JPS61210034A

JPS61210034A - 関節症治療剤

Info

Publication number: JPS61210034A
Application number: JP5035785A
Authority: JP
Inventors: Katsukiyo Sakurai; 桜井　勝清; Yoshio Ueno; 上野　義夫
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1985-03-15
Filing date: 1985-03-15
Publication date: 1986-09-18
Also published as: JPH0574571B2

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、関節症治療剤に関し、更に詳しくは、関節症
の病態そのものの木質的な治療に適用し得る関節症治療
剤に関する。

［従来技術及びその問題点］関節疾患の中でも変形性関節症や慢性関節リウマチでは
、患者の関節液中のヒアルロン酸（以下ｒ　ＨＡＪとい
う）が、その濃度１分子量ともに低下しており、このこ
とが関節液の有する潤滑機能。

関節軟骨表層の保護などの諸機能を低下させる一因であ
ると考えられている。これらの関節疾患に対する従来の
薬物療法は、対症療法であり、障害された関節組織の修
復、改善という点からは適切ではない。

これに対し、関節軟骨の変性を抑制し、あるいは、すで
に変性した関節軟骨を部分的に修復できれば病態そのも
のの本質的な治療となり得る。

かかる観点から、関節液の主成分であるＨＡを関節腔内
に注入することにより、競走馬の外傷性関節炎［アクタ
・ベト・スカンジナビア（Ａｃｔａ　Ｖｅｔ。

５ｃａｎｄ、）、　１１　、１３９（１９７０）］、ヒ
トの変形性関節症［パソル・パイオル（Ｐａｔｈｏｌ、
　Ｂｉｏｌ、）　２２．７３１（１９７４月に対し、あ
る程度の有効性が認められている。

しかしながら、生体内におけるＨＡは、ある特殊な蛋白
質と複合体を形成し、安定かつ強い曳糸性、高粘弾性を
有し、特殊な働きをしているのに対して、単離精製され
たＨＡは曳糸性をほとんど示さず、かつ、従来技術では
高粘性のＨＡの抽出精製は非常に困難である。また、生
体内、特に病的部位に投与した後、酵素的分解や非酵素
的酸化還元的分解［アースライチス・リウマチズム（Ａ
ｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ）、　４　、
２４０（１９８１）］を受け　その粘性を維持すること
が困難であるため。

満足な結果は得られていない。

そこで、本発明者らは、前記した従来技術の欠・、′工
を解消すべく鋭意研究を重ねた結果、ｉ！橋ヒアルロン
酸（以下ｌ架橋ＨＡＪという）を用いることにより本発
明の目的を達成できることを見出し本発明を完成するに
至った。

［発明の構成］本発明の開面症治療剤は、架橋ＨＡからなることを特徴
とするものである。

本発明に用いる架橋ＨＡとしては、　ＨＡ又はその塩を
適当な架橋剤で架橋させてなるものであって、水溶性の
ものであれば如何なるものでもよいが。

このうち　高粘度のもの、例えば１％生理食塩水溶液に
おける粘度（２０℃、すり速度１ｓｅｃ’　）が１００
０〜ｅｏｏｏｏセンチボアーズのものが好ましい。

好ましい架橋剤としては１例えば、多官能性エポキシ化
合物が挙げられる。

ここで、多官能性エポキシ化合物とは、エポキシ基を少
なくとも１個有する化合物であって、その他に、エポキ
シ基を含めて、ＨＡを架橋するに適した官能基を１個以
−Ｌ有する化合物をいう。

かかる化合物としては２例えば、へロメチルオキ７ラン
化合物及びビスエポキシ化合物などが挙げられる。ハロ
メチルオキシラン化合物としては、エピクロルヒドリン
、エピブロムヒドリン１β−メチルエピクロルヒドリン
及びβ−メチルエピブロムヒドリンなどが挙げられる。

ビスエポキシ化合物としては、１．２−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）エタン、１．４−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ブタン、１．６−ビス（２，３−
エポキシプロポキシ）ヘキサン及びビスフェノールＡ又
はビスフェノールＦのジグリシジルエーテルなどが挙げ
られる。

本発明に用いる架橋ＨＡのうち、架橋剤として多官能性
エポキシ化合物を用いたもの及びその製造法は、特願昭
５９−８８４４０号明細書に詳述されている。

通常、分子贋数千から数百刃のＨＡ又はその塩を、　０
．５％以上、好ましくは　１．０％以上の濃度に、アル
カリ水溶液に溶解し、水溶性有機溶剤を全液量の３０％
以上、好ましくは５０％以上になるように加える。アル
カリ水溶液は、ＰＨ８〜１４であることが好ましく、ｐ
Ｈ１２〜１４であることが更に好ましい、アルカリとし
ては１通常、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸
化カルシウムなどの金属水酸化物及び炭酸ナトリウム、
炭酸カリウムなどの金Ｊｉ！炭酸塩等が挙げられる。水
溶性有機溶剤としては、メタノール、エタノール、イン
プロパツール、アセトン、ジオキサンなどが挙げられ、
これらは、単独で又は混合物として用いられる。

これらの水溶性有機溶剤を加えることにより反応を有効
に行なうことができ、また、アルカリによるＨＡの分解
（低分子化）も抑制することができる。

次いで、得られた溶液に、前記多官能性エポキシ化合物
の１種以上を加え、０〜１００℃、好ましくは１０〜６
０℃、更に好ましくは１５〜４０℃で反応させる０反応
時間は、反応温度により異なるが、２０℃近辺では２０
〜４８時間が好ましく、４０℃近辺では２〜３時間が好
ましい。

また、本発明に用いる架橋ＨＡは、次のようにしても調
製することができる。

即ち　ＨＡ又はその塩の前記アルカリ溶液に前記　　゛
水溶性有機溶剤を加えて、得られる水アメ状沈殿物を分
取し、該沈殿物に多官能性エポキシ化合物を加えて、　
５０℃以下で反応させると非常に効率的に反応を行なう
ことができる。水アメ状沈殿物を分取するには１例えば
、デカンテーションにより上清を除去すればよい０反応
温度は、通常１０〜５０℃で、最も好ましいのは２０〜
４０℃である。温度が高い程、短時間で反応を終了させ
る必要がある。一般的には、４０℃近辺では２間抜程度
が。

２０℃近辺では２４〜４８時間が好ましい。

架橋ＨＡの調製において、ＨＡ又はその塩と多官能性エ
ポキシ化合物とのモル比、即ち架橋度を変えることによ
り、得られる架橋ＨＡ又はその塩の溶解性及び粘度を調
節することができる。

分子賃１００万前後の）ＩＡにおいては、　ＨＡの鰻り
返しニー糖　１モルに勾する多官能性エポキシ化合物の
使用モル数を１〜ｌＯモルにすれば、水溶性で　１％生
理食塩水溶液における粘度（２０℃、ずり速度１ｓｅｃ
−’　）が１０００−８００００センチボア・−ズの架
４：ＨＡをｔ［Ｉることができる。

本発明の関節症治療剤の各種関節症への適用に際しては
、架橋１（Ａを、通常、生理食塩水に溶解し、注射針を
通過できる粘度、即ち５ｏｏｏｏセンチボアーズ（２０
℃、すり速度１ｓｅｃ’　）以下、好ましくは５０００
〜３００００センチポアーズ（２０℃、ずり速１１Ｆ　
１ｓｅｃ−’　）にして用いる。

［発明の効果］本発明によれば、安全性が高く、かつ、ヒアルロニダー
ゼ等の組織酵素に対して抵抗性を示す関節症治療剤を提
供することができる。かかる本発明の関節症治療剤は、
生理食塩水等に溶解することにより、正常人の関節液と
非常に類似した性質を有する溶液となり、変形性関節症
　慢性関節リウマチなどの各種関節症の治療剤として有
用である。

［発明の実施例］以ド、調製例、試験例及び実施例により本発明を更に詳
細に説明するが、これらは、本発明の範囲を何ら制限す
るものではない。

調製例　　丸雀Ｂ且】１（＋）　ＨＡすｌ・リウム塩（分子着７３００００）　
ｌ　ＯｇをＩＮ水酸化ナトリウム水溶液（ｐ）＋　１３
．７）に　２％になるように溶解した後、０．２２μ国
の膜で除菌し、エタノール５００１１！２．及びエピク
ロルヒドリン６．０ｔｓｌを加え、２０°Ｃで２４時間
反応させた。酢酸を加えて反応液のｐＨを６，４とした
後、エタノール３０００層文を加えて沈殿させ５架橋Ｈ
Ａ　（以下［架橋）ＩＡ−ＩＪ　という）を調製した。

収　　　　らｆ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
８．５ｇずり速度１ｓｅｃ−’　）元　　素　　分　　析　　値　　Ｃ：４２．０　　％　
、Ｈ：　　４．８７％　。

Ｎ　：　３．２９％、　Ｎａ：　５．８１％（２）架橋
剤であるエピクロルヒドリンの量を変える以外は、（１
）と同様に処理して、表１に示す３種の架橋ＨＡを調製
した。

表１ □□□≠ □□□□門；これらの３種の架橋ＨＡ及び合成に使用したＨＡすトリ
ウム塩を、それぞれ、０．１Ｍ酢酸（ｐＨ５，０）に　
１％の濃度に溶解し、測定（２０℃、すり速度ｌ５ｅｃ
−１）　したところ１次のとおりであった。

架橋ＨＡ−２４５０００センチポア一ズ架ＭＡＨＡ−３
２７０００センチボアーズ架橋ＨＡ−４８０００センチ
ボアーズＨＡナトリウム塩　　　１５００センチボアーズこれら
の溶液に０．０９℃量％になるように牛畢丸ヒアルロニ
ダーゼを加え５０℃で反応させ、　１５．３５．５５．
７０分後に粘度を測定し１反応前の粘度に対する割合を
算出した。

結果を図１に示す。図１において、ロ印、Δ印、Ｏ印及
びφ印は、それぞれ、架橋ＨＡ−２，３，４及びＨＡナ
トリウム塩の酢酸溶液の各反応面間における反応前の粘
度に対する割合を表わす。

図１から、本発明に用いる架橋ＨＡは、　ＨＡに比し、
ヒアルロニダーゼに対する抵抗性が高く、その程度は、
架橋度が高いほど顕著であることがわかる。

試験例１　　　−ＬＬ！の　　　と　　との“　９分７
−州３７００σＯ及び７３００００のＨＡナトリウム塩
１００ｍｇを、それぞれ、ＩＮ水酸化ナトリウム５．Ｏ
ＪＬに溶解した溶液に、エタノール５ｍＭとエピクロル
ヒドリン、それぞれ、２５．５０．１００．２００ｐ文
とを加え、４０°Ｃで２時間反応した０反応後は調製例
（１）に準じて後処理を行なった。

また、分子１１７０００００　（７）ＨＡナトリウムｔ
ｌｊ７５ｍｇをＩＮ水酸化ナトリウム？、５ｒａｌに溶
解した溶液にエタノール？、５＋ａｉとエピクロルヒド
リン４０ル文又は８０色文とを加え、４０℃で２時間反
応した。更に、Ｌ記反応と同面に同じ条件で　［２−μ
Ｃ）エピクロルヒドリン（アマジャム・ジャパン社から
入手）を用いて反応を行ない、この標識化合物の放射活
性から架橋度を算出した。架橋度と粘度との関係を表２
に示す。

表２から、架橋ＨＡにおいては、架橋度と粘度とが比例
関係にあることがわかる。

試験例２　　　ＨＡ　　二　−トン架＠ＨＡ−１と合成に使用したＨＡとの　１％生理食塩
水溶液について回転粘度計（■東京計器製Ｅ形粘度計）
を用い、すり速度を変え、３７℃で粘度を　　ａ測定し、非ニユ−トン指数（ｍ　−Ｔ）を算出した。ま
た、正常人の関節液及び変形性関節症患者の関節液につ
いても、同様に粘度を測定し、非ニユートン指数を算出
した。結果を図２に示す。

図２において、０印、φ印１口印及び■印は、それぞれ
、架橋ＨＡ−１及びＨＡの１％生理食塩水溶液並びに正
常人の関節液及び軽度の変形性関節症患者の関節液の各
ずり速度における粘度を表わす。

図２から１本発明に用いる架橋ＨＡ−１の１％生理食塩
水溶液は、正常人の関節液と非常に類似した物理パター
ンを示すことがわかる。

試験例３１１皿二重途上架橋ＨＡ−１と合成に使用した）ＩＡの曳糸性を、渡辺
式曳糸性測定装置（池内宏１日本整形外科学会雑誌、　
３４．１７５（１９８Ｇ））を模して作製した装置を用
いて測定した。結果を図３に示す０図３において、０印
、Δ印、・印及び［株］印は、それぞれ、架橋ＨＡ−１
の０．５％生理食塩水溶液、同　１％生理食塩水溶液、
ＨＡの１％生理食塩水溶液及びイヌの正常関節液の各引
き上げ速度における曳糸性を表わす。

図３から１本発明に用いる架橋ＨＡ−１は、関節液と同
様に曳糸性を有することがわかる。

試験例４　　ｉ１１並ス１４週令のｄｄＹ系雄性マウスを１週間予備飼育した。試
験開始時における実験に用いたマウスの体毛は２１〜２
７ｇであった。

前記マウスを各群１５匹ずつに分け、それぞれについて
架橋Ｈ＾−１の０．５％生理食塩水溶液１層見ハＯｇ体
市（架橋ＨＡ−１ｓｏｏｍｇ／Ｋｇ）　、同１％生理食
塩水溶液１ｍ見／１０ｇ体蓋（架橋ＨＡ−，１１１００
１）ｓ／　Ｋｇ）又は生理食塩水１ｍＪＬ／１０ｇ体重
を腹腔内投与した。

アーウィン（Ｉｒｗｉｎ）法に準じて毎日同時刻に一般
症状を観察した。投与後７日目に各群５匹ずつを層殺し
、１４４日目残りの生存マウスを層殺し、投グ一部位及
び主要臓器の肉眼的観察を行なった。

その結果を以下に示す。

（１）　　各群とも死亡例はなかった。

１ｉｉ＋　　５００　ｒａｇｌ　Ｋｇ投！Ｆ群、！００
０＋ｓｇ／　Ｋｇ投与群、対照群とも一般症状、体重変
化、摂取量　摂水にに差はなかった。

Ｇ１１ｌ　　７日日、１４日目の剖検では対照群と　５
００ｍｇ／　Ｋｇ投与群に差はなかったが、　＋００Ｃ
１ｍｇ／Ｋｇ投１群についてのみ７日目、１４４日目も
ｌｔｌ腔内残留液のウコン酸が対照群よりも多く。

１４４日目３６６〜３．８脂ｇｅｍ文の架橋ＨＡ−１が
残留しでいると推定された。

〜）　各群とも臓器への影響は殆どなかった。

実施例１−ＨＡ’ 架ｍＨＡ−１について、次のようにして、その鎮痛効果
を検討した。

ピーグル犬を雌雄の別なく用い、一方の後肢の膝関節腔
内に疼痛物質として、ブラジキニン又はアセチルコリン
のそれぞれ２０ｐｇ又は２ｍｇを架橋ＨＡ−１２，５＋
ｗｇ１０．５■見生理食塩水と同時に投与し、投ｒｊ、
側の後肢荷重の変動を経時的に測定した。また、対照と
して架橋ＨＡ−１の代りに調製例で原料として用いたＨ
ＡすＩ・リウム塩５厘ｇ１０．５ｍ見生理食塩水を用い
た。鎮痛効果は、正常時の５０％荷重回復時間をもって
比較した。結果を表３に示す。

表　　３表３から、本発明の関節症治療剤は、２倍量のＨＡナト
リウム塩と同等の鎮痛効果を有することがわかる。

実施例２卵白アルブミン生理食塩水溶液（１０履ｇ／ａｌｌ）０
．５＋ＪＬ及びフロイント完全アジュバント生理食塩水
溶液（１０＋ｓｇ／腸Ｊ１）０．５ｌ文の混合溶液ウサ
ギ１２羽（平均体重３ｋｇ）の皮下内に１０日間隔で３
同感作し、最終感作後９日目に卵白アルブミン生理食塩
水溶液（５ｓｇ／ｍ文）０．２腸文を抗原とじて膝関節
腔内に投与してアレルギー性関節炎を生じさせた。架橋
ＨＡ−１生理食塩水溶液（２０ＩＩｇ１層ＩＬ）０．１
層文を卵白アルブミン生理食塩水溶液（１０層ｇ／ｌａ
ｎ　）　０．１層文とともに膝関節腔内に投与して、投
与後３．７及び１４４日目関節腔内の滲出細胞数を測定
した。結果を表４に示す。

表　　４表４から、架橋ＨＡ−１の投与により、明らかに滲出細
胞数が減少したことがわ力；る。

【図面の簡単な説明】

図１は、各種架橋ＨＡ及びＨＡをヒアルロニダーゼ処理
したときの粘度低下と時間との関係を示す図である。図
２は、架橋ＨＡ−１、ＨＡ並びに正常人及び変形性関節
症患者の関節液の粘度測定結果を示す図である０図３は
、架橋）ＩＡ−１，）ｉＡ及びイヌの正常関節液の曳糸
性測定結果を示す図である。１念時間（牛）図る引き上ず走度（Ｃ飢／ｓｅｃ）

Claims

【特許請求の範囲】

架橋ヒアルロン酸からなることを特徴とする関節症治療
剤。