JPS61275218A - アデニン誘導体の治療的適用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 光肌ｑ立野 本発明は新規なウィルス疾患用治療剤、その製法および
用途に関する。

発明の背景 ある種の、アデニンの置換アルキル誘導体は著しい抗ウ
ィルス活性を示すことが知られている。

かかるアデニン誘導体には米国特許第４２３０７０８号
記載の９−（Ｓ）−（２，３−ジヒドロキシプロピル）
アデニン、ホーリイら〔コレクンヨン・オブ・チェッコ
スロバーク・ケミカル・コミュニケーション（Ｈｏｌｙ
　ｅｔ　ａｌ、、Ｃｏ１１．　Ｃｚｅｃｈ、　　Ｃｈｅ
ｍ、　Ｃｏｍｍ、　）４７巻１３９２〜１４０７頁１９
８２年〕開示のＤ−エリタデニン、米国特許出願第６５
８４３８号開示の３−（アデニン−９−イル）−２〜ヒ
ドロキシプロパン酸エステルなどがある。

これらのアデニン誘導体は抗ウィルス剤として広範なス
ペクトルを示すとされているが、その抗ウィルス活性は
、主として麻疹ウィルス、パラインフルエンザウィルス
および水はう仕口内炎ウィルスのようなＲＮＡウィルス
に対するものであって、ＤＮＡウィルスについては唯１
つのウィルス、すなわちワクシニアウィルスのみに対し
多少の作用が認められるに過ぎず、単純ヘルペス、帯状
ヘルペスのような大多数のＤＮＡウィルスに対する活性
はかなり少ないか、または全く認められない。

したがって、主としてＤＮＡ−ウィルスに対し抗ウィル
ス活性を有する抗ウイルスアデニン誘導体が必要であり
、かかる活性を有するアデニン誘導体および治療用組成
物を提供することが本発明の主目的である。

魚囲Δ罷檄 本発明に従えば、ある種のホスホニルメトキシアルキル
アデニンがワクシニアおよびヘルペスウィルスのような
数種のＤＮＡ−ウィルスに対し著しい抗ウィルス活性を
示すが、大多数のＲＮＡ−ウィルスに対し不活性であり
、かつ宿主細胞に対する毒性が低いことが判明した。こ
れは、抗ウィルス活性が限られた数のアデニン誘導体に
よってのみ示されること、およびホスホニルメトキシ基
の導入が抗ウィルス活性のかかる著しい変化を誘発する
ことが予想できないことからみて、驚くべきことである
。

本発明のホスホニルメトキシアルキルアデニンは式： 〔式中、Ｒ１はヒドロキシで置換されていることもある
低級アルキレン、特にメチレン、−Ｃ１−１（ＯＨ）−
ＣＨｔ−または＝ＣＨ−ＣＨ，０ＨＳＲ’はヒドロキシ
を意味する。場合により、Ｒ′およびＲ２は相互に連結
して環状エステルを形成する。〕で示すことができる。

該化合物は遊離酸形またはアルカリ金属、アンモニウム
またはアミン塩のような塩形とすることができる。

Ｒ１がメチレンである化合物を除き、式ＣＩ）の化合物
の大部分は不斉炭素原子を有し、１つ以上の光学対掌形
で存在する。かかる場合、該化合物の（Ｓ）形およびラ
セミ体（ＲＳ）形だけが十分な抗ウィルス活性を示しう
ろことに注目すべきである。式（１）の化合物のうち、
最良の抗ウィルス活性は（Ｓ）−９−（３−ヒトａキシ
−２−ホスホニルメトキシプロピル）アデニンによって
示される。

式（１）の誘導体の大半は公知化合物（英国特許Ａ−２
１３４９０７参照）である。したがって、化合物自体お
よびその化学合成は本発明の一部ではない。

該誘導体は一般に少なくとも２つの経路に従い、すなわ
ち（Ａ）９−（ヒドロキシアルキル）アデニンをクロロ
メタンホスホニルクロライドと縮合し、ついでアルカリ
加水分解するか（英国特許Ａ−２１３４９０７）、また
は（Ｂ　）　９−（ヒドロキシアルキル）アデニンをＰ
−トルエンスルホニルオキシメチレンリン酸ジエステル
と縮合し、ついで該エステル基をトリメチルヨードシラ
ンで除去することで製造することができる。ラセミ体混
合物は製造の前後にその成分に分離することができ、生
成物が遊離酸である場合、アルカリ金属、アンモニアま
たはアミンとの反応によって塩に変換することができる
。

府記したように、式（１）の誘導体は宿主細胞に対する
毒性が低い。組織培養細胞についてのこれら誘導体の細
胞毒性作用は１００．２００または４００μｇ／ｓ１以
上の濃度、すなわち、活性ウィルス抑制濃度よりも非常
に高い濃度で観察される・だけである（以下の第２表参
照）。さらに、式〔Ｉ〕の誘導体はレオウィルス、ラブ
ドウィルス、パラミクソウィルス、エンテロウィルス等
の大半のＲＮＡウィルスによって感染された組織培養細
胞には効果がない。しかし、いくつかの該誘導体はマウ
ス中で肉腫性腫瘍を誘発するモロニーマウス肉腫ウィル
ス、すなわちレトロウィルスに対し、非常に活性である
（第３表参照）。したがって、該誘導体はレトロウィル
ス全般Ｉこ有効であると思われる。式〔１）の化合物の
主要な標的はワクシニアウィルス、単純ヘルペスウィル
ス等のＤＮＡウィルスによって形成される。かかる化合
物は、全ていくつかの株の単純ヘルペスウィルス・タイ
プｌおよび２の複製を抑制する（第４表参照）。ヘルペ
スウィルスによって引起された病気の治療用組成物に使
用される公知の化合物、例えばアシクロビル、（Ｅ）−
５−（２−ブロモビニル）−２゛−デオキシウリジンお
よび５−ヨード−２°−デオキシウリジンと比較すると
、式（Ｉ）の化合物は効果がやや低いが、かかる化合物
の欠点、すなわちアシクロビルの低い溶解度、５−ヨー
ド−２°−デオキシウリジンの突然変異誘発性、奇形発
性、胎芽毒性および発がん性作用を欠いている。式：〔
ｒ〕の化合物の重要かつ実質的な特徴は、チミジンキナ
ーゼ誘発活性を欠いているこれらヘルペスウィルス株（
ＴＫ−株）に対するその効果である。チミジンキナーゼ
はアシクロビルおよび（Ｅ）−５−（２−ブロモビニル
）−２′−デオキシウリジンの活性に必須である。

したがって、これらはＴＫ−ヘルペスウィルスに対し不
活性である〔プルソフら（Ｐｒｕｓｏｆｆ　ｅｔ　ａｌ
、）１〜２７貢、「抗ウイルス剤計画の標的」、編者：
デュ・クレルクおよびワーカ−（Ｄｅ　Ｃ１ｅｒｃｑ　
ａｎｄＷ　ａ　Ｉ　ｋ　ｅ　ｒ）、ブレニウムプレス、
ニューヨークおよびロンドン、１９８４年参照〕。これ
に対し、式（１）の化合物はＴＫ″″ヘルペスウィルス
に対する明確な活性を有する（第４表参照）。したがっ
て、式〔ＩＤの化合物はＴＫ−ヘルペスウィルス株に起
因する疾患の治療に使用することができ、さらに該化合
物はアシクロビルおよび他の公知の化合物と組合せて用
いることもできる。

式〔ＩＤの誘導体の抗ウィルス活性は、全く新らしく、
かつ予期せぬものである。アデニン・アラビノシト、５
−エチル−ウラシル・アラビノシト、アシクロビル、５
−ヨード−２°−デオキシ−ウリジンおよび（Ｅ　）−
（２−ブロモビニル）−２°−デオキシウリジンのよう
な抗ウィルス活性のヌクレオシド同族体のリン酸エステ
ルが、また抗ウィルス剤として有効であることは公知で
ある。しかしながら、これらのエステルは、単にプロド
ラッグとして作用するもので、該エステルは細胞内に入
る機会を得る直前に、加水分解されて遊離のヌクレオシ
ド同族体を放出する。式（１）の化合物は上記のリン酸
エステルと同じ極性を有する。しかしながら、該化合物
は、何ら加水分解が生じることなくそのまま細胞内に入
り、所望の生物学的作用を発揮するのである。

式（１）の化合物を活性成分として含有する、ウィルス
疾患をヒトおよび動物治療法で治療するための治療用組
成物は粉末、懸濁液、溶液、シロップ、エマルション、
軟こうまたはクリーム形とすることができ、局部的適用
（皮膚、粘膜、目等の外傷）、鼻腔内、直腸内、腟内等
で用いることができ、また経口または非経口（静脈内、
皮膚内、筋肉内、鞘内等）投与に用いることができる。

かかる組成物は式（１）の活性化合物を遊離酸または塩
の形で、中性の特性を有する医薬上許容される賦形剤（
例えば、水性または非水性溶媒、安定化剤、乳化剤、清
浄剤、添加剤）と共に、さらに要すれば色素および芳香
剤と共に合する（例えば、混合、溶解する）ことによっ
て製造することができる。治療用組成物中の活性成分の
濃度は疾患および投与法の性質に応じて０．１〜１００
％と広範に変化させることができ。さらに、投与される
活性成分の用量は体重１ｋｇ当り０．１〜１００ｍｇと
変化させることができる。

実施例 つぎに、式（１）の化合物の抗ウィルス活性を以下の実
施例によって説明するが、これらの用途に制限されるも
のではない。実施例および表において、以下の短縮名を
用いる。

ＭＣＣ：顕微鏡的に検知可能な細胞形態学的変化をもた
らす最小化合物濃度、 Ｍ　Ｉ　Ｃｓ。：ウイルスの細胞変性効果を５０％抑制
する最小化合物濃度、 ＩＤ５゜ニトリチウム（３Ｈ）でラベルした下記前駆体
のとりこみを５０％減少させる化合物の濃度ｄＴＨｄ：
２−デオキシチミジン、 ｄＵｒｄ：２−デオキシウリジン、 Ｕｒｄ：ウリジン、 Ｌｅｕ：Ｌ−ロイシン、 〈セルライン〉 ＰＲＫ・−次組縁培養のウサギ腎細胞、ベロＢおよびベ
ロ・フａ−（Ｖｅｒｏ　Ｆｌｏｗ）ニアフリカミトリザ
ル腎細胞の連続ライン、 ヘラ：ヒト頚部がん細胞の連続ライン、ＭＯ＝連続的な
ネズミ胎児セルライン く式Ｎ）の化合物の名称〉 化合物１：（ＲＳ）−９−（２（３）ヒドロキシ−３（
２）−ホスホニルメトキンプロピル）アデニン、化合物
２：（Ｒ９）−９−（２−ヒドロキシ−３−ホスホニル
メトキシプロピル）アデニン 化合物３　：（Ｓ）−９−（２−ヒドロキシ−３−ホス
ホニルメトキシプロピル）アデニン 化合物４　：（Ｓ　）−９−（３−ヒドロキシ−２−ホ
スホニルメトキンプロピル）アデニン 化合物５：（ＲＳ）−９−（２，３−ジヒドロキシプロ
ピル）アデニンの２°、３“−環状０−ホスホニルメチ
ルエーテル 化合物６：９−（２−ホスホニルメトキシエチル）アデ
ニン 〈他の化合物の名称〉 （Ｓ　）−Ｄ　ＨＰ　Ａ　：　９−（Ｓ）−（２、３−
ジヒドロキシプロピル）アデニン ＡＣＶニアシクロビル ＢＶＤＵ：（Ｅ）−５〜（２−ブロモビニル）−２°−
デオキシウリジン ＩＤＵ：５−ヨード−２゛−デオキシウリジン化合物Ｉ
〜６はっぎのように製造した。化合物１（異性体混合物
）は（ＲＳ）−９−（２，３−ジヒドロキシプロピル）
アデニンをクロロメチルホスホニルジクロライドと反応
させ、ついでアルカリ処理して製造した。化合物２はク
ロマトグラフィー分離により化合物１から単離した。化
合物３および４は（Ｓ）−９−（２，３−ジヒドロキシ
プロピル）アデニンをクロロメチルホスホニルジクロラ
イドと反応させ、アルカリ処理し、ついでイオン交換樹
脂でクロマトグラフィー分離して製造した。化合物５（
異性体の混合物）は化合物ｌをＮ、Ｎ−ジシクロカルボ
ジイミドで環化して合成した。化合物６は９−（２−ヒ
ドロキシエチル）アデニンをジエチルｐ−トルエンスル
ホニルオキシメタンホスホネートと反応させ、ついでエ
ステル基を開裂させて製造した。

ペーパークロマトグラフィーおよび電気泳動によって得
られた物性データを第１表に示す。

第１表 旧位は売−プロパノール／濃水性アンモニア／水（７：
ｌ：２、容量／容量）中、ペーパークロマトグラフィー
で得たものである。Ｅｕｐ値はＩ）８７．５でのペーパ
ー電気泳動（２０Ｖ／ａｍ）により得たもので、ウリジ
ン３−ホスホネートに対する移動率を示した。Ｋ値はＨ
ＰＬＣ（セパロン・シックス・ｐＨ８（５／μｌ１１）
（４Ｘ２００１１Ｉｆｆｉ、０　、７　ｍｌ／分）、炭
酸水素トリエチルアンモニウム０．０５モル／１中メタ
ノール５容量％、ｐＨ７，５）によって得た。

検出は２５４　ｒｕｓで行なった。Ｋ　＝　（ｔｒ　−
ｔｏ）／　ｔｏ（ｔｒ＝反応時間、ｔｏ＝保圧時間）。

実施例！ 組織培養物中の式（１）の化合物の細胞毒性および抗代
謝活性の測定 ウサギ腎細胞−次培養物を式（１）の化合物溶液を含む
ペトリ皿中で（濃度をｌ〜４００μｇ／ｍｌに増加）、
イーグル最少必須培地を用い７２時間インキュベートし
た。各皿中の形態学的変化を顕微鏡で評価した。第２表
に示した最小細胞毒性濃度（ＭＣＣ）は、該細胞の形態
学的変化が用いた実験条件下で観察される該化合物の最
小濃度である。

式（１）の化合物の代謝拮抗効果の測定については、イ
ーグル培地中のウサギ腎細胞−次培養物を所定量のラジ
オラベル前駆体の存在下、式（１）の化合物の濃度を増
加させながらインキュベートした。（５皿ごと１μＣｉ
、、（３Ｈ−メチル）ｄＴ　ｈｄ　３０Ｃｉ／ミリモル
、（３Ｈ−１°、２’）ｄＵｒｄ２７Ｃｉ／ミリモル、
（３Ｈ−５）Ｕｒｄ３０　Ｃｉ／ミリモル、（３Ｈ−４
、５）Ｌｅｔ＋４７　Ｃｉ／ミリモル）。ラベルした面
駆体の濃度はデュ・クレルクら〔パイロケミカル・ファ
ラマコロジイ（Ｄｅ　Ｃ１ｅｒｃｑ　ｅｔ　ａｌ、、Ｂ
ｉ。

ｃｈｅｍ、　Ｐ　ｈｒａｍａｃ、）　２４巻５２３頁■
９７５年〕記載のように測定した。該化合物を含有しな
い対照と比較した、該前駆体のとりこみを５０％減少さ
せる式（１）の化合物のＩＤ５ｏ値を第２表に示す。

これらの値から明らかなごとく、式Ｎ）の化合物は、全
て著しい細胞毒性を示さず、化合物４および６のみか約
！００μｇ／ｍｌの濃度で２°−デオキンウリジンの細
胞内へのとりこみに特異的な影響を与えた。

実施例２ 組織培養物中の式（１）の化合物の抗ウィルス作用の測
定 細胞培養物にウィルスを細胞の半分の感染に要するのウ
ィルス用量の１００倍（１００ＣＣＩＤｇ。）で感染さ
せた。感染１時間後、該細胞をイーグル培地の存在下、
該培地に含まれる式〔ＩＤの化合物の濃度を増加させな
がらさらにインキュベートした。分析される一連の化合
物を種々の濃度で用い、ウィルスの細胞変性作用の５０
％抑制に要する最小化合物濃度（ＭＩＣ，。）をロゼン
タールおよびスケクマイスター〔「組織培養Ｊ（Ｒｏｓ
ｅｎｔｈａｌａｎｄ　Ｓ　ｃｈｅｃｈｍａｉｓｔｅｒ、
　”Ｔ　１ｓｓｕｒｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ”）ペルガモン
・プレス、ニューヨーク５１０頁１９７３年〕の方法で
測定した。第３表に示したデーターから、式（１）の化
合物はワクシニアウィルス、単純ヘルペスウィルス・タ
イプ！および２、およびモロニー肉腫ウィルスを抑制す
ることが明らかである。

実施例３ ヘルペスウィルスに対する式（［）の化合物の抗ウィル
ス作用の測定 実施例２記載の方法により、種々の株の単純ヘルペスウ
ィルス・タイプｌおよび２（１００ＣＣＩＤ、。）を感
染させた一次培養のウサギ腎細胞（ＰＲＫ）、および種
々の株の水痘帯状ウィルスおよびサイトメガロウィルス
２０ＰＦＵ（プラーク形成単位）を感染させたヒト胎児
の肺（ＨＥＬ）を用いて実験を行なった。式（１）の化
合物の効果の評価は第４および５表に示す。これらのデ
ーターにより、全ての該化合物がＴＫ″″突然変異体を
含め、記載したウィルスに対し活性であることが証明さ
れた。この点では、化合物４が最も有効なものであった
。

実施例４ 単純ヘルペスウィルス・タイプ！およびワクシニアウィ
ルスの生じた増殖に対する式〔ＩＤの化合物の効果 ウサギ腎細胞−次培養物（ＰＲＫ）に、単純ヘルペスウ
ィルス・タイプ１　（Ｋ　ＯＳ株）またはワクシニアウ
ィルスを１０４・’ＰＦＵ１０．５ｍ１（ＰＦＵ＝１プ
ラーク形成単位）のウィルス用量で、実施例２と同様に
感染させた。ついで、該細胞をイーグル培地中の式（１
）の化合物（１００μｇ／ｍｌ）にさらした。

！、２４．４８および７２時間後に得られたウィルスを
ＰＲＫ細胞中のプラークの数の測定によって測定した。

第６表に示したデーターにより、テストした全ての化合
物（化合物１．２．４．５および６）が単純ヘルペスウ
ィルス・タイプＩ（ＫＯ８）およびワクシニアウィルス
の収量を、ウィルス感染後１，２または３日後の測定で
１００００〜１０００００倍減少させたことが証明され
た。

第２表 ＰＲＫ細胞に対する式（１）の化合物の細胞毒性および
代謝拮抗作用 第４表 ＰＲＫ細胞中の６株の単純ヘルパスウイルス（ＨＳＶ−
１，ＨＳＶ−２）第５表 ＨＥＬ細胞中の６株の水痘帯状ウィルス（ＶＺＶ）およ
びサイトメガロウィルス（ＣＭＶ）に対する化合物４の
効果 実施例Ａ 化合物４を発熱性物質非含有精製水中に溶解してヒトま
たは動物の経口用の０．１％水溶液を製造した。

実施例Ｂ 化合物４を多価アルコールを少なくとも３０％含有する
水溶性軟こう基剤と混合してヒトまたは動物の局部用途
の１％軟こう剤を製造した。

実施例Ｃ 化合物４を結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤およ
び表面活性剤と混合し、得られた混合物を活性成分を２
０％含有する錠剤に打錠した。かかる錠剤はヒトへの経
口投与に用いることができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、活性成分として式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１はメチレン、−ＣＨ（ＯＨ）−ＣＨ＿２
   −または▲数式、化学式、表等があります▼、Ｒ＾２は
   ヒドロキシを意味 する。ただし、Ｒ＾１がメチレン以外である場合、Ｒ＾
   １とＲ＾２は相互に連結して環状エステル基を形成して
   もよい。〕 で示される遊離酸または塩形のホスホニルメトキシアル
   キルアデニン（該アデニン誘導体は、Ｒ＾１がメチレン
   以外である場合（ＲＳ）または（Ｓ）形である。）を含
   有するウィルス疾患治療用組成物。 ２、活性成分として（Ｓ）−９−（３−ヒドロキシ−２
   −ホスホニルメトキシプロピル）アデニンを含有する特
   許請求の範囲第１項記載の組成物。