JPS6163696A - 新しいペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （１）　　発明の目的 本発明は、抗ウィルス作用、細胞増殖抑制作用などの生
理活性能に優れた新規なペプチド金提供することを目的
とする。

更に詳しくは式（１）： ％式％ 、、ｉｅｔ　　Ａ３１１　　Ｖａｌ　　Ｌｙｓ　　Ｐｈ
ｅ　　Ｐｈｅ　　Ａｓｎ　　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　　Ｌｙｓ
　　ＬｙｓＬＬＩ　　Ａｒｇ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｐｈｅ
　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ＴｙｒＳ
ｅｒ　Ｖａｌ　　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｌｃｕ　Ａｓｎ　Ｖ
ａｌ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　Ｌｙ＋ｓ　Ａｌａｌｌｅ　　）
ｉｉｓ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｇｉｎ　　
Ｖａｌ　　Ｍｅｔ　　Ａｌａ　　Ｃｒ１ｕ　　ＬｅｕＳ
ｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ａ１３　　、Ａｌａ　　Ｌｙｓ　　
Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｌｙａ　　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　　Ａｒｇ
Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　＃Ｉｅｔ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　
Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ａｒｇ　Ａｌａ　　５ｅｒ（但し、Ｇ
ｌｎ＋Ａｑｐ、Ｐｒｏ、Ｔｙｒ、Ｖａｌｓ　Ｌｙｓ＊Ｇ
１ｕ＊Ａｌａ＋Ａｓｒ＋、Ｌｅｕ、Ｐｈｅ、Ｇｌｙ＋Ｈ
ｉａ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、ＩＩｓ、Ｔｒｐ、Ａｒｇおよび
ｂｉｅｔはグルタミン、アスノぞラギン酸、プロリン。

チロシン、）セリン、リジン、グルタミン酸、アラニン
、アスパラギンＮ、ロイシン、フェニルアラニン、グリ
シン、ヒスチジン、セリン、スレオニン、インロイシン
、トリプトファン、アルギニンおよびメチオニンの残基
を：またＪはメチオニン残ｚｌ’；又は水紮原子を表す
）で次わされるペプチドを提供することを目的とする。

（２〕　　発すリの溝底 （手段） 本発明のｉ）ｒ規なペプチドは、従来から公知の方法、
即ち、泉屋信夫等著「合成化学シリーズ−ペプチド合成
」１９７５年丸善株式会社発行：日本生化学会編「生化
学実験講座／タンパク質の化学１−ＩＶＪ１９７７年東
京化学同人発行に記載の方法を利用することにより製造
することができる。

その実施態様の１つとして、固相法について以下具体的
に説明する。α−アミノ保護基を有するアミノｆａのカ
ルメン酸基をジビニルベンゼンで架橋したポリスチレン
樹脂などの支持体に結合させた後、α−アミノ保護基を
選択的に除去する。遊離したアミノ基に、α−アミノ保
護基を有する２番目のアミノ酸と反応させる。このα−
アミノ保たｉ基の除去とα−アミノ保護基を有するアミ
ノ酸の導入を〈シ返して目的のペプチド鎖を得る。次に
ペプチドのＣ−末端アミノ酸のカルダン酸基と樹脂との
間の共有結合を切断する。この際、共有結合を切断する
のに用いる試薬によっては、α−アミノ保護基や側鎖保
護基の除去を共有結合の切断と同時に行なうことができ
る。

上述の同相法は、すべての反応が１つの容器で行なえる
のでペプチドの製造が操作の上で簡単であり、また得ら
れた生成物は反応に用いた溶媒に可溶であるので、反応
に用いた適量の試薬およびＪ−“１１産物を５過により
除去できるために、目的のペプチドが短時間でしかも高
い収率で製造できることから、いわゆる液相法よシ有利
な方法である。

第１の方法で用いられる支持体としては、一般にジビニ
ルベンゼンで架橋した架橋度２チのスチレｙ　ｉ？　Ｉ
Ｊママ−，２００〜４００メツシユのサイズのものが望
ましい。樹脂をアミノ酸と反応させて結合する前に、樹
脂に官能基を導入し反応性を付与する。一般に、樹脂に
官能基を導入するためには、５ｎＣ１２ｆ　ｆ”、ｊ！
　ｆ７として用いるフリーデル、クラフッ反応によりス
チレンの芳香環とクロロメチルメチルエーテルとを反応
させ、該スチレンの芳香環をクロロメチル化する方法が
とられる。

；暦１の方法で用いられるα−アミノ保護基としては、
支持体とα−アミノ保趙基を有するアミノρごとのカッ
プリングに際して安定であり、側鎖保訂：基やペプチド
鎖に悪影響を与えずに容易に除去できるものが好ましい
。上述のような好ましいα−アミノ保護基としては、第
三ブトキシカルボニル（以下ｒＢｏｃＪと略称する）基
が挙げられる。このＢｏｃ構は、Ｉ　Ｎ　ＨＣｌ／酢酸
混合液、４ＮＨＣ１／ジオ＝？　？　７混合Ｕあるいは
５０　％　（Ｗ／Ｖ）　ＴｆＯＨ（テトラフルオロ酢酸
）　／ＣＨａＣＡ！ｚ　　混合液を用いて容易ニヘプチ
ド鎖から除去することができる。

側鎖保護基としては、カップリング及びα−アミノ保５
基の除去の時に安定であり、且つペプチド合成の段階で
容易に除去できる基が好ましい。

このような好ましい側鎖保護基としては、アルギニンの
側鎖保護用にはＮｏ２又はトシル基が、アスパラギン酸
の側鎖保護用にはベンジル基（以下ｒＢｚｌＪと略称す
る）基が、システィン及びグルタミン酸の側鎖保護用に
はＢｚｌ基又はＯ−メチルベンジル（以下「０ＢｚＪと
略称する）基が、ヒスチジンの側鎖保護用にはＢｚｌ基
、ベンジルオキシカルｙｆ？ニル（以下ｒＺＪと略称す
る）基又はＢｏａ基が、リジンの側鎖保護用には２基、
トシル基又はジインプロビルメチルオキシカルゼニル（
以下ｒＤｉｐｍｏｃｊと略称する）基が、メチオニンの
側り１保護用にはスルホキシド基が、そしてセリン、ス
レオニン及びチロシンの側鎖保ｎ用にはＢｚｌ基が苧り
られる。

＋ｂｒ、明のペプチドは以下の方法でも得られる。

まず、得ようとする本発明のペプチドのアミノ酸配列の
各アミノ酸に対応する遺伝暗号を選び出す。

この妃び出した各遺伝暗号を基忙して、本発明のペプチ
ドの遺伝情報を有する二重鎖ＤＮＡ断片を化学合成する
。得られた二重鎖ＤＮＡ断片を複製可能な発現媒体であ
るベクター九組み込む。次にＤＮＡ断片を組み込んだベ
クターを宿主に押入する。

Ｄ　Ｎ　Ａ断片を組み入れた上記ベクターを宿主に挿入
することによって、該宿主は形質転換され、その結果形
質転換体が形成される。次に常法により、この形質１′
、ｒ、換体を遺伝子発現凰の有無により元の宿主から単
ν：ＩＥする。トドられた形質転換体を培養することに
よって、本発明のペプチドが製造される。

上記の方法に用いられる宿主としては、微生物、哨乳〆
ＩＩＪ堅’；Ｊ　＋Ｍ側および植物細胞等か挙げられる
。これらのＹｄ主の内、微生物と哺乳動物細胞を使用す
るのが望ましい。望ましい微生物としては犬腸呵、枯草
菌、好熱菌等の細菌類、放線菌類及び酵母が挙げられる
。

本発明で用いられる複製可能な発現媒体即ちベクターは
、前記の宿主に感染し得るものである。

このようなベクターとしては、プラスミド、ファージ、
ウィルス等が挙げられる。上記のベクター及び宿主は、
生理から生物工学的に傅らｎた冠伝子からペプチドを製
造する場合にも用いられる。

以下に示す各アミノ酸残基に対応する遺伝暗号が本発明
の生理活性ペプチドの遺伝子を合成するために用いられ
る（但し、以下に示す遺伝暗号において、Ａはデオキシ
アデニル酸残基を、Ｇはデオキシファニル酸残基を、Ｃ
はデオキシシチジル酸残基を、セしてＴはチミジル酸残
基を表し、遺伝暗号の左側は５′−水酸基側を、遺伝暗
号の右ｌｌｌ１ｌは３′−水酸基側をそれぞれ表す）： フェニルアラニンに対する遺伝暗号はＴＴＴ又はＴＴＣ
，ｅｌイ’７７％対する遺伝暗号は’ｒＴＡ、　ＴＴＧ
。

ＣＴＴ、　ＣＴＣ，ＣＴＡ又はＣＴＧ　、インロイシン
に対するｉ’ｌ伝暗号はＡＴＴ、　ＡＴＣ又ＦｉＡＴＡ
　、メチオニンに対する・Ｒ伝暗号はＡＴＧ　、バリン
に対する遺伝暗号はＧＴＴ　、　ＧＴＣ、ＧＴＡ又はＧ
ＴＧ　、セリンに対する遺伝暗号はＴＣＴ、　ＴＣＣ，
ＴＣＡ、　ＴＣＧ、　ＡＧＴ又はＡＧＣ。

プロリンに対する遺伝暗号はＣＣＴ、　ＣＣＣ，ＣＣＡ
又Ｉｒ１ＣＣＧ　、スレオニンに対する遺伝暗号はＡＣ
Ｔ　。

ＡＣＣ，ＡＣＡ又はＡＣＧ　、アラニンに対する遺伝暗
号ばＧＣＴ　、　ＧＣＣ、ＧＣＡ又はＧＣＧ　、チロシ
ンに対するフ１１伝暗号はＴＡＴ又はＴＡＣ、ヒスチジ
ンに対する遺伝暗号は、ＣＡＴ又はＣＡＣ、グルタミン
に対する遺伝暗号はＣＡＡ又はＣＡＧ　、アスＡラギン
に対する遺伝暗号はＡＡＴ又は７ＶＡＣ％　　！Ｊジン
に対する遺伝暗号はＡＡＡ又はＡＡＧ　、アスパラギン
酸に対する遺伝暗号はＧＡＴ又はＧＡＣ、グルタミン酸
に対する遺伝暗号はＧＡＡ又はＧＡＧ　、システィンに
対する遺伝暗号はＴＧＴ又はＴＧＣ，）ＩＪブトファン
に対する遺伝暗号はＴＧＧ　、アルギニンに対する遺伝
暗号はＣＧＴ　。

ＣＧＣ、ＣＧＡ、　ＣＧＧ、　ＡＧＡ又はＡＧＧ　１そ
してグリシンにズ；ｊする遺伝暗号はＧＧＴ　１ＧＧＣ
、ＧＧＡ又はＧＧＧカ用いられる。また、以上の遺伝暗
号の他に、ＡＴＧはメチオニンの遺伝暗号であると同時
に、ペプチド合成の開始暗号として用いられ、ＴＡＡ。

ＴＡＧ及びＴＧＡ　ｆｆペプチド合成の終止暗号として
用いられる。遺伝子は、前記の４種類のデオキシリボヌ
クレオチドが、３′部位と５′部位でリン酸ジエステル
結合によって連結したものである。従って、ペプチドの
遺伝子は、保護基と結合剤を用いて化学合成できる。保
護基としてはデオキシリボヌクレオチドの予じめ決めて
おいた位置ｔ−選択的に保護できるもので、ヌクレオチ
ド合成の反応中安定であ夛、ヌクレオチド間の結合を切
断することなく容易に除去できるものが望スしい。更に
、反応中間体の分離精製も容易に行なわなければならな
い。

例えば、ペプチドの遺伝子を合成するには以下に述べる
トリエステル法を用いることもできる。

即ち、アミノ酸暗号に対応するデオキシリボヌクレオチ
ドのトリマーブロックと要すればダイマーブロックｆ　
？／Ｊめに合成する。次いで得られたブロックを縮合し
て、約１２〜２３個のヌクレオチド山んｊ、らなるオリ
ゴマーを形成するこの縮合反応は、ポリマーのような支
持体を用いる同相法により行フ！うことが’ｍ、’！し
い。得られたオリゴマーをＤＮＡ　！Ｊカー七を用いて
伸長させ、得られるＤＮＡを水；いにｊ合さ−じること
により、目的とするペプチドのＮ、Ｃ１仏子二重順ＤＮ
Ａを形成つ−る。

上５己のデオキシリボヌクレアーゼのアミノ基の保４艮
りとしては、ン′オキシンチジン及びデオキシアデノ７
ノにはベンゾイル基”が、デオキシグアノシンνこ；ま
イソブチル赫刀；吊けられる。水酸基の保ｉＬ・二Ｍと
しでは、トリチル基、アシル基、シリル基及び−ｔＪシ
らの訪η工体基を用いることができる。これらの水酸基
の保ＩＪ藩の甲では、トリチル基の誘明８俸込５が好ま
しく用いられる。ぐ５合剤としては、２．４．６−　ト
ＩＪイノプロピルベンゼンスル７オニルテトラゾリド（
以下しばしばｒＴＰｓＴｅＪと略称する）のような独力
な縮合剤が望ましい。デオキシリボヌクレアーゼの縮合
により得られたオリゴヌクレオチドの保Ｑ＆は以下に述
べる方法で除去することができる。まず、アミン保δ基
及びアシル誘導体基などの３′−水酸基の保護基はアン
モニア水によって除去し、次いでトリチル基の誘導体基
などの５′−水酸基保農基ｔ？８０容量係の酢酸によっ
て取り除く。

ｄＡＴＰ　の存在下、ターミナルトランスフェラーゼの
作用により、オリゴ（デオキシアデノシン−燐酸）〔以
下しばしば「オＩＪ　：ｒ　（ｄＡ）Ｊと略称する）を
上記で得た二重鎖ＤＮＡの３′−末端に付加させる。

一方、プラスミドｐＢＲ３２２（エフ、ゼリノ々−等、
「コンストラクション、アンド、キャラクタライゼーシ
ョン、オブ、二ニー、クローニンク、グイヒクルス■；
ア、マルチパーパス、クローニング。

システム」　、ジーン、１１月（１９７７年）〔Ｆ。

Ｂｏｌｉｖａｒ　ａｔ　ａｌ、”ｃｏｎｓｔｒａｃｔｉ
ｏｎ　ａｎｄ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉ　−ｚａｔＬｏｎ
　ｏｆ　ｎｅｗ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｖ＠ｈｉｃｌｅｓ　
（１：　Ａｍｕｌｔｉ　−ｐｕｒｐｏｓｅ　ｃｌｏｎｉ
ｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ”、　Ｇｏｎｅ、Ｎｏｖｅｍｂｅｒ
（ｌｓ７７）］）を制限酵素ＥｃｏＲＩで開裂し、次い
でλ−エキソヌクレアーゼで処理する。続いて、ｄＴＴ
Ｐ　の存在下、ターミナルトランスフェラーゼの作用に
より、開裂したプラスミドｐＢＲ３２２の３′−末柵に
オリゴ（ｄＡ）を付加さぜる。上記のオリゴ（ｄＴ）の
付加した線状のプラスミドｐＢＲ３２２を混合し、アニ
ーリングする。アニーリングにより得られたプラスミド
を大腸菌Ｘ１７７６株〔アメリカ合衆国メリーランド州
ロックビルのアメリカン、タイプ。カルチャー、コレク
ション（ＡＴＣＣ）寄託番号第３１２４４号）Ｋ押入し
て、該菌株を形質転換する。汁〉質・詠し４された菌株
はアンピシリンなどのｊ、さ創ｒ′ｒｌ性で＾Ａ択する
。

次に、大ｊＶ〜口のトリプトファンオペロンのプロモー
ター、オペレーター及びリポソーム結合部位を有し、両
唱にＥｃｏＲＩ切ＶＪｒ端を有する３００塩基対のＤＮ
Ａ断片を、プラスミドｐＢＲ３２２に組み込まれた前記
ＤＮＡの’Ｆ：ｃ　ｏＲＩ切Ｖ４ｊ部位に接続し、該プ
ラスミドにｆＩｌみ込む。

次いで、このようにして倚られたプラスミドを大＋ｊ！
′１を人の細胞内にζス入する。

ｉｆｉ　ＤＮＡ　ｌυｒ片か前記のプロモーターの後に
、ｍＲＮＡへの販為、力向に正しく接続していれば大腸
菌の癲１、ｑａ中でＰｉ、ｒ＝　ｅＬＩＮＡは）ＩＩＩ
記オペロンのプロモーターの働きでｍＲＮＡ　Ｋ転写さ
れる。更に、転写されたｍＲＮＡ　は開始トリプレット
暗号の部分からアミノ酸に翻訳され、目的のペプチドが
つくられる。

このようにして、ｌｌの培養液中の培養した大腸菌の細
胞η）ら、目的のペプチドを０．１７１７９抽出するこ
とができる。

つぎに、目的のペプチドを産生ずる大腸菌のＡ−ｍ胞を
培養後集め、溶菌する。６０した細胞を含む溶液中の核
酸をリボヌクレアーゼ及びデオキシリボヌクレアーゼで
分解した後、目的のペプチドを６５９Ｊ＃和度の硫酸ア
ンモニウムで塩析する。得られた塩析沈殿画分をコンド
ロールドポアガラスピーズ（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｐ
ｏｒｅ　ｇｌａｓｓ　ｂｅａｄｓ）を用いて精製する。

本発明の新規なペプチドのアミノ酸配列を決定する方法
は以下の通シである。ま゛ず、最初に本発明の新規な生
理活性ペプチドのメチオニル結合をブロモシアンで切断
する。切断して得たペプチドＤｒ片？ｉ七ファテツクス
Ｇ−１００（ファーマシア。

ファイン、ケミカル社製、スウェーデン）き用い−Ｃ分
（して、′６断片のアミノ酸配列を公知の高精綻アミノ
Ｑ己列分析で、各断片のＮ−末端から順に決定していく
。一方、本発明の祈規な生理活性ペプチドをトリプシン
で部分分解し、得られたペプチド断片をセファデックス
Ｇ−１００力ジムを用いて分；［：（する。分離した各
断片を上述と同様の方Ｉ去で、各断片のアミノ配列を各
断片のＮ−末端から八に決定していく。ブロモシアンで
切断して得らｎたペプチドの各断片のアミノ酸配列とト
リプシンで切断して得られたペプチドの各断片のアミノ
酸配列を比較することによって、該ペプチドの各断片の
配列を決定する。このようにして、本発明の＝ｊｒ　ａ
なペプチドのアミノ酸配列を決定する。

ｉ’ＬｌｌＩ肥増殖の抑、！１１ｊ１例えば悪性腫瘍細
胞の増殖搾油」を目的とする賜金、本発明のペプチドは
一般には５．′４−脈内、励肉内又は皮下に注射投与す
ることができる。不発明のペプチドの１日投与量は、も
ちろん患者の年令、病状及び体重により異なるが、超電
、成人１人当りｌＸｌ０’〜ｌＸｌ０’単位７日の共で
注射投与される。

ウィルス性の疾病を治僚するために、秋ＥＴ　ＩＦ’１
１０ｇ当り本発明のペプチドｌＸｌ０’〜ｌＸｌ０９嚇
位含有する軟膏剤を皮膚に塗布することができる。

従来公知の医薬上許容しうる軟膏基剤を用いて、本発明
のペプチドを含有する軟膏剤を潤製することができる。

本発明のペプチドを含有する軟膏剤の１日投与量は、も
ちろん患者の年令及び病状により尺なるが、通常本発明
のペプチド基準でｌＸｌ０’〜ｌＸｌ０’単位となるせ
を分割して塗布することができる。

以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、本
発明は以下の実施例に限定されるものではない。

実施例に用いられている略語の説明 ａ−２−リジン：リジンの砿−アミノ基にベンジルオキ
シカルボニル基（２−）が結合したもの Ｇ　　Ｎ（ｈ　　フルギニン：アルギニンのグアニジノ
基（Ｇ−）Ｋニトロ基（Ｎｏｔ　　）が結合し走もの ｉｍＢｚｌ−ヒスチジン：ヒスチジンのイミダゾリル＆
（ｉｍ）にベンジル基（Ｂｚｌ−）が結合したもの ０−１＜ｚｉ−セリン：セリンの水６Ｌ（０−）にベン
ジルＭ（Ｂｚｌ−）が結合したもの Ｂｏｃ−ノフリン：パリンのα−アミノ基に６ｇ三ブト
キシカルゼニル励（Ｂｏｃ−）が結合したもの ｕＢ　ｚ　ｌ　二＆’ｌＺｊ＋　ｍ１ｉ−％の１つであ
るオルト−メチルベンジル基ＶＳＶ　　：水痘」口内炎
ウィルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ　Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ
Ｖｉｒｕｓ） ＡＭＶ　　二、ＩＪ−を骨ニガ芽球症ウィルス（Ａｖｉ
ａｎ　ＭｙｅｌｏｂｌａｓｔｏｓｉｓＶｉｒｕ３） ＢＳＡ　　：午血清アルブミン ＳＥＡ　　：マイトノエンの１１重であるスタフイロコ
ツカル、エンテロト二〜シンＡ （ン″ミ膓’ｙ”ｌ　） 工・二１（イ°＋４脂の６し浄） １イ、↑ｊｌ”ｊ　ＣＢｉｏ−Ｂｅａｄ　５−Ｘｚ　＊
　２００〜４００メツシユ（２係ジビニルベンゼン果（
、ウスチレンボリマーの商品名、バイオ−ラッド社畏、
アメリカ合衆国）〕１５０ｇを１１の蒸留ベンゼンに攪
拌しながら加える。３０分後、１・ｒｌ胎をガラスフィ
ルターで門取しり・ｚ（１とする・ 次に乾燥した樹脂を１１のメタノール中に、ｊχ拌しな
がら加え、３０分後にガラスフィルターでυ１，１取し
て乾燥する。乾儂して得ら１Ｌる側層ｔメタ、ノール、
メタノール／水及び水で順次洗浄する。洗浄したＩ±Ｌ
（脂を１１の１ＮＮａｏ）！水溶酸中に加える。

得られる混合物を沸騰水浴中で１時間仏拌した文、樹脂
を瞳取し、水洗する。次に、１４ら７する’、ｌ’Ｊ　
Ｉｔａ紫１１のＩＮ塩酸水溶液中に加え、沸騰水浴中で
１時間攪拌する。次いで樹脂を濾取し、水洗する。

水洗して得られる樹脂を４１の蒸留水に懸１′＋４した
後、静置する。１汁ｆ４３０分後、浮遊する政パーなｆ
Ａ脂をデカンテーションにより除去する。このよ）にし
て、雲脂を沈殿物として得る。沈殿した１ガ脂はガラス
フィルター上に濾取し、メタノールで洗浄する。洗浄し
た樹脂を少量のジメチルホルムアミド（以下「閲」と略
称する）に加え、３０分間８０℃で１２拌した後、攪拌
を濾取してＤｈ正およびメタノールで洗浄する。更に、
ケ脂勿２１のメタノール中で１時間攪拌した後濾取する
。傅られる樹脂を）ル乾しｆｃ区、さらに１００℃で２
１１ケ間兵窒；ｌ乙　、　１　勺　。

ニトソ２（クロロメチル舛脂の贋造） １侭Ｉ　Ｃ（ｆｆ　（ろｆｌ、だ；；４胆２５，９と蒸
留したクロロ、／　Ｆルメチル丁−テ／ｌ／　ｌ　ＯＯ
ｒｄ　ｔｃｌ　１の丸底二頭フラスコｌ、で入、シて、
２５℃で静〃會こ１時［口ＪＱ拌して’ｒ、ｊ　ｆ’：
ｌを顎ｊｌ；′、ｌさ」サグこ後、０℃に冷只する。こ
の膨１刊し；、＋、−、ＩＥＪ↑脂（τ１．Ｆ１８＋ｄ
の５ｎＣＪ４を含有する５　０　ｒｔＥのり【；「Ｊメ
チルメー、シルエーテルｒｏ℃に保ったまｌｉ−拌しな
がら３０分間かけて力ｒえた後、さらに３０分１＞；Ｉ
　＋”−拝して反応生成物ケ得る。このようにして得ら
ねた生成物をガジヌフィルターで置数し、５θＯイのノ
オキ→ノンー水（１：１）、次いで５０　Ｑ　、Ｔｅの
７・オキサ７−３　Ｎ塩１２（３：１）で静かＫ　６’
ｅ、υ°卜する。更に、生成物を水、ジオキサンースク
Ｚコびメーノー、−Ｌ、でｊヌ次洗浄した後、減圧下１
００℃で屹、、こする。

工ｆ°２３ Ａ、（５−Ｚ−リジン） １１．９のＬ−リジン銅塩に、１ｏＩのＮａＨＣＯｓと
１２−のＺ−Ｃ１を４分の１ずつ１０分おきに水冷下（
ｄ拌しながら加え、さらに１５時間攪拌する。

このようにして得られる沈殿物を濾取し、水、エタノー
ルおよびアセトン／エーテルで順次洗浄する。洗浄した
沈殿物を２５０−の水に１ｔｔｌ　ｆ’ｊ４し、次にこ
の懸濁液に４１２−の６Ｎ塩酸水溶液を加えることによ
り上記沈殿物を溶解させる。次いで、得られる溶液１ｃ
Ｈｚ８ガスを１〜２時間通気する。

その結果生成するＣｕＳをハイフロスーツ９−セル（和
光紬薬製、日本）を用いて濾去し、このＣｕＳをＩＮ塩
酸水溶液で洗浄する。上述の操作で得られる濾液及び洗
浄を集めて、空気を通しＨ，Ｓを除去する。その後、こ
の溶液を水冷下濃アンモニア水を加えてｐＨ６，５にし
、冷蔵庫で２時間放置する。

その結果得られる沈殿物を濾取し、水、エタノール及び
エーテルで順次洗浄する。このようにして、融点２５４
℃のｇ　−Ｚ−リジン１０ｇが得られる。

生成する一−２−リジンの収率は６５チである。

得られるｇ−１＋）ジンの再結晶は、希塩酸に溶解した
後、アンモニア水で中和して行う。

Ｂ、（Ｇ−Ｎｏ、−アルギニン） 発煙硝Ｇ：２１２０ｍｇと発煙硫酸７５−の混合液を水
冷し、この混合液に１１０！ｉのＬ−アルギニン堪ニ堪
を（を拌しながら徐々に加える。更に、儂硫ζ〕べ５ｄ
を上記の混合液に加える。得られる混合１・氏を１時開
攪拌した後、氷片中に注ぎ、濃アンモニア水でｐＨ８に
調節する。次に該混合液を酢酸でｐＨ６に調荀した後、
冷Ｒ庫内で約４時間放置する。

その結果化じる沈殿を濾取し、熱水よシ再結晶する。イ
Ｊられる結晶をエタノール及びジエチルエーテルでＪ白
次洗浄し乾燥する。

このようにしてＨ：１点２５１℃のＧ　−Ｎｏ、−アル
ギニン６０，９が得られる。Ｇ　　Ｎ（ｈ−アルギニン
の収率は５０係である。

Ｃｏ　　（ｉｍＢｚｌ−ヒスチジ゛ン）２０．９のし一
ヒスチジン塩酸塩Ｈ２０を、ドライアイス−アセトンの
浴中で一３０℃に冷却した２　００　ｒｐＪ！の液体ア
ンモニアに浴かし、この溶液に金１．Ｘナトリウムの小
片を、浴液の・１７色が消えずに残るようＶこなるまで
侵拌しながら加える。次に少Ｊ、ｔのヒスチジン’Ｅ　
、Ｍ　ｆ６液のｆｆ色が消えるまで加えた後、塩化ベン
ジルを該溶液に部下−ｔ−る。この混合溶液ｔｌ−３０
分間侵拌した後２この混合浴な中のＮＨ３ｔ−室温で大
気圧下蒸発させ、次いで水流ホンゾを用いて減圧下ＮＨ
３ｆｉ−除去する。ＮＨ３＋全３＋余去晟を１００　ｍ
ｌの氷水に注ぎ入れる。得られる生じる沈殿物を濾取し
、７ｏＩ縦％エタノールから再結晶する。融点２４８℃
のｉｍＢｚｌ−ヒスチジＤ、（０−Ｂｚｌ−七リン） ２３７Ｉのアセチル−Ｌ−セリンを２３５　ｒｎｔのｒ
ｔＥを３６℃で１０日間放置する。生じる沈澱を直去し
、′濾ｉＨを、ツユ′宿した後、この儂シ宿ｄ−又液に
アーヒトン金ｈ０えて結晶を得る。このようにしてｔｏ
ｏｇのＯ−ｎｚ　１−七リンが得られる。同様の方法に
従って２４０ｇのアセチル−Ｌ−スレオニンカラ１００
　、ｑの０−Ｂｚｌ−スレオニンが（；トられる。

Ｅ、（０−１１ｚｌ−チロシン） １．８９のし一チロシンと１，２ｇの−ＣｕＳＯ４、５
Ｈ１ＯＳ：　５　ｍｅの２　Ｎ　Ｎａ０Ｉ［水７６欲と
Ｉ　Ｏｔ４の水との溶液に懸〆、゛つして２時田ｊ録拌
する。この懸濁液に６０−のメタノールをハロえ、次い
で１．２−の臭化ベンジル及び０．７ゴの２　Ｎ　Ｎａ
ＯＨ水溶液を徐々に加える。

１５分後０．３　ｒｎｌの臭化ベンジル及び０，８．ゴ
の２ＮＮａＯＨ水、・谷液ｔ−更に加える。得られた混
合液を１時間攪拌し７を後、生じる沈殿を濾取し、この
沈殿をメタノール−水（１：３）で洗浄する。このよう
にして、２ｇの０−１３ｚｌ−チロシンの銅塩を得る。

この０−Ｂｚｌ−チロシンの銅塩と２０−のＩＮ　　Ｅ
ＤＴＡ　　水ｆ８液とを乳鉢内でこねて得られる混合吻
〃・ら」ｍｌ固形分濾取し、この固形分を水洗する。

洗浄し７と生成物を少量のＥＤＴＡを含有する熱水から
再結晶することにより、標点２２３℃を有す６Ｏ−Ｂｚ
ｌ−チロシン１ｇが得られる。０−Ｂｚｌ−チロシンの
収率は３０％である。

Ｆ、（Ｓ−Ｂｚｌ−システィン） １５７ｇのし一システィン塩酸塩を２１の２ＮＮａＯＨ
水溶液に溶かし、この溶液に２５βｇの臭化ベンジルを
水冷下激しく壇拌しながら添加後、冷室で５時間攪拌す
る。その後、該溶液を酢酸でｐＨ５に調節して沈殿物を
生成させる。生成した沈殿物を濾取し水洗する。このよ
うにして、融点２１２℃の５−Ｂｚｌ−システィン１６
０ｇが得られる。５−Ｂｚｌ−システィンの収率は７０
％である。

上述と同様の方法で１６０ｇのアスパラギン酸から１５
０Ｉの０−Ｂｚｌ−アスノぞラギン酸が、１６０ｇのグ
ルタミン酸から１５０９の０−Ｂｚｌ−グルタミン酸が
得られる。

Ｇ、（Ｂｏａ−アミノ［ ２９ＩのＬ−バリンを２５０−のＩ　Ｎ　ＮａＯＨ水溶
液に溶かして得られる溶液に水を加えて４００ｍ／のｌ
＋；　（’＋７−とする。この溶液に１５０　ｍｅのテ
トラヒドロフラン全添加後、１０℃で激しく攪拌しなが
ら、１ｊシ溶７ｉｆにｌ　ＯＯ＋ｒｒｉのＢｏａ　−Ｃ
Ｉ　　を５分の１ずつ１０分毎疋加える、一方、２　Ｎ
　ＮａＯＨを前記のＢｏｃ　−Ｃ１を加えるたびに該溶
液に加えて、溶液のｐＨｔ８〜９１Ｃｉつようにする。

、２時間後、このａ合液をジエチルエーテルで抽出し、
得られる水層を０．５Ｍクエン酸水溶液で酸性にし、析
出する油状吻ｉ′ｒを酢酸エチルで抽出する。得られる
抽出；〕を少壮の水で洗浄しＮＩＬ２ＳＯ４で乾燥後、
減圧下で７．　、’ＶＩする。４縮抽出物に石油エーテ
ルを加え−Ｃ，冷蔵庫内に放（ｊアシ結晶を生成させる
。生成結晶をＩＩり取して乾燥する。

このようにして融点７８℃のＢｏａ−バリン３０ｙを得
る。Ｂｏｃ−バリンの収率は５５％である、Ｈ８（その
他のＬｌｏｃ−アミノ酸） 上進と同４３１、の方法を行うことにより、ＢｏＣ−グ
リシ：／１５ｇ、Ｂｏｃ−アラニン１６　ｆｉ、　　Ｂ
ｏａ　−。

イシン１５．！９、Ｂｏｃ−インロイシン１５，９．Ｂ
ｏａ−セリン（Ｂｚｌ）１４．５’、　　Ｂｏａ−スレ
オニｙ（Ｂｚｌ）１４．９、Ｂｏｃ−シスディン（Ｂｚ
ｌ）１５　ｇ、Ｂｏｃ−メチオニン１ｓｇ、Ｂｏｃ−プ
ロリン１２．！？、Ｂｏｃ−アスパラギンｒＲ（ＯＢｚ
ｌ）　１５　ｇ、Ｂｏａ−グルタミン酸（ＯＢｚｌ）　
１５　ｊＪ、Ｂｏａ−グルタミン１５ｇ、Ｂｏｃ−ヒス
チジン（Ｂｚｌ）１２　ｇ、Ｂｏｃ−０イシン（Ｚ）ｌ
　３，９ＳＢｏａ−アルギニン（Ｎｏｔ）　１５．９　
ＸＢｏｃ−フェニルアラニン１５ｇ、Ｂｏａ−チロシン
！Ｂｚ　１　）１５９及びＢｏｃ−）リプトファン１０
ｇがそれそり、ｙリシン３０！９、アラニン３０Ｊ、ロ
イシン３０ｇ、インロイシン３０．９．セリン（ＢＺＩ
）３０ｇ１スレオニン（Ｂｚｌ）　３０１　％　システ
ィン（Ｂｚｌ）３０ｇ、メチオニン３０ｇ、プロリン３
０１１アス、ｅラギン酸（ＯＢｚｌ）　３０１　ｓ　グ
ルタミン酸（ＯＢｚｌ）３０９、グルタミン３０ｇ１ヒ
スチジン（Ｂｚｌ）３０９、リシ７　（Ｚ）　３０　ｐ
、　フルギニン（Ｎｏ２）３０．９、フェニルアラニン
３ｏＦｓチロシン（Ｂｚｌ）３０５＋及びトリプトファ
ン３０ｇから得られる工程４（Ｂｏａ−セリン（Ｂｚ　
ｌ　）と樹脂との結合）２ｇのクロロメチル樹脂（Ｃ１
！総含址４ミリモル）、２ミリモルのＢｏＣ−Ｌ−セリ
ン（Ｂｚｌ）、１，８ミリしルのトリエチルアミン反び
１２ｍｅのジメチルホルムアミドの混合物を室温で２４
時間振とり−４−勺。仄ニノノノスフィルターを用いて
上記混合物力・Ｌ：）固ノ１ン分を８取し、得られる固
形生成物をそれ（７７ｔ７０・０’　ｒｒｔｌ、のジメ
チルホルムアミド、エタノールＸ　ｕｒこ／エタノール
及び項化メチレンで順次洗治する。七の後生成物を奴は
で減圧下乾燥する。

主：、パζ′：′Ｊのアミノｒ：、之含量を１ｌｉｉｔ
定するために、該生成’ｌ？Ｊ　５　Ｑ　Ｉｈ９を秤（
）“し、１２Ｎ塩酸水溶液とジオキサンのｌ二ｌ谷伝比
の混合物中に入れて２４時間加水分６Ｊ−Ｌ　ｌｅ後、
アミノ酸分析計で測定する。生成しりのアミノ直盆斂は
０．２ミリモル／ｇである。

工ｊ４５　（Ｂｏａ　−Ａｌａ　−５ｅｒ（Ｂｚｌ）−
樹脂）工１．Ｈ４で得られた２ｇのＢｏａ−セリン（Ｂ
ｚｌ）（以Ｆ　ｒＢｏｃ−ＧｌｎＪと略称する）樹脂ｉ
１６０ｍのｏｔ酸中：・こ入れて至温で６時間放置する
。次にこの混合物をガンスフイルターで濾過する。得ら
れた固形旬を１６０　ｍｌの酢酸中に入れて振とうし、
瀞取ずゐ。この操作と３回くりかえす。天に上記のｉ１
形；、’ｌ　ｋ　１６　Ｃ１ｒ＝ｔのＩＮ塩畝水浴版／
酢酸中に人Ｊｔて室・路で３０分ｊｉ、ｉｊ　Ｊ曙とう
し、１１↑月旨からＢｏ仁Ｈ＞全除去すも。このように
して得られた生成５り゛をら１え取し、酢ａ　、エタノ
ール及びジメチルホルムアミドで、それ−どれ３回ずつ
１ｍ次洗浄する。６ヒ浄生成物を１６０−の１０重λ幅
トリエチルアミン／ツメチルホルムアミド中に入れて１
０分間県とうして中和反応を行なう。その結果、得らｎ
乙生成ゼを浦取シテジメチルホ／Ｌムアミドで洗浄し、
次いでちに化メチレンで洗浄する。６１１：浄生ＤＺ物
をＬ２ｍｉの塩化メチレン！に、２ミリモルのＢｏＣ−
アラニンｆｒ谷かした溶液中に入れ、扇とりする。１０
分後、この混合物に６０ｍ１の塩化メチレンに２　Ｑ　
ミＩＪモルのジシクロへキシル力ルゼジイミドを溶かし
た溶液中に加え、室温で２時間系とうしてカップリング
を行なう。その結果潜られる生成物を濾取し、塩化メチ
レン及びエタノールで、ｆ：ム次洗浄する。

工程６　（Ｂｏｃ−ペプチジル宙脂） 工程５と同嫌の操作で繰り返してアミノ酸全呻長させて
下記Ｅｏｃ−ペプチジル樹脂を得る０Ｂｏａ　Ｇｉｎ　
Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　（Ｂｚｌ）　
Ｖａｌ　Ｌｙｓ　（Ｚ）Ｇｌｕ　　（ＯＨ２，１）Ａｌ
ａ　Ｇｌｕ　　ｒＯＢｚｌ）Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　
　（Ｚ）Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）　
　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　　（Ｂｚ
１３Ｓｃｒ　　（Ｂｚｔ）Ａａｐ　　（ＯＢｚｌ）Ｖａ
ＩＡｌ＋１ＩＡａｐ　　（ＯＢＺｌ）　ＡｓｎＧｌｙ　
Ｔｈｒ　　（Ｂｙ、１）Ｌｃｕ　Ｐｈｅ　　Ｌｅａ　Ｇ
ｌｙ　　ＩＩｓ　　Ｌａｕ　ＬｙａｆＺ）　　Ａｌ１１
ｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＴｈ
ｚｌ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）Ｓｅｒ　　ｆＲｚｌ
）　　八ｓｐ　　（ＯＢｙ、１）Ａｒｇ　ｆＮＯ２）Ｃ
１５（ｚ）　　ＩｌｅＭｅｔ　　Ｃａｎ　　Ｓｅｒ　　
（ＢＺＩ）ＧＩＩＩ　　Ｉｌｅ　Ｖａｌ　　Ｓｒｒ　　
（Ｂｚｌ）ＰｈｅＴｙｒ　　（８７，１）　　Ｐｈｅ　
　Ｌｙｓ　　（ｚ＞　　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　　Ｌｙｓ　　
（Ｚ）　　ＡｓｎＰｈｅ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ａａｐ
　　（ＯＢｚｌ）　　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｇｉ
ｎ　５ｅｒ（ＢＺｌ”ｌ　　１１ｃＧｉｎ　Ｌｙｓ　　
（Ｚ）Ｓｅｔ　　（Ｂｚｌ）Ｖａｌ　　Ｇｌｕ　　（Ｌ
）ＢＺＩ）Ｔｈｒ　　（ｌｚｌ）　　Ｉｌｃ　　Ｌｙｒ
；　　（、Ｚ）　　Ｇｌｕ　　（ＣＩｌｚｌ）　　Ａｓ
ｐ　　（ＯＢｚｌ）八ｌｅｔ　　ＡＳｎ　　Ｖａｌ　　
　Ｌｙｓ　　（Ｚ）Ｐｈｅ　　Ｐｈｅ　　Ａｓｎ　　Ｓ
ｅｒ　　　（Ｂｚｌ）ＡａｎＬｙｓ　　（Ｚ）Ｌｙｓ（
Ｚ）　　Ｌｙｓ　（Ｚ）Ａｒｇ　（ＮＯ２）　ＡＳｌ）
　　（ＯＢｙ、１）　　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）Ｐｈｅ
　Ｇｌｔ＋　　（ＯＲｚｌ）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　
Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　　（ＢＺＩ）　　Ａｓｎ　Ｔｙｒ［ｈ
ｚｌ）Ｓａｒ　　（ＢｚｌＪ　　Ｖａｌ　’ｌ’ｈｒ　
　（Ｂｚｌ）Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）ＬｅｕＡ３ｎ　Ｖ
ａｌ　Ｇ１１ｌ　Ａｒｇ　　（Ｎｏｗ）ＬｙＳ　　＜ｚ
）Ａｌａ　　Ｉｌｅ　Ｈｉｓ（Ｂｚｌｌ　　Ｇｌｕ　　
＜ＯＨ２，１）Ｔ、ｅｕ　　Ｉｌａ　　Ｇｉｎ　Ｖａｌ
　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｇｌｕ（Ｌ’１３ｙｉ）　　Ｌａｕ
　Ｓｅｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｌａ　
ｆ、ｙｓ　　（Ｚ）　　Ｔｈｒ（１３ｚｌｌ　　Ｇｌｙ
　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ　　（ＤＪＯａ）　　Ｌ
ｙｅｓ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ　　（ＮＯ２）Ｓｅｒ　　
（！（ｚｌｌ　　Ｇｌｎ　；・！ｅｔ　　Ｌｅｕ　Ｐｈ
ｅ　　Ａｒｇ　　（ＮＯ２３Ｇｌｙ　Ａｒｇ（Ｎｏｗ）
　Ａｒｇ　（Ｎｏｔ）　Ａｌａ　Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）　
　ａｔ脂前記Ｂｏａ−ペプチジル樹脂とＢｏａ−メチオ
ニンを用いて、工程５と同様の操作により下記１１ｏｃ
　−メチオニルペプチジルｔｆｉｊ脂を得る。

Ｂｏｃ　　Ｍｅｔ　　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｉ）
Ｐｒｏ　　Ｔｙｒ　　（Ｂｚｌ）Ｖａｌ　　Ｌｙｓ（Ｚ
）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　Ａｌａ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚ
ｌ）　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　（Ｚ）Ｌｙｓ　（Ｚ）
　Ｔｙｒ　（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌ
ｙ　Ｈｌｓ　（Ｂｚｌ）Ｓａｒ　（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ　
（ＯＢｚｌ）　Ｖ’ａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　（ＯＲｚｌ
）ＡＩ！１ｎＧｌｙ　Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　Ｌｅｕ　Ｐ
ｈｅ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　ＩＩｓ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　（Ｚ
）Ａａｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｇｌｕ　ｆＯＢｚ
ｌ）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　５ｅｒ（Ｂｚｌ）　Ａｓ
ｐ　（ＯＢｚｌ）　Ａｒｇ　（Ｎｏｗ）　Ｌｙｓ　（Ｚ
）　Ｉｌｅ　ＭｅｔＧｉｎ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｇｉ
ｎ　Ｌｉｅ　Ｍａｌ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｔ
ｙｒ（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｌｅｕ　Ｐ
ｈｅ　Ｌ１２（Ｚ）　Ａｓｎ　ＰｈｅＬｙｓ　（Ｚ）　
Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｇｉｎ
　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）Ｉｔｓ　Ｇｉｎ　Ｌｙａ　（Ｚ）
　Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）　Ｖａｔ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）
Ｔｈｒ　（Ｂｚｌ）　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｇｌｕ
　（ＯＢｚｌ）　Ａ１１ｌ）　（ＯＢｚｌ１Ｍ＠ｔ　Ａ
ｓｎ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　ＰｂｅＰｈｅ　Ａａｎ
　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）Ａｓｎ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｌｙｓ
　（Ｚ）　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ａｓ
ｐ（ＯＢｚｌ）　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｇｌ
ｕ　（ＯＢｚｌ）　Ｌｙａ　（Ｚ）Ｌｃｕ　Ｔｈｒ　（
Ｂｚｌ）　Ａｓｎ　Ｔｙｒ　（Ｂｚｌ）　Ｓｅｒ　（Ｂ
ｚｌ）　ＶａｔＴｈｒ　　（ｎｚｌ）　　Ａｓｐ　　（
ＯＢｚｌ）　　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｔ　Ｇｉｎ　Ａｒ
ｇ（ＮＯ２ｊ　　Ｌｙ＋　　（Ｚ）　Ａｌａ　Ｉｌｃ　
Ｈｉｓ　　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）Ｌｅ
ｕ　　Ｉｌａ　　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　？、′１．ｅｔ　Ａ
ｌａ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｌｅｕ　５ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　　（Ｚ
）　　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）　　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ（Ｚ）
　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ（
Ｎｏｔ）　　Ｓｅｒ　　（Ｂｚｌ）Ｇ１１”、Ｌｅｔ　
Ｌｑｕ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　　（ＮＯ２）　　Ｇｌｙ　Ａ
ｒｇ　　（Ｎｏｗ）　　Ａｒｇ（Ｎｏｔ　ｌ　＋’ｉｌ
ａ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　−；、’↑脂、二さ７　（：
：’：ｒ　ｉＥ’からのペプチドの切ｌ訴）エピ６でｍ
られたＬ４，９のＢｏｃ−ペゾチジルー・ｊ　１ｉｉｒ
と１．４ｇのＢｏｃ−メチオニルペプチジル樹脂の各々
と１　ｍ（のアニソールを１ポリテトラフルオロエチ７
）でカバーした攪拌子の入った反応容器Ｉｌｃ入１て、
ドライアイス−アセトンで冷却しながらフン化水素２０
ｍｅを該反応容器に導入し、０℃で１　［′−’ｐ　ｒ
ｊＪ　４二拌仮、Ｏｃの或圧下反工６容器中のフッ１ヒ
刀に、ζＬ（１，ＪＴ去する。得られる残渣に１破ｈ１
係酢酸水石ｌ；χを／ｌｉ［＋えてイ、に拌後ペプチド
を抽出し、抽出物を分数ロートに入れてエーテルで此浄
して凍結乾該する。このようにして保ｉ＆を持たない各
ペプチド忙分離す２．。Ｂｏｃ−ペプチジル樹脂から得
られるペプチドをペプチド１　＃　Ｂｏａ−メチオニル
ペプチジル−ｉ、を脂から得られるペプチドをペプチド
２と呼ぶ。

（ＢｏＣ−グルタミンと樹脂との結合）工８４と同様に
して以下の実験により対照に用いるインターフェロン−
ｒを合成する。即ち、２．ゾのクロロメチル樹脂（Ｃ１
総含猥４ミリモル）、２ミリモルのＢｏａ−Ｌ−グルタ
ミン、１．８ミリモルのトリエチルアミン及び１２−の
りメチルホルムアミドの混合物を室温で２４時間撮とり
する。

次にガラスフィルターを用いて上記混合物から固形分を
濾取し、得られる固形生成物をそれぞれ７００−のジメ
チルホルムアミド、エタノール、酢酸／エタノール及び
塩化メチレンで順次洗浄する。その後生成物を室温で減
圧下乾燥する。生成物のアミノ酸含量を測定するために
、慈生放物５０ダを秤箭し、１２Ｎ塩酸水溶穎とジオキ
サンのｒａｔ答赦此の混合物中に入れて２４時間７ＪＯ
水分解した後、アミノ醒分析計で測定する。生成向のア
ミノ酸含量はα２ミリモル／９である。

Ｉ　ＢｏＩ＋−８ｃｒ　　Ｇｉｎ　　’３：：脂）？４
られた２ｇのＢｏｃ−グルタミン（以下ｒＢｏｅ　−Ｇ
ｌ　ｎｊとさ、称する）す・１脂を１６０ｍ１の酢酸中
に入れてＹτ１％’、で６時間数がする。次（てこの混
合物をガラスフィルターてｖ屯する。得られる固形物を
１６０−ｅのｌｒ’［Ｖ）：中に入れて振とりし　ｉｉ
、ｌＨ取する。この操作を３１ｒｉｌ　（：　ｌ）かえ
す。仄に上記の固形物を１６０イの１Ｎλ口水、容液／
酢酸中に入れて室温で３０分間伝とうし、樹脂からＢｏ
Ｃ蟇を除去する。

この上うにして得られた生成物を；）Ｃ取し、酢酸、エ
タノール又ひジメチルホルムアミドで、それぞれ３回す
つｉ：ｊＳ＋次洗浄する。１先浄牛成物ｋｚ；ｏｙのＩ
　Ｑ　２３　付％トリエチルアミン／ジメチルホルムア
ミド中ｋＣ入れて１０分ｊ司搬とうして中和反応を行な
う。そのｋＪ液、得られる生成物を濾取してジメチルボ
ルムアミドでし七（争し、次いで塩化メチレンで促浄す
る。洗浄生成′１Ｊと１２ｍ１の環化メ゛チレン（（２
ミリモルのＢｏａ−セリン（Ｌ３ｚｌ）を溶かしたｉ’
、：ｒ　ｊ６申しこ人ζし、ニー；とうする。１０分後
、この混合物に５０　＝；”のａ比メナレンに２０ミリ
モルのジシクロヘキシルカル−ジイミドを溶かした溶液
中に加え、室温で２時間振とうしてカップリングを行な
う。その結果得られる生成物ｆ、濾取し、塩化メチレン
及びエタノールで１脂次洗浄する。

（Ｂｏａ−ペプチジル樹脂） 工程５と同様の′Ｌ■作を繰粉・ペシてアミノ酸を呻長
させてＪ以下ＣＢすＣ−ペプチジル位、を脂を得る：Ｂ
ｏａ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　（ＱＢｚｌ）　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ
　（Ｒｚｌ）　ＶａｌＬｙｓ　　（ｚｌ　Ｇｌｕ　（Ｏ
Ｅｚｌ）　Ａｌａ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　ＡａｎＬ
ａｕ　Ｌｙｓ　　（Ｚ）　　Ｌｙａ　　（Ｚ）　Ｔｙｒ
　　（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　ＡｓｎＡｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｉ
ｓ　　（Ｂｚｌ）　　Ｓｅｒ　　（Ｂｚｌ）　Ａｓｐ　
　（ＯＢｚｌ）Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　　（Ｏｌｌｚ
ｌ）　Ａｇｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）Ｌｅｕ　
ＰｈｅＬｅｕ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　（Ｚ
）　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ（Ｚ）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚ
ｌ）　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ａ
ｓｐ（ＯＢｚｌ）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ｌｙｓ　（Ｚ
）　ｒｌｅ　Ｍａｔ　Ｇｉｎ　５ｅｒ（Ｂｚｌ）　Ｇｉ
ｎ　Ｉｌａ　Ｖａｔ　Ｓｅｒ　（Ｂｚｌ）　Ｐｈｅ　Ｔ
ｙｒ　（Ｂｚｌ）Ｐｈｅ　　　Ｌｙｓ　　　（Ｚ）　　
　Ｌｅｕ　　Ｐｈｅ　　　Ｌｙｓ　　　（Ｚ）　　　Ａ
ｓｎ　　Ｐｈｅ　　　Ｌｙｓ　　　（Ｚ）Ａｓｐ　（Ｏ
Ｈ２Ｉ）　Ａｓｐ　（Ｏｌｌｚｌ）　Ｇｉｎ　Ｓｅｔ　
（Ｂｚｌ）　Ｉｌｅ　ＧｉｎＬｙｓ　（Ｚ）　Ｓｅｒ　
（Ｂ７．Ｌ）　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）　Ｔｈｒ
　（Ｂｚｌ）１１ｅ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　Ｇｌｕ　（０８
ｙ、ｌ）　Ａｓｐ　（ＯＢｚｌ）　Ｍａｔ　ＡｓｎＭａ
ｌ　Ｌｙｓ　（Ｚ）　　Ｉ’ｈｅ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ｓ
ｅｒ　　（ＢｚＬ）　Ａｓｎ　Ｌｙａ　　（Ｚ）Ｌｙ３
（Ｚ）　　Ｔ、ｙＱ　　（Ｚ）　　Ａｒｇ　（ＮＯ２）
　　Ａｓｐ　　（ＯＢｚｌ）　　Ａｓｐ（ＯＢｚｌ＞　
　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　　（ＯＢｚｌ）　　Ｌｙｓ　　（Ｚ
）　　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）八３ｎ　　Ｔｙｒ
　　（Ｂｚｌ）　　Ｓｅｒ　　（Ｂｙｌ）　　Ｖａｌ　
　Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）　　Ｌｅｕ
　Ａｓｎ　Ｖａｔ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ　　（Ｎｏ２）　　
Ｌｙｓ　　（ＺＩ　　Ａｌａｌｌｃ　　Ｈｉ、ｑ　　　
ｆ１３ｚｌ）　　Ｇ１ｔ＋　　　（ＯＢｚｌ）　　Ｌｅ
ｕ　　Ｉｔｓ　　Ｇｉｎ　　Ｖａｌ　　ＭｅｔＡｌａ　
　Ｇｌｕ　　ｆＯＢｚｌ’ｌ　　Ｌｅｕ　Ｓｃｒ　　（
ｉｌｚｌ）Ｐｒｏ　　Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｙｓ（Ｚ）　
Ｔｈｒ　　（Ｂｚｌ）Ｇｌｙ　Ｌｙａ　　（Ｚ’）　　
Ａｒｇ　　（ＮＯｘ）Ｌｙａ　（Ｚ）　Ａｒｇ（ＮＯ＝
ｌ　Ｓｃｒ　（Ｂｚｌ、）　ＧＬｎ　Ｍｅｔ　Ｌ＠ｕ　
Ｐｋａ　Ａｒｇ　（Ｎｏｔ）　ＧＩＹＡｒｃ　（ＮＯ，
）　Ａｒｇ　（ＮＯ２）　Ａｌｔ　Ｓｅｔ　（Ｂｚｌ）
　Ｇｉｎ　−（Ｑｔ脂（Ｘ−・ｒ脂からのペプチドの切
ｒ！：ｆｒ　）得ら７ｔた１、　４　ｇのＢＯＣ−ペゾ
チジルー樹脂と１−のアニソールき、ポリテトラフルオ
ロエチレンでカッ々−した痔拌子の入った反工６容器に
入れて、ドライアイス−アセトンで冷却しなからフッ化
水ごＱ　２０　ｐｈｉをまど反応容器に肴５人し、０℃
で１時間攪拌後、０℃の桟圧下反応答器甲のフッ化水素
を除去する。得られ／、）残渣に１！：ｉｊ＆係酢酸酢
酸水溶液えて１：°仁拌１．シベブグードを抽出し、抽
出物を分液ロート分液に入１．てエーテルで洗浄して凍
結乾燥する。

このようにして保護基を持たないペプチドを分離する。

Ｂｏｃ−ペプチジル−樹脂から得られるペプチドをイン
ターフェロン−γと呼ぶ。

工ａ８（合成ペプチドの物性） 工穆７で得られる各ペプチドの分子量、アミノｒｒ１組
成及びアミノ酸配列を測定する。

各ペプチドの分子量はＳＤＳゲル電気泳動測定での移１
＃度から求める。

アミノ酸組成（モル％）は、−芝量の各ペプチドを６Ｎ
塩酸水溶液中で２４時間１１０℃で加水分解し、得られ
る混合物を二次元ペー・ぞ−タロマトグラフイーに供し
て決定する。この方法では、トリプトファン、シスチン
及びシスティンは検出されない。従って、別の一定量の
各ペプチドを蛋白分解酵素で分解することによυ、トリ
プトファン及びシスチン又はシスティンの組成を求める
。

なお、グルタミン酸とグルタミン、及びアスパラギン酸
とアスノぞラギンの区別はつかない。

各ペプチドのアミノ酸配列は、日立製作新製の自動アミ
ノ酸分析機によって分析する。

ペプチド１ 分子−：約２０．θ０Ｏｊ１１モル アミノ収に１成（モル憾）： ヒスチジン（Ｌ４）　　トリプトファン（０，３＞リシ
ン（１λ６）　アルギニン（５，５）　　７スノぐラド
ン〔３，／アスノぞラギン（２１６）　セリン（７，６
）　　グルｐ　ミｙ；３／／’ルｌ　ミｙ　（ｌＯ，６
）スレオニン（１４）／’グリシン３．４）　　−ｊ’
口＋）ン（１，４７アラニン（ｓ、ｓ）　　ノ々リン（
ｓ、ｓ）■シスチン（０）　メチオニン（Ｚ？）　　イ
ソロイ７７　（４゜８）　ロイシン（ａ８）　　フェニ
ルアラニン（６，３）　　チロシン（λ５）アミノ酸配
列： Ｇｌｎ　Ａｇｏ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇ
ｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ａａｎ　ＬｅｕＬｙｓ　Ｌｙｓ
　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｉｓ　
Ｓｅｒ　Ａｓｐ　ＶａｌＡｌａ　　Ａａｐ　　Ａ１１ｎ
　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｌａｕ　　Ｐｈｅ　　Ｌｅｕ
　　Ｇｌｙ　　ｌｉｅ　　Ｌｅｕ！、ｙｑ　Ａｓｎ　Ｔ
ｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓｓｒ　Ａｓｐ　Ａｒ
ｇ　Ｌｙｓ　ＩｌｅＭａｔ　Ｇｉｎ　Ｓｃｒ　Ｇｌｎ　
Ｉｌｅ　Ｖａｌ　Ｓｓｒ　Ｐｈｅ　Ｔｙｒ　Ｐｈｏ　Ｌ
ｙｓＬｏｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙ５Ａｓｎ　Ｐｈｓ　Ｌｙｓ　
Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｓｏｒ　ｌ１ｅＧｉｎ　Ｌｙ
！１Ｓａｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ
　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　ｒＪｅｔＡｓｎ　　Ｍａｌ　　Ｌｙ
ｓ　　Ｐｈｅ　　Ｐｈｅ　Ａｊｎ　　Ｓｅｒ　　Ａｓｎ
　　Ｌｙｓ　　ＬｙｓＬｙｓ　　Ａｒｇ　　Ａａｐ　　
Ａｓｐ　　Ｐｈｓ　　Ｇｌｕ　　Ｌｙａ　　Ｌｅｕ　　
Ｔｈｒ　　ＡｓｎＴｙｒ　　Ｓａｒ　　Ｖａｌ　　Ｔｈ
ｒ　　Ａｍｐ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｎ　　Ｖａｌ　　Ｇｉ
ｎ　　ＡｒｇＬｙｓ　　Ａｌａ　　Ｉｌｅ　　Ｈｉｓ　
　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｇｉｎ　　Ｖａｌ　
　ＭｅｔＡｌａ　　Ｇｌｕ　　Ｌａｕ　　Ｓｓｒ　　Ｐ
ｒｏ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｌｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｇ
ｌｙＬｙａ　　Ａｒｇ　　Ｌｙａ　　Ａｒｇ　　Ｓｅｒ
　　Ｇｉｎ　　Ｍｅｔ　　Ｌａｕ　　Ｐｈｅ　　Ａｒｇ
Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　Ａｒｇ　　Ａｌａ　　Ｓｅｒペプ
チド２ 分子量：約２０−０００，９７モル アミノ酸組成（モル憾）： ヒスチジン（Ｌ４）　　）リプトファン（０，３）リジ
ン（１３，６）　　アルギニン（５，４）　　アスパラ
ギン酸／アスパラギン（１：Ｌ６）　　セリフ（７，５
）　　グルタミン酸／グルタミン（１０，４）スレオニ
ア（’１４）　　グリシン（３，４）　　フロリン（１
，４）　　アラニン（５，４）　　ノ々リン（５，４）
Ａジメチン（０）　メチオニン（１４）　　イソロイシ
ン（４，ａ　）　　ロイシンＣ６，８）　　フェニルア
ラニン（６，８）　　チロシン（Ｚ５）アミノＩ：’２
　、：己・ン１ｊ： Ｌｌａｔ　　Ｇｌｎ　　Ａｓｐ　　Ｐｒ＋　　Ｔｙｒ　
　Ｍａｌ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　Ａｌａ　　ＧｌｕＡ
ｓｎ　　Ｌｅｕ　　［、ｙｓ　　Ｌｙｓ　　Ｔｙｒ　　
Ｐｈｅ　　Ａａｎ　　Ａｌａ　　Ｇｌｙ　　Ｈ１ｓＳ１
３ｒ　　Ａａｐ　　Ｖａｌ　　Ａｌａ　　Ａ３Ｐ　　Ａ
ａｎ　　Ｇｌｙ　　Ｔｈｒ　　Ｌａｕ　　ＰｈａＬＧ＋
Ｊ　　Ｇｌｙ　　Ｉｌｅ　　Ｌａｕ　　Ｌｙｓ　　Ａｓ
ｎ　　Ｔｒｐ　　Ｌｙｓ　　Ｇｌｕ　　ＧｌｕＳｅｒ　
　Ａｊｐ　　Ａｒｇ　Ｌｙｎ　　Ｉｌｅ　　Ａｉｅｔ　
　Ｇｉｎ　　Ｓｅｒ　　Ｇｌｎ　　ｌｌ５Ｖ３１　　Ｓ
ｎｒ　　Ｐｈｅ　　Ｔｙｒ　　Ｐｈｏ　　Ｌｙｓ　　Ｌ
ｅｕ　　Ｐｈｅ　　Ｌｙａ　　ＡａｎＰｈｅ　　Ｌｙｓ
　　Ａｓｐ　　Ａｓｐ　　Ｇｌｎ　　Ｓｅｒ　　Ｉｌｅ
　　Ｇｉｎ　　Ｌ）ｒ＋ｓ　　５ｅｒＶａｌ　　Ｇｌｕ
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ｅｔ　　Ａｓｎ　ＶａＩＬｙｓ　　Ｐｈｅ　Ｐｈｅ　Ａ
ｓｎ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　　Ｌｙａ　Ａ
ｒｇＡｓｐ　　Ａｓｐ　　Ｐｈｏ　　Ｇｌｕ　　Ｌｙｓ
　　Ｌｅｕ　　Ｔｈｒ　　Ａａｎ　　Ｔｙｒ　　Ｓ＠ｒ
Ｖａ！　　Ｔｈｒ　　Ａａｐ　　Ｌｅｕ　　Ａｓｎ　　
Ｖａｌ　　Ｇｉｎ　　Ａｒｇ　　Ｌｙａ　　ＡｌｒＬｌ
ｌｅ　　Ｈｌｓ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｅ　　Ｇ
ｉｎ　　Ｖａｌ　　Ｍｅｔ　　Ａｌａ　　ＧｉｎＬｅｕ
　　Ｓｏｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｌｙｓ
　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙａ　　ＡｒｇＬｙｓ　Ａ
ｒｇ　　Ｓｅｒ　　Ｇｉｎ　　Ｍｅｔ　　Ｌｅｕ　　Ｐ
ｈｅ　　Ａｒｇ　　Ｇｌｙ　　ＡｒｇＡｒｇ　　Ａｌａ
　　Ｓｅｒ インターフェロン−γ ガ子ｉ辻：約２０，０００，９７モル アミノ７３，７徂成（モル係）： ヒスチジン（１，４１）リプトファン（０，３）リシン
（ｌλ６）　アルギニン（５，５）７スノぞライン酸／
アスパラギン（１１６）　セＩ７７（７，６）　　グル
タミン酸／グルタミン（９，９）スレオニン（λ４）　
　グＩＪシン（λ４）、；”ｏｌＪン（Ｌ４）　アラニ
ン（！Ｌ５）　　バリン（５，５）腫シスチン（Ｏ）　
メチオニン（Ｌ？）　　インロイシン（４８）　　ロイ
シン（６，８）　　フェニルアラニン（ａ８）　チロシ
ン（ｚ５） アミノ酸配列： Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｇ
ｌｕ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　ＡｓｎＬｓｕ　Ｌｙｓ　Ｌｙａ
　Ｔｙｒ　Ｐｈａ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｈｌｓ　
５ｓｒＡａｐ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｇｌ
ｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　ＬｅｕＧｌｙ　Ｉｌｅ　
Ｌｓｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｇ
ｌｕ　５ｓｒＡａｐ　Ａｒｇ　Ｌｙａ　ＩＩｓ　Ｍｅｔ
　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　ＩＩｓ　ＶａｌＳｅｒ　Ｐ
ｈｅ　Ｔｙｒ　ｐｈｅ　Ｌｙｅ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｌｙ
８Ａｓｎ　ｐＨｅＬｙａ　Ａｓｐ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　Ｓ
ａｒ　Ｉｌｅ　Ｇｌｎ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　ＶａｌＧｌｕ
　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ａａｐ　ｉνｉｅ
ｔ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　ＬｙｓＰｈｅ　Ｐｈａ　Ａａｎ　
Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｌｙａ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ　Ａ
ｓｐＡｓｐ　Ｐｈｃ　Ｇｌｕ　Ｌｒｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｈ
ｒ　Ａａｎ　Ｔｙｒ　Ｓｕｒ　ＶａｌＴｈｒ　Ａａｐ　
Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｍａｌ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｙｅ　Ａ
ｌａ　ｌ１ｅＦｔｉｓ　　Ｇｌｕ　　Ｌｅｕ　　Ｉｌｃ
　　Ｇｉｎ　　Ｖａｌ　　Ｍｅｔ　　Ａｌａ　　Ｇｌｕ
　　ＬｅｕＳｃｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　
Ｌｙ、Ｔｈｒ　　Ｇｌｙ　　Ｌｙａ　　Ａｒｇ　　Ｌｙ
ｅＡｒｇ　Ｓｅｒ　　Ｇｌｎ　　Ｍｓｔ　　Ｌｅｕ　　
Ｐｈｅ　　Ａｒｇ　　Ｇｌｙ　　Ａｒｇ　　ＡｒｇΔｌ
ａ　　Ｓｅｒ　　Ｇｉｎ 工ｄ９（抗ウィルス活性の測定） 工、已７で＋ｑられる各ペプチドの抗ウィルス活性の測
雉は、ビー。シー、メリガン著−ヒト新生児皮π］（、
シま芽、、＋：’ＩＩ胞■卑層とウシ水庖性ロ内炎つィ
ルス示用いるヒトインターフェロンのプラーク形成Ｉｎ
　３の、７ｆ市−［、″ｌｉ’ｔｌ胞媒介免疫における
イン、ビトロ法」４−、ディー、ビー、アール、ブルー
ム及びビー、アール、グレード絽アカデミツク、プレス
社刊、ニューヨーク１９７１年、４８９頁ＣＰ。

Ｃ１１−むｒｉｇａｎ　　、　Ｐｌａｑｕｅ　　Ｉｎｈ
ｉｂｉｔｉｏｎ　　Ａａｎａｙ　　ｆｏｒＨ＊ｒｒ＋３
ｎ　　Ｉｎｔｓｒｆｅｒｏｎ　Ｔ２ｍｐｌｏｙｉｎｇ　
Ｈｕｍａｎ　ＮａｏｎａｔｅＳｋｉｎ　　Ｆｉｂｒｏｂ
ｌａｓｔ　　Ｍｏｎｏｌａｙ＠ｒ３　＆　　Ｂｏｖｉｎ
ａ　　ＶｅｓｔｔｃｕｌａｘＳｔｏｍａｔｉｔｉａ　　
　Ｖｉｒｕｓ、”Ｉｎ−ｖｉｔｒｏ　　〜丁ｅｔｈｏｄ
　　　ｉｎ　　Ｃａ１ｌ　−）＋’＊ａｄｉ、１ｔｃｔ
ｌ　ｌｍｎ１ｕｎｉｔｙ”、　ｅｄｉｔＯｄ　ｂｙ　Ｅ
、Ｄ、Ｂ、Ｒ。

Ｂｌ　Ｏｏｍ　　＆　　　Ｉ’　　、　Ｒ＋Ｇｒａｄｅ
　　＋　　Ａｃａｄｅｒｎｉｃ　　　Ｐｒｅｓ　３１Ｎ
　、　”ｌ’　。

１９７１、ｐｐ４８９：］に記・、、尤の方法と同様の
方法で測定する。

詳しくは、工程７で得られる各ペプチドを種々に希釈し
て、１０容量係の胎児性小生血清を含有する増殖培地に
入れる。この培地にはＦ　Ｓ　−４ｎ４Ｂ　胞（ヒト新
生児皮膚ｆｅｉ維芽細胞）が単層に培養されている。１
８時間後、細胞当９２０個のプ２−り形成能を有する水
痘性口内炎ウィルス（ＶＳＶ）を該細胞に感染させ、゛
さらに１時間３７℃で培養する。

次に該細胞を実記の増殖培地で２回洗浄した後、再び該
増殖培地中３７℃で２４時間培養する。ウィルスが発生
したかどうかは、培養後の該細胞を顕微鏡観察すること
により検査する。その槓果認められる細胞の損傷はウィ
ルスによるものである。

ペプチドが１　ｐｇ／　ｍｅの８度で抗ウィルス活性を
示す。

工程７で得られるペプチドｌとペプチド２とインターフ
ェロン−γの抗ウィルス活性の結果を以下に丞す。

抗つ１′ルス活江が金沢、１話しで認められ、培希釈で
認めらゴしない鳴合を１単位とし、ｎｌ、、ｉ希釈で認
められ、２ｎ倍希釈で認められない揚台ｅｎ単位とする
。

ペプチド１とペプチド２はインターフェロン−ｒの２倍
のｆＩ５注を有する。

（３）　　光間の効果 不ッｂ明のペプチドは抗ウィルス作用に筺れた新、（ｌ
ｌなペプチドである。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式（ I ）： 【アミノ酸配列があります】 （但し、【アミノ酸配列があります】 およ びＭｅｔはグルタミン、アスパラギン酸、プロリン、チ
   ロシン、バリン、リジン、グルタミン酸、アラニン、ア
   スパラギン、ロイシン、フェニルアラニン、グリシン、
   ヒスチジン、セリン、スレオニン、イソロイシン、トリ
   プトファン、アルギニンおよびメチオニンの残基を；ま
   たＪはメチオニン残基又は水素原子を表す）で表わされ
   るペプチド