JPS6176455A - 新規α−Ｄ−マンノシダ−ゼ阻害剤 - Google Patents
新規α−Ｄ−マンノシダ−ゼ阻害剤Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業−４二の利用分野
近年、細胞表面に存在する複合糖質が細胞表面の関与す
る重要な生命現象に本質的な役割を果していることが明
らかになりつつあり、さまざまな免疫現象、炎症、細胞
融合、補体結合、５１Ｑ１化、癌転移あるいはウィルス
感染などの諸現象が、これマンノースを含む糖質部分を
加水分解するα−１）−マンノシダーゼの阻害剤は医薬
の領域に於いてα−Ｄ−マンノシダーゼの阻害剤として
はマメ科植物より中間１されたスワインソニン（Ｓｗａ
ｉｎ＝ｓｏｎｉｎｅ）が知られている（ Ａｕ５ｔｒａ
ｌｉａｎ Ｊ、ＣＩ＋ｅｍ、。
る重要な生命現象に本質的な役割を果していることが明
らかになりつつあり、さまざまな免疫現象、炎症、細胞
融合、補体結合、５１Ｑ１化、癌転移あるいはウィルス
感染などの諸現象が、これマンノースを含む糖質部分を
加水分解するα−１）−マンノシダーゼの阻害剤は医薬
の領域に於いてα−Ｄ−マンノシダーゼの阻害剤として
はマメ科植物より中間１されたスワインソニン（Ｓｗａ
ｉｎ＝ｓｏｎｉｎｅ）が知られている（ Ａｕ５ｔｒａ
ｌｉａｎ Ｊ、ＣＩ＋ｅｍ、。
３２巻、２２５７〜２２６４頁、１９７９年）。
この物質は最近、メタリジウム アニソプリエ（Ｍｅｔ
ａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉｅ）からも単離さ
れ、免疫調整作用を有することが明らかにされた（特開
昭５９−７３５１９ ）。
ａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉｅ）からも単離さ
れ、免疫調整作用を有することが明らかにされた（特開
昭５９−７３５１９ ）。
発明が解決しようとする問題点
スワインソニンはマメ科植物由来のα−Ｄ−マンノシダ
ーゼを阻害するが、本発明者等はラット物中Ｃ二阻害剤
を探索し、放線菌（１属する一菌種がラット副翠丸由来
のα−Ｄ−マンノシダーゼの阻本発明者らは微生物の培
養液中（二α−Ｄ−マンノシダーゼ阻害物質を探索し、
昭和４８年７月微生物化学１σ１究所（二おいて長野県
木柱部の土ｊ襄より ′分離された放線菌ＭＥ３−ＡＧ
ａ株が、新規な構造を有するα−Ｄ−マンノシダーゼ阻
害物質マンノヌタテンを生産することを見出した。
ーゼを阻害するが、本発明者等はラット物中Ｃ二阻害剤
を探索し、放線菌（１属する一菌種がラット副翠丸由来
のα−Ｄ−マンノシダーゼの阻本発明者らは微生物の培
養液中（二α−Ｄ−マンノシダーゼ阻害物質を探索し、
昭和４８年７月微生物化学１σ１究所（二おいて長野県
木柱部の土ｊ襄より ′分離された放線菌ＭＥ３−ＡＧ
ａ株が、新規な構造を有するα−Ｄ−マンノシダーゼ阻
害物質マンノヌタテンを生産することを見出した。
まず生産菌ＭＥ３−ＡＣ１３株の菌学的性状について記
載する。
載する。
ＭＢ２−Ａ２Ｂ株の菌学的性状
１形態
ＭＢ２−−ＡＱａ株は顯微鏡下で分枝した基中菌め、胞
子の大きさは０４〜０．７ Ｘ Ｏ，８〜１．１ミクロ
ン位で、その表面は平滑である。
子の大きさは０４〜０．７ Ｘ Ｏ，８〜１．１ミクロ
ン位で、その表面は平滑である。
２各種培地に於ける生育状態
色の記載について〔〕内（二示す標準は、コンテイナー
・コーポレーション・オフ゛・アメリカのカラー・ハー
モニイー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ の Ｃ
ｏ１ｏｒ ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｔｔ−ａｌ）
を用いた。
・コーポレーション・オフ゛・アメリカのカラー・ハー
モニイー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏ
ｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ の Ｃ
ｏ１ｏｒ ｈａｒｍｏｎｙ ｍａｎｔｔ−ａｌ）
を用いた。
（１）シーク「ｊ−ス・硝酸塩寒天培地（２７°Ｃ培養
）無色〜薄黄の発育」二（二、白色の気菌糸を着生し、
溶解性色素は認められない。
）無色〜薄黄の発育」二（二、白色の気菌糸を着生し、
溶解性色素は認められない。
（２）グルコース・アスパラギン寒天培地（２７°Ｃ培
養）薄黄（２ｉｃ、Ｈｏｎｅｙ Ｇｏｌｄ） 〜黄茶（
３ｎｇ。
養）薄黄（２ｉｃ、Ｈｏｎｅｙ Ｇｏｌｄ） 〜黄茶（
３ｎｇ。
Ｙｅｌ ｌｏｗ Ｍａｐｌｅ ）の発育上（二白色の気
菌糸なうりすらと着生し、にぶ黄（２ｎａ、ｌ３ｒｉｔ
ｅ Ｙｅｌｌｏｗ〜３ ｐ ｃ 、 Ａｍｂｅ＋’）の
溶解性色素を産生する。
菌糸なうりすらと着生し、にぶ黄（２ｎａ、ｌ３ｒｉｔ
ｅ Ｙｅｌｌｏｗ〜３ ｐ ｃ 、 Ａｍｂｅ＋’）の
溶解性色素を産生する。
： （ｊｌ）グリセリン・アスパラギン寒天培地。
Ｍａｐｌｅ）の発育」−に、白〜黄味灰色の気菌糸をし
、溶解性色素は認められない。
、溶解性色素は認められない。
（５）チロシン寒天培地。
（ＩＳＦ−培地７，２７°Ｃ培養）
薄黄色（２ｎｅ 、Ｍｕｓｔａｒｄ （ｌｏｌｄ ）
〜苗条色（３ｎｇ。
〜苗条色（３ｎｇ。
Ｙｅ ｌ ｌ ｏｗ Ｍａｐ ｌ ｅ）の発育−Ｌ（二
、白〜黄味灰色Ｏｒ薄黄７澄々の気菌糸を着生し僅かに
苗条をおびた− ５ ＝ 溶解性色素を産生ずる。
、白〜黄味灰色Ｏｒ薄黄７澄々の気菌糸を着生し僅かに
苗条をおびた− ５ ＝ 溶解性色素を産生ずる。
（６）栄養寒天培地。（２７°Ｃ培養）発育は薄黄〜薄
黄茶色（３１ｅ、 Ｃｉｎｎａｍｏｎ） 、 気菌糸
は着生しないか、僅かに白〜黄味灰色を呈１７、溶解性
色素は認められない。
黄茶色（３１ｅ、 Ｃｉｎｎａｍｏｎ） 、 気菌糸
は着生しないか、僅かに白〜黄味灰色を呈１７、溶解性
色素は認められない。
（カイ−スト・麦芽寒天培地。
［３ｈａ、５ｈｅｌｌ Ｔｉｎｔ 〜 １ ｈａ
、Ｙｅｌｌｏｗ Ｔｉｎｔ）の発育は無色〜薄黄色
で、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
、Ｙｅｌｌｏｗ Ｔｉｎｔ）の発育は無色〜薄黄色
で、気菌糸は着生せず、溶解性色素は認められない。
（９）グリセリン・硝酸塩寒天培地。（２７°Ｃ培養）
鈍黄色〜苗条〔３ｐｉ、Ｇｏｌｄｅｎ Ｂｒｏｗｎ、１
〜暗い茶Ｃ４ｐｎ、Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ） の発育上に
白色〜黄味灰（３ｂａ、５ｈｅｌｌ ’Ｉ’１ｎｌ）色
の気菌糸を、うつすら−〇 − と着生し、苗条の溶解性色素を産生ずる。
鈍黄色〜苗条〔３ｐｉ、Ｇｏｌｄｅｎ Ｂｒｏｗｎ、１
〜暗い茶Ｃ４ｐｎ、Ｄｋ Ｂｒｏｗｎ） の発育上に
白色〜黄味灰（３ｂａ、５ｈｅｌｌ ’Ｉ’１ｎｌ）色
の気菌糸を、うつすら−〇 − と着生し、苗条の溶解性色素を産生ずる。
００）スターチ寒天培地。（２７°Ｃ培養）発育は無色
、気菌糸は着生しないか、或いは白色の気菌糸を僅かに
着生し、溶解性色素は認められない。
、気菌糸は着生しないか、或いは白色の気菌糸を僅かに
着生し、溶解性色素は認められない。
旧）林檎酸石灰寒天培地。（２７°Ｃ培養）川 発育は
無色〜薄黄色て気菌子は着」しなり力］ツい１よ、。、
、Ｊえ、イ□カ１３、□１７、工、□０素は言忍められ
ない。
無色〜薄黄色て気菌子は着」しなり力］ツい１よ、。、
、Ｊえ、イ□カ１３、□１７、工、□０素は言忍められ
ない。
（１２）セルロース。（２７°Ｃ培養）発育は無色、気
菌糸は着生せず、溶解性色素も（巳単純ゼラチン培地（
２０°Ｃ培養）では、発育は無色〜薄黄〜黄茶色で気菌
糸は着生せず、溶解性色素は僅かに茶色をおびる程度で
ある。
菌糸は着生せず、溶解性色素も（巳単純ゼラチン培地（
２０°Ｃ培養）では、発育は無色〜薄黄〜黄茶色で気菌
糸は着生せず、溶解性色素は僅かに茶色をおびる程度で
ある。
グルコース・ペプトン・ゼラチン培地（２７°Ｃ培養）
では、発育は無色〜薄黄色で、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。
では、発育は無色〜薄黄色で、気菌糸は着生せず、溶解
性色素も認められない。
（１４）脱脂牛乳。（３７°Ｃ培養）
発育は無色〜薄黄色、或いは薄苗条、気菌糸は着生せず
、溶解性色素は認められない。
、溶解性色素は認められない。
３生理的性質
（１）生育温度範囲。
マルトース・イー スト寒天（マルトース１０％。
イーストエキス（オリエンタル）０４％、糸寒天３５％
、 ｐｌＴ ６．０ ）を用い、２０°Ｃ９２４°Ｃ２
２７°Ｃ２３０°Ｃ１３７°Ｃ９５０°Ｃの各温度で試
験の結果、５０°ＣＹ除いて何れの温度でも生育するが
、最適温度は３７°Ｃ付近と思われる。
、 ｐｌＴ ６．０ ）を用い、２０°Ｃ９２４°Ｃ２
２７°Ｃ２３０°Ｃ１３７°Ｃ９５０°Ｃの各温度で試
験の結果、５０°ＣＹ除いて何れの温度でも生育するが
、最適温度は３７°Ｃ付近と思われる。
（２）ゼラチンの液化。
（グルコース・ペプトン・ゼラチン培地。２７°Ｃ培養
及び１５％単純ゼラチン培地。２０°Ｃ培養）。
及び１５％単純ゼラチン培地。２０°Ｃ培養）。
単純ゼラチン培地の場合は液化は認められない。
グルコース・ペプトン・ゼラチン培地では、培養後４目
止頃から僅かに液化が始まるが、その作用は極めて弱い
。
止頃から僅かに液化が始まるが、その作用は極めて弱い
。
（３）スターチの加水分解。
（スターチ無機塩寒天培地及びスターチ寒天培地。何れ
も２７°Ｃ培養）。
も２７°Ｃ培養）。
培養後２１日目止で観察したが、氷解性は認められなか
った。
った。
（４）脱脂牛乳の凝固・ペプトン化。
（脱脂牛乳、３７°Ｃ培養）。
（５）メラニン様色素の生成。
（トリプトン・イースト・ブロス、ＩＳＰ培地何れの培
地でもメラニン様色素の生成は認められない。
地でもメラニン様色素の生成は認められない。
（６）炭素源の利用性。
（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地、ｌ５Ｐ−培地９，
２７°Ｃ培養）。
２７°Ｃ培養）。
グルコースを利用して発育し、ラフィノースは恐らく利
用すると思われ、Ｌ−アラビノース。
用すると思われ、Ｌ−アラビノース。
Ｄ−キシロース、Ｄ−フラクトース、シュクロース、イ
ノシトール、ラムノース、Ｄ−マンニトールは利用しな
い。
ノシトール、ラムノース、Ｄ−マンニトールは利用しな
い。
（７）リンゴ酸石灰の溶解。
（リンゴ酸石灰寒天、２７°Ｃ培養）。
（０１％硝酸カリ含水ペプトン水。ＩＳＰ培地以上の性
状を要約すると、ＭＢ２−ＡＱ３は、その形態−１−１
胞子のうを認めず、気菌糸に輪生技を形成し、らせん形
成は認められない。又、胞子の表面は平滑である。種々
の培地で発育は薄黄〜黄茶色、気菌糸は着生しないか、
或いは白〜黄味灰色を呈する。溶解性色素は、鈍黄〜苗
条なおびる場＝ｌ 〇− 合もあるが、殆んど認められない。メラニン様色素は何
れの培地に於いても陰性である。澱粉氷解性は認められ
ず、蛋白分解力は、ゼラチンの液化性は弱いが、脱脂牛
乳の凝固、ペプトン化は中等度〜強い方である。
状を要約すると、ＭＢ２−ＡＱ３は、その形態−１−１
胞子のうを認めず、気菌糸に輪生技を形成し、らせん形
成は認められない。又、胞子の表面は平滑である。種々
の培地で発育は薄黄〜黄茶色、気菌糸は着生しないか、
或いは白〜黄味灰色を呈する。溶解性色素は、鈍黄〜苗
条なおびる場＝ｌ 〇− 合もあるが、殆んど認められない。メラニン様色素は何
れの培地に於いても陰性である。澱粉氷解性は認められ
ず、蛋白分解力は、ゼラチンの液化性は弱いが、脱脂牛
乳の凝固、ペプトン化は中等度〜強い方である。
尚、この菌株に含まれる２６ジアミノピメリン明らかで
ある。
ある。
之等の性状によりＭ Ｅ ３−Ａ、 ０３株（１近縁の
既知、菌種を検索すると、プレオマイシン、・プレオマ
イシン産生株のストレプトミセス°バーテンラス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｔｉｃｉｌ！ｕｓ、
’ｊ特：願昭３４２５９８ ： Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、Ｓｅｒ。
既知、菌種を検索すると、プレオマイシン、・プレオマ
イシン産生株のストレプトミセス°バーテンラス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｅｒｔｉｃｉｌ！ｕｓ、
’ｊ特：願昭３４２５９８ ： Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａ
ｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、Ｓｅｒ。
Ａ、１２巻、１１１頁、１９５９ ： Ｔｈｅ Ｊｏｕ
ｒｎａ１９６３頁）の２種があげられた。
ｒｎａ１９６３頁）の２種があげられた。
Ｍ Ｅ３− Ａ Ｇ ａ 株は、この物質の他にフレオ
マイシン、プレオマイシンを生産し、前記の如く、発育
の色は特徴ある苗条を呈し、牛乳の凝固、ペプトン化が
中等度〜強い方であること、硝酸塩の還元性を示さない
、澱粉氷解性が認められない。
マイシン、プレオマイシンを生産し、前記の如く、発育
の色は特徴ある苗条を呈し、牛乳の凝固、ペプトン化が
中等度〜強い方であること、硝酸塩の還元性を示さない
、澱粉氷解性が認められない。
という点でストレプトミセス・バーチシラス・バリエタ
ヌ・フィンツムにより類似していると考えられる。
ヌ・フィンツムにより類似していると考えられる。
そこでストレプトミセス・バーチシラス・バリエタス・
クィンッムＭＢ６９５−Ａ、４株Ｎｏ、ｌＭＣ８７−０
６６６と、ＭＢ２−Ａ２Ｂ株とを実地に比較検討した。
クィンッムＭＢ６９５−Ａ、４株Ｎｏ、ｌＭＣ８７−０
６６６と、ＭＢ２−Ａ２Ｂ株とを実地に比較検討した。
その成績の大要を示すと次表のようになる。
尚、ＭＢ２−ＡＧ３株を工業技術院微生物工業技術研究
所（二寄託申請し、昭和５８年ＩＯ月１４ｆ、微工研菌
寄 第７２９９号とし１受託された・させる事（二よっ
て得られる。栄養源としては放線菌の栄養源として公知
のものが使用出来る。例えば市販されているグリセリン
、グルコース、ラクトース、蔗糖、澱粉、マルトース、
糖蜜などの炭水化物あるいは、脂肪（動物性脂肪、大、
豆油、綿実油、落花生油などの植物油）などの炭素源、
及び市販されているペプトン、肉エキス、コーンステイ
ープリカー、綿実粉、落下生粉、大豆粉、酵母エキス、
Ｎ−Ｚアミン、カゼイン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウムなどの窒素源と食塩、燐酸塩、炭
酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩を使用出
来る。その他、必要に応じて微量の金属塩を添加する。
所（二寄託申請し、昭和５８年ＩＯ月１４ｆ、微工研菌
寄 第７２９９号とし１受託された・させる事（二よっ
て得られる。栄養源としては放線菌の栄養源として公知
のものが使用出来る。例えば市販されているグリセリン
、グルコース、ラクトース、蔗糖、澱粉、マルトース、
糖蜜などの炭水化物あるいは、脂肪（動物性脂肪、大、
豆油、綿実油、落花生油などの植物油）などの炭素源、
及び市販されているペプトン、肉エキス、コーンステイ
ープリカー、綿実粉、落下生粉、大豆粉、酵母エキス、
Ｎ−Ｚアミン、カゼイン、硝酸ソーダ、硝酸アンモニウ
ム、硫酸アンモニウムなどの窒素源と食塩、燐酸塩、炭
酸カルシウム、硫酸マグネシウムなどの無機塩を使用出
来る。その他、必要に応じて微量の金属塩を添加する。
これらのものは本物質生産菌が利用し、また本物質の生
産（二役立１５一 つものであれば良い。公知の放線菌の培養材料は、総て
利用できる。脂肪、脂肪酸は本物質の生合成適用し得る
が、特（二好ましいのは２５〜３５°Ｃである。培養は
普通本物質が充分蓄積するまで継続される。例えばグリ
セリン２％、ポリペプトン２８°Ｃで好気的に振盪培養
を行うと通常培養３〜４１１月に培地中に本物質の蓄積
が認められる。
産（二役立１５一 つものであれば良い。公知の放線菌の培養材料は、総て
利用できる。脂肪、脂肪酸は本物質の生合成適用し得る
が、特（二好ましいのは２５〜３５°Ｃである。培養は
普通本物質が充分蓄積するまで継続される。例えばグリ
セリン２％、ポリペプトン２８°Ｃで好気的に振盪培養
を行うと通常培養３〜４１１月に培地中に本物質の蓄積
が認められる。
また本物質はタンク培養でも振盪培養法と同様によく生
産される。例えば本物質の生産は２００１の醗酵槽（二
１３０１の培地を入れて滅菌し、毎分１３０１の無菌空
気を通気し、毎分２００回転の攪拌をしたとき、７２時
間で最高に達した。
産される。例えば本物質の生産は２００１の醗酵槽（二
１３０１の培地を入れて滅菌し、毎分１３０１の無菌空
気を通気し、毎分２００回転の攪拌をしたとき、７２時
間で最高に達した。
本発明化合物は生産菌の培養液中（１十として存在する
。培養液中からの本物質の分離は微生物の生産する代謝
産物を、その微生物の培養物から採取するのに通常使用
される分離手段が適宜使用される。
。培養液中からの本物質の分離は微生物の生産する代謝
産物を、その微生物の培養物から採取するのに通常使用
される分離手段が適宜使用される。
本発明化合物は、水溶性塩基性物質であるので、例えば
次のような分離、精製方法で単離する事が出来る。培養
Ｐ液を培養Ｐ液の１％に相当するクロマト用活性炭（和
光純薬社製）を充填した塔に注ぎ脱色しＺ二活性炭を０
．２ Ｍ蟻酸１５〜２倍量で１：′″゛″′°”″”゛
°”°′ Ｈ型）（二重層したのち、０．５規定塩酸で溶出する。
次のような分離、精製方法で単離する事が出来る。培養
Ｐ液を培養Ｐ液の１％に相当するクロマト用活性炭（和
光純薬社製）を充填した塔に注ぎ脱色しＺ二活性炭を０
．２ Ｍ蟻酸１５〜２倍量で１：′″゛″′°”″”゛
°”°′ Ｈ型）（二重層したのち、０．５規定塩酸で溶出する。
出液を水酸化ナトリウムでｐｌ（５，Ｏｔ二調整したの
ち、溶出液の１％（’／Ｖ） のクロマト用活性炭を
充填した塔に注ぎ吸着させ、０．２ Ｍの蟻酸で溶出し
、活性分画を集めダウエックス５０ＷＸ８（チンである
。マンノスタチンＳ−オキサイドは炭酸ナトリウム溶液
でｐｔｒｌｏに調整した後、クロマト用活性炭を充填し
た塔（二注ぎ吸着させ、水洗で溶出し、活性分画をクロ
マト用活性炭の塔（二注ぎ吸着させ、水洗した後、ｏ２
規定塩酸で溶出し、活性分画を集めダウエックスＩ Ｘ
２ （ＯＨ型）でｐＨ５，０ｉ二調整した後、ｐ液を
蒸発乾固させて微黄色の固体を得る。
ち、溶出液の１％（’／Ｖ） のクロマト用活性炭を
充填した塔に注ぎ吸着させ、０．２ Ｍの蟻酸で溶出し
、活性分画を集めダウエックス５０ＷＸ８（チンである
。マンノスタチンＳ−オキサイドは炭酸ナトリウム溶液
でｐｔｒｌｏに調整した後、クロマト用活性炭を充填し
た塔（二注ぎ吸着させ、水洗で溶出し、活性分画をクロ
マト用活性炭の塔（二注ぎ吸着させ、水洗した後、ｏ２
規定塩酸で溶出し、活性分画を集めダウエックスＩ Ｘ
２ （ＯＨ型）でｐＨ５，０ｉ二調整した後、ｐ液を
蒸発乾固させて微黄色の固体を得る。
このようにして得られたマンノスタチンＳ−オキサイド
は、高圧２紙電気泳動で単一のスポットを示す。マンノ
スタチン分画も同様な操作により、高圧２紙電気泳動で
単一のスポットを示す微黄色例えば本発明化合物の水溶
液はｐＨ２，０，７０゜９０で４８時間放置しても抗α
−Ｄ−マンノシダーゼ活性の低下は認められない。両物
質は水によし酢酸鉛紙検出反応に陽性である。２，４−
ジニトロフェニルヒドラジン、ライドン−スミス、ツー
−リング試液及び坂口反応に陰性である。
は、高圧２紙電気泳動で単一のスポットを示す。マンノ
スタチン分画も同様な操作により、高圧２紙電気泳動で
単一のスポットを示す微黄色例えば本発明化合物の水溶
液はｐＨ２，０，７０゜９０で４８時間放置しても抗α
−Ｄ−マンノシダーゼ活性の低下は認められない。両物
質は水によし酢酸鉛紙検出反応に陽性である。２，４−
ジニトロフェニルヒドラジン、ライドン−スミス、ツー
−リング試液及び坂口反応に陰性である。
０．２３、マンノスタチンは０．４３を示した。蟻酸：
酢酸：水（２５ニア５：９００．ｐＨ１，８）を用いた
６００■、３０分間の高圧Ｐ紙電気泳動では、両Ｉ肉質
ともアラニンを１とした場合、Ｒｍ値１０７を示した。
酢酸：水（２５ニア５：９００．ｐＨ１，８）を用いた
６００■、３０分間の高圧Ｐ紙電気泳動では、両Ｉ肉質
ともアラニンを１とした場合、Ｒｍ値１０７を示した。
両物質は吸湿性物質であるが、アセチル化すると結晶と
して得ることが出来る。即ち、マンノスタチンＳ−オキ
サイドのテトラアセテートは、マンノスタチンＳ−オキ
サイドをピリジン中（二懸濁し、無水酢酸を加えて４０
°Ｃで３時間反応すること（二より得られ、酢酸エチル
とｎ−ヘキサン混液から結晶化を行うと、白色結晶を得
ることが出来る。テトラアセテートの融点は１４６°Ｃ
（分解）で元素分析値は、Ｃ： ４６．４１ ％、
Ｈ： ５．８０ ％。
して得ることが出来る。即ち、マンノスタチンＳ−オキ
サイドのテトラアセテートは、マンノスタチンＳ−オキ
サイドをピリジン中（二懸濁し、無水酢酸を加えて４０
°Ｃで３時間反応すること（二より得られ、酢酸エチル
とｎ−ヘキサン混液から結晶化を行うと、白色結晶を得
ることが出来る。テトラアセテートの融点は１４６°Ｃ
（分解）で元素分析値は、Ｃ： ４６．４１ ％、
Ｈ： ５．８０ ％。
Ｎ：３．８０％、Ｓ：８．８７％であった。
マンノスタチンＳ−オキサイドのテトラアセテ１０１５
．９７０．９．４０．９１８．９００．８７５ 。
．９７０．９．４０．９１８．９００．８７５ 。
８３０．７９５．７６２．６７５、−二吸収を示す。
針状晶が得られる。マンノスタチンテトラアセテートの
融点は１２１°Ｃ（分解）で、元素分析値は、Ｃ：４８
．８６％、 Ｈ： ５．９５％、Ｎ：３．９９％。
融点は１２１°Ｃ（分解）で、元素分析値は、Ｃ：４８
．８６％、 Ｈ： ５．９５％、Ｎ：３．９９％。
Ｓ：９．２８％であった。
マンノスタチンテトラアセテートの赤外線吸収スペクト
ルでは、次の波数（薗−’）： ３２９０ 、。
ルでは、次の波数（薗−’）： ３２９０ 、。
１０８０．１０４０．１０１０．９７５．９５．ｊ、９
り０）、９３５．９２５．９０５．８８５．８６５．８
１５ 。
り０）、９３５．９２５．９０５．８８５．８６５．８
１５ 。
７３０．６９５ に吸収を示す。マンノスタチンＳ−
オキサイドは、構造から容易（二類推出来るように、そ
の水溶液にチオグリコール酸を加えて５０？・０３０時
間還元反応させることによりマンノスタチンを得ること
ができる。
オキサイドは、構造から容易（二類推出来るように、そ
の水溶液にチオグリコール酸を加えて５０？・０３０時
間還元反応させることによりマンノスタチンを得ること
ができる。
本発明者による構造決定の結果、本発明化合物作用
本物質は抗α−Ｄ−マンノシダーゼ活性の測定により定
量される。α−Ｄ−マンノシダーゼの活性はＰ−ニトロ
フェニル−α−Ｄ−マンノピラノサイド（Ｋｏｃｈ −
Ｌｉｇｈｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 社製、英国
）を基質として、ラットの副翠丸より得たα−Ｄマンノ
シダーゼ（自製、２０〜８０％硫安分００４Ｍ基質溶液
０．０５−に０．１ Ｍ酢酸緩衝液−２２＝ （ｐＨ４，５）ｏ、 ２５ ｍ６、水あるいは検体を含
む水溶液０．１５ ｍｌを加え、３分間３７°Ｃで加温
したのち、α−Ｄ−マンノンダーゼ（ラット２０匹の副
翠丸より得た硫安分画分を０．０２ Ｍの酢酸亜鉛４５
ｍｅに溶解し、更にこの溶液を０．０２Ｍ酢酸亜鉛で
２０〜３０倍（−希釈した酵素溶液）０．’０５ ｍを
加えて３７’、。Ｃで反応させる。反応２０分後に０．
４ Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０，
５） ２．０ｍを加えて反応を停止させ、４００ ｎｍ
に於ける吸光０．００５ｍｃＰは５０％阻害（■Ｃ３０
）を示した。
量される。α−Ｄ−マンノシダーゼの活性はＰ−ニトロ
フェニル−α−Ｄ−マンノピラノサイド（Ｋｏｃｈ −
Ｌｉｇｈｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ 社製、英国
）を基質として、ラットの副翠丸より得たα−Ｄマンノ
シダーゼ（自製、２０〜８０％硫安分００４Ｍ基質溶液
０．０５−に０．１ Ｍ酢酸緩衝液−２２＝ （ｐＨ４，５）ｏ、 ２５ ｍ６、水あるいは検体を含
む水溶液０．１５ ｍｌを加え、３分間３７°Ｃで加温
したのち、α−Ｄ−マンノンダーゼ（ラット２０匹の副
翠丸より得た硫安分画分を０．０２ Ｍの酢酸亜鉛４５
ｍｅに溶解し、更にこの溶液を０．０２Ｍ酢酸亜鉛で
２０〜３０倍（−希釈した酵素溶液）０．’０５ ｍを
加えて３７’、。Ｃで反応させる。反応２０分後に０．
４ Ｍグリシン−水酸化ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０，
５） ２．０ｍを加えて反応を停止させ、４００ ｎｍ
に於ける吸光０．００５ｍｃＰは５０％阻害（■Ｃ３０
）を示した。
尚、活性（Ｉ ｃ、ｏ）の記載は反応液０．４５１ｎｅ
の濃度で記載した。
の濃度で記載した。
実施例
以下１１両物質の採取ｌ１関しての実施例を示すが、両
物質の性状並びに生産方法、その抽出、精製法が本発明
者ら（二よって明らかにされたので、本明細書（１示さ
れた知見に基づいて１本発明は修飾法も包括し、下記実
施例のみＣ二限定されるものではない。
物質の性状並びに生産方法、その抽出、精製法が本発明
者ら（二よって明らかにされたので、本明細書（１示さ
れた知見に基づいて１本発明は修飾法も包括し、下記実
施例のみＣ二限定されるものではない。
ら−白金耳量な、グリセリン２．０％、ポリペプトン（
大五栄養化学（株製）１５％２．酵母エキス０３％、
ＣａＣＯ３０，３％を含む培地１２５ｍ１ずつを５０
０艷容量の培養用三角フラスコに分注し、１２０８Ｃ２
０容間滅１墳したものに接種し、２７°Ｃで毎分１８０
回転で４日間、前培養した。培養時の培地ｐＨｌの変化
は、植菌前７２，１日目７２，２日目５０゜３日用４．
６８．４日目４７３．であった。この前培養した菌を、
５１容の培養用三角フラスコＣ二同培地を１．２５／！
分′注滅閑されたものζ二、各々１Ｑ７ｎ６を植菌し、
２７°Ｃで毎分１８０回転、８９時間培養した。この培
養液を濾過して菌体を分離し、清澄なＰ液ｊ２５．２／
’を得た。この培養液のｐ Ｉ−Ｉは６２でα−Ｄ−マ
ンノシダーゼ５０％阻害量は、０．２４μ／テする。こ
の上清分画は、１．５７のクロマト用活性炭（和光紬薬
■）を充填した塔に注ぎ、０．２Ｍ蟻酸３７？で洗い、
通過液と合わせる。
大五栄養化学（株製）１５％２．酵母エキス０３％、
ＣａＣＯ３０，３％を含む培地１２５ｍ１ずつを５０
０艷容量の培養用三角フラスコに分注し、１２０８Ｃ２
０容間滅１墳したものに接種し、２７°Ｃで毎分１８０
回転で４日間、前培養した。培養時の培地ｐＨｌの変化
は、植菌前７２，１日目７２，２日目５０゜３日用４．
６８．４日目４７３．であった。この前培養した菌を、
５１容の培養用三角フラスコＣ二同培地を１．２５／！
分′注滅閑されたものζ二、各々１Ｑ７ｎ６を植菌し、
２７°Ｃで毎分１８０回転、８９時間培養した。この培
養液を濾過して菌体を分離し、清澄なＰ液ｊ２５．２／
’を得た。この培養液のｐ Ｉ−Ｉは６２でα−Ｄ−マ
ンノシダーゼ５０％阻害量は、０．２４μ／テする。こ
の上清分画は、１．５７のクロマト用活性炭（和光紬薬
■）を充填した塔に注ぎ、０．２Ｍ蟻酸３７？で洗い、
通過液と合わせる。
ｊ漬°″°″″′”゛°”パパ゛′
８／充填した塔に吸着させ、水８／！で洗った後ｉ＋１
０．５規定塩酸で溶出した。活性分画を集め９７？を得
た。この溶液のＩＣ６ｏはｏ、１、μｌであった。
た。この溶液のＩＣ６ｏはｏ、１、μｌであった。
９、３５１！をクロマト用活性炭４００Ｗβを充填した
塔に吸着させ、水３５７？で洗った後、０．２ Ｍ蟻酸
で溶出する。活性分画を集め７１０−を得た。この溶液
のＩＣ５ｏはＯ，’００９μ・ｌであった。
塔に吸着させ、水３５７？で洗った後、０．２ Ｍ蟻酸
で溶出する。活性分画を集め７１０−を得た。この溶液
のＩＣ５ｏはＯ，’００９μ・ｌであった。
実施例 ３
実施例２と同様な方法で得られたα−Ｄ−マン＝２５−
ノシダーゼ阻害物質を含む溶液をダウエックス５０ＷＸ
８（Ｈ型）を填めた塔（３Ｘ３０ωシ）に重層し、０．
３規定塩酸で溶出を行った。溶出液をｌＢＩ分画で集め
たとき、抗α−Ｄ−マンノシダーゼ活性物質は１３８〜
１７６分画及び２１０〜２６２分画に溶出した。先シニ
溶出される分画なフラクションＡ（マンノスタチンＳ−
オキサイド分画）とし、５３０ ｍｅを得た。又後ｌ二
溶出される分画を、フラクションＢ（マンノスタチン分
画）とし、た後、濃縮乾固し、フラクションＡからは２
３７ｇ得られ、ＩＣ５ｏは０．０５μｇ を示した。ま
たフラクションＢからは、２９６■が得られ、ＩＣ５ｏ
は実施例３と同様シートて得られたフラクションＡ
１０．２．９を、２６一 水５００ｍ１に溶解し、０．５Ｍ炭酸ナトリウムでｐＨ
１００に調整した溶液を１００ｍ１のクロマト用活性炭
（和光紬薬）を充填した塔に注ぎ、・Ｊ、ｒ５０ Ｑ
ｍｅ濃縮し予めｐＩ−１１，０，０の０．０５ Ｍ炭酸
緩衝液で平衡化したダウエックス１×８の塔（２，Ｉ
Ｘ’６２ ｏｍ）Ｃ二重層し、ｐＩ（１０，０，００５
Ｍ炭酸緩衝液で溶出し、活性分画を集めて２００ ｍｌ
を得た。この活性分画のＩ Ｃ，。は０．００１９６μ
ｌ である。
８（Ｈ型）を填めた塔（３Ｘ３０ωシ）に重層し、０．
３規定塩酸で溶出を行った。溶出液をｌＢＩ分画で集め
たとき、抗α−Ｄ−マンノシダーゼ活性物質は１３８〜
１７６分画及び２１０〜２６２分画に溶出した。先シニ
溶出される分画なフラクションＡ（マンノスタチンＳ−
オキサイド分画）とし、５３０ ｍｅを得た。又後ｌ二
溶出される分画を、フラクションＢ（マンノスタチン分
画）とし、た後、濃縮乾固し、フラクションＡからは２
３７ｇ得られ、ＩＣ５ｏは０．０５μｇ を示した。ま
たフラクションＢからは、２９６■が得られ、ＩＣ５ｏ
は実施例３と同様シートて得られたフラクションＡ
１０．２．９を、２６一 水５００ｍ１に溶解し、０．５Ｍ炭酸ナトリウムでｐＨ
１００に調整した溶液を１００ｍ１のクロマト用活性炭
（和光紬薬）を充填した塔に注ぎ、・Ｊ、ｒ５０ Ｑ
ｍｅ濃縮し予めｐＩ−１１，０，０の０．０５ Ｍ炭酸
緩衝液で平衡化したダウエックス１×８の塔（２，Ｉ
Ｘ’６２ ｏｍ）Ｃ二重層し、ｐＩ（１０，０，００５
Ｍ炭酸緩衝液で溶出し、活性分画を集めて２００ ｍｌ
を得た。この活性分画のＩ Ｃ，。は０．００１９６μ
ｌ である。
実施例 ５
実施例４で得られたフラクションＡの活性分画して、マ
ンノスタチンＳ−オキサイド４７３■が得られた。ＩＣ
３゜は０００５μＩ であった。
ンノスタチンＳ−オキサイド４７３■が得られた。ＩＣ
３゜は０００５μＩ であった。
実施例 ６
実施例３と同様にして得られたフラクションＢａｎ ）
に重層し、同緩衝液で溶出し、活性分画を集めて２６
Ｑ ｍｅを得た。この活性分画のＩ Ｃ，０はの活性
分画を５０７ｎｅのクロマト用活性炭の塔（二重層し、
蒸留水１０００ｍで洗った後、０２規定塩酸で溶出する
。活性分画を集めて、ダウエックス１、 Ｘ ２ （Ｏ
ＩＴ型）でｐＨ５，０に調整した後、濃縮乾固してマン
ノスタチン４３ｑｎｆＩが得られた。ＩＣ５０は０．０
０５１μｇであった。
に重層し、同緩衝液で溶出し、活性分画を集めて２６
Ｑ ｍｅを得た。この活性分画のＩ Ｃ，０はの活性
分画を５０７ｎｅのクロマト用活性炭の塔（二重層し、
蒸留水１０００ｍで洗った後、０２規定塩酸で溶出する
。活性分画を集めて、ダウエックス１、 Ｘ ２ （Ｏ
ＩＴ型）でｐＨ５，０に調整した後、濃縮乾固してマン
ノスタチン４３ｑｎｆＩが得られた。ＩＣ５０は０．０
０５１μｇであった。
実施例 ８゜
実施例１と同様の培地を、２００１容のステンレススチ
ール製タンクに１３０／！を仕込み、１】５°Ｃ３０分
滅菌後、Ｍ Ｅ ３− Ａ Ｇ ３株の前培養液（振盪
培養４８時間）ｌ／！を植菌し、攪拌は毎分２００回転
、通気量は１３０７？で、２８°Ｃ１７２時間培養を行
った。この培養液を濾過して菌体を分離し、清澄なＰ液
１１５／？（ｐＨ５，７、ＩＣ５゜＝ ０．３２μ／？
）を得た。このＰ液をクロマト用活性を得た。この溶出
液のＩＣ５ｏは、０２３μｌ である。溶出液は３０％
水酸化ナトリウムでｐＩＩ８に２０ Ｑ ｍｅの塔に注
いだ。塔は水１／？で洗ったのち、０３規定塩酸で溶出
を行った。先に溶出される活性分画Ａ９８０―及び、後
（二溶出される活性分画８４７０ ｍｌ＋を得た。活性
分画ＡのＩＣ５ｏはＱ、ＯＯ８３ｐ、ｅ を示し、活
性分画ＢのＩＣ５ｏは、００３６μｌリウムでｐＨ１０
，０に調整した後、２０ Ｑ ｔｎｅのクロマト用活性
炭を充填した塔に注ぎ、２００Ｑｄの水で洗った後、０
．２Ｍ蟻酸で溶出する。活性分画を集めて５００１ｎｅ
を得た。この溶液のＩＣ５ｏ は０．００５１μｌであ
る。この活性分画をダウエックスＩ Ｘ ２ （ＯＨ型
）でｐＨ７，０に調整した後、濃縮し予めｐＨＩＱ、Ｏ
の０．０５Ｍ炭酸緩衝液で平衡化したダウエックス１×
８の塔（２，９Ｘ９１ｍ）に重層し、同緩衝液で溶出し
、活性分画を集め、クロマト用活性炭を充填した塔２０
０ｍ１に重層し、水２０００ ｍｅで洗った後、０２規
定塩酸で溶出する。活性分画を集めてダウエックスｌＸ
２（ＯＨ型）でｐＨ５，０に調整した後、濃縮乾固して
、マンノスタチンＳ−−第１キサイドが３５５■得られ
た。この固体のＩＣ５ｏは０．００５／ｊｇである。活
性分画Ｂは濃縮乾固した後、ｐｌ４ １０． Ｏの００
５Ｍ炭酸緩衝液１０ゴに溶解し、予めｐＨ１０，Ｏｌｏ
、 ０５ Ｍ炭酸緩衝液で平衡化したダウエックスＩＸ
８の塔（２，ｚ ｘ ６４ ｔｙｍ ） を二重層し、
同緩衝液で溶出し、活性分画を５ Ｑ ｍｅのクロマト
用活性炭の塔Ｃ二重層し、水１０００艷で洗った後、０
２規定塩酸で溶出する。活性分画を集めて、ダウエック
スＩ Ｘ ２ （Ｏｌ−Ｉ型）でｐｌ、］５．ｏｌ二調
製した後、濃発明の効果 マンノスタチンおよびそのＳ−オキサイドは基質である
マンノース誘導体からは容易に類推できない新規な、ア
ミノ基、メチルチオ基またはメチルスルフィニル基を有
するシクロペンタノール構造を有し、また動物由来（ラ
ットの副翠丸）のα−Ｄ−マンノシダーゼを強く阻害す
ることが明らか（ニされた。
ール製タンクに１３０／！を仕込み、１】５°Ｃ３０分
滅菌後、Ｍ Ｅ ３− Ａ Ｇ ３株の前培養液（振盪
培養４８時間）ｌ／！を植菌し、攪拌は毎分２００回転
、通気量は１３０７？で、２８°Ｃ１７２時間培養を行
った。この培養液を濾過して菌体を分離し、清澄なＰ液
１１５／？（ｐＨ５，７、ＩＣ５゜＝ ０．３２μ／？
）を得た。このＰ液をクロマト用活性を得た。この溶出
液のＩＣ５ｏは、０２３μｌ である。溶出液は３０％
水酸化ナトリウムでｐＩＩ８に２０ Ｑ ｍｅの塔に注
いだ。塔は水１／？で洗ったのち、０３規定塩酸で溶出
を行った。先に溶出される活性分画Ａ９８０―及び、後
（二溶出される活性分画８４７０ ｍｌ＋を得た。活性
分画ＡのＩＣ５ｏはＱ、ＯＯ８３ｐ、ｅ を示し、活
性分画ＢのＩＣ５ｏは、００３６μｌリウムでｐＨ１０
，０に調整した後、２０ Ｑ ｔｎｅのクロマト用活性
炭を充填した塔に注ぎ、２００Ｑｄの水で洗った後、０
．２Ｍ蟻酸で溶出する。活性分画を集めて５００１ｎｅ
を得た。この溶液のＩＣ５ｏ は０．００５１μｌであ
る。この活性分画をダウエックスＩ Ｘ ２ （ＯＨ型
）でｐＨ７，０に調整した後、濃縮し予めｐＨＩＱ、Ｏ
の０．０５Ｍ炭酸緩衝液で平衡化したダウエックス１×
８の塔（２，９Ｘ９１ｍ）に重層し、同緩衝液で溶出し
、活性分画を集め、クロマト用活性炭を充填した塔２０
０ｍ１に重層し、水２０００ ｍｅで洗った後、０２規
定塩酸で溶出する。活性分画を集めてダウエックスｌＸ
２（ＯＨ型）でｐＨ５，０に調整した後、濃縮乾固して
、マンノスタチンＳ−−第１キサイドが３５５■得られ
た。この固体のＩＣ５ｏは０．００５／ｊｇである。活
性分画Ｂは濃縮乾固した後、ｐｌ４ １０． Ｏの００
５Ｍ炭酸緩衝液１０ゴに溶解し、予めｐＨ１０，Ｏｌｏ
、 ０５ Ｍ炭酸緩衝液で平衡化したダウエックスＩＸ
８の塔（２，ｚ ｘ ６４ ｔｙｍ ） を二重層し、
同緩衝液で溶出し、活性分画を５ Ｑ ｍｅのクロマト
用活性炭の塔Ｃ二重層し、水１０００艷で洗った後、０
２規定塩酸で溶出する。活性分画を集めて、ダウエック
スＩ Ｘ ２ （Ｏｌ−Ｉ型）でｐｌ、］５．ｏｌ二調
製した後、濃発明の効果 マンノスタチンおよびそのＳ−オキサイドは基質である
マンノース誘導体からは容易に類推できない新規な、ア
ミノ基、メチルチオ基またはメチルスルフィニル基を有
するシクロペンタノール構造を有し、また動物由来（ラ
ットの副翠丸）のα−Ｄ−マンノシダーゼを強く阻害す
ることが明らか（ニされた。
コンカナバリンＡは細胞表面のα−Ｄ−マンノース部分
（二付着して細胞の幼若化を惹起することが知られてお
り、したがってα−Ｄ−マンノース誘導体、あるいはα
−Ｄ−マンノンダーゼの阻害剤はこの幼若化を抑えて、
癌化、癌の転移を抑え、また免疫系にも作用する可能性
がある。事実マメ利植物由来のα〜Ｄ−マンノシダーゼ
の［害剤テあるスワインソニンは免疫調整作用のあるこ
とが知られている。
（二付着して細胞の幼若化を惹起することが知られてお
り、したがってα−Ｄ−マンノース誘導体、あるいはα
−Ｄ−マンノンダーゼの阻害剤はこの幼若化を抑えて、
癌化、癌の転移を抑え、また免疫系にも作用する可能性
がある。事実マメ利植物由来のα〜Ｄ−マンノシダーゼ
の［害剤テあるスワインソニンは免疫調整作用のあるこ
とが知られている。
ヨ１
−１．：ので、癌化、ｌ：’＃の転移の抑制、免疫系（
二対する作用などを示す可能性がより高く、医薬の碩域
Ｃ二おいて極めて有用である。
二対する作用などを示す可能性がより高く、医薬の碩域
Ｃ二おいて極めて有用である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式（１）で表わされる新規α−Ｄ−マンノシダーゼ
阻害剤マンノスタチンおよびそのＳ−オキサイド。 ▲数式、化学式、表等があります▼（１）（ｎは０また
は１） ２、式（１）で表わされる化合物を生産する能力を有す
るストレプトミセス属に属する放線菌を培養して、式（
１）で表わされる新規α−Ｄ−マンノシダーゼ阻害剤マ
ンノスタチンおよびそのＳ−オキサイドの製造法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59196761A JPS6176455A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | 新規α−Ｄ−マンノシダ−ゼ阻害剤 |
| EP85111558A EP0175291B1 (en) | 1984-09-21 | 1985-09-12 | Novel alpha-d-mannosidase inhibitor |
| DE8585111558T DE3585189D1 (de) | 1984-09-21 | 1985-09-12 | Alpha-d-mannosidase hemmungsmittel. |
| ES547117A ES8700693A1 (es) | 1984-09-21 | 1985-09-19 | Un procedimiento para producir un nuevo inhibidor de (-d-ma-nosidasa,la manostatina,o su s-oxido |
| GR852278A GR852278B (ja) | 1984-09-21 | 1985-09-19 | |
| PT81169A PT81169B (pt) | 1984-09-21 | 1985-09-20 | Processo parqa a preparacao de novos inibidores da alfa-d-manosidase |
| DK427885A DK427885A (da) | 1984-09-21 | 1985-09-20 | Alfa-d-mannosidaseinhibitor, mannostatin, eller s-oxidet deraf og fremgangsmaade til dens fremstilling |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59196761A JPS6176455A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | 新規α−Ｄ−マンノシダ−ゼ阻害剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6176455A true JPS6176455A (ja) | 1986-04-18 |
| JPH0446269B2 JPH0446269B2 (ja) | 1992-07-29 |
Family
ID=16363179
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59196761A Granted JPS6176455A (ja) | 1984-09-21 | 1984-09-21 | 新規α−Ｄ−マンノシダ−ゼ阻害剤 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0175291B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6176455A (ja) |
| DE (1) | DE3585189D1 (ja) |
| DK (1) | DK427885A (ja) |
| ES (1) | ES8700693A1 (ja) |
| GR (1) | GR852278B (ja) |
| PT (1) | PT81169B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11846895B2 (en) | 2019-10-11 | 2023-12-19 | Canon Kabushiki Kaisha | Cartridge, supply container, and image forming apparatus |
-
1984
- 1984-09-21 JP JP59196761A patent/JPS6176455A/ja active Granted
-
1985
- 1985-09-12 DE DE8585111558T patent/DE3585189D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-12 EP EP85111558A patent/EP0175291B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-19 GR GR852278A patent/GR852278B/el unknown
- 1985-09-19 ES ES547117A patent/ES8700693A1/es not_active Expired
- 1985-09-20 DK DK427885A patent/DK427885A/da not_active Application Discontinuation
- 1985-09-20 PT PT81169A patent/PT81169B/pt not_active IP Right Cessation
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11846895B2 (en) | 2019-10-11 | 2023-12-19 | Canon Kabushiki Kaisha | Cartridge, supply container, and image forming apparatus |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT81169B (pt) | 1987-10-20 |
| PT81169A (en) | 1985-10-01 |
| ES8700693A1 (es) | 1986-10-16 |
| EP0175291A3 (en) | 1987-09-30 |
| EP0175291A2 (en) | 1986-03-26 |
| GR852278B (ja) | 1986-01-17 |
| DE3585189D1 (de) | 1992-02-27 |
| JPH0446269B2 (ja) | 1992-07-29 |
| ES547117A0 (es) | 1986-10-16 |
| DK427885A (da) | 1986-03-22 |
| DK427885D0 (da) | 1985-09-20 |
| EP0175291B1 (en) | 1992-01-15 |
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