JPS6188894A - 微生物による光学活性α−オキシ酸の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ラセミ体のα−オキシ酸アミド化合物を原料
として光学活性のα−オキシ′酸化合物を製造する方法
に関する。さらに詳しく言えば、本発明は、ラセミ体の
α−オキシ酸アミド化合物を原料として、α−オキシ酸
アミド化合物を分解して、Ｄ−α−オキシ酸化合物のみ
又はＬ−α−オキシ酸化合物の、みを産生ずる能力を有
する微生物を用いて、培養基中に、光学、活性を有する
α−オキシ酸化合物を生成せしめることを特徴とする光
学活性α−オキ／酸化合物の製造方法を提供するもので
ある。

光学活性を有するα−オキシ酸化合物は、関連する光学
活性化合物の出発物質として、また、ある物はそれ自体
医薬品として、あるいは医゛２；５品の原、科として有
用な物質であり、これらの効率的な生産方法を開発する
ことはイτｊめて重−）２なことである。

従来、一般的には、光学活性なα−オキシ酸化合物は、
化学合成により得られたラセミ体のオキ／酸化合物を、
光学分割するか、または発酵法により直接生産する方法
によるかして製造されている。光学分割の方法には適当
な塩基を用いたジアステレオマー法、直接晶析法等があ
るが、分、リリ剤が高価であったり、分別率が低いとい
う欠点があり、また、発酵法は、はとんどの場合、糖を
基質としており、その適用範囲がきわめて狭いという欠
点がある。

本発明者らは、光学活性を有するα−オキシ酸化合物の
工業的製法を鋭意所見した結果、微生物の有する不斉加
水分解能を利用して光学活性を有するα−オキシ酸化合
物を有利に得る方法を見出した。本発明は、かかる知見
に基づくものである。

本発明者らは、アエロモナス・ハイドロフイラ（微工研
菌寄第７３６０号）、モラキセラ・フェニルピルビカ（
微工研菌寄第７３５９号）を用いて、Ｄ、Ｌ−α−オキ
シ酸アミド化合物を原料としてそれを不斉加水分解し、
任意にＤ−、、：ｔｊＱｌあるいはＬ−活性を有するα
−オキシ酸化合物を製造することに成功した。

本発明において使用するＤ−α−オキ／融化合物のみ又
はＬ−α−オキシ酸化合物のみな、童生ずる能力を有す
る微生物の探索方法は、例えば次に示す方法によって行
なうことができろ。

すなわち、土壌、汚水、塵埃、空気等を供給Ｘイ（とじ
て微生物の生育可能な液体培地あるいは固体培地を使用
することにより微生物を分離する。

単離された菌株については、不斉加水分解能を検査する
。例えばリン酸二カリウム０．７　％、リン酸−カリウ
ム０６チ、硫酸マグネシウム０．０５チ、塩化カルシウ
ムｏ、ｏｏｏｓ％、塩化第二鉄０．０００５％、ブドウ
糖０．５チ、Ｄ、Ｌ−）ξントアミド０２％からなる液
体培地に、単離菌を微行し、２７℃にて好気的に６日間
ないし５日間培養する。生育した菌体を収集し、Ｄ、Ｌ
−α−オキン酸アミドを加え、１〜３時間反応させる。

反応後、クロマトグラフィー、旋光度等を利用して生成
したα−オキシ酸の光学純度を測定する。

本発明者らは、このような方法によりり、Ｌ−α−オキ
シ酸アミド化合物から光学活性を有するα−オキシ酸化
合物を生成する能力を有する微生物として約８０柿の土
壌から得た２００種余の単離ＩＹ４を鋭意検索した。そ
の結果、前述の２種の菌が優れた性能を有することを確
認した。

選択された菌の分類学的位置を検索した結果、これらは
、それぞれ、アエロモナス・ハイドロフイラあるいはモ
ラキセラ・フェニルピルビカに寓していることが判明し
た。なお、種属の決定はバーノース・マニュアル・オブ
・デターミナチブ・バクテリオロジー（第８版　１９７
４　）の分類書に従って行なった。

本発明方法において用いられる原料物質は、式 ％式％ 〔式中ｒ、は、Ｃ１〜１２の分枝状または直鎖状のアル
キル又はアルケニル、置換低級アルキル（コこテ置換基
は／％ロケン、ヒドロキシ、低級アルコキ７、アミン、
アルキルアミノ、カルボキシを意味する）、アリル、置
換アリル（ここで置換基は低級アルキル、低級アルコキ
ー／、ハロケンを意味する）、アラルキル、アラルケニ
ル、複素環式アラルキル、複素環式アラルケニルである
〕 で表わされるα−オキシ酸アミド化合物のラセミ体であ
る。

このり、Ｌ−α−オキシ酸アミド化合物（ま１０応する
り、Ｌ−α−オキシ酸から容易に製造することができる
。例えばＤ　＋　Ｌ−バントアミドは、Ｄ、Ｌ−バント
ラクトンを飽和メタノール中、室Ｌ−にて一晩反応させ
ると好収率で得ることがでδる。

他のり、Ｌ−α−オキシ酸アミド化合物は、０！゛Ｓ。

５ｙｎｔｈｅｓｉｓ　２旦６２（１９４０）の記載方法
に従い、対応するり、Ｌ−α−オキシ酸から容易に好収
率で得ることができる。

目的とする光学活性を有するα−オキシ１表化合物は例
えば、式 Ｒ−ＣＨ−ＣＯＯＨ Ｂ 〔式中Ｒは、前記と同じ意味を有する〕で表わされる化
合物である。

本発明を実施するには、土壌よシ単離した前述の微生物
、例えば、アエロモナス・ハイドロフイラ（微工研菌寄
第７３６０号）またはモラキセラ・フェニルピルビカ（
微工研菌寄第７３５９号）を例えばり、Ｌ−バントアミ
ドを加えた適当な培地にて振盪培養を行ない、培養後、
遠心、沖過等により菌体を分離し、その菌体に任意のり
、Ｌ−α−オキシ酸アミド化合物を加えて懸濁し、適当
な温度で反応きせる。反応後、反応液から菌体を除去し
、次いで分別抽出、クロマトグラフィー等の精製操作を
行なう。かくして、目的の光学活性α−オキシ酸化合物
を得ることができる。出発物質や目的物質の物性により
、分離、抽出、精製等の条件は適宜に選択される。

未反応の光学活性を有するα−オキシ酸アミドは、アル
カリ存在下でラセミ化し、適当な処理を加えて繰り返し
使用することができる。

以下に実施例を掲げ、本発明を具体的に説明する。

実施例１　アエロモナス・ハイドロフイラ種菌液の調製 リン酸二カリウム７０２、リン酸−カリウム６０？を精
製水９５０−に溶解（ｐＨ７，２）、滅菌し、硫酸マグ
ネシウム０，５２．１チ塩化カルシウム０．５　ｍｌ、
１％′塩化第二鉄０．２５−、ブドウ糖５０？、Ｄ、Ｌ
−バントアミド２．０２を精製水５〇−に溶解後、濾過
除菌して混合する。５ｄずつを滅菌した試験管に分注し
、土壌から上記組成寒天培地（寒天１．５　％　）上で
分離したアエロモナス・ハイドロフイラ（微工研菌寄第
７５６０号）を１白金耳接種する。２７℃、３日間好気
的に静置培養してアエロモナス・ノ・イドロフイラの種
菌液を調製した。

実施例２　モラキセラ・フェニルピルビカ種菌液の調製 実施例１と同じ組成を有する培地５−に土壌から分離し
たモラキセラ・フェニルピルビカ（微工研菌寄第７６５
９号）を１白金耳接種し、２７℃６日間好気的に静置培
養してモラキセラ・フェニルピルビカの種菌液とした。

実施例６　Ｄ−ベント酸の合成 実施例１と同じ組成を有する培地５００　ｍｌに実施例
１で得たアエロモナス・ハイドロフィラ種菌液１　ｍｅ
を加え、２７℃　５日間振盪培養する。

培イａ液から遠心分離により湿体菌５．　Ｏｆを得た。

菌体２．２ｒをｏ、４ｂａ　Ｄ、Ｌ　−ｔ’ｒントアミ
ト′・リン酸緩衝溶液（ｐＨ７，２）　３．０　ｍＺに
加え、６７℃　１時間反応する。遠心分離により菌体を
除去した後、クロマトグラフィー、酢酸エチル抽出によ
りＤ−・にント酸５８　＋１１９　（収率６２敷光学純
度９４％）を得た。光学純度は、パント酸をラクトン化
し、Ａｒ＋ａｌｙｔｈｃａｌ　Ｂｌｏｃｈｅｍｉｓｔｒ
ｙ　１１２９−１６　（１９８１）に従って分桁したつ 実施例４　Ｄ−マノデル酸の合成 実施例ろと同ツ求の操作でアエロモナス・ハイドロフイ
ラ湿体菌２．０？を得た。菌体１．５？を０、１　Ｍ　
　Ｄ　、　Ｌ−マンデルアミド・リン酸緩衝溶液（ｐＨ
７，２）１０−に加え、２７℃　１時間反応する。

遠心分離によυ菌体な除去した後、塩酸酸性化、エーテ
ル抽出により生成したマンデル酸５２　＃＋９（比旋光
度〔α’：ｌ、　　−１１６°（Ｃ＝０．５　、　Ｈ２
Ｏ）　）を得、さらに、酢酸エチル−ヘキサン（混合比
１：１）で結晶化し、Ｄ−マンデル酸４５　ｍｇ（比旋
光度〔α〕６°＝−１４５°（ｃ＝ｉ、ｏエタノール）
　ｍ、ｐ、　１３１−１５２°）を得た。

実施例５　Ｌ−バンド酸の合成 実施例１と同じ組成を有する培地３００ｍｊ！に実施例
２で得たモラキセラ・フェニルピルビカ種菌液（１ゴ）
を２７℃　５日間振盪培養する。培養液から遠心分離に
より、湿体菌２．０１を得た。

菌体１．２２を０．２　Ｍ　　Ｄ　、　Ｌ−パフドアミ
ドリン酸緩ｆＩ溶液（ｐＨ７，２）　２．５−に加え、
３７℃４．５時間反応する。遠心分離により菌体を除去
した後、クロマトグラフィー、酢酸エチル抽出によりＬ
−パント酸１５ｔｎｑ（収率６２％、光学純度９０％）
を得た。

実施例６　Ｌ−マンデル酸の合成 実施例５と同様の操作でモラキセラ湿体菌１５７を得た
。菌体１．１７を０．１１ｖｌＤ、Ｌ−マンデルアミド
リン酸緩衝溶液（ｐＨ７，２）１０ｒｎｌを加え、２７
℃２時間反応した。遠心分離により菌体を除去した後、
塩酸酸性下、エーテル抽出により反応生成物であるマン
デル酸６４　ｍ９（比旋光度〔α〕９＝＋１１３°（Ｃ
＝０．５　、Ｉ（２ｏ：ｌ　）を得る。酢酸エチル−ヘ
キサン混合溶液（１：１）で勇結晶し、Ｌ−マンデル酸
５６　ｍ９　（比旋光度〔α〕ｔ０−＋１４６°（Ｃ＝
１．０゜エタノール）　ｍ、ｐ、　１３１−１６２°）
を得た。

光学活性を有するα−オキシ酸化合物、例えばＤ−α−
オキシ酸としてはＤ−／ξノド酸、Ｄ−酒石酸等が、ま
た、Ｌ−α−オキシ酸としてはＬ−乳酸、Ｌ　−ＩＪン
ゴ酸等が、工業用、食品、医薬品用としてまたは、それ
らの原料として広汎に使用されており、また例えばベス
タチンのように近年発見された有用な微生物代謝産物の
構成成分として光学活性なα−オキシ酸を含何する場合
がしばしば見られる。本発明方法は、これらα−オキシ
酸の０体又はＬ体を取得する方法として極めて有用な方
法である。

特許出願人　富士薬品工業株式会社 代　埋　人　　弁理士　　南　　　　孝　　夫　ｒ゛、
’ｌ　−゛−゛１

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）ラセミ体のα−オキシ酸アミド化合物を原料として
   、α−オキシ酸アミド化合物を分解して、Ｄ−α−オキ
   シ酸化合物のみ又はＬ−α−オキシ酸化合物のみを産生
   する能力を有する微生物を用いて、培養基中に、光学活
   性を有するα−オキシ酸化合物を生成せしめることを特
   徴とする光学活性α−オキシ酸化合物の製造方法。 ２）上記のＤ−α−オキシ酸化合物のみを産生する能力
   を有する微生物がアエロモナス・ハイドロフイラ（微工
   研菌寄第７３６０号）である特許請求の範囲第１項記載
   の光学活性α−オキシ酸化合物の製造方法。 ３）上記のＬ−α−オキシ酸化合物のみを産生する能力
   を有する微生物がモラキセラ・フエニルピルビカ（微工
   研菌寄第７３５９号）である特許請求の範囲第１項記載
   の光学活性α−オキシ酸化合物の製造方法。