JPS62159B2

JPS62159B2 -

Info

Publication number: JPS62159B2
Application number: JP52028151A
Authority: JP
Inventors: Hao Ri Choo
Original assignee: RIIJENTSU OBU ZA UNIV OBU KARIFUORUNIA ZA
Current assignee: RIIJENTSU OBU ZA UNIV OBU KARIFUORUNIA ZA
Priority date: 1976-03-17
Filing date: 1977-03-16
Publication date: 1987-01-06
Also published as: DK149203B; IL51660A; SE7703004L; NO770941L; AR222778A1; SE436354B; NO147105C; CH625785A5; GB1563654A; FR2348912B1; PH13864A; USRE29842E; AU514499B2; NL7702849A; NO147105B; NZ183605A; ATA178877A; PT66311B; ES467453A1; AT355238B

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、下記の結合順序Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro− Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn− Ala−Ile−R¹−Lys−Asn−Ala−R²− Lys−Lys−Gly−R₃−OH 〔式中、R¹はIle又はValであり；R²はHis又はTyr
であり、そしてR³はGln又はGluである〕を有するヘントリアコンタペプチド
（hentriakontapepide）、特に下記の結合順序Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro− Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn− Ala−Ile−Ile−Lys−Asn−Ala− His−Lys−Lys−Gly−Gln−OH ａのヘントリアコンタペプチド、及びその製造方法
に関する。便宜上結合順序ａのヘントリアコンタペプチ
ドを以後β−エンドルフイン（β−endorphin）
と称することにする。結合順序のヘントリアコンタペプチドの製造
方法は、(a) 当業界で周知の方法を用いて天然源
からの上記化合物を単離するか、又は (b) 通常の固相ペプチド合成法を用いて上記化
合物を合成することを特徴とするものである。天然源からのβ−エンドルフインの単離は、当
業界で周知の方法を利用して行なうことができ
る。この原料用の好ましい天然源には、羊の下垂
体、好ましくは駱駝の下垂体が包含される。かく
して、たとえば、駱駝の全下垂体を酸性アセトン
抽出に付して画分Ｄを得、次いでこのものをカル
ボキシメチルセルロースカラム上でクロマトグラ
フイーにかけ、Li et al Biochemistry 14、947
（1975）に記載された成分Ｎを得る。成分Ｎの精
製はそれ自体公知のゲル過及び電気泳動法を用
いて達成され、かくして所望のβ−エンドルフイ
ンが得られる。天然源からのβ−エンドルフインのアミノ酸含
有率及びアミノ酸の結合順序の同定は、精製した
成分Ｎから誘導されたβ−エンドルフインを、通
常の方法においてトリプシン及びサブチリシン
（subtilisin）消化を用いて酵素的に消化すること
により達成することができる。次いでその消化物
をペーパークロマトグラフイー及びそれに続く高
電圧電気泳動により分配する（map）。スポツト
をニンヒドリンで発色させそして溶離した後、ト
リプシン消化は11種のスポツトを生じ、一方サブ
チリシン消化は10種のスポツトを生ずることが見
出される。これらのスポツトを溶離し、そして自
動分析器によりアミノ酸含有率を決定し、他方ア
ミノ酸の結合順序はダンシル−エドマン法
（dansyl−Edman procedure）により決定する。
かかる方法の使用により、β−エントルフインは
前記したアミノ酸含有率及びアミノ酸の結合順序
を有するヘントリアコンタペプチドあることが決
定されるに到つた。 β−エンドルフインの合成は、当業界で現在周
知の固相法を使用して行なうことができる。好ま
しい方法においては、β−エンドルフインの−
COOH末端基を表わすアミノ保護されたグルタ
ミンを、１〜２％ジビニルベンゼンで架橋された
ベンズヒドリルアミンポリスチレンの如き通常の
固相ペプチド合成樹脂にカツプリングされる。次
いで、適当な試薬を使用して該アミノ保護基を選
択的に除去する。上記試薬の性質は使用した保護
基に依存する。好ましい態様においては、アミノ
基の保護のためにｔ−ブチルオキシカルボニル
（Boc）基を使用し、そして選択的脱保護剤は塩
化メチレン中の50％トリフルオロ酢酸である。脱保護基の後、このグルタミン−樹脂をそれ自
体公知の方法によりアミノ保護されたグリシン、
好ましくはＮ−Boc−グリシンで、最も好ましく
はＮ−Boc−グリシンの予備生成せしめた対称無
水物で処理して、該グルタミン残基の遊離アミノ
基とグリシンのカルボキシル基との間にペプチド
結合を形成せしめる。次いで、脱保護基及び保護されたアミノ酸の予
備生成せしめた対称無水物とのカツプリングのサ
イクルを、残りのアミノ酸に関してβ−エンドル
フインの結合順序の順番に繰り返す。該アミノ酸
の中のいくつかはα−アミノ保護の他に更に側鎖
封鎖基を必要とする。かかるアミノ酸及び使用さ
れる封鎖基は下記の通りである： Glu（OBzl）、Ser（Bzl）、Lys（oBr−Ｚ）、
Tyr（oBr−Ｚ）及びHis（Boc）〔式中、oBr−Ｚはｏ−ブロモベンジルオキシカ
ルボニルであり、Bzlはベンジルであり、そして
Bocは前記した通りである〕。合成が完了すると、前記スチレン−ジビニルベ
ンゼン共重合体樹脂に結合した下記の保護された
ヘントリアコンタペプチドが得られる： Boc−Tyr（oBr−Ｚ）−Gly−Gly−Phe−Met−
Thr−Ser−（Bzl）−Glu（OBzl） −Lys（oBr−Ｚ）−Ser（Bzl）−Gln−Thr−Pro
−Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys（oBr−Ｚ）
−Asn−Ala−Ile−Ile−Lys（oBr−Ｚ）−Asn−
Ala−His（Boc）−Lys（oBr−Ｚ）−Lys（oBr−
Ｚ）−Gly−Gln− 〔式中、oBr−Ｚ、Bzl及びBocは前記した通りで
あり、そしてはスチレン−１％ジビニルベンゼ
ンコポリマーである〕。上記樹脂からのペプチドの脱カツプリングは液
体フツ化水素で処理することにより、全保護基の
開裂と共に行ない、かくして所望のβ−エンドル
フインを生成せしめる。 β−エンドルフインがβ−リポトロピンホルモ
ン（β−lipotropin hormone）の残基61−91のア
ミノ酸結合順序を有すると言う事実にもかかわら
ず、β−エンドルフインの脂肪分解活性は該完全
なホルモンに比較して非常に低い。しかしなが
ら、β−エンドルフインは充分な阿片剤アゴニス
ト活性を有し、かくして効力のある非耽溺性の鎮
痛剤として有用である。合成及び天然のβ−エン
ドルフインは同一の物理的性質及び生物学的性質
を有する。結合順序により定義されるβ−エンドルフイ
ン類似体は豚及びヒトのホルモンからの対応する
β−リポトロピン中に見出されるアミノ酸結合順
序に対応する。それらはβ−エンドルフインに対
して述べた方法と同様な通常の固相ペプチド合成
により、この場合適当な別のアミノ酸で代替して
製造するのが好都合である。本発明の化合物は、適合しうる製薬学的担体材
料と共にそれらを含有し且つ該活性成分の直接放
出性又は徐放性を有する製薬学的製剤の形態にあ
る薬剤として使用することができる。この担体材
料は腸内、経皮又は非経口投与に適した有機又は
無機の不活性担体材料たとえば水、ゼラチン、ア
ラビアゴム、ラクトース、デンプン、ステアリン
酸マグネシウム、タルク、植物油、ポリアルキレ
ングリコール、黄色ワセリン等である。該製薬学
的製剤は固体形態に（たとえば錠剤、糖剤、坐剤
又はカプセル剤として）、半固体形態に（たとえ
ば軟膏剤として）又は液体形態に（たとえば溶液
剤、懸濁液剤又は乳液剤として）構成することが
できる。該製薬学的製剤は必要に応じて無菌化し
及び／又は、防腐剤、安定剤、湿潤剤又は乳化
剤、滲透圧を変えるための塩又は緩衝剤として作
用する物質の如き補助薬物質を含有することがで
きる。全身投与用の製薬学的製剤の場合、１投与当り
本発明の化合物約５〜750mg／Kgを与えることが
できる。該製薬学的製剤は、本発明の化合物を製薬学的
製剤において常用され且つ治療学的投与に対して
適する無毒性の固体及び／又は液体担体材料（た
とえば、前記した担体材料）と混合し、そして必
要に応じて、該混合物を所望の製薬学的投与形態
に変えることにより、それ自体公知の方法で製造
することができる。実施例１天然のβ−エンドルフインの単離合計で500個の駱駝の全下垂体をLi et al.、
Biochemistry 14、947（1975）の方法に従つて
酸性アセトンで抽出して画分Ｄを得た。画分Ｄを
カルボキシメチルセルロースカラム上でのクロマ
トグラフイーにかけることにより成分N66mgが得
られ、この量を0.1N酢酸中でセフアデツクス
（Sephadex）Ｇ−25（微細）のカラムによるゲル
過に付した。６個の画分が凍結乾燥後下記の収
率で得られた：Ａ÷10mg；Ｂ÷７mg；Ｃ÷11mg；
Ｄ÷13mg；Ｅ÷２mg及びＦ÷７mg。画分ＣをPH3.7のピリジン−酢酸緩衝液〔ピリ
ジン−HOAc−H₂O＝４／40／1150（Ｖ／Ｖ）〕
中でホワツトマンNo.3MM紙にて400Vで２時間調
製用電気泳動（preparative electrophoresis）に
より更に精製した。主要なバンドを0.1N酢酸で
溶離し、そして凍結乾燥して純粋な生成物7.5mg
を得た。このもののNH₂末端分析は末端基として
チロシンのみを与た。自動分析器を使用して、Spackman et al.、
Anal.Chem.30、1190（1958）に従つて純粋な生
成物の試料についてアミノ酸分析を行なつた。こ
の生成物の得られるアミノ酸組成を表１に記載す
る。 Smith.Nature 171、43（1953）の方法に従う
紙上での着色試験により、トリプトフアンが存在
しないことが確認された。

【表】実施例２天然のβ−エンドルフインの構造決定 PH8.0の緩衝液（0.2M酢酸アンモニウム）中の
ペプチド１mg及びトリプシン0.02mg又はサブチリ
シン0.05mgを用い、37℃にて、トリプシンの場合
には８時間そしてサブチリシンの場合には１時
間、実施例１の生成物の酵素消化を行なつた。そ
の消化物をペーパークロマトグラフイー〔ブタノ
ール／酢酸／水＝４／１／５〔Ｖ／Ｖ）〕及び次
いでPH2.0〔ギ酸（88％）／酢酸／水＝218／63／
719（Ｖ／Ｖ）〕にて200Vで１時間高電圧電気泳
動により分配した。分配物をエタノール溶液中の
１％ニンヒドリンで噴霧し、そして暗所で20時間
発色せしめた。スポツトを切り出し、そして
0.1N水酸化アンモニウム溶液で溶離した。その
溶離物をアミノ酸分析及び結合順序分析のために
デシケータ中で乾燥した。アミノ酸分析は
Spackman et al.、supraに従つて行なつた。該
ペプチドのアミノ酸結合順序はLi et al.、Arch.
Biochem.Biophys.141、705（1970）に記載のエ
ドマン法（Edman procedures）により決定し
た。Asp／asn及びGlu／Glnの決定は、Offord、
Naturs 211、591（1966）に従うPH6.7における
ペーパー電気泳動による移動度から推測した。そ
の結下を下記表２及び３に要約する。

【表】

【表】実施例１の表１並びに本実施例の表２及び３に
記載のデータからβ−エンドルフインの結合順序
を推測する。表１に示されている如く、アルギニ
ン、シスチン及びトリプトフアンは成分Ｎ−画分
Ｃには欠如している。更にこの物質は、ヒスチジ
ン、プロリン、バリン、メチオニン及びチロシン
の各々の１個の残基のみを有する。NH₂−末端残
基はチロシンであるので、トリプチツクペプチド
T8はNH₂−端に位置しなければならない。サブ
チリシンペプチドS9（表２）のアミノ酸及びNH₂
−末端データから、T8はT9に結合していること
は明らかである。同様に、S7はT9及びT7に対す
る重なりを与えることができる。ペプチドT6はCOOH−末端グルタミンを有し
そしてリジンを有しておらず、それはCOOH−
端に位置すると仮定することができる。ペプチド
T5はLys−Lys結合の確率を示し、そしてこれは
T1及びT3（表２及び３）により確かめられる。
ペプチドT1またはT3及びT5を結合するのに役立
つている。かくして、トリプチツクペプチドの配
置は下記：T8→T9→T7→T3→T5の通りであ
り、そして成分Ｎ−画分Ｃ（β−エンドルフイ
ン）の完全アミノ酸結合順序はヘントリアコンタ
ペプチドに対して本明細書中に既に記載した通り
のものであると結論することができる。実施例３ β−エンドルフインの固相合成Ｎ〓−Boc−α−ベンジル−γ−グルタミンベン
ズヒドリルアミン樹脂ベンズヒドリルアミン樹脂に対するα−ベンジ
ルＮ〓−ｔ−ブチルオキシカルボニルグルタメー
トの結合はその対称無水物を用いて行なつた。１
ｇにつき0.38ミリモルの遊離アミンを含有するベ
ンズヒドリルアミン塩酸塩樹脂の試料（2.5ｇ）
をCH₂Cl₂中の５％ジイソプロピルエチルアミン
（DIEA）で中和し、次いでCH₂Cl₂中の上記対称
無水物３当量で45分間処理した。次いでCH₂Cl₂
中の５％DIEA5mlを加え、続いて追加的に10分
間反応させた。過及び30mlのCH₂Cl₂による３
回の洗浄及び30mlの無水エタノールによる３回の
洗浄により反応を終了せしめた。上記樹脂を前記
量の対称無水物で再処理した後、それを真空中で
１時間乾燥した。反応の終点はギシン試験
（Gisin test）により証明された。試料をプロピ
オン酸／12NHCl中で加水分解した後、アミノ酸
分析は１ｇにつきGln0.23ミリモル（68％開裂）
に相当する１つのピークを与えた。HF−開裂さ
れた生成物のグルタミンとしての同定は、１−ブ
タノール／酢酸／水（４／１／１、Ｖ／Ｖ）及び
１−ブタノール／ピリジン／酢酸／水（６／６／
1.2／4.6、Ｖ／Ｖ）中での薄層クロマトグラフイ
ーにより確かめられた。 Boc−アミノ酸の対称無水物Ｎ・N′−ジシクロヘキシル−カルボジイミド
（DCCI）とBoc−アミノ酸との反応は下記の如く
して行なつた：塩化メチレン６ml中のBoc−アミ
ノ酸1.9ミリモルを０℃に冷却し、そして塩化メ
チレン中の0.6MDCCI1.6mlと混合した。０℃で20分間撹拌した後、ジシクロヘキシル尿
素の沈殿物を25℃での過により除去し、そして
塩化メチレン2.4mlで洗浄した。液をカツプリ
ング反応のためにそのまま使用した。保護されたβ−エンドルフインベンズヒドリルア
ミン樹脂上記した樹脂を下記合成工程に付した： (1) 塩化メチレン15mlで３回洗浄； (2) 塩化メチレン中の50％トリフルオロ酢酸によ
り15分間Boc基の除去； (3) 塩化メチレン15mlで２回洗浄； (4) 塩化メチレン中の50％ジオキサン15mlで２回
洗浄； (5) 塩化メチレン15mlで２回洗浄； (6) 塩化メチレン中の５％ジイソプロピルエチル
アミン15mlによる中和５分間； (7) 塩化メチレン15mlで６回洗浄； (8) Boc−アミノ酸の予備生成した対称無水物の
溶液を加えそして30分間振とう； (9) 塩化メチレン中の５％ジイソプロピルエチル
アミン0.20当量を加えそして更に20分間振と
う； (10) 塩化メチレン15mlで３回洗浄；そして (11) 無水エタノール15mlで３回洗浄。下記のＮ−保護されたアミノ酸に対して上記サ
イクルを繰り返した： Boc−Gly、Boc−Lys（oBr−Ｚ）、Boc−Lys
（oBr−Ｚ）、Boc−His（Boc）、Boc−Ala、Boc−
Asn、Boc−Lys（oBr−Ｚ）、Boc−Ile、Boc−
Ile、Boc−Ala、Boc−Asn^*、Boc−Lys（oBr−
Ｚ）、Boc−Phe、Boc−Leu、Boc−Thr、Boc−
Val、Boc−Leu、Boc−Pro、Boc−Thr、Boc−
Gln、Boc−Ser（Bzl）、Boc−Lys（oBr−Ｚ）、
Boc−Glu（OBzl）、Boc−Ser（Bzl）、Boc−
Thr、Boc−Met、Boc−Phe、Boc−Gly、Boc−
Gly、及びBoc−Tyr（oBr−Ｚ）。＊ Asnの導入後、ペプチド樹脂を乾燥し（収率
4.7ｇ）、そして部分標本（aliquot）（400mg）を
除去した。次いでこのペプチド樹脂の残りを前
記工程に付し、２つの残基を除く残りの残基を
導入した。塩化メチレン中５％DIEAで２回処
理して中和し、そして無水物カツプリングの第
２段階に対してはトリフルオロエタノールを20
％濃度となるように加えた。 β−エンドルフイン保護されたβ−エンドルフイン樹脂の試料
（0.6ｇ）を、Boc基を除去するために脱保護基及
び中和工程に付した。次いで乾燥した樹脂を、ア
ニソール1.8ml及び液体HF15mlの存在下に０℃で
１時間撹拌した。HFを窒素の流れで除去し、そ
して油状残留物を酢酸エチル15mlで２回洗浄し
た。50％酢酸15mlで３回上記樹脂からペプチドを
抽出し、一緒にした過を真空中で少容量になる
まで（３〜５ml）蒸発させ、そして0.5N酢酸中
セフアデツクスＧ−10（２×25cmカラム）により
ゲル過に付した。１つのピーク（280nｍ検
出）が検出されそして凍結乾燥により110mgが得
られた。次いでこの物質をカルボキシメチルセル
ロースによりクロマトグラフイーに付した。主要
ピーク（280nｍ検出）の単離により物質66mgを
得た。この物質をセフアデツクスＧ−50による分
配クロマトグラフイーによりさらに精製した。主
要ピーク〔Folin−Lowry検出〕（Rf＝0.21）によ
り表わされた物質を単離すると、高度に精製され
たβ−エンドルフイン（出発樹脂を基準として
19.6％収率）52mgが得られた。ｎ−ブタノール／ピリジン／氷酢酸／水（15／
10／３／12、Ｖ／Ｖ）を用いて薄層クロマトグラ
フイーにかけると、上記精製された物質（50μ
ｇ）はRf値0.35を有する１つのスポツト（ニンヒ
ドリン検出）を与えた。ペーパー電気泳動にかけ
ると、合成β−エンドルフイン（50μｇ試料）は
PH3.7及び6.9でそれぞれRf値（Lysに比べて）
0.65及び0.42を有する単一のスポツトを与えた。
上記精製した物質（100μｇ）のゲル電気泳動も
またPH4.5、１時間で単一のバンドを与えた。試
料（１mg）を、５％ポリアクリルアミドゲル中で
エレクトロフオーカシング（electrofocusing）に
付した。約10.0のpIを有する唯一のバンド（12％
トリクロロ酢酸による沈殿により検出）が観察さ
れた。酸加水分解後のアミノ酸分析は、Lys₅.₂、
His₀.₉、Asp₂.₂、Thr₃.₀、Ser₂.₁、Glu₂.₁、
Pro₁.₁、Gly₃.₀、Ala₂.₁、Val₁.₁、Met₀.₉、Ile₁.₅、
Leu₂.₂、Tyr₁.₀、及びPhe₂.₂を与えた。完全な酵
素消化（最初トリプシン及びキモトリプシンによ
り、そして次いでロイシンアミノペプチダーゼに
より）後のアミノ酸分析は；Lys₃.₀、His₁.₀、
Thr₃.₂、（Ser、Asn、Gln）₃.₂、Glu₁.₁、Pro₀.₉、
Gly₃.₀、Ala₂.₁Val₁.₀、Met₁.₂、Ile₂.₀、Leu₂.₁、
Tyr₁.₁及びPhe₁.₈を与えた。実施例４ β−エンドルフインの生物学的活性天然β−エンドルフインの阿片剤アゴニスト活
性を、モルモツトの悩膜を使用してSimon et al.
、Proc.Nat.Acad.Sci.70、1947（1973）の方法に
より決定した。得られた結果を表４において下記
に要約する：

【表】上記表からβ−エンドルフインが強力な阿片剤
アゴニスト活性を有し；その効力はモル基準でノ
ルモルフイン１に対して3.42倍であることがわか
る。天然β−エンドルフインの脂肪分解活性をLi
et al.、Arch.Biochem Biophys169、669
（1975）の方法を使用して家兎の脂肪細胞中にお
いて羊のβ−リポトロピンホルモンの活性と比較
した。得られた結果を表５に要約する。

【表】誤差の値。
β−エンドルフイン（ヒト）及びβｃ−エンド
ルフイン（ラクダ）の鎮痛効力をマウスにicv
（脳室内）及びiv（静脈内）注射の後に定量的に
測定した結果を表６に示す。モルフオリンを対照
化合物として使用する。モル濃度基準で効力を比
較した場合、βｈ−エンドルフインは、中枢的に
投与すると、３回のバイオアツセイによつて評価
してモルフオリンよりも17〜48倍効力が高く、iv
注射すると、モルフオリンより3.4倍効力が高
い。中枢的に投与した場合、βｃ−エンドルフイ
ンはモルフオリンより17〜33倍効力が高く、iv注
射すると、3.5倍効力が高い。

【表】実施例５豚のβ−リポトロピンの結合順序に類似したβ
−エンドルフイン類似体１番目のBoc−Ileアミノ酸をBoc−Valで代替
し、かくして豚のβ−リポトロピンの対応する部
分のアミノ酸結合順序を有するβ−エンドルフイ
ン類似体Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr−Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr −Pro−Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn −Ala−Ile−Val−Lys−Asn−Ala−His−Lys−Lys−Gly−Gln−OH を生成せしめることを除き、実施例３の方法を繰
り返す。実施例６ヒトのβ−リポトロピンの結合順序に類似した
β−エンドルフイン類似体使用するカルボキシル末端基がBoc−Glu
（Bzl）であり、Boc−His（Boc）をBoc−Tyr
（oBr−Ｚ）で代替し、そして通常のコポリスチ
レン−ジビニルベンゼン樹脂、例えばクロルメチ
ル化コポリスチレン−ジビニルベンゼンを選択
し、かくしてヒトのβ−リポトロピンのその部分
に対応する下記のアミノ酸結合順序；Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr−Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr −Pro−Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn −Ala−Ile−Ile−Lys−Asn−Ala−Tyr−Lys−Lys−Gly−Glu−OH を有するβ−エンドルフイン類似体を生成せしめ
ることを除き、実施例３の方法を繰返す。得られる上記β−エンドルフイン類似体は以下
に述べる物性を示す： PH3.7（ピリジンアセテート緩衝液）及びPH6.7
（コリジンアセテート緩衝液）において400Vで
4.5時間ペーパー電気泳動する（試料110μｇ）す
ると、それぞれリジンに対し0.56及び0.23のRf値
をもつ単一のスポツトを与える。薄層クロマトグ
ラフイー（BPAW）（65μｇ）によればRf＝0.52
に単一スポツト（ニンヒドリン）を示す。PH4.5
におけるポリアクリルアミドゲル上でのデイスク
電気泳動（0.1mg）によれば１つの強いバンドを
示す。HCl加水分解（24時間）後のアミノ酸分析
によれば、Lys₅.₃Asp₂.₀、
Thr₂.₈Ser₁.₇Glu₃.₁Pro₁.₀Gly₁.₈Ala₁.₈Val₁.₀Met₀.₉I
ｌｅ_１．_４Ｌｅｕ_２．_１Ｔｙｒ_１．_９Ｐｈｅ_１．_９（Il
e−Ile部分は抵抗性）
を示す。完全酵素消化（最初にトリプシン及びキ
モトリプシンで、次いでロイシンアミノペプチダ
ーゼで）後のアミノ酸分析によれば、Lys5.1
（Thr＋Ser＋Asn＋Gln）₇.₇
Glu₂.₀Pro₁.₁Gly₃.₀Ala₁.₈Vol₁.₁Met₁.₀Ile₁.₉Leu₂.₁T
ｙｒ_２．_０Ｐｈｅ_２．_１を示す。ペプチド・マツプ化のため、試料（1.30mg）を
0.23mlの0.2MNH₄OAc、PH８中で、26μｇのトリ
プシンと共に37℃で６時間処理した。繰返し凍結
乾燥後、一部をワツトマン3MMにスポツトし、
クロマトグラフイ（BAW）により、次いで電気
泳動（コリジンアセテート、PH6.7、400V、６時
間）によりマツプ化した。ニンヒドリン（エタノ
ール中、0.01％）により可視化して５つの主たる
スポツトを示し、これらを切り取り0.1NNH₄OH
で24時間抽出した。すべての小量スポツトを切り
取り抽出のためプールした。HCl加水分解物のア
ミノ酸分析の結果、スポツト１については
Lys₁.₀Glu₁.₁Gly₀.₉；スポツト２については
Lys₀.₉Thr₁.₁Ser₀.₉Glu₁.₂Gly₂.₂Met₀.₈Tyr₀.₈Phe₁.
_１；スポツト３については
Lys₀.₈Thr₁.₉Ser₀.₉Glu₁.₂Pro₀.₉Vol₁.₀Leu₁.₉Phe₁.₁
；スポツト４については
Lys₀.₉Asp₁.₀Ala₁.₁Ile₁.₇；そしてスポツト５につ
いてはLys₀.₉Asp₁.₁Ala₁.₁Tyr₀.₉を示した。これ
ら１つの主たるスポツトはこの操作で検出したペ
プチドの94％を占める。実施例７非経口用配合物蒸留水中のβ−エンドルフインの安定化された
溶液を、無菌のアンプル中に又は小瓶中に小瓶当
りペプチド50mgを与える量に小分けする。次いで
容器を凍結乾燥に付して乾燥した無菌の固体を得
る。β−エンドルフインは等張性塩溶液の添加に
より注射用に再構成することができる。

Claims

【特許請求の範囲】１下記の配列Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro− Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn− Ala−Ile−R¹−Lys−Asn−Ala−R²− Lys−Lys−Gly−R₃−OH 式中、R¹はVal又はIleであり、 R²はHis又はTyrであり、そして R₃はGln又はGluである、のヘントリアコンタペプチド。２下記の配列Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro−Leu−
Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn− Ala−Ile−Ile−Lys−Asn−Ala−His− Lys−Lys−Gly−Gln−OH ａのヘントリアコンタペプチドである特許請求の範
囲第１項記載のペプチド。３下記の配列Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro− Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn−Ala−
Ile−Ile−Lys−Asn−Ala−Tyr− Lys−Lys−Gly−Glu−OH ｂのヘントリアコンタペプチドである特許請求の範
囲第１項記載のペプチド。４下記の配列Ｈ−Tyr−Gly−Gly−Phe−Met−Thr− Ser−Glu−Lys−Ser−Gln−Thr−Pro− Leu−Val−Thr−Leu−Phe−Lys−Asn− Ala−Ile−Ile−Lys−Asn−Ala−His− Lys−Lys−Gly−Gln−OH ａのヘントリアコンタペプチドを有効成分として含
有することを特徴とする鎮痛剤。