JPS62175189A - 発酵法によるオリゴ糖脂肪酸エステルの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は発酵法によるオリゴ糖脂肪酸エステルの製造法
に関する。本発明で得られるオリゴ糖脂肪酸エステルは
、界面活性剤としての利用及びガンの免疫療法剤等の生
理効果が期待される。

〔従来の技術〕

微生物の産生ずる糖脂質系バイオサーファクタントとし
てシュードモナス・アエルギノーサ（Ｐ、　ａｅｒｕｇ
ｉｎｏｓａ）によって生産されるラムツリピッドＣＦ、
Ｇ、　Ｊａｒｖｉｓ　ｅｔ　ａｌ、＋　Ｊｏｕｒｎａｌ
　ｏｆ　Ａｍ−ｅｒｉｃａｎ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　５ｏ
ｃｉｅｔｙ、２．４１２４（１９４９））、トルロプシ
ス・ボンビコーラ（Ｔ、　ｂｏｍｂｉｃｏｌａ）等によ
って生産されるソホロリピソドＣＦ、　Ｊ、　Ｔ。

５ｐｅｎｃｅｒ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｃａｎａｄｉａｎ　
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉ−ｓｔｒｙ＋競、　
８４６（１９６１））等が知られている。またノカルデ
ィア属、ミコバクテリウム属に属する微生物が果糖及び
蔗糖脂肪酸エステルを生産することが見出されている（
特公昭５４−１４６６６号公報）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

しかしながら、一般に微生物の産生ずる糖脂質は収量が
低く、その回収、精製も困難である。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の如き従来の問題点を解決すべく鋭
意研究の結果、特定の菌体を用いることにより、培地中
にオリゴ糖脂肪酸エステルの結晶を析出せしめることが
でき、そのために収率よ＜、節単にオリゴ糖脂肪酸エス
テルを回収できることを見出し、本発明を完成するに到
った。

即ち、本発明は、ミクロポリスボラ属に属し、オリゴキ
ｙと脂肪酸エステルを生産する能力を有する放線菌を栄
養培地に培養し、菌体或いは培地中にオリゴ糖脂肪酸エ
ステルを生産せしめ、これを採取することを特徴とする
発酵法によるオリゴ糖脂肪酸エステルの製造法を提供す
るものである。

本発明のオリゴ糖脂肪酸エステルは、従来の物質と異な
りオリゴ糖に脂質が結合しており、新しい性能が期待で
きる。

本発明で使用するミクロポリスボラ属に属し、オリゴ糖
脂肪酸エステルを生産する能力を有する放線菌としては
、ミクロポリスボラエスピー（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐ
ｏｒａ　Ｓｐ、）ＮＳ−１０８５に株が挙げらる。

この菌学的性質を以下に示す。

（１）形態 本菌株は各種の有機及び無機培地において良く生育する
ダラム陽性、好気性の放線菌である。気菌糸及び基土菌
糸は幅０．４〜０　、６　ｔｒｍで比較的長く、両画糸
上に胞子鎖を形成する。

即ち気菌糸上では、乳頭状に分岐した胞子柄■に、ルー
プ状又は緩い螺旋状に５〜１５個の胞子鎖を形成する。

又基土菌糸ではほぼ球形の胞子が数個〜数十個で鎖状な
いし、時にはふど・うの房状塊を形成する。気菌糸上の
胞子は長円形状で０．４〜０．９　Ｘ　Ｏ，８〜１．５
ρで、表面は相部状を呈す。基体菌糸上の胞子は０．４
〜０．１３　Ｘ　Ｏ，６Ｘ　１．０１厘でほぼ球形で表
面は粘質物のため明確でない。上記両胞子共に運動性ば
ない。又、子嚢胞子、輪生糸、菌核等の特殊形態は観察
されない。

（２）各種培地における生育状態 各種寒天培地の性状は以下に示す′ａりである。特に記
載しない限り、２８°Ｃで２１日間培養し、常法に従っ
て観察したものである。色調の記載については色の標ｊ
４８（日本色彩研究所）によった。

尚、表中の記号は、Ｇ：生育の程度、Ａ：気菌糸の着生
及びその色相、Ｒ：裏面の色相、Ｓ：可溶性色素を意味
する。

（３）生理的性質 生育温度範囲　　　　　　　　１５〜３７°Ｃ至適生育
温度　　　　　　　　２８℃ ゼラチンの液化 脱脂牛乳の凝固　　　　　　　陽　性 脱脂牛乳のペプ）・ン化　　　　陽　性硝酸還元作用　
　　　　　　　陰　性 スターチの加水分解　　　　　陰　性 メラニン様色素の生成 生育温度は各温度（５，１０，１，５，２０，２５，２
８，３０゜３３．３７，４０，４５，５０°Ｃ）で７〜
２１日目までの観察結果。ミルクムこ対する作用は３７
℃で３〜２１日までの観察結果。それ以外は特に指摘の
ない限り２８°Ｃで２週間後の観察結果を示す。

（４）炭素源の資化性（プリドハム・ゴドリーブ寒天培
地、２８℃培養） Ｌ−アラビノース　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　　＋ Ｄ−グルコース　　　　　＋ Ｄ−フラクトース　　　　＋ シュークロース　　　　　＋ イノシトール　　　　　　＋ ラフ１ノース　　　　　　± Ｄ−マンニト−ル　　　　＋ スターチ　　　　　　　　＋ 注）＋；利用して生育する。

±：利用性が疑わしい。

（５）　　菌体成分 ヘンカー（Ｂｅｃｋｅｒ）らの方法（Ｂｅｃｋｅｒ、　
Ｂ　ｅｔａｌ、、　　八ｐｐ１．　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏ
ｌ、、↓ヨ２．　４２１−４２３（１９６４）；八ｐｐ
１．　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、　　１３．　２３６−
２４３（１９６５））　　及びルシュハリエらの方法（
Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ、　Ｍｐｅｔ　ａｌ、＋　ｐ、
２２７−２３８　ｉｎ　Ｄｉｅｔｚ、　Ａ　ｅｔ　ａｌ
、、ｅｄ。

Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ　Ｔａｘｏｎｏｍｙ、　ＳＩ
Ｍ　５ｐｅｃｉａｌ　ｐｕｂｌ−ｉｃａｔｉｏｎ　Ｎｏ
、６　（１９８０））に従い、菌体成分の分析を行った
。結果は以下の通りである。

■　細胞壁タイプ ■　全細胞糖成分 ■　ミコール酸 検出されず これらのことから、本菌株の細胞壁タイプは■型である
と判断される。

以上述べたＮＳ−１０８５に株の性質をパーシーズ・マ
ニュアル・オブ・デターミネイテブ・バタテリオロジー
（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒ
ｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版、
　１９７４年及びその他の文献によって検索した。本菌
株は、 （１）　　ダラム陽性の好気性放線菌で気菌糸及び基生
菌糸上に比較的小数の胞子鎖を形成する。

（２）気菌糸及び本生菌糸は殆ど断裂しない。

（３）細胞壁タイプは■型で、全細胞糖類としてガラク
トースとアラビノースを特徴的に含む。

又、ノカルドミコール酸は検出されない。

これらの性質及び上述したその他の性質より、本菌株を
ミクロポリスポラ属に属する菌株であると判断し、ミク
ロポリスボラ（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐｏ−ｒａ）　ｓ
ｐ、ＮＳ−１０８５に株と称した。本菌株は通商産業省
工業技術院微生物工業技術研究所に昭和６０年１１月２
日に受託され、ＦＥＲＭ　Ｐ−８５０８として寄託され
ている。

一般にミクロポリスポラ属菌はその性状が変化しやすく
、自然的にまた変異剤によって変異を起こし得る。例え
ばｘ’＋？、ガンマ−線、紫外線等の放射線の照射、卯
胞子分離、種々の薬剤を含有する培地での人工的変異手
段で得られる多くの変異株、或いは自然に得られる突然
変異株等であっても、上記の菌学的性状又は下記に示し
た菌学的性状との比較において実質的に別種とするに足
らず、しかも当該オリゴ糖脂肪酸エステルを生産する性
質を有するものば、ずべて本発明方法に利用し得る。

当該物質生産菌の培養に用いられる培地は、木菌が利用
し得る栄養源を含むものなら、液状でも固状でも可であ
るが、大量に処理するには液体培地を用いるのがより適
当である。培地には当該物質生産菌が同化し得る炭素源
、消化し得る窒素源、無機物、微量栄養素が適当に配合
される。

炭素源としては、例えばブドウ糖、乳糖、ショ糖、麦芽
糖、デキストリン、澱粉、グリセリン、マンニトール、
ソルビトール、脂肪酸、油脂類、ｎ−パラフィン、その
他が、窒素源としては肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母
、大豆粉、コーン・スチープ・リカー、ペプトン、綿実
粕、尿素、アンモニウム塩（例えば硫酸アンモニウム、
塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウ
ム）、その他が用いられる。さらにナトリウム、カリウ
ム、カルシウム、マグネシウムなどを含む塩類や鉄、マ
ンガン、亜鉛、コバルト、ニッケルなどの金属塩類、リ
ン酸、ホウ酸などの塩類や、酢酸、プロピオン酸などの
有機酸の塩類が適宜用いられる。その他にアミノ酸（例
えばグルタミン酸、アスパラギン酸、アラニン、リジン
、メチオニン、プロリンなど）、ペプチド（例えばジペ
プチド、トリペプチドなど）、ビタミン類（例えばビタ
ミンＢｌ＋　８２１　Ｂ１２１０、ニコチン酸など）、
核酸類（例えばプリン、ピリミジン、その他誘導体など
）などを含有させても良い。その他に培地のｐＨを調節
する為に酸やアルカリ類、緩衝剤等を加え、或いは消泡
の口約で油脂類や界面活性剤等を適当量加えることもあ
る。

培養の手段は静置培養でも振の培養でも又は通気攪拌培
養法等によっても良いが、当該物質の生産には液体静置
培養によるのが望ましい。

培養の条件は培地の状態、組成、菌株の種類、培養の手
段によって一定しないが、通常２５〜３８℃、望ましく
は２８〜３２℃で初発ρＩＩを中性付近に選択するのが
良い。培養期間も前記の諸条件により一定しないが２０
〜５０日、望ましくは３０〜４０日を要する。

培地物中に産生された物質を採取するには通常の微生物
の培養物より単離する方法が適用される。目的物は主に
菌体及び培地中に含有されるので、培養液を濾過後、目
的物質の抽出を行う。即ち適当な溶剤に対する溶解性及
び溶解度の差、溶液からの析出性及び析出速度の差、種
々の吸着剤に対する吸着親和性の差、２種の液相間にお
ける分配の差などを利用する一般的に用いられる手段に
よって分離、採取、精製される。これらの方法は必要に
よって単独に用いられ、或いは任意の順序に組み合わせ
、また反覆し適用できる。

このようにして得られる物質は薄層クロマトグラフィー
、赤外線吸収スペクトル、ガスクロマトグラフィー、核
磁気共鳴吸収スペク）・ル、マススペクトロメトリーな
どの結果から、オリゴ糖脂肪酸エステルであることがわ
かった。

実施例１ ミクロポリスポラ　エスピー（Ｍｉｃｒｏｐｏｌｙｓｐ
−ｏｒａ　ｓｐ、）ＮＳ−１０８！５に株を用い、ショ
糖３０ｇ／　ＩＶ、、日清０ｒ）Ｏ−Ｐ　（日清製油■
製）　３０ｇ／β、ポリベントン２　ｇ／　ｊ！、食塩
０．５ｇ／βの組成を有する培養培地で２８℃、３５日
間静置培養した。培養終了時の培養液１．５１を濾紙濾
過し、得られた固形分からメタノール４５０ｍ１を用い
、室温にて生産物質を抽出した。更にｎ−ヘキサン１５
０　ｍｌを用い、油相成分を除去した後、ロータリーエ
バポレーターで溶媒を留去し、生産物質２２．５ｇを得
た。

得られた物質は白色結晶で、ヘンゼン；エチルエーテル
：メタノール（８０ニア　＋１０）　／昆液を用いたシ
リカゲル薄層クロマトグラフィーによってｌ？ｆ−０，
１５を示した。又、常温でメタノール、エタノール、ク
ロロポルム及びテＩ・ラヒドロフラン等各種溶媒に溶け
るが、水には不溶であった。

本物質の赤外線吸収スペク）・ルを第】図乙こ示ず。

本物質はアンスロン試薬と反応して青緑色を与えること
、ＩＮ苛性ソーダでケン化した後の水層部をシリカゲル
薄層クロマトグラフィーで調へると、ショ糖よりｌ？、
ｆ値の低い部分にスポットが検出されることなどから、
オリゴ糖脂肪酸エステルであることが証明された。本物
質の脂肪酸とオリゴ糖との結合がエステル結合であるこ
とば、本物質の赤外線吸収スペクトルでの１７１０ｃｍ
−’における吸収及び本物質がアルカリで容易に脂肪酸
を遊離することから確認される。

実施例２ 実施例１の培地中の日清０００−Ｐをオレイン酸に置き
換え、さらに澱粉５０ｇ／　（ｌを用い、実施例１と同
様に培養した。

培養終了時の培養液１，２！をクロロホルム：メチルア
ルコール（１：　１）溶媒で抽出し、ロータリーエバポ
レーターで溶媒を留去した。得られた’）勿質１３．２
ｇをクロロポルム５０ｍ１に？容解し、シリカゲルカラ
ムに吸着せしめた後、クロロホルム：メチルアルコール
（７：　３）にて回収し、目的とするオリゴ糖脂肪酸エ
ステル１］、、８ｇを得た。

実施例３ オリーブ油１０ｇ／β、可溶性澱粉１０ｇ／β、ポリペ
プトン２ｇ／β、食塩０．５ｇ＃！、寒天１０ｇ／７！
の組成を有する培養培地で培養するほかは実施例１と同
様に培養した。

培養終了時の培養液１．５１を遠心分離し、菌体６６．
５ｇ（湿重量）を得た。次いで菌体をエタノールで洗浄
し、生産物質を回収した後、エタノール溶液を濃縮、水
を加えて結晶を生成せしめ、その結晶を濾過回収し、目
的とするオリゴ糖脂肪酸エステル１４．５ｇを得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で得られた生産物質の赤外線吸収スペ
クトルである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ミクロポリスポラ属に属し、オリゴ糖脂肪酸エステルを
   生産する能力を有する放線菌を栄養培地に培養し、菌体
   或いは培地中にオリゴ糖脂肪酸エステルを生産せしめ、
   これを採取することを特徴とする発酵法によるオリゴ糖
   脂肪酸エステルの製造法。