JPS6024189A - 抗生物質１０２４ｓｙ１−ａ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗真菌抗生物質１０２４Ｓ　Ｙ　１−
Ａ及びその製造法に関するものである。

本発明の抗真菌抗生物質１０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａは、
ストレプトバチシリウム属に属する抗生物質１０２４Ｓ
Ｙ１−Ａ生産菌株、例えば、本発明者らによって発見さ
れたストレプトバチシリウム属に属づ−る新規な１０２
４Ｓ　Ｙ　１菌株を栄養培地に好気的に培養し、その培
養物から採取される。ストレブトバヂシリウム１０２４
８　Ｙ　１株は、本発明者らが広島県北西部で採取した
土壌から分離されたもので、その菌学的性状は以下の通
りである。

（１）形態 １０２４８　Ｙ　１株は、顕微鏡下で輪生技がみとめら
れる。成熟した胞子は、３〜１０個の胞子で連鎖をみと
め、胞子の大きさは０．４〜０，５Ｘ　Ｏ０７〜１．０
ミクロン位で、胞子の表面は平滑である。

（２）各種培地における生育状態 色の記載について、［］内に示す標準は、コンテイナー
・コーポレーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎ
ｅｒ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａ　ｍｅｒｉｃ
ａ）のカラー・ハーモニイ・中ニュアル（Ｃｏ１ｏｒ　
ｈａｒｍｏｎｙ　ｍａｎｕａｌ）を用いた。

培養１８日後の状態を記す。

■シュクロース・硝酸塩寒天培地（２７℃培養）発育は
わずかで、その色は無色である。白の気菌糸をうつすら
と着生し、溶解性色素はみとめられない。

■グルコース・アスパラギン寒天培地（２７℃培養） うすオリーブ［１１／２　ｉｅ、　Ｌｉｇｈｔ　０ｌｉ
ｖｅコの発育上に、白〜明るいオリーブ灰あるいは、明
るい茶灰［２ｆｅ、　ＱＯＶｅｒｔ　Ｇ　ｒａＶ　］の
気菌糸を着生する。培養初期に黄色の溶解性色素を産生
ずるが、しだいに退色していく。

■グリセリン・アスパラギン寒天培地（ＩＳＰ−培地５
．２７℃培養） 発育はわずかで、その色は黄味法［２Ｃｂ、１ｖｏｒｙ
　Ｔｉｎｔ　］である。気菌糸は着生しない。

培養初期にわずかに黄色の溶解性色素を産生するが、し
だいに退色していく。

■スターチ・無機塩寒天培地（Ｉ　Ｓ　Ｉ）−培地４゜
２７℃培養） うす黄茶［２ｅｃ、　ｓ　１ｓｃｕｉｔコの発育上に、
白の気菌糸をわずかに着生するが、培養３週間１頃から
生育が進み、かすかに黄味をＬ１３び１＝気菌糸を着生
してくる。培養初期に、わずかに黄色の溶解性色素を産
生ずるが、しだいに退色していく。

■チロシン・寒天培地（ＩＳＰ−゛培地７．２７℃培養
） 発育の色は、うす黄茶［２ｅｃ、　Ｂ　１ｓｃｕｉｔ］
　テ、気菌糸は着生しない。培養初期に、わずかに黄色
の溶解性色素を産生ずるが、しだいに退色していく。

■栄養寒天培地（２７℃培養） 発育の色は、黄茶［２ｉｅ、　Ｌ　１ａｈｔ　Ｍ　ｕｓ
ｔａｒｄＴａｎ］で、気菌糸は、着生しない。培養初期
に、黄茶の溶解性色素が認められるが、しだいに黄色味
がうすれていく。

■イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２゜２７℃培
養） 黄茶［２ｉｅ、　Ｌ　ｉｇｈｔ　Ｍｕｓｔａｒｄ　Ｔ　
ａｎ］の発育上に、白〜明るいオリーブ灰［１Ｆ２Ｏ，
Ｌ　１（ＪｈｔＣ１ｔｒｏｎ　Ｇ　ｒａｙ　］の気菌糸
を着生する。

培養初期に、黄色の溶解性色素を産生ずるが、しだいに
退色する。

■オートミール寒天培地（ＩＳＰ−培地３．２７℃培養
） うすオリーブ［１（ＩＣ，Ｃ１ｔｒｏｎ　］　〜にぶ黄
［１１／２　ｉｃ、Ｌｉｏｈｔ　Ａｎｔｉｑｕｅ　Ｇｏ
ｌｄ　］の発育上に、白っぽい気菌糸をわずかに着生す
る。

培養初期に黄色の溶解性色素を産生ずるが、しだいに退
色していく。

（３）生理的性質 ■生育温度範囲 イースト・麦芽寒天培地（ＩＳＰ−培地２）を用い、２
０°Ｃ１２７℃、　３０’Ｃ、３７℃で試験の結果、３
７℃を除いて、何れの温度でも生育する。最適温度は、
２７６〜３０℃付近と思われる。

■ゼラチンの液化（グルコース・ペプトン・ゼ゛ラチン
培地、２７℃培養） 培養３日目頃から液化が始まり、２１日目において、ま
だ完了しない。その作用は弱い方である。

■スターチの加水分解（スターチ・アスパラギン寒天培
地、及びスターチ・無機塩寒天培地（ＩＳＰ−培地４　
）　、　２７℃培養）氷解性はみとめられない。

■脱脂牛乳の凝固、ペプトン化（脱脂牛乳、３７℃培養
） 培養後、２週間で凝固が完了、その後ペブトン化が始ま
り、２１日目においてまだ完了しない。

その作用は弱い方である。

■メラニン様色素の生成（トリプトン・イースト・ブロ
ス　ｌ５Ｐ−培地１；ペプトン・イースト・鉄寒天琺地
　ｌ５Ｐ−培地６；チロシン寒天培地　ｌ５Ｐ−培地７
．何れも２７℃培養）ペプトン・イースト・鉄寒天培地
において、黒カッ色色素の生成がわずかに認められるが
、チロシン寒天培地、トリプトン・イースト・ブロスに
おいてはメラニン様色素の生成は認められない。

■炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培地　
ｌ５Ｐ−培地９．２７℃培養）Ｄ−グルコース、イノシ
トールをよく利用し、Ｄ−フルクトースを中等度に利用
する。Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、シュクロー
ス。

Ｌ−ラムノース、ラフィノース、Ｄ−マンニトール、セ
ルロースは利用しない。

以上の性状から、本発明者らが見い出し１０２４３Ｙ１
と命名した菌株は、ストレプトバチシリウム属に属して
いることが判った。そして、本菌株は工業技術院微生物
工業技術研究所に微■研菌寄第７１５７号として寄託さ
れている。

以上１０２４８　Ｙ　１株について説明したが、放線菌
の諸性質は一定したものではなく、自然的又は人工的に
容易に変異し得るものであり、本発明で使用しうる菌株
は、ストレプトバチシリウム属に属し、抗生物質１０２
４３　Ｙ　１−　Ａを生産す。菌株をすべて包含するも
のである。

本発明の抗生物質１０２４８　Ｙ　１−△を製造する方
法における培養は、前記菌株を微生物が利用し得る栄養
物を含有する培地で好気的に行なわれる。

栄養源としては、従来ストレプトミセス属およびストレ
プトバチシリウム属の菌の培養に利用されている公知の
ものが使用できる。例えば、炭素源としてグルコース、
澱粉、グリセリン、マルトース、デキストリン、水飴、
糖蜜、大豆油等を使用し得る。窒素源としては大豆粉、
小麦胚芽、肉エキス、ペプトン、コーンステイープリカ
ー、乾燥酵母、カザミノ酸、硫酸アンモニウム、硝酸ソ
ーダ等が使用し得る。その他必要に応じて炭酸カルシウ
ム、食塩、塩化カリ、燐酸塩等の無機塩類を添加するほ
か、菌の発育を助け、抗生物質の生産を促進するような
有機及び無機物を適当に添加することができる。

培養法としては、一般抗生物質生産の場合と同様、液体
培養法、特に深部培養法が最も適している。培養は好気
的条件下で行われ、培養に適当な温度は２５〜３５℃で
あるがより好ましくは２７〜２８℃であり、抗生物質１
０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａの生成は２〜５日で最高に達す
る。

次に培養物から目的の１０２４８　Ｙ　１−　Ａを採取
するには抗生物質のための常法を利用することができる
。

例えば、培養液を濾過して菌体と濾液を分離し、得られ
た濾液から目的物を活性炭に吸着させた後、８０％アセ
トン−水で数回溶出する。菌体はメタノールで数回抽出
する。両液をそれぞれ減圧下に凝縮後１）Ｈ８で酢酸エ
チルに転溶させ、ついでｐＨ２の水層に転溶し、ｐＨ５
に補正後凍結乾燥することにより、黄色シロップ状の物
質を得ることができる。この中には、薄層クロマトグラ
フィー上Ｒｆの大きい順にＡ、Ｂ、Ｃの３物質が存在し
、Ａが主成分である。

以上のようにして得た粗物質をより純化するためには、
例えば、これをメタノールに溶かし、セファデックスＬ
Ｈ−２０（ファーマシア、ファイン。

ケミカル社製）のカラムを通過させ、目的物を含む分画
を集め、減圧下に濃縮乾固する。乾固物をクロロボルム
液としてシリカゲル（シリカゲル６０゜メルク社製）の
カラムを通過させ（溶媒；クロロホルム：メタノール：
水−８：３：１．下層）目的物を含む分画を集めて減圧
濃縮し、乾燥する。

乾燥品をプレパラティブ・シリカゲルＴＬＣ（展開溶媒
、：クロロホルムーメタノールー水（６，５：３．５：
ｌ容比）の混液の下層）によって分離、精製する。かく
して無色で非晶性フィルム状の純粋な１０２４８　Ｙ　
１−　Ａが得られる。

以下に、本発明の１０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａの理化学的
性状を配す。

１、外　観：無色の非晶性フィルム状 ２．含有する元素：炭素、水素、窒素、酸素３、分　子
　式：　Ｃ２Ｇ　Ｈ３８Ｎ’２０４（推定）４、分　子
　量：３７０（マス・スペクトルＭ”　３７０ｍ／ｚ　
） ５、Ｒｆ　値：　０．４９　［クロロホルム−メタノー
ル−水（６，５：　３．５：　ｌ　）下層〕 メタノール） ７、紫外線吸収スペクトル：第１図に示す通り門＠ＯＲ である。λ　ｎｍ（ε）　：　２１３ ｍＱχ （４２０９）　、　３１３ｓｈ　、（３４９）　。

０．１Ｎ）４α λｍａχ　（ε）　：　２１４ （４１２６）　、　２７９ｓｈ　（２７８＞　。

３１５　（３３３）　。

０、ｌＮＮｃＯＨ−ＭｅＯＨ λ　（ε）　：　２３６ ｍａχ （４０１５）に巨大吸収を示す。

８、赤外線吸収スペクトル： 第２図に示す通りである。その 主要吸収帯はクロロホルム溶液 中、３４００〜３２００．２９２０．２８６０゜１７０
０、１６４０．１４６０．１４００．１３７０゜１２１
０、１０５０ｃｍ−１である。

９、溶　解　性：メタノール、クロロホルム。

ピリジンに易溶、酢酸エチル。

アセトンに可溶、ベンゼンにや や難溶、エーテル、ｎ−ヘキサ ン及び水に不溶である。

１０、呈色反応　：ニンヒドリン反応、フルオレサミン
及びヨード反応には陽性 である。

本発明の抗生物質１０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａは、塩酸、
硫酸、などの鉱酸及び酢酸などの有機酸を含めて、薬学
的に無毒な酸と酸付加塩を形成し、また有機酸１例えば
酢酸の無水物と反応させることによってエステルを生成
する。本発明は、これら酸付加塩やエステルも包含する
ものである。

本発明の抗生物質は、糸条菌及び酵母に優れた抗菌力を
示し、毒性は、Ｌ　Ｄ　ｏ　（ｍ１ｃｅ）　：　３０ｍ
！Ｊ／Ｋｇ（ｉ、ｐ、）であるので、真菌症治療剤とし
ての有用性が期待される。

以下に本発明を実施例により具体的に説明する。

なお、％はすべで重量基準である。

実施例１ １．０％シュクロース、０．２％イースト抽出物（ｐｌ
−１７，０）を含む培地に、ストレプトミセス１０２４
８Ｙ１株（微工研菌寄喝グ１ｒ’１号）を接種し、往復
振盪ｌ１ｌ（振幅７ｃｍ、１８０ストロ一ク／分）によ
り２７℃で１８時間培養を行い種菌とした。

この種菌を、１．５％可溶性澱粉、１％グルコース、２
．０％大豆粉、０．５％乾燥酵母（エビオス。

田辺製薬製）、０．２５％ＮａＣＲ，０，３％Ｃａ　Ｇ
。

３　、　０．０００８％Ｍｎ　ＣＲｚ　・４　Ｈ２０，
０，０００７％Ｃｕ　ＳＯ４・５Ｈ２０，０，０００２
％ＺｎＳＯ４・７　Ｈ２０，０，０００１％ＦｅＳＯ４
・７Ｈ２０（ｐＨ７，６滅菌前）からなる培地をそれぞ
れ１０Ｍずつ入れた振盪フラスコ２００個にそれぞれ接
種し、往復振盪薇（振幅７ｃｍ、　１８０ストロ一ク／
分）により２７℃で６０時間培養した。

培養後を濾過して菌体と濾液に分け、得られる濾液１６
０七〇＋＋１２　（１）Ｈ６，４＞には１３０ｇの活性
炭を加えて１時間撹拌した後、活性炭を濾取した。この
活性炭を３００（７の８０％の水性アセトン溶剤で３回
抽出した。菌体は４７００７のメタノールで２回抽出し
た。両袖出液は各々減圧下に濃縮し、ｐＨ８，０で３５
０１１１１＋の酢酸エチルで３回抽出し、ついでｐｌ−
１２，０で水（１５０＃１１２×３）に転溶させ、ｐＨ
５に調整後に凍結乾燥した。かくして黄色シロップ状の
物質（本発明の目的物を含む）が得られた。

更に精製のため、上記の粗黄色シロップを１５威のメタ
ノールに溶かし、セファデックスＬｌ−１２０のカラム
（３３，５Ｘ　２．３ｃｍ　）に通し、メタノールで溶
出し、１分画を５威とし、１００個分画した。Ｎｏ。

４〜１５の分画を減圧下に濃縮し、黄色のシロップを得
た。このシロップを２０ｄのクロロホルムに溶かし、３
２．５Ｘ　２．５ｃｍのシリカゲルカラムに通し、クロ
ロホルム−メタノール−水（８：３：１（下層））を用
い溶出を行い、１分画５ｄ宛の分画を集めた。そして、
ＮＯ，１２〜２２の分画を集めて乾燥し、乾燥物をシリ
カゲル６０Ｆ　”２５４のプレパラティブＴＬＣにかけ
、クロロホルム−メタノール−水（６，５：　３．５：
　ｉ　（下層））の溶媒系で分離・精製することにより
、無色のフィルム状物質（４ｏｍｙ）として本発明の１
０２４８　Ｙ　１−　Ａを得た。

かくして得られた１０２４８　Ｙ　１−　Ａの抗菌スペ
クトルは、第１表に示した通りであった。なお、最小発
育阻止濃度はグルコース栄養寒天培地で３７℃。

ポテトシュークローズ寒天培地で２７℃で測定したもの
である。

（以下余白） 第１表 注）　培　地１　：　グリコース栄養寒天培地。

培　地２　：　ポテート・シュクロース寒天培地。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明の抗生物質１０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａ
のメタノール中、０．１％塩酸−メタノール中及び０．
１％苛性ソーダ−メタノール中での紫外線吸収スペクト
ル曲線を、第２図は、クロロホルム中で測定した赤外線
吸収スペクトル曲線を示す。 特許出願人　帝　人　株　式　会　社 中　村　昭　四　部

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、無色非晶性フィルム状物質で、比旋光度が［α］　
   −１２，５°　（Ｃ＝　０．８．メタノール）、シリカ
   ゲル６０Ｆ２５４薄層クロマトグラフィーにおけるＲｆ
   値が０．４９　（展開溶媒クロロホルム−メタノール−
   水（６，５：　３，５：　１　）下層）であり、メタノ
   ール、クロロホルム、ピリジンに易溶、酢酸エチル、ア
   セトンに可溶、ベンゼンにやや難溶。 エーテル、ｎ−ヘキサン、水に不溶であり、ニンヒドリ
   ン反応、フルオレサミン反応、ヨード反応が陽性であり
   、紫外線吸収スペクトルが２　ｔ’１ｅＯＨｎｍｍ八Ｉ へε）：　２１３（４２０９）、３１３ｓｈ、（３４９
   ）；７８）　、３１５　（３３３）　：　λ”ＩＮ”０
   Ｈ−”０Ｈ（ε）　：　２３６ＴｒＩａχ （４０１５）に極大吸収を示し、赤外線吸収スペクトル
   の主要吸収帯は、クロロホルム溶液中、３４００〜３２
   ００．２９２０，２８６０，１７００，１６４０，１４
   ６０，１４００，１３７０、１２１０．１０５１０５Ｏ
   ’である抗生物質１０２４８　Ｙ　１−Ａ及びその酸付
   加塩またはそのエステル。 ２、ストレプトミセス属に属する抗生物質１０２４ＳＹ
   １−Ａ生産菌株を栄養培地で好気的に培養し、培養物か
   ら抗生物質１０２４Ｓ　Ｙ　１−　Ａを採取することを
   特徴とする、抗生物質１０２４８　Ｙ　１−Δの製造法
   。