JPS62175193A - 光学活性４−ヒドロキシシクロペンテノン類の生化学的製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、（Ｈ）式で示される光学活１１Ａ４−ヒドロ
キシシクロベンテノン類の生化学的製造方法に関する。

　更に詳しくは、（Ｒ）体の４−ヒドロキシシクロベン
テノン類の生化学的製造法に関する。

従来技術および問題点 前記ＤＩ）式で示される４−ヒドロキシシクロベンテノ
ン類、特にその（Ｒ）体はノ′ｆ薬、香１パ［あるいは
医薬品などの中間体として有用であるが、特にプロスタ
グランディン’８ｆ：ＪＥ’体の中間体として極めて重
要であり、とりわげ置換ＷＲがアリル基である４−ヒド
ロキシ−２−アリル−２−シクロベンテノンは特開昭５
８−４１８３６号公報Ｇこ記載されているように、抗血
小板凝集作用など得れた薬理作用を有するチアプロスタ
グランディン類への中間体としζ極めて重要な化合物で
あり、そのためには（Ｒ）体含有率が９７％以」二の高
い光学純度で該化合物を得ることが必要とされる。

従来、本発明の４−ヒドロキシシクロベンテノン類に類
似する化合物を得るための微生物酵素を用いた不斉加水
分解法が知られている。（特開昭６０−１２９９１号） しかし、この微生物酵素を用いた不斉加水分解法は、複
雑な工程や高価な試薬を必要としない点において傍れた
方法であるが、微生物酵素の光学選択性が必ずしも厳格
ではないため、（Ｒ）体含有率９７％以上の光学純度の
光学活性４−ヒドロキシシクロベンテノン類を工業的に
有利な収率で得ることは難しく、実用的製造方法とはな
りがたかった。　即ち、光学選択性が厳格でない微生物
酵素を用いて（Ｒ）体含有率が９７％以上の光学活性な
４−ヒドロキシシクロベンテノン類を得るためには不斉
加水分解反応時の加水分解率を低く抑える必要があった
。　そのため、得られる光学活性な４−ヒドロキシシク
ロベンテノン類の（Ｒ）体含有率が９７％であることと
工業的に有利な収率で製造できるという二つの要求を同
時に満たずことは不可能であった。

問題解決の手段 本発明者らは、（Ｒ）体含有率が９７％以上の光学純度
が高い光学活性４−ヒドロキシシクロベンテノン類を工
業的にも有利な収率で製造出来る光学活性４−ヒドロキ
シシクロベンテノン頬の生化学的製造法を見い出すべく
研究を重ねた結果、（Ｉ）式で示されるラセミ体のシク
ロベンテノンエステル類を微生物酵素を用いて不斉加水
分解し、（Ｈ）式の（Ｒ）体の４−ヒドロキシシクロベ
ンテノン類を９０％以上含有する光学活性４−ヒドロキ
シシクロベンテノン類を生成せしめ、これを単離取得し
た後、（Ｖ）式で示される光学活性なシクロベンテノン
エステル類に転換し、この光学活性なシクロベンテノン
エステル類を微生物酵素を用いて再度不斉加水分解する
ことにより、（Ｒ）体を９７％以上含有する光学純度の
高い４−ヒドロキシシクロペンテノン類を収率良く製造
できる事を見出し、本発明を完成するに至った。

以下、本発明の詳細な説明する。

本発明において原料として用いられる前記（Ｉ）式で示
されるラセミ体のシクロベンテノンエステル類を構成す
るラセミ体の４−ヒドロキシシクロベンテノン類として
は、以下の化合物が例示される。

２−エチル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノン、 ２−ｎ−プロピル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテ
ノン、 ２−イソプロピル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテ
ノン、 ２−ｎ−ブチル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノ
ン、 ２−イソブチル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノ
ン、 ２−ｎ−ペンチルー４−ヒドロキシ−２〜シルロベンテ
ノン、 ２−イソペンチル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテ
ノン、 ２−ｎ−ヘキシル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテ
ノン、 ２−ｎ−ヘプチル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテ
ノン、 ２−アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノン、 ２−プロパギル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノ
ン、 ２−（２−シス−ブテニル）−４−ヒドロキシ−２−シ
クロベンテノン、 ４−ヒドロキシ−２−（ω−ブチニル）−２−シクロベ
ンテノン、 ２−（２−−シス−ペンテニル）−４−ヒトロギシー２
−シクロベンテノン、 ２−（２−１−ランス−ペンテニル）−１−ヒドロ二）
−シー２−シクロベンテノン、 ２−（３−シス−ヘキセニル）−４−と１・′ロキシー
２−シクロベンテノン、 ２−（２−ペンチニル）−４，−ヒドロキシ−２−シク
ロペンテノン。

これらの化合物のうぢ、特に有用性の高いものは、２−
アリル、２−プロパルギル、ｌ−（２−シス−ブテニル
）、２−（ω−ブチニル）、２−（２−シス−ペンテニ
ル）、　　２−（２−トランス−ペンテニル）、：２−
（３−シス−ヘキセニル）および２−　（２−ペンチニ
ル）−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノンである。

また、もう一方の構成成分である脂肪族カルボン酸類と
しては、例えば以下の化合物が例示される。

酢酸、プロピオン酸、醋酸、カプロン酸、カプリル酸、
ラウリン酸、パルミチン酸、クロル酢酸、ジクロル酢酸
。

かかるラセミ体の４−ヒドロキシシクロベンテノン類と
脂肪族カルボン酸類とのエステル化反応は、エステル製
造の常法が適用され、ラセミ体の４−ヒドロキシシクロ
ベンテノン類に脂肪族カルボン酸類の無水物あるいは脂
肪族カルボン酸類ハライドを溶媒の存在もしくは非存在
下に触媒を用いて反応させることにより実施される。

この反応において、溶媒を使用する場合、その溶媒とし
ては例えばテトラヒドロフラン、エチルエーテル、アセ
トン、メチルエチルケトン、トルエン、ベンゼン、クロ
ルベン、ジクロルメタン、ジクロルエタン、クロロホル
ム、四塩化炭素、ジメチルホルムアミド、ヘキサン等の
脂肪族もしくは芳香族炭化水素、エーテル、ハロゲン化
炭化水素等の反応に不活な溶媒の単独または混合物が挙
げられる。その使用量については特に制限なく使用する
ことができる。

反応に用いる脂肪族カルボン酸類は原料であるラセミ体
の４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノン類に対応して
１当量以上必要であり、上限については特に制限はない
が、好ましくは１〜４当世である。

触媒としては、例えばトリエチルアミン、トリーｎ−ブ
チルアミン、ピリジン、ピコリン、炭酸す１〜リウム、
ナトリウムメチラート、炭酸水素カリウム等の有機ある
いは無機塩基性物質が挙げられる。その使用量は特に制
限されないが、通常ラセミ体の４−ヒドロキシシクロベ
ンテノン類に対して１〜５当量である。溶媒として有機
アミンを使用する場合は、該アミンが触媒として作用す
ることもある。また、トルエンスルホン酸、メタンスル
ホン酸、硫酸等の酸類を触媒として用いることもできる
。

反応温度は通常−２０〜１５０　’Ｃであるが、好まし
くは、−］０〜１２０°Ｃの範囲である。反応時間につ
いては特に制限はない。

このような反応によって、（Ｉ）弐で示されるラセミ化
のシクロベンテノンエステル類が容易に、かつ高収率で
得られ、これらは通常の分離手段、例えば抽出、分液、
濃縮、蒸留等により反応混合物から容易に単離すること
かできる。

本発明で用いられるエステラーゼを生産する微生物とし
ては、（Ｔ）式で示されるラセミ体のシクロベンテノン
エステル類に作用して、（ＴＩ＞で示される（Ｒ）体の
シクロベンテノン類を優先的に生成しうる能力を有する
エステラーゼを生産する微生物であればよく、特に限定
されるものではない（本発明におけるエステラーゼとは
リパーゼを含む広義のニスラーゼを意味する）。このよ
うな微生物の具体例としては、例えば以下の属に属する
微生物が挙げられる。

シュードモナス属　　　（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓ
ｐ、）アルスロバクター属　（八ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ　ｓｐ、）クロモバクテリウム属（Ｃｈｒｏｍｏｂａ
ｃｔｅｒｉｕｍ　ｓｐ、）アルカリ土類金属　　（Δｌ
Ｃａ１１．（：ｅｎｅＳ　５ｐ−）これらの微生物起源
のエステラーゼの中には市販のものがあり、容易に入手
することが可能である。

市販のエステラーゼの具体例としては、シュードモナス
属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｕｌｏｒｅｓｃｅｎｓ
）のリパーゼ（リパーゼ“Ｐ”；人寄製薬製、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍｉｃａ　　ｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ
誌４８８巻３５３〜３５８頁）、アルスロバクタ−・ウ
レアファシェンス・ノブ・バール（八ｒｔｈｒｏｂａｃ
ｔｅｒ　ｕｒｅａｆａｓｉｅｎｓ　ｎｏｖ、ｖａｒ、）
のリパーゼ（新日本化学調製）、クロ干バクテリウム・
ヒスコザム（Ｃｂｒｏｍｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｖｉｓ
ｃｏｓｕｍ）のリパーゼ（リパーゼ“Ｌ　Ｐ”；　東洋
醸造製、八ｇｒｉｃａｌｔｕｒａｌ　　ａｎｄ　　Ｂｉ
ｏｌｏＨｉｃａｌ　　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　　ａ、ｔ　
　３７巻９９９〜１００５頁）、アルカリ土類金属のリ
パーゼ（リパーゼ”　Ｐ　Ｌ　”　；名状１産業製　Ａ
（Ｂｒｉｃａｌｔｕｒａｌａｎｄ　［ｌｉｃ、ｌｏｇｉ
ｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ誌４６巻、１１．５９〜１
１６４頁及び同誌４６巻１７４３〜１７５０頁）等が挙
げられる。

本発明の方法を実施するに際し、該シクロベンテノンエ
ステル類の不斉加水分解は、上記微生物を培養した培養
液、培養液から分離した菌体、エステラーゼを含有する
培養濾液、あるいは各種酵素分離法によって菌体または
培養濾液から分離した粗製エステラーゼ、生成エステラ
ーゼ及びエステラーゼ含有抽出液または濃縮液を含有す
る水溶液と該ラセミ体のシクロベンテノンエステル類を
混合し、攪拌または振盪することにより行なわれる。ま
た、固定化菌体あるいは固定化エステラーゼも使用する
ことができる。

該ラセミ体のシクロベンテノンエステル類の不斉加水分
解反応を行なう条件としては、反応温度は１０〜７０°
Ｃが適当であり、通常は２０〜５０°Ｃである。

反応中のｐＨは好アルカリ性菌の培養液やアルカリ性エ
ステラーゼではｐ１１８〜１１．好アルカリ性でないエ
ステラーゼではｐＨ５〜８が好ましい。また、加水分解
反応によって生成する有機カルボン酸を中和し、反応中
のｐｌ＋を一定に保つために緩衝液の使用が好ましく、
燐酸ナトリウム、燐酸カリウム等の無機酸塩の緩衝液、
酢酸すトリウム、クエン酸す）　ＩＪカラムの有機酸塩
の緩衝液を使用することができる。

基質である該ラセミ体のシクロベンテノンエステル類の
使用濃度は反応液に対し０．１〜５０重量％であり、好
ましくは０．５〜２５重量％である。使用するエステラ
ーゼの濃度は、基質の重量に対して０．１〜５０重量％
である。

ここで不斉加水分解反応は、生成する４−ヒドロキシシ
クロベンテノン類の（Ｒ）体含有率９０％未満とならな
い範囲で止めることが肝要で、通常は加水分解率が４０
〜６０％の範囲に達するまで行なわれる。

反応終了後、反応液から加水分解生成物及び加水分解残
を分離するためには、加水分解液を例えばメチルイソブ
チルケトン、酢酸エチル、エチルエーテル等の溶媒によ
り抽出処理し、有機層から溶媒を留去した後、濃縮残渣
を更に蒸留するか、カラムクロマトグラフィーで処理す
る等の方法により加水分解生成物である（Ｒ）体を９０
％以」−含有する光学活性な４−ヒドロキシシクロベン
テノン類と加水分解残である未反応のシクロベンテノン
エステル類をそれぞれ分離することができる。

次に、ここに得られた（Ｒ）体を９０％以上含有する光
学活性な４−ヒドロキシシクロベンテノン類を、前記し
たラセミ体の４−ヒドロキシシクロベンテノン類のエス
テル化と同様にして、エステル化し、光学活性なシクロ
ベンテノンエステル類へと誘導する。　この光学活性な
シクロベンテノンエステル類を再び、前記のラセミ体の
シクロベンテノンエステル類の不斉加水分解反応と同様
の条件で微生物エステラーゼを用いて不斉加水分解する
。　この時の不斉加水分解反応は生成する４−ヒドロキ
シシクロベンテノン類の（Ｒ）体含有率が９７％未満と
ならない範囲で止められるが、通常は、加水分解率が７
０〜９５％に達するまで行なわれる。

反応終了後は、前記とまったく同様にして反応液から加
水分解生成物及び加水分解残の分離を行ない、ここに、
（Ｒ）体の含有率か９７％以」二の光学活性な４−ヒド
ロキシシクロベンテノン類を取得する。

次に、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、本
発明はこれらによって限定されるものではない。

実施例１ ラセミ体の２−アリル−４−アセトキシ−２−シクロベ
ンテノン６８．６ｇ、アルスロハククー属リパーゼ（新
日本化学製）１４０ｗ及び０．　１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ
６、５）　２８’Ｏｇを混合し、４５　’Ｃで２０時間
激しく攪拌しつつ不斉加水分解反応を行なった。　　反
応終了時の加水分解率は４３．４％であった。　なお、
加水分解率の測定はガスクロマトグラフィー分析により
行なった。

反応終了後、反応液に芒硝を加え、メチルイソブチルケ
トンで抽出を行なった。抽ａｉｔａを濃縮し、濃縮残渣
を酢酸エチル＝トルエン−３：５（重量比）の混合溶媒
にてカラムクロマト精製を行ない、加水分解残渣である
２−アリル−４−アセトキシ−２−シクロベンテノン３
８．８ｇと加水分解生成物である２−アリル−４−ヒド
ロキシル２−シクロベンテノン２２．４ｇを得た。ここ
で得られた２−アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベ
ンテノンを（＋）−α−メトキシ−α−（トリフロロメ
チル）−フェニル酢酸のエステルとした後、高速液体ク
ロマトグラフィーにてジアステレオマーを分離し、光学
異性体比を測定した結果、（Ｒ）体含有率は９１．８％
であった〔Ｒ体：３体−９１．８：８．２）。　　ここ
で得られた２−アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベ
ンテノン２２、４ｇをメチルイソブチルケトン溶炭解し
、無水酢酸１．８．８ｇ及び硫酸０．０９ｇを加え、４
０°Ｃで３時間攪拌し、アセチル化反応を行なった。反
応後、反応液に水１００ｇを加えて抽出分離し、水溶性
成分を除去し、メチルイソブチルケトン溶液を回収した
。このメチルイソブチルケトン溶液を濃縮し、濃縮残渣
である２−アリル−４〜アセトキシ−２−シクロベンテ
ノン２９。

２ｇを得た。ここに得られた２−アリル−４−アモトキ
シ−２−シクロベンテノン２９．２ｇとアルスロバクタ
−属リパーゼ（新日本化学製）６０■及び０．１Ｍ燐酸
緩衝液１００ｇを混合し、４５℃で２４時間激しく攪拌
しつつ、不斉加水分解反応を行なった。反応終了時の加
水分解率は７３％であった。反応終了後、反応液に芒硝
を加え、メチルイソブチルケＩ・ンで抽出を行なった。

以後、前記と同様にして？ｍ縮、カラムクロマトグラブ
イ−精製を行ない、加水分解生成物である２−アリ）’
ｖ−４．−ヒ）−ワキシー２−シクロベンテノン１６。

３ｇを取得した。ここで得られた２−アリル−４−ヒド
ロキシ−２−シクロベンテノンにつき、前記と同様にし
て、光学異性体比を測定した結果、（Ｒ）体含有率は９
８．５％であった〔Ｒ体＝Ｓ体＝９８．５：１．５）。

　また、収率は６１％であった。（ここで、収率とは原
料として用いたラセミ体の２−アリル−４−アセトキシ
−２−シクロベンテノン、中の（Ｒ）＝２−アリル−４
−アセトキシ−２−シクロベンテノンに対する製造され
た（Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベ
ンテノンのモル比を意味する。）参考例 ラセミ体の２−アリル−４−アセトキシ−２−シクロベ
ンテノン６８．６ｇ、アルスロバクタ−属リパーゼ（新
日本化学型）　１４０■及び０．１Ｍ燐酸緩衝液２８０
ｇを混合し、４５℃で５時間激しく攪拌しつつ不斉加水
分解反応を行なった。

以後、実施例１と同様にして加水分解生成物である２−
アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベンテノン］、５
．４ｇを単離した。　得られた２−アリル−４−ヒドロ
キシ−２−シクロベンテノンにつき実施例１と同様にし
て、光学異性体比を測定した結果、（Ｒ）体含有率ば９
３．５％であった〔９体：８体−９３，５：６．５）。

　また、収率ば５５％であった。

実施例２〜４ ラセミ化の２−アリル−４−アセトキシ−２−シクロベ
ンテノン３０．０ｇ、アルスロバクタ−属のリパーゼ０
．２４ｇ及び０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６，５）　　１
００　ｇを混合し、４０℃で激しく攪拌しつつ不斉加水
分解反応を行なった（加水分解率４２．０％）。　反応
終了後、実施例１と同様の操作を行ない、加水分解生成
物である２−アリル−４−ヒドロキシ−２−シクロベン
テノン９゜６７ｇ（９体：８体−９２，５：１．５）を
得た後、２−了りルー４−アセトギシー２−シクロベン
テノン（収１１２．５ｇ）へと誘導した。ここに得られ
た２−アリル−４−アセ１−キシ−２−シクロベンテノ
ン１ｇと表１に記載の各リパーゼ及び０．１．Ｍ燐酸緩
衝液（ｐＨ６，５）１０　ｇを混合し、激しく攪拌しつ
つ、４０℃で８時間、不斉加水分解反応を行なった。以
後、実施例Ｉと同様にして、光学活性２−アリル−４−
ヒドロキシ−２−シクロベンテノンを取得し、表１の結
果を得た。

＼＼、 ゛≧へヘミ 表　　　１ 実施例５ ラセミ体の２−プロパルギル−４−アセトキシ−２−シ
クロベンテノン６９．０ｇ、シュードモナス属リパーゼ
（人寄製薬製）３００■および０゜１Ｍ燐酸緩衝液（ｐ
Ｈ６，５）　２８０　ｇを混合し、３０℃で２０時間激
しく攪拌しつつ不斉加水分解反応を行なった。反応終了
時の加水分解率は５５％であった。なお、加水分解率は
ガスクロマトグラフィー分析により行なった。反応終了
後、反応液に芒硝を加え、メチルイソブチルケトンで抽
出を行なった。抽出液を濃縮し、？農縮残渣を酢酸工Ｉ チル：トルエン−３：５　（重量比）の混合溶媒にてカ
ラムクロマト精製を行ない、加水分解残渣である２−プ
ロパルギル−４−アセトキシ−２−シクロベンテノン３
０．７ｇと加水分解生成物である２−プロパルギル−４
−ヒドロキシ−２−シクロベンテノン２８．２！ｇを得
た。ここで得られた２−プロパギル−４−ヒドロキシ−
２−シクロベンテノンを１０ｍｇ採取し、　（＋）−α
−メトキシ−α−（トリフロロメチル）−フェニル酢酸
のエステルとした後、高速液体クロマトグラフィーにて
ジアステレオマーを分離し、光学異性体比を測定した結
果、（Ｒ）体含有率は９０．５％〔９体：８体−９０，
５：９．５）であった。

更に、２−プロパル−４−ヒドロキシ−２−シクロベン
テノン２８；２ｇをメチルイソブチルケトン３０ｇに熔
解し、無水酢酸２４．０ｇ及び硫酸０．１１ｇを加え、
４０℃で３時間溶解し、アセチル化反応を行なった。反
応後、反応液に水１００ｇを加えて抽出分離し、水溶性
分を除去し、メチルイソブチルケトン溶液を回収した。

このメチルイソブチルケ１−ン溶液を濃縮し、濃縮残渣
である２−プロパルギル−４−アセトキシ−２−シクロ
ベンテノン３４．７ｇを得た。ここに得られた２−プロ
パルギル−４−アセトキシ−２−シクロベンテノン３４
．７ｇとシュードモナス属リパーゼ（人寄製薬製）１７
０Ｉｎｇ及びＯ，１，Ｍ燐酸緩衝液１００ｇを混合し、
３０℃で２４時間激しく攪拌しつつ、不斉加水分解反応
を行なった。反応終了時の加水分解率は７３％であった
。反応終了後、反応液に芒硝を加え、メチルイソブチル
ケＩ・ンで抽出を行なった。以後、前記と同様にして濃
縮、カラムクロマトグラフィー精製を行ない加水分解生
成物である２−プロパルギル−４〜ヒドロキシ−２−シ
クロベンテノン１９．３ｇを取得した。

ここで得られた２−プロパルギル−４−ヒドロキシ−２
−シクロベンテノンにつき、前記と同様にして、光学異
性体比を測定した結果、Ｒ休：Ｓ体＝９９．ｓｈｏ、５
てあった。また、収率は６８゜５％であった。（ここで
、収率とは原料として用いたラセミ体の２−プロパルギ
ル−４−アセトキ９　？ シー２−シクロベンテノンに含まれる（Ｒ）２−プロパ
ルギル−４−アセトキシ−２−シクロベンテノン対する
製造された（Ｒ）−２−アリル−４−ヒドロキシ−２−
シクロベンテノンのモル比を意味する。） 実施例Ｇ〜８ ラセミ体の２−プロパルギル−４−アセトキシ−２−シ
クロベンテノン３０．０ｇ、シュードモナス属のリパー
ゼ２００■および０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６，５）　
　１００　ｇを混合し、４０°Ｃで激しく攪拌しつつ不
斉加水分解反応を行なった（加水分解率５３．５％）。

反応終了後、実施例５と同様の操作を行ない、加水分解
生成物である２−プロパルギル−４−ヒドロキシ−２−
シクロベンテノン］１．６ｇ（Ｒ体＝Ｓ体−９１，０：
９゜０を得た後２−プロパルギル−４−アセ１ヘキシ〜
２−シクロベンテノン（収ｆｆ１１４．６ｇ）へト誘導
−した。ここに得られた２−プロパルギル−４−アセト
キシ−２−シクロベンテノン１ｇと表２に記載の各リパ
ーゼ及び０．１Ｍ燐酸緩衝液（ｐＨ６。

５）１０ｇを混合し、激しく攪拌しつつ、４０°Ｃで８
時間、不斉加水分解反応を行なった。以後、実施例５と
同様にして、光学活性２−プロパルギル−４−ヒドロキ
シ−２−シクロベンテノンヲ取得し、表２の結果を得た
。

表　　　２ 完 手続補正書（自発） 昭和６１年６月３０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （ I ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒ′はハロゲンで置換されていてもよいアルキ
   ル基、アルケニル基を、Ｒは炭素数１〜７の直鎖アルキ
   ル基、アルケニル基、アルキニル基を示す。）で示され
   るラセミ体のシクロペンテノンエステル類を微生物酵素
   を用いて不斉加水分解し、（II）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （式中、Ｒは前記と同じ意味であり、※印は不斉炭素を
   示す。）で示される４−ヒドロキシシルロペンテノン類
   の（Ｒ）体を９０％以上含有する光学活性な４−ヒドロ
   キシシルロペンテノン類を生成せしめ、この（Ｒ）体を
   ９０％以上含有する光学活性な４−ヒドロキシシクロペ
   ンテノン類を単離取得した後、（III）式で示される脂
   肪族カルボン酸ハライド又は（IV）式で Ｒ′ＣＯＸ（III） ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） （式中、Ｒ′は前記と同じ意味であり、Ｘは塩素原子あ
   るいは臭素原子を表わす。） 示される脂肪族カルボン酸無水物を反応せしめ、得られ
   た（Ｖ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（Ｖ） （式中Ｒ、Ｒ′は前記と同じ意味であり、※印は前記と
   同じ絶対配置を有する不斉炭素を表わす。）で示される
   光学活性なシクロペンテノンエステル類を微生物酵素を
   用いて不斉加水分解し、（II）式で示される４−ヒドロ
   キシシクロペンテノン類の（Ｒ）体含量が９７％以上で
   ある光学活性な４−ヒドロキシシクロペンテノン類を取
   得する事を特徴とする光学活性４−ヒドロキシシクロペ
   ンテノン類の生化学的製造方法 （２）微生物酵素がアルスロバクター属、アルカリゲネ
   ス属、クロモバクテリウム属あるいはシュードモナス属
   に属する微生物の中から選ばれた微生物が産生する酵素
   であることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製
   造方法