JPS62201898A - 不可逆的酸化からポリペプチド鎖中のメチオニンの保護 - Google Patents
不可逆的酸化からポリペプチド鎖中のメチオニンの保護Info
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- JPS62201898A JPS62201898A JP61299018A JP29901886A JPS62201898A JP S62201898 A JPS62201898 A JP S62201898A JP 61299018 A JP61299018 A JP 61299018A JP 29901886 A JP29901886 A JP 29901886A JP S62201898 A JPS62201898 A JP S62201898A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/06—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents
- C07K1/061—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups
- C07K1/067—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length using protecting groups or activating agents using protecting groups for sulfur-containing functions
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- Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は、ペプチド化学の分野、より詳しくは、不可逆
的酸化から反応性アミノ酸を保護するための方法に関す
る。
的酸化から反応性アミノ酸を保護するための方法に関す
る。
ポリペプチド鎖中のメチオニンは、アルキルハロゲン化
物によるアルキル化及びさらに酸化に対して耐性のスル
ホニウム塩の形成によって、酸化媒体による不可逆的酸
化から保護される。
物によるアルキル化及びさらに酸化に対して耐性のスル
ホニウム塩の形成によって、酸化媒体による不可逆的酸
化から保護される。
以前は、化学合成によって製造され又は比較的高い費用
で天然源から抽出された、タンパク質性質の細菌細胞性
調合薬を遺伝子工学的に製造することに関する興味が、
ここ数年間、進展して来た。
で天然源から抽出された、タンパク質性質の細菌細胞性
調合薬を遺伝子工学的に製造することに関する興味が、
ここ数年間、進展して来た。
普通、サイズ上大きな、そのようなペプチドは、しばし
ば成熟分子として直接的にＥ、コリ細胞によって発現さ
れ、そしてそのアミノ酸末端でメチオニンの存在により
天然の分子と異なる。
ば成熟分子として直接的にＥ、コリ細胞によって発現さ
れ、そしてそのアミノ酸末端でメチオニンの存在により
天然の分子と異なる。
他方、小さなペプチドは、ハイブリッドタンパク質の一
部として旦、ユニ中に発現され得、そしてそれから、そ
れらは、一定のアミノ酸又はアミノ酸配列に対して特異
的な、化学又は酸素反応によって分離される。
部として旦、ユニ中に発現され得、そしてそれから、そ
れらは、一定のアミノ酸又はアミノ酸配列に対して特異
的な、化学又は酸素反応によって分離される。
イタクラなど、 （Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９Ｂ、１０５６
．１９７７）は、β−ガラクトシダーゼと一旦よ−１ツ
ー中のソマトスタチンとの発現をハイブリッドタンパク
質として報告した。ソマトスタチンは、特にメチオニン
残基を分離する臭化シアンによる分解によって、ハイブ
リッドから分離される。Ｇｏｅｄｄｅｌなど（Ｐｒｏｃ
。
．１９７７）は、β−ガラクトシダーゼと一旦よ−１ツ
ー中のソマトスタチンとの発現をハイブリッドタンパク
質として報告した。ソマトスタチンは、特にメチオニン
残基を分離する臭化シアンによる分解によって、ハイブ
リッドから分離される。Ｇｏｅｄｄｅｌなど（Ｐｒｏｃ
。
Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、ｓｃｉ、ＩＪｓＡ、７６．１０６
．１９７９）は、 Ｅ、 ：］−ニソー中のヒトＡ及
びＢインシュリンとβ−グラクトシダーゼとの発現をハ
イブリッドタンパク質として報告する。
．１９７９）は、 Ｅ、 ：］−ニソー中のヒトＡ及
びＢインシュリンとβ−グラクトシダーゼとの発現をハ
イブリッドタンパク質として報告する。
審査中のイタリア特許第４７８５６＾／８５号は、ハイ
ブリッドタンパク質ＴｒｐＢ−ＧＲＦとして成長ホルモ
ン放出因子（ＧＲＦ）ペプチドの旦エユユにおける発現
を報告する。
ブリッドタンパク質ＴｒｐＢ−ＧＲＦとして成長ホルモ
ン放出因子（ＧＲＦ）ペプチドの旦エユユにおける発現
を報告する。
このＧＲＦポリペプチドを得るために、ハイブリッドタ
ンパク質が、ヨードソ安息香酸（ＴｒｐＥ成分からＧＲ
Ｆセグメントを分離する）による処理によってアミノ酸
のトリプトファンで該ハイブリッドタンパク質を分解す
ることから成る一連の化学反応にゆだねられ、そしてそ
のシスティン残基は前もって還元され、そしてカルボキ
シアミドメチル化されている。不運なことに、ヨードソ
安息香酸による処理は、位置２７のメチオニンのチオエ
ーテル基を、スルホンに酸化する。従って、生物学的に
活性であるが、得られたＧＲＦは、そのＭｅｔ ２７の
アミノ酸がメチオニン−スルホンＭ’Ｓ体に酸化される
場合、天然のＧＲＦと異なる。
ンパク質が、ヨードソ安息香酸（ＴｒｐＥ成分からＧＲ
Ｆセグメントを分離する）による処理によってアミノ酸
のトリプトファンで該ハイブリッドタンパク質を分解す
ることから成る一連の化学反応にゆだねられ、そしてそ
のシスティン残基は前もって還元され、そしてカルボキ
シアミドメチル化されている。不運なことに、ヨードソ
安息香酸による処理は、位置２７のメチオニンのチオエ
ーテル基を、スルホンに酸化する。従って、生物学的に
活性であるが、得られたＧＲＦは、そのＭｅｔ ２７の
アミノ酸がメチオニン−スルホンＭ’Ｓ体に酸化される
場合、天然のＧＲＦと異なる。
本発明の目的は、ヨードソ安息香酸又は他の酸化剤によ
って引き起こされる不可逆的酸化からメチオニンを保護
することができる方法を提供することである。
って引き起こされる不可逆的酸化からメチオニンを保護
することができる方法を提供することである。
保護に関して、特に記載したが、本発明は、そのような
保護が有用又は必要である、すべての［（１２する位置
に適用できる方法を提供する。対象のポリペプチドが、
上に記載した例におけるように、遺伝子工学的な方法に
より融合されたハイブリッドタンパク質の形で製造され
る場合、本発明の方法が最っとも適切である。
保護が有用又は必要である、すべての［（１２する位置
に適用できる方法を提供する。対象のポリペプチドが、
上に記載した例におけるように、遺伝子工学的な方法に
より融合されたハイブリッドタンパク質の形で製造され
る場合、本発明の方法が最っとも適切である。
ヨード酢酸及びそのアミドは、特に、メチオニン中に存
在するサルファ原子と反応することが報告されて来た。
在するサルファ原子と反応することが報告されて来た。
そのような反応は、トリプトシン消化によって得られた
ペプチド混合物からメチオニン含有性ペプチドを分離す
るために使用されて来た（口ｅｇｅｎ及びＫｙｔｅ、
Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、８９．５２９．１９７８）
。
ペプチド混合物からメチオニン含有性ペプチドを分離す
るために使用されて来た（口ｅｇｅｎ及びＫｙｔｅ、
Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、８９．５２９．１９７８）
。
沃化メチルは、メチオニンのサルファ原子と反応し、そ
してこの反応は、メチオニンのメチル基を放射性ラベル
されたメチル基と置換するために使用されて来たことも
また、知られている（Ｒｏｔｈｇｅｂなど、旧ｏｃｈｅ
ａ＋ｉｓ ｔｒｙ、 １６．５８１３．１９７７； ｅ
ａｒｌ ｉｎｇなど、Ａｎａｌ、 ｌ１ｉｏｃｈｅ＋ｓ
、 １４４．５４２．１９８５）。しかしながら、メチ
オニンを保護する手段として、アルカリハロゲン化物の
使用は、従来技術においては何も提案されていない。
してこの反応は、メチオニンのメチル基を放射性ラベル
されたメチル基と置換するために使用されて来たことも
また、知られている（Ｒｏｔｈｇｅｂなど、旧ｏｃｈｅ
ａ＋ｉｓ ｔｒｙ、 １６．５８１３．１９７７； ｅ
ａｒｌ ｉｎｇなど、Ａｎａｌ、 ｌ１ｉｏｃｈｅ＋ｓ
、 １４４．５４２．１９８５）。しかしながら、メチ
オニンを保護する手段として、アルカリハロゲン化物の
使用は、従来技術においては何も提案されていない。
本発明によれば、保護反応は、次のスケムに従って生じ
る（ここで、Ｘは■又はＢｒであり、そしてＲはＨ、Ｃ
００Ｉ！又はＣＯＮＨ２である）ニーＮＨ−ＣＨ−ＧＯ
−、−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯ−このようにして得られたスル
ホニウム塩は、酸化に対して耐性であり、そして特に、
ヨードソ安息香酸の酸化作用に対して耐性である。
る（ここで、Ｘは■又はＢｒであり、そしてＲはＨ、Ｃ
００Ｉ！又はＣＯＮＨ２である）ニーＮＨ−ＣＨ−ＧＯ
−、−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯ−このようにして得られたスル
ホニウム塩は、酸化に対して耐性であり、そして特に、
ヨードソ安息香酸の酸化作用に対して耐性である。
スルホニウム塩が次の一般式：
％式％）
〔式中、“ｎ”は１〜４の整数であり；Ｍは−ＯＨ又は
−３Ｈ基を表わす〕のジー又はポリ−チオールと反応さ
れる場合、メチオニンは再生され得る。
−３Ｈ基を表わす〕のジー又はポリ−チオールと反応さ
れる場合、メチオニンは再生され得る。
この一般式の典型的な化合物は、？−メルカプトエタノ
ール及び１．４−ジチオトレイトールである。
ール及び１．４−ジチオトレイトールである。
再生反応のスケムは、次の通りである：以下余白
−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯ−
−ＮＨ−ＣＨ−ＣＯ−
続く詳細な説明は、ハイブリッドタンパク質（ＴｒｐＥ
−ＧＲＦ）として示される、ＧＲＦペプチドの位置２７
に存在するメチオニンの保護への本発明の方法の適用の
特定の例に関する。
−ＧＲＦ）として示される、ＧＲＦペプチドの位置２７
に存在するメチオニンの保護への本発明の方法の適用の
特定の例に関する。
特定の例において、ヨードアセトアミドが、アルキル化
剤として使用されて来た。しかしながら、本発明はまた
、メチオニンのサルファ原子をアルキル化することがで
きる他のアルキルハロゲン化物、たとえばブロモ酢酸、
ヨード酢酸、それらのエステル及び塩、ブロモアセトア
ミド、臭化アルキル及び臭化メチルのようなヨウ化物、
臭化エチル及びその対応するヨウ化物、及び同様のもの
の使用を包含することが明らかである。
剤として使用されて来た。しかしながら、本発明はまた
、メチオニンのサルファ原子をアルキル化することがで
きる他のアルキルハロゲン化物、たとえばブロモ酢酸、
ヨード酢酸、それらのエステル及び塩、ブロモアセトア
ミド、臭化アルキル及び臭化メチルのようなヨウ化物、
臭化エチル及びその対応するヨウ化物、及び同様のもの
の使用を包含することが明らかである。
本発明はまた、メチオニンを、メチオニンスルホンへの
その不可逆的酸化から可逆的な方法で保護することが有
用であるか又は必要である場合へのアルキル化反応及び
次の脱保護反応の適用を含む。
その不可逆的酸化から可逆的な方法で保護することが有
用であるか又は必要である場合へのアルキル化反応及び
次の脱保護反応の適用を含む。
審査中のイタリア特許第４７８５６Ａ／８５号明細書に
記載しているようにして得られたハイブリッドＴｒｐ［
！−ＧＲＦ ４４（前もってカルボキシアミドメチル化
された）５■を、緩衝液（３０％酢酸中に溶解された４
Ｍグアニジン−ＨＣｌｏ、５ｄ中に溶解する。その溶液
に、ヨードアセトアミド２７７．５■（飽和量）を添加
し、そしてその混合物を、５０℃で２時間、暗やみでイ
ンキエベートした。次に水１ｍＺを添加し、そしてその
混合物を、４℃で２時間、保持する。このインキュベー
ションの間、沈殿物が形成され、そして１０．００Ｏｒ
ｐｍで１０分間、遠心分離することによって集められる
。ヨードアセトアミドは、メチオニンの側基と反応し、
前のスケム中に示されたように、それに対応するＳ−メ
チル−カルバミノスルホニウムを形成する。
記載しているようにして得られたハイブリッドＴｒｐ［
！−ＧＲＦ ４４（前もってカルボキシアミドメチル化
された）５■を、緩衝液（３０％酢酸中に溶解された４
Ｍグアニジン−ＨＣｌｏ、５ｄ中に溶解する。その溶液
に、ヨードアセトアミド２７７．５■（飽和量）を添加
し、そしてその混合物を、５０℃で２時間、暗やみでイ
ンキエベートした。次に水１ｍＺを添加し、そしてその
混合物を、４℃で２時間、保持する。このインキュベー
ションの間、沈殿物が形成され、そして１０．００Ｏｒ
ｐｍで１０分間、遠心分離することによって集められる
。ヨードアセトアミドは、メチオニンの側基と反応し、
前のスケム中に示されたように、それに対応するＳ−メ
チル−カルバミノスルホニウムを形成する。
０−ヨードソ 申 との ・
０−ヨードソ安息香酸（ＩＢＡ）５ｎｗを、緩衝液（８
０％酢酸中に溶解された４Ｍグアニジン−）ＩＣ４）
３１Ｓ ｄ中に溶解する。この溶液に、ｐ−クレゾール
７．５４を添加し、そして前もって得られた沈殿物（メ
チオニン２７で保護されたハイブリッドタンパク質Ｔｒ
ｐＥ−ＧＲＰ ４４を含む）を、その中に溶解する。室
温で２０時間、暗やみ中でインキュベーションした後、
水７５０ハを添加し、そして１０分後、その反応混合物
を、１２． ＯＯＯｒｐｍで５分間、遠心分離する。水
性相に、ペプチド（ＧＲＰ４４）が存在する。
０％酢酸中に溶解された４Ｍグアニジン−）ＩＣ４）
３１Ｓ ｄ中に溶解する。この溶液に、ｐ−クレゾール
７．５４を添加し、そして前もって得られた沈殿物（メ
チオニン２７で保護されたハイブリッドタンパク質Ｔｒ
ｐＥ−ＧＲＰ ４４を含む）を、その中に溶解する。室
温で２０時間、暗やみ中でインキュベーションした後、
水７５０ハを添加し、そして１０分後、その反応混合物
を、１２． ＯＯＯｒｐｍで５分間、遠心分離する。水
性相に、ペプチド（ＧＲＰ４４）が存在する。
ＧＲＦ ４４の 、Ｉ び ゴ
上で得られた水溶液を、５％酢酸により平衡化された、
５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ｌＸ２５ｃｍカラムを用い
てゲル濾過によって脱塩する。流速は約１２＋ｎｊ／時
である。排除された物質を、蒸発手段によって急速に乾
燥せしめ、そして０．１２Ｍメルカプトエタノールを含
む、ｐＨＢ、９の０．２ Ｍ Ｈｅｐｅｓ ５００Ｊ１
１中に混合する。その得られる混合物を、３７℃で２４
時間、インキエベートし、そして次に、トリフルオロ酢
酸（ｐＨ＝４）により酸性にする。０．１％トリフルオ
ロ酢酸により平衡化されたＣＩ８カラムを用いて、ＨＰ
ＬＣによって、ＧＲＦ ４４を精製し、そしてアセ１−
ニトリル中０．０５％トリフルオロ酢酸により溶出する
。アミノ酸配列の研究は、その得られたＧＲＦの残基が
天然のＧＲＦ ４４の残基と同一であることを示す。
５ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ｌＸ２５ｃｍカラムを用い
てゲル濾過によって脱塩する。流速は約１２＋ｎｊ／時
である。排除された物質を、蒸発手段によって急速に乾
燥せしめ、そして０．１２Ｍメルカプトエタノールを含
む、ｐＨＢ、９の０．２ Ｍ Ｈｅｐｅｓ ５００Ｊ１
１中に混合する。その得られる混合物を、３７℃で２４
時間、インキエベートし、そして次に、トリフルオロ酢
酸（ｐＨ＝４）により酸性にする。０．１％トリフルオ
ロ酢酸により平衡化されたＣＩ８カラムを用いて、ＨＰ
ＬＣによって、ＧＲＦ ４４を精製し、そしてアセ１−
ニトリル中０．０５％トリフルオロ酢酸により溶出する
。アミノ酸配列の研究は、その得られたＧＲＦの残基が
天然のＧＲＦ ４４の残基と同一であることを示す。
イタリア特許第４７８５６Ａ／８５号明細書に記載して
いるようにして得られたハイブリッドＴｒｐＥ−ＧＲＦ
４４タンパク質（前もってカルボキシアミドメチル化さ
れた）５■を、緩衝液（３０％酢酸中に溶解された４Ｍ
グアニジン−）（（Ｊ）０．５ｄ中に溶解する。その溶
液に沃化メチル９０ ｐｉを添加し、そしてその混合物
を、３７℃で１８時間、暗やみで振慢する０次に水１−
を添加し、そしてその混合物を４℃で２時間、保護する
。このインキューベーションの間、沈殿物が形成され、
そして、１０、０ＧＯｒｐｍで１０分間、遠心分離する
ことによって集められる。沃化メチルは、メチオニンの
側基と反応し、前のスケム中に示されたように、その対
応するＳ−メチルスルホニウム塩を形成する。
いるようにして得られたハイブリッドＴｒｐＥ−ＧＲＦ
４４タンパク質（前もってカルボキシアミドメチル化さ
れた）５■を、緩衝液（３０％酢酸中に溶解された４Ｍ
グアニジン−）（（Ｊ）０．５ｄ中に溶解する。その溶
液に沃化メチル９０ ｐｉを添加し、そしてその混合物
を、３７℃で１８時間、暗やみで振慢する０次に水１−
を添加し、そしてその混合物を４℃で２時間、保護する
。このインキューベーションの間、沈殿物が形成され、
そして、１０、０ＧＯｒｐｍで１０分間、遠心分離する
ことによって集められる。沃化メチルは、メチオニンの
側基と反応し、前のスケム中に示されたように、その対
応するＳ−メチルスルホニウム塩を形成する。
Ｏ−ヨードソ 中 との「心
０−ヨードソ安息香酸（ＩＢＡ）５■を、緩１！ｉ液（
８０％酢酸中に溶解された４Ｍグアニジン−Ｈ（Ｊ ）
３７５ Ｊ１１中に溶解する。この溶液に、ｐ−クレ
ゾール７．５４を添加し、そして前もって得られた沈殿
物（メチオニン２７で保護されたハイブリッドＴｒｐＢ
−ＧＲＦ ４４を含む）を、その中に溶解する。室温で
２０時間、暗やみ中でインキュベーションした後、水７
５０ Ｉｌｌを添加し、そして１０分後、その反応混合
物を、１２．００Ｏｒｐｍで５分間、遠心分離する。そ
の水性相に、ペプチド（ＧＲＦ ４４）が存在する。
８０％酢酸中に溶解された４Ｍグアニジン−Ｈ（Ｊ ）
３７５ Ｊ１１中に溶解する。この溶液に、ｐ−クレ
ゾール７．５４を添加し、そして前もって得られた沈殿
物（メチオニン２７で保護されたハイブリッドＴｒｐＢ
−ＧＲＦ ４４を含む）を、その中に溶解する。室温で
２０時間、暗やみ中でインキュベーションした後、水７
５０ Ｉｌｌを添加し、そして１０分後、その反応混合
物を、１２．００Ｏｒｐｍで５分間、遠心分離する。そ
の水性相に、ペプチド（ＧＲＦ ４４）が存在する。
ＧＲＦ ４４の精＋ｌ び脱保８
上で得られた水溶液を、ゲル濾過によって脱塩する。５
ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ｌ Ｘ ２５ ｃｍカラム（
５％酢酸により平衡化された）を使用する。流速は約１
２ｍ１／時である。排除された物質を、蒸発することに
よって急速に乾燥せしめ、そして０．５Ｍジチオトレイ
トールを含む・、ｐＨ９の０．２ＭＮ−エチルモルホリ
ン５００ｄ中に混合する。その脱保護反応混合物を、３
７℃で２４時間、インキエベートし、そして次に、トリ
フルオロ酢酸（ｐＨ＝４）により酸性にする。次に、Ｇ
ＲＦ ４４を、０．１％トリフルオロ酢酸により平衡化
されたＣ１Ｂカラムを用いて、ＨＰＬＣによって精製し
、そしてアセトニトリル９０．０５％トリフルオロ酢酸
により溶出する。そのアミノ酸配列の研究は、本発明の
方法によって得られたＧＲＰ ４４が天然のＧＲＰ ４
４の残基と同一の残基を有することを示す。
ｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２５、ｌ Ｘ ２５ ｃｍカラム（
５％酢酸により平衡化された）を使用する。流速は約１
２ｍ１／時である。排除された物質を、蒸発することに
よって急速に乾燥せしめ、そして０．５Ｍジチオトレイ
トールを含む・、ｐＨ９の０．２ＭＮ−エチルモルホリ
ン５００ｄ中に混合する。その脱保護反応混合物を、３
７℃で２４時間、インキエベートし、そして次に、トリ
フルオロ酢酸（ｐＨ＝４）により酸性にする。次に、Ｇ
ＲＦ ４４を、０．１％トリフルオロ酢酸により平衡化
されたＣ１Ｂカラムを用いて、ＨＰＬＣによって精製し
、そしてアセトニトリル９０．０５％トリフルオロ酢酸
により溶出する。そのアミノ酸配列の研究は、本発明の
方法によって得られたＧＲＰ ４４が天然のＧＲＰ ４
４の残基と同一の残基を有することを示す。
以下余白
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ポリペプチド鎖中に存在するメチオニンを不可逆的
酸化から保護するための方法であって、次の式： Ｘ−ＣＨ＿２−Ｒ 〔式中、ＸはＩ又はＢｒであり；そしてＲはＨ、ＣＯＯ
Ｈ又はＣＯＮＨ＿２である〕のアルキルハロゲン化物と
前記ポリペプチド物質とを反応せしめ、次の式：▲数式
、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは上に定義した通りである〕のスルホニウム
塩を得ることを特徴とする方法。 ２、次の式： Ｘ−ＣＨ＿２−Ｒ 〔式中、ＸはＩ又はＢｒであり；そしてＲはＨ、ＣＯＯ
Ｈ又はＣＯＮＨ＿２である〕のアルキルハロゲン化物と
ポリペプチド物質とを反応せしめることによって得られ
た次の式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは上に定義した通りである〕のスルホニウム
塩の脱保護のための方法であって、前記スルホニウム塩
と、次の式： ＨＳ−（Ｍ）＿ｎ−Ｙ 〔式中、“ｎ”は１〜４の間の整数であり；Ｍは−ＣＨ
＿２−又は▲数式、化学式、表等があります▼基を表わ
し；そしてＹは−ＯＨ又は−ＳＨ基を表わす〕とを反応
せしめ、完全なメチオニン残基を得ることを特徴とする
方法。 ３、前記反応を、過剰の次の式： Ｘ−ＣＨ＿２−Ｒ 〔式中、Ｘ及びＲは上に定義した通りである〕の試薬の
存在下で行なうことを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ４、前記アルキルハロゲン化物がヨードアセトアミド又
はブロモアセトアミドであることを特徴とする特許請求
の範囲第１項記載の方法。 ５、前記アルキルハロゲン化物が沃化メチル又は臭化メ
チルであることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載
の方法。 ６、前記脱保護反応を、試薬として２−メルカプトエタ
ノールを用いることによって実施することを特徴とする
特許請求の範囲第２項記載の方法。 ７、前記脱保護反応を、試薬として１，４−ジチオトレ
イトールを用いることによって実施することを特徴とす
る特許請求の範囲第２項記載の方法。 ８、￥Ｅ．コリ￥（￥Ｅ．Ｃｏｌｉ￥）中に発現するハ
イブリッドタンパク質ＴｒｐＥ−ＧＲＦ（成長ホルモン
放出因子）から確実なＧＲＦを得るための方法であって
、ＧＲＦ配列の位置２７のメチオニンを、アルキルハロ
ゲン化物によりアルキル化することによって保護し、そ
の後、そのハイブリッドタンパク質を、アミノ酸のトリ
プトファンでのヨードソ安息香酸切断にゆだね、Ｔｒｐ
Ｅアミノ酸配列からＧＲＦを分離し、そしてこのように
して形成されたメチオニン−スルホン残基を、完全なメ
チオニン残基に転換することを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT48955/85A IT1200162B (it) | 1985-12-18 | 1985-12-18 | Protezione della metionina in una catena polipeptidica dalla ossidazione irreversibile |
| IT48955A85 | 1985-12-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62201898A true JPS62201898A (ja) | 1987-09-05 |
Family
ID=11269152
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
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