JPS62270596A - 感染防御物質アラダプシン - Google Patents
感染防御物質アラダプシンInfo
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- JPS62270596A JPS62270596A JP61115637A JP11563786A JPS62270596A JP S62270596 A JPS62270596 A JP S62270596A JP 61115637 A JP61115637 A JP 61115637A JP 11563786 A JP11563786 A JP 11563786A JP S62270596 A JPS62270596 A JP S62270596A
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- Japan
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- water
- alladapsin
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- nocardia
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- Prior art date
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
３、発明の詳細な説明
本発明は新規な感染防御物質アラダプシン（Ａｌａｄａ
ｐｃｉｎ ）およびその製造法に関する。本発明者らは
栃木県塩谷郡で採取した土壌から分離したノカルゾア属
に属する５ＡＮＫ ６０４８４株がダラム陽性、ダラム
陰性＃Ｉ菌の感染に対して感染防御効果を有する新規な
感染防御物質を生産することを見出し、これをアラダプ
シン（Ａｌａｄａｐｃｉｎ）と命名した。従って、アラ
ダプシンはこれら細菌に起因するヒト、動物の疾病の予
防または治療に用いられる。アラダプシンを生産する５
ＡＮＫ６０４８４株の菌学的性状は次の通りである。
ｐｃｉｎ ）およびその製造法に関する。本発明者らは
栃木県塩谷郡で採取した土壌から分離したノカルゾア属
に属する５ＡＮＫ ６０４８４株がダラム陽性、ダラム
陰性＃Ｉ菌の感染に対して感染防御効果を有する新規な
感染防御物質を生産することを見出し、これをアラダプ
シン（Ａｌａｄａｐｃｉｎ）と命名した。従って、アラ
ダプシンはこれら細菌に起因するヒト、動物の疾病の予
防または治療に用いられる。アラダプシンを生産する５
ＡＮＫ６０４８４株の菌学的性状は次の通りである。
１）形態学的特徴
１１１３Ｐ［インターナショナル・ストレプトミセス・
プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔ、ｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ）］規定の培地およ
びワックスマン（Ｓ、Ａ。
プロジェクト（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔ、ｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏｊｅｃｔ）］規定の培地およ
びワックスマン（Ｓ、Ａ。
Ｗａｋｓｍａｎ）らの勧告しジ・アクチンミセイテス（
’Ｉ’ｌ）ｓ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ） 、 ２
巻〕の培地上で培養する。培養は通常２８℃で行う。Ｓ
ＡＮ’Ｉ（６０４８４株の形態学的特徴は気菌糸は生じ
ることなく栄養菌糸は良く伸長しジグザグ（Ｚｉｇ−Ｚ
ａｇ）状とカリ接種培養の数日後には栄養菌糸に明瞭な
分断が観察されることである。分断菌糸は種々の大きさ
の球状ないし洋梨状を示す。その他、特殊器官の形成は
観桜されない。
’Ｉ’ｌ）ｓ Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ） 、 ２
巻〕の培地上で培養する。培養は通常２８℃で行う。Ｓ
ＡＮ’Ｉ（６０４８４株の形態学的特徴は気菌糸は生じ
ることなく栄養菌糸は良く伸長しジグザグ（Ｚｉｇ−Ｚ
ａｇ）状とカリ接種培養の数日後には栄養菌糸に明瞭な
分断が観察されることである。分断菌糸は種々の大きさ
の球状ないし洋梨状を示す。その他、特殊器官の形成は
観桜されない。
２）各種培養基上の諸性状
各種培養基上で２８℃、１４日間培養したときの性状は
第１表に示す通りである。色調の表示は日本色彩研究所
版１標準色票”のカラーチップナンバーを表す。
第１表に示す通りである。色調の表示は日本色彩研究所
版１標準色票”のカラーチップナンバーを表す。
第 １ 表
２８℃、１４日口の結果を示す。
培 地 名 性 状４−′１°”１
□ うす黄味茶（６−８−８）０“５Ｐ２） ｓ
ｐ 産生イず ア７″ラギ７転 Ｒ黄味灰（１−９−１０）（ＩＳＰ
５） ｓｐ 産生せずエキス゛鉄寒天 Ｒう
す黄味茶（６−８−９）（ＩＳＰ ６） ｓｐ
産生せず培地名 性 状 ｓｐ 産生ぜず アスパラギン寒天 Ｒうす黄味橙（２−９−９）ｓｐ
産生ぜず ｓｐ 産生せず 培地名 性 状 水寒天 Ｒ黄味法（１−９−１０） ｓｐ 産生せず ３）生理学的性質 ５ＡＮＫ ６０４８４株の生理学的性質を第２表に、炭
素源資化性を第３表に示す。
□ うす黄味茶（６−８−８）０“５Ｐ２） ｓ
ｐ 産生イず ア７″ラギ７転 Ｒ黄味灰（１−９−１０）（ＩＳＰ
５） ｓｐ 産生せずエキス゛鉄寒天 Ｒう
す黄味茶（６−８−９）（ＩＳＰ ６） ｓｐ
産生せず培地名 性 状 ｓｐ 産生ぜず アスパラギン寒天 Ｒうす黄味橙（２−９−９）ｓｐ
産生ぜず ｓｐ 産生せず 培地名 性 状 水寒天 Ｒ黄味法（１−９−１０） ｓｐ 産生せず ３）生理学的性質 ５ＡＮＫ ６０４８４株の生理学的性質を第２表に、炭
素源資化性を第３表に示す。
第２表 生理学的性質
＊培地１： トリジトン・イーストエキスプロス（ＩＳ
Ｐ １）培地２：ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（
ＩＳＩ） ６）培地３：チロシン寒天（ＩＳＰ ７） ４）菌体内成分について エム・ビー・レシエパリｘ −（Ｍ、Ｐ、Ｌｅｃｂｅｖ
ａｌｉｅｒ）らの方法〔エイ・ディーラ（Ａ、、Ｄｉ
ｓ ｔｚ ）ら著、放線菌の分類（Ａｃｔｊ、ｎｏｍｙ
ｃｅｔｅ ｔａｘｏｎｏｍｙ） 、 ２２５頁、１９８
０年〕に従い、菌体の酸加水分解物のに−パークロマト
グラフイーによる分析を行った結果、メソジアミノピメ
リン酸およびアラビノース、ガラクトースが認められ、
細胞壁型のタイプは■型であることが確認された。また
全菌体糖型はＡ型であった。さらにエッチ・モルダルス
カ（Ｈ・Ｍｏｒｄａｒｓｋａ）らの方法〔ジャーナル・
オノ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙ
）、７１巻、７７頁、１９７２年〕に従い、菌体内の脂
質を分析した結果、 ＬＣＮ−Ａ（Ｌｉｐｉｄｓ ｃｈ
ａｒａｃｔｅｒｊ、５ｔｊｃ ｏｆ Ｎｏｃａｒｄｉａ
）が存在していた。
Ｐ １）培地２：ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（
ＩＳＩ） ６）培地３：チロシン寒天（ＩＳＰ ７） ４）菌体内成分について エム・ビー・レシエパリｘ −（Ｍ、Ｐ、Ｌｅｃｂｅｖ
ａｌｉｅｒ）らの方法〔エイ・ディーラ（Ａ、、Ｄｉ
ｓ ｔｚ ）ら著、放線菌の分類（Ａｃｔｊ、ｎｏｍｙ
ｃｅｔｅ ｔａｘｏｎｏｍｙ） 、 ２２５頁、１９８
０年〕に従い、菌体の酸加水分解物のに−パークロマト
グラフイーによる分析を行った結果、メソジアミノピメ
リン酸およびアラビノース、ガラクトースが認められ、
細胞壁型のタイプは■型であることが確認された。また
全菌体糖型はＡ型であった。さらにエッチ・モルダルス
カ（Ｈ・Ｍｏｒｄａｒｓｋａ）らの方法〔ジャーナル・
オノ・ジェネラル・マイクロバイオロジー（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆｇｅｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｌｏｌｏｇｙ
）、７１巻、７７頁、１９７２年〕に従い、菌体内の脂
質を分析した結果、 ＬＣＮ−Ａ（Ｌｉｐｉｄｓ ｃｈ
ａｒａｃｔｅｒｊ、５ｔｊｃ ｏｆ Ｎｏｃａｒｄｉａ
）が存在していた。
上記の如き５ＡＮＫ ６０４８４株の諸性状のうち特に
■菌糸が分断すること、■細胞壁が■型で全菌体中の糖
型がＡ型であること、■菌体内にＬＣＮ−Ａが存在する
こと等から、本菌株は、放線菌の中でもノカルジアセア
エ（Ｎｏｃａｒｄｌ、ａｃｅａｅ）科のノカルジア（Ｎ
ｏｃａｒ６ ｊ−ａ）属に属する菌株であることが明ら
かとなシ１．ノカルジア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａ
ｓｐ、）ＳＡＮＫ ６０４８４ （微工研菌寄第７４２
３号）と命名した。
■菌糸が分断すること、■細胞壁が■型で全菌体中の糖
型がＡ型であること、■菌体内にＬＣＮ−Ａが存在する
こと等から、本菌株は、放線菌の中でもノカルジアセア
エ（Ｎｏｃａｒｄｌ、ａｃｅａｅ）科のノカルジア（Ｎ
ｏｃａｒ６ ｊ−ａ）属に属する菌株であることが明ら
かとなシ１．ノカルジア・エスピー（Ｎｏｃａｒｄｉａ
ｓｐ、）ＳＡＮＫ ６０４８４ （微工研菌寄第７４２
３号）と命名した。
以上、アラメゾシンの生産菌について説明したが、放線
菌の諸性質は一定したものではなく、自然的２人工的に
容易に変化することは周知の通りであり、本発明で使用
しうる菌株はノカルジア属に属するアラダプシンを生産
するすべての菌株を包含するものである。
菌の諸性質は一定したものではなく、自然的２人工的に
容易に変化することは周知の通りであり、本発明で使用
しうる菌株はノカルジア属に属するアラダプシンを生産
するすべての菌株を包含するものである。
本発明における培養は一般放線菌における培養方法に準
じて行われ、液体培地中での振盪培養または通気攪拌培
養によるのが好ましい。培地成分としては、例えば炭素
源としてプＰつ糖。
じて行われ、液体培地中での振盪培養または通気攪拌培
養によるのが好ましい。培地成分としては、例えば炭素
源としてプＰつ糖。
マルトース、シュクロース、マンニット、糖蜜。
グリセリン、デキストリン、澱粉、大豆油、綿実油など
が、窒素源としては大豆粉、落花生粉。
が、窒素源としては大豆粉、落花生粉。
綿実粉、ファーマミン、魚粉、コーン・スチープ・リカ
ー、ペゾトン、肉エキス、イースｌ−。
ー、ペゾトン、肉エキス、イースｌ−。
イースト・エキス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム
、硫酸アンモニウム等が、また無機塩として食塩、燐酸
塩、炭酸カルシウム、微景金属塩などが必要に応じて適
宜添加される。液体培養に際してはシリコン油、植物油
、界面活性剤停が消泡剤として適宜使用される。
、硫酸アンモニウム等が、また無機塩として食塩、燐酸
塩、炭酸カルシウム、微景金属塩などが必要に応じて適
宜添加される。液体培養に際してはシリコン油、植物油
、界面活性剤停が消泡剤として適宜使用される。
培地の声は７．０附近、培養温度は２４℃から３０℃、
特に２８℃前後が好ましい。通常８０〜９６時間の培養
でアラダプシンの生産量は最高値に達する。主として培
養液中の液体部分に存在するアラダプシンは、培養終了
後菌体その他の固型部分を叶いそう土等を濾過助剤とす
る沖過操作、または遠心分離によって除去し、そのろ液
または上清中から抽出・精製される。アラダプシンはそ
の物理化学的性状を利用することにより、例えば吸着剤
を用いて採取することができる。吸着剤としては例えば
活性炭、または吸着用樹脂であるアンバーライ） ＸＡ
Ｄ−２。
特に２８℃前後が好ましい。通常８０〜９６時間の培養
でアラダプシンの生産量は最高値に達する。主として培
養液中の液体部分に存在するアラダプシンは、培養終了
後菌体その他の固型部分を叶いそう土等を濾過助剤とす
る沖過操作、または遠心分離によって除去し、そのろ液
または上清中から抽出・精製される。アラダプシンはそ
の物理化学的性状を利用することにより、例えば吸着剤
を用いて採取することができる。吸着剤としては例えば
活性炭、または吸着用樹脂であるアンバーライ） ＸＡ
Ｄ−２。
ＸＡＤ−４、ＸＡ、Ｄ−７等（ローム・アンド・ハース
社製）やダイヤイオｙｌ（ＰＩＯ，ＨＰ２０．ＨＰ５Ｏ
゜ＣＨＰ２０Ｐ等（三菱化成工業（株）社製）が使用さ
れる。アラダプシンを含む液から上記の如き吸着剤の層
を通過させて含まれる不純物を吸着させて取りのぞくか
、アラダプシンを吸着させた後、メタノール水、アセト
ン水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出する６また、
中性脂溶性物質を培養液から採取する方法、例えば水と
混和しない有機溶媒例えばクロロホルム、酢酸エチル、
ｎ−シタノールなどの単独またはそれらの組み合せによ
り培養テ液または水溶液から不純物を抽出することによ
りアラダプシンを精製することもできる。更にアラダプ
シンを精製するためにはアビセル（旭化成工業（株）社
製）などのセルロース、セファデックスＬＨ−２０（フ
ァルマシア社製）などを用いた分配カラムクロマトグラ
フィー、逆相用担体を用いた逆相カラムクロマトグラフ
ィー、アラダプシンと混在する不純物との溶媒に対する
分配率の差を利用した抽出法または向流分配法などが有
効な方法といえる。以上の精製手段を単独′！ｉ−たは
適宜組み合せ、反復用いることによシアラダゾシンを精
製することができる。アラダプシンはまた一般の脂溶性
抗生物質と同じく、培養条件によっては培養液中の菌体
部分に存在する。従ってアルコール類、アセトン等の親
水性有機溶媒によって抽出し、溶媒を除去し、水溶液と
した後、培養ろ液からと同様の方法で抽出精製すること
ができる。
社製）やダイヤイオｙｌ（ＰＩＯ，ＨＰ２０．ＨＰ５Ｏ
゜ＣＨＰ２０Ｐ等（三菱化成工業（株）社製）が使用さ
れる。アラダプシンを含む液から上記の如き吸着剤の層
を通過させて含まれる不純物を吸着させて取りのぞくか
、アラダプシンを吸着させた後、メタノール水、アセト
ン水、ｎ−ブタノール水などを用いて溶出する６また、
中性脂溶性物質を培養液から採取する方法、例えば水と
混和しない有機溶媒例えばクロロホルム、酢酸エチル、
ｎ−シタノールなどの単独またはそれらの組み合せによ
り培養テ液または水溶液から不純物を抽出することによ
りアラダプシンを精製することもできる。更にアラダプ
シンを精製するためにはアビセル（旭化成工業（株）社
製）などのセルロース、セファデックスＬＨ−２０（フ
ァルマシア社製）などを用いた分配カラムクロマトグラ
フィー、逆相用担体を用いた逆相カラムクロマトグラフ
ィー、アラダプシンと混在する不純物との溶媒に対する
分配率の差を利用した抽出法または向流分配法などが有
効な方法といえる。以上の精製手段を単独′！ｉ−たは
適宜組み合せ、反復用いることによシアラダゾシンを精
製することができる。アラダプシンはまた一般の脂溶性
抗生物質と同じく、培養条件によっては培養液中の菌体
部分に存在する。従ってアルコール類、アセトン等の親
水性有機溶媒によって抽出し、溶媒を除去し、水溶液と
した後、培養ろ液からと同様の方法で抽出精製すること
ができる。
このようにして得られたアラダプシンは次の理化学的性
状を有する。
状を有する。
（１）物質の性状二両性水溶性、白色粉末。
（２）分子式：Ｃ４３Ｈ２５Ｎ５Ｏ５
（３）分子量：３３１
（４）溶解性：
水、メタノールに可溶、アセトン、酢酸エチル、クロロ
ホルムに不溶。
ホルムに不溶。
（５）呈色反応：
ニンヒドリン、ペプチド試薬に陽性。
（６）薄層クロマトグラフイー；
０．４２
吸着剤；イーストマン・クロマグラム・シートＡ１３２
５４展開溶媒；ｎ−ブタノール：水：酢酸（４：１：２
）（７）紫外線吸収スペクトル： 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは２２０ｎｍ
以上に特異吸収を示さず、末端吸収のみを示す。
５４展開溶媒；ｎ−ブタノール：水：酢酸（４：１：２
）（７）紫外線吸収スペクトル： 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトルは２２０ｎｍ
以上に特異吸収を示さず、末端吸収のみを示す。
（８）赤外線吸収スペクトル＝νｇＨ、” ＩＫＢｒ法
で測定した赤外線吸収スペクトルは第１図に示す通りで
ある。
で測定した赤外線吸収スペクトルは第１図に示す通りで
ある。
（９）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ’ ｐｐｍ重水中
、外部基準に干ＭＳ （テトラメチルシラン）を使用し
て測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（２７０ＭＨｚ）
は第２図に示す通りである。
、外部基準に干ＭＳ （テトラメチルシラン）を使用し
て測定した核磁気共鳴吸収スペクトル（２７０ＭＨｚ）
は第２図に示す通りである。
α１液体クロマトグラフィー：
カラム；マイクロボンダパックＣｌ８（ウォーターズ社
製）溶 媒；５ｍＭヘプタンスルホン酸ナトリウム−１
，５チアセトニトリル 流速；１゜５プ／分 Ｕｖ ：２１０ｎｍ 保持時間；１０．８分 αカ酸加水分解： ６ ＮＨＣｔで１０５℃で２０時間加水分解した結果、
メソ−ジアミノピメリン酸 １モルおよびＤ−アラニン
２モルを検出した。
製）溶 媒；５ｍＭヘプタンスルホン酸ナトリウム−１
，５チアセトニトリル 流速；１゜５プ／分 Ｕｖ ：２１０ｎｍ 保持時間；１０．８分 αカ酸加水分解： ６ ＮＨＣｔで１０５℃で２０時間加水分解した結果、
メソ−ジアミノピメリン酸 １モルおよびＤ−アラニン
２モルを検出した。
０埠感染防御効果
アラダプシンをマウスに２４時間前にＳ、Ｃ”。
投与後、Ｌ ｃｏｌｉ ５ＡＮＫ ７３１７５ （２Ｘ
１０’ ｃｅｌｌｓＡｌ）を用いて１・Ｖ・感染させ
、７日後の生存数を調べた。
１０’ ｃｅｌｌｓＡｌ）を用いて１・Ｖ・感染させ
、７日後の生存数を調べた。
以上から、アラダプシンは各種細菌感染性疾患を対照と
する宿主抵抗性増強剤として単独ないし市販の抗菌剤と
併用して使用される。その投与形態としては皮下注射、
静脈内注射、筋肉注射、坐剤などによる非経口投与法あ
るいは錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤かとによる経口
投与法があげられる。投与量は対象疾患、投与経路およ
び投与回数などによって異なるが、例えば成人に対して
通常は１日１０■乃至１ｇを１回または数回に分けて投
与するのが好ましい。
する宿主抵抗性増強剤として単独ないし市販の抗菌剤と
併用して使用される。その投与形態としては皮下注射、
静脈内注射、筋肉注射、坐剤などによる非経口投与法あ
るいは錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤かとによる経口
投与法があげられる。投与量は対象疾患、投与経路およ
び投与回数などによって異なるが、例えば成人に対して
通常は１日１０■乃至１ｇを１回または数回に分けて投
与するのが好ましい。
次に実施例をあげて本発明をさらに具体的に説明する。
実施例１
ノカルジア・エスピー５ＡＮＫ ６０４８４株を培地組
成−１で示される培地５Ｏ０ｓｕを含む２１容三角フラ
スコに１白金耳接種し、２２Ｏｒｐｍの回転振盪培養機
により２８℃で９６時間培養し７ヒ。
成−１で示される培地５Ｏ０ｓｕを含む２１容三角フラ
スコに１白金耳接種し、２２Ｏｒｐｍの回転振盪培養機
により２８℃で９６時間培養し７ヒ。
この培養液２，５１を同一の培地５Ｏ１を含１）１００
１容タンクに接種し１００ ｒｐｍの回転により２８℃
で４８時間通気攪拌培養した。この培養液１５１を同一
の培地３００１を含む６００１容タンクに接種し温度２
８℃１通気量０．５ ｖｖｍ 。
１容タンクに接種し１００ ｒｐｍの回転により２８℃
で４８時間通気攪拌培養した。この培養液１５１を同一
の培地３００１を含む６００１容タンクに接種し温度２
８℃１通気量０．５ ｖｖｍ 。
内圧］、、Ｏｋｇ・ｃＪ 、 １００ ｒｐｍの回転に
よυ９１時間通気攪拌培養した。得られた培養液７００
１に濾過助剤としてセライト５４５（米国ジョンズ・マ
ンピル会プロダクト・コーポレーション製）を３０ｋｇ
加えて炉遇することによシ培養Ｆ液６９０１が得られた
。培養ｐ液をｐＨ５，５に調整しダイヤイオン８に−Ｉ
Ｂ（Ｈ＋） （三菱化成工業（株）社製）１００Ａ！の
カラムに通しアラダプシンを吸着させた。３００Ｊの脱
イオン水で水洗後、０．５Ｎアンモニア水４００１で溶
出した。得られた溶出液１８０１を減圧下濃縮し、濃縮
液８１が得られた。濃縮液８１を−６，５に調整しア７
バー ５ イ） Ｃ！Ｇ−５Ｏ（Ｈ＋） （ローム・
アンド・ハース社：ｔ！り４７のカラムに吸着させた。
よυ９１時間通気攪拌培養した。得られた培養液７００
１に濾過助剤としてセライト５４５（米国ジョンズ・マ
ンピル会プロダクト・コーポレーション製）を３０ｋｇ
加えて炉遇することによシ培養Ｆ液６９０１が得られた
。培養ｐ液をｐＨ５，５に調整しダイヤイオン８に−Ｉ
Ｂ（Ｈ＋） （三菱化成工業（株）社製）１００Ａ！の
カラムに通しアラダプシンを吸着させた。３００Ｊの脱
イオン水で水洗後、０．５Ｎアンモニア水４００１で溶
出した。得られた溶出液１８０１を減圧下濃縮し、濃縮
液８１が得られた。濃縮液８１を−６，５に調整しア７
バー ５ イ） Ｃ！Ｇ−５Ｏ（Ｈ＋） （ローム・
アンド・ハース社：ｔ！り４７のカラムに吸着させた。
２５１の脱イオン水で洗浄後０．０！５Ｎ塩酸水で溶出
した。
した。
得られた溶出液２３／を水酸化ナトリウムで−７，０に
調整し減圧下濃縮し濃縮液２１が得られた。得られた濃
縮液２１にアビセル（旭化成工業（株）社製）３００１
１を加えて凍結乾燥した。
調整し減圧下濃縮し濃縮液２１が得られた。得られた濃
縮液２１にアビセル（旭化成工業（株）社製）３００１
１を加えて凍結乾燥した。
凍結乾燥粉末をあらかじめ８０チアセトニトリル−水（
Ｖ／Ｖ）で充填した４１のアビセルカラムに重層し４１
の８（ｌアセトニトリル−水、２０１の７０％アセトニ
トリル−水２４１の２０％アセトニトリル−水で順次溶
出した。７０％および２０％アセトニトリル−水でＩＯ
Ａ’ずつ分画していくと活性物質は２０１アセトニトリ
ル−水で溶出したフラクション煮４〜６に溶出された。
Ｖ／Ｖ）で充填した４１のアビセルカラムに重層し４１
の８（ｌアセトニトリル−水、２０１の７０％アセトニ
トリル−水２４１の２０％アセトニトリル−水で順次溶
出した。７０％および２０％アセトニトリル−水でＩＯ
Ａ’ずつ分画していくと活性物質は２０１アセトニトリ
ル−水で溶出したフラクション煮４〜６に溶出された。
この分画を集め減圧下濃縮し凍結乾燥を行って粗粉末１
．９１が得られた。得られた粗粉末１．９２ｇを再度８
０％アセトニ） ＩＪルー水で充填した２５ＯＷＬｌの
アビセルカラムに吸着させ、各々１．５１の７０チ、５
Ｏ１％および３０％アセトニトリル−水で５Ｏ０１ｌＩ
ｔずつ順次溶出した。
．９１が得られた。得られた粗粉末１．９２ｇを再度８
０％アセトニ） ＩＪルー水で充填した２５ＯＷＬｌの
アビセルカラムに吸着させ、各々１．５１の７０チ、５
Ｏ１％および３０％アセトニトリル−水で５Ｏ０１ｌＩ
ｔずつ順次溶出した。
活性物質はフラクションＡ６〜９に溶出され、この分画
を集め減圧下濃縮し、凍結乾燥を行って粉末３５４．８
Ｗが得られた。得られた粉末３５４．８■をアンバーラ
イトＣＧ−５Ｏ（ＮＨ４” ） ２７０ ｗＬｌのカラ
ムに吸着させ水で展開し５１ずつ分画を行った。
を集め減圧下濃縮し、凍結乾燥を行って粉末３５４．８
Ｗが得られた。得られた粉末３５４．８■をアンバーラ
イトＣＧ−５Ｏ（ＮＨ４” ） ２７０ ｗＬｌのカラ
ムに吸着させ水で展開し５１ずつ分画を行った。
アラダプシンを含むフラクションＡ３８〜６０を集め凍
結乾燥し１３．７■の白色粉末が得られた。
結乾燥し１３．７■の白色粉末が得られた。
培地組成−１グルコース ５％
大豆粉 ０．７５
硫酸アンモニウム ０５
プロフロ ０．６
Ｃａ Ｃｏ ３（１５５
ＫＨ２Ｐ０４０１
ｐｌ（７，０
実施例２
実施例１と全く同様の方法で調製した部分精製品アラダ
プシン１４■を水で調整したトヨパー ルＨＷ−４０（
Ｆｉｎｅ） （東洋曹達工業（力社製）３０ｉノのカ
ラムに吸着させ水で展開溶出した。
プシン１４■を水で調整したトヨパー ルＨＷ−４０（
Ｆｉｎｅ） （東洋曹達工業（力社製）３０ｉノのカ
ラムに吸着させ水で展開溶出した。
溶出液を３ ｍｌずつ分画するとアラダプシンは薄層ク
ロマト上半−のスポットとしてフラクションＡ３２〜５
２までに溶出された。溶出分画を集め減圧下濃縮し、凍
結乾燥することにより、アラダプシン５．４■が白色粉
末として得られた。
ロマト上半−のスポットとしてフラクションＡ３２〜５
２までに溶出された。溶出分画を集め減圧下濃縮し、凍
結乾燥することにより、アラダプシン５．４■が白色粉
末として得られた。
第１図はアラダプシンの赤外線吸収スペクトルを示し、
第２図は同物質の核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
第２図は同物質の核磁気共鳴吸収スペクトルを示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、下記の理化学的性状を有するアラダプシン。 （１）物質の性状：両性水溶性、白色粉末。 （２）分子式：Ｃ＿１＿３Ｈ＿２＿５Ｎ＿５Ｏ＿５（３
）分子量：３３１ （４）溶解性： 水、メタノールに可溶、アセトン、酢酸エ チル、クロロホルムに不溶。 （５）呈色反応： ニンヒドリン、ペプチド試薬に陽性。 （６）薄層クロマトグラフイー； Ｒ＿ｆ値；０．４２ 吸着剤；イーストマン・クロマグラム・シートＮｏ．１
３２５４展開溶媒；ｎ−ブタノール：水：酢酸（４：１
：２）（７）紫外線吸収スペクトル： 水溶液中で測定した紫外線吸収スペクトル は２２０ｎｍ以上に特異吸収を示さず末端吸収のみを示
す。 （８）赤外線吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ
＿ｘｃｍ＾−＾１ＫＢｒ法で測定した赤外線吸収スペク
トルは第１図に示す通りである。 （９）核磁気共鳴吸収スペクトル：δ：ｐｐｍ重水中、
外部基準にＴＭＳ（テトラメチルシラン）を使用して測
定した核磁気共鳴吸収 スペクトル（２７０ＭＨｚ）は第２図に示す通りである
。 （１０）液体クロマトグラフイー： カラム；マイクロボンダパツクＣ＿１＿８（ウオーター
ズ社製） 溶媒；５ｍＭヘプタンスルホン酸ナトリウ ム−１．５％アセトニトリル 流速；１．５ｍｌ／分 ＵＶ；２１０ｎｍ 保持時間：１０．８分 （１１）酸加水分解： ６ＮＨＣｌで１０５℃で２０時間加水分解した結果、メ
ソ−ジアミノピメリン酸 １モル およびＤ−アラニン ２モルを検出した。 ２、ノカルジア属に属するアラダプシン生産菌を培養し
て、その培養液よりアラダプシンを採取することよりな
るアラダプシンの製造法。 ３、ノカルジア属に属するアラダプシン生産菌がノカル
ジア・エスピーＳＡＮＫ ６０４８４株（微工研菌寄第
７４２３号）である特許請求の範囲第２項記載の製造法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61115637A JPS62270596A (ja) | 1986-05-20 | 1986-05-20 | 感染防御物質アラダプシン |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61115637A JPS62270596A (ja) | 1986-05-20 | 1986-05-20 | 感染防御物質アラダプシン |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62270596A true JPS62270596A (ja) | 1987-11-24 |
Family
ID=14667571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61115637A Pending JPS62270596A (ja) | 1986-05-20 | 1986-05-20 | 感染防御物質アラダプシン |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62270596A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4005488A1 (de) * | 1990-02-21 | 1991-08-22 | Wabner Dietrich | Verfahren und vorrichtung zur wasserentgiftung |
| WO2009098016A1 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-13 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredientsgmbh | Oligopeptides for use as taste modulators |
| CN104111303A (zh) * | 2014-06-19 | 2014-10-22 | 福建省山河药业有限公司 | 一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架的鉴别方法 |
-
1986
- 1986-05-20 JP JP61115637A patent/JPS62270596A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4005488A1 (de) * | 1990-02-21 | 1991-08-22 | Wabner Dietrich | Verfahren und vorrichtung zur wasserentgiftung |
| WO2009098016A1 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-13 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredientsgmbh | Oligopeptides for use as taste modulators |
| EP2093234A1 (en) * | 2008-02-08 | 2009-08-26 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients GmbH | Oligopeptides for use as taste modulators |
| CN104111303A (zh) * | 2014-06-19 | 2014-10-22 | 福建省山河药业有限公司 | 一种红色诺卡氏菌细胞壁骨架的鉴别方法 |
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