JPS62270A - 新規な微生物 - Google Patents
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- JPS62270A JPS62270A JP14110585A JP14110585A JPS62270A JP S62270 A JPS62270 A JP S62270A JP 14110585 A JP14110585 A JP 14110585A JP 14110585 A JP14110585 A JP 14110585A JP S62270 A JPS62270 A JP S62270A
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- amino acids
- arthrobacter
- reaction
- amino acid
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- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はアル／’、Ｏバクター（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ ｌ属に属し、５ｆ換ヒダントイン及びＮ−カルバ
モイルアミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転
換する能力を有する新規な微生物に関するものである。
ｅｒ ｌ属に属し、５ｆ換ヒダントイン及びＮ−カルバ
モイルアミノ酸を対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転
換する能力を有する新規な微生物に関するものである。
なお、本発明において、特に断わらない限り５置換ヒダ
ントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸なる化合物は、
各々Ｄ体、５体、ＤＬ体の総称を意味する。
ントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸なる化合物は、
各々Ｄ体、５体、ＤＬ体の総称を意味する。
従来、ＤＬ−５置換ヒダントイン類を酵素的にＬ−アミ
ノ酸に転換する方法については、特公昭４２−１３８５
０号以降多くの特許出願がなされており、特に芳香族ア
ミノ酸の製造方法としては、フラボバクテリウム アミ
ノゲネス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉ−ｕｍ ａｍｉｎ
ｏｇｅｎｅｓ ｌ ＦＥＲＭ −３１３３及びその変異
株ＦＥＲＭ−３１３４、ＦＥＲＭ −３１３５を５置換
ヒダントイ／に作用させる方法が知られている。
ノ酸に転換する方法については、特公昭４２−１３８５
０号以降多くの特許出願がなされており、特に芳香族ア
ミノ酸の製造方法としては、フラボバクテリウム アミ
ノゲネス（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉ−ｕｍ ａｍｉｎ
ｏｇｅｎｅｓ ｌ ＦＥＲＭ −３１３３及びその変異
株ＦＥＲＭ−３１３４、ＦＥＲＭ −３１３５を５置換
ヒダントイ／に作用させる方法が知られている。
４７’１−１Ｌ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を酵素的に
Ｌ−アミノ酸に転換する方法としては、Ｌ−又１−ｊ）
ＤＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニンにコリネハクテリウ
ムセペドニカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓ
ｅｐｅ−ｄｏｎｉｃａｍ ） Ｉ Ｆ ０３３０６等を
作用させて、含まれるＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニン
−１Ｌ−メチオニンに転換する方法が知られている（特
公昭５５−２９６７８号）。しかし、この方法によって
転換することができるのは５体のみであってＤ体をＬ−
メチオニンに転換することはできない。
Ｌ−アミノ酸に転換する方法としては、Ｌ−又１−ｊ）
ＤＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニンにコリネハクテリウ
ムセペドニカム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｓ
ｅｐｅ−ｄｏｎｉｃａｍ ） Ｉ Ｆ ０３３０６等を
作用させて、含まれるＬ−Ｎ−カルバモイルメチオニン
−１Ｌ−メチオニンに転換する方法が知られている（特
公昭５５−２９６７８号）。しかし、この方法によって
転換することができるのは５体のみであってＤ体をＬ−
メチオニンに転換することはできない。
更にまた、従来の酵素法によるＬ−アミノ酸の製造法で
は、５置換ヒダントインを原料とする場合とＮ−カルバ
モイルアミノ酸を原料とする場合とでは、各々別種の微
生物を使用する必要があり、５置換ヒダ／トインとＮ−
カルバモイルアミノ酸の両方に作用し、対応するそれぞ
れのＬ−アミノ酸に転換しうる微生物は見出されていな
かった。
は、５置換ヒダントインを原料とする場合とＮ−カルバ
モイルアミノ酸を原料とする場合とでは、各々別種の微
生物を使用する必要があり、５置換ヒダ／トインとＮ−
カルバモイルアミノ酸の両方に作用し、対応するそれぞ
れのＬ−アミノ酸に転換しうる微生物は見出されていな
かった。
従って、ＤＬ−５置換ヒダントイン類を原料とする場合
には、その原料の製造の際に副生じたＤＬ−Ｎ−カルバ
モイルアミノ酸を除去する必要があり、またＤＬ−Ｎ−
カルバモイルアミノ酸を原料とする場合にはＤ−Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸が反応系に混入するのを防止する措
置又は反応終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ
酸を分取、ラセミ化するだめの煩雑女工程を採らざるを
得なかった。更に、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
水溶性塩として用いれば反応液濃度を高くできるため反
応を有利に行ない得るはずであるが、Ｄ体のＮ−カルバ
モイルアミノ酸に作用してＬ−アミノ酸に転換し得る微
生物がなく操作の単純化は不可能であった。
には、その原料の製造の際に副生じたＤＬ−Ｎ−カルバ
モイルアミノ酸を除去する必要があり、またＤＬ−Ｎ−
カルバモイルアミノ酸を原料とする場合にはＤ−Ｎ−カ
ルバモイルアミノ酸が反応系に混入するのを防止する措
置又は反応終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ
酸を分取、ラセミ化するだめの煩雑女工程を採らざるを
得なかった。更に、ＤＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を
水溶性塩として用いれば反応液濃度を高くできるため反
応を有利に行ない得るはずであるが、Ｄ体のＮ−カルバ
モイルアミノ酸に作用してＬ−アミノ酸に転換し得る微
生物がなく操作の単純化は不可能であった。
本発明者らは、５置換ヒダントイン類の微生物による分
解機作について研究中、発明者らが土壌中よシ新たに分
離した微生物がヒダントイン化合物を開裂し、アミノ酸
を生成する際にＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸とＤ−Ｎ
−カルバモイルアミノ酸を生成すること、そして逐次的
に生成してくるアミノ酸がＬ体であることから、この微
生物が従来知られていない能力を有するものであるとと
。
解機作について研究中、発明者らが土壌中よシ新たに分
離した微生物がヒダントイン化合物を開裂し、アミノ酸
を生成する際にＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸とＤ−Ｎ
−カルバモイルアミノ酸を生成すること、そして逐次的
に生成してくるアミノ酸がＬ体であることから、この微
生物が従来知られていない能力を有するものであるとと
。
を見出し、本発明を完成した。
すなわち本発明は、アルスロバクタ−属に属し、５置換
ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸を対応する
それぞれのＬ−アミノ酸に転換する能力を有する新菌種
アルスロバクタ−エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ、 ） Ｄ Ｐ −Ｂ −１００１（微工研菌寄
第８１９０号）である。
ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ酸を対応する
それぞれのＬ−アミノ酸に転換する能力を有する新菌種
アルスロバクタ−エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ
ｓｐ、 ） Ｄ Ｐ −Ｂ −１００１（微工研菌寄
第８１９０号）である。
アルスロバクタ−エスピー Ｄ Ｐ −Ｂ−１００１は
、本発明者らが栃木県日光市の土壌中よυ新たに分離し
た微生物であって、下記の菌学的性質を有する。
、本発明者らが栃木県日光市の土壌中よυ新たに分離し
た微生物であって、下記の菌学的性質を有する。
以上の結果から、ＤＰ−Ｂ −１００１株の菌学的諸性
質の特徴として、（１１グラム染色性が微陽性であシ、
培養の経過とともに変化し、形態的にも特徴ある多形性
を示すこと、（２）胞子をつくらないこと、（３）細胞
壁の塩基性アミノ酸がリジンであること等が挙げられる
。
質の特徴として、（１１グラム染色性が微陽性であシ、
培養の経過とともに変化し、形態的にも特徴ある多形性
を示すこと、（２）胞子をつくらないこと、（３）細胞
壁の塩基性アミノ酸がリジンであること等が挙げられる
。
これらの性質を基準にしてパーシーズ・マニュアル・オ
ブ・デターミネーテイブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ ＢａＣｔｅｒｉ−ｏｌｏｇｙ ）第８版にて検
索すると、Ｄ Ｐ −Ｂ−１００１株はアルスロバクタ
−属に属する細菌であると判断される。しかし、アルス
ロバクタ−属に含まれる種について、更に検索を行なっ
てもＤＰ−Ｂ−１００１株と一致する菌種の記載を見出
せない。
ブ・デターミネーテイブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ ＢａＣｔｅｒｉ−ｏｌｏｇｙ ）第８版にて検
索すると、Ｄ Ｐ −Ｂ−１００１株はアルスロバクタ
−属に属する細菌であると判断される。しかし、アルス
ロバクタ−属に含まれる種について、更に検索を行なっ
てもＤＰ−Ｂ−１００１株と一致する菌種の記載を見出
せない。
バーシーズ・マニュアル・オブ・デタミネーテイブパク
テリオロジー第８版の記載によると、アルスロバクタ−
属に属する微生物は、ビタミン要求性等によシフ種に分
類されている。ＤＰ−Ｂ−１００１株はビオチンのみを
要求している点はアルスロバクタ−グロビ７オルミス（
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ ）
に一致しているが、ＤＮＡのＧＣ含量が５９．３％で１
）アルスロバクタ−グロビ７オルミスの６０〜６４．４
％の範囲になく明らかに相違する。更に、Ｄ Ｐ −Ｂ
−１００１株が５置換ヒダ／トインとＮ−カルバモイ
ルアミノ酸の両方に作用して対応するそれぞれのＬ−ア
ミノ酸に転換する能力も本発明の微生物の特徴である。
テリオロジー第８版の記載によると、アルスロバクタ−
属に属する微生物は、ビタミン要求性等によシフ種に分
類されている。ＤＰ−Ｂ−１００１株はビオチンのみを
要求している点はアルスロバクタ−グロビ７オルミス（
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ ）
に一致しているが、ＤＮＡのＧＣ含量が５９．３％で１
）アルスロバクタ−グロビ７オルミスの６０〜６４．４
％の範囲になく明らかに相違する。更に、Ｄ Ｐ −Ｂ
−１００１株が５置換ヒダ／トインとＮ−カルバモイ
ルアミノ酸の両方に作用して対応するそれぞれのＬ−ア
ミノ酸に転換する能力も本発明の微生物の特徴である。
そこで、本発明者らはＤＰ−Ｂ−１００１株をアルスロ
バクタ−属に属する新菌種と認め、アルスロバクタ−エ
スピー Ｄ Ｐ −Ｂ −１００１と命名し、前記した
如く工業技術院微生物工業技術研究所に寄託した。
バクタ−属に属する新菌種と認め、アルスロバクタ−エ
スピー Ｄ Ｐ −Ｂ −１００１と命名し、前記した
如く工業技術院微生物工業技術研究所に寄託した。
このアルスロバクタ−エスピーＤＰ−Ｂ−１００１は、
例えば後記実施例に記載の方法により土壌中よシ分離さ
れた。
例えば後記実施例に記載の方法により土壌中よシ分離さ
れた。
本発明のアルスロバクタ−エスピー ＤＰ−Ｂ −１０
０１を用いてＬ−アミノ酸を製造するには、例えばこれ
を適当な培地中で培養して得た培養物を酵素源としてＮ
−カルバモイルアミノ酸又ハ／及び５ｆｉ換ヒダ／トイ
ンに作用させる。
０１を用いてＬ−アミノ酸を製造するには、例えばこれ
を適当な培地中で培養して得た培養物を酵素源としてＮ
−カルバモイルアミノ酸又ハ／及び５ｆｉ換ヒダ／トイ
ンに作用させる。
培地としては、炭素源、窒素源、無機塩類等をき有する
通常の培地を使用することができる。炭素源としては、
例えばグルコース、フラクトース、シュークロース、マ
ルトース等の糖；グリセリン、マンニット等の糖アルコ
ール；７マル酸、クエン酸等の有機酸が適宜使用できる
。窒素源としては、肉エキス、酵母エキス、ポリベット
／、コーンステイープリカー等の天然有機窒素源の他、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸ア／モ二
ラム等の無機アンモニア源及びフマル酸アンモニウム、
クエン酸アンモニウム等の有機酸のアンモニウム塩を使
用することができる。また、無機塩類としては、リン酸
−ナトリウム、リン酸−カリウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン等が使用できる。さらに酢酸コバルトなどの有機塩
類も適宜使用することができる。なお、ＤＰ−Ｂ−１０
０１株はＤＬ−５−インドリルメチルヒダントイ／を培
地に０，０５〜０．２重量％添加することで、さらに高
い活性を得ることができる。
通常の培地を使用することができる。炭素源としては、
例えばグルコース、フラクトース、シュークロース、マ
ルトース等の糖；グリセリン、マンニット等の糖アルコ
ール；７マル酸、クエン酸等の有機酸が適宜使用できる
。窒素源としては、肉エキス、酵母エキス、ポリベット
／、コーンステイープリカー等の天然有機窒素源の他、
塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、リン酸ア／モ二
ラム等の無機アンモニア源及びフマル酸アンモニウム、
クエン酸アンモニウム等の有機酸のアンモニウム塩を使
用することができる。また、無機塩類としては、リン酸
−ナトリウム、リン酸−カリウム、硫酸マグネシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸第一鉄、硫酸マン
ガン等が使用できる。さらに酢酸コバルトなどの有機塩
類も適宜使用することができる。なお、ＤＰ−Ｂ−１０
０１株はＤＬ−５−インドリルメチルヒダントイ／を培
地に０，０５〜０．２重量％添加することで、さらに高
い活性を得ることができる。
培養は、常法に従って実施することができ、例えば培地
のｐＨは５〜９、好ましくは６〜８．５の範囲に調節し
、菌株を接種した後、約２０〜３５℃、好ましくは２６
〜３０℃の範囲で通気攪拌下、１６〜７２時間培養する
方法が採用される。
のｐＨは５〜９、好ましくは６〜８．５の範囲に調節し
、菌株を接種した後、約２０〜３５℃、好ましくは２６
〜３０℃の範囲で通気攪拌下、１６〜７２時間培養する
方法が採用される。
斯くして得られた培養物は、そのまま酵素源として用い
ることができるが、培養液、粗酵素標品、精製酵素標品
は勿論、該培養液から採取した菌体又は例えば凍結乾燥
菌体、アセトン乾燥菌体、菌体破砕物、洗浄菌体等の該
菌体の処理物等の形態で使用することもできる。更に菌
体あるいは菌体処理物を例えばポリアクリルアミド、ア
ルギン酸カルシウム、カラギーナン、光架橋樹脂等に公
知の方法により固定化して用いることもできる。
ることができるが、培養液、粗酵素標品、精製酵素標品
は勿論、該培養液から採取した菌体又は例えば凍結乾燥
菌体、アセトン乾燥菌体、菌体破砕物、洗浄菌体等の該
菌体の処理物等の形態で使用することもできる。更に菌
体あるいは菌体処理物を例えばポリアクリルアミド、ア
ルギン酸カルシウム、カラギーナン、光架橋樹脂等に公
知の方法により固定化して用いることもできる。
また、Ｎ−カルバモイルアミノ酸又は／及び５置換ヒダ
ントインを対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する
反応は、例えばこれらの化合物と上記培養物とを水性媒
体中に共存せしめることにより実施される。
ントインを対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する
反応は、例えばこれらの化合物と上記培養物とを水性媒
体中に共存せしめることにより実施される。
この場合、本発明の微生物の特異な能力から、Ｎ−カル
バモイルアミノ酸及び５置換ヒダントインは、それぞれ
０体、Ｌ体、ＤＬ体のいずれであっても対応するそれぞ
れのＬ−アミノ酸に転換することができる。従って、本
発明の微生物を用いてＬ−アミノ酸を製造するための原
料化合物としては、対応するＬ−アミノ酸が同一のＮ−
カルバモイルアミノ酸又は５置換叫ダントイ／の０体、
Ｌ体、ＤＬ体あるいはこれらの任意の組合せからなる混
合物を使用することができる。なお、Ｎ−カルバモイル
アミノ酸は、そのナトリウム塩等の水溶性塩の形で反応
に供することもできる。
バモイルアミノ酸及び５置換ヒダントインは、それぞれ
０体、Ｌ体、ＤＬ体のいずれであっても対応するそれぞ
れのＬ−アミノ酸に転換することができる。従って、本
発明の微生物を用いてＬ−アミノ酸を製造するための原
料化合物としては、対応するＬ−アミノ酸が同一のＮ−
カルバモイルアミノ酸又は５置換叫ダントイ／の０体、
Ｌ体、ＤＬ体あるいはこれらの任意の組合せからなる混
合物を使用することができる。なお、Ｎ−カルバモイル
アミノ酸は、そのナトリウム塩等の水溶性塩の形で反応
に供することもできる。
反応はｐＨ６〜１１、好ましくはｐＨ６，５〜９．５の
範囲で行なうのが好適である。ｐＨの調整は、リン酸緩
衝液、アンモニウム緩衝液等の通常使用されている緩衝
液が使用できる。反応温度は１０〜５０℃、好ましくは
３０〜４０℃の範囲に調節するのが好適である。
範囲で行なうのが好適である。ｐＨの調整は、リン酸緩
衝液、アンモニウム緩衝液等の通常使用されている緩衝
液が使用できる。反応温度は１０〜５０℃、好ましくは
３０〜４０℃の範囲に調節するのが好適である。
なお、反応液に鉄、マンガン、コバルト等の無機イオン
又は亜硫酸ナトリウム等の還元性物質を添加、あるいは
窒素ガスの吹き込みを行なうと、反応速度が増大ないし
は培養物の酵素活性を安定化することができ好ましい結
果を与える。また、菌体の反応液からの回収、反応への
再使用が可能になる。無機イオンは０．１〜１０ｍＭに
なるように添加するのが好ましい。
又は亜硫酸ナトリウム等の還元性物質を添加、あるいは
窒素ガスの吹き込みを行なうと、反応速度が増大ないし
は培養物の酵素活性を安定化することができ好ましい結
果を与える。また、菌体の反応液からの回収、反応への
再使用が可能になる。無機イオンは０．１〜１０ｍＭに
なるように添加するのが好ましい。
また、反応液に加えられる５置換ヒダントインの量はそ
の溶解度以上であっても、不溶分は反応進行に伴ない溶
解し逐次Ｌ−アミノ酸に転換されてゆくため反応に支障
は生じない。更にまた、Ｎ−カルバモイルアミノ酸は水
溶性塩の形で添加できるため、原料濃度を高く保つこと
ができる。従って、固定化菌体をカラムに充填した反応
器に原料溶液を流下させる方法により反応を行なう場合
、５置換ヒダントインのみではなく、Ｎ−カルバモイル
アミノ酸の水溶性塩を原料として使用できるため、殺菌
操作を行なう場合も含め操作を容易かつ高濃度で効率よ
く行なうことができる。
の溶解度以上であっても、不溶分は反応進行に伴ない溶
解し逐次Ｌ−アミノ酸に転換されてゆくため反応に支障
は生じない。更にまた、Ｎ−カルバモイルアミノ酸は水
溶性塩の形で添加できるため、原料濃度を高く保つこと
ができる。従って、固定化菌体をカラムに充填した反応
器に原料溶液を流下させる方法により反応を行なう場合
、５置換ヒダントインのみではなく、Ｎ−カルバモイル
アミノ酸の水溶性塩を原料として使用できるため、殺菌
操作を行なう場合も含め操作を容易かつ高濃度で効率よ
く行なうことができる。
かくして反応は数時間〜８０時間程度で終了し、反応に
供した５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ
酸は完全にＬ−アミノ酸に転換され、反応液中に蓄積さ
れる。生成したＬ−アミノ酸は通常の結晶化法、イオン
交換樹脂法その他公知の方法を適宜使用することによシ
、容易に分離精製することができる。特に、高濃度で反
応を行なった場合には、反応液の冷却、ｐＨ調整によっ
てＬ−アミノ酸を容易に結晶として得ることができる。
供した５置換ヒダントイン及びＮ−カルバモイルアミノ
酸は完全にＬ−アミノ酸に転換され、反応液中に蓄積さ
れる。生成したＬ−アミノ酸は通常の結晶化法、イオン
交換樹脂法その他公知の方法を適宜使用することによシ
、容易に分離精製することができる。特に、高濃度で反
応を行なった場合には、反応液の冷却、ｐＨ調整によっ
てＬ−アミノ酸を容易に結晶として得ることができる。
なお、得られたアミノ酸が目的とするＬ−アミノ酸であ
ることは、ロイコノストックメゼンテロイデスを用いた
バイオアッセイ法及び高速液体クロマドグラフィー、ア
ミノ酸分析計を用いて確認することができる。
ることは、ロイコノストックメゼンテロイデスを用いた
バイオアッセイ法及び高速液体クロマドグラフィー、ア
ミノ酸分析計を用いて確認することができる。
本発明のアルスロバクタ−エスピー ＤＰ−Ｂ −１０
０１は、後記試験例に示す如く５置換ヒダ／トイン及び
Ｎ−カルバモイルアミノ酸ｉＤ体、５体、ＤＬ体の如何
を問わず対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する作
用を有する。
０１は、後記試験例に示す如く５置換ヒダ／トイン及び
Ｎ−カルバモイルアミノ酸ｉＤ体、５体、ＤＬ体の如何
を問わず対応するそれぞれのＬ−アミノ酸に転換する作
用を有する。
本発明の新規微生物は叙上の如き能力を有するため、こ
れをＬ−アミノ酸の製造に用いれば、その生産性の飛躍
的な向上を図ることができる。すなわち、 （１）従来、適当な微生物がなく使用し得なかったＤ−
Ｎ−カルバモイルアミノ酸をも対応するＬ−アミノ酸展
造の出発原料にできる。
れをＬ−アミノ酸の製造に用いれば、その生産性の飛躍
的な向上を図ることができる。すなわち、 （１）従来、適当な微生物がなく使用し得なかったＤ−
Ｎ−カルバモイルアミノ酸をも対応するＬ−アミノ酸展
造の出発原料にできる。
（２） 化学的に５置換ヒダ／トインを製造する際に
副生ずるＤＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を反応系から
除去する必要がないため、工業的に容易かつ安価に得ら
れるＤＬ−５置換ヒゲ／トイ／とＤＬ−・Ｎ−カルバモ
イルアミノ酸の混合物から一段の反応で定磯的にＬ−ア
ミノ酸を製造することができる。それ故、従来のＤＬ−
５を換ヒダントイ／類を出発原料にするＬ−アミノｉ！
！！２製造工程に必要であったＤＬ−５置換ヒダ／トイ
ンへのＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混入を防止する
措置及び反応終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を分取、ラセミ化するための煩・帷な工程が全く不
要となり、製造工程が極めて単純化されると共に目的と
するＬ−アミノ酸を高収率で製造できるようになった。
副生ずるＤＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸を反応系から
除去する必要がないため、工業的に容易かつ安価に得ら
れるＤＬ−５置換ヒゲ／トイ／とＤＬ−・Ｎ−カルバモ
イルアミノ酸の混合物から一段の反応で定磯的にＬ−ア
ミノ酸を製造することができる。それ故、従来のＤＬ−
５を換ヒダントイ／類を出発原料にするＬ−アミノｉ！
！！２製造工程に必要であったＤＬ−５置換ヒダ／トイ
ンへのＤ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の混入を防止する
措置及び反応終了後残存するＤ−Ｎ−カルバモイルアミ
ノ酸を分取、ラセミ化するための煩・帷な工程が全く不
要となり、製造工程が極めて単純化されると共に目的と
するＬ−アミノ酸を高収率で製造できるようになった。
（３）ＤＬ−Ｎ−カルバモイルアミノ酸の水溶性塩を原
料として固定化菌体カラムを用いて反応を行ない得るの
で、製造工程の連続化が容易である。
料として固定化菌体カラムを用いて反応を行ない得るの
で、製造工程の連続化が容易である。
次に実施例及び試験例を挙げて説明する。
実施例１
アルスロバクタ−エスピー Ｄ Ｐ −１３−ｔｏｏｉ
株は栃木県日光市の土壌から以下の方法でスクリーニン
グを行なった結果単離されたものである。
株は栃木県日光市の土壌から以下の方法でスクリーニン
グを行なった結果単離されたものである。
土壌約０．５？を滅菌水５−に懸濁し希釈した後トリプ
トンイ寒天平板上に塗布し、２８℃にて培養を行って菌
を得た。このようにして得た菌をグルコース１ｏ Ｐ／
Ａ、酵母エキス５？／ノ、ポリペプトン５ Ｌ？／１３
、肉エキス２ ｆ−／４３、ＭｇＳＯ４・７１（、ＯＯ
，４ｆ−／Ａ、ＦｅＳ、Ｏ４・７Ｈ，ＯＯ，０１ｔ／
１３、Ｍｎ５Ｏ１−５Ｈ，ＯＯ，０１’／ ／−１３か
ら成りｐＨを７．０に調節した液体培地に接種し、２８
℃２日間振とう培養を行ない菌体を得た。菌体は１０
ｔ／４３のＮ−カルバモイルアミノ酸（例えばＤＬ−Ｎ
−カルバモイルトリブトファン）又は５置換ヒダントイ
／（例えばＤＬ−５−インドリルメチルヒダントイン）
を含む０．２ Ｍアンモニウム緩衝液（ｐＨ９，ＯＪに
添加し、３７℃に２４時間保温した。保温後緩衝液上清
中のＬ−アミノ酸をロイコノストック・メゼンテロイデ
スＰ−６０を用いたバイオアッセイ法及びシリカゲルプ
Ｌ／−）による薄層クロマトグラフィーにより測定した
所、特に高いアミノ酸生成活性を与えた菌株として本面
が得られた。
トンイ寒天平板上に塗布し、２８℃にて培養を行って菌
を得た。このようにして得た菌をグルコース１ｏ Ｐ／
Ａ、酵母エキス５？／ノ、ポリペプトン５ Ｌ？／１３
、肉エキス２ ｆ−／４３、ＭｇＳＯ４・７１（、ＯＯ
，４ｆ−／Ａ、ＦｅＳ、Ｏ４・７Ｈ，ＯＯ，０１ｔ／
１３、Ｍｎ５Ｏ１−５Ｈ，ＯＯ，０１’／ ／−１３か
ら成りｐＨを７．０に調節した液体培地に接種し、２８
℃２日間振とう培養を行ない菌体を得た。菌体は１０
ｔ／４３のＮ−カルバモイルアミノ酸（例えばＤＬ−Ｎ
−カルバモイルトリブトファン）又は５置換ヒダントイ
／（例えばＤＬ−５−インドリルメチルヒダントイン）
を含む０．２ Ｍアンモニウム緩衝液（ｐＨ９，ＯＪに
添加し、３７℃に２４時間保温した。保温後緩衝液上清
中のＬ−アミノ酸をロイコノストック・メゼンテロイデ
スＰ−６０を用いたバイオアッセイ法及びシリカゲルプ
Ｌ／−）による薄層クロマトグラフィーにより測定した
所、特に高いアミノ酸生成活性を与えた菌株として本面
が得られた。
試験例１
（１）種菌の培養
実施例１で用いたものと同じ液体培地を５００ｍ１容三
角フラスコに２００ｄ分注し、滅菌後参考例１で得たア
ルスロバクタ−エスピー ＤＰ−Ｂ −１００１株を一
白金耳接種し、２８℃で２４時間振とり培養した。
角フラスコに２００ｄ分注し、滅菌後参考例１で得たア
ルスロバクタ−エスピー ＤＰ−Ｂ −１００１株を一
白金耳接種し、２８℃で２４時間振とり培養した。
（２）本培養、菌体作成
実施例１で用いたものと同じ液体培地に０．１５−の５
−インドリルメチルヒダントインを添加した培地を調製
し、＋１）で得られた培養液を４ ｍｌ接種し、２８℃
で２４時間振とう培養した。培養液から、１８０００Ｇ
、１０分間の遠心によシ菌体を集め、生理食塩水によ
り１回洗浄し、湿菌体を得、酵素反応に用いる洗浄菌体
とした。
−インドリルメチルヒダントインを添加した培地を調製
し、＋１）で得られた培養液を４ ｍｌ接種し、２８℃
で２４時間振とう培養した。培養液から、１８０００Ｇ
、１０分間の遠心によシ菌体を集め、生理食塩水によ
り１回洗浄し、湿菌体を得、酵素反応に用いる洗浄菌体
とした。
（３）酵素反応
（２）で得られた洗浄菌体１０？を棺製氷５０−に懸濁
したものに、ｏ、 ８ Ｍ ＮＨ４０Ｈ−ＮＨｌ（Ｊ
（ｐＨ８，Ｏ）、４ ｍＭ Ｆｅ５０４−７Ｈ，Ｏ及び
４ ｍＭ ＭｎＳＯ４・５Ｈ，Ｏなる組成の緩衝液２５
ｒｎｌを加え、更に原料として■Ｄジル）ヒダ／トイン
１０ｙ−１■ＤＬ−５−（４’−ヒドロキシベンジル）
ヒダントインｌｉ、ＱＤＬ−５−インドリルメチルヒダ
ントイン１％、ＱＤＬ−５−メチルメルカプトエチルヒ
ダントイン１？、ＣＩＤＬ−５−イソプロピルヒダント
インＩ Ｐ、０ＤＬ−５−インブチルヒダントイン１？
をそれぞれ懸濁し、Ｎ２気流を吹き込み３７℃に４８時
間保温した。
したものに、ｏ、 ８ Ｍ ＮＨ４０Ｈ−ＮＨｌ（Ｊ
（ｐＨ８，Ｏ）、４ ｍＭ Ｆｅ５０４−７Ｈ，Ｏ及び
４ ｍＭ ＭｎＳＯ４・５Ｈ，Ｏなる組成の緩衝液２５
ｒｎｌを加え、更に原料として■Ｄジル）ヒダ／トイン
１０ｙ−１■ＤＬ−５−（４’−ヒドロキシベンジル）
ヒダントインｌｉ、ＱＤＬ−５−インドリルメチルヒダ
ントイン１％、ＱＤＬ−５−メチルメルカプトエチルヒ
ダントイン１？、ＣＩＤＬ−５−イソプロピルヒダント
インＩ Ｐ、０ＤＬ−５−インブチルヒダントイン１？
をそれぞれ懸濁し、Ｎ２気流を吹き込み３７℃に４８時
間保温した。
反応終了後、菌体を遠心分離により除き、遠心上清中の
アミノ酸を実施例１と同様にして定量したところ、次の
＠２表に示す量のＬ−アミノ酸が蓄積していた。
アミノ酸を実施例１と同様にして定量したところ、次の
＠２表に示す量のＬ−アミノ酸が蓄積していた。
以下余白
第２表
＊ 第１表と同じ。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、アルスロバクター属に属し、５置換ヒダントイン及
びＮ−カルバモイルアミノ酸を対応するそれぞれのＬ−
アミノ酸に転換する能力を有する新菌種アルスロバクタ
ーエスピーＤＰ− Ｂ−１００１（微工研菌寄第８１９０号）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14110585A JPS62270A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP14110585A JPS62270A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62270A true JPS62270A (ja) | 1987-01-06 |
| JPH0439315B2 JPH0439315B2 (ja) | 1992-06-29 |
Family
ID=15284294
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14110585A Granted JPS62270A (ja) | 1985-06-27 | 1985-06-27 | 新規な微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62270A (ja) |
-
1985
- 1985-06-27 JP JP14110585A patent/JPS62270A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0439315B2 (ja) | 1992-06-29 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |