JPS6236008B2

JPS6236008B2 -

Info

Publication number: JPS6236008B2
Application number: JP52011878A
Authority: JP
Inventors: Kazunari Myazaki; Hisashi Tamaoka; Taketoshi Izawa; Masanao Shinohara; Yoshimasa Nakano
Original assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Otsuka Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1977-02-04
Filing date: 1977-02-04
Publication date: 1987-08-05
Also published as: JPS5399314A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な腎炎治療剤に関する。従来より抗補体活性物質に関する研究は種々行
なわれているが、抗補体活性を有する物質が微生
物の培養によつて収得できるという報告は皆無で
あり、また抗補体活性を有する物質がその抗補体
作用を利用して腎炎の治療薬として利用できると
報告された例も全く認められない。本発明者らは、かねてより上記抗補体活性物質
についての研究を重ねてきたが、その過程におい
てスタキボトリス属に属する微生物が抗補体活性
を有する物質を生産するという新しい事実及び該
微生物起源の抗補体活性物質は腎炎に対する治療
効果を奏するという新規事実を発見した。本発明
は之等の知見に基づいて完成されたものである。
即ち本発明は、スタキボトリス属に属する抗補体
活性物質生産能を有する菌の培養によつて得ら
れ、抗補体活性作用を有する培養混合物を有効成
分として含有することを特徴とする腎炎治療剤に
係る。本発明腎炎治療剤の有効成分とする抗補体活性
作用を有する培養混合物は、スタキボトリス属に
属する菌の培養により収得される。ここでスタキ
ボトリス属に属する菌としては公知の各種微生物
及び本発明者らが土壌より新たに分離収得した微
生物を使用できる。代表的な公知のスタキボトリ
ス属に属する微生物としては以下のものを例示で
きる。 Γ スタキボトリスアルタナンスIFO 9355 （Stachybotrys alternans IFO 9355） Γ スタキボトリスカルタルムIFO 5369 （Stachybotrys chartarumIFO 5369） Γ スタキボトリスカルタルムIFO 7222 Γ スタキボトリスシリドロスポラ 8858 （Stachybotrys cylindrospora 8858） Γ スタキボトリスエチナータ 7525 （Stachybotrys echinata 7525） Γ スタキボトリスレニホルミス 7067 （Stachybotrys reniformis 7067）また本発明者らが新たに分離収得したスタキボ
トリス属に属する菌としては以下に述べる通り新
菌種と認められ本発明者らが夫々スタキボトリス
エスピー．Ｋ−76，Ｔ−789及びＴ−791と命名し
た菌を使用できる。採集地１スタキボトリスエスピー．Ｋ−76 沖縄県石垣市の土壌より分離。２スタキボトリスエスピー．Ｔ−789 徳島県鳴門市の土壌より分離。３スタキボトリスエスピー．Ｔ−791 徳島県徳島市の土壌より分離。各種培養基上の性状１スタキボトリスエスピー．Ｋ−76 本菌系の肉眼的及び顕微鏡的観察（第１図及び
第２図に示す）に基く各種培地上における特徴を
次に示す。Ａ肉眼的観察通常の糸状菌培養に用いられる種々の培地上
できわめて良好な生育を示す。梗子胞子の着生
は、オートミル寒天培地を除き必ずしも良好で
はない。以下代表的培地における生育状態を記
す。１生育比較的緩慢で27℃、30日間の培養で30
〜35mmの巨大集落を示す。集落は円形に生育
し、周辺部は大きなぎざぎざ状である。集落
表面は平坦で、中央部に円形マツト様に厚く
空中気糸が伸びて密生し培養初期の白色から
次第にライトアイボリー（Lt−Ivory，
2ca）の色調を示す。梗子胞子は培養２週目
頃から、わずかに形成されるが肉眼的にはほ
とんど確認できない。菌核その他の有性胞子
器管は形成されない。裏面は無色からコツパ
ータン（Copper Tan，5ie）。拡散性色素は
コツパータン（Copper Tan，5ie）を産生。２バレイシヨブドウ糖寒伝培地生育良好で27℃、30日間の培養で45〜47mm
に達する。集落は中心凸状の生育をし、周辺
部はぎざぎざ状で集落中心部から同心円状の
褶曲を呈する。培養初期から速やかに白色〜
パールピンク（Pearl Pink，4ca）の菌糸に
厚く覆われ、培養経過が進むにつれ黒灰色
（Gray，ｉ）の菌叢色となる。梗子胞子塊は
非常に多く形成される。液滴も多量に観られ
る。裏面の色はルストタン（Rust Tan，
5le）〜ライトローズブラウン（Lt Rose
Brown ６ 1/2lg）、拡散性色素はバタースコ
ツチ（Butter Scotch，3ne）を呈するがわず
かである。３ツアペツク寒天培地生育良好で27℃、30日間の培養で40〜45mm
に達する。同心円状に褶曲し、集落は中心凸
状の隆起がある。周辺部は波状。裏面の色は
ラギツヂタン（Luggage Tan，4ne）、表面
はトーストタン（Toast Tan，4lg）の空中
菌糸に覆われない中心部から同心円状に薄く
無色から白色の菌糸が着生。液滴は認められ
ないが中心部はきめわて湿潤。梗子胞子は殆
んど形成されない。拡散性色素は微弱でゴー
ルド（Gold，2le）。４オートミール寒天培地生育きわめて速やかで27℃、30日間の培養
で60〜70mmに達する。集落は薄く平坦で倍養
初期から、無色〜白色の菌糸が全面に形成さ
れる。集落の中心付近にのみ３〜４mmの直立
した菌糸が生じるが、密ではない。培養２週
間目で梗子胞子の着生が集落全面にわたり、
ライトオリーブドラブ（Lt Olive Drab，
1li）の色調に変わる。裏面は、ベージュブ
ラウン（Beige Brown，3ig）〜タン
（Tan，3ie）。拡散性色素はコロニアルイエ
ロー（Colonial Yellow，2ca）が微弱に産
生。２スタキボトリスエスピー．Ｔ−789 不完全菌Ｔ−789株の肉眼的および顕微鏡的観
察（第３図に示す）に基く各種培地上における特
徴を次に記載する。本菌株は顕微鏡観察による形
態学的性状においてスタキボトリスエスピー．
Ｋ−76株と全く一致する。しかし培地上での性質
には相違がある。最も異なる下記二種類の培地に
ついて記す。Ａ肉眼的観察１麦芽エキス寒天培地生育きわめて遅く27℃、30日培養で17〜20
mm。集落の周辺部は波状に生育し限局的であ
る。集落は中央部が凸状の隆起を示し周辺部
に放射状の褶曲を生じる。空中菌糸は薄く全
面に着生し、培養初期の白色から次第に胞子
形成がおこり中央部ではモール（Mole，
ｌ）の色調を呈し、密生するが、周辺部にか
けて輪状に胞子形成が見られる。裏面はコー
クタン（Cork Tan，4ie）。拡散性色素は豊
富でアンバー（Amber，3le）。２ツアペツク寒天培地生育良好で27℃、30日の培養で45mmに生
育。集落は中心凸状で放射状の褶曲を形成
し、周辺部は波状の生育を示す。中心凸状部
から外側に同心円状に薄く白色の空中菌糸を
着生し、胞子形成は周辺部にのみ同心円状に
生じ、凸状部は菌糸の溶解した状態となりき
わめて湿潤。裏面はマスタードブラウン
（Mustard Brown，2pi）。拡散性色素産生せ
ず。３スタキボトリスエスピー．Ｔ−791 不完全菌Ｔ−791株の肉眼的および顕微鏡的観
察（第４図に示す）に基く各種培地上における特
徴を次に記す。Ａ肉眼的観察１麦芽エキス寒天培地生育速やかで、不規則な生育を示し裏面の
色は、タン（Tan，3ie）〜ダークブラウン
（Dk Brown，3pn）。集落は平坦で胞子形成
は良好。菌糸はビスケツト（Biscuit，2ec）
〜タン（Tan，3ie）を呈し、浸出液滴が認
められる。拡散性色素産生せず。２バレイシヨブドウ糖培地生育きわめて速やかで、培養27℃、30日で
70mmに達する。周辺部は樹木状に拡がり稀薄
な白色の菌糸着生が認められ、液滴も顕著で
ある。胞子形成はほとんどない。裏面はライ
トアンバー（Lt Amber，3ie）。拡散性色素
なし。３ツアペツク寒天培地生育不良４合成ムコール寒天培地生育不良５オートミール寒天培地きわめて生育良好で２週間でシヤーレを覆
う。集落は薄く平坦で、培養初期から菌糸の
形成が豊富で胞子形成も速やか。菌叢色は白
色からダークブラウン（Dk Brown，3pn）
に培養の経過につれて変化する。菌糸に多量
の液滴を生ずる。拡散性色素産生せず。生理学的性質Ｋ−76，Ｔ−789及びＴ−791はいずれも好気性
菌で次の生理学的性質を有する。１スタキボトリスエスピー．Ｋ−76 PH 温度生育し得る条件 3.5〜11.5 15〜35℃ 最適生育条件 6.0〜9.5 20〜32℃ ２スタキボトリスエスピー．Ｔ−789 PH 温度生育し得る条件 3.5〜11.5 15〜38℃ 最適生育条件 4.5〜10.5 20〜32℃ ３スタキボトリスエスピー．Ｔ−791 PH 温度生育し得る条件 3.5〜11.5 15〜38℃ 最適生育条件 4.5〜9.5 20〜30℃ 形態学的性質１スタキボトリスエスピー．Ｋ−76 第１図及び第２図から以下のことが判る。即ち
各種培地上で菌核およびその他の有性器管は確認
されず、梗子胞子型の無性胞子形成が観察され
る。菌糸は多種の培地上で形成され、複雑に分枝し
２〜４μの菌糸幅で縦横に伸長している。梗子柄は菌糸から単純分枝をなし（１個の梗子
柄からの他の梗子柄への分枝はなし）基部の足細
胞から３〜４個の隔壁を有して、直立もしくはゆ
るいわん曲をなして伸長する。梗子柄の菌糸幅は
基部で4.3〜4.7μ、中央部で3.6〜4.5μ。梗子柄
の先端はわずかに膨らみその頂端から大きさ7.9
〜9.3×3.6〜4.7μの楕円形〜徳利型の梗子が３〜
７個直立して形成される。梗子は平滑で無色〜薄
黄褐色を呈する。梗子胞子は梗子の先端から求基
的に連結して生じ直鎖は作らず半月状の小塊とな
りその数７〜26個。梗子柄は大きさ4.9〜8.0×3.3
〜4.7μの亜球型〜卵形でありその表面は粗面〜
イボ状。又その色調はダークアイブイ（Dk Ivy
24po）〜灰黒色を呈する。梗子胞子塊は粘生物
による被膜は観察されない。上記の菌学的性質を有する本菌の分類学上の位
置を検策便覧「ザジエネラオブハイフオミセテスフ
ロムソイル（The Genera of Hyphomycetes
from Soil、The Williams ＆ Wilkins
Company、G.L. Barron、1968年）」、「アマニユアルオブソイルフンヂヤイ
（Ａ MANUAL OF SOIL FUNGI、The Iowa
State University Press Ames Iowa USA、J.
C.Gilman、1971年）」および「ザジエネラオブ、フンヂヤイスポロレ
ーテイングインピユアカルチヤー（The
Genera of Fungi Sporolating in Pure
Culture、VERAG VON J.CREMER 3301
LEHRE、J.A.VON ARX、1970年）」により検策すると本菌はサツカルド
（Saccardo）の分類系式に従うとハイフオミセテ
ス綱デマチヤケアエ科スタキボトリス属に属す
る。即ち子のう果その他の有性性殖器管を有さ
ず、梗子から暗褐色の梗子胞子を生じ、かつ又生
じた梗子胞子が梗子の頂端に半月上に集まる性状
を有する本菌株の性状は、スタキボトリス属の性
状と一致する。本菌の諸性状を上記検索便覧並び
に、ビスビー G.R〔Trans.Brit.Mycol.soc.，26，
133−143（1943）〕、ヅツク R.K〔Mycologia.，38，69−76
（1946）〕及びバロン G.L〔Can.J.Bot.，39，153−157
（1961）〕の文献、更にはIFO保存標準株と比較同定したと
ころ本菌株の梗子胞子は粗面かつイボ状の突起を
有し、卵形〜楕円形の形状を有する点で、スタキ
ボトリスロブラタ（Stachybotrys lobulata
IFO 5369）に最も類似すると判定される。しか
しスタキボトリスロブラタは梗子柄が１mmにも
達するものがあり、又本菌株が単純分枝をなすの
に対し１つの梗子株から更に梗子柄が分枝伸長す
る性質を有する点において異なる。各種培地での
生育状態において本菌株は多量の拡散性色素を産
生しかつ胞子形成がポテトグルコース寒天培地お
よびオートミール寒天培地を除く他の寒天培地上
ではきわめて不良であるのに対しスタキボトリス
ロブラタは各種培地上できわめて速やかに生育
しかつ褶曲のない平坦な集落を形成し、又胞子形
成はツアペツク寒天培地を除くほとんどの培地に
おいて菌叢色を代表する程良好であり、拡散性色
素も出さないか出しても微弱である点において相
違する。以上のような相違から、本菌株はスタキボトリ
スロブラタとは異なる新菌種であると判断し、
スタキボトリスエスピー．Ｋ−76株と命名され
た。２スタキボトリスエスピー．Ｔ−789 第３図から次のことが判る。即ち本菌株はスタ
キボトリスエスピー．Ｋ−76と大きさに若干の
差があるが形態学的に全く一致する。上記の菌学的性質を、前述のスタキボトリス
エスピー．Ｋ−76株と同様に検索便覧並びに文献
を参照しかつ又IFO標準株との比較同定するとス
タキボトリスロブラタ IFO 5369およびスタ
キボトリスエスピー．Ｋ−76と最も類似する。
本菌株はツアペツク寒天培地で良好な梗子胞子形
成が認められるが、しかし前２株はツアペツク寒
天培地での梗子胞子の形成はほとんど認められな
い培養上の相違を有する。又前述のスタキボトリスエスピー．Ｋ−76株
の項で述べたようにスタキボトリスロブラタと
は形態学的性状の相違が明白であり、又至適生育
範囲がPH4.5〜10.5に広く存在することからも、
本菌株はＫ−76株とは相違している。従つて以上の理由から、本菌株の新菌種と認め
スタキボトリスエスピー．Ｔ−789と命名し
た。３スタキボトリスエスピー．Ｔ−791 第４図から以下のことが判る。即ち梗子柄は単
純分枝をなして直立する。その先端部でわずかに
こん棒状に膨らむ。しかし標準株スタキボトリス
エチナタ IFO 7525および8856に観察される
様な顕著な膨大はない。梗子柄よりわずかに大き
い菌子幅4.0〜4.5μを示す。栄養菌糸もしくは気
菌糸から、足細胞を有して直立に分枝した梗子柄
は２〜３個の隔壁を有し40〜80×3.0〜3.5μの大
きさを呈する。梗子柄の細胞壁にはとげ状突起は
観察されず、平滑である。梗子柄頂端膨大部から３〜６個の梗子を生じ、
更にその先端に求基的に4.3〜5.2×3.0〜4.2μの
大きさで１細胞のとげ状突起を有する球〜亜球形
の梗子胞子を連続的に生じ24〜70個の胞子鎖を形
成する。梗子は徳利型の形状を示し、大きさ6.9
〜10.7×3.5〜4.7μ。梗子柄および梗子は無色。
梗子はコーヒー（Coffee，3pn）〜黒色を呈す
る。上記の菌学的性質を有する本菌株の分類学上の
位置を前述のＫ−76株の項で示した検索便覧によ
り検索すると本菌は子のう果その他の有性性殖器
管を有せず梗子から暗褐色の梗子胞子を連続的に
生じ、尚かつ生じた胞子が長鎖となる性状を有す
るスタキボトリス属（メンモニエラ属）のそれと
一致する。本菌の諸性状を前述の検索便覧、ヅツクの文献
およびスミス G.〔Trans.Brit.Myccl.soc.，
45，387−394（1962）〕の文献並びにIFO保存標
準株と比較同定すると本菌株は梗子から梗子胞子
を求基的に連続的に生じる性質においてホーネル
（Ｈｏ¨hnel）によつて命名されたメンモニエラ属
メンモニエラエチナタ（Menmoniella
echinata）に属すると判定される。しかし上記ヅ
ツクおよびスミスの文献から本菌株はスタキボト
リスエチナタに類縁の菌種と考えられたために
スタキボトリスエチナタ IFO 7525および同
IFO8856の２株と比較検討した。形態学的には本菌株の梗子柄の細胞壁が両標準
株に特異的なとげ状突起が観察されず、更に梗子
柄先端部が標準株では梗子柄菌糸幅の２〜３倍に
膨大するのに比較して、本菌株は顕著な膨大が認
められない。更に培地上の生育、殊にバレイシヨ
ブドウ糖寒天培地に於て標準株２株は良好な生育
を示し円形のやや隆起した集落を形成しかつ菌糸
を豊富に着生し、胞子形成も顕著であるのに比し
て、本菌株は上述の如く樹木状の不規則な生育を
示しかつ菌糸形成、胞子形成が不良である。以上
の様な菌学的性状の差異から本菌株を新菌種と認
めスタキボトリスエスピー．Ｔ−791と命名し
た。尚色の表示記載は「カラーハーモニーマニ
ユアル（Color Harmony Manual，1958年、
Container Corporation ofAmerica）」の表示法
に従つた。上記した新菌株スタキボトリスエスピー．
Ｋ−76、スタキボトリスエスピー．Ｔ−789及
びスタキボトリスエスピー．Ｔ−791は夫々微
工研に微生物受託番号微工研菌寄第3801号
（FERM−Ｐ No.3801）、微工研菌寄第3802号
（FERM−Ｐ No.3802）、及び微工研菌寄第3803
号（FERM−Ｐ No.3803）として受託された。上記スタキボトリス属に属する微生物による抗
補体活性物質の製造は、具体的には次の如くして
実施される。即ちまず上記微生物を通常の栄養物
及び添加物を含有する培地で培養する。培養基と
して一般に用いられる窒素源としては、例えば大
豆粉、大豆油、コーンスチツプリカー、酵母エキ
ス、乾燥酵母、オートミール、肉エキス、カゼイ
ン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩等を例示
でき炭素源としては、例えばブドウ糖、グリセリ
ン、麦芽糖、デンプン、乳糖、シヨ糖、糖蜜等を
例示できる。また培地に添加される添加物として
は例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、硫酸
マグネシウム、リン酸等の無機塩を例示でき、更
に該培地には必要に応じて鉄、銅、マンガン、亜
鉛等の金属の塩を微量含有していてもよい。培養
は、上記培養基を含有する通常の水性培地で、表
面培養でも深部通気撹拌培養でも実施できるが、
深部通気撹拌培養を行なうのが好ましい。培養条
件は通常の通気条件下に、液性がPH3.5〜11.5好
ましくはPH4.5〜9.5及び培養温度15〜35℃好まし
くは20〜32℃で通常３〜７日間で有利に培養でき
る。本発明においては次いで上記培養後に培養液中
に生産された物質を採取する。採取法は特に制限
されず公知の各種方法をいずれも採用できる。例
えば不純物との溶解度の差、通常の吸着剤例えば
活性炭、XAD−２、シリカゲル、イオン交換樹
脂、セフアデツクス等に対する吸着親和力の差、
二液相間の分配率の差等を利用する方法及び之等
方法の組み合せにより実施できる。より具体的に
は、培養液を常法に従い過もしくは遠心分離し
て予め菌体を除去し、次いで上澄液にメタノール
を加え撹拌後２〜３時間放置し、再度遠心分離に
より沈澱物を除いた後、得られる上清をアンバー
ライトXAD−２（溶出液はメタノール又はアセ
トン）を用いクロマトグラフイにかけ、溶出液よ
り抗補体活性を有する画分を集め、之より溶媒を
留去して、本発明腎炎治療剤の有効成分とする培
養混合物を得る。得られた混合物の赤外線スペクトル（KBr錠）
を第５図に示す。該混合物はメルク社製「シリカ
ゲル60F₂₅₄を用いた薄厚クロマトグラフイ
（TLC）分析（展開溶媒は酢酸エチルエステル−
クロロホルム−酢酸の50：50：２容積比混液であ
る）の結果、明確な４つのスポツトと他に数種の
スポツトを示し、之等各スポツトを示す物質は、
いずれも抗補体活性を有する。このことより上記
培養混合物は、四種の抗補体活性物質を主成分と
する混合物であると認められるが、該混合物自体
後述する通り充分な抗補体活性を示し、また毒性
も低く、従つて上記混合物を構成する各成分を単
離精製せずとも所期の腎炎治療剤有効成分として
有利に使用できるものである。勿論該培養混合物は、之を更に例えば適当なゲ
ル過法等を採用して、該混合物を構成する各成
分を単離精製することもできる。この単離精製は
例えば上記混合物を酢酸エチルエステルで抽出後
溶媒を留去し、抽出物をメタノールに溶解後活性
炭カラムを通過させ溶出液中の溶媒を留去し、残
渣をセフアデツクスLH−20でゲル過し、得ら
れる各画分を抗補体活性試験に供し、活性な画分
を溶媒留去後収集することにより実施できる。かくして得られるひとつの抗補体活性物質（物
質Ｂとする）の理化学的性状は次の通りである。１元素分析値Ｃ：68.16 Ｈ： 8.02 Ｎ： 0.00 ２赤外線吸収スペクトル（KBγ錠）分析結果第６図に示す通り３ TLC分析値（「シリカゲル60F₂₅₄」使用）ａ酢酸エチルエステル−クロロホルム−酢酸の
50：50：２容積比混液 Rf＝0.08 ｂベンゼン−ブタノール−酢酸の60：15：２容
積比混液 Rf：0.42 ｃベンゼン−酢酸エチルエステル−酢酸の40：
50：２容積比混液 Rf＝0.08 ４呈色反応（上記TLC上で行なう）ａ２，４−ジニトロフエニルヒドラジン試薬反応陽性ｂリンモリブデン酸試薬反応陽性ｃ 50％硫酸試薬反応陽性ｄ希硫酸噴霧後の加熱試験陽性ｅ UVランプによる試験陽性５外観、性状白色粉末腎炎治療剤としての使用に際し、本発明の培養
混合物は通常その薬理的担体と共に薬理組成物の
形で投与される。担体は使用形態に応じた薬剤を
調製するのに通常使用される充填剤、増量剤、結
合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤等の
稀釈剤あるいは賦形剤を包含する。上記担体を含
む本発明腎炎治療剤の投与単位形態は治療目的に
応じて適宜選択できる。その代表的なものとして
は錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒
剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、乳剤、懸
濁剤等）等を例示できる。錠剤の形態に成形する
に際しては、担体として、公知の例えば乳糖、白
糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプ
ン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロー
ス、ケイ酸等の賦形剤；水、エタノール、プロパ
ノール、単シロツプ、ブドウ糖液、デンプン液、
ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、セ
ラツク、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポ
リビニルピロリドン等の結合剤；乾燥デンプン、
アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナリア
末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ツウ
イン、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モ
ノグリセリド、デンプン、乳糖等の崩壊剤；白
糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油等の
崩壊抑制剤；第四級アンモニウム塩基、ラウリル
硫酸ナトリウム等の吸収促進剤；グリセリン、デ
ンプン等の保湿剤、デンプン、乳糖、カオリン、
ベントナイト、コロイド状ケイ酸等の吸着剤；精
製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、マクロゴ
ール、固体ポリエチレングリコール等の滑沢剤等
を使用できる。丸剤の形態に成形するに際して
は、担体として、公知の例えばブドウ糖、乳糖、
デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タ
ルク等の賦形剤；アラビアゴム末、トラガント
末、ゼラチン、エタノール等の結合剤；ラミナリ
ア、カンテン等の崩壊剤等を使用できる。更に上
記錠剤等は必要に応じ通常の剤皮を施し糖衣錠、
ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フイルムコーテイン
グ錠あるいは二重錠、多層錠とすることができ
る。坐剤の形態に成形するに際しては、担体とし
て公知の例えばポリエチレングリコール、カカオ
脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル
類、ゼラチン、半合成グリセライド等を使用でき
る。注射剤として用いられる液剤及び懸濁剤の形
態に成形するのに際しては、稀釈剤として、慣用
の例えば水、エチルアルコール、プロピレングリ
コール、エトキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオ
キシエチレンソルビツト、ソルビタンエステル等
を使用し、得られる液剤等を殺菌及び血液と等張
とするのが好ましい。この場合等張性の溶液を調
製するに充分な量の食塩、ブドウ糖又はグリセリ
ンを腎炎治療剤中に含有せしめるか又は通常の溶
解補助剤、緩衡剤、無痛化剤、保存剤等を、更に
必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘
味剤等や他の医薬品を該治療剤中に含有せしめる
ことができる。本発明の腎炎治療剤中に含有されるべき有効成
分即ち上記培養混合物量は特に限定されず適宜選
択できるが、通常全組成物の１〜70重量％、好ま
しくは５〜50重量％とするのが好ましい。本発明の腎炎治療剤は各種形態に応じた方法で
投与される。例えば錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、
乳剤、顆粒剤及びカプセル剤の場合には経口投与
を採用できる。また注射剤の場合には筋肉内、皮
内、皮下若しくは腹腔内投与すればよい。坐薬の
場合には直腸内投与される。本発明腎炎治療剤の投与量は使用目的、症状等
により適宜選択されるが、通常有効成分量を１日
当り0.8〜30mg／Kg程度の範囲とすればよく、こ
の範囲の使用で充分安全な治療効果を示す。尚本
発明の治療薬は腎炎に対してのみならず自己免疫
疾患、膠原病及びリユウマチに対してもその治療
効果を認め得るものである。以下本発明をより明らかにするため本発明治療
薬の有効成分の製造例を参考例として掲げると共
に薬理試験結果及び本発明治療剤の製造例を掲げ
る。参考例１スタキボトリスエスピー．Ｋ−76を500ml容
坂口フラスコに100mlの下記組成の培地を入れて
28℃ PH＝６で４日間往復振とう培養を行なつ
た。グリセリン 0.5％デンプン 1.0％乳糖 0.2％大豆粉 0.5％酵母エキス 0.1％麦芽エキス 0.2％ CaCO₃ 0.3％ MgSO₄ 0.05％前述で得られた種培養１本を30容、ジヤーフ
アメンターに20の上記組成の培地を入れ培養温
度28℃、通気量１／培地・分、撹拌数300回
転／分で５日間培養を行なつた。得られた培養液
を8000回転／分で遠心分離し菌体を除去し、この
上澄液に上澄液の1/4重量倍のメタノールを加え
撹拌して３時間放置したのち、遠心分離して沈澱
物を除去する。次いで得られる上清をPH４〜５に
調整し、該上清に対し1/20倍重量のアンバーライ
トXAD−２樹脂を使用し、最初は水洗するため
に適量の水で溶出させ次いで樹脂量の３倍重量の
メタノールで溶出した後メタノール溶出画分のう
ち抗補体活性を有する画分を集め、減圧下に溶媒
を留去後残渣にｎ−ヘキサンを加え生成する白色
粉末を取し、抗補体活性作用を有する混合物
4.2ｇを得る。得られた白色粉末の赤外線吸収ス
ペクトル（KBγ錠）分析及びTLC分析結果は、
前記した通りである。またその抗補体活性作用は
後記する第１表に検体No.１として示した通りであ
る。上記で得た白色粉末4.0ｇをメタノールに溶か
し活性炭カラムを通過させたのち溶出液を減圧下
濃縮乾固後、セフアデツクスLH−20（溶出液は
酢酸エチルエステル−クロロホルムの１：１容積
比混液）でゲル過し、溶出画分よりRf＝0.42
（展開溶媒はベンゼン−ブタノール−酢酸の60：
15：２容積比混液）を示す抗補体活性作用を有す
る画分を集め、溶媒を留去して白色粉末状の物質
Ｂを1.2ｇ得る。該物質Ｂの理化学的性状は前述
の通りであり、またその抗補体活性作用は後記第
１表に検体No.２として示した通りである。参考例２公知のスタキボトリスカルタルム IFO5369
を500ml容坂口フラスコに100mlの下記組成の培地
を入れて28℃、PH＝６で往復振とう培養を４日間
行なつた。グリセリン 0.5％デンプン 1.0％乳糖 0.2％大豆粉 0.5％酵母エキス 0.1％麦芽エキス 0.2％ CaCO₃ 0.3％ MgSO₄ 0.05％前述で得られた種培養２本を30容、ジヤーフ
アメンターに20の上記組成の培地を入れ培養温
度28℃、通気量１／培地・分、撹拌数300回
転／分で５日間培養を行なつた。得られた培養液
を8000回転／分で遠心分離し菌体を除去しこの上
澄液に５のメタノールを加え撹拌して３時間放
置したのち、遠心分離して沈澱物を除去する。以
下参考例１と同様にして抗補体活性作用を有する
白色粉末4.5ｇを得る。これは参考例１で得た白
色粉末とほぼ同様のIR分析図を与え、TLC分析
結果は全く一致した。その抗補体活性も亦参考例
１で得た白色粉末とほぼ同等であつた。参考例３スタキボトリスエスピー．Ｔ−789を下記組
成の培地をPH＝7.5に調整し、32℃で参考例１と
同様に培養及び精製することにより抗補体活性を
有する培養混合物を得た（この物質の理化学的性
質は参考例１で得たものとほぼ一致した）。グリセリン 0.5％ブドウ糖 1.2％コーンスチープリカー 0.5％乾燥酵母 0.1％麦芽エキス 0.2％ MgSO₄ 0.05％ NaCl 0.3％参考例４スタキボトリスエスピー．Ｔ−791を下記組
成の培地をPH＝5.5に調整し、25℃で参考例１と
同様に培養及び精製することにより抗補体活性を
有する培養混合物を得る（この物質の理化学的性
質は参考例１で得たものとほぼ一致する）。グリセリン 0.5％デンプン 1.0％シヨ糖 0.2％大豆粉 0.5％ペプトン 0.1％麦芽エキス 0.2％ MgSO₄ 0.3％ HCl 0.05％１抗補体活性作用抗補体活性は、「免疫化学」第830〜834頁（朝
倉書店発行、山村雄一他編集、1973年）に記載の
試験法に従い測定及び確認される。即ち試験管に
上記参考例１で得た検体の水分散液0.5ml、１×
10⁸セル／mlの感作血球（EA）0.5ml、等張ゼラ
チンを含むベロナール緩衝食塩水（GVB⁺⁺）の１
ml及びGVB⁺⁺液で150倍に希釈した補体血清（g.
p.c）0.5mlを採取し、37℃で60分間保温後之に氷
冷した生理食塩水５mlを加えて遠心分離し、次い
で分離された上清の吸光度を吸光計OD₄₁₃で測定
し、本発明物質によつて感作血球がどれ程その溶
血を抑制されるかを求めることにより測定され
る。上記方法に従い測定された吸光度及び抗補体
活性値を下記第１表に示す。

【表】尚上記第１表中ブランクは、GVB⁺⁺、ｇ，p.c
及びEAのみを採取した試料、また対照※は
EA0.5mlと水2.0mlとを採取した100％溶血を示す
試料である。そして抗補体活性値は、本発明試料
を採取した検体の示すOD₄₁₃値から２つのブラン
クのOD₄₁₃平均値を差し引いた値（OD′）を、２
つの対照※のOD₄₁₃平均値から同様に２つのブラ
ンクのOD₄₁₃平均値を差し引いた値（OD′）で除
した値即ち溶血比（ｙ）により求められる。従つ
て該溶血比（ｙ）が１より小さくなれば抗補体活
性を有することとみなし得る。抗補体活性は上記
溶血比（ｙ）の値が小さい程高いといえ、本発明
の物質はこの試験結果より優れた抗補体活性を有
することが判る。２薬理作用ネフロトキシン（Nephrotoxin）型腎炎に対
する治療効果ラツトネフロトキシン（以上「NT」と略
記）は次のようにして得られる。ねずみのキド
ニーコルテツクス（kidney cortex）を等量の
生理食塩水でホモジナイズし、そのホモジネー
トをフレンドコンプレートアジユバンド
（Freund’ｓ complate ajuvant；Difco社
製）と１：１の比で混合し、得られる混合物２
mlをウサギ（体重3100ｇ）に筋肉注射し免疫さ
せる。1.5ケ月後ウサギの心臓より血液を採取
し血清を得る。得られた血清を56℃、30分間で
非動化した後40％飽和硫安により塩析して分画
する。イミノグロブリン−γ−グロブリン
（IgG）フラクシヨンを採取してNTを得る。試験には体重150〜160ｇのウイスター系
（wister）の雄ねずみを使用する。本発明の物
質をNT投与の１時間前に投与した時を基準と
して、24時間毎に１日１回１匹当り５mgの投与
量で３日前〜４日後まで腹腔内投与する。また
NTは１mlをねずみの尾静脈より静注する。尚
比較化合物としてクロロフイリン（CP）を用
い（１日１回１匹当り10mgの投与量）、対照区
としては生理食塩水を使用する。蛋白ウリア（Proteinuria）（24時間で尿中に
排泄される全量）を、スルホサリチル酸による
ボバインセリムアルブミン（Bovine Serim
Albumin）を対照とする濁度法により測定す
る。得られる結果を第２表に示す。

【表】時からの経過日数である。
第２表中蛋白ウリアの量はmg／日で示した。
正常状態のねずみの蛋白ウリアは0.5〜５mg／
日であるが、この数値以上の場合は特に10mg／
日以上の場合には腎炎が発症しているといえ
る。第２表から明らかなように対照区以外の場
合には投与時〜７日間の蛋白ウリアの量は正常
状態のねずみのそれと同程度であり、一次反応
が抑制されていることがわかる。また本発明の
物質はCPに比較して半量でほぼ同程度の抑制
効果を示し約２倍その抑制効果が大であること
が判る。ヘイマン（Heymann）型腎炎に対する治療
効果試験には体重180〜200ｇのウイスター系の雌
ねずみを使用する。ねずみのキドニーコルテ
ツクスを取り等量の生理食塩水と伴にホモジナ
イズする。そのホモジネートを1500Gで１時間
遠心分離し、その上清をエドギントン等の方法
〔T.S.Edgington at al，Journal of
Experimental Medicinl，127，555参照〕に従
つて精製したものと「フレンドコンプレート
アジユバント37Ra」（Difco社製）とを0.4：
１の重量比で混合したものをアジユバントとし
て0.5mlをねずみの腹腔内に注入する。その後
２週間毎に蛋白ウリアが100mg／日以上になる
までこのアジユバントを同量ずつ投与する。
（その期間はほぼ６〜８週間である。）斯くしてヘイマン型腎炎を発病させたねずみ
（体重は約300〜350ｇとなつている）に本発明
の物質を24時間毎に１匹当り５mgの投与量で７
日間腹腔内投与し、蛋白ウリアの量（mg／日）
を上記と同様にして測定する。尚比較化合物と
してCPを用い（１日１回１匹当り10mgの投与
量）、対照区として生理食塩水を用いて同様に
試験した。得られた結果を第３表に示す。

【表】実験開始から２〜３週間後のねずみの体重は
400〜500ｇとなり、正常な蛋白ウリアの量は５
〜15mg／日と考えられる。第３表から明らかな
ように、本発明の物質はヘイマン型腎炎を治瘉
し得る作用を有し、この作用はCPに比し半量
で同程度であり、約２倍強力であることが判
る。製造例１本発明培養混合物のナトリウム塩 500mg ブドウ糖 250mg 注射用蒸留水適量全量５ml 注射用蒸留水に本発明の培養混合物及びブドウ
糖を溶解させた後５mlのアンプルに注入する。室
素で置換後121℃で15分間加圧減菌を行い、注射
剤を得る。製造例２本発明の培養混合物 500mg 亜硫酸ソーダ５mg 注射用蒸留水適量全量５ml 製造例１に準じて注射剤を得る。製造例３本発明の培養混合物 750mg 半合成グリセライド基剤適量全量 2000mg 半合成グリセライド基剤に本発明の培養混合物
を加え、50℃で混合、懸濁させた後成形鋳型に流
し込み、自然冷却したのち取り出し坐剤を得る。製造例４本発明の培養混合物 750mg ビタミンＥ 90mg 半合成グリセライド基剤適量全量 2000mg 製造例３に準じて坐剤を得る。製造例５本発明の培養混合物 150ｇアビシエル（商標名、旭化成(株)製） 40ｇコンスターチ 30ｇステアリン酸マグネシウム２ｇ TC−５（商標名、ヒドロキシプロピルメチルセルロース 10ｇポリエチレングリコール− 6000 ３ｇヒマシ油 40ｇメタノール 40ｇ本発明の培養混合物、アビシエル、コンスター
チ及びステアリン酸マグネシウムを取り混合研摩
後糖衣R10mmのキネで打錠する。得られた錠剤を
TC−５、ポリエチレングリコール−6000、ヒマ
シ油及びメタノールからなるフイルムコーテイン
グ剤で被覆を行ないフイルムコーテイング錠を製
造する。製造例６本発明の培養混合物 100ｇアビシエル 40ｇコンスターチ 30ｇステアリン酸マグネシウム２ｇアクリル酸メチル−メタクリル酸共重合体 5.7ｇトリアセチン 0.6ｇエタノール 50.4ｇ製造例５と同様にして各薬剤を打錠する。得ら
れた錠剤をアクリル酸メチル−メタクリル酸共重
合体、トリアセチン及びエタノールからなるフイ
ルムコーテイング剤で被覆を行ない腸溶錠を製造
する。製造例７本発明の培養混合物 150.0ｇクエン酸 1.0ｇラクトース 33.5ｇリン酸二カルシウム 70.0ｇプロンＦ−68 30.0ｇ（Pluronic Ｆ−68）ナトリウムラウリル 15.0ｇサルフエートポリビニルピロリドン 15.0ｇポリエチレングリコール 4.5ｇ（カルボワツクス1500）ポリエチレングリコール 45.0ｇ（カルボワツクス6000）コンスターチ 30.0ｇ乾燥ナトリウムラウリル 3.0ｇサルフエート乾燥ステアリン酸マグネシウム 3.0ｇエタノール適量本発明物質、クエン酸、ラクトース、リン酸二
カルシウム、プロンＦ−68およびナトリウムラウ
リルサルフエートを混合する。上記混合物をNo.60スクリーンでふるい、ポリビ
ニルピロリドン、カルボワツクス1500及び6000か
らなるアルコール性溶液で湿式粒状化する。必要
に応じてアルコールを添加して粉末をペースト状
塊にする。コンスターチを添加し、均一な粒子が
形成されるまで混合を続ける。No.10スクリーンを
通過させ、トレイに入れ100℃のオーブンで12〜
14時間乾燥する。乾燥粒子をNo.16スクリーンでふ
るい乾燥ナトリウムラウリルサルフーエトおよび
乾燥ステアリン酸マグネシウムを加え混合し、打
錠機で所望の形状に圧縮する。上記の芯部をワニスで処理し、タルクを散布し
湿気の吸収を防止する。芯部の周囲に下塗り層を
被覆する。内服用のために十分な回数のワニス被
覆を行う。錠剤を完全に丸くかつ滑かにするため
にさらに下塗層および平滑被覆が適用される。所
望の色合が得られるまで着色被覆を行う。乾燥
後、被覆錠剤を磨いて均一な光沢の錠剤にする。

【図面の簡単な説明】

第１図及び第２図は参考例１で用いたスタキボ
トリス・エスピー．Ｋ−76の顕微鏡写真、第３図
はスタキボトリス．エスピー．Ｔ−789の顕微鏡
写真、第４図はスタキボトリス．エスピー．Ｔ−
791の顕微鏡写真、第５図は本発明培養混合物の
赤外線吸収スペクトル分析図及び第６図は上記混
合物を構成する一成分の赤外線吸収スペクトル分
析図を夫々示す。

Claims

【特許請求の範囲】

１スタキボトリス属に属する抗補体活性物質生
産能を有する菌の培養によつて得られ、抗補体活
性作用を有する培養混合物を有効成分として含有
することを特徴とする腎炎治療剤。