JPS6240300A

JPS6240300A - 体液中のアデノシンデアミナ−ゼの活性測定法

Info

Publication number: JPS6240300A
Application number: JP17781185A
Authority: JP
Inventors: Toshiro Hanada; 寿郎花田; Kazuhiko Yamanishi; 山西　一彦
Original assignee: Wako Pure Chemical Industries Ltd
Current assignee: Fujifilm Wako Pure Chemical Corp
Priority date: 1985-08-13
Filing date: 1985-08-13
Publication date: 1987-02-21

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】記載の測定法。

３、発明の詳細な説明　　　　　　　　　　　　　　　
　　ン〔産業上の利用分野〕、１本発明は１体液１例えば血清中の７デノシンデ　　　　
　：゛。

７°７−５（”Ｔ、　ＡＤＡ＆１１１ｔ６．　）　（７
）ｉｎ　　　。

測定法に関する。　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　）・、□。□３１ＡＤＡは核酸代謝にあずかり、アデノシンを脱　　　　
、１アミノ化してイノシンとアンモニアを生成する酵素
であって、各種悪性腫瘍、肝疾患、炎症性疾　　　　ζ
２ニー思、細胞性免疫などに係りを有することから１体　　　
　１、液中のＡＤＡ活性を測定することは臨床的意義が
　　　　ｌ；あるといわれている。

ＡＤＡの活性測定法としては、ＡＤＡアデノシン＋）１２０−−→イノシン十　ＮＨ３の反応
で生成したイノシンを測定する方法と　ＮＨ３を測定す
る方法とがある。

ＡＤＡ活性は現在のところ、酵素反応により生成したＮ
　Ｈ３量をインドフェノール反応により定量する方法が
主流であるが、しかしながら、この測定法は酵素反応と
インドフェノール反応を分けて行なう必要があるため、
操作が煩雑で長時間を要し日常検査として必ずしも良い
方法であるとはいえない、また、血清中にインドフェノ
ール反応を起こす成分が存在するため血清盲検が必要で
あること、血清盲検値が高いため誤差が大きいことなど
の欠点も有する。また、他にＮ）１３を測定する方法と
しては、α−ケトゲルタール酸と還元型ニコチンアミド
７デニンジヌクレオチドリン酩（ＮＡＤＰＨ）の存在下
でグルタミン酸脱水素酵素（以下、ＧＬＤＨと略称する
。）によるＮＡＤＰＨの減少を波長３４０ｎｍで測定す
る方法が知られているが、この方法も紫外部吸収測定法
であるため装置上の制約をうけるなどの欠点を有する。

−・方、最近、イノシンを測定する種々のＡＤＡ活性測
定法が検討されており１例えば、プリンヌクレオシドホ
スホリラーゼ（以下、ＰＮＰど略称する。）及びキサン
チンオキシダーゼ（以下。

ＸＯＤと略称する。）を共役酵素として用い、生成する
Ｈ２Ｏ２をペルオキシダーゼの存在下で被還元性呈色試
薬を酸化発色させることにより比色定量する方法が開発
されている。しかしながら、この方法はＸＯＤを共役さ
せたときに発生するスーパーオキシドアニオン（Ｏｌ）
により色素が還元され、Ｈ２Ｏ２量と色素量が比例しな
いという重大な欠点を有している。また、酵素反応によ
り生成する０２を完全にＨ２Ｏ２に変換するために、一
旦クエン酸又は塩酸で反応液を触性にし酵素反応を停止
させると同時に０１をＨ２Ｏ２に変換させ、然る後、呈
色試薬を加えて比色定量する方法が開発されている［特
公昭５９−２２８０号公報号公報−の方法は、測定のス
テップ数が多く、またレイト法には適用できないもので
あった。

マタ他に、ＡＤＡ酵素尺応１．：ＰＮＰ、Ｘ０Ｄｅ共役
させたとき１発生する０２を直接ニトロテトラゾリウム
ブルー（以下、ＮＴＢと略称する。）を用いて比色定量
する方法［臨床検査、２８巻、７０５〜７０８、１９８
５年］も開発されているが、この方法は、感度が低いた
め試料を多く必要としく通常５０ｕり　、また試薬盲検
が必要であるなどの欠点も有するので、この方法も未だ
満足すべきもの′であるとはいえない。

〔発明の目的〕

本発明は上記した如き状況に鑑みなされたもので、イノ
シンを測定することによりＡＤＡ活性を測定する方法に
於て、従来より改善が求められていた測定感度の問題、
検体盲検の問題、共存物質による誤差の問題等をすべて
解決したＡＤＡ活性の新規で且つ精度の高い定量法を提
供することを目的とする。

〔発明の構成〕

本発明は、アデノシンを基質とし、体液中のアデノシン
デアミナーゼ（ＡＤＡ）の作用により生成したイノシン
に、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）を作
用させて生成するヒボキサンチンに、キサンチンオキシ
ダーゼ（ＸＯＤ）、ウリカーゼ、還元型補酵素、ペルオ
キシダーゼ、フェノール類（又はナフトール類）又はア
ミン類、及び被還元性呈色試薬を作用させて、生成する
色素を比色定量することによりその活性値を求めること
を特徴とする、アデノシンデアミナーゼ活性測定法であ
る。

本発明の方法は、以下の（１）〜（４）の反応式で示さ
れる。

（アデノシン）　　　（イノシン）（ヒポキサンチン）（イノシン）（ヒポキサンチン）３Ｈ２０２＋ＮＡ口（Ｐ）Ｈ−ムク乙上ｊＬどｙゴ乙ム
共しヱ９旦−一一−−−−ヤフェノール（ナフトール）
又はアミンホルマザン又はジホルマザン十　ＮＡＤ（Ｐ）　　　　
　・・・・・・・（４）尚、（３）式は、詳しくは下記
の２つの式から成る。

（ヒボキサンチン）このように１本発明は、ＡＤＡによりアデノシンから生
成したイノシンにＰＮＰを作用させて生成するヒポキサ
ンチンに、ＸＯＤとウリカーゼを作用させ、生成した尿
酸を更に、ウリカーゼ番こよりＨ２Ｏ２とアラントイン
及びＩＲ醸ガスに分解させ、ヒボキサンチンからＸＯＤ
により生成したＨ２Ｏ２と、尿酸からウリカーゼにより
生成した）１２０２との総量を、還元型補酵素、ペルオ
キシダーゼ、フェノール類（ナフトール類）又はアミン
類の存在下、被還元性呈色試薬を用いて測定しているの
で、従来法に比べ感度が向上し、それに伴って試料量も
従来の５０ＪＩ７から２０４に低減できる０本発明の測
定法によれば、例えば、従来の０２をＮＴＢで測定する
系（臨床検査、２３巻、７０５〜７０８．１９８５年）
に比べて約２．５倍の感度が得られる。

酵素反応により生成したＨ２Ｏ２は１本発明者らが先に
特許出願した方法（特願昭８０−０７１８３２号）、即
ち還元型補酵素、ＰＯＤ、フェノール類（又はナフトー
ル類）又はアミン類、及び被還元性呈色試薬を用いるＨ
２Ｏ２の定量法を適用することにより、測定が可能で、
これにより共存物質の影響の少ない測定値を得ることが
できる。

また、本発明を行なうにあたり、検体（血清）中に存在
する尿醜、キサンチンなどによる誤差は、予めＸＯＤ、
ウリカーゼ、ペルオキシダーゼ、及びアミン類又はフェ
ノール類（又はナフトール類）を検体中に存在させ、一
定時間反応させることにより消去できるので、検体盲検
の測定が不必要である。

また、本発明の方法では、特公昭５８−２２８０号の、
発明のように、ｏａｔ　Ｈ２Ｏ２に完全に変換するため
に反応停止剤を用いて、酵素反応を一旦停止させなけれ
ばならないというようなこともない。

即ち、　（３ａ）式に於ける反応では、Ｏｌを経由して
Ｈ２Ｏ２に変換されるが、この反応を完全に行なわせる
には、′通常、液性を酸性にしたり、或はスーパーオキ
シドジスムターゼ（以下、ＳＯＤと略称する。）を添加
する必要があるが１本発明の方法では、このような処理
は全く必要ない、更に。

アデノシン−ＡＤＡの酵素反応と同時に呈色反応が行な
えるので、レイト法による測定も可能である。また、エ
ンド法で測定を行なう場合、反応停止剤としては従来か
ら用いられている塩酸、クエン酸等の酸類を用いてもよ
いが、中性のドデシル硫酸塩を用いれば、自動分析装置
の材質をいためる恐れもなぐ、より好ましい。

本発明に用いる還元型補酵素としては１例えば、還元型
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）や
、還元型ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸
（ＮＡＤＰＨ）等が挙げちれるが、これらに限定される
ものではない。

また、ペルオキシダーゼは、植物由来、動物由来、微生
物由来のペルオキシダーゼがいずれも使用できるが１通
常は西洋ワサビ由来のペルオキシダーゼが好ましく用い
られる。

本発明に用いる被還元性呈色試薬としては、既存のもの
未知のものを問わず、還元されて・呈色する化合物は全
て挙げられる。既存のもので一般によく用いられるもの
としては１例えば、ＮＴＢ、２−（４−ヨードフェニル
）−３−（４−ニトロフェニル）−５−フェニルテトラ
ゾリウム　りロリド（以下、ＩＮＴと略称する。　）　
、　３−　（４，５−ジメチルチアゾリル−２）−２，
５−ジフェニルテトラゾリウム　プロミド（以下、ＭＴ
Ｔと略称す　　　　　□る・）・　２−（２−＜７ゾチ
アソ゛）′ｂ）−３−。

（２−カルボキシフェニル）−５−（４−［ヒドロキシ
ポリ（オキシ−１，２−エタンジイル）】フェニル）−
２Ｈテトラゾリウム　クロリド（以下、ＢＣＨＴと略称
する。）等のテトラゾリウム塩が挙げられる。

本発明に用いるフェノール類としては、フェノールその
ものの他、例えば、メチル、エチル。

プロピル等アルキル置換フェノール、例えば、メトキシ
、エトキシ、プロポキシ等アルコキシ置換フェノール、
塩素、臭素、弗素、沃素等ハロゲン置換フェノール等各
種誘導体が使用できる。また、ナフトール類としては、
ナフトールそのものの他、例えば、ナフトールスルホン
酸類、ナフトールカルボン酸類等のナフトール誘導体が
使用できる。

アミン類としては、通常の有機アミンがいずれも使用で
き、−級、二級、三級を問わない、また、一般に脂肪族
アミンに比べ芳香族アミンの方が、少ない使用量で効果
がある。これらのアミン類の具体例としては、例えば、
アニリン、Ｎ−メチルアニリン、Ｎ−エチルアニリン、
　Ｎ、Ｎ−ジメチルアニリン、　Ｎ、Ｎ−ジエチルアニ
リン、　Ｎ、Ｎ−ジエチル−ｍ−）ルイジン、Ｎ−エチ
ル−Ｎ−（β−ヒドロキシエチル）　−ｍ−トルイジン
、３．５−ジメトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ−（２−ヒドロ
キシ−３−ソジウムスルホブロビル）アニリン、Ｎ−エ
チル−Ｎ−（２−ヒドロキシ−３−スルホプロピル）−
ｍ−トルイジンナトリウム（以下、ＴＯＯ５と略罫すも
、）等が挙げられるが、これらに限定されるものでない
ことは勿論である。

これらアミン類、フェノール類及びナフトール類は夫々
単独で用いても、任意に二種以上組み合せて用いてもか
まわない、また例えばｌ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ−４
−ナフトール、４−Ｎ、Ｎ−ジエチルアミノサリチル酸
のように、１つの化合物がフェノール類でもｈ９．アミ
ン類でもある化合物を使用することもできる。

本発明の方法は、通常エンド法では３ステツプ、レイト
法では２ステツプになる。即ち、第１ステツプでは、試
料中に共存するキサンチン、ヒボキサンチン、尿酸、及
び必要であればアスコルビン酸やビリルビン等の分解処
理を行なう、そのために用いられる試薬としては、最小
限キサンチンオキシダーゼ、ウリカーゼ、ペルオキシダ
ーゼ、並びにフェノール類（又はナフトール類）又、は
アミン類から成る試液が用いられるが、イノシンを含有
する試料については、これに更にＰＮＰを存在させれば
イノシンによる誤差も消去できる。

アスコルビン酸を含む試料の場合は、この第１ステツプ
の試液（以下、第１試液と略称する。）中に銅イオンを
共存させれば、本発明者らが先に開示した特開昭５９−
２０５９９９号又は特開昭５９−２１０８９９号の発明
に示される如く、アスコルビン酸は分解除去できるし、
また、アスコルビン酸オキシダーゼを第１試液中に共存
させてもよい、更に、ビリルビンはビリルビンオキシダ
ーゼを第１試液に共存させることにより分解除去できる
。第２ステツプでは、基質の７デノシンを含む試液が用
いられて、ＡＤＡの酵素反応と呈色反応が同時に行なわ
れる。レイト法では、この呈色反応の単位時間当りの呈
色の増加を測定する。エンド法では、第２ステツプでの
ＡＤＡ酵素反応を一定時間行４ｈ１後９反応停−′１″
１１１素反応２止　　　　　　１め、吸光度を測定する
。　Ｈ２Ｏ２と被還元性呈色試薬との反応は、還元型補
酵素、ＰＯＤ、及びフェノール類（又はナフトール類）
又はアミン類の共存下で進行するので、第１試液中に被
還元性呈色試薬又は還元型補酵素のいずれか一方を存在
させることは何等差支えない。

ｍ１ＸＩＫｅｔｔＬ６ＸＯＤ、　＋！Ｊ＃−−ｔ／、　
ＰＯ。

Ｄ、フェノール類（又はナフトール類）又はアミン類の
量は、試料中のヒポキサンチン、キサンチン、及び尿酸
を分解できる量であれば特に限定されないが、第２ステ
ツプの反応に支障のない量が望ましいことはいうまでも
ない、また、第２スチツプの試薬（以下、第２試液と略
称する。）中に、更にｘＯＤ、ウリカーゼ、ＰＯＤ、フ
ェノ−２，ａ。１よ＋７）−ｚ、、）ッｔよア５□、。

い、　　　　ｊれか又は全てを存在させることは何等差
支えない。

第１試液の液性は、ＸＯＤ、ウリカーゼ、Ｐ０Ｄが作用
する範囲であれば特に限定されないが、通常はＰＨ５〜
９の範囲が好ましく用いられる。

第２試液の液性は、第１試液と混合してＡＤＡの酵素反
応をさせるときの液性がｐＨ６〜９になるように調製す
る。第２試液中の７デノシンの濃度は、第１試液と混合
して第２ステップ反応を行なうとき、０．０２〜２ｍｍ
ｏｌ／ｌの範囲になるように調製する。

ＰＮＰは第１試液、第２試液のいずれか一方又は両方に
含まれるが、いずれにしても第２ステツプの反応液中の
濃度が１〜５００υ／１になるように調製する。

Ｘ　ＯＤ　Ｉｔ第２ステップの反応液中１−１０００／
ｌ。

ウリカーゼハ１〜３００１／ｌ、ＰＯＤ（ｔ　１００〜
１０，０００ｕ／１、フェノール類（又はナフＩ・−ル
類）又はアミン類は０．１〜５００　ａｎａｌ／１．　
Ｎ　Ａ　Ｄ　（Ｐ）Ｈ’は０、Ｏ１〜２０ＩＩａｏｌ／
ｌの範囲が好ましく用いられるが、これらに限定される
ものではない。

第１試液、第２試液の液性の調整に用いる緩衝剤は、通
常用いられている緩衝剤、例えばリン酸塩緩衝液、トリ
ス塩酸緩衝液、グツド緩衝液などが使用できるが、これ
に限定されるものではない。

酵素反応又は呈色反応を円滑に行なわせるため、界面活
性剤を第１試液又は／及び第２試液に加えることは同等
差支えない。

反応停止剤としてドデシル硫酸塩を用いる場合は、最終
呈色液中、ｌ　ｍｍｏｌ／１以上の濃度になるようにす
る０反応停市剤として塩酸、クエン酩等の酸類を用いる
場合は、最終呈色液の液性がＰＨ３以下になるようにす
る。

以下に実施例を示し、本発明を更に詳細に説明するが、
本発明はこれらに限定されるものではない。

〔実施例〕

実施例　１゜［試液の調製］ ■　第１試液０．０５Ｍ　ＩＪ　ｙ酸塩緩衝液（ｐＨ７，１５）中に
、ｘｏｎを８０　Ｕ／１．　　’Ｆ　Ｕ　カーゼを１ｏ
Ｏｔｌ／１．　　ＰＯＤヲ３，０００Ｕ／Ｉ　、　　フ
ェノールを０．０１％、ＮＴＢを０．０４％の濃度にな
るように溶解した。

■　第２試液０．０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐ）１７．１５）中に、°
アデノシンを０．５　■ａｌ／！、　ＰＮＰを５００／
ｌ　、　ＮＡＤ　ＰＨを１．２５ｍ５ｏｌ／ｌ、及ヒ）
　Ｕ　）　ンＸ−１００ヲ０．１％の濃度になるように
溶解した。

■　反応停止液０．２％ドデシル硫酸ナトリウム水溶液を調製した。

［試　料］プール血清に、Ｓｉｇｍａ社製アデノシンデアミナーゼ
　↑１ｐｅ　Ｉ（Ｆｒｏｍ　ｃａｌｆ　１ｎｔｅｓｔｉ
ｎａｌ　Ｍｕｃｏｓａ）を夫々２Ｇ、　４０．８０．８
０．１００．　ｔ５０Ｕ／ＩニＡ：るように添加し、こ
れを試料とした。

［測定方法］試料　２０ＩＬｌをとり、第１試液　！、０−を加え、
３７℃で５分間加温後、第２試液１．０ｍｌを加えて、
３７℃で正確に１０分間加温した０反応停止液１．０ｍ
を加え混和した後、試薬ブランクを対照として、波長５
８０ｎｍの吸光度を測定した。

第１図にアデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）ａ度と吸光
度との関係を示す、第１図より明らかな如く、各ＡＤＡ
活性値（Ｕ／ｌ）に対してプロットした吸光度を結ぶ検
量線は良好な定量性を示している。

実施例　２゜［試液の調製］ ■　第１試液実施例１．に同じ。

■　第２試液実施例１．に同じ。

■　反応停止液実施例１．に同じ。

［試　料］血清、及び血清に床置、キサンチン、ヒポキサ″′を夫
′加社も１試料乙？−１［測定方法］　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　：実施例１．に同じ。

３．１□よ□１．３８オ。　　　　　　　　　　（・表
　　　１　　′ 表１から明らかなように１本発明の方法では、血清中の
尿酸、キサンチン、ヒボキサンチンの影響を全く受けな
かった。

実施例　３゜［試液の調製］ ■　第１試液実施例１．に同じ。

■　第２試液実施例１．に同じ。

■　反応停止液実施例１．に同じ。

［試　料］血清１０検体、及びアデノシンデアミナーゼ（ＡＤ　Ａ
　）　　４０１Ｊ／ｌを含む標準液を試料とした。

〔測定方法］実施例１．に同じ。

測定結果を表２及び表３に示す。

参考例　１゜ ■　基質溶液アデノシンの５ａｎｏｌ／ｌ水溶液を調製した。

■　酵素液０．２　Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，５）中に、ＮＴＢ
ヲＩＱｈｇ／ｌ、　Ｐ　Ｎ　Ｐ　ヲ８．３　ｕ／ｌ、Ｘ
ＯＤを８．８ｔｉ／１．トリトンＸ−１００を０．１％
の濃度になるように溶解した。

■　反応停止液２Ｎ塩酸を調製した。

［試　料］実施例３．に同じ。

［測定方法〕基質液　０．５　ｍｌと酵素液　２ｍｌを混和し、これ
に試料（血清）５０４を加えて、３７℃で１０分間加温
後、反応停止液　０．５　ｄを加えて、水を対照として
波長５Ｇ０ｎｓの吸光度を測定した（Ｅｔ）　。

基質液の代りに蒸留水を用いて同様に操作し。

血清ブランクの吸光度を測定した（Ｅｔａ）。

基質液　０．５ａＺ、酵素液　２ｄを用い、血清５０４
の代りに蒸留水を用いて、血清と同様に操作し、試薬ブ
ランクを測定した（Ｅ９Ｌ）。

Ａ　Ｄ　Ａ　　４０Ｕ／Ｉを含む標準液を試料として用
い、血清と同様に操作して吸光度を測定した（Ｅｓｔｄ
）。

測定結果を表２及び表３に示す。

（ｉ）本発明（実施例３）と従来法（参考例１）の感度
を比較したものを表２に示す。

表２から明らかなように、本発明の方法は、０；を測定
する参考例１．に比べて、２．５７倍の感度を有するこ
とがわかった。

（目）　血清！０検体を用いて、実施例３．と参考例１
゜で測定した結果を表３に示す。

表３の結果について、を検定を行なった結果、有意水準
５％で実施例３．と参考例１．の間には差が認められな
かった。

表　　　３Ｙ　＝０．９８９　Ｘ＋０．２２　（ｙ＝０．９９９８
）〔発明の効果〕以上述べた如く、本発明は、ＡＤＡの新規で且つ有用な
定量法を提供するものであり。

中　従来法に比べ感度が高く、そのため試料量も従来の
半分以下に低減できる点。

■　ニトロテトラゾリウムブルー等のテトラゾリウム塩
を発色試薬として用いて還元系で測定するため、アスコ
ルビン醜等還元性を有する共存物質の影響の少ない測定
値が得られる点。

■　検体中に共存する、キサンチン、ヒポキサンチン、
尿酸等による影響は、予め検体中にｘＯＤ、ウリカーゼ
、ペルオキシダーゼ、及びアミン類又はフェノール類（
又はナフトール類）を添加して一定時間反応させること
により消去できるので、検体盲検の測定が不必要となっ
た点。

等に顕著な効果を奏する発明であり、斯業に貢献すると
ころ大なるものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１．に於て得られた検量線を表わし、
横軸の各アデノシンデアミナーゼ活性値（Ｕ／Ｉ）につ
いて得られた吸光度を縦軸に沿ってプロットした点を結
んだものである。特許出願人　和光純薬工業株式会社 ′Ｊ６１　口１テ゛ノシンヂアミナー仁゛珀・限４Ｊｔ　（Ｕ／１　
）手続補正書昭和６１年１０月２８日　　　ｉ特許庁長官　殿　　　　　　　　　　　　　　　　　：
１、事件の表示昭和６０年特許願第１７７８１１号２、発明の名称体液中のアデノシンデアミナーゼの活性測定法３、補正
をする者事件との関係　　特許出願人　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　Ｉ郵便番号　５４１　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｆ４１　　′Ｔ
′＊’ｆｉｊ、Ｊ？ｆ＊ｋｍ＊ｒ、１＝ｉｔ！１ｌｌｌ
ｌＴ°１１”ｏｓｔｔｕ　　　　　　　　、。連絡先　特許課（東京）置　　０３−２７０−１３５７
１４゜補正命令の日付　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１１′。５、補正の対象明細書の発明の詳細な説明の欄（ご〆千ｆシチン）」（３）明、１０１書７員に記載の反応式（３）の「十尿
酸」を削除する。（４）明細書７頁に記載の反応式（３ａ）の以上

Claims

【特許請求の範囲】

（１）アデノシンを基質とし、体液中のアデノシンデア
ミナーゼ（ＡＤＡ）の作用により生成したイノシンにプ
リンヌクレオシドホスホリラーゼ（ＰＮＰ）を作用させ
て生成するヒポキサンチンに、キサンチンオキシダーゼ
（ＸＯＤ）、ウリカーゼ、還元型補酵素、ペルオキシダ
ーゼ、フェノール類（又はナフトール類）又はアミン類
、及び被還元性呈色試薬を作用させて、生成する色素を
比色定量することによりその活性値を求めることを特徴
とする、アデノシンデアミナーゼ活性測定法。
（２）体液中に存在するキサンチン、ヒポキサンチン、
尿酸を、キサンチンオキシダーゼ、ウリカーゼ、ペルオ
キシダーゼ、フェノール類（又はナフトール類）又はア
ミン類を用いて分解後、体液中のアデノシンデアミナー
ゼ活性の測定を行なう、特許請求の範囲第１項に記載の
測定法。
（３）還元型補酵素が、還元型ニコチンアミドアデニン
ジヌクレオチド（ＮＡＤＨ）又は還元型ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）である、
特許請求の範囲第１項又は第２項に記載の測定法。
（４）被還元性呈色試薬がテトラゾリウム塩である、特
許請求の範囲第１項〜第３項のいずれかに記載の測定法
。