JPS6256491A - 高純度メチルコバラミンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、医薬として実用に供しつる高純度のメチルコ
バラミンの製造方法に関する。

従来の技術 メチルコバラミンは、血液および髄液存在型の補酵素型
ＢＩ２として、神経細胞などの組織移行性に優れている
。生化学的にはメチル基転移反応に関与し、核酸・蛋白
・脂質代謝においてＢ１□同族体の中で最も優れた生体
内活性を示す。臨床的には。

巨歩芽球性貧血に有効であるのみならず、糖尿病性神経
障害、多発性神経炎などの末梢性神経障害治療剤として
有効である。

メチルコバラミンの製法についての種々の方法が知られ
ているが９代表的な方法としては例えば出発原料として
シアノコバラミンを使用する方法がある（特公昭４５−
３８０５９）。

発明が解決しようとする問題点 この合成法によって得られたメチルコバラミン含有溶液
中には、微量のシアノコバラミン、ヒドロキソコバラミ
ン、更に黄色物質、塩類などが含有されている。したが
って、いかにしてこれらのメチコバール以外の挾雑成分
を除き、高純度のメチルコバラミンを得るかが問題であ
る。

これらの挾雑成分を除去する方法としては、これらの物
質は塩類を除いてその性質が近似しているため、吸着性
の差を利用した方法２例えば、イオン交換樹脂クロマト
グラフィーによる方法および水−ア七トン結晶化法など
がすでに知られている。

しかしながら、これらの方法は１次のような欠点を有す
る。すなわち、イ木ン交換樹脂受側クロマトグラフィー
による方法は、イオン交換樹脂が高価なため、再利用す
るための別途設備を要するという欠点を有し、また水−
ア七トン結晶化法では化学的性質が近似しているため２
　メチルコバラミンの分離精製は困難であるという欠点
を有している。

問題点を解決するための手段 そこで２本発明者等は、これらの欠点を有しない高純度
メチルコバラミンを得るため、長年にわたって研究を重
ねてきたが１次の手段により解決できることを見い出し
２本発明を完成した。すなわち。

シアノコバラミンを常法によりメチル化して。

メチルコバラミンを主成分とする反応混合物を得。

この反応混合物を出発物質としてこれを精製し。

高純度のメチルコバラミンを得る工程において。

次の５つの工程を結合することを特徴とする高純度のメ
チルコバラミンの製造法 ■　反応混合液のｐＨを約２．５〜７．０に調整する工
程。

■　シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪族アル
コール−水または低級脂肪族ケトン−水を流出せしめる
工程。

（■　次いで該吸着物に、低級脂肪族アルコール−水を
流出せしめ、吸着物を留出する工程。

■　該留出液をジビニルベンゼン／スチレン系共重合体
樹脂クロマトグラフィーと接触させ、その際低級脂肪族
アルコール−水または低級脂肪族ケトン−水を低濃度か
ら段階的に濃度をあげて溶出せしめる工程。

■　吸着部を低級脂肪族ケトン−水を流出して吸着物を
脱着せしめ、該留出液を濃縮し、低級脂肪族ケトンを加
えて結晶化させ、結晶部より高純度のメチルコバラミン
を得る工程 出発物質として用いるメチルコバラミンを主成分とする
反応混合物とは、シアノコバラミンを常法によりメチル
化して得られるが、具体的に代表的な方法を述べれ６ば
９例えば特公昭４５−３８０５９実施例３に記載されて
いる方法であり２本法によれば、主成分としてのメチル
コバラミンのほか。

不純物トしてシアノコバラミン、ヒドロキシコバラミ：
／、　Ｍｅ−Ｃｏｎｐ、　ＮａＣ１！などの塩類などを
含有するものである。

本発明は、これを出発物質として不純物を除去し、高純
度のメチルコバラミンを得る方法であるが、上記の工程
を更に詳細に述べれば次のとおりである。

■の工程 反応混合物のｐＨを約２．５〜７．０に調整する工程で
あるが２通常は希塩酸水溶液、好ましくは０．０３Ｎ以
下の希塩酸を用いておこなう。ｐＨは５前後が最も好ま
しい。この範囲のｐＨに調整することによって吸着量の
増加と溶出分難に著しく効果がある。ｐＨ７，０を超え
た場合は未分離となり不利である。

（のの工程 このメチル化反応液を、シリカゲルに接触さぜる工程で
ある。シリカゲルとしては例えばシリカゲル−４０（メ
ルク社製）などを用いる。シリカゲル−４０は、比表面
積が６５０　ｍ　／　、！ｉ’で他のシリカ１ゲルに比
し大きく吸着に有利である。

溶出は、低級脂肪族アルコール−水または低級脂肪族ケ
トン−水、好ましくはメタノールを用い。

ｓｖ　Ｏ，７でおこなうことが好結果を与える。メタノ
ールは約５９６のアセトンが好ましい。

この操作により、目的物質は吸着部にあり、塩化ナトリ
ウム、ヒドロキシコバラミンなどが非吸着部分として除
かれる。

■の工程 目的物質であるメチルコバラミンを含む吸着物に、更に
低級脂肪族アルコール類−水を流出せしめ、吸着物を留
出する工程である。この際ｓｖは０．５〜１．０の範囲
でおこなうことが好ましい。

低級脂肪族アルコール類とは、メ、タノール、エタノー
ル、プロパツール、ブタノールなどがあげられるが、メ
タノールが最も好ましい。メタノールの濃度は１５９６
前後が好ましい結果を与える。

この工程により目的物質であるメチルコバラミンは非吸
着部分にあり、吸着されるのは黄色不純物である。非吸
着部分には、メチルコバラミンのほか、シアノコバラミ
ンが存在するものと考えられる。

■の工程 該留出液を、ジビニルベンゼン／スチレン系共重合体樹
脂に接触させる工程である。

ジビニルベンゼン／スチレン系共重合体はポリスチレン
系のもので、構造的には下記の構造（Ｉ）を有している
。

具体例をあげれば９例えばダイヤイオンＨＰ　−２０ま
たはダイヤイオンＨＰ　−４０などをあげることができ
る。

溶出は、低級脂肪族アルコール−水、または低級脂肪族
ケトン−水でおこなうが、最も好ましいのは、１０％ア
セトン水溶液でＳＶは１．０程度である。

この操作により、非吸着部分にはシアノコバラミンが、
吸着部分には、目的物であるメチルコバラミンが存在す
る。

■の工程 吸着部から目的物質であるメチルコバラミンを得る方法
である。

具体的には、低級脂肪族ケトン、好ましくは２０％アセ
トン水溶液を、上記カラムにｓ　ｖ　１．０で流し。

目的物を脱着せしめたのち、更に低級脂肪族ケトン、好
ましくはアセトンで結晶化し、常法により目的物である
メチルコバラミンを得ることができる。

本発明のメリットを要約すると次のとおりである。

（１）高純度拳高収帛のメチルコバラミンを得る工業的
な方法である。

（２）本性では、シリカゲルクロマトおよびジビニルベ
ンゼン／スチレン系共重合体樹脂クロマトの再精製工程
を食塩および低級アルコールおよび低級ケトンの水溶液
で、同一カラム内溶出除去をおこなうため、大幅な時間
短縮と、精製設備が不要である。

次に２本発明の代表的な実施例を掲げるが２本発明がこ
れらのみに限定されることがないことはいうまでもない
。

実施例１ シアノコバラミンからメチルコバラミンを製造する方法
（特公昭４５−３８０５９）にしたがい、還元・メチル
化反応（シアノコバラミン８．０．９）ヲオこない２反
応溶液から残余のヨードメチルを濃縮留去し、　９５９
６メチルコバラミン含有メタノール−水溶液６００　ｃ
ｃを得た。

溶液を希塩酸水溶液（０，０３Ｎ以下）にて、　　ｐＨ
５，０に調整した後、シリカゲ／ｌ／　（Ｋｉｅｓｅｌ
ｇｅｌ−４０メルり社製）５００ｃｃが充填されたカラ
ムにｓ　ｖ　Ｑ、５の流速で吸着させる。次いで、５％
メタノール水溶液５００　ｃｃを５ＶＯ９７にて溶出し
、ヒドロキソコバラミン、食塩および金属錯体塩（可溶
化物）の除去をおこなう。次いで、１５％メタノール水
溶液１５００ｃｃをｓ　ｖ　０．５で流し、　９９９６
メチルコバラミン、微量のシアノコバラミンを含有する
溶液１０００　ｍｌ、を溶出した。この溶液をジビニル
ベンゼン・スチレン共重合体樹脂（ダイヤイオンＨＰ　
−２０）　１０００ｃｃが充填されているカラムに導き
、ｓｖＯ，５で吸着せしめ。

続いて１０９６ア七トン水溶液４０００　ｃｃをｓ　ｖ
　１．０で流し、シアノコバラミンを除去し、続いて２
０％ア七トン水溶液１５００ｃｃをＳｖｌ、０で流し、
メチルコバラミン１０００　ｃｃを溶出した。これを６
０℃以下で減圧。

濃縮し、　１００ｃｃ水溶液とした。これにアセトン１
００　ｃｃ加えて、４０℃に溶解後、アセトン８００Ｃ
Ｃを徐々に滴下、結晶化をおこない、メチルコバラミン
ｑ、４ｐｃ収率９２４５％）を得た。結晶はＨＰＬＣ法
で含量測定の結果メチルコバラミン９９．９％であり。

シアノコバラミンは検出されなかった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）シアノコバラミンを常法によりメチル化して、メ
   チルコバラミンを主成分とする反応混合物を得、この反
   応混合物を出発物質としてこれを精製し、高純度のメチ
   ルコバラミンを得る工程において、次の５つの工程を結
   合することを特徴とする高純度のメチルコバラミンの製
   造法 ［１］反応混合液のｐＨを約２．５〜７．０に調整する
   工程、 ［２］シリカゲルに接触させ、該吸着物に低級脂肪族ア
   ルコール−水または低級脂肪族ケトン−水を流出せしめ
   る工程、 ［３］次いで該吸着物に、低級脂肪族アルコール−水を
   流出せしめ、吸着物を留出する工程、 ［４］該留出液をジビニルベンゼン／スチレン系共重合
   体樹脂クロマトグラフィーと接触させ、その際、低級脂
   肪族アルコール−水または低級脂肪族ケトン−水を低濃
   度から段階的に濃度をあげて溶出せしめる工程、 ［５］吸着部を、低級脂肪族ケトン−水を流出して吸着
   物を脱着せしめ、該留出液を濃縮し、低級脂肪族ケトン
   を加えて結晶化させ、結晶部より高純度のメチルコバラ
   ミンを得る工程