JPS6284055A - リポキシゲナーゼ及びシクロオキシゲナーゼ抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明汀カテコール誘導体、その製造方法お上びこれを
有効成分とする治療用組成物に関する。

本発明によれば、一般式（Ｉ）： 〔式中、Ｒに炭素数ｌ−に個（これらの炭素原子の１個
に場合により不整炭素原子である）の直鎖または分岐鎖
脂肪原炭ｆヒ水素基；場合により炭素数１〜７個のアル
キル基の１個また１Ｊそれ以上により置換されたモノ−
またにビシクロアルキル基（このモノ−またにビシクロ
アルキル基の炭素原子の１個に場合により不整炭素原子
である）；フェニル基；ハロフェニル基；ニトロフェニ
ル基：またげ炭素数７〜７個のアルキル基、トリフルオ
ルメチル基またはｃｏｏｙ基（Ｙは水素原子または炭素
数／、ｊ個のアルキル基′に表わす）の１個またはそれ
以上により置換されたフェニル基を表わす〕で表わされ
るカテコール誘導体が提供される。

本発明のカテコール誘導体ｉ　１７ボキシゲナーゼおよ
びンクロゲナーゼの抑制剤である。このｆヒ金物に非ス
テロイｒ系の抗炎症剤、抗血栓剤、抗アレルギー剤、抗
虚血症剤および抗過敏症剤として使用し得る。

本発明によれば、史に、式（０）： で表わされる５−（３，ｔｔ−ジヒｒロキンフェニル）
インチオ尿素と一般式（川）： （式中、Ｒぼ前記の意義ヲ有する）のトシレート（ｔｏ
ｓｙｌａｔｅ　）　　と全反応させることを特徴とする
、前記一般式（１１のカテコール誘導体の製造方法が提
供される。

上記反応に反応剤を不活性雰囲気下、無水メタノール中
でｔｔｌｒ〜７−２時ｌ還流させることによって行われ
ることが好ましい。上記の８−（Ｊ、ｇ−ジヒドロキシ
フェニル）−インチオ尿素（［１にその塩化水素塩とし
て使用することが好マ１．い。トシレート（ｌｌ）中の
Ｒで表わされる基はラセミ体型であるか又は光学的に活
性な形であり得る。

５−（ｊ、ｔｔ−’）ヒドロキシフェニル）−インチオ
尿素（ＩＩ）は、Ｊ、ＤＡ漉認、　Ｕ、Ｔ庇凪Ｅ、　Ｂ
、ＰＡＮＫＯＷおよびＨ，Ｗ、ＷＡＮＺＬＩＫ　、　−
Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ　−。

／９７Ｑ、ｌｌ、／２７／に記載される°方法から誘導
された方法で′Ａ↓することができる。トシレート（［
１）ＨｌＡ、５ＴＲＩＴＷＩＥＳＥＲＪｒおよびＡ、Ｃ
。

ＷＡＩＳ　Ｊｒ　、　”　Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、、　
−／　９１．コ、−２７゜２ｑＯＫ記載された方法から
誘導した方法で調製することができる。

本発明によれば更に前記一般式（１１のカテコール誘導
体の少なくとも７種を活性成分として含有する薬剤組成
物が提供される。

次に実施例により本発明を説明する。

実施例１ μｍ（２−メチルブチルチオ）−カテコールコ２９ＣＯ
，／％ル）ノＳ−（３、”−ジヒドロキシフェニル）−
インチオ尿素を磁気攪拌機を有するＩｌ＆のフラスコ中
で窒素流下でｊＯ−の無水メタノール中に溶解した。こ
の溶液を加熱し、／！０ｄの無水メタノール中に９．２
Ｖのナトリウム（ｇ当りを含有するナトリウムメトキシ
１の溶液を加えた。−μ、２　？　（０，１モル）の２
−メチルブチルトシレー）　’ｉ　ｆ　Ｏｄメタノール
中に溶解した溶液をメタノールの沸点で反応混合物中に
注入した。

反応混合物音ｇ１時間還流し、次いで減圧（２０００／
ｅスカル）下で溶媒を蒸発除去した。

残留物全貌イオン水中に溶解し、２０４．塩酸で酸性化
した。ジエチルエーテルで抽出後、有機相を水洗し、次
いで無水硫酸ナトＩＪウム上で乾燥した。

ジエチルエーテルを蒸発させて赤色油状物ケ得、これ全
溶離剤としてヘキサン：酢酸エチル（容量比ｑｒ：ｓ）
混合物ヲ用いてシリカゲル上でのクロマトグラフィー−
により精製した。収率は６ｇ壬であった。この化合物の
同定と構造決定ｒｔｐＭＲスペクトロスコピーと元素微
量分析によって行った。

ＣＨＯＳ 理論値（憾）　　　１！１２．２ｔｔ　　　７．ルｏ　
　　ｉｓ、ｏｔ　　　ｔｒ、ｔ。

実測１直Ｃ％）　　　　４２．０１　　　７！９　　　
１１．ＩＩ　　　　／ｇ、９９実施例２ 例１と同様にして標記の（ヒ合物ｉ　ｊ　ｇ　４の収率
で得た。この１ヒ合物は黄色の油状であった。〔α〕２
６＝＋λλ、ｊλ、Ｃ＝Ｏ，ｔ、クロロホルム。その同
定と構造決定はＰＭＲスペクトロスコピーと元素微量分
析により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（％）　　Ａシ２ｔｔ　　　７．ＡＯ／丸０４　
　　／！うｉ。

実測値（冬）　≦シλ／　　　７．４７　　　／尤２２
　　　／ｊ、０／実施例３ λ−メチルーブチルトシレートの代わりにメンチルトシ
レート會使用したこと以外実施例１と同様にして標記の
化合物＞ｒｑｂの収率で得た。この化合物は融点ｌ−μ
’Ｃ（ｋｏｆｌｅｒ　）　　の固体であった。その同定
と構造決定ｉＰＭＲスペクトロスコピーと元素微量分析
により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（ｑｂ）　　ｌｎ１．！３　　　ｒ、Ａ３　　　
／１．ｔｔｌ　　　／／、μ３実測１直（＝ｇ）　　Ａ
ざ、１ｔｌｒ　　　ｒ、７ｔ１　　　／１．２３　　　
／／、２１実施例μ メンチル） ２−メチル−ブチルトシレートの代わりにｌ−メンチル
トシレートを使用したこと以外、実施例１と同様にして
標記の１ヒ合物ケ１０鳴の収単ｆ得た。コノ化合＃Ａは
融点／／９℃（Ｋｏｆｌｅｒ　）の固体テアツタ。（ｃ
り”　＝−４−９３，９、ｒ％Ｃ＝　１、エタノール。

その同定と構造決定はＰＭＲスペクトロ・スコピーと元
素微量分析により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（１＋）　　Ａｉｒ、ｊＪ　　　ｒ、１．３　　
　／／、ｔｔｔ　　　／／、ｔｔ３実測１直（％）　　
１，７，９９　　　Ｌ３７　　　／／、２２　　　／シ
Ｏｊ実施例ケ μｍ（ｌ−メチルへブチルチオ）−力テコールコーメチ
ルーブチルトシレートの代わりにｌ−メチルーヘブタニ
ルトシレートヲ使用したこと以外、実施例１と同様に［
−で標記の化合物７７．４％の収率で得た。この化合物
に油状であった。その同定と構造決定ｆｌＰＭＲスプク
トロスコピーと元素微量分析により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（４）　　６１．．１０　　　Ｌ７０　　　／２
．ＩＩ　　　／２，４０災測１直（％）　　　Ａｊ、９
Ｏｒ、ｌａｒ　　　　／２，７４ｔ　　　　／２．ＴＯ
実施例ル ｆ−）−）−４’−（／−メチルへブチルチオ）−カテ
ココーメチループチルトシレートの代わＦ）’ｉ’Ｃｅ
−７−メチルへブチルトシレートを使用したこと以外、
実施例１と同様にして標記の化合物をＡ、ｔｑｂの収率
で得た。この化合物に油状であった。

〔αゾ５＝＋７、Ｃ＝　０．７、クロロホルム。その間
り 定と構造決定はＰＭＲスペクトロスコピーと元素微量分
析により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（壬）　　ルＡ、１０　　１７’、７０　　１２
Ｍ　　　ｊＪ、ｌ、０実測値（％）　　ｌ、ｊ、９７　
　１ｒ、Ａｒ　　　１２Ｊ３　　　／、ｌ、７／実施例
７ μｍフェニルチオ−カテコール（Ｒ＝フェニル）ノーメ
チルーブチルトシレートの代わりにフェニルトシレート
を使用したこと以外、実施例１と同様にして標記の化合
物ｉ　／　７　％の収率で得た。

コノ比せ物ハ融点ｔ　ｌ＃ＩＡ　’Ｃ（Ｋｏｆｌｅｒ　
）　　の固体であった。その同定と構造決定ｆｌＰＭＲ
スペクトロスコピーと元素微量分析により行った。

ＣＨＯＳ 理論１直（憾）　を瓜０３　　　１ｔ、ｔ２　　　　／
１ｔｊ７　　　　／μ、６９実測値（’ｌ’ｌ）　　Ａ
Ａ、００　　　ｔｔ、７０　　　ｔｔｔ、４ａ　　　ｔ
ｔｔ、４４実施例ｇ μｍシクロへキシルチオカテコール（Ｒ＝シクロヘキシ
ル） ノーメチル−ブチルトシレートの代わりにシクロヘキシ
ルトシレートに使用したこと以外、実施例１と同様にし
て標記の化合物′Ｔｊｌ傷の収率で得た。この化合物に
融点／　ｇ　Ｉ　’Ｃ（Ｋｏｆｌｏｒ　）　　の固体で
あった。その同定と構造決定ｉｃＰＭＲスペクトロスコ
ピーと元素微量分析により行った。

ＣＨＯＳ 理論呟（釜）　６ペ２ｊ　　７．λＱ　　　／ｌｔ、２
ｔ　　　７μ、λ９実測値（％）　　Ａ＜ｌ、ｌｑ　　
　７．Ｊ／　　　／居、２３　　ｌμ、２７実施例？ Ｉｔ−（３，ｊ−ジメチル）−フェニルチオカテコール
Ｃｌ１＝−（３，！！−ジメチル）−フェニル） ノーメチループチルトシレートの代わりに３゜ｊ−ジメ
チルフェニルトシレート全使用したこと以外、実施例１
と同様にして標記のｆヒ合物金２３係の収率で得た。こ
の化合物に油状であった。その同定と構造決定１／！Ｐ
ＭＲスペクトロスコピーと元素微量分析により行った。

ＣＨＯＳ 理論値（優）＋、ｒ、λ６　　よ７３　　／λ、９９　
　　／３．０２実側値（％）　乙Ｌ２０　　　Ｊ、５’
Ｊ　　　／λ、９／　　　／２．９１Ｊ実施例ＩＯ μｍ（２，ｔ−ジ−トリフルオルメチル）−フェニルチ
オ−カテコール（Ｒ＝２．、＜−））リフルオルメチル
フェニル） ノーメチループチルトシレートの代わりに（２゜Ａ−，
９−）＋１フルオルメチル）フェニルトシレートを使用
したこと以外、実施例／と同様に１．て標記の化合物？
　／　３　％の収率で得た。このｆヒ合物は融点／／Ｑ
℃（Ｋｏｆｌｓｒ　）　　の固体であった。その同定と
構造決定ｎ　Ｐ　Ｍ　Ｒスペクトロスコピーと元素微量
分析により行った。

ＣＨＯＳ　　　　　　　Ｆ 理論値（４）　　ｇ７．ｔｔＡ　　Ｑコｆ　　９．（１
）７　９．０！　　３，１．／ｒ実測値（４）　　ｔｔ
７．３Ａ　　２．ｊＴ！　　ｒ、９１’　　１．９１　
３Ｊ／３リポキシゲナーゼ（ＬＯｓ　）はアラキドン酸
（ＡＡ）をヒドロキシ誘導体とロイコトリエンに変換す
る。

これらの生成物に炎症および過敏症疾患に対１７て潜在
的に重要な役割ケ有する有効な薬剤である。

種々のＬＯｓがＡＡに対して作用する：そ（、て原則的
に、 ｊＬＯｉロイコトリエンを生成する： １、ＬＬＯｎ／２−ヒＰロペルオキシエイコサテトラエ
ン酸（／２ＨＰｇＴＥ）と他の１２ヒＰロキシ化合物を
生成する： ／　ｊＬｏは／１ＨＰＥＴＢと他の／ｊヒＰロキシ化合
物および（低濃度で）ｒＬｏと／／ＬＯを生成する。

ＬＯ系列の酵素による最も重要な生成物は、ｊ−ＬＯに
より生じるロイコトリエンである。喘臭とアナフィラキ
シ−反応に関して５Ｒ８−Ａについて示唆されている重
要性と５Ｒ８−Ａがロイコトリエンに属するという知見
により、これらの物質の生物学的効果についての研究に
おける興味が刺激された。ＬＴＣｇとＬＴＤ　　μ（０
，／、ｌ。

ｎＭ）は、ヒスタミンに関連する５Ｒ８−Ａの生物学的
活性の測定に使用されたとき、モルモットの回腸の濃度
依存性の収縮ケ生じた。モルベースで用いた場合、ヒス
タミンの活性ＨＬＴ（、’の活性の２００分のｌである
ことが認められており、このことは一単位のＳ　ＲＳ　
−Ａ　（Ａ　ｎｇ　Ｈｉｓｔ、ＨＣ＃　）が約０．２　
ｐｍｏｌｅのＬＴＣ”に相当することを示唆している。

ＬＴＣｇとＬＴＩ）’はまたモルモットの皮膚の血管浸
透性を増大させ、また５Ｒ３−Ａについて以前から認め
られているものと同じような平滑筋刺激性を有【、てい
る。ＬＴＣｇとＬＴＤ　　ｔｔは心臓や肺における微細
循ｆｌ　（ｍ１ｃｒｏ−ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ　）に
おいて臨界的な役割を果す。

ＬＴＢ　　４１：を後毛細管側静脈中の内皮に対する白
血球の付着を生せしめることおよび顕著な走化性効果を
有することによって白血球の移行に影響する。従ってロ
イコ）　＋１エンは、直接的過敏症反応および急性炎症
反応のごとき宿主防御＠樋における重要な媒介物質であ
る。更に、ある種のシクロオキシゲナーゼ（ＣＯ）の生
成物およびロイコトリエンの効果は相補的である。しか
して血漿漏洩（ｐｌａｓｍａ　ｌｅａｋａｇｅ　）　　
ｋ生じるロイコトＩＩ　ｘ　ｙと血管拡張剤ＰＧＥλお
よびＰＧＩＪとの間の共働作用に浮腫の形成において重
要であり得る。更に、気管支収縮（ｃｏｎｓｔｒｉｃｔ
ｉｏｎ　）におけるロイコトリエンとトロンボキサン（
’ｒＸＡｕ　）との１Ｗの相剰効果は啄めて重要である
。ＬＴＣｔｔとＬＴＤ＆にモルモットの肺でＴＸＡコの
放出を生起さル０ＴＸＡｕは気道に対する強力な収縮剤
であるので、その放出にアレルギー症状の気管支厘傘の
原因となっている。更に幾つかの試験結果１−ｊ、ＰＡ
Ｆ−アセザー（Ａｃｅｔｈｅｒ　）のある種の作用１Ｌ
ＴＢ”により仲介されることケ示しているように思われ
る。非ステロイＰ系の炎症抑制側（ＡＩＮＳ）によって
はアナフィラキシ−は抑制されない。逆にこれらｕ　Ｌ
Ｏｓ系のＡＡに対する作用を促進するのでアナフィラキ
シ−反応を増大させる。皮質ステロイＦ’　（Ｃ８）ｔ
ｒｉホスホリノぞ一ゼＡコのペプチド抑制剤であるリボ
モジュリン（ｔｉｐｏｍｏｄｕｌｉｎ　）の合成を刺激
することによって作用する前駆体の放出を妨ケる。ＡＡ
の放出を抑制することによって、Ｃ８がＣＯ生底物のみ
ならず、Ｌｏｇ生成物の生成、従ってロイコトリエンの
生成を抑制する。

Ｌｏ８系酵素に関する知識の増大によって、新規なかつ
治療に対してより有効な薬剤、特に、喘息、アレルギー
心臓アナフィラキシ−１脳の虚血症および炎症の如き直
接的過敏反応に関連する病気の治療剤を開発できる新し
い可能性が示された。このような薬剤の効果に最終生成
物の拮抗作用あるいはキーとなる中間体ＬＴＡｇの発生
と変換に関係する酵素の抑制とに基づいている。ロイコ
トリエン系とシクロオキシゲナーゼ系の両者に対する効
果もまた価値のあるものである。

ｌ）大豆リポキシゲナーゼの潜在的抑制剤としての７種
の化合物についての°試験管内”選別試験（ｓｃｒｅｅ
ｎｉｎｇ　　） ａ、概説 モノヒドロキシ−エイコサテトラエン酸（ｉ（ＥＴｈ：
ｓ）に、種々の咄乳動物の細胞および組織中のアラキド
ン酸（ＡＡ）の定量的に重要な代謝物質である。例えば
、／１−Ｌ−ＨＥＴＥＨ血小板から確認されておりニー
ｔ−０−ＨｇＴＥｉうさぎのＰＭＮ　　・から：／２−
Ｌ−）ＩＥＴＩＥ％　／　／−１（ＥＴＥおよび／　ｒ
−ＨＥＴＥＨモルモットの肺とラットの乳腺細胞から：
そしてｊ−ＨＥＴＥ、ｆ−ＨｇＴＥ、９−ＨｇＴＥ、／
／−ＨＥＴＦＪおよび／ｕ−）ＩＦＪＴＥは人の好中球
から確認されている。かかるＩ（ＥＴＥの分布は、リポ
キシゲナーゼにより酵素的に促進されるＡＡ代謝に依存
１−且つその代表的なものである。

このような生成物の有する生物学的役割にまだ完全には
明らかにされていない。しかしながら、人の血小板から
得られる／　２−ＨＥＴＥＨ人の多形核白血球に対し走
化性活性を示すことが知られている（　Ｓｉｅｇｅｌ　
、　Ｍ、１．等−Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓｅ
ｉ、　−７７，３０１〜３／λＨｉｑｒｏ）。ｔ−ＨＰ
ＥＴＥ（ハイドロペルオキシ酸）ニ、遅反応性物質（Ｓ
ＩＯＷ−Ｒｅａｃｔｉｎｇ−８ｕｂ＋ｔａｎｅｅ　）の
前駆体であり、直接的過敏症の症状を媒介する非常に強
力な平？１１筋収縮剤である。かくして、す２キシゲナ
ーゼの抑制に、アレルギー抑制剤あるいは炎症抑制剤用
に選別する時にのみ特に有益であると考えられる。

吐乳類および植物のりボキシゲナーゼ（大豆）に一般に
多くの生化学的性質を有しており、植物酵素の抑制剤の
大部分も血液の血小板や白血球から誘導されるリポキシ
ゲナーゼを抑制することが証明されている（　Ｂａｕｍ
ａｎｎ、Ｊ、等、−Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ”２
０、Ａ２７−６３９．／９１０’）。大豆のりポキシゲ
ナーゼｌｄ’ｊ−ＨＩＥＴＥの生成だけｔｆ＋ＩＪ導す
ること（Ｃ，Ｐ、Ａ、Ｖａｎ　Ｏｓ等＊　−Ｂｉｏｅｈ
ｉｒｎ、　ａｎｄＢｆｏｐｈｙａ、　　Ａｃｔａ　　Ｉ
Ｉ　　Ａ　　Ａ　　Ｊ　　、　　／　　７　７　　＋　
　／　　９　３　．１９ｇ／）また、血小板ＩＩボキシ
ゲナーゼよりも７０倍以上鋭敏であること（Ｗａｌｌａ
ｅｈ　、　Ｏ，Ｐ、　、等、−Ｂｉ＋□ｃｈ−１ｍ　、
　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　”Ａｅｔａ　Ａ　＆３．
３　ｉｔ　／　〜３７２゜１ｑｚｉ）が立証されている
。更に／ｊＨＥＴＥｉトロンボキサンＡλの形成を間接
的に刺激する血小板リポキシゲナーゼ（ｔ　２−ＨＥＴ
Ｅ）に対する強力で且つ特異的な抑制剤である（　Ｖａ
ｎｄｅｒｈｏｅｋ。

Ｊｌ等、−Ｊ、Ｂｉｏｌｏｇ、　Ｃｈａｍ、　２２　ｊ
　、　ｊ　９９　Ａ　〜ｊ９９１：１９！０）。／ｊ−
ヒドロペルオキシ用族体も豚の大動脈のプロスタサイク
リン・シンセターゼ活性全抑制すると報告さルている（
　Ｇｒ　−ｙｇｌｅｗｓｋｉ、　Ｒ，Ｊ、等、−Ｐｒｏ
ａｔａｇｌａｎｄｉｎｓ　−／　−２。

ＡＪ’ｊ〜７／Ｊ：／９７４）。この抑ｍＪ作用ｉ分解
的酸化種または同様な活性全盲する種、おそらくばＯＨ
基の生成によって発揮される（　Ｗａｉｅｓ　。

Ｓ、Ｊ、等、＠Ｂｌｏｏｄ−、！−２，１９１／　、／
９７９）。

ｂ、物質および方法 分光光変法はＣｏｒｅｙ　Ｅ、Ｊ、等によって酵素活性
全測定するために開発されたものである（”Ｊ。

Ａｍｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓａｃ、　”　／　□ＪＩＣ
、／　７　ｒＯ〜／７３２：／９ｆ−２）。０．２　Ｍ
の通気したボラツクス（Ｂｏｒ−ａｘ）：ｄ衝剤（ｐＩ
■＝９．００　）ｆ１００単位の大豆リポキシゲナーゼ
と混合して、最終容積ｋ　’、　Ｉ　ｍｅ！とじた。抑
制剤を試験する時に、この抑制剤をｉｏ−楠〜ｔ　（１
１−５Ｍの範囲の最終Ｉ＃度でＯ６ｔゴ加え、次いで室
温で１０５）−間の予備培養を行った。反応框ｌ０−４
Ｍのアラキドン酸により開始した。９０分間室温で培養
後、／　−ｔ　−ＨＰＥＴＥ　ｆ２３　Ａ　ｎｍでの吸
収を測定することにより求めた。

この方法でに既知のりボキシゲナーゼの抑制剤を用いて
確認した。各々の供試物質について、使用した彼長にお
ける化合物の吸収を考慮するために、煮沸したりボキシ
ゲナーゼを対照とした。酵素活性のノξ−セントａ各々
の濃度について計算し、＃素活性のｊＯ％を抑制するの
に要する物質の量を公饗（Ｍ　）　／’抑制率優）の対
数を記入した一組のデータボイ゛ントについての回帰線
によって計算した。

２）″試ｉｖ８を管内での過酸化物アニオンラジカル（
０２−の潜在的抑制。

ａ、概説 炎症］Ｊ、ｊ程の特徴は、内皮細胞壁の完全性（ｉｎｔ
ｅ−ｇｒｉｔｙ）が低下し、血管浸透性が変化しそして
多形核白血球（ＰＭＮ）の如き食ｉｔ［胞が活性什され
、次いで７群の活性化合・物（そのうち幾つかはフリー
ラジカルである］が＃ｌ胞外空［■に放出され、発生す
ることである。これらのラジカル種と炎症の他の特徴と
の関係は完全には理解されていない。

ＰＭＨの如き活性化された炎症細胞の呼吸器破裂の本質
的な装素の７つは、０２が酵素によシー価の過酸化物ア
ニオンラジカル０２−に還元されることである。発生し
た０２−の大部分は細胞外空間中に放出きれ、そこで自
発的なモ均化が生起して付随的にＨ２Ｏ２と０２・が発
生する。細胞外空間中に０２−、Ｈ２Ｏ２およびキレー
ト化された金属触媒が同時に存在するとヒドロキシラジ
カル（ＯＨ＠）および−重項酸素（’０２１の如き更に
活性なｊ９素誘導分子が更に発生することになる。スー
パーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）は０２−の酵素
的捕促剤として作用する（　ＭｃＯｏｒｄ等Ｊ、Ｂｉｏ
ｌ、ｃｈｅｍ、　２４１　ＩＩ　。

ｔｏ弘２〜４０ｊｊ：／！７ＧりＪｏ−万、ｌ−メチオ
シンとＤＭＳＯは両方ともＯＨ・捕捉剤である。

Ｅｎｚ−Ｈ２−０２−４Ｅｎｚ＋０２−＋２Ｈ＋ＳＯＤ （捕捉剤Ｊ ＤＭＳＯ （捕捉剤） 生成の仮説的機構 概要　／ フリーラジカル発生を発生させる基質−キサンチンオキ
シダーゼのモデルは十分に研究されてお？）　（Ｆｒｉ
ｄｏｗｉｃｈ、１．、”Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、−２
／　ｊ　。

≠０３３〜弘０！７”、ｌり７０’　ｌ、また“試（験
管内″および”生体内″の両方でフリーラジカルを発生
させるのに使用されている（　Ｏｈｍｏｒｉ、Ｈ，、等
”’Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｐｈａｒｍａｃｏ１．’　　２７
　、　／　３り７〜／４ＬＯＯ；／り７１４゜ ０２−を特異的に検出し且つ監視するための好都合でか
つ精度の良い分光光度法的評価は、このラジカルがヘリ
シトクロムｅ　（ＯｙｔＯ”Ｊ　ｋ還元する性質に基づ
いている。重炭酸塩緩衝剤中にキサンチンオキシダーゼ
とハイポキサ／チンおよび０ｙｔＯ’＋が存在すると０
２−が発生し、これが最初にＯｙｔ　Ｏ”　ｆ　Ｃｙｔ
　Ｏ２＋に還元しく　Ｄｅｌ　Ｍａｅｓｔｒｏ。

Ｒ，Ｆ、−Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ　ＦＬｅｓ、−
２２，２３１〜２７０　：ｌ’ｙｒｉＪ、次イテＯＨ・
ニよる幾分カッＣｙＬＣ２＋の再酸化が生じる（Ｆｏｎ
ｇ、に、、等、　、　Ｃ！ｈｅｍ、Ｂ　ｔｏｌ　。

Ｉｎｔｅｒａｃｔ、　／　ｊ　、　７７〜ｒり；／り７
６）。

ハイポキサンチン＋キサンチンオキシダーゼ＋５＋ ０ｙｔＯ→０２−＋ＣｙｔＣ２＋＋０Ｈ１１０ｙｔＯ” 過酸化水素は分子状酸素の２’ｆｌＬ子還元によるかあ
るいは０２−の不均化によって形成される。カタラーゼ
（（！ＡＴＩはＨ２Ｏ２をＨ２Ｏに還元する。

ｂ、物質と方法 次の方法はＤｅｌ　Ｍａｅｓｔｒｏ、Ｒ，Ｆ、、Ｊ、Ｂ
ｊｏｒｋとＫＪ。

入ｒｆｏｒｓによシ記述された方法と同じであるじＭｉ
ｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ、ａｅｓ、’　　２　２　．２
３り〜＋２！ｌＡ：１５Ｆ１１）。すなわち、シトクロ
ム（３”（Ｏｙ　ｔ　Ｏ”　Ｊの還元は重炭酸塩緩衝剤
（ｐＨ＝７．ｊ　ｊ　ｒ＜０．／３２ＭＮａｃ１．　　
ｌｔ、７　Ｘ　／　０−’　ＭＫｃｌ、２Ｘ　／　０−
’　ＭＯａｅ１２゜八２　Ｘ　／　０−’ＭＭｇ８０４
　、０．０／ざＭＮａＨＯＯ５）中の０．７６ｍＭのハ
イポキサンチン、ｊ　Ｘ　／　０−５　ＭＯｙｔＯ”か
らなる系中で評価した。反応はキサンチンオキシダーゼ
を０．０７　Ｕ　／−の濃度で添加することによって開
始した。！ｊＯｎｍでの吸収の増加を恒温化した分光光
度法セル中で３７℃で７分間毎にμ分間監視した。

各々の供試化合物はキサンチンオキシダーゼよシ前に添
加した。活性度の単位は０．００　／単位１分の変化計
として定義した。酵素活性のパーセンテージ全供試化合
物の各々の濃度について算出し、そして酵素のｒｏ％’
ｅ抑制するのに要した物質のｆｉｌ’（ＩＯ５ｏＪを濃
度いＨ／抑制率（％］の対数を記載した７群のデーター
ポイントについての回帰線によって算出した。

Ｃ８結　果蛸き） ３）　人の血小板ミクロソーム中のアラキドン酸力ａ、
物質および方法 Ｐ、ＨＯ，Ｐ、Ｗａｌ　ｔｅｒｓとＨ，５ｕｌｌｉｖａ
ｎの方法Ｃ″Ｐｒｏ−ｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ’　　／
　、２　、りＩＩ”、／り７６）に従って、酵素的評価
をシラン化した（　５ｉｌａｎｉｚｅｄ）ガラス器具内
で行った。！　ＯｍＭ）　’）　スＨＣｔ緩衝剤（ｐＨ
＝７．り］、ｊｍＭの一一トリゾトファン、２Ｍのメト
ヘモグロビン、０．２■のミクロソーム粉末および供試
化合物を総容積０．２−中に含有する反応混合物音３７
℃で３分間培養し、その後７０μｔの２０μＭＯアラキ
ドン酸（０，ｏｒｔｔＣＨ）　ｋ添加した。！分間培養
蕾、ｌＯμｔの７Ｍクエン酸を添加して反応を終了させ
た。

混合物−ｑ　ｏ、ｚ−の無水ジエチルエーテルで弘回抽
出し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。残留物を約≠Ｏμ
ｔのエーテル中に再懇濁し、シリカゲル板上でのクロマ
トグラフィーにかけた。溶離液としてはジエチルエーテ
ル／メタノール／酢酸のり０：／：２混合物金用いた。

アラキドン酸に基づくＲＦ値を測定した。薄層クロマト
グラフィー板（ＴＬＣ）ｆＬＫＢウルトラフィルム上で
２≠時間暴露した。スポットの部分的固定は同一の溶媒
系中で標準物質（ＰＧＡ２．ＰＧＥ２．ＰＧＥ２．ＰＧ
Ｆ２ｏ、ＰＸＢ２゜アラキドン酸Ｊを流して行った。定
量的な結果は、展界したフィルムｆ　Ｈｅｗｌｅｔｔ　
Ｐａｃｋａｒｄ　Ｊ　ｊ　？　ＯＡ積分器と接触させた
トランスミッションデンシトメーター（ＥＯＡｐｐａｒ
ａｔｕｓり１０）ｆ用いて走査することにより得た。イ
ミダゾールとインドメタシン全トロン２キサンシンセタ
ーゼとシクロオキシゲナーゼの特異的な抑制に対する正
の標準物質として包含させた。

５９人の＋ｌ１ｌｔ）　４反ミクロン′−１、中のシク
ロオキシゲナーゼの円曲り月　雄羊の精嚢ミクロゾーム
中のプロスタグラジａ、物質と方法 評価方法として、Ｂａｕｍａｎｎ等（Ｎａｕｎｙｎ−５
ｃｈｍｉ　−ｅｄｅｂｅｒｇ’ｓ　’Ａ、ｒｃｈ、Ｐｈ
ａｍ”、　３０７　、７３　：　／り７り）およびＴ　
ａｋｅｑ・ｕｃｈ　ｉ　、Ｃ！、等（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
　／　０　、２３７２　：／り７／）によυ発表された
方法を改良した方法を使用した。酵素的放射線評価をシ
ラン化したガラス器具内で行った。６０ｍＭのトリスＨ
Ｏｔ緩衝液（ｐＨ＝Ｌ３１　ｋ、還元グルタチオン（Ｇ
８ＨＪ／ｍＭの存在下に含み、更にハイドロキノン０．
ｊ　ｊ　Ｍ。

供試化合物および３０μ２の雄羊の精兵ミクロノーム粉
末？含有する認容１ｋ　０．２　ｍｌの反応混合物を３
７℃で５分間培養後、１０μｔの１４０アラキドン酸／
　０−６Ｍ　（０，０ｆμＯＩＪ全添加した。時々振し
ながら３０分間培養後、７０μｔのクエン酸１Ｍ金添加
して反応を終了させた。

混合物を０１ｊ−の無水、ジエチルエーテルで弘回抽出
し、硫酸す）　ＩＪウムで乾燥した。残留物全豹１．１
０μｔのエーテル中に再懸濁し、シリカゲル仮によるク
ロマトグラフィーにかけた。溶離液系としテシエチルエ
テル／メタノール／酢酸≠ｊｒ：／：２混合物を用いた
。ＢＦ値をアラキドン酸に関して測定した。薄層クロマ
トグラフィー板ｉ　ＬＢＫウルトラフィルム上に約２０
時間暴露した。スポットの仮同定（ｔｅ口ｔａｔｉｖｅ
　１ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｉ　’ｆ同一の溶媒
系中の標準物（ＰＧｇｌ　＋ＰＧ”’２＋ＰＧＦ１ａ＋
Ｉ’ＧＦ２ａ＋ＰＧＪ　、ＰＧＡ２．ＰＧＢｌ　、ＰＧ
Ｂ２Ｊを流して行った。定量的結果は光学濃度法によυ
得た。

ｂ、結果 月　キサンチンオキシダーゼの潜在的押部１剤としａ、
物質および方法 尿酸の生成を分光光度法でσ１１１定するＨ、ｌｌＪ、
Ｋａｌｃ　−ｋａｒの方法（Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｏｈｅｍ、
　／　４７　、４！コタ〜４ｔ４ＣＪ。

ｌりμ７Ｊに従ってキサンチンオキシダーゼ活性を測定
した。

分光光度計のキュベツト中にキサンチンオキシダーゼを
加えて、０．０／単位／ゴの最終濃度にし、次いでりン
酸塩緩■「剤０．Ｏｊ　Ｍ　（ｐ）ｌ＝　７．４０ある
いは抑制剤を加えた。反応は最終−吹ｊＸ／Ｃ１）−５
’ｄのキサンチンをカロえて開始ζせた。尿ｒｓ１の放
出はコタｊ　ｎｍで２分間３０秒毎（線状相］に監視し
た。活性度の単位は０．００１モル／分の変化量として
定義し次。酵素活性のパーセント會供試化合物の各濃度
について計算し、また酵素の５０％を抑制するのに必砦
な吻負の量を、抑制率（係）の関数としての濃度（’ｌ
ｄＪの対数を記録した１群のデータポイントについての
回帰線によりｎ出した。

ｂ、結　果 １　人の白血球リポキシゲナーゼ（ＬＯ）の抑制ａ）　
　ｊ−およびノコ−リポキシゲナーゼ、人の多形核白血
球に対する抑制効果 ／、　　／ｊｘ１０６／−の人の白血球を抑制剤の存在
下、Ｏａ”２ｍＭ、’Ａｇ”　０．３　ｍＭ　ｆ用いて
３７℃・で２０分間培養。

２　／μ２／−のイオノフオアを用いて弘分間培養。

Ｊ、　　／容量のメタノールで培養を停止。

！ＡＦＬＰ−ＨＰＬＰ、カラムｏ／ｒ、ｊμｍＶｃよす
分析よ　ピークの高さの測定および内部標準物（ＰＧＢ
２Ｊとの比較。

実験１１ｉｏ、１：結果の分析 ｂｌｊ−、／２−および／ｊ−リポキシゲナーＺ、／／
×１０６／−の人の白血球全抑制剤の存在下、２ｍＭ０
ａ２＋と０．！　＋ｎＭＭｇ２＋ｆ用いて３７℃で２Ｑ
分間培養。

１　１０μｍ／−のアラキドン酸と７μｍ／−のイオ／
７．＋７（Ａ１．？／　１７　Ｊで弘分間刺激。

３、／容量のメタノールで培養停止およびＦＬＰ−ＨＰ
ＬＯで分析。

弘　ビークの高さの測定および内部徐準物（ＰＧＢ２Ｊ
による比較。

考察 ／ｊ−リポキシゲナーゼは、１０−６Ｍ〜３×１０６Ｍ
の濃度の上記三種の化合物によｐ刺激されたのに対し、
！−リポキシゲナーゼはこれらの濃度で抑制された。

実験ｉＦａ　／においては白血球がイオノフオア単独に
よシ刺激されたのに対し、実、駿馬！ではイオノフオア
とアラキト／酸により細胞が刺激されたことが認められ
るであろう。外因物であるアラキドン酸の存在によシ抑
制剤のＩＤ５Ｑは７０倍まで増大した。−万、アラキド
ン酸を添加することによって、通常はイオンフォア単独
で刺激された白血球中では検出不能である／ｊ−リポキ
シゲナーゼの活性の測定が可能である。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒは炭素数１〜８個（これらの炭素原子の１個
   は場合により不整炭素原子である）の直鎖または分岐鎖
   脂肪族炭化水素基；場合により炭素数１〜７個のアルキ
   ル基の１個またはそれ以上により置換されたモノ−また
   はビシクロアルキル基（このモノ−またはビシクロアル
   キル基の炭素原子の１個は場合により不整炭素原子であ
   る）；フェニル基；ハロフェニル基；ニトロフェニル基
   ；または炭素数１〜７個のアルキル基、トリフルオルメ
   チル基またはＣＯＯＹ基（Ｙは水素原子または炭素数１
   〜５個のアルキル基を表わす）の１個またはそれ以上に
   より置換されたフェニル基を表わす〕で表わされるカテ
   コール誘導体。 ２、式（II）： ▲数式、化学式、表等があります▼（II） で表わされるＳ−（３，４−ジヒドロキシフェニル）イ
   ソチオ尿素と一般式（III）： ▲数式、化学式、表等があります▼（III） （式中、Ｒは後記の意義を有する）のトシレートとを無
   水アルカノール中、還流温度で反応させることを特徴と
   する、一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒは炭素数１〜８個（これらの炭素原子の１個
   は場合により不整炭素原子である）の直鎖または分岐鎖
   脂肪族炭化水素基；場合により炭素数１〜７個のアルキ
   ル基の１個またはそれ以上により置換されたモノ−また
   はビシクロアルキル基（このモノ−またはビシクロアル
   キル基の炭素原子の１個は場合により不整炭素原子であ
   る）；フェニル基；ハロフェニル基；ニトロフェニル基
   ；または炭素数１〜７個のアルキル基、トリフルオルメ
   チル基またはＣＯＯＹ基（Ｙは水素原子または炭素数１
   〜５個のアルキル基を表わす）の１個またはそれ以上に
   より置換されたフェニル基を表わす〕で表わされるカテ
   コール誘導体の製造方法。 ３、一般式（ I ）： ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） 〔式中、Ｒは炭素数１〜８個（これらの炭素原子の１個
   は場合により不整炭素原子である）の直鎖または分岐鎖
   脂肪族炭化水素基；場合により炭素数１〜７個のアルキ
   ル基の１個またはそれ以上により置換されたモノ−また
   はビシクロアルキル基（このモノ−またはビシクロアル
   キル基の炭素原子の１個は場合により不整炭素原子であ
   る）；フェニル基；ハロフェニル基；ニトロフェニル基
   ；または炭素数１〜７個のアルキル基、トリフルオルメ
   チル基またはＣＯＯＹ基（Ｙは水素原子または炭素数１
   〜５個のアルキル基を表わす）の１個またはそれ以上に
   より置換されたフェニル基を表わす〕で表わされるカテ
   コール誘導体を有効成分とする治療用組成物。