JPS63132843A - 抗炎症剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗炎症剤に関する。さらに詳しくはヒト由来
アンチトロンビン−１１１（以下、単にアンチトロンビ
ン−ＩＩＩという）を有効成分としてなる抗炎症剤に関
する。

〔従来技術〕

アンチトロンビン−ｍは血漿中に存在するα。

グロブリンに属する糖蛋白質の一種で、その分子量は６
５，０００〜６８，０００であり、プロテアーゼ阻害活
性を有し、トロンビンの凝固活性を強（阻害する。

また、トロンビンに対する阻害作用のみならず、その他
の凝固因子、たとえば活性化Ｘ因子、活性化■因子など
に対する阻害作用をも有している。

その他、プラスミンやトリプシンに対する阻害作用のあ
ることも報告されている。

これらの阻害作用は、一般にヘパリンの共存下でより速
やかに進行することが知られている。

このような薬理作用を有するアンチトロンビン−■は、
凝固異常亢進の補正、具体的には汎発性血管異常症（Ｄ
　Ｉ　Ｃ）を目的として用いられるものである。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明者らは、当該アンチトロンビン−ＩＩＩを他の医
薬用途に使用することを意図して、種々研究を重ねてき
た。

しかして、本発明者らは各種炎症が、プラスミンやトリ
プシン等の蛋白分解酵素活性の上昇と関係があることを
見出した。

そこで、アンチトロンビン−■の抗蛋白分解酵素作用に
着目して研究を重ねたところ、アンチトロンビン−ＩＩ
Ｉが抗炎症作用を有することを見出した。

本発明はアンチトロンビン−■の上記作用を利用した薬
剤を提供することを目的とする。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明は上記新知見に基づいて完成されたものであり、
ヒト由来アンチトロンビン−ＩＩＩを有効成分としてな
ることを特徴とする抗炎症剤である。

本発明で使用されるアンチトロンビン−■は、ヒト由来
のもので、医薬として使用できる程度に精製されたもの
であれば特に制限されるものではなく、たとえばヒトの
全血、血清、血清または凝固した血液から圧搾された血
清等から精製することができる。

アンチトロンビン−ＩＩＩを調製するための出発原ｒ４
としては、たとえばコーンの冷エタノール法で得られる
画分子Ｖ−１が使用される。

アンチトロンビン−■の精製法としては、たとえば特開
昭４８−３５０１７号明細書、特公昭５９−７６９３号
明細書に開示の方法等が例示される。

本発明の抗炎症剤は、アンチトロンビン−ｍ単独、アン
チトロンビン−ＩＩＩとヘパリンとの併用、アンチトロ
ンビン−■・ヘパリン複合体等の態様等で使用される。

なお、アンチトロンビン−ＩＩＩとヘパリンとは元来親
和性を有しており、アンチトロンビン−■・ヘパリン複
合体自体は公知である。当該複合体は、たとえばアンチ
トロンビン−ＩＩＩとヘパリンとを、溶媒の存在下に等
量混合することによって容易に製造することができる。

ヘパリンとしては、医薬として使用しうる程度に精製さ
れたものであればよく、現在臨床上で使用されているも
の（第１１改正薬局方収載品）を使用すれば充分である
。

アンチトロンビン−ＩＩＩとヘパリンとの併用の場合に
おけるヘパリンの配合量は、通常アンチトロンビン−■
に対して、４０〜１６０％、好ましくは６０〜１４０％
、特に８０〜１２０％（最適には両者同単位）である。

本発明の抗炎症剤の有効成分であるアンチトロ。

ンビンー■は、ヒト、イヌ、ウシ、ウマ、マウス、ラッ
ト等の哺乳動物に対して優れた抗炎症作用を有するもの
である。具体的には、たとえば前記動物等の肝炎、膵炎
、腎炎、関節炎等に対して優れた抗炎症作用を有するも
のである。

本発明の抗炎症剤は、通常経口的または非経口的に投与
され、それぞれの投与ルートに応じた製剤として調製さ
れるが、通常はアンチトロンビン−ｍ単独または他の添
加剤とともに凍結乾燥品として調製しておき、用時溶解
する製剤とすることが好ましい。かかる製剤はたとえば
、注射用蒸溜水によって希釈してアンチトロンビン−■
の約ｌ〜ｌＯ％Ｗ／Ｖ溶液を調製し、より好ましくは生
理的に等張な濃度に塩濃度に調製して静脈投与される。

投与量は症状、体重、性別、動物種等によって適宜選択
すればよく、一般的にはヒトの成人に対しては、１００
〜１０００単位程度である。

本明細書においてアンチトロンビン−■の力価はトロン
ビンと試料とを２８℃で５分間反応させ、これにフィブ
リンを加えた時に凝固時間がどの程度延長されるかを測
定し、予め作製しておいた検量線よりその力価を算出し
たものである。この時の単位は正常ヒト血漿を５６℃で
３分間加熱処理し、脱フィブリンを行った上清液の示す
抗トロンビン活性を便宜上１００／一単位として表示し
た。

〔実施例・実験例〕

実験例１ ラットを用いたカラゲニン浮腫に対する抗炎症効果 １５０〜２００ｇのラット（１群５匹）の後足にカラゲ
ニンを投与し、同時にアンチトロンビン−ｍを１００単
位／　ｋｇ、または同じ容量の生理食塩溶液（対照群）
を尾静脈より投与し、１時間ごとに浮腫の容積を測定し
た。

その結果、対照群ではカラゲニン投与直後の容積を１０
０％としてカラゲニン投与３時間後では、浮腫が１７０
％に増大したが、アンチトロンビン−■投与群では１３
５％に増大するにとどまり、アンチトロンビン−■に顕
著な抗炎症効果のあることが確認された。

また、同じ量のアンチトロンビン−■１００単位に予め
ヘパリンを１００単位混合し、アンチトロンビン−■・
ヘパリン複合体を形成せしめた後、その複合体を上記と
同様に投与した群、およびアンチトロンビン−ＩＩＩを
投与後ヘパリンを同単位投与した群では、それぞれ浮腫
が１２８％、１２５％増大するにとどまり、これらの群
にも抗炎症効果のあることが判った。

また、アンチトロンビン−■単独の群とアンチトロンと
ンー■・ヘパリン複合体投与群とアンチトロンビン−■
投与後ヘパリンを投与した群との間では、後２群で効果
がやや強い傾向がみられたが有意ではなかった。

実験例２ アンチトロンビン−■の凍結乾燥製剤を注射用蒸溜水に
溶解し、５匹のマウスに４００００単位／ｋｇ相当量を
尾静脈より投与して７日間観察を続けたが、何ら異常は
認められなかった。また、同じ溶解液を家兎に５０００
単位／ｋｇ投与して２４時間観察したが、体温の異常は
認められなかった。

実施例１ コーンの冷アルコール分画法で得られた画分■−１のペ
ースト１０　ｋｇを生理食塩水１００１に懸濁し、硫酸
バリウムを５Ｗ／Ｖ％になるように加え、室温で３０分
間攪拌し、ｍｌに存在するプロトロンとンを硫酸バリウ
ムに吸着させて除去した。

この上清液をｐ）１６．５に調整し、ポリエチレングリ
コール＃４０００を１３Ｗ／Ｖ％になるように加え、生
じた沈澱を遠心分離して除き、さらにポリエチレングリ
コール＃４０００を３０Ｗ／Ｖ％になるように加え、生
じた沈澱を遠心分離して回収した。この沈澱を冷生理食
塩水約２０ｊ！に溶解し、予め生理食塩水でＵＲ製され
たヘパリンセファロースのカラムへ注入し、アンチトロ
ンビン−ＩＩＩをカラムに吸着させた。このカラムを０
．４Ｍの塩化ナトリウム溶液で洗浄して不純蛋白を除い
たのち、２．０Ｍの塩化ナトリウム溶液をカラムに流し
て溶出してくる部分を回収した。

このアンチトロンビン−■の水溶液にクエン酸ナトリウ
ムを０．６Ｍの濃度に加え、ｐＨ７，８に調整した後６
０℃で１０時間の加熱処理を施し、続いて０．９％塩化
ナトリウム溶液に対しｔｉ透析を行いつつ濃縮してアン
チトロンビン−■のＩＷ／Ｖ％水溶液を得、必要に応じ
て１１１Ｍまたは遠心分離を行って澄明な液とした。

このアンチトロンビン−■のＩＷ／Ｖ％水溶液にマンニ
トール２Ｗ／Ｖ％とクエン酸ナトリウム０．２Ｗ／Ｖ％
を加え、塩化ナトリウムが０．５％になるように少量の
冷菓溜水希釈し、ＩＮの水酸化ナトリウムでｐＨ７，６
に調整した後、滅菌したミリポアフィルタ−で除菌濾過
し、５００単位づつ分注し、凍結乾燥を行って乾燥製剤
とした。

実施例２ １バイアル中、 アンチトロンビン−■　　　５００単位マンニトール　
　　　　　　２００ｍｇ塩化ナトリウム　　　　　　　
　５０弯クエン酸ナトリウム　　　　　　５２■よりな
る凍結乾燥品を用時１０ＷＪの蒸溜水に溶解して、静脈
用製剤とした。

手続争甫正書（自発） 昭和６２年２月２５日 １、事件の表示 昭和６１年特許願第２７９１８０号 ２、発明の名称 抗炎症剤 ３、補正をする者 事件との関係　特許出願人 氏名（名称）　株式会社　ミドリ十字 ４、代理人■５４１ 住所　大阪市東区平野町４丁目５３番地３ニューライフ
平野町４０６号 Ｔｎ　（０６）　２２７−１１５６ ６、補正の内容 明細書第１０頁、上から第５行の「静脈用製剤とした。

」の次行に、以下を加入する。

「実施例３ 急性デオキシコール酸膵炎（犬）に対する効果体重１０
〜１８ｋｇの雑種成人（１群８匹）をベンドパルビター
ル麻酔下に開腹し、大膵管より３０％デオキシコール酸
（ＤＣＡ）０．２ｍｌ／ｋｇを注入し、急性の出血性壊
死性膵炎を作成した。ＯＣＡ投与直後に下記の検体を下
記の投与量でそれぞれ大腿静脈から投与し、２４時間ま
での生存率、血中膵分泌性トリプシンインビター（ＰＳ
ＴＩ、イヌＰＳＴＩ・ＲＩＡを用いる北原らの方法）お
よびフィブリノーゲン量（トロンビン時間法）を測定し
た。なお膵炎作成後６時間にわたり、乳酸加リンゲル液
を１００〜１２０ｍｌ／ｋｇ持続点滴した。

抜生二投与１ （１）アンチトロンビン−■１００単位／ｍｌを１ｍｌ
／ｋＩｒ（２）アンチトロンビン−Ｉｌｌ　１００単位
に予めヘパリンを１００単位混合して、アンチトロンビ
ン−■・ヘパリン複合体を形成せしめた後、その複合体
をアンチトロンビン−ＩＩＩとして１００単位／瞳（複
合体投与群） （３）アンチトロンビン−１［ｒ　１００単位／　ｍ　
ｌの１ｍｌ／ｋｇ投与後ヘパリン１００単位／ｍｌを１
ｍｌ／ｋｇ投与（併用投与群） （４）生理食塩液２ｍｌ／ｋｉｒ 〔以下余白〕 以上の如く、膵炎に対しアンチトロンビン−■、アンチ
トロンビン−■・ヘパリン複合体およびアンチトロンビ
ン−ＩＩＩとヘパリン併用は有効であることが判った。

なお、これら３投与群間には差はなかった。

実施例４ 馬杉腎炎（ウサギ）に対する効果 体重２．５〜３．０　ｋｇの日本在来種雄性白色ウサギ
の腎皮質を取りだし、そのホモシネ−）’　（２０％浮
遊液）を家兎腎抗原として１０ｍ１アヒル（２，５〜３
．０ｋｇ）に腹腔内投与して免疫した。７日間隔で１５
回の抗原投与を行って抗つサギ腎抗血清を得た。このア
ヒル抗血清を体重２．０〜２．５　ｋｇの雄性白色ウサ
ギに２＋ｗｌ／ｋｇ静脈内投与し、馬杉腎炎を作製した
。抗血清投与５日後、尿蛋白（比色法）が３００＋ｇ／
ｄ１以上の動物（正常動物では１５０■／ａ以下）を腎
炎発症動物として選び（１群８羽）、その日から連日１
１日間以下の検体投与を行った。

挟生二艮並１ （１）アンチトロンビン−■１００単位／−１を１１／
ｋｇ静脈内投与 （２）アンチトロンビン−■１００単位に予めヘパリン
を１００単位混合して形成させたアンチトロンビン−■
・ヘパリン複合体をアンチトロンビン−ＩＩＩとして１
００単位／ｋｇ静脈内 投与＋３１７７チトロンビ７−１［１１００単位／ｍｌ
のｌ＋ｌ／に＋ｒ静脈内投与後ヘパリン１００単位／１
を１ｍｌ／ｋｇ静豚内投与 （４）生理食塩液１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与抗血清投与５
日後から１６日後までのウサギの生死を観察するととも
に１６日後の尿蛋白およびＢＵＮ　（ジアセチルモノオ
キシム法）を測定した。

〔以下余白〕

以上の如く、腎炎（馬杉腎炎）に対し、アンチトロンビ
ン−■、アンチトロンビン−■・ヘパリン複合体および
アンチトロンビン−ＩＩＩとヘパリン併用は有効である
ことが判った。なお、これら３投与群間には差はなかっ
た。

実施例５ 体重１８０〜２２０ｇのＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａ＠ｌｅｙ
系雌性ラット（１群６匹）の右後肢足踏皮下にフロイン
トの完全アジュバン）　（６，Ｏ＊／ｍｌ注射用流動パ
ラフィン）を０．１ｍｌずつ注射し、その日から連日１
８日間、以下の検体投与を行った。

挟体二返亙１ （１１アンチトロンビン−ＩＩＩ　１００単位／ｍｌを
１ｍｌ／ｋ［ｒ静脈内投与 （２）アンチトロンビン−■１００単位にヘパリンを１
００単位混合して形成させたアンチトロンビン−■・ヘ
パリン複合体をアンチトロンビン−ＩＩＩとじて１００
単位／賭静脈内投与 （３）アンナト０フビ／−１１ｒ１００単位／＋ｗｌＯ
）　１ｍｌ／Ｉ＋ｉｒ静脈内投与後ヘパリン１００単位
／１を１ｍｌ／ｋｇ静豚肉投与 （４）生理食塩液１ｍｌ／ｋｇ静脈内投与。

アジュバント投与後隔日に１８日後まで、左右後肢の容
積を測定した。

アジュバント処置足（右後肢）の腫脹すなわち（第１次
炎症）は処置後６日目までは直線的に増加し、以後増加
はとまった。しかし１２２日目ら炎症は再び増加した。

非処置足（左後肢）の腫脹（第２次炎症）は１２２日目
ら出現し、以後直線的に増加した。１２日後の処置足の
腫脹および１８日後の非処置足の腫瘍から効果を判定し
た（表３）。

その結果、アンチトロンビン−■各投与により処置足の
第１次炎症は生理食塩液投与の約７７〜８４％に抑制さ
れ、また非処置足の第２次炎症は約８２〜８５％に抑制
された。

〔以下余白〕

表３　ラット　アジュバント関節炎に対する効果腫瘍率
（％） 処置足　　非処置足 生理食塩液投与群　　　　　　　　１００　　　１００
アンチトロンビン−■投与群　　　　８０　　　８２ア
ンチトロンビン−■・ヘパリン　　８４　　　８５複合
体投与群 アンチトロンビン−■、ヘパリン　　７７　　　８２併
用群 以上の如く、アジュバント関節炎に対し、アンチトロン
ビン−■、アンチトロンビン−■・ヘパリン複合体及び
アンチトロンビン−ＩＩＩとヘパリン併用は予備的投与
方法でを効であることが判った。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト由来アンチトロンビン−IIIを有効成分とし
   てなることを特徴とする抗炎症剤。
2. （２）ヒト由来アンチトロンビン−IIIがヒト由来アン
   チトロンビン−IIIとヘパリンとの複合体の態様である
   ことを特徴とする特許請求の範囲第（１）項記載の抗炎
   症剤。
3. （３）さらにヘパリンを配合してなることを特徴とする
   特許請求の範囲第（１）項記載の抗炎症剤。