JPH0684965B2 - 血液製剤中の不適合反応原因物質の試験法 - Google Patents
血液製剤中の不適合反応原因物質の試験法Info
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- JPH0684965B2 JPH0684965B2 JP61161768A JP16176886A JPH0684965B2 JP H0684965 B2 JPH0684965 B2 JP H0684965B2 JP 61161768 A JP61161768 A JP 61161768A JP 16176886 A JP16176886 A JP 16176886A JP H0684965 B2 JPH0684965 B2 JP H0684965B2
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、治療的および予防的に用いられる血液製剤中
の、不適合反応原因物質の試験方法およびこれらの製剤
の安全性を試験するための本方法の使用に関する。
の、不適合反応原因物質の試験方法およびこれらの製剤
の安全性を試験するための本方法の使用に関する。
本発明は、特に、ヒトに静脈内投与される免疫グロブリ
ン含有製剤の試験方法に関する。
ン含有製剤の試験方法に関する。
免疫グロブリン含有製剤は原発性、および二次性の免疫
欠損、ガンマグロブリン血症、または低ガンマグロブリ
ン血症、抗体欠損症候群、ウイルス感染症または細菌性
感染症の場合に適用される。
欠損、ガンマグロブリン血症、または低ガンマグロブリ
ン血症、抗体欠損症候群、ウイルス感染症または細菌性
感染症の場合に適用される。
ヒトまたは動物の血漿から免疫グロブリン含有製剤を得
るための種々の方法が既に知られており、例えばエタノ
ール沈澱法［オンクレイ（J.L.Oncley）、メリン（M.Me
lin）、リチャート（D.A.Richart）、カメロン（J.W.Ca
meron）およびグロス（P.M.Gross）のジャーナル・オブ
・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.Am.Chem.So
c.）71 541（1949）］並びに改良エタノール法［ドイ
チュ（H.F.Deutsch）、ゴスティング（L.J.Gosting）、
アルバーティ（R.A.Alberty）およびウイリアムス（J.
W.Williams）のジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（J.Biol.Chem.）164 109（1964）、および
キストラー（P.Kistler）およびニッチュマン（H.Nitsc
hmann）のフオックス・サンギニス（Vox Sanguinis）7
414（1962）］などがある。
るための種々の方法が既に知られており、例えばエタノ
ール沈澱法［オンクレイ（J.L.Oncley）、メリン（M.Me
lin）、リチャート（D.A.Richart）、カメロン（J.W.Ca
meron）およびグロス（P.M.Gross）のジャーナル・オブ
・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.Am.Chem.So
c.）71 541（1949）］並びに改良エタノール法［ドイ
チュ（H.F.Deutsch）、ゴスティング（L.J.Gosting）、
アルバーティ（R.A.Alberty）およびウイリアムス（J.
W.Williams）のジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケ
ミストリー（J.Biol.Chem.）164 109（1964）、および
キストラー（P.Kistler）およびニッチュマン（H.Nitsc
hmann）のフオックス・サンギニス（Vox Sanguinis）7
414（1962）］などがある。
さらには、硫酸アンモニウムおよびポリエチレングリコ
ールを用いて血漿から免疫グロブリンを沈殿させる方法
が知られている［ポルソン（A.Polson）、ポトジテル
（G.M.Potgiter）、ラルグリエール（J.F.Largrier）、
メール（G.E.F.Mears）およびジョルブ（F.J.Jourbet）
のビオシミカ・エ・ビオフィジカ・アクタ（Biochim.Bi
ophys.Acta.）82 463（1964）］。その他、イオン交換
法を利用する方法も指摘されている［ピーターソン（E.
A.Peterson）およびソーバー（H.A.Sober）のジャーナ
ル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.Am.C
hem.Soc.）78 751（1956）］。
ールを用いて血漿から免疫グロブリンを沈殿させる方法
が知られている［ポルソン（A.Polson）、ポトジテル
（G.M.Potgiter）、ラルグリエール（J.F.Largrier）、
メール（G.E.F.Mears）およびジョルブ（F.J.Jourbet）
のビオシミカ・エ・ビオフィジカ・アクタ（Biochim.Bi
ophys.Acta.）82 463（1964）］。その他、イオン交換
法を利用する方法も指摘されている［ピーターソン（E.
A.Peterson）およびソーバー（H.A.Sober）のジャーナ
ル・オブ・アメリカン・ケミカル・ソサエティ（J.Am.C
hem.Soc.）78 751（1956）］。
しかしながら、これらの方法に従って得られる製剤は筋
肉内投与にしか適さず、それらを静脈内投与すると望ま
しくない副反応を示す。
肉内投与にしか適さず、それらを静脈内投与すると望ま
しくない副反応を示す。
そこで、副反応または副作用を軽減する試みがなされて
おり、そのために、免疫グロブリン含有製剤類を可溶性
タンパク分解酵素類、即ちペプシン、プラスミン、パパ
インその他によって処理することが実行されている（ド
イツ特許第1,148,037号）。しかしながら、この処理に
よると免疫グロブリン類の分子構造が変化し、生物学的
半減期が短縮されてしまう。また、製剤中に酵素残渣が
残在することも発見されており、これによっても汚染さ
れることになる。従って、保存性は低く、かつタンパク
質の分解が進行する危険性が大きい。
おり、そのために、免疫グロブリン含有製剤類を可溶性
タンパク分解酵素類、即ちペプシン、プラスミン、パパ
インその他によって処理することが実行されている（ド
イツ特許第1,148,037号）。しかしながら、この処理に
よると免疫グロブリン類の分子構造が変化し、生物学的
半減期が短縮されてしまう。また、製剤中に酵素残渣が
残在することも発見されており、これによっても汚染さ
れることになる。従って、保存性は低く、かつタンパク
質の分解が進行する危険性が大きい。
本発明者らは、ヒトの血液から得た画分を水不溶性の担
体と結合した膵臓酵素類、すなわち、トリプシン、キモ
トリプシンまたは膵臓プロテアーゼなどによって処理
し、この処理画分を、所望により、さらに分画し濃縮す
ることによる静脈内投与用免疫グロブリン含有製剤の製
造方法を開発した。
体と結合した膵臓酵素類、すなわち、トリプシン、キモ
トリプシンまたは膵臓プロテアーゼなどによって処理
し、この処理画分を、所望により、さらに分画し濃縮す
ることによる静脈内投与用免疫グロブリン含有製剤の製
造方法を開発した。
詳細には、この方法は、（１）０℃以下の温度でエタノ
ール処理することにより、ヒトの血漿から免疫グロブリ
ン含有沈殿を析出させる、（２）この沈殿を緩衝液で抽
出し、抽出液を更にエタノール処理することによりペー
スト状の免疫グロブリン濃縮物を回収する、（３）この
濃縮物を透析により精製する、（４）この精製免疫グロ
ブリン含有画分をトリプシン、キモトリプシンまたは膵
臓プロテアーゼからなる群から選ばれる、固定化酵素で
約37℃において処理する、（５）この様に処理した画分
を、タンパク質沈殿剤、好ましくはポリエチレングリコ
ール、で処理し実質的にIgGからなる精製免疫グロブリ
ンを析出させる、（６）この沈殿を溶かし、その溶液を
滅菌濾過した後、最終的に凍結乾燥するという諸工程か
らなるものである。
ール処理することにより、ヒトの血漿から免疫グロブリ
ン含有沈殿を析出させる、（２）この沈殿を緩衝液で抽
出し、抽出液を更にエタノール処理することによりペー
スト状の免疫グロブリン濃縮物を回収する、（３）この
濃縮物を透析により精製する、（４）この精製免疫グロ
ブリン含有画分をトリプシン、キモトリプシンまたは膵
臓プロテアーゼからなる群から選ばれる、固定化酵素で
約37℃において処理する、（５）この様に処理した画分
を、タンパク質沈殿剤、好ましくはポリエチレングリコ
ール、で処理し実質的にIgGからなる精製免疫グロブリ
ンを析出させる、（６）この沈殿を溶かし、その溶液を
滅菌濾過した後、最終的に凍結乾燥するという諸工程か
らなるものである。
このようにして得られた製剤は、副反応または不適合反
応を惹起する物質をごく少量しか含んでいない。
応を惹起する物質をごく少量しか含んでいない。
しかしながら、医師によって多かれ少なかれ不適合反応
原因物質を含有している免疫グロブリン含有製剤が使用
される可能性があるので、簡単かつ迅速な方法により、
特に血管作用物質、白血球減少作用物質および気管支痙
攣作用物質の含有の有無という点で製剤の薬理学的特性
を調べることができる安全な試験方法を提供すること
が、本発明の目的である。更に本発明者らは、ヒトへの
投与前に免疫グロブリン含有製剤の安全性を試験するた
めの有効な薬理学的に許容し得る限界値を得ようと努め
るものである。
原因物質を含有している免疫グロブリン含有製剤が使用
される可能性があるので、簡単かつ迅速な方法により、
特に血管作用物質、白血球減少作用物質および気管支痙
攣作用物質の含有の有無という点で製剤の薬理学的特性
を調べることができる安全な試験方法を提供すること
が、本発明の目的である。更に本発明者らは、ヒトへの
投与前に免疫グロブリン含有製剤の安全性を試験するた
めの有効な薬理学的に許容し得る限界値を得ようと努め
るものである。
本発明によれば、血液製剤をイヌに動脈内注射して血圧
低下を調べるか、血液製剤をイヌに動脈内注射して白血
球数の減少を調べるか、血液製剤をモルモットに動脈内
注射して呼吸圧の上昇を調べることでこの目的は達成さ
れる。
低下を調べるか、血液製剤をイヌに動脈内注射して白血
球数の減少を調べるか、血液製剤をモルモットに動脈内
注射して呼吸圧の上昇を調べることでこの目的は達成さ
れる。
好都合なことに、免疫グロブリン含有血液製剤がこの試
験に使用される。
験に使用される。
ここに示した方法は、イヌまたはモルモットに製剤を動
脈内注射した場合、副作用原因物質はヒトに静脈内投与
した場合の約10倍強く現れるという知見に基いているの
で、この方法でヒトに静脈内投与される製剤中の許容し
得る不純物の無害な限界値を求めることができる。
脈内注射した場合、副作用原因物質はヒトに静脈内投与
した場合の約10倍強く現れるという知見に基いているの
で、この方法でヒトに静脈内投与される製剤中の許容し
得る不純物の無害な限界値を求めることができる。
ここに示した試験方法は、使用する可能性のある最大投
与量において、イヌの試験における血圧の有意な低下、
および／またはイヌの試験における白血球数の有意な減
少、および／またはモルモットの試験における呼吸圧の
有意な上昇が検出されない場合は十分な安全性があると
いう規定の下に、免疫グロブリン含有製剤の安全性を試
験することができるという点が特徴である。
与量において、イヌの試験における血圧の有意な低下、
および／またはイヌの試験における白血球数の有意な減
少、および／またはモルモットの試験における呼吸圧の
有意な上昇が検出されない場合は十分な安全性があると
いう規定の下に、免疫グロブリン含有製剤の安全性を試
験することができるという点が特徴である。
血管作用を調べるための免疫グロブリン含有製剤の試験
では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の平均血
圧低下が最大限30％検出される場合は、実質上安全であ
るということがわかった。
では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の平均血
圧低下が最大限30％検出される場合は、実質上安全であ
るということがわかった。
白血球減少作用を調べるための免疫グロブリン含有製剤
の試験では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の
平均白血球数減少の検出値が最大限50％である場合、実
質上安全であるということがわかった。
の試験では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の
平均白血球数減少の検出値が最大限50％である場合、実
質上安全であるということがわかった。
気管支痙攣作用を調べる免疫グロブリン含有製剤の試験
では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の平均呼
吸圧上昇の検出値が最大限30％である場合、実質上安全
であるということがわかった。
では、500mg/kg体重以上の投与量で４匹の動物の平均呼
吸圧上昇の検出値が最大限30％である場合、実質上安全
であるということがわかった。
上に示した限界値と被験動物の数の間には、被験動物の
数が増加すると許容し得る限界値が低下し、逆に、より
少ない被験動物では安全性の限界が高められるという相
互関係がある。
数が増加すると許容し得る限界値が低下し、逆に、より
少ない被験動物では安全性の限界が高められるという相
互関係がある。
本発明によれば、血管作用効果は以下の方法で測定され
る： 試験動物（両性の雑種）の頸静脈および頸動脈を麻酔下
に切開する。麻酔をかけるに先立ち、少なくとも12時間
の絶食時間を確保する。１試行につき、有資格動物（イ
ヌ）、即ち、標準化された筋肉内投与用免疫グロブリン
（「標準物質」）を、投与量50mg/体重（kg）で動脈内
投与した場合に、少くとも30％の血管作用効果（血圧低
下作用）があらわれるような動物、が４匹必要である。
この標準化された筋注用免疫グロブリンは、オンクレイ
（J.L.Oncley）、メリン（M.Melin）、リチャート（D.
A.Richart）、カメロン（J.W.Cameron）およびグロス
（P.M.Gross）のジャーナル・オブ・アメリカン・ケミ
カル・ソサエテイ（J.Am.Chem.Soc.）71、541（1949）
により最初に報告された方法で調製される。この標準物
質に何ら反応を示さないイヌは比較試験に用いることが
できない。
る： 試験動物（両性の雑種）の頸静脈および頸動脈を麻酔下
に切開する。麻酔をかけるに先立ち、少なくとも12時間
の絶食時間を確保する。１試行につき、有資格動物（イ
ヌ）、即ち、標準化された筋肉内投与用免疫グロブリン
（「標準物質」）を、投与量50mg/体重（kg）で動脈内
投与した場合に、少くとも30％の血管作用効果（血圧低
下作用）があらわれるような動物、が４匹必要である。
この標準化された筋注用免疫グロブリンは、オンクレイ
（J.L.Oncley）、メリン（M.Melin）、リチャート（D.
A.Richart）、カメロン（J.W.Cameron）およびグロス
（P.M.Gross）のジャーナル・オブ・アメリカン・ケミ
カル・ソサエテイ（J.Am.Chem.Soc.）71、541（1949）
により最初に報告された方法で調製される。この標準物
質に何ら反応を示さないイヌは比較試験に用いることが
できない。
標準物質160mgを注射用水1mlに溶かし、これをNaCl等張
液で16.7mg/mlに希釈する。この溶解後の試料は４時間
以内に使用する。
液で16.7mg/mlに希釈する。この溶解後の試料は４時間
以内に使用する。
また、試験する免疫グロブリン製剤を注射用水に、タン
パク含有量が165mg/mlになるように溶かす。この溶解し
た試料は４時間以内に使用する。
パク含有量が165mg/mlになるように溶かす。この溶解し
た試料は４時間以内に使用する。
Nembutal（バルビツレート）40mg/kgの静脈内１回投与
によって被検動物に麻酔をかけ、外頸静脈を、分割した
後、下顎の下側縁で切開し、カテーテルを挿入する。そ
の後直ちに頸動脈を同じ皮膚切開部分で露出させ、カテ
ーテルを挿入する。動脈切開術の後、安定した初期値
（initial values）を得るために30分間待つ。圧力伝
達計を用いて、中央静脈圧（central venous pressur
e）は深層静脈カテーテルを介し、また動脈圧は浅部動
脈カテーテルを介して、それぞれ測定する。動脈カテー
テルを通じて、まず最初に本発明方法によって試験する
免疫グロブリンを、次いで標準物質を注入する。
によって被検動物に麻酔をかけ、外頸静脈を、分割した
後、下顎の下側縁で切開し、カテーテルを挿入する。そ
の後直ちに頸動脈を同じ皮膚切開部分で露出させ、カテ
ーテルを挿入する。動脈切開術の後、安定した初期値
（initial values）を得るために30分間待つ。圧力伝
達計を用いて、中央静脈圧（central venous pressur
e）は深層静脈カテーテルを介し、また動脈圧は浅部動
脈カテーテルを介して、それぞれ測定する。動脈カテー
テルを通じて、まず最初に本発明方法によって試験する
免疫グロブリンを、次いで標準物質を注入する。
実験が行なわれている間中、収縮および拡張期の血圧
を、圧力伝達計を用いて動脈カテーテルを介して記録す
る。
を、圧力伝達計を用いて動脈カテーテルを介して記録す
る。
被検物質および標準物質注入前の平均血圧（収縮期およ
び拡張期圧）並びに白血球数を測定しておく。最大血圧
降下を、被検物質注入後20分間、血圧測定することによ
って求める。
び拡張期圧）並びに白血球数を測定しておく。最大血圧
降下を、被検物質注入後20分間、血圧測定することによ
って求める。
試験する免疫グロブリン製剤の血管作用は、イヌの体重
当たり500mg/kgを４匹のイヌに注入し、その収縮期並び
に拡張期の平均血圧の減少を筋注用（i.m.）標準物質の
血圧減少効果と比較し、（％）で表わすことによって決
定される。
当たり500mg/kgを４匹のイヌに注入し、その収縮期並び
に拡張期の平均血圧の減少を筋注用（i.m.）標準物質の
血圧減少効果と比較し、（％）で表わすことによって決
定される。
白血球減少活性は本発明に係る以下の方法で決定され
る： 試験動物（両性の雑種）の頸静脈および頸動脈を麻酔下
に切開する。麻酔をかけるに先立ち、少くとも12時間の
絶食時間を設ける。１試行につき、有資格動物（イ
ヌ）、即ち、標準化された筋注用免疫グロブリン（標準
物質）を投与量50mg/体重（kg）で動脈内投与した場合
に少くとも50％の白血球作用（白血球減少）があらわれ
るような動物、が４匹必要である。この標準物質に対し
て何ら反応を示さないイヌは比較試験に用いることがで
きない。
る： 試験動物（両性の雑種）の頸静脈および頸動脈を麻酔下
に切開する。麻酔をかけるに先立ち、少くとも12時間の
絶食時間を設ける。１試行につき、有資格動物（イ
ヌ）、即ち、標準化された筋注用免疫グロブリン（標準
物質）を投与量50mg/体重（kg）で動脈内投与した場合
に少くとも50％の白血球作用（白血球減少）があらわれ
るような動物、が４匹必要である。この標準物質に対し
て何ら反応を示さないイヌは比較試験に用いることがで
きない。
試験動物および被検物質は、上記と同様に調製する。
白血球数を調べるために血液標本を採取する。初回の標
本に関しては、血液40μｌをIsotone（II）（COULTER）
20mlおよびZapoglobin（COULTER）６滴と共に混合し、c
oulter計数器内で測定する。引き続き、白血球数を測定
するために10、15、16、17、18および19分後に血液標本
を採取する。次いで直ちに、静注用免疫グロブリンを、
免疫グロブリンの投与量500mg/体重（kg）で、90秒以内
に動脈内注入する。注入後１、２、３、４、５、７、1
0、15および20分後に血液標本を採取する。
本に関しては、血液40μｌをIsotone（II）（COULTER）
20mlおよびZapoglobin（COULTER）６滴と共に混合し、c
oulter計数器内で測定する。引き続き、白血球数を測定
するために10、15、16、17、18および19分後に血液標本
を採取する。次いで直ちに、静注用免疫グロブリンを、
免疫グロブリンの投与量500mg/体重（kg）で、90秒以内
に動脈内注入する。注入後１、２、３、４、５、７、1
0、15および20分後に血液標本を採取する。
20分後に、標準物質の免疫グロブリン50mg/体重（kg）
を90秒以内に注入する。さらに、１、２、３、４、５、
７、10、15および20分後に血液標本を採取する。
を90秒以内に注入する。さらに、１、２、３、４、５、
７、10、15および20分後に血液標本を採取する。
白血球数の最大減少値は被検試料注入後１、２、３、
４、５、７、10、15および20分後に採取した血液標本に
関する測定に基づいて決定する。
４、５、７、10、15および20分後に採取した血液標本に
関する測定に基づいて決定する。
試験する免疫グロブリン製剤の白血球減少作用は、イヌ
に対する500mg/体重（kg）注入による白血球の平均減少
数を、筋注用標準物質の白血球減少作用下にある４匹の
イヌにおけるそれらと比較し（％）で表すことにより決
定される。
に対する500mg/体重（kg）注入による白血球の平均減少
数を、筋注用標準物質の白血球減少作用下にある４匹の
イヌにおけるそれらと比較し（％）で表すことにより決
定される。
モルモットにおける気管支痙攣（呼吸圧の増加）作用の
決定は、下記の方法で行われる： 試験動物（雄のモルモット）の気管を咽頭部位で麻酔下
に切開する。挿管した後、試験動物を、レスピレーター
を用いて該動物の体重に対応させた呼吸容量で、呼吸頻
度80/分で呼吸させる。その後、同様の皮膚切開により
頸動脈を露出させる。被検物質を動脈内に注入し、呼吸
圧を連続的に測定する。
決定は、下記の方法で行われる： 試験動物（雄のモルモット）の気管を咽頭部位で麻酔下
に切開する。挿管した後、試験動物を、レスピレーター
を用いて該動物の体重に対応させた呼吸容量で、呼吸頻
度80/分で呼吸させる。その後、同様の皮膚切開により
頸動脈を露出させる。被検物質を動脈内に注入し、呼吸
圧を連続的に測定する。
この試験には、体重500〜700gの雄性実験用モルモット
を用いる。１試行について４匹の有資格モルモット、即
ち、標準化された筋注用免疫グロブリン（標準物質）
を、投与量50mg/体重（kg）で動脈内投与した場合に、
少くとも30％の呼吸圧の増加があらわれる様な動物、が
４匹必要である。標準物質に対して何ら反応を示さない
モルモットは比較試験に用いることができない。
を用いる。１試行について４匹の有資格モルモット、即
ち、標準化された筋注用免疫グロブリン（標準物質）
を、投与量50mg/体重（kg）で動脈内投与した場合に、
少くとも30％の呼吸圧の増加があらわれる様な動物、が
４匹必要である。標準物質に対して何ら反応を示さない
モルモットは比較試験に用いることができない。
標準物質160mgを注射用水1mlに溶かし、これをNaCl等張
液で16.7mg/mlに希釈する。この溶解させた試料は４時
間以内に使用する。
液で16.7mg/mlに希釈する。この溶解させた試料は４時
間以内に使用する。
また、本発明に従って試験する免疫グロブリン製剤を注
射用水に、タンパク含量が165mg/mlになるように溶か
す。この溶解した試料は４時間以内に使用する。
射用水に、タンパク含量が165mg/mlになるように溶か
す。この溶解した試料は４時間以内に使用する。
動物に麻酔をかける；次いで咽頭部位で気管を切開し、
気管カニューレを挿入する。レスピレーターによって、
試験動物を、該動物の体重に対応せしめた呼吸量並びに
頻度80/分で呼吸させる。レスピレーターは、Harvardポ
ンプ681型を使用する。
気管カニューレを挿入する。レスピレーターによって、
試験動物を、該動物の体重に対応せしめた呼吸量並びに
頻度80/分で呼吸させる。レスピレーターは、Harvardポ
ンプ681型を使用する。
そこで直ちに、同様の皮膚切開により頸動脈を露出さ
せ、カテーテルを挿入する。Ｔ−ピースによって気管と
連結させた圧力伝達機を用いて呼吸圧を記録する。
せ、カテーテルを挿入する。Ｔ−ピースによって気管と
連結させた圧力伝達機を用いて呼吸圧を記録する。
切開術後、安定した初期値を得るために少くとも10分間
待つ。その後、ゼロ点を定め、さらに２〜３分経ってか
ら静注用免疫グロブリンを、免疫グロブリンの投与量15
0mg/体重（kg）で、カテーテルを介して90秒以内に動脈
内注入する。
待つ。その後、ゼロ点を定め、さらに２〜３分経ってか
ら静注用免疫グロブリンを、免疫グロブリンの投与量15
0mg/体重（kg）で、カテーテルを介して90秒以内に動脈
内注入する。
20分後に、標準物質50mg/体重（kg）を90秒以内で動脈
内に注入する。
内に注入する。
試料注入後20分間における呼吸圧上昇の最高値を求め、
初期（開始時）の平均値と比較する。
初期（開始時）の平均値と比較する。
試験する免疫グロブリン製剤の気管支痙攣作用は、モル
モットに対する500mg/体重（kg）注入時における呼吸圧
の平均値を、筋注用免疫グロブリン標準物質の呼吸圧上
昇作用下にある４匹のモルモットにおけるそれらと比較
し、（％）で表わすことにより決定される。
モットに対する500mg/体重（kg）注入時における呼吸圧
の平均値を、筋注用免疫グロブリン標準物質の呼吸圧上
昇作用下にある４匹のモルモットにおけるそれらと比較
し、（％）で表わすことにより決定される。
以下にごく少量の不適合反応原因物質しか含有していな
い免疫グロブリン画分の製造方法およびその試験法を例
示する。
い免疫グロブリン画分の製造方法およびその試験法を例
示する。
実施例 セファロース（Sepharose）4B−ゲル（Pharmacia）１
を蒸留水4lで洗浄した後、アセトニトリル100mlに溶か
したブロモシアン200gとpH11.0において混合する。混合
物を氷浴中で冷却する。液相を除去した後、このゲル
を、0.2M−NaHCO3１に溶かしたトリプシン（Sigma）8
00mgと混合する。濾過し、非結合トリプシンを、ゲルと
結合しているトリプシンから分ける。
を蒸留水4lで洗浄した後、アセトニトリル100mlに溶か
したブロモシアン200gとpH11.0において混合する。混合
物を氷浴中で冷却する。液相を除去した後、このゲル
を、0.2M−NaHCO3１に溶かしたトリプシン（Sigma）8
00mgと混合する。濾過し、非結合トリプシンを、ゲルと
結合しているトリプシンから分ける。
このゲル（固定化）トリプシンを1M−グリシン溶液１
と混合した後、0.2M−NaHCO3溶液により遊離のタンパク
を完全に洗い流す。最後に、ゲル（固定化）トリプシン
を0.9％NaCl溶液１に懸濁すれば、免疫グロブリン画
分のインキュベーションに用いることのできる固定化酵
素が得られる。
と混合した後、0.2M−NaHCO3溶液により遊離のタンパク
を完全に洗い流す。最後に、ゲル（固定化）トリプシン
を0.9％NaCl溶液１に懸濁すれば、免疫グロブリン画
分のインキュベーションに用いることのできる固定化酵
素が得られる。
ヒト血漿をpH7.2、温度−２℃で８％エタノールと混合
する。沈殿を分離した後、エタノール濃度を25％に上げ
ると同時に温度を−６℃に下げる。免疫グロブリンを含
有する沈殿を、ホスフェート・アセテートバッファーで
抽出することによりさらに精製し、pH5.4、温度−２℃
で12％エタノールと混合する。
する。沈殿を分離した後、エタノール濃度を25％に上げ
ると同時に温度を−６℃に下げる。免疫グロブリンを含
有する沈殿を、ホスフェート・アセテートバッファーで
抽出することによりさらに精製し、pH5.4、温度−２℃
で12％エタノールと混合する。
α−およびβ−グロブリンを含む沈殿を除去する。上清
のエタノール濃度をpH7.2、温度−10℃で25％に上げ
る。析出するペースト状の免疫グロブリンを集め、透析
してエタノールを除く。
のエタノール濃度をpH7.2、温度−10℃で25％に上げ
る。析出するペースト状の免疫グロブリンを集め、透析
してエタノールを除く。
次いで、この透析物にpH6.25において硫酸アンモニウム
を170g/lの割合で加え、沈殿を分離して捨てる。さら
に、上清に硫酸アンモニウムを、pH7.2において280g/l
の濃度に達するまで加える。沈殿を水に溶かし、硫酸ア
ンモニウムを除去するために透析する。透析後、この免
疫グロブリン溶液のイオン強度を0.15に調節する。
を170g/lの割合で加え、沈殿を分離して捨てる。さら
に、上清に硫酸アンモニウムを、pH7.2において280g/l
の濃度に達するまで加える。沈殿を水に溶かし、硫酸ア
ンモニウムを除去するために透析する。透析後、この免
疫グロブリン溶液のイオン強度を0.15に調節する。
このようにして得た免疫グロブリン100gを、固定化トリ
プシン30mlにより、37℃において72時間、処理する。ゲ
ル（固定化）トリプシンを除去した後、処理した免疫グ
ロブリンを135g/lのポリエチレングリコール4000で沈殿
させる。沈殿を0.9％NaClに溶かし、滅菌濾過して容器
に充填し、凍結乾燥して保存用とする。
プシン30mlにより、37℃において72時間、処理する。ゲ
ル（固定化）トリプシンを除去した後、処理した免疫グ
ロブリンを135g/lのポリエチレングリコール4000で沈殿
させる。沈殿を0.9％NaClに溶かし、滅菌濾過して容器
に充填し、凍結乾燥して保存用とする。
上記の方法に従って得られる免疫グロブリンを、血管作
用および白血球減少作用はイヌによる実験で、気管支痙
攣作用はモルモットによる実験で、それぞれ前述の方法
で試験する。得られた値を以下に示す。
用および白血球減少作用はイヌによる実験で、気管支痙
攣作用はモルモットによる実験で、それぞれ前述の方法
で試験する。得られた値を以下に示す。
イヌ４匹に於ける、免疫グロブリン製剤注入（500mg/kg
体重）後の平均血圧の初期値に対する割合（％） 被検製剤 収縮期圧 拡張期圧 実施例の免疫 91％ 86％ グロブリン イヌ４匹に於ける、免疫グロブリン製剤注入（500mg/kg
体重）後の平均白血球数の初期値に対する割合（％） 実施例の免疫グロブリン 73％ モルモット４匹に於ける、免疫グロブリン製剤注入（50
0mg/kg体重）後の平均呼吸圧の初期値に対する増加率
（％） 実施例の免疫グロブリン 102％ 得られた値から、試験した免疫グロブリンはヒトに静脈
内投与するのに適しており、かつ安全であることがわか
る。
体重）後の平均血圧の初期値に対する割合（％） 被検製剤 収縮期圧 拡張期圧 実施例の免疫 91％ 86％ グロブリン イヌ４匹に於ける、免疫グロブリン製剤注入（500mg/kg
体重）後の平均白血球数の初期値に対する割合（％） 実施例の免疫グロブリン 73％ モルモット４匹に於ける、免疫グロブリン製剤注入（50
0mg/kg体重）後の平均呼吸圧の初期値に対する増加率
（％） 実施例の免疫グロブリン 102％ 得られた値から、試験した免疫グロブリンはヒトに静脈
内投与するのに適しており、かつ安全であることがわか
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 熊谷洋監修 臨床薬理学大系 中山書店 第７巻（1964年８月31日発行）Ｐ．83, 第６巻（1969年６月５日発行）Ｐ．321〜 322
Claims (12)
- 【請求項１】治療および予防的に用いられる血液製剤中
の不適合反応の原因となる血管作用物質の試験方法であ
って、該血液製剤をイヌに動脈内注射し、その血圧低下
を測定することを特徴とする方法。 - 【請求項２】免疫グロブリン含有血液製剤を試験に使用
することを特徴とする第１項に記載の方法。 - 【請求項３】使用する可能性のある最大量に於いて、イ
ヌの試験における血圧の有意な低下が検出されない場合
には、十分な安全性があるという規定の下に、免疫グロ
ブリン含有血液製剤の安全性を試験する第２項に記載の
方法。 - 【請求項４】血管作用の試験において、500mg/kg体重以
上の用量で４匹の動物の平均血圧低下の検出値が最大限
30％であるという規定の下で免疫グロブリン含有血液製
剤の安全性を試験する第３項に記載の方法。 - 【請求項５】治療および予防的に用いられる血液製剤中
の不適合反応の原因となる白血球減少作用物質の試験方
法であって、該血液製剤をイヌに動脈内注射し、その白
血球数の減少を測定することを特徴とする方法。 - 【請求項６】免疫グロブリン含有血液製剤を試験に使用
することを特徴とする第５項に記載の方法。 - 【請求項７】使用する可能性のある最大量に於いて、イ
ヌの試験における白血球数の有意な減少が検出されない
場合には、十分な安全性があるという規定の下に、免疫
グロブリン含有血液製剤の安全性を試験する第６項に記
載の方法。 - 【請求項８】白血球減少作用の試験において、500mg/kg
体重以上の用量で４匹の動物の平均白血球減少の検出値
が最大限50％であるという規定の下で免疫グロブリン含
有血液製剤の安全性を試験する第７項に記載の方法。 - 【請求項９】治療および予防的に用いられる血液製剤中
の不適合反応の原因となる気管支痙攣作用物質の試験方
法であって、該血液製剤をモルモットに動脈内注射し、
その呼吸圧上昇を測定することを特徴とする方法。 - 【請求項１０】免疫グロブリン含有血液製剤を試験に使
用することを特徴とする第９項に記載の方法。 - 【請求項１１】使用する可能性のある最大量に於いて、
モルモットの試験における呼吸圧の有意な上昇が検出さ
れない場合には、十分な安全性があるという規定の下
に、免疫グロブリン含有血液製剤の安全性を試験する第
10項に記載の方法。 - 【請求項１２】気管支痙攣作用の試験において、500mg/
kg体重以上の用量で４匹の動物の平均呼吸圧上昇の検出
値が最大限30％であるという規定の下で免疫グロブリン
含有血液製剤の安全性を試験する第11項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT931/83 | 1983-03-16 | ||
| AT0093183A AT383739B (de) | 1983-03-16 | 1983-03-16 | Verfahren zur inaktivierung von unvertraeglichkeitsreaktionen verursachenden substanzen in immunglobulinhaeltigen blutfraktionen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6296857A JPS6296857A (ja) | 1987-05-06 |
| JPH0684965B2 true JPH0684965B2 (ja) | 1994-10-26 |
Family
ID=3503142
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59050804A Granted JPS601136A (ja) | 1983-03-16 | 1984-03-15 | 血液製剤中の不適合反応原因物質不活化法 |
| JP61161768A Expired - Lifetime JPH0684965B2 (ja) | 1983-03-16 | 1986-07-08 | 血液製剤中の不適合反応原因物質の試験法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59050804A Granted JPS601136A (ja) | 1983-03-16 | 1984-03-15 | 血液製剤中の不適合反応原因物質不活化法 |
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| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4886758A (ja) |
| EP (1) | EP0120835B1 (ja) |
| JP (2) | JPS601136A (ja) |
| AT (2) | AT383739B (ja) |
| CA (2) | CA1216792A (ja) |
| DE (1) | DE3482845D1 (ja) |
| DK (1) | DK166713B1 (ja) |
| ES (1) | ES8604990A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK166763C (da) * | 1983-03-16 | 1993-07-12 | Immuno Ag | Immunoglobulin-g-holdig fraktion |
| FR2582515B1 (fr) * | 1985-05-30 | 1988-11-04 | Merieux Inst | Procede de preparation de gamma-gobulines administrables par voie intraveineuse et gamma-globulines obtenues |
| DE3609954A1 (de) * | 1986-03-25 | 1987-10-01 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur herstellung eines den blutgerinnungsfaktor viii in ankonzentrierter form enthaltenden praeparates |
| AT390560B (de) * | 1986-05-30 | 1990-05-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern |
| AT388501B (de) * | 1987-02-12 | 1989-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von parenteral verabreichbaren blutprodukten |
| AT391810B (de) * | 1988-02-26 | 1990-12-10 | Immuno Ag | Verwendung von chymotrypsin zum unwirksammachen des praekallikrein-aktivators |
| US5328834A (en) * | 1989-09-08 | 1994-07-12 | Unisyn Technologies, Inc. | Method for preparing immunoglobulin fragments |
| AT396937B (de) * | 1992-04-06 | 1993-12-27 | Immuno Ag | Verfahren zur aktivierung von blutgerinnungsfaktoren |
| EP0835880A1 (de) * | 1996-10-14 | 1998-04-15 | Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk | Verfahren zur Herstellung eines IgM Präparates für die intravenöse Applikation |
| JP4830768B2 (ja) * | 2006-05-10 | 2011-12-07 | 日亜化学工業株式会社 | 半導体発光装置及び半導体発光装置の製造方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE1148037B (de) * | 1961-10-11 | 1963-05-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Herstellung eines desaggregierten, das Komplementsystem nicht beeinflussenden Gammaglobulins |
| CH392780A (de) * | 1961-12-07 | 1965-05-31 | Schweiz Rotes Kreuz | Verfahren zur Herstellung von intravenös anwendbaren Antikörperpräparaten humanen Ursprungs |
| AU469815B2 (en) * | 1971-04-14 | 1973-10-18 | Anti-inflammatory compositions | |
| JPS5548392A (en) * | 1978-02-17 | 1980-04-07 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel immobilizing material combined with biologically active substance, its preparation, device comprising it, method, and preparation of support |
| AT359641B (de) * | 1978-09-19 | 1980-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines intravenoes ver- abreichbaren antikoerperhaeltigen immunglobulin- praeparates |
| DE2846412A1 (de) * | 1978-10-25 | 1980-05-08 | Behringwerke Ag | Mittel zur behandlung allergischer reaktionen |
| JPS567721A (en) * | 1979-07-02 | 1981-01-27 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Preparation of immunoglobulin for intravenous injection |
| JPS5615215A (en) * | 1979-07-14 | 1981-02-14 | Nippon Sekijiyuujishiya | Preparation of human immunoglobulin for intravenous injection with immobilized pepsin gel |
| JPS57206608A (en) * | 1981-05-29 | 1982-12-18 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Production of gamma-globulin for intravenous injection |
-
1983
- 1983-03-16 AT AT0093183A patent/AT383739B/de not_active IP Right Cessation
-
1984
- 1984-02-29 DK DK131284A patent/DK166713B1/da not_active IP Right Cessation
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- 1984-03-12 AT AT84890044T patent/ATE55059T1/de not_active IP Right Cessation
- 1984-03-12 DE DE8484890044T patent/DE3482845D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-12 EP EP84890044A patent/EP0120835B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1984-03-14 ES ES530592A patent/ES8604990A1/es not_active Expired
- 1984-03-15 JP JP59050804A patent/JPS601136A/ja active Granted
-
1986
- 1986-07-08 JP JP61161768A patent/JPH0684965B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-04 CA CA000517515A patent/CA1248447A/en not_active Expired
- 1986-09-15 US US06/907,652 patent/US4886758A/en not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 熊谷洋監修臨床薬理学大系中山書店第７巻（１９６４年８月３１日発行）Ｐ．８３，第６巻（１９６９年６月５日発行）Ｐ．３２１〜３２２ |
Also Published As
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| CA1248447A (en) | 1989-01-10 |
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| DK131284D0 (da) | 1984-02-29 |
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| AT383739B (de) | 1987-08-10 |
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