JPS63196521A - 腫瘍細胞障害性因子誘起剤 - Google Patents
腫瘍細胞障害性因子誘起剤Info
- Publication number
- JPS63196521A JPS63196521A JP62027138A JP2713887A JPS63196521A JP S63196521 A JPS63196521 A JP S63196521A JP 62027138 A JP62027138 A JP 62027138A JP 2713887 A JP2713887 A JP 2713887A JP S63196521 A JPS63196521 A JP S63196521A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polysaccharide
- tumor cytotoxic
- lactobacillus
- tumor
- peptidoglycan
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- Pending
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
座！上η五■盆団
本発明は、腫瘍細胞障害性因子誘起剤に関するものであ
る。
る。
従来の技術
中性プロテアーゼ、補体、アルギナーゼ、活性酵素群、
インターロイキンエ、腫瘍壊死因子・ＴＮＦなど、マク
ロ７アーシが産生するｌ！ｌ！瘍細胞障害性因子の中で
、ＴＮＦの作用はマクロファージの腫瘍細胞障害性のス
ペクトラムと非常によ（一致することが知られており、
マクロファージの抗腫瘍活性の最も重要なエフェクター
であると考えられている。
インターロイキンエ、腫瘍壊死因子・ＴＮＦなど、マク
ロ７アーシが産生するｌ！ｌ！瘍細胞障害性因子の中で
、ＴＮＦの作用はマクロファージの腫瘍細胞障害性のス
ペクトラムと非常によ（一致することが知られており、
マクロファージの抗腫瘍活性の最も重要なエフェクター
であると考えられている。
ＴＮＦとしては、マクロファージから放出されるＴＮＦ
−αのほかに、リンホサイトから放出されるＴＮＦ−β
が知られており、これらは担癌動物に投与すると癌を壊
死させ、ｉｎν１ｔｒｏではある種の癌細胞に対してそ
の増殖を抑制したり、死に至らしめたりする。しかしな
がら、ＴＮＦのよ’ｙ−’を腫瘍細胞障害性因子をマク
ロファージに作らせて放出させるためには、Ｃａｒｓｗ
ｅｌｌら（１９７５年）がしたように、マクロファージ
をまずＢＣＧ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌ論ｅｔｔｅ
Ｇｕｅｒｉｎ）などの免疫賦活剤で処理し、その後、
エンドトキシンのような誘起剤を投与する必要がある。
−αのほかに、リンホサイトから放出されるＴＮＦ−β
が知られており、これらは担癌動物に投与すると癌を壊
死させ、ｉｎν１ｔｒｏではある種の癌細胞に対してそ
の増殖を抑制したり、死に至らしめたりする。しかしな
がら、ＴＮＦのよ’ｙ−’を腫瘍細胞障害性因子をマク
ロファージに作らせて放出させるためには、Ｃａｒｓｗ
ｅｌｌら（１９７５年）がしたように、マクロファージ
をまずＢＣＧ （Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃａｌ論ｅｔｔｅ
Ｇｕｅｒｉｎ）などの免疫賦活剤で処理し、その後、
エンドトキシンのような誘起剤を投与する必要がある。
腫瘍細胞障害性因子誘起物質としては、ほかにＬｉｐｉ
ｄ Ａおよびその誘導体が知られている。
ｄ Ａおよびその誘導体が知られている。
しかしながら、上記障害性因子誘起作用を有することが
分かっている物質は、毒性と副作用が強く、医薬として
の腫瘍細胞障害性因子誘起剤に使うことは困難であった
。
分かっている物質は、毒性と副作用が強く、医薬として
の腫瘍細胞障害性因子誘起剤に使うことは困難であった
。
発明が解決しようとする問題点
本発明の目的は、エンドトキシンやＬｉｐｉｄ Ａが示
すような毒性のない、安全性の高い物質からなる腫瘍細
胞障害性因子誘起剤を提供することにある。
すような毒性のない、安全性の高い物質からなる腫瘍細
胞障害性因子誘起剤を提供することにある。
問題点を解決するための手段
本発明者らは、乳酸桿菌の処理物に関する広範な研究の
過程において、乳酸桿菌をＮ−７セチルムラミデースで
処理して得られる多糖−ペプチドグリカン複合体がすぐ
れた腫瘍細胞障害性因子誘起作用を示すことを知った。
過程において、乳酸桿菌をＮ−７セチルムラミデースで
処理して得られる多糖−ペプチドグリカン複合体がすぐ
れた腫瘍細胞障害性因子誘起作用を示すことを知った。
本発明は上記新規な知見に基づくもので、乳酸桿菌の細
胞壁由来の多糖−ペプチドグリカン複合体を有効成分と
する腫癌細胞障害性因子誘起剤を提供するものである。
胞壁由来の多糖−ペプチドグリカン複合体を有効成分と
する腫癌細胞障害性因子誘起剤を提供するものである。
乳酸桿菌の細胞壁の表層部には主としてペプチドグリカ
ンからなる層があり、更にその外側には、タイコ酸や多
糖などが存在する。ペプチドグリカンは、４個または５
個の７ミノ酸からなるペプチド値で置換されたＮ−７セ
チルムラミン酸とＮ−７セチルグルフサミンとが結合し
た三糖単位を基本単位とし、これが、他のアミノ酸やペ
プチドによって架橋されなから巨大分子化したものであ
り、細胞壁中では、上記タイコ酸や多糖とリン酸を介し
て結合している。乳酸桿菌なＮ−７セチルムラミデース
で処理すると、Ｎ−７セチルムラミン酸とＮ−７セチル
グルコサミンとの間のβ−１，４結合が切断されて、ペ
プチドグリカンと多糖との結合を残したまま、上記基本
単位および該基本単位同士がペプチド鎖部分で結合した
ものが遊離する。その代表的なものを次に示す。
ンからなる層があり、更にその外側には、タイコ酸や多
糖などが存在する。ペプチドグリカンは、４個または５
個の７ミノ酸からなるペプチド値で置換されたＮ−７セ
チルムラミン酸とＮ−７セチルグルフサミンとが結合し
た三糖単位を基本単位とし、これが、他のアミノ酸やペ
プチドによって架橋されなから巨大分子化したものであ
り、細胞壁中では、上記タイコ酸や多糖とリン酸を介し
て結合している。乳酸桿菌なＮ−７セチルムラミデース
で処理すると、Ｎ−７セチルムラミン酸とＮ−７セチル
グルコサミンとの間のβ−１，４結合が切断されて、ペ
プチドグリカンと多糖との結合を残したまま、上記基本
単位および該基本単位同士がペプチド鎖部分で結合した
ものが遊離する。その代表的なものを次に示す。
Ｒ−Ｌ−Ａ １ａ−Ｄ−Ｇ １ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａ
ｌａＲＬ−Ａｌａ Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−
Ａｌａ−Ａｓｐ Ｒ−Ｌ−Ａ １ａ−Ｄ−Ｇ １ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａ
ｌａ−Ａｓｐ Ｒ−Ｌ−Ａ １ａ−Ｄ−Ｇ ｌ ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−
Ａ ｌ ｍ但し、式中の略号はそれぞれ下記の単位を意
味する。
ｌａＲＬ−Ａｌａ Ｄ−Ｇｌｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−
Ａｌａ−Ａｓｐ Ｒ−Ｌ−Ａ １ａ−Ｄ−Ｇ １ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−Ａ
ｌａ−Ａｓｐ Ｒ−Ｌ−Ａ １ａ−Ｄ−Ｇ ｌ ｕ−Ｌ−Ｌｙｓ−Ｄ−
Ａ ｌ ｍ但し、式中の略号はそれぞれ下記の単位を意
味する。
Ｒ： 多糖
ＨＯ−Ｐ＝０
■
Ｈ−Ｃ−ＣＨ。
■
Ｃ＝０
Ｌ−Ａｌａ ： Ｌ・アラニン
Ｄ−Ｇｌｕ ： Ｄ−グルタミン
Ｌ−Ｌｙｓ ： Ｌ−リジン
Ｄ−Ａｓｐ ： Ｄ−７スパラギン
これら複雑な化合物の混合物が、本発明の腫瘍細胞障害
性因子誘起剤を構成する多糖−ペプチドグリカン複合体
である。
性因子誘起剤を構成する多糖−ペプチドグリカン複合体
である。
多糖−ペプチドグリカン複合体における糖組成およびア
ミノ酸配列は、原料乳酸桿菌の種類によって若干異なる
が、下記の乳酸桿菌から得られるものはすべて上記のア
ミノ酸配列のものであり、且つ本発明の腫瘍細胞障害性
因子誘起剤を構成する多糖−ペプチドグリカン複合体と
して好ましい。
ミノ酸配列は、原料乳酸桿菌の種類によって若干異なる
が、下記の乳酸桿菌から得られるものはすべて上記のア
ミノ酸配列のものであり、且つ本発明の腫瘍細胞障害性
因子誘起剤を構成する多糖−ペプチドグリカン複合体と
して好ましい。
Ｌ、カゼイ （Ｌ、 ｃａｓｅｉ）、Ｌ、ブヒネリ （
Ｌ、 ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、Ｌ、ユーグルテ４ （Ｌ
、ｊｕｇｕｒｔｉ）、Ｌ、サケ（Ｌ、 ５ａｋｅ）、Ｌ
、ラクチス（Ｌ、１ａｃｔｉｓ）、Ｌ、コリネフォルミ
ス（Ｌ。
Ｌ、 ｂｕｃｈｎｅｒｉ）、Ｌ、ユーグルテ４ （Ｌ
、ｊｕｇｕｒｔｉ）、Ｌ、サケ（Ｌ、 ５ａｋｅ）、Ｌ
、ラクチス（Ｌ、１ａｃｔｉｓ）、Ｌ、コリネフォルミ
ス（Ｌ。
ｃｏｒｙｎｅｆｏｒｍｉｓ）、Ｌ、７シドフイルス（Ｌ
、 ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ、パストリ７ヌス（
Ｌ、ｐａｓｔｏｒｉｉｎｕｓ）、Ｌ、カルパタス（Ｌ、
ｃｕｒｖａｔｕｓ）、Ｌ、サリパリウス（Ｌ、 ５ａ
ｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ。
、 ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）、Ｌ、パストリ７ヌス（
Ｌ、ｐａｓｔｏｒｉｉｎｕｓ）、Ｌ、カルパタス（Ｌ、
ｃｕｒｖａｔｕｓ）、Ｌ、サリパリウス（Ｌ、 ５ａ
ｌｉｖａｒｉｕｓ）、Ｌ。
キシロサス（Ｌ、ｘｙｌｏｓｕｓ）、Ｌ、デルプレッキ
イ（Ｌ、 ｄｅｌ−ｂｒｕｅｃｋｉｉ）、Ｌ、ライヒマ
ンニ（Ｌ、 ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ）、Ｌ、プル〃リ
クＸ （Ｌ、ｂｕｌｇａｌｉｃｕｓ）、Ｌ、ヘルベティ
カス（Ｌ。
イ（Ｌ、 ｄｅｌ−ｂｒｕｅｃｋｉｉ）、Ｌ、ライヒマ
ンニ（Ｌ、 ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ）、Ｌ、プル〃リ
クＸ （Ｌ、ｂｕｌｇａｌｉｃｕｓ）、Ｌ、ヘルベティ
カス（Ｌ。
ｈｅｌｖｅｔｉｅｕｓ）、Ｌ、プレビス（Ｌ、 ｂｒｅ
ｖｉｓ）、 （但し、Ｌ、はラクトバチルスＬａｃＬｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓの略、以下の文において同じ）。
ｖｉｓ）、 （但し、Ｌ、はラクトバチルスＬａｃＬｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓの略、以下の文において同じ）。
本発明の腫瘍細胞障害性因子誘起剤の有効成分である多
糖・ペプチドグリカン複合体を乳酸桿菌から製造する方
法の詳細は、次のとおりである。
糖・ペプチドグリカン複合体を乳酸桿菌から製造する方
法の詳細は、次のとおりである。
原料とする乳酸桿菌は、乳酸桿菌の培養に使用可能な適
当な培地を用いて常法により培養したものでよく、特殊
な培養法によるものである必要はない、培養後、常法に
より洗浄し、望ましくは加熱して死菌体としたものを水
に懸濁させて、Ｎ−アセチルムラミデースで処理する。
当な培地を用いて常法により培養したものでよく、特殊
な培養法によるものである必要はない、培養後、常法に
より洗浄し、望ましくは加熱して死菌体としたものを水
に懸濁させて、Ｎ−アセチルムラミデースで処理する。
９Ｈ約５〜６、温度約３７〜５０℃で１２〜２４時間程
度処理すると、細胞壁が溶解する。反応混液な遠心分離
し、上清を再度酵素処理したのち、核酸分解酵素で核酸
を分解し、更にトリプシンを加えてタンパク質を分解す
る０次いで蒸留水にて透析し、透析内液を凍結乾燥すれ
ば、目的とする多糖−ペプチドグリカン複合体が得られ
る。
度処理すると、細胞壁が溶解する。反応混液な遠心分離
し、上清を再度酵素処理したのち、核酸分解酵素で核酸
を分解し、更にトリプシンを加えてタンパク質を分解す
る０次いで蒸留水にて透析し、透析内液を凍結乾燥すれ
ば、目的とする多糖−ペプチドグリカン複合体が得られ
る。
上述のようにして得られる多糖−ペプチドグリカン複合
体は、そのまま、あるいは必要に応じて更に精製して、
本発明の腫瘍細胞障害性因子誘起剤の構ｒ！を成分とす
ることができる。
体は、そのまま、あるいは必要に応じて更に精製して、
本発明の腫瘍細胞障害性因子誘起剤の構ｒ！を成分とす
ることができる。
多糖−ペプチドグリカン複合体は水溶性であり、また安
定性のよい物質である。すなわち、凍結乾燥粉末は室温
保存で一年以上も活性が低下せず、また生理的食塩水溶
液にしたものは、−２０℃で凍結保存した場合、６力月
以上活性が減弱しないし、凍結融解を３回くり返しても
活性が城弱しない、生理的食塩水溶液は、さらに１００
℃で１０分間加熱しても活性減弱を起こさない。
定性のよい物質である。すなわち、凍結乾燥粉末は室温
保存で一年以上も活性が低下せず、また生理的食塩水溶
液にしたものは、−２０℃で凍結保存した場合、６力月
以上活性が減弱しないし、凍結融解を３回くり返しても
活性が城弱しない、生理的食塩水溶液は、さらに１００
℃で１０分間加熱しても活性減弱を起こさない。
したがって、多糖−ペプチドグリカン複合体から腫瘍細
胞障害性因子誘起剤を製造する場合は任意の方法により
注射剤、錠剤、粉剤等の形に製剤し、静脈注射、経口投
与などの形で利用することができる。
胞障害性因子誘起剤を製造する場合は任意の方法により
注射剤、錠剤、粉剤等の形に製剤し、静脈注射、経口投
与などの形で利用することができる。
本発明による腫瘍細胞障害性因子誘起剤の標準的な投与
量は、体重１に８当り、多糖−ペプチドグリカン複合体
として約０．８〜８０輸ｇである。
量は、体重１に８当り、多糖−ペプチドグリカン複合体
として約０．８〜８０輸ｇである。
多糖−ペプチドグリカン複合体の毒性は、下記のＬＤ、
。値（７週令、体重的２５ｇのＢＡＬＢ／ｃ雄マウスに
ウマウス値）から明らかなように、全く認められない。
。値（７週令、体重的２５ｇのＢＡＬＢ／ｃ雄マウスに
ウマウス値）から明らかなように、全く認められない。
経口投与の場合 ２０００闘／ｋｇ以上静脈内投与
の場合 ８００ｍｇ／ｋｇ以上腹腔内投与の場合
８００ｍｇ／ｋｇ以上発明の効果 本発明の腫瘍細胞障害性因子誘起剤は、毒性や副作用が
なく、また、水溶性であるため注射剤その他任意の剤形
への製剤が容易である。＊た、乳酸桿菌画体から得られ
るので原料入手が容易であり、製造もまた容易である。
の場合 ８００ｍｇ／ｋｇ以上腹腔内投与の場合
８００ｍｇ／ｋｇ以上発明の効果 本発明の腫瘍細胞障害性因子誘起剤は、毒性や副作用が
なく、また、水溶性であるため注射剤その他任意の剤形
への製剤が容易である。＊た、乳酸桿菌画体から得られ
るので原料入手が容易であり、製造もまた容易である。
これらの特長を生かして、本発明の腫瘍細胞障害性因子
誘起剤はさまざまな投与経路により生体に使用可能であ
り、腫瘍細胞に対して効果的な障害活性を誘導しうる。
誘起剤はさまざまな投与経路により生体に使用可能であ
り、腫瘍細胞に対して効果的な障害活性を誘導しうる。
さらに、腫瘍細胞障害性因子の大量生産における誘起剤
としても使用可能であるなど、多くの用途に広く利用す
ることができる。
としても使用可能であるなど、多くの用途に広く利用す
ることができる。
ヌ１男
以下、実施例を示して本発明を説明する。なお実施例に
おいては、次の方法によりａ癌細胞障害性因子誘起作用
を確認した。
おいては、次の方法によりａ癌細胞障害性因子誘起作用
を確認した。
試験法：８〜９週令のＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ｃマウスにラ
クトバチルス・カゼイの死菌体０．５ａ＋ｇをＩＩ瞭内
投与し、その５日後に腹腔的浸出細胞を採集し、パーフ
ール（７フルマシ７社製）密度勾配法（Ｇｕｔｉｅｒｒ
ｅｙｅら： Ｊ 、 Ｉ ｍｍｕｎｏ、Ｍｅｔｈｏｄｓ
、 ２９ 、５７ 。
クトバチルス・カゼイの死菌体０．５ａ＋ｇをＩＩ瞭内
投与し、その５日後に腹腔的浸出細胞を採集し、パーフ
ール（７フルマシ７社製）密度勾配法（Ｇｕｔｉｅｒｒ
ｅｙｅら： Ｊ 、 Ｉ ｍｍｕｎｏ、Ｍｅｔｈｏｄｓ
、 ２９ 、５７ 。
１９７９）により純度９９％の腹腔マクロファージを得
る。
る。
これを、１０％子牛脂児血清（シグマ社製）を添加した
ＲＰＭｌ−１６４０培地に２Ｘ１０’個／論１になるよ
うに懸濁させ、得られた懸濁液を３５−輪の培養用シャ
ーレに分注する。そこに検体（ＲＰＭＩ−１６４０培地
に溶解したもの）を加え、１８時間培養する。その後、
培養上清を１０分間遠心分離し、更にＲＰＭＩ−１６４
０培地に対して４８時間透析する。
ＲＰＭｌ−１６４０培地に２Ｘ１０’個／論１になるよ
うに懸濁させ、得られた懸濁液を３５−輪の培養用シャ
ーレに分注する。そこに検体（ＲＰＭＩ−１６４０培地
に溶解したもの）を加え、１８時間培養する。その後、
培養上清を１０分間遠心分離し、更にＲＰＭＩ−１６４
０培地に対して４８時間透析する。
別に、１０％子牛脂児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４
０培地にＬ９２９細胞を懸濁させ（ＩＸＩＯ＠／ａ＋Ｉ
）、得られた懸濁液を１００１１ずつ９６穴のマイクロ
プレートに分注し、５％炭酸ガス中、２時間培養する。
０培地にＬ９２９細胞を懸濁させ（ＩＸＩＯ＠／ａ＋Ｉ
）、得られた懸濁液を１００１１ずつ９６穴のマイクロ
プレートに分注し、５％炭酸ガス中、２時間培養する。
その後、前記透析した培養上清の透析内液を子牛胎児添
加ＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈したものを各マイクロ
プレートに加え、５％炭酸ガス中、３７゛Ｃで７２時間
培養する。次いで培養上清を捨て、各ウエールにハンク
ス液を加えて洗浄する。ハンクス液を除去したのち２０
０μｍのエタノールを各ウェールに加え、室温で５分放
置後、エタノールを除去する６次いで、エタノールで固
定されたＬ９２９細胞を染色するため各ウェールに１０
％ギムザ液を加え、室温で１５分間放置し、水道水で洗
浄し、５０゛Ｃで乾燥する。その後、各ウェールに１０
０μｌの０．０５Ｎ−ＨＣＩを含む５０％エタノール液
を加え、細胞を染色していた色素を抽出し、６２０ｎ−
と４９ｏｎ−の吸光度を測定し、検体により誘起された
腫瘍細胞障害性因子のＬ９２９細胞に対する細胞障害性
を下式により算定する。
加ＲＰＭＩ−１６４０培地で希釈したものを各マイクロ
プレートに加え、５％炭酸ガス中、３７゛Ｃで７２時間
培養する。次いで培養上清を捨て、各ウエールにハンク
ス液を加えて洗浄する。ハンクス液を除去したのち２０
０μｍのエタノールを各ウェールに加え、室温で５分放
置後、エタノールを除去する６次いで、エタノールで固
定されたＬ９２９細胞を染色するため各ウェールに１０
％ギムザ液を加え、室温で１５分間放置し、水道水で洗
浄し、５０゛Ｃで乾燥する。その後、各ウェールに１０
０μｌの０．０５Ｎ−ＨＣＩを含む５０％エタノール液
を加え、細胞を染色していた色素を抽出し、６２０ｎ−
と４９ｏｎ−の吸光度を測定し、検体により誘起された
腫瘍細胞障害性因子のＬ９２９細胞に対する細胞障害性
を下式により算定する。
細胞障害性（％）＝
体を加えたときの６２０ｎ論と４９０止の吸 度の屯検
体を加えないときの６２ｏｎ−と４９０ｎｍの吸光度の
差実施例 １ ラクトバチルス・カゼイ ＹＩＴ９０１８ （徽工研条
寄第６６５号）をロゴサの培地に接種し、３７℃で２４
時間培養した後、遠心分離操作により集菌し、蒸留水で
４回洗浄した。
体を加えないときの６２ｏｎ−と４９０ｎｍの吸光度の
差実施例 １ ラクトバチルス・カゼイ ＹＩＴ９０１８ （徽工研条
寄第６６５号）をロゴサの培地に接種し、３７℃で２４
時間培養した後、遠心分離操作により集菌し、蒸留水で
４回洗浄した。
洗浄済み菌体は、１００℃に２０分間加熱したのち凍結
乾燥した。
乾燥した。
上記により得られた薗末１ｇを、２００ｍｌの５−Ｍト
リス−マレート緩衝液（ｐＨ５，８，２１ＭのＭｇＣｌ
□を含む）に懸濁させ、１０論ｇのＮ−７セチルムラミ
デースＳＧ（生化学工業製品）を加え、３７℃で１６時
間反応させた。その後、反応混合液を５０００ＸＱで２
０分間遠心分離して細胞質部分を含む沈殿を除き、上清
をさらに１８時間反応させた０次いで反応液に１０ｍｇ
のＤ Ｎ ａｓｅと１０輸ｇのＲＮａｓｅ （イずれも
シグマ社製品）を加えて３７℃で１２時間反応させるこ
とにより混在する核酸を分解し、さらに１０−ｇのトリ
プシン（シグマ社製品）を加えて３７℃で１６時間反応
させることにより混在するタンパク質を分解した。得ら
れた反応混合液は、４℃で多量の蒸留水に対して透析し
、その後、透析内液を凍結乾燥して、約４００ｍｇの多
糖−ペプチドグリカン複合体を得た。
リス−マレート緩衝液（ｐＨ５，８，２１ＭのＭｇＣｌ
□を含む）に懸濁させ、１０論ｇのＮ−７セチルムラミ
デースＳＧ（生化学工業製品）を加え、３７℃で１６時
間反応させた。その後、反応混合液を５０００ＸＱで２
０分間遠心分離して細胞質部分を含む沈殿を除き、上清
をさらに１８時間反応させた０次いで反応液に１０ｍｇ
のＤ Ｎ ａｓｅと１０輸ｇのＲＮａｓｅ （イずれも
シグマ社製品）を加えて３７℃で１２時間反応させるこ
とにより混在する核酸を分解し、さらに１０−ｇのトリ
プシン（シグマ社製品）を加えて３７℃で１６時間反応
させることにより混在するタンパク質を分解した。得ら
れた反応混合液は、４℃で多量の蒸留水に対して透析し
、その後、透析内液を凍結乾燥して、約４００ｍｇの多
糖−ペプチドグリカン複合体を得た。
その赤外線吸収スペクトル図は第１図のとおりである。
上記多糖−ペプチドグリカン複合体について腫瘍細胞障
害性因子誘起作用を調べた結果、表１に示したように、
多糖−ペプチドグリカン複合体は１０１１ｇ／＋ｍ１以
上の濃度で腹腔マクロファージからの腫瘍細胞障害性因
子放出を誘発し、濃度５０３１ｇ／＋＊ｌで最も多くの
腫瘍細胞障害性因子を放出させた。
害性因子誘起作用を調べた結果、表１に示したように、
多糖−ペプチドグリカン複合体は１０１１ｇ／＋ｍ１以
上の濃度で腹腔マクロファージからの腫瘍細胞障害性因
子放出を誘発し、濃度５０３１ｇ／＋＊ｌで最も多くの
腫瘍細胞障害性因子を放出させた。
表１
−４．７±４．１
１００ ８３．６±０．６
５０ ９３．１±０．３
１０ ７０．６±０．９
実施例 ２
実施例１と同様にして、種々の乳酸桿菌死菌体から多糖
−ペプチドグリカン複合体を製造し、それらについて、
腫瘍細胞障害性因子誘起作用を調べた。その結果を表２
に示す、なお、多糖ペプチドグリカン複合体を加えなか
った対照例の場合、細胞障害性は４．７±２．１であっ
た。
−ペプチドグリカン複合体を製造し、それらについて、
腫瘍細胞障害性因子誘起作用を調べた。その結果を表２
に示す、なお、多糖ペプチドグリカン複合体を加えなか
った対照例の場合、細胞障害性は４．７±２．１であっ
た。
Ｌ、カゼイ ＹＩＴ９０１８ ６７．７±
１．ＩＬ、カゼイ ＹＩＴＯ１２３７２，８±１．４Ｌ
、カゼイ ＹＩＴＯ１０５７５，６±２．３Ｌ、ニーグ
ルティ ＹＩＴＯＯ８５７３，４±２．ＯＬ、ヘルベテ
ィカスＹＩＴＯＯ８３８１，２±１．７Ｌ、サリバリウ
スＹＩＴＯ１０４７６，０±２．５
１．ＩＬ、カゼイ ＹＩＴＯ１２３７２，８±１．４Ｌ
、カゼイ ＹＩＴＯ１０５７５，６±２．３Ｌ、ニーグ
ルティ ＹＩＴＯＯ８５７３，４±２．ＯＬ、ヘルベテ
ィカスＹＩＴＯＯ８３８１，２±１．７Ｌ、サリバリウ
スＹＩＴＯ１０４７６，０±２．５
第１図は実施例１による多糖・ペプチドグリカン複合体
の赤外線スペクトル図である。
の赤外線スペクトル図である。
Claims (1)
- 乳酸桿菌細胞壁由来の多糖−ペプチドグリカン複合体を
有効成分とする腫瘍細胞障害性因子誘起剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62027138A JPS63196521A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | 腫瘍細胞障害性因子誘起剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62027138A JPS63196521A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | 腫瘍細胞障害性因子誘起剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63196521A true JPS63196521A (ja) | 1988-08-15 |
Family
ID=12212690
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62027138A Pending JPS63196521A (ja) | 1987-02-10 | 1987-02-10 | 腫瘍細胞障害性因子誘起剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63196521A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994012656A1 (en) * | 1992-12-02 | 1994-06-09 | Quest International B.V. | Lactobacillus sake like strains, production and use of their exopolysaccharides |
| JP2004502633A (ja) * | 1999-01-15 | 2004-01-29 | エンタープライズ・アイルランド（トレイディング・アズ・バイオリサーチ・アイルランド） | ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）の使用 |
| WO2008053588A1 (en) | 2006-10-27 | 2008-05-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Cytokine production regulator gene and use thereof |
-
1987
- 1987-02-10 JP JP62027138A patent/JPS63196521A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994012656A1 (en) * | 1992-12-02 | 1994-06-09 | Quest International B.V. | Lactobacillus sake like strains, production and use of their exopolysaccharides |
| JP2004502633A (ja) * | 1999-01-15 | 2004-01-29 | エンタープライズ・アイルランド（トレイディング・アズ・バイオリサーチ・アイルランド） | ラクトバチルス・サリバリウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｓａｌｉｖａｒｉｕｓ）の使用 |
| WO2008053588A1 (en) | 2006-10-27 | 2008-05-08 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Cytokine production regulator gene and use thereof |
| US8404823B2 (en) | 2006-10-27 | 2013-03-26 | Kabushiki Kaisha Yakult Honsha | Cytokine production regulator gene and use thereof |
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