JPS63218687A - 抗生物質ｒｐ−２６５及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、抗生物質ＲＰ−２６５及びその製造法に関す
るものである。本発明のＲＰ−２６５は、ストレプトミ
セス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する抗生物質
ＲＰ−２６５生産菌株を培養して、その培養物中から分
離採取される文献未載の新規抗生物質である。

〔発明の背景〕

抗生物質は、医療用のみならず農薬用としても利用しう
るちのが現在までに数多く見出されている。

本発明者らは、従来より上記の如き有用な抗生物質の探
索を目的として、多数の土壌中から微生物を分離し、そ
の産出する抗生物質について、精製、同定及び用途の開
発を行ってきた。

その結果、ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅ
ｓ）属に属する微生物の培養物中に文献未−の新規抗生
物質が産出、蓄積されることの知見を得、その単離、精
製に成功した。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、新規な抗生物質および該抗生物質を放
線菌ストレプトミセス属に属する微生物から分離・採取
する方法を提供することにある。

〔発明の構成〕

く使用する微生物〉 まず、本発明において用いる微生物は、抗生物質ＲＰ−
２６５の生産能を有するものであり、ストレプトミセス
属に属する菌種である。

その−例として、ストレプトミセス・エスピー−ＲＰ　
−２６５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、　ＲＰ−
２６５）　（以下、“ＲＰ−２６５株”という）と呼称
される微生物は上記の特性を有し、本発明の抗生物質Ｒ
Ｐ−２６５を有利に生産するものであり、本発明方法に
有効に利用し得るものである。

また、上記ＲＰ−２６５株の自然的及び人工的変異株は
勿論、ストレプトミセス属に属する菌種で後述の抗生物
質ＲＰ−２６５の生産能を有する微生物はすべて本発明
方法において使用することができる。

上記ＲＰ−２６５株は、本発明者によりインドネシア国
ジャワ島で採取された土壌中より発見された土壌放射菌
であり、工業技術院微生物工業技術研究所に昭和６２年
２月１２日付受託され、その微生物受託番号は、微工研
菌寄第９１９７号（ＦＩＥＲＭ　Ｐ−９１９７）である
。

ＲＰ−２６５株は、次の菌学的性質を有する。

１、形態的特徴 本菌株はインドネシア共和国、ジャワ島中央部のチラチ
ャップ付近で採集した土壌より分離したものである。本
菌株の菌糸の塩酸加水分解物はり、　　Ｌ−ジアミノピ
メリン酸を与え、寒天培地上で長い胞子鎖を形成し、先
端付近は開放状の螺旋状となる。胞子は長円形であるが
表面は大形の多数のコブ状でおおわれノビ−（Ｋｎｏｂ
ｂｙ）に属する。また本菌株は脱脂乳を凝固後ペプトン
化し、キサンチンを利用し、澱粉を加水分解し、硝酸塩
を還元するがゼラチンを液化せず、セルロースを利用し
ない。更にチロシンを寒天培地およびペプトン・イース
トエキス・鉄寒天培地でメラノイド色素を形成し、全て
の糖を炭素源として利用して良く発育し、また多くの寒
天培地上でも良く発育して灰色糸の菌糸を形成するが、
オートミル寒天、シュクロース硝酸塩寒天、グルコース
・アスパラギン寒天培地では充分に発育しない以上の様
な性質を有する放線菌はストレプトミセス属中トルロウ
ザス（Ｓｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｔｏｒｕｌｏｓｕｓ）
が知られるだけだが、本菌株はこの種に極めて類似して
いるパージエイズ　デターミナティブ　バクテリオクジ
−８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖ
ｅ　ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　３ｔｈＥｄによる。）
。以下本菌株の２７℃３週間培養後の生育状態である。

（Ｇ：発育状況、ＡＭ：菌糸着生と色調、Ｒ：裏面色調
、ＳＰ：可溶性色素の生成、色調はディスクリティブ・
カラー・ネームズ・ディクショナリーによる） ２、各種培地での生育状態 １）スターチ・イーストエキス寒天培地Ｇ：良好 ＡＭ：豊　富　１Ｑｄｃ＝オーチヤド・ヘイズＲ：　３
ｉｃ＝ライト・アンバー ＳＰ：な　し ２）イーストエキス・マルトエキス寒天培地Ｇ：良好 へＭ：普　通　１０Ｃｂ＝セランド・ティントＲ：２Ｉ
Ｃ＝ゴールド ＳＰ：な　し ３）オートミル寒天培地 Ｇ：極めて不良 へＭ：非常に貧弱　ｂ＝ニオイスターホワイト　：　ｂ
＝ニオイスターホワイ トＰ：な　し ４）スターチ・無機塩寒天培地 Ｇ：良好 へＭ：豊　富　ｂ＝オイスターホワイからＣ＝ニライト
グレー Ｒ：　３ｂａ＝シエル・ティント ＳＰ：な　し ５）チロシン寒天培地 Ｇ：良好 ＡＭ：な　し Ｒ：　３ｐｉ＝ゴールデイン・ブラウンＳＰ　：　３ｐ
ｉ＝ゴールデイン・ブラウン６）シュクロース・硝酸塩
寒天培地 Ｇ：不良 ＡＭ＝貧　弱　２ｈａ＝バール Ｒ：　３ｂａ＝バール ＳＰ：な　し ７）グルコース・アスパラギン寒天培地Ｇ：不良 へＭ：貧　弱　２ｈａ＝バール Ｒ：　２ｈａ＝バール ＳＰ：な　し ８）グリセロール・アスパラギン寒天培地Ｇ：普通 へＭ：普　通　２ｈａ＝バール Ｒ：　２ｂａ＝パール ＳＰ：な　し ９）栄養寒天培地 Ｇ：普通 ＡＭ：な　し Ｒ：　３ｇｃ＝ライト・タン ＳＰ：な　し １０）ペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地Ｇ：普通 八Ｍ：な　し Ｒ：３ｉｃ＝ライト・アンバー ＳＰ：３１ｅ＝シナモン ３、炭素源の利用 利用 Ｌ−アラビノース　　　　　＋ Ｄ−キシロース　　　　　　＋ Ｄ−グルコース　　　　　　＋ Ｄ−フラクトース　　　　　＋ シュクロース　　　　　　　＋ イノシトール　　　　　　＋ Ｌ−ラムノース　　　　　　＋ ラフィノース　　　　　　　＋ Ｄ−マンニトール　　　　＋ （培養法及び精製法） 本発明の抗生物質ＲＰ−２６５を得るに当っては、スト
レプトミセス属に属する上記抗生物質生産菌を、抗生物
質を生産する通常の方法で培養すればよい。培養の形態
は、液体培養でも固体培養でもよく、工業的に有利に培
養するためには、前記生産菌の胞子懸濁液又は培養液を
培地に接種し、通気撹拌培養を行えばよい。

培地の栄養源としては特に限定されることはな（、微生
物の培養に通常用いられる炭素源、窒素源その他を培地
中に含有させることができる。炭素源としては、澱粉、
デキストリン、グリセリン、グルコース、シュクロース
、ガラクトース、イノシトール、マンニトールなどが、
また窒素源としては、ペプトン、大豆粉、肉エキス、米
ぬか、麩、尿Ｌコーンステイープリカー、アンモニウム
塩、硝酸塩、その他の有機または無機の窒素化合物が用
いられる。その他、無機塩類、たとえば食塩、燐酸塩類
、カリウム、カルシウム、亜鉛、マンガン、鉄等の金属
塩類等を適宜に添加してもよく、必要に応じて消泡剤と
して、動、植、鉱物油等を添加してもよい。培養温度、
培養時間等の培養条件は使用菌の発育に適し、しかもＲ
Ｐ−２６５の生産が最高となるような条件が選ばれる。

たとえば、培地のｐＨは４〜９、特に６〜７付近がよく
、培養の適温は２６−３２℃程度がよい。しかし、これ
らの培養組成物、培地の水素イオン濃度、培養温度、撹
拌条件などの培養条件は使用する菌株の種類や、外部の
条件などに応じて好ましい結果が得られるように適宜調
節されるべきであることはいうまでもない。このように
して得られる培養物から、ＲＰ−２６５を得るには、代
謝産物を採取するのに通常用いられる手段を適宜に利用
して採取し得る。たとえば、ＲＰ−２６５と不純物との
溶解度差を利用する手段、イオン結合力の差を利用する
手段、吸着親和力の差を利用する手段、分子量の差を利
用する手段のいずれも、それぞれ単独、又は、適宜組合
わせて、あるいは反復して使用される。具体的には、Ｒ
Ｐ−２６５は、培養濾液あるいは菌体中に存在する。菌
体は、アセトン、酢酸エチルで抽出後、培養濾液を酢酸
エチルで抽出したものと合わせる。該抽出液を減圧濃縮
後、メタノールに溶解し、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー（例えば、溶媒：クロロホルム−メタノール）
に付す。活性区分を集め、減圧濃縮し、高速液体クロマ
トグラフィー（例えば、旧ｇｈＣａｒｂｏｎ　ＯＤＳ、
　　溶媒：メタノール−アセトニトリル）に付し、活性
ピークを集めて減圧濃縮、次いで凍結乾燥すると純粋な
ＲＰ−２６５が得られる。

かくして得られたＲＰ−２６５の理化学的性質及び生物
学的性質は、次のとおりである。

［ＲＰ−２６５の理化学的性質及び生物学的性質〕（１
）形　　状：白色粉末 （２）融　　点：１２２−１２３℃ （３）元素分析：炭素６４．７８％、水素９．３１％、
（４）比旋光度：　　ＣａＥ　ｌ１ｌ−２５，５°　（
Ｃ＝０．０１、メタノール） （５）紫外部吸収スペクトル：λ、□　ｍμ第２図のと
おり ３４２０．２９２０．１７１３． １６４０．１４５０．１３８０． １２７０．１１６０．１０７８． １００５．９７０ｃ＋ｔｒ’ （７）分子量：　　（ＦＤ−スペクトルによる）７５４
（８）溶解性：メタノール、クロロホルム、ベンゼン、
酢酸エチル、エーテルに易溶、 水、シクロヘキサンに難溶 （９）呈色反応ニレミュー試薬、アニスアルデヒド−硫
酸反応、ヨード反応・・・・・・陽性ニンヒドリン反応
、アンスロン反 応・・・・・・陰性 α（ｉＲｆ値ニジリカゲル薄層クロマトグラフィー（Ｍ
ｅｒｃｋ　Ｆ２５４） 溶　　媒　　系　　　　　　　　　　　Ｒｒ　値クロロ
ホルムーメタノール（５：１）　　　　　０．６６酢酸
エチル−ベンゼン　　（４：１）　　　　０．１９（６
）抗菌スペクトル：寒天平板希釈法による検定を行い、
最小生育阻止濃度（ＭＩＣ） を求めた。

この結果、本物質は、植物病原性糸状菌に対し阻害活性
を示し、又特徴的には、藻類に対し、極めて強い阻害活
性を示した。

（他物質との比較） ＲＰ−２６５は、その理化学的性質において、中性マク
ロライド系抗生物質と考えられる。ＵＶスペクトルにお
いて、２１Ｔｎｍ付近に吸収のあるマクロライド系抗生
物質としては、サイトバリシン（Ｃｙｔｏｖａｒｉｃｉ
ｎ、　Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　　３４　１０７３
（１９８１）参照）、５Ｓ−４９物質（特開昭４７−２
８１９４号参照）等がある。サイトバリシンは分子量が
９００であり、ＲＰ−２６５は７５４と異なる。又、５
Ｓ−４９物質については、直接比較によりＨＰＬＣの保
持時間がＲＰ−２６５と異なる。又、更にＵＶ及び分子
量について、他の既知物質と比較したが、そのいずれと
も一致しないので、本物質を新規抗生物質であると結論
した。

（有用性） ＲＰ−２６５は、上記の如く、植物病原性糸状菌及び藻
類に対して生育阻害作用を示すことから、農園芸用殺菌
剤あるいは除草剤とじての利用が期待される。

実施例 グルコース２％、可溶性でんぷん１％、肉エキス０．１
％、乾燥酵母０．４％、大豆粉２．５％、食塩０．２％
、リン酸第２カリウム０．００５％の組成からなる培地
にＲＰ−２６５株（ＦＥＲＭＰ−９１９７）を接種して
２８℃で７２時間振とう培養した。得られた培養液７２
ｊ７を遠心濾過（２００Ｏｒ、ｐ、ｍ）して、４５１の
培養濾液を得た。得られた培養濾液（ｐＨ６，５）を酢
酸エチルで抽出後、減圧下に濃縮すると油状物１９ｇが
得られた。このうち、２ｇをメタノールに溶解し、クロ
ロホルム−メタノール（２０：　１）に調製したシリカ
ゲルカラム（φ２５ｍｍＸ　８２０ｍｍ＞に付し、同じ
溶媒系で展開した。分画量は１８ｍＮで分画Ｎα３７−
５９に活性区分が得られた。この活性区分を集め、減圧
濃縮すると１７　Ｑｍｇの濃縮物が得られた。得られた
濃縮物を高速液体クロマトグラフィー（ハイ・カーボア
（Ｈｉｇｈ　Ｃａｒｂｏｎ）　ＯＤＳ　、φ２０ｍｍＸ
　２’　５０ｍｍ。

アセトニトリル：メタノール：水＝４０：３５：２５．
８．７ｒｎｌ／分、１００ｋｇ／ｃｎｆ）により精製す
ると保持時間３８分にＲＰ−２６５のピークが現われる
。このピークを集め、アセトニトリル、メタノールがな
くなるまで減圧濃縮し凍結乾燥すると純粋なＲＰ−２６
５が白色粉末として９０ｍｇ得られた。

【図面の簡単な説明】

第１図は、ＲＰ−２６５紫外線吸収スペクトルを示す図
であり、第２図は、ＲＰ−２６５の赤外線吸収スペクト
ルを示す図面である。 第１図 波長（ｎｍ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記の理化学的性質及び生物学的性質を有する抗
   生物質ＲＰ−２６５。 （１）形　状：白色粉末 （２）融　点：１２２−１２３℃ （３）元素分析：炭素６４．７８％、水素９．３１％、
   （４）比旋光度：〔α〕＾２＾６＿Ｄ−２５．５°（Ｃ
   ＝０．０１、メタノール） （５）紫外部吸収スペクトル：λ＾メ＾タ＾ノ＾ー＾ル
   ＿ｍ＿ａ＿ｘｎｍ（Ｅ＿１ｃｍ） ２１７（１３７） （６）赤外部吸収スペクトル：ν＾Ｋ＾Ｂ＾ｒ＿ｍ＿ａ
   ＿ｘ３４２０、２９２０、１７１３、 １６４０、１４５０、１３８０、 １２７０、１１６０、１０７８、 １００５、９７０ｃｍ＾−＾１ （７）分子量：（ＦＤマス・スペクトル）７５４ （８）溶解性：メタノール、クロロホルム、ベンゼン、
   酢酸エチル、エーテルに易溶水、シクロヘキサンに難溶 （９）呈色反応：レミュー試薬、アニスアルデヒド−硫
   酸反応、ヨード反応・・・・・・陽性ニンヒドリン反応
   、アンスロン反応・・・・・・陰性 （１０）抗菌スペクトル：植物病原性糸状菌、藻類に対
   して抗菌活性を示す。 （２）ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）
   属に属する抗生物質ＲＰ−２６５生産菌を培養し、その
   培養物から抗生物質ＲＰ−２６５を分離採取することを
   特徴とする抗生物質ＲＰ−２６５の製造法。 （３）抗生物質ＲＰ−２６５生産菌が、ストレプトミセ
   ス・エスピー・Ｒ−２６５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ
   ｓｐ、ＲＰ−２６５）である特許請求の範囲第（２）項
   記載の製造法。