JPS63309200A - Ｈｉｖの測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の測定方法に関る、。

（従来の技術） ＡＩＤＳ（＾ｃｑｕｉｒｅｄ　Ｉｖｓｕｎｏｄｅｆｉｃ
ｉｅｎｃｙ　Ｓｙｎｄｒｏｍｅ；後天性免疫不全症候群
）は二十世紀における主要な公衆衛生上の脅威である。

その生物学的に変化る、性質、個体から個体に伝播る、
その微妙な手段、及びその本当の存在の容易な検出さえ
拒むその潜伏期間のため、ＡＩＤＳは先例のない程の疫
学的窮地に立ち至っている。確かに、診断の可能を増す
ためにすでに開発されているかなりの手段をもってして
も、利用可能な技法は、集団のいずれかの部分において
この問題の確実な制御を得るために必要な要件になお欠
けている。例えば、メリーランド、ベセスダ、　ｔｈｅ
　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ）１
ｅａｌｔｈにおいて１９８５年７月３１日に開催された
、ＴｈｅＣｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇｓ　ａｎｄ　
Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ、　ＰＤＡ、　ＮａｔｉｏｎａｌＩ
ｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｆ　ＨｅａｌｔＴｏ　ａｎｄ　
Ｃａｎｃｅｒｓ　ｆｏｒ　ＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏ
ｌ主催の“Ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅ　ｗｉｔｈ　ＨＴＬＶ
　−ｍＡｎｔｉｂｏｄｙ　Ｔｅｓｔｉｎｇ、　ａｎ　Ｕ
ｐｄａｔｅ　ｏｎ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ。

しａｂｏｒａｔｏｒｙ　　ａｎｄ　　Ｅｐｔｄｅｓｉｏ
ｇｏｇｉｃａｌ　　Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ″と題る
、ワークショップの記録を参照のこと；さらにＢｕｄｉ
ａｎｓｋｙ＋　Ｓ、　Ｎａｔｕｒｅ、　Ｖｏ１３１６＋
　９６頁、１９８５年７月１１日、を参照のこと。

ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩ　Ｖ）について幾つかの異
る名称が存在る、。ＬＡＶはフランス、パリ、パスツー
ル研究所において単離されたＨＩＶウィルスの名称であ
り、そしてＨＴＬＶ−ＩＩＩ（ヒトＴ−細胞好リンパウ
イルス）は米国、メリーランド。

ベセスダ、　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　
ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈにおいて単離されたＨＩＶウィルス
の名称である。この明細書においてはしばしば、ＨＩＶ
ウィルスを一般的にＨＴＬＶ　ＩＩ［もしくはＬＡＶ又
はＨＩＶと称る、が、これらの間を区別る、ことを意図
る、ものではない、さらに、この明細書において“）Ｉ
ＩＶ”なる語は、単離されているか否かを問わずＡＩＤ
Ｓの発生と関連る、であろう任意の且つすべての他のウ
ィルスを包含る、。単にＨＩＶウィルスといえば、それ
らのゲノム内容物とは無関係にあらゆるＨＩＶタイプを
包含る、。同様に、ＡＩＤＳ症状は、）（ＩＶ　（上に
定義した）　、ＡＲＣ又はＡＩＤＳ関連コンプレックス
、リンパ腺症症候群（ＬＡＳ）　、及び他のウィルスが
惹起る、実質的に類似る、臨床状症を包含る、ことを一
般に意味る、。

現在の医療的考慮は２つのアプローチの内の１つを採用
している。ウィルスそれ自体に対る、免疫学的（ワクチ
ン生産）又は直接的攻撃である（抗ウイルス療法）。ワ
クチンの生産は、少なくとも理論的には、最初は非常に
有望なようであったが、ウィルス組成についての新しい
知識はこの希望を実質的に葬り去った。すなわち、ウィ
ルスは容易に変異し又はその基本的な生化学的構造を変
え、その結果必須のウィルス抗原“決定基”・・・ワク
チンが有効であるために必要である・・・が容易に変異
又は変化を受けるようである。例えば、カリホルニア、
マリ−ランド及びイングランドでのＨＴＬＶ−Ｉ［［単
離体は、それらのゲノム内容を十分に分析した場合、相
互に有意に異ることが最近見出された。これらの研究の
裏の意味は、はとんどの他のワクチン、例えばポリオウ
ィルス、麻疹ウィルス等に対る、ワクチンについて歴史
的に特徴的である決定的に有利であり／永続的である結
果をもたらすような利点を保持しながら普及る、ことは
ないであろうということである。

第二の、又は直接抗ウイルスアプローチにおいて、他の
科学者はＡＺＴ、　　ＨＰＡ−２３、スラミン、リバビ
リン、インターフェロン及ヒファスカルネット（ｆａｓ
ｃａｒｎｅｔ）等を包含る、幾つかの化合物を試験した
。これらの化合物は、療法的成功の限定的な又は条件付
きの証拠を伴って実験室研究又は臨床研究に導入された
。確かに、高い毒性及び／又は深刻な副作用の一貫した
証拠がほとんどあらゆる場合に報告されている（例えば
、Ｍ、ＣｌａｒＬＮｅｗｓｗｅｅｋ＋　７１頁、１９８
５年８月５日；さらにＣ０Ｗａｌｌｉｓ、　Ｔｉｍｅ＋
　４０　４７頁、１９８５年８月１２日を参照のこと）
　、　６ｉ！かに、これらの薬剤はいずれも新規ではな
く、又は基礎となる疾患、すなわちある種の細胞でのＨ
ＩＶの増殖、に対して選択的に向けられるものではない
。例えば、ＨＰＡ　−２３は重金属の組み合わせ（１９
２０年代、又は前−ペニジリン時代における性病の治療
のための砒素の使用を追憶る、）であり、スラミンは実
際に抗−寄生体（眠り病）化合物であり、そしてファス
カルネットは抗−ヘルペスウィルス化合物である。後者
の２種類の化合物は“逆転写酵素”と称されるＨＩＶ−
関連酵素を阻害る、ことができるが、このような酵素阻
害が実際になんらかの有意な療法的改善又は疾患の予防
／改善をもたらすという証拠はほとんど無い、ＡＺＴは
ＡＩＤＳの犠牲においてわずかな延命を伴うが、このも
のは非常に毒性が強く、そしてＨＩＶを根絶しない（Ｒ
，Ｙａｒｃｈｏａｎ等、Ｌａｎｃｅｔ。

Ｍａｒｃｈ　１５．　５７５頁、１９８６　；　Ｒ，Ｅ
、Ｃｈａｉｓｓｏｎ等、ＮｅｗＥｎ　１ａｎｄ　Ｊｏｕ
ｒｎａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、　Ｖｏ１３１５．
１６１１頁、１９８６年）。

ＡＩＤＳの一進Ｊｔ性。

ＡＩＤＳはヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の感染によ
り惹起される免疫系の進行性の退化を伴う。

この疾患の初期において、Ｔヘルパー細胞及びインデュ
ーサー細胞から主として成るＴ−細胞のサブセントであ
る、いわゆるＴ４抗原を発現る、Ｔ（胸腺由来）細胞の
喪失により、細胞性免疫が害される。Ｔ４細胞不全は、
ＮＫ（ナチュラルキラー細胞）　、ＬＡＫ　（リンホカ
インにより活性化されたキラー細胞）及び細胞溶解性（
ｃｙｔｏｌｙｔｉｃ）　Ｔ細胞における欠損を包含る、
幾つかの欠損を導り。

さらにＡＩＤＳにおいてはＢ細胞（骨髄由来細胞）欠損
が存在る、。

ＡＩＤＳは進行性疾患のようである。但し、１つの段階
から他の段階への移行の速度は異り得る。これらの段階
は分類されている。ＨＩＶにより感染された無症状の個
体が存在し、これはウィルスに対る、循環抗体の存在に
より判定され、時として血清陽性（ｓｅｒｏｐｏｓｉｔ
ｉｖｅ）と称される（Ｍ、Ｇ、　Ｓａｒｎｇａｄ−ｄｈ
ａｒａｎ等、５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏ　ｌ　２２４＋　
５０６頁、１９８４）。

これらが他の徴候を有しないのであれば、Ｗａ　Ｉ　ｔ
ｅｒＲｅｅｄ分類（Ｒ，Ｒ，Ｒｅｄｆｉｅｌｄ等、Ｎｅ
ｗ　Ｆｉｎ　１ａｎｄ　Ｊｏｕｒｎａｌ工ｏｆ　Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ、　Ｖｏ１３１４．　ｉａｉ真、１９８６年
）により、これらはＷＲ１段階の患者である。これらの
個体の内の幾らかは決してＡＲＣ症状を示さないが、こ
れらはまたＡＲＣ（ＡＲＣ＝ＡＩＤＳ−関連コンプレッ
クス）とも呼ばれる。これらの患者の幾らかはリンパ腺
症を出現しくＷＲ２）そしてＴ４細胞欠損を表わす（Ｗ
Ｒ３）、次に、抗原の刺激による増殖及び抗原の刺激に
よるインターフェロン−Ｔ生産を行うリンパ球の能力が
低下し、そしてこれらのＷＲ４患者は遅延皮膚通説（ｄ
ｅｌｅｔｅｄ　ｃｕｔａｎｅｏｕｓｈｙｐｅｒｓｅｎｓ
ｉｔｉｖｉｔｙ）を失い始める。ＷＲ５患者は通常アネ
ルギー状態にある。これらの患者はヘルペス・シスター
（Ｈｅｒｐｅｓ　Ｚｏｓｔｅｒ）感染、口内キャンシダ
症（鵞口疹）、又はＡＲＣ症状（長びく発熱、寝汗、疲
労、下痢、及び／又は体重の減少を含む）を現わす、こ
のＡＲＣ期間はまた進行性の免疫破壊により特徴付けら
れる。最後に、ＷＲ６の個体はフルーブラウン（ｆｕｌ
ｌ−ｂｌｏｗｎ）又はフランり（ｆｒａｎｋ）　ＡＩＤ
Ｓを構成る、日和見感染を経験し、患者の６０％が１２
ケ月以内に死亡る、（Ｈ，Ｗ。

Ｍｕｒｒａｙ等、Ｎｅｗ　Ｅｎｇｌａｎｄ　Ｊｏｕｒｎ
ａｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ。

Ｖｏ　１３１０．８８３頁、１９８４年）。

（発明の概要） ヒト免疫不全ウィルスにより感染された細胞により放出
されるか又は放出されるように原因付けられた阻害物質
が発見された。この阻害物質は、２　’−５’オリゴア
デニレート／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路の末端を生成物である
酵素ＲＮａｓｅ　Ｌに物理的に付着して、全免疫系の機
能を低下せしめ、そしてウィルスが制御されないで増殖
る、ことを可能にる、ようである。　ＲＮａｓｅ　Ｌの
不存在又はＲＮａｓｅ　Ｌの不活性化あるいは２　’　
−５’　Ａ／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路における生化学的中間
体の阻害物質の不存在により直接的に又は間接的にこれ
らの阻害物質を同定る、技法が開示される。ここで、阻
害物質はＨＩＶ又は実質的に類似の臨床状態を示す関連
ウィルスを検出る、ためのマーカーとして機能る、。患
者、特に、その抹消血中に及び血液、血液画分、移植器
官の細胞及び細胞抽出物を包含る、組織中にＨＩＶに対
る、抗体を有る、患者におけるフルーブラウン（ｆｕｌ
ｌ−ｂｌｏｗｎ）ＡＩＤＳの発達に関る、前記マーカー
の前兆的な重要性も検討される。ＲＮａｓｅ　Ｌを活性
化しそして／又はＲＮａｓｅ　Ｌ阻害物質を除去しもし
くは不活性化る、ための方法が記載される。

ＲＮａｓｅ　Ｌ阻害物質、又はこのような阻害物質に向
けられたウィルを不活性化る、療法はこの発明の部分で
ある。抗原としてＲＮａｓｅ　Ｌの特異的阻害剤、又は
２　’　−５’　Ａ／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路中の生化学的
介在物質のウィルスに向けられた阻害物質を用いて、イ
ンビボ及びインビトロの両方において、これらのウィル
スに対る、抗体を製造る、方法はこの発明に含まれる。

（本発明の記Ｒ） 従ってこの発明は、医薬組成物において、並びにＲＮａ
ｓｅ　Ｌを活性化し、ＲＮａｓｅ　Ｌの特異的阻害剤、
又は動物及びヒトの両者における２’−５′Ａ／ＲＮａ
ｓｅ　Ｌ経路中の生化学的介在物質のウィルスに向けら
れた阻害物資を除去し又は不活性化る、ための方法にお
けるｄｓＲＮＡの使用を含み、これはｄｓＲＮＡ好まし
くは後に説明る、ミスマツチｄｓＲＮＡ、及びリンホカ
イン、例えばインターフェロン、又はその作用がｄｓＲ
ＮＡ依存性２’−５′Ａ経路の回復及び復旧によって促
進されるであろう他の特異的抗ウィルス剤の組み合わせ
を含んでなる。

好ましくは、この組成物はｄｓＲＮＡ及びインターフェ
ロンを、０．０１〜１０００■のｄｓＲＮＡと０．１〜
１００、０ＯＯＩＲＵのインターフェロンの比率で含有
る、。

この発明はさらに、好ましくはヒト由来の生物学的流体
又は好ましくはヒト由来の、ウィルス感染に対して耐性
の細胞をして、その耐性を増強せしめ、又はＨＩＶ感染
の効果を和らげる方法を含み、この方法はこれらの生物
学的流体又は細胞を有効果の、例えばＨＩＶを阻害し、
ＲＮａｓｅ　Ｌを活性化る、量のｄｓＲＮＡと混合又は
接触せしめることを含んで成る。生物学的流体はヒトの
血液又はその画分であって、例えば輸血又は透析におい
て使用る、ためのものであることができる。細胞は提供
される皮膚移植片又は移植可能な器官であることができ
る。

さらに、この発明はまた、非経口流体を取扱うための装
置からＲＮａｓｅの形成を阻害る、物質を除去し又は不
活性化し、あるいはそれらからのＩ（Ｉ■惑感染効果を
緩和る、方法を含み、この方法は前記装置を、有効な、
ＨＩＶを阻害し、ＲＮａｓｅ　Ｌを活性化る、量のｄｓ
ＲＮＡを含有る、組成物と接触せしめることを含んで成
る。

この発明はまた、ＨＩＶ−特異的ＲＮａｓｅ　Ｌ阻害物
質又は２　’　　５　’　Ａ／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路中の
生化学的介在物質のウィルスに向けられた阻害物質を抑
制しもしくは除去し、そして／又はＲＮａｓｅ　Ｌを活
性化る、ことによる、ＡＩＤＳ状態を包含る、ＨＩＶに
感染された個体の治療において使用る、ための療法及び
組成物を含む、この組成物は、ｄｓＲＮＡ及び医薬とし
て許容されるキャリヤー又は稀釈剤を含有し、レトロウ
ィルス又はＴ−細胞好リンパ性ウィルス例えばＡＩＤＳ
により誘導される状態、又は休止しているＲＮａｓｅ　
Ｌを活性化る、ことによりその増殖が妨害されるであろ
う他のヒトウィルスの処置のために使用る、ための指示
書を伴う。

従って、これ以後、例示により、正常細胞に対る、有意
な毒性を伴わないでヒトウィルス、特にＨＩＶを選択的
に阻害る、医療的方法；ヒトがＨＩＶに感染る、のを阻
害し、遅延せしめ又は予防る、方法；ヒトにおけるＡＩ
ＤＳ−関連コンプレックス及びＡＩＤＳ−関連疾患を予
防又は治療る、方法：ＨＩＶによる感染又は汚染を予防
し又は抑止る、ためにヒトの生物学的流体、細胞及びＵ
織製品を処理る、方法；並びに、免疫系の選択された細
胞における細胞内ｄｓＲＮへの減少又は喪失並びにＲＮ
ａｓｅ　Ｌの不活性化及び細胞内２’−５′Ａシンセタ
ーゼの削減又は減少に基く、免疫系内の細胞上のインタ
ーフェロン受容体の喪失を含む、ＨＩＶに伴う特定の病
変を修正る、方法が開示される。

これらの方法に使用る、ための医薬組成物もまた開示さ
れる。ヒトのほか、動物の処置もまたこの発明の範囲に
含まれる。

ｄｓＲＮＡの使用は、免疫系内の種々の重要な細胞上の
ＲＮａｓｅ　Ｌ及びｄｓＲＮＡ依存性酵素（例えばプロ
ティンキナーゼ）の喪失、免疫／身体防御系における種
々の重要な細胞中の細胞内２’−５′Ａシンセターゼの
削減／減少、並びに免疫／身体防御系内の種々の重要な
細胞中の生物活性２’−５′Ａオリゴマーの減少又は喪
失及び細胞内ｄｓＲＮＡの減少又は喪失を包含る、、Ｈ
ＩＶｉ染に伴う特定の病変の修正に適合される。

種々の研究が、２’−５’オリゴアデニレート経路（医
学文献においてはインターフェロン２′−５′経路とも
称される）がＡＩＤＳにおいて機能しないことを示して
いる。この経路は、感染に対る、体の防御系の一体的部
分である。　ＡＩＤＳ及び種々の先行る、状態（例えば
ＡＲＣ）又はＬＡＳ　（リンパ腺症症候郡）においては
、この経路の近位酵素／因子が“ターンオン”され、又
は活性化されるが、しかしＡＩＤＳウィルスはなお増殖
る、。例えば、インターフェロンのレベルが典型的に上
昇し、そして酵素２’−５′Ａシンセターゼも上昇る、
。

しかしながら、これらの上昇の機構、及びこの経路が少
なくともある程度ＨＩＶを抑制る、ために少なくとも部
分的にターンオンされないことは、ここで報告る、研究
までは全く不可能なことであった。

本発明者の見解として、本発明者はＨＩＶ惑染感染して
二次的である阻害物質を同定した。この物質は存在し、
そして抗ウイルス防御機構を無力化してフルブーラウン
（ｆｕｌｌ−ｂｌｏｗｎ）ＡＩＤＳに寄与る、。

第１図は、ｄｓＲＮＡ　（アンプリゲン（ＡＭＰＬＩＧ
ＩＥＮ）、米国、マリ−ランド、ロックビル、ＨＥＭリ
サーチ社の商標）療法の間に末梢血中のＨＩＶ負荷を迅
速に排除したＡＲＣ／ＡＩＤＳ遺者におけるＲＮａｓｅ
　Ｌの特徴付けを与える。患者の末梢血単核細胞の細胞
質抽出物中の活性化されたＲＮａｓｅ　Ｌの存在又は不
存在が、Ｋ、Ｋａｒｉｋｏ及びＪ、Ｌｕｄｗｉｇ、　Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏ　ｈ　ｓ、Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃ
ａｔｉｏｎ、　Ｖｏｊ！１２８．６９５頁、１９８５　
ＨＤ、ＩＩＪｒｅｓｃｈｎｅｒ等、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａ
ｃ１ｄＲｅｓｅａｒｃｈ、　Ｖｏｌ　Ｌ　１５７１頁、
１９８１、の方法に従って、２８Ｓ及び１８Ｓ　？ＲＮ
＾から特異的開裂生成物（ＳＣＰ）を生じさせる能力に
より決定された。

リボゾームＲＮＡ（２８３及び１８Ｓと称される２つの
分子種を含む）は、活性化されたＲＮａｓｅ　Ｌによる
開裂に対して感受性であるがしかし不活性ＲＮａｓｅ　
Ｌについてはそうでない点においてウィルス（例えばＩ
ＩＩＶ）　ＲＮＡに類似した挙動を示す。活性化された
ＲＮアーゼしは、その分子構造に優勢な２−５Ａオリゴ
マーを結合していること、及びもしあるとしても阻害物
質の稀薄な結合により特徴付けられる。これらの研究の
結果を第１図に示す。

この図はポリアクリルアミドゲル電気泳動核の写真であ
る。第１表はアンプリゲン治療を受けた１０人の患者か
ら集めたデーターの要約である。

リボゲームＲＮＡ源として使用る、肛９２９細胞の抽゛
出物（ＲＮａｓｅ　Ｌマイナス）を、健康な対照からの
ＰＢＭＣ細胞質抽出物の不存在下（レーン１）又は存在
下（レーン２）、あるいはアンプリゲン治療の前のＡＲ
Ｃ及び＾ＩＤＳ患者（すべてコードされている）からの
抽出物の存在下（レーン３及びレーン４はそれぞれ患者
３及び７からの治療前のサンプルである）で１時間イン
キュベートした。レーン１．３及び４は、ゲルのＳＰＣ
領域中のバンドにより示されるように、活性化されたＲ
Ｎａｓｅ　Ｌの証拠をなんら示さなかった。　ＨＬ　９
２９細胞は、ブダペスト条約に基き、アメリカン・タイ
プ・カルチュアー・コレクションに受託番号　　　　と
して寄託されている。。

治療の前、すべてのＡＲＣ／ＡＩＤＳ患者の抽出物も、
外来の生物活性オリゴアデニレート（２’　５　’ＰＪ
ｚ　（１０〜８Ｍ）〕が適用された場合でさえ、活性化
を示さず（ＳＰＣなし）、このことは、アンブリゲン治
療の前の患者のリンパ球中で機能的ＲＮａｓｅ　Ｌ分子
が利用可能でないことを確認した。

これに対して、アンプリゲン治療と共に、ＡＲＣ患者３
（治療の８週間口レーン５、及び１６週週間−−ン６）
；並びにＡＩＤＳ患者７（８週間口シーン７）、及び第
１表に示す種々の患者（ゲルによっては示してない）に
おいて、ＲＮａｓｅのＲＮａｓｅ　Ｌの進行性のインビ
ボ活性化が観察された。患者Ｎｏ５のみがｄｓＲＮＡ治
療においてＲＮａｓｅ　Ｌを活性化る、ことに失敗し、
おそらくこの結果として、二次日和見感染により死亡し
た。

ケース１−ＨＩＶ感染を克服した個体を含む正常個体に
おける生物学的経路を第２図に示す。

ケース２−ＡＩＤＳの個体、及びＡＲＣ、ＬＡＳ　、　
ＡＩＤＳに進む無症状ＨＩＶ血清陽性個体等を含む先行
疾患の個体・・・段階（Ａ）、ＣＢ）及び（Ｃ）はオー
バーファンクショニング（ｏｖｅｒｆｕｎｃｔｉｏｎｉ
ｎｇ）である。なぜなら、ＲＮａｓｅ　Ｌは阻害物質中
に捕捉され〔段階りが機能しない〕、そして経路を完結
る、ことができず；従って、“フードバック制御”の欠
損のために経路は適切に閉鎖されず、そして高濃度のイ
ンターフェロン、２−５Ａシンセターゼ及び生物活性２
−５オリゴマー（２−５Ａのトリマー及びオリゴマーが
特に活性である）に直面してさえＨＩＶが増殖る、から
である。

実験データー・・・ＡＩＤＳの臨床検体の全体にわたり
、未処置の個体からのリンパ球中に有意な濃度で２−５
Ａオリゴマーが存在る、ことが観察された。

しかしながら、正常個体（第１図のポリアクリルゲルの
レーン２）とは異り、ＲＮａｓｅは未処置のＡＲＣ及び
ＡＩＤＳ患者においては不活性であった（レーン３及び
４）０本発明者の観察によればさらに、もし本発明者が
ＲＮａｓｅ　Ｌ調製物をＡＲＣ／ＡＩＤＳ患者から得、
そしてこれらをまずトリクロロ酢酸（ＴＣＡ）等を用い
て十分に洗浄たなら（アッセイ前に）　、ＲＮａｓｅ　
Ｌ調製物は機能を回復したであろう。それらは巨大分子
ＲＮＡの特異的開裂（ゲル中ＳＣＰと称される）を触媒
し、そして活性であるとされたであろう、一連の再構成
実験により％　ＲＮａｓｅ　Ｌの阻害物質は溶出され又
は開放され、それは加えもどされたなら、ＲＮａｓｅ　
Ｌ反応を停止、すなわち阻害る、ことが確認された。

今日までに得られた証拠は、細胞性ＲＮａｓｅ　Ｌの状
態（活性又は不活性）はＨＩＶにおける重要な予知的パ
ラメーターを構成る、こと、及び二本鎖ＲＮＡを用いる
特定の治療スケジュールがこれらのＨＩＶ−特異的病変
を逆転せしめることができることを示している。無症状
ＨＩＶキャリヤー（例えば、第１表中の患者Ｎｏ８）か
ら初期疾患（例えば、ＡＲＣ又はＬＡＳ　；患者２，３
，９゜１Ｏ２１及び４）〜フルーブラウンＡＩＤＳまで
の個体の臨床スペクトルをｄｓＲＮＡにより処置して、
阻害物質がＲＮａｓｅ　Ｌから除去され得るか否かを決
定した。この様な分子事象がＨＩＶ負荷の減少及び劇的
な比的改善を導くかもしれないことを期待してのことで
ある０個体（体重約６０ｋｇ）を週２回、５０〜２５０
■のアンブリゲンと称る、特定のｄｓＲＮＡにより処理
した。２’−５’オリゴＡシンセターゼはｄｓＲＮＡ依
存性の酵素であり、そして人工的・（合成）ｄｓＲＮＡ
の使用により特定の生物活性２′−５′オリゴマーの細
胞内濃度を急激に増加せしめることによりＲＮａｓｅ　
Ｌからその阻害物質を除去る、。ことが可能であろうと
理由付けられた。

以下（、白 第１表は、ミスマツチｄｓＲＮＡの使用が実際に、処置
された患者の血清中のＨＩＶレベルをいかに劇的に低下
せしめるかを示している。第１表中の最終４１４（ウィ
ルス学的観察）を比較る、ことにより、ＲＮａｓｅ　Ｌ
の活性化がＨＩＶ負荷の低下と関連し、そして臨床的環
境を導くことが明らかである。

マツチｄｓＲＮＡが適当であり、そして投与量はＬａｍ
ｐａｏｎにより調製されたｐｏｌｙ　Ｉ　Ｉｐｏｌｙ　
Ｃ、ｄｓＲＮへのような不都合な反応を回避る、のに十
分低いであろう、一層高い投与量が適当な場合、ミスマ
ツチｄｓＲＮへを使用る、必要性が一層高いであろう。

好ましくは、ｄｓＲＮ＾は、例えば増強された生物利用
性（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ）により、副作用
をもたらすことなく２’−５′Ａオリゴマーの生産を活
性化る、ように適合された構造により、又は投与後の比
較的短い半減期により、宿主の毒性を伴わないでＲＮａ
ｓｅ　Ｌ阻害剤を排除る、ために２’−５′Ａオリゴマ
ーの必然的に上昇した細胞内濃度をもたらすようなもの
である。

ミスマツチ二本鎖ＲＮＡは既知の巨大分子ＲＮ八であり
（米国特許Ｎｕ　４，０２４，２２２、及び米国特許ｌ
ｂ４．１３０．６４１）、ここでは二重螺旋の不安定性
が塩基対合を妨げる。ミスマツチｄｓＲＮ＾は、インタ
ーフェロン誘導それ自体とは無関係の機構を示すそのイ
ンターフェロン誘導特性についてよく知られている（例
えば、１９８３年８月１５日に出願された“Ａｎｔｉｐ
ｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ　　Ａｃｔｉｏｎ　　ｏｆ　
　ｄｓ　　ＲＮＡ５　　ｏｎ　　　・Ｔｕｍｏｒ　Ｃｅ
１ｌｓ″と題る、ヨーロッパ特許出願隘８３３０５４２
６．５を参照のこと）。

ミスマツチ二本鎖ＲＮＡの典型的な療法用態様はポリリ
ボイノシン酸及びポリリボシチジル酸／ウリジル酸の複
合により形成される合成ｄｓＲＮ＾、例えばｒＬ・、（
Ｃ１１，［１又はＧ）、ｌ（式中、８は４〜２９の値を
有る、）、例えばＦＩＲ・、（Ｃ１□Ｕ）、、〔アンプ
リゲン（Ａｓ＋ｐｌｉｇｅｎ）と称る、；米国、ロック
ビル、メリーランド、ＨＥＭリサーチ社の商標〕である
。アンプリゲンと類似の挙動を示す多くのミスマフチｄ
ｓＲＮ＾ポリマーが研究されている。天然及び／又は合
成ｄｓＲＮへの他の形態に対る、ミスマツチｄｓＲＮ＾
の中心的な療法上の利点は、動物及びヒトにおけるそれ
らの低い毒性である。例えばＬａ＋＊ｐｓｏｎ等は米国
特許Ｎａ　３，６６６．６４６において、種々のインタ
ーフェロン関連効果を開始る、ことができるｄｓＲＮへ
の初期の複合体を記載しているがζしかしこれらの化合
物の毒性は癌及び関連疾患の治療におけるあらゆる臨床
的有用性を排除した。

本発明者は、その最近の教科書において、種々のインタ
ーフェロン、インターフェロンインデューサー及びｄｓ
ＲＮＡの既知の活性について十分に記載している（例え
ば、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ　ａｎｄ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒ
ｏｎ紅肌旦中の本発明者の章、３０１〜３１９頁、Ｒ，
Ｍ。

０ｔｔｅｎｂｒｉｔｅ及びＧ、Ｂ、Ｂｕｔｌｅｒｌｉ集
、Ｍａｒｃｅｌｌ　Ｄｅｋｋｅｒ。

ニューヨーク、１９８４を参照のこと；さらにＨａｎｄ
ｂｏｏｋｏｒ　Ｅｘ　ｅｒｉｍｅｎｔａｌ　Ｐｈａｒｍ
ａｃｏｌｏ　　ｏｎ　Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ＋Ｐ、Ｅ
、Ｃｏａ＋ｅ及びＷ、Ａ、Ｃａｒｔｅｒｍ、１９８４．
　Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、ニューヨーク及び
ハイデルベルグ、発行、５３５〜５５５はｄｓＲＮＡの
既知の性質を十分に記載している。

ミスマツチｄｓＲＮＡ　、例えばアンプリゲンはある種
のヒト腫瘍、特に腎臓癌に対して療法的活性を有る、こ
とが知られている。現在単に“インターフェロンインデ
ューサー”であると考えられているが、本件発明者がそ
の発明者であるヨーロッパ特許出願８１Ｂ３３０５４２
６．５に十分に記載されているように、ｄｓＲＮＡはイ
ンターフェロンそれ自体に対して完全に耐性であるある
種のヒト腫瘍に対して活性である。

他の特許出ｌ１ｌｌｌ（”Ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ
　Ｖｉｒｕｓ−ＲｅｌａｔｅｄＥｖｅｎｔｓ　ｂｙ　Ｄ
ｏｕｂｌｅ−３ｔｒａｎｄｅｄ　ＲＮＡ５’　と題る、
１９８６年８月２６日に出願されたヨーロッパ特許出願
陽８６３０６５８２．７を参照のこと）において、本発
明者は、プロトタイプｄｓＲＮＡ　としてアンブリゲン
を使用る、ｄｓＲＮＡによるヒト細胞培養におけるＨＩ
Ｖの阻害を記載している。

“ミスマツチ（ｍｉｓｓａＬｃｈｅｄ）ｄｓＲＮＡ″は
、相対る、鎖間の水素結合（塩基重層）が相対的に無傷
である、すなわち２９個の連続る、塩基残基当り平均１
個未満の塩基対により中断されているものを意味る、。

従って“ミスマツチｄｓＲＮＡ”はそのように理解され
るべきである。

ｄｓＲＮＡはポリイノシテート及びポリシチジレートの
複合体であってこれらの塩基５個中１個〜３０個中１個
のウラシル塩基又はグアニジン塩基を含有る、もの（ｐ
ｏｌｙ　Ｉ−ｐｏｌｙ（Ｃ４−２９ｘ＞Ｕ又はＣ）であ
ることができる。ミスマツチｄｓＲＮＡはｐｏｌｙ　１
・ｐｏｌｙ　Ｃ、Ｕ）であることができ、ここでＣとＵ
の比率は約１３：１であり、ｐｏｌｙ　１及びｐｏｌｙ
ｃ　、　Ｕの沈降定数はいずれも９未満であり、そして
相互の２ユニット以内であり、これは好ましくは約０．
５〜７．５である。

ｄｓＲＮＡは一匁式、Ｉ、１・（ＣＢ−＋ｉＵ）、、で
あることができる、　　ｄｓＲＮＡの他の適当な例を下
に検討る、。

この発明の組成物はｄｓＲＮＡ及びＨＩＶ阻害補助剤、
例えばインターフェロン、又はインターロイキン、例え
ばＩＬ−２を含んで成ることができる。

第２表に種々の組合わせが示されている。ＲＮａｓｅＬ
欠損、又は他の同様のｄｓＲＮＡ依存性欠損が、Ｔ。

ＮＫ、ＬＡＫ、Ｂ及び単球細胞を包含る、、ＡＩＤＳ患
者の種々の細胞において見られるであろう（第２表を参
照のこと）。

この明細書において説明る、ように、ｄｓＲＮＡは幾つ
かのＨＩＶ病変を処置しそして修正る、ための“基本的
な生物学的物質”であると考えることができる０次の第
２表において、７種類の特定のＨＩＶ欠損又は病変が、
ｄｓＲＮＡと他の１又は複数の療法剤との対応る、可能
性ある療法剤組合わせと共に記載されている。

以下で、白 芽じし聚 幾つかのＡＩＤＳ病変を修正る、ための“基本的生物活
的物質２としてのｄｓＲＮＡ １、急性ＨＩＶ感染　　　ｄｓＲＮＡ／ＡＺＴ２、慢性
ＨＩＶ感染　　　ｄｓＲＮ＾／リバビリンｄｓＲＮＡ／
　ＩＦＮ　−ｒ ３、Ｔ、Ｎに又は冒に欠損　ｄｓＲＮＡ／　ＩＬ　−２
ｄｓＲＮＡ　／レチノイド類 ｄｓＲＮＡ／胸腺ペプチド ４、　　Ｂ細胞欠損　　　　　ｄｓＲＮＡ／　ＩＦＮ　
−ｒ５、　単球欠損　　　　　　ｄｓＲＮＡ／　ＩＦＮ
　−ｒ６、　カボシ肉腫　　　　　ｄｓＲＮＡ／　ＩＦ
Ｎ　−αｄｓＲＮＡ／　ＩＦＮ　−Ｔ ｄｓＲＮＡ／ＩＬ　−２ ？、　ＣＮＳ病変　　　　　ｄｓＲＮＡ／リバビリンｄ
ｓＲＮ＾／＾ＺＴ 本発明において使用る、ために好ましいミスマツチｄｓ
ＲＮ＾はｐｏｌｙ（Ｃ，１，Ｕ）及びｐｏｌｙ（Ｃ，、
Ｇ）（式中、ｎは４〜３７の値の整数である）から選ば
れたコポリヌクレオチドを基礎とる、ものであり、そし
てポリリボシチジル酸ト（、Ｃ，１）ＩＮにそって不対
塩基（ウラシル又はグアニン）を導入る、ためにｒＴｎ
・、、Ｃ７を変更る、ことによって形成された、ポリリ
ボイノシン酸とポリリボシチジル酸との複合体のミスマ
ツチ類似体である。あるいはｄｓＲＮＡは、ポリリボイ
ノシン酸（ｒ　Ｉ　ｎ）のリボシル主鎖を変形る、こと
により、例えば２′−〇−メチルリボシル残基を含有せ
しめることにより、ｐｏｌｙ（１）　・ｐｏｌｙ（Ｃ）
ｄｓＲＮＡから誘導る、ことができる。ｒａｎ・、、Ｃ
ｆｉのこれらのミスマツチ類似体〔その内の好ましい１
つは一般式ＰＩＮ・（Ｃ１□、Ｕ）、、で表わされる〕
はＣａｒｔｅｒ及びＴｓ’ｏ、米国特許隘４．１３０，
６４１及びｌｌｈ　４，０２４，２２２に記載されてい
る；そこに記載されているｄｓＲＮＡは一般にこの発明
に従う使用のために適切である。

この発明において使用る、ためのミスマツチｄｓＲＮＡ
の特定の例には、 ｐｏｌｙ（１）　・ｐｏｌｙ（Ｃｎ−１１）ｐｏｌｙ（
１）　・ｐｏｌｙ（Ｃｙ・Ｕ）ｐｏｌｙ（１）　・ｐｏ
ＩＶ（Ｃ＋ｘ・”）ｐｏｌｙｍ　・ｐｏｌｙ（Ｃｚｘ・
［１）ｐｏｌｙ（１）　・ｐｏｌｙ（ＣｚａｌＧ）ｐｏ
ｌｙ（Ｉ）　・ｐｏｌｙ（Ｃｚｘ・Ｇ）及びｐｏｌｙ（
Ｉ）　・ｐｏｌｙ（Ｃｍ）２３　Ｇ　＞Ｐが含まれる。

この発明の医薬組成物は、活性成分としての、ｄｓＲＮ
ＡミスマフチｄｓＲＮＡ　、場合によってはさらにイン
ターフェロン又は他の免疫調節剤（リンホカイン）を、
医薬キャリヤー又は稀釈剤と共に含んで成る。この発明
の医薬組成物は適当な医薬担体中非経口投与のために調
製されたものを包含る、。

すなわち、例えば、非経口溶液、懸濁液及び分散剤を、
必要に応じて既知の医薬技法に従って、無菌水又はパイ
ロジエンフリー水を溶削又は稀釈剤として使用して、場
合によってはさらに生理的に許容される塩を用いて製造
る、ことができる。

ミスマツチｄｓＲＮＡの投与量は好ましくは、注入点の
遠位で投与直後の全身血液循環中で０．０１ｘ／−〜１
０００躍／−のｄｓＲＮＡのピーク血中濃度を達成る、
のに十分な量である。同時的に投与される場合、インタ
ーフェロンは好ましくは、体液中０．１〜１００，００
００１υ／ａＺのレベルを達成る、量で含有される。一
般に、投与すべき量は状態の深刻さ、特に利用可能な細
胞内生物活性ｄｓＲＮＡ　％　２　’　　５　’オリゴ
Ａ分子又は２’−５′Ａシンセターゼ、及びＲＮａｓｅ
　Ｌの阻害の相対レベルに依存る、。この明細書で使用
る、場合、体液なる語は、生物体内を循環しそしてＭｉ
織を浸たしている血清、ビタミン等の溶液である。患者
の推定される体液容積は言うまでもなく医者に知られて
おり、日常的に入手可能なチャート及び表として公表さ
れている。

平均体液容量は約５〜６１である。

この発明を次に、ｄｓＲＮ＾を用いる例によって説明る
、。

ミスマツチｄｓＲＮＡ　、例えばアンプリゲンは水溶液
中に形成され、種々のヒトの細胞に添加された場合に液
体（細胞を浸す）＠１当り０．０１〜２５０イの過渡的
濃度が得られた。すべてがＨＩＶによる感染のための潜
在的標的である種々の異る細胞が使用された。

ＨＩＶにより急性的に又は慢性的に感染され得るヒトリ
ンパ系細胞であるＨ−９細胞を用いる典型的な実験を下
に記載る、。細胞を標準的条件下（例えばＭＨｓｕｙａ
等、５ｃｉｅｎｃｅ、　Ｖｏ　ｌ　２２６＋　１７２頁
、１９８４を参照のこと）で増殖せしめ、そしてＨＩＶ
酵素又はＨＩＶ特異的蛋白質の存在に関して数週間にわ
たって分析した。ウィルスと同時に、又はその前もしく
は後に、種々の濃度のアンプリゲンを模倣的な種々の臨
床状態に加えた。最も重要なことには、細胞数、形態等
の注意深い分析が行われ、Ｍｉｔｓｕｙａ等により他の
阻害剤を用いて記載されているように、リンパ系細胞塩
殖に対る、種々の非特異的効果を有る、か不かが決定さ
れた。実験中の異る時点において細胞が単離され、そし
てＬｅｅ等（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｖｏ　ｌ　
２４　、　５５１頁、　１９８５）により記載された方
法を用いて２’−５’−ＡオリゴマーのＨＰＬＣ分析に
より検討された。ある種のＡオリゴマーは、天然に存在
る、場合、細胞にウィルス耐性を付与る、こと知られて
いるが、しかし試験化合物がこの自然の反応を選択的に
正確に開始し、そしてそれ故に一般にウィルスに対る、
、そして特にＨＩ　Ｖに対る、天然防御機構を強化る、
ことは記載されておらず、又は知られていない。

４　　　０　　　　５０　　　　１．４１２　　　２４
．２８７９　　　７　　　　９０　　　１４４．６３２
　１，２４３．３００裏駿旦 ７　　　０　　　　０　　　　　４００　　　１．２０
０１０　　　０　　　　５　　　　　８００　　　２．
２６１１４　　　２　　　　＞８０　　　　１．１００
　　１１２．２４７１７　　　５　　　　＞９０　　　
　１．２００　１，５６０，０００実験Ａは標的細胞よ
り２５倍多くのウィルス・（感染ユニットとして表現る
、）を用いて行われ、実験Ｂはウィルスより１０倍多く
の標的細胞（Ｈ−９細胞と称る、）を用いて行われた。

陽性細胞の％はイムノフルオレッセンスにより決定され
る場合ｐ２４及びＩ）１９と称る、ＨＩＶマーカーを発
現る、細胞に関し、逆転写酵素はポリｒＡ／ｄＴと称る
、標準的鋳型により細胞上清中で測定されるウィルス酵
素に関る、。同時に細胞の計数を行った。

試験したすべてのアンブリゲン濃度（３００ｇ／−まで
）において細胞は正常な増殖速度で増加した。

実験Ａ及びＢにおいて、アンプリゲン（５０ａｇ／−）
を１日目に加えた。　ＨＰＬＣ分析（実験Ａ又はＢのい
ずれにおいても３〜７日まで）は２’５’−オリゴマー
プロフィールの特異的シフトを示し、高い方の分子量（
抗ウイルス性の低い）オリゴマーが、ＨＩＶの選択的且
強力な抑制に寄与る、低い方の分子量（抗ウィルス活性
が最も高い）のオリゴマーにシフトした。ＲＮａｓｅ　
Ｌの同時的測定は、ＲＮａｓｅ　Ｌの生物活性が逐次的
なｄｓＲＮ＾処理により回復されることを示した。

類似の実験が、ＨＴＶのための潜在的たインビボ標的で
ある種々の他のヒト細胞を用いて行われた。これらの実
験は、ＮＫ（ナチュラル・キラー）１１１胞、Ｔヘルパ
ー細胞、Ｔサプレッサー細胞及び単核細胞等と機能的に
決定される他の細胞を包含した。すべての場合に、種々
の濃度のミスマツチｄｓＲＮＡが正常細胞の増殖及び成
熟になんらの影響を与えることな（ＨＩＶの増殖を選択
的に捕捉しそして／又は防止した（第２表も参照のこと
）。

細胞生物学の分野の当業者によく知られているように、
培養中のＴ細胞の増殖は！Ｌ−２ファクターの標準的添
加によって維持された。ミスマツチｄｓＲＮＡによるＨ
ＩＶの選択的抑制は、ＨＰＬＣ分析により決定される２
′５′−オリゴマープロフィールにおいて、特異的シフ
ト又は増強を常に伴った。

関連る、生化学的経路において、危険な状態におかれた
個体（活性なＨＩＶ感染を伴うか又は伴わない）中の生
化学的病変の下流又は遠位で機能し、従って正常な抗ウ
イルス応答能力を回復る、。

ｄｓＲＮＡは非常に効果的に細胞によって取り込まれ、
そしてそれ故に無傷のＩＦＮリセブターを必要としない
、さらに、ミスマツチｄｓＲＮ＾はまた、細胞内取り込
み及び分散を促進る、ために生物活性断片として使用さ
れる。そして、ｄｓＲＮＡは血液−脳障壁を容易に越え
る能力を有る、。この障壁はある個体におけるＨＩＶの
残留貯金となり得る。

典型的には、この発明において使用る、ためのｄｓＲＮ
Ａは米国特許！ｍ　４，０２４，２２２、及びｌｋ４，
１３０．６４１に例示されているような分子サイズのも
のであるが、親分子の断片として得られる非常に分子量
の小さいｄｓＲＮＡも有効である。これらは例えば、前
に記載した典型的なｄｓＲＮＡ材料のサイズの２分の１
〜１０分の１であることができる。

ｄｓＲＮＡは２’−５′Ａポリメラーゼを活性化し、そ
してインターフェロンのみを用いて可能であるのに比べ
て、活性な抗ウイルスオリゴヌクレオチの５００倍の合
成を促進る、（ｄｓＲＮＡは１．６ＸＩＯ”細胞中で２
５０ｎｗｏ　ｌの２’−５’オリゴＡを導き、他方２０
０ユニット／−のＩＦＮはわずか０．５ｎｍｏ　１の２
’−５’オリゴＡを導＜）。

ＡＩＤＳに発病る、危険があるか又はＡＩＤＳに進行中
の個体のＮＫ細胞において類似の現象が本発明者により
観察された。ＡＩＤＳ／＾ＲＣ患者におけるナチュラル
・キラー細胞のレベルに関して同様な状況が存在る、。

しかしながらＮＫ！１１１１の機構についてはほとんど
知られていない。＾ｒＤｓ／ＡＲＣ患者及び“危険状態
の群の構成員はしばしば弱いイムノサーベイランス容１
１（ｉｓ＋ｍｕｎｏｓｕｒｖｅｉｌａｎｃｅ　ｃｏｐａ
ｃｉｔｙ）（機能的ＮＫ及びＴリンパ球）を有し、そし
てインターフェロンによって再活性化され得ない。サン
プリゲンは病的ブロックの遠位で機能し、そして細胞毒
性リンパ球を活性化る、ことができる。

【図面の簡単な説明】

第１図は７つのトランク及び各トラック中のバンド又は
ゾーンを示すポリアクリルアミドゲル電気泳動の写真で
ある。 第２図は２’−５’オリゴアデニレート／ＲＮａｓｅ　
Ｌ経口を示す・　　　　　　　　以下に、白閏面の浄書
（１容（；賓更なり、） ｆｌＧ、１ □ 手続補正書（方式） 昭和６３年６月２２日 特許庁長官　吉　１）文　毅　殿 １、事件の表示 昭和６３年特許願第０４７６５６号 ２、発明の名称 ＨＩＶの測定方法 ３、補正をる、者 事件との関係　　　特許出願人 名称　エイチイーエム　リサーチ。 インコーホレイティド ４、代理人 住所　〒１０５東京都港区虎ノ門−丁目８番１０号６、
補正の対象 （１）　　願書の「出願人の代表者」の欄（２）委　任
　状 （３）　　　明　　　細　　　書 （４）図　　面 ７、補正の内容 （１）　＋２１　　別紙の通り （３）明細書の浄書（内容に変更なし）（４）図面の浄
書（内容に変更なし） ８、添付書類の目録 （１１訂正願書　　　　　１通

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ＨＩＶウィルス又は実質的に同様の臨床状態を惹起
   する他のウィルスの存在を決定する方法であって、活性
   化されたＲＮａｓｅ　Ｌ，ＨＩＶの存在についてのマー
   カー、又は動物の細胞抽出物中のＨＩＶにより指令され
   る遺伝情報の存在をＲＮａｓｅ基質を用いて決定するこ
   とを特徴とする方法。 ２、ヒトの生物学的流体又は細胞中の隠れたヒト免疫不
   全ウィルスの存在を決定するための請求項１に記載の方
   法であって、該生物学的流体又は細胞中の活性化された
   ＲＮａｓｅ　Ｌの存在を決定することを特徴とする方法
   。 ３、前記生物学的流体が血液又はその画分である、請求
   項２に記載の方法。 ４、前記細胞が皮膚移植片又は移植可能なヒトの器官で
   ある、請求項２に記載の方法。 ５、動物におけるＨＩＶの突出した頻度を決定するため
   の診断的試験法であって、動物組織の抽出物を試験し、
   そして請求項１に従って活性化されたＲＮａｓｅ　Ｌ分
   子の存在又は不存在を決定し、不存在がＨＩＶの突出し
   た存在をポジティブに示す、ことを特徴とする方法。 ６、ＨＩＶ又は類似の生化学的及び／又は臨床的状態を
   惹起するウィルスからの回復の進行をモニターする方法
   であって、（１）患者の細胞の抽出物中の活性化された
   ＲＮａｓｅ　Ｌの存在又は不存在を決定し、活性化され
   たＲＮａｓｅ　Ｌが検出されなければ、（２）ＨＩＶで
   誘導された状態、あるいは類似の生化学的及び／又は臨
   床的状態を惹起する他のウィルスのＲＮａｓｅ　Ｌ阻害
   物質の量を減少せしめるのに十分なｄｓＲＮＡの量を決
   定し、そして（３）患者の臨床的症状が安定化又は改善
   されるまでｄｓＲＮＡの投与を続ける、段階を含んで成
   る方法。 ７、患者の細胞抽出物中の２８Ｓ　ｒＲＮＡ及び１８Ｓ
   　ｒＲＮＡ並びに生物活性２′−５′Ａオリゴマーから
   の所定の開裂生成物の存在を測定することによりＲＮａ
   ｓｅ　Ｌの存在を決定する、請求項１〜６のいずれか１
   項に記載の方法。 ８、ｄｓＲＮＡがミスマッチｄｓＲＮＡである、請求項
   ６に記載の方法。 ９、前記ｄｓＲＮＡがポリイノシネートとポリシチジレ
   ートとの複合体であって５個中１個〜３０個中１個のウ
   ラシル塩基又はグアニジン塩基を含有しているものであ
   り、そして好ましくは一般式＿ｒＩ＿ｎ・Ｃ＿１＿２Ｕ
   ）＿ｎを有するものである請求項８に記載の方法。 １０、ＨＩＶに対する免疫を付与する方法であって、Ｒ
   Ｎａｓｅ　ＬのＨＩＶ−特異的阻害物質又は２′−５′
   Ａ／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路中の生化学的中間体のウィルス
   に向けられた阻害剤を抗原として動物に投与することを
   特徴とする方法。 １１、ＨＩＶ感染の治療方法であって、ＨＩＶに感染さ
   れた動物に、ＲＮａｓｅ　ＬのＡＩＤ−特異的阻害物質
   又は２′−５′Ａ／ＲＮａｓｅ　Ｌ経路中の生化学的中
   間体のウィルスに向けられた阻害物質を除去する物質の
   有効量を投与し、そして前記阻害物質が実質的に変化す
   るまで前記投与を経続することを特徴とする方法。 １２、ｄｓＲＮＡ、好ましくはミスマッチｄｓＲＮＡを
   投与する、請求項２に記載の方法。