JPS6332330B2 - - Google Patents
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- JPS6332330B2 JPS6332330B2 JP59274895A JP27489584A JPS6332330B2 JP S6332330 B2 JPS6332330 B2 JP S6332330B2 JP 59274895 A JP59274895 A JP 59274895A JP 27489584 A JP27489584 A JP 27489584A JP S6332330 B2 JPS6332330 B2 JP S6332330B2
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Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
技術分野
本発明は、新規な医用担体に関するものであ
る。詳しく述べると、安定性の極めて優れた高分
子リポソームよりなる医用担体に関するものであ
る。 先行技術 現在、医薬物質、酵素等を微小なカプセルに封
入して医薬品として提供する試みが種々なされて
おり、ヘモグロビンを封入したマイクロカプセル
は人工赤血球となる。 このようなマイクロカプセル化の初期の方法
は、乳化法による高分子化合物のカプセルや界面
重縮合反応による重合体（ポリアミド）の生成を
伴なつたカプセル化である。しかしながら、これ
らの方法では、カプセル化材料である重合体の著
しい毒性やその合成過程で必要な有機溶媒がカプ
セル中に残存することによる毒性、さらにカプセ
ルの粒径が大きい（数μｍ〜1000μｍ）ために、
血栓等の障害を引き起しやすいといつた、医薬品
としての使用には致命的な問題があつた。 ところで、医薬物質、酵素、ヘモグロビン等を
マイクロカプセルに封入する主たる目的は、生体
内で不安定な医薬物質、酵素、ヘモグロビン等の
活性を長時間保持させ、その効果を長時間持続さ
せることにある。したがつて、生体に適用させる
ことを前提とした、あるいは医薬品としてのマイ
クロカプセル材料に要求される条件としては、生
体に対する毒性が低いこと、カプセル粒径を微小
化し得ること、生体内においてカプセルが十分安
定であること等である。 これらの条件をかなりの程度まで満足させるも
のとして生体膜の主成分である各種のリン脂質が
水中に形成する微小な球状の集合体である、いわ
ゆるリポソームをマイクロカプセルとして利用す
ることが注目を集めている。 しかしながら、天然のリン脂質をそのまま用い
たリポソームは、寿命が短かく、特に生体細胞と
の相互作用において不安定であり、このため細胞
の認識のモデルや細胞間の相互作用のモデルに利
用したり、薬物をリポソーム内に保持させて担体
として用いるドラツグデリバリー（drug
delivery）の分野においては安定なリポソームを
見出すための研究が数多くなされている。現在、
その最も有効な手段としてはリポソームの高分子
化がある。 しかして、リポソームの高分子化の目的は、脂
質分子を共有結合させることによる二分子膜、ひ
いては小胞体構造の安定化にある。その手法は、
重合能を持つ官能基を脂質分子内に組み込み、モ
ノマーとしてのリポソームを調製し、その後にリ
ポソームの膜中で脂質を重合させるという方法が
主流である。その代表例としては、例えばJ.Am.
Chem.Soc.、106、1627−1633（1984）等に記載さ
れているように、まず不飽和脂肪酸を合成し、こ
れとリン脂質の加水分解物とのエステル化反応に
より、リン脂質に重合可能な反応基を導入するも
のである。しかしながら、このような方法によれ
ば、不飽和脂肪酸の合成に非常に手数を要し、ま
た合成後の精製分離も操作が複雑であり、しかも
最終生成物である重合性のリン脂質の収率が文献
値では数パーセントであり、また本発明者らによ
る追試結果では該文献値の10分の１程度の収率し
か得られなかつた。 また、ヘモグロビンをマイクロカプセル化した
人工赤血球の材料として、リポソームを利用しよ
うとする試みがなされており、天然のリン脂質の
みからなるリポソームで問題となる血漿中でのヘ
モグロビンの漏れ出しが、重合性リン脂質を用い
た高分子リポソームを利用することによつて有効
に抑制され得るものと期待される。 しかしながら、高分子リポソームを人工血液用
材料として応用するには、いくつかの問題点があ
る。まず、第１に、重合性リン脂質が極めて綿密
な分子設計に基づいて純有機化学的に多数の反応
段階経て合成されるため、実用的な面での大量合
成が困難であるばかりでなく、極めて高価な点で
ある。第２に、高分子リポソームを得るための重
合方法である。すなわち、一般に重合性リン脂質
の重合反応は、ラジカル重合開始剤を使用して、
あるいは紫外線を照射して行なわれる。しかしな
がら、開始剤を用いる方法は、通常加熱を必要と
し、またこれらの開始剤がリポソーム中に残存す
るために生体を対象とする使用目的には好ましく
ない。一方、紫外線照射法では、従来の重合性リ
ン脂質は重合性が低いので、多量照射する必要が
あり、この場合には内部のヘモグロビンが変質し
やすいという問題があつた。 発明の目的 したがつて、本発明の目的は、新規な医用担体
を提供することにある。本発明の他の目的は、安
定性の極めて優れた高分子リポソーム形成脂質よ
りなる医用担体を提供することにある。本発明の
さらに他の目的は、担持物質の漏出の小さい医用
担体を提供することにある。本発明の別の目的
は、ヘモグロビン等のマイクロカプセル化に有用
な医用担体を提供することにある。 これらの諸目的は、つぎの一般式で表わされ
るリポソーム形成脂質を主構成成分とするリポソ
ームを紫外線または放射線で照射処理してなる医
用担体により達成される。 （ただし、Ｒは（−CH2）−2N（CH3）3、（−CH2）−
2NH3または−CH2−CH（NH3）−COOで
ある。） また、本発明は、Ｒが（−CH2）−2N（CH3）3で
ある医用担体である。さらに、本発明は、照射処
理が紫外線で行なわれてなる医用担体である。ま
た、本発明はヘモグロビン担持用である医用担体
である。 発明の具体的構成 本発明による医用担体を構成するリポソーム形
成脂質は、エレオステアリン酸を含有する桐油脂
肪酸をリン脂質の加水分解物でエステル化するこ
とにより得られる。 本発明で使用されるリン脂質とは複合脂質の１
種であり、アルコール類の脂肪酸およびリン酸が
結合した生体成分であり、化学構造上、比較的長
い脂肪族炭化水素からなる非極性部と、リン酸や
塩基等の極性部との二つの部分から成り立つてい
る。このリン脂質を水中に分散させると、２分子
膜構造を持つ小水胞体（ベシクル）、すなわちリ
ポソームが形成される。このようなリン脂質とし
ては、例えば卵黄レシチン（ホスフアチジルコリ
ン）、ケフアリン、ホスフアチジルセリン等があ
り、特に卵黄レシチンが好ましい。 しかして、ホスフアチジルコリンは、つぎの一
般式で表わされる。 このようなリン脂質から形成されるリポソーム
は寿命が短かく、実用面で問題がある。本発明で
は、リン脂質構成部分のうち、脂肪酸部分（R1
およびR2）を、天然の不飽和脂肪酸であるエレ
オステアリン酸で置き換えて重合可能な反応基を
導入して重合性のリン脂質を合成するものであ
る。 本発明で使用されるエレオステアリン酸は、つ
ぎの化学式で表わされる９、11、13位に共役二
重結合を有する不飽和脂肪酸であり、桐油中にグ
リセリドとして存在し、混合脂肪酸の80〜95重量
％を占めている。この桐油を加水分解して得られ
る桐油脂肪酸中には、エレオステアリン酸が60重
量％以上、好ましくは80重量％以上含有され、残
りは飽和酸、オレイン酸、リノール酸等が含まれ
ている。この桐油脂肪酸はそのまま天然不飽和脂
肪酸として用いてもよく、また必要によりカラム
クロマトグラフイ等で精製してエレオステアリン
酸のみを取出して用いてもよい。 CH3（CH2）3CH＝CHCH＝CHCH ＝CH（CH2）7COOH （） しかして、この桐油脂肪酸は、通常酸無水物の
形でエステル化に供される。桐油脂肪酸の使用量
は、リン脂質100重量部当り200〜400重量部、好
ましくは300〜370重量部である。 一方、前記リン脂質は加水分解物として使用さ
れ、特にその金属錯体、例えばカドミウム等の金
属の錯体として使用される。 エステル化反応は、つぎのようにして行なわれ
る。リン脂質の加水分解物ないしその金属錯体を
クロロホルム、四塩化炭素、塩化メチレン等の媒
体中に加えて撹拌下に懸濁させ、この懸濁液中に
前記桐油脂肪酸無水物および触媒を加え、反応系
内をアルゴン、窒素、ヘリウム等の不活性ガスで
置換したのち、15〜25℃、好ましくは18〜22℃の
温度で暗所で24〜72時間、好ましくは40〜72時間
反応させる。このとき、白色不溶物が析出するの
で、濾去し、媒体を室温で減圧留去後、クロロホ
ルム、メタノール、水の混合溶媒（容量比＝４／
５／１）に再溶解してイオン交換樹脂と接触さ
せ、ついで洗い落とす。溶媒を減圧留去後、残渣
を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラ
ム等によりクロロホルム、メタノール混合溶媒で
精製する。触媒としては、４−ジメチルアミノピ
リジン等があり、リン脂質の加水分解物100重量
部当り45〜90重量部、好ましくは68〜84重量部使
用される。 得られるリポソーム形成脂質は、使用するリン
脂質によつて異なり、例えば卵黄レシチンを使用
する場合には、化学式（）で示されるエレオス
テアリン酸ホスフアチジルコリン、またケフアリ
ンやホスフアチジルヒリン等を使用した場合には
これらに対応するリポソーム形成脂質が得られ
る。 このようにして得られるリポソーム形成脂質
は、クロロホルム、塩化メチレン、エーテル、メ
タノール等の溶媒に溶解したのち、得られる脂質
溶液を丸底の容器に入れて該溶媒を完全に蒸発さ
せて該底面に脂質膜を形成させる。これにリン酸
緩衝液またはヘペスバツフア（Hepes buffer）
を添加して、ミキサーで振とうした後、アルゴ
ン、窒素、ヘリウム等の不活性ガス雰囲気下に超
音波処理することによりモノマーリポソームが得
られる。 このようにして得られるモノマーリポソーム
は、紫外線あるいはガンマ線、電子線等の放射
線、特に紫外線を照射することにより２個の脂肪
族基における３個の共役二重結合が容易に重合し
て高分子リポソームである本発明の医用担体が形
成される。このような照射処理によりモノマーリ
ポソームの高分子化により医用担体の安定性は増
大する。この医用担体には医薬物質、酵素、ヘモ
グロビン等を担持させることができる。 しかして、被担持物質が親水性である場合に
は、高分子リポソーム内に封入されて担持され、
一方、疎水性である場合には、高分子リポソーム
の脂肪族部分に担持される。 担持方法としては、種々あるが、重合性のリポ
ソーム形成脂質を前記被担持物質と混合したの
ち、超音波処理することによりモノマーリポソー
ムの懸濁液が形成され、これを遠心分離すること
によりモノマーリポソームに担持させることがで
きる。このような担持モノマーリポソームを紫外
線、放射線等により照射処理することにより担持
された高分子リポソームが得られる。 照射条件は、線源の種類によつて異なるが、例
えば紫外線の場合には、モノマーリポソーム懸濁
液を紫外線を透過し得る容器、例えば石英ガラス
製容器内に入れ、容器内を脱気あるいはアルゴ
ン、窒素、ヘリウム等の不活性ガス雰囲気に置換
後、水銀ランプ、キセノンランプ等の紫外線を放
射し得る光源を用いて、照射距離５〜20cm、好ま
しくは10〜15cmとして、サンプルを水冷あるいは
空冷しつつ、15分〜16時間好ましくは２〜12時間
紫外線を照射する。 つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明する。 重合性のリポソーム形成脂質の製造例 エレオステアリン酸無水物の製造 エレオステアリン酸80ｇに相当する桐油脂肪酸
を脱水蒸留直後の四塩化炭素600mlに溶解した、
この溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド32.6
ｇを加え、容器内をアルゴンガスで置換して密封
し、そのまま25℃で24時間放置（時々撹拌）し
た。不溶成分を濾別し、蒸留乾固した。これをジ
クロロメタンを展開溶媒としてシリカゲルで精製
したところ、29％の収率でエレオステアリン酸無
水物が得られた。 卵黄レシチン（ホスフアチジルコリン） 加水分解物カドミウム錯体の製造 卵黄レシチン（キユーピーPL−100）45ｇを脱
水エーテル450mlに溶解し、不溶物を濾別後、10
％濃度のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
のメタノール溶液50mlを加え、25℃の温度で激し
く振とうした。反応の進行に伴なつて溶液は白濁
し、次第に層分離してくるので、これを静置し、
褐色油状物を充分沈澱させ、上澄をデカンテーシ
ヨンした。褐色油状物を脱水エーテル100mlで３
回洗浄したのち、脱水メタノール125mlに加熱溶
解させ、沸点還流下に脱色剤１ｇを加えて熱時濾
過した。冷却後、濾液に脱水エーテル250mlを加
え、析出沈澱を残してデカンテーシヨンし、沈澱
を熱湯40mlに溶解させた。これに塩化カドミウム
５／２水和物８ｇを純水20mlに溶解したものを加え、
さらに活性炭2.5ｇおよび脱色剤２ｇを加えて沸
点還流後、濾紙および0.25μｍミリポアフイルタ
ーにて濾過した。これにエタノール100〜150mlを
加えたところ、着色沈澱が生成したので、これを
除去して白濁溶液のみを採取し、さらにエタノー
ル100〜150mlを加えて激しく振とうしたところ、
白色結晶が析出してきた。０〜５℃の温度で一夜
静置後、析出結晶を濾集し、脱水メタノール、脱
水エーテルおよび脱水ベンゼンの順で結晶を洗浄
し、さらに五酸化リン上で80℃の温度で終夜真空
乾燥したところ、56％の収率でホスフアチジルコ
リン加水分解物のカドミウム錯体が得られた。 エステル化による重合性脂質の製造 卵黄レシチン加水分解物カドミウム錯体6.74ｇ
に、蒸留直後のクロロホルム160mlを加えて撹拌
下に懸濁させた。これに桐油脂肪酸無水物24.70
ｇおよび触媒である４−ジメチルアミノピリジン
5.61ｇを加え、容器内をアルゴンガスで置換した
のち、密栓し、暗所で25℃の温度で60時間撹拌し
ながら反応させた。このとき、白色不溶物が析出
したので、これを濾別し、溶媒を室温下減圧留去
後、メタノール／クロロホルム／水＝５／４／１
混合溶媒100mlに再溶解させる。この溶液を再度
濾過して濾液をイオン交換樹脂AG−501−X8(D)
（Bio−Rad）カラムに注入し、先の混合溶媒500
mlで洗い落した。この溶媒を25℃の温度で減圧留
去したのち、クロロホルムに再溶解してシリカゲ
ルカラムによる精製を行なつたところ、30％の収
率でエレオステアリン酸ホスフアチジルコリンが
得られた。その赤外線吸収スペクトルは、第１図
のとおりであつた。 重合性リン脂質からのリポソームの製造 エレオステアリン酸ホスフアジルコリン200mg
をクロロホルム６mlに溶解した。このようにして
得られた脂質溶液をナス型フラスコに入れ、エバ
ポレータで溶媒を完全に除去してナス型フラスコ
底面に脂質膜を形成させた。これにヘペスバツフ
ア（Hepes buffer）（10ｍＭ、PH8.0）10mlを添加
してボルテツクスミキサーで振とうした後、チツ
プ型超音波照射機（40〜50W）でアルゴン気流下
に10分間処理した。処理液は白濁状態から透明分
散液となり、リポソームの形成が確認された。ま
た、走査型電子顕微鏡により直径0.2〜0.5μｍの
球状粒子が観察され、リポソームの形成が確認さ
れた。 実施例 １ リポソームの重合（医用担体の製造） 75Wの水銀ランプを光源として照射距離12cm、
サンプル濃度10mg／mlとし、脱気下において、水
温25℃の水浴中で紫外線を照射したところ、第２
図に示すようにトリエンに基づく272nｍにおけ
る吸光度が照射時間の経過とともに減少している
ことから重合が進行していることが確認された。 実施例 ２ ヘモグロビンカプセル化リポソームの調製 重合性のリポソーム形成脂質の製造例で得られ
たエレオステアリン酸ホスフアチジルコリン46mg
（58μmol）に、コレステロール22.4mg（58μmol）
を含有するクロロホルム溶液および桐油脂肪酸
2.4mg（8.5μmol）を含有するクロロホルム溶液を
加え、得られる溶液を50mlのナス型フラスコに入
れ、窒素を吹付けてフラスコ底面に薄膜を形成さ
せ、エバポレータで25℃の温度で１時間乾燥させ
たのち、25℃の温度で２時間半真空乾燥を行なつ
た。ついで、一酸化炭素化したヘモグロビンを10
％含有する生理食塩水溶液10mlを加え、ボルテツ
クスミキサーで振とうしたのち、バス型超音波照
射機（20W）でアルゴン気流下に30分処理した。
これにリン酸緩衝液（PH7.4）40mlを加え遠心分
離（10000rpm、10分間）後、沈澱にリン酸緩衝
液（PH7.4）11mlを加えた。 得られた懸濁液のうち3.5mlを分取し、一酸化
炭素置換後、暗所にて終夜撹拌したのち、
5000rpmで10分間遠心分離し、これにリン酸緩衝
液（PH7.4）を加えて３mlに定容したモノマーリ
ポソーム懸濁液を得た。このモノマーリポソーム
懸濁液0.4mlを牛血漿またはリン酸緩衝液3.6mlに
加えた。 また、得られた懸濁液のうち3.5mlを分取し、
一酸化炭素置換後、75Wの水銀ランプを光源とし
て照射距離12cmで25℃の温度で12時間撹拌下紫外
線照射を行ない、ついで5000rpmで10分間遠心分
離し、これにリン酸緩衝液（PH7.4）を加えて３
mlに定容したポリマーリポソーム懸濁液を得た。
このポリマーリポソーム懸濁液0.4mlを牛血漿ま
たはリン酸緩衝液3.6mlに加えた。 ヘモグロビン漏出試験 ヘモグロビンリポソームのモノマーおよびポリ
マーのそれぞれを牛血漿およびリン酸緩衝液中に
一定時間放置し、その懸濁液全体の可視スペクト
ル（ヘモグロビンに基づく400nｍ付近のピーク）
と、これを遠心分離（牛血漿；10000rpm、リン
酸緩衝液；5000rpm、10分）した上清のスペクト
ルを比較し、リポソームからのヘモグロビン漏出
を定量した。その結果は、第１表のとおりであつ
た。 比較例 つぎの化学式で示されるジエンホスフアチジル
コリン45mg（60μmol）、コレステロール23.2mg
（60μmol）および桐油脂肪酸2.4mg（8.5μmol）を
用いてリポソームの重合例２と同様な方法でヘモ
グロビンカプセル化リポソームを調製した。 得られたヘモグロビンリポソームのモノマーお
よびポリマーについて、リポソームの重合例２と
同様なヘモグロビン漏出試験を行なつたところ、
第２表のとおりであつた。
る。詳しく述べると、安定性の極めて優れた高分
子リポソームよりなる医用担体に関するものであ
る。 先行技術 現在、医薬物質、酵素等を微小なカプセルに封
入して医薬品として提供する試みが種々なされて
おり、ヘモグロビンを封入したマイクロカプセル
は人工赤血球となる。 このようなマイクロカプセル化の初期の方法
は、乳化法による高分子化合物のカプセルや界面
重縮合反応による重合体（ポリアミド）の生成を
伴なつたカプセル化である。しかしながら、これ
らの方法では、カプセル化材料である重合体の著
しい毒性やその合成過程で必要な有機溶媒がカプ
セル中に残存することによる毒性、さらにカプセ
ルの粒径が大きい（数μｍ〜1000μｍ）ために、
血栓等の障害を引き起しやすいといつた、医薬品
としての使用には致命的な問題があつた。 ところで、医薬物質、酵素、ヘモグロビン等を
マイクロカプセルに封入する主たる目的は、生体
内で不安定な医薬物質、酵素、ヘモグロビン等の
活性を長時間保持させ、その効果を長時間持続さ
せることにある。したがつて、生体に適用させる
ことを前提とした、あるいは医薬品としてのマイ
クロカプセル材料に要求される条件としては、生
体に対する毒性が低いこと、カプセル粒径を微小
化し得ること、生体内においてカプセルが十分安
定であること等である。 これらの条件をかなりの程度まで満足させるも
のとして生体膜の主成分である各種のリン脂質が
水中に形成する微小な球状の集合体である、いわ
ゆるリポソームをマイクロカプセルとして利用す
ることが注目を集めている。 しかしながら、天然のリン脂質をそのまま用い
たリポソームは、寿命が短かく、特に生体細胞と
の相互作用において不安定であり、このため細胞
の認識のモデルや細胞間の相互作用のモデルに利
用したり、薬物をリポソーム内に保持させて担体
として用いるドラツグデリバリー（drug
delivery）の分野においては安定なリポソームを
見出すための研究が数多くなされている。現在、
その最も有効な手段としてはリポソームの高分子
化がある。 しかして、リポソームの高分子化の目的は、脂
質分子を共有結合させることによる二分子膜、ひ
いては小胞体構造の安定化にある。その手法は、
重合能を持つ官能基を脂質分子内に組み込み、モ
ノマーとしてのリポソームを調製し、その後にリ
ポソームの膜中で脂質を重合させるという方法が
主流である。その代表例としては、例えばJ.Am.
Chem.Soc.、106、1627−1633（1984）等に記載さ
れているように、まず不飽和脂肪酸を合成し、こ
れとリン脂質の加水分解物とのエステル化反応に
より、リン脂質に重合可能な反応基を導入するも
のである。しかしながら、このような方法によれ
ば、不飽和脂肪酸の合成に非常に手数を要し、ま
た合成後の精製分離も操作が複雑であり、しかも
最終生成物である重合性のリン脂質の収率が文献
値では数パーセントであり、また本発明者らによ
る追試結果では該文献値の10分の１程度の収率し
か得られなかつた。 また、ヘモグロビンをマイクロカプセル化した
人工赤血球の材料として、リポソームを利用しよ
うとする試みがなされており、天然のリン脂質の
みからなるリポソームで問題となる血漿中でのヘ
モグロビンの漏れ出しが、重合性リン脂質を用い
た高分子リポソームを利用することによつて有効
に抑制され得るものと期待される。 しかしながら、高分子リポソームを人工血液用
材料として応用するには、いくつかの問題点があ
る。まず、第１に、重合性リン脂質が極めて綿密
な分子設計に基づいて純有機化学的に多数の反応
段階経て合成されるため、実用的な面での大量合
成が困難であるばかりでなく、極めて高価な点で
ある。第２に、高分子リポソームを得るための重
合方法である。すなわち、一般に重合性リン脂質
の重合反応は、ラジカル重合開始剤を使用して、
あるいは紫外線を照射して行なわれる。しかしな
がら、開始剤を用いる方法は、通常加熱を必要と
し、またこれらの開始剤がリポソーム中に残存す
るために生体を対象とする使用目的には好ましく
ない。一方、紫外線照射法では、従来の重合性リ
ン脂質は重合性が低いので、多量照射する必要が
あり、この場合には内部のヘモグロビンが変質し
やすいという問題があつた。 発明の目的 したがつて、本発明の目的は、新規な医用担体
を提供することにある。本発明の他の目的は、安
定性の極めて優れた高分子リポソーム形成脂質よ
りなる医用担体を提供することにある。本発明の
さらに他の目的は、担持物質の漏出の小さい医用
担体を提供することにある。本発明の別の目的
は、ヘモグロビン等のマイクロカプセル化に有用
な医用担体を提供することにある。 これらの諸目的は、つぎの一般式で表わされ
るリポソーム形成脂質を主構成成分とするリポソ
ームを紫外線または放射線で照射処理してなる医
用担体により達成される。 （ただし、Ｒは（−CH2）−2N（CH3）3、（−CH2）−
2NH3または−CH2−CH（NH3）−COOで
ある。） また、本発明は、Ｒが（−CH2）−2N（CH3）3で
ある医用担体である。さらに、本発明は、照射処
理が紫外線で行なわれてなる医用担体である。ま
た、本発明はヘモグロビン担持用である医用担体
である。 発明の具体的構成 本発明による医用担体を構成するリポソーム形
成脂質は、エレオステアリン酸を含有する桐油脂
肪酸をリン脂質の加水分解物でエステル化するこ
とにより得られる。 本発明で使用されるリン脂質とは複合脂質の１
種であり、アルコール類の脂肪酸およびリン酸が
結合した生体成分であり、化学構造上、比較的長
い脂肪族炭化水素からなる非極性部と、リン酸や
塩基等の極性部との二つの部分から成り立つてい
る。このリン脂質を水中に分散させると、２分子
膜構造を持つ小水胞体（ベシクル）、すなわちリ
ポソームが形成される。このようなリン脂質とし
ては、例えば卵黄レシチン（ホスフアチジルコリ
ン）、ケフアリン、ホスフアチジルセリン等があ
り、特に卵黄レシチンが好ましい。 しかして、ホスフアチジルコリンは、つぎの一
般式で表わされる。 このようなリン脂質から形成されるリポソーム
は寿命が短かく、実用面で問題がある。本発明で
は、リン脂質構成部分のうち、脂肪酸部分（R1
およびR2）を、天然の不飽和脂肪酸であるエレ
オステアリン酸で置き換えて重合可能な反応基を
導入して重合性のリン脂質を合成するものであ
る。 本発明で使用されるエレオステアリン酸は、つ
ぎの化学式で表わされる９、11、13位に共役二
重結合を有する不飽和脂肪酸であり、桐油中にグ
リセリドとして存在し、混合脂肪酸の80〜95重量
％を占めている。この桐油を加水分解して得られ
る桐油脂肪酸中には、エレオステアリン酸が60重
量％以上、好ましくは80重量％以上含有され、残
りは飽和酸、オレイン酸、リノール酸等が含まれ
ている。この桐油脂肪酸はそのまま天然不飽和脂
肪酸として用いてもよく、また必要によりカラム
クロマトグラフイ等で精製してエレオステアリン
酸のみを取出して用いてもよい。 CH3（CH2）3CH＝CHCH＝CHCH ＝CH（CH2）7COOH （） しかして、この桐油脂肪酸は、通常酸無水物の
形でエステル化に供される。桐油脂肪酸の使用量
は、リン脂質100重量部当り200〜400重量部、好
ましくは300〜370重量部である。 一方、前記リン脂質は加水分解物として使用さ
れ、特にその金属錯体、例えばカドミウム等の金
属の錯体として使用される。 エステル化反応は、つぎのようにして行なわれ
る。リン脂質の加水分解物ないしその金属錯体を
クロロホルム、四塩化炭素、塩化メチレン等の媒
体中に加えて撹拌下に懸濁させ、この懸濁液中に
前記桐油脂肪酸無水物および触媒を加え、反応系
内をアルゴン、窒素、ヘリウム等の不活性ガスで
置換したのち、15〜25℃、好ましくは18〜22℃の
温度で暗所で24〜72時間、好ましくは40〜72時間
反応させる。このとき、白色不溶物が析出するの
で、濾去し、媒体を室温で減圧留去後、クロロホ
ルム、メタノール、水の混合溶媒（容量比＝４／
５／１）に再溶解してイオン交換樹脂と接触さ
せ、ついで洗い落とす。溶媒を減圧留去後、残渣
を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲルカラ
ム等によりクロロホルム、メタノール混合溶媒で
精製する。触媒としては、４−ジメチルアミノピ
リジン等があり、リン脂質の加水分解物100重量
部当り45〜90重量部、好ましくは68〜84重量部使
用される。 得られるリポソーム形成脂質は、使用するリン
脂質によつて異なり、例えば卵黄レシチンを使用
する場合には、化学式（）で示されるエレオス
テアリン酸ホスフアチジルコリン、またケフアリ
ンやホスフアチジルヒリン等を使用した場合には
これらに対応するリポソーム形成脂質が得られ
る。 このようにして得られるリポソーム形成脂質
は、クロロホルム、塩化メチレン、エーテル、メ
タノール等の溶媒に溶解したのち、得られる脂質
溶液を丸底の容器に入れて該溶媒を完全に蒸発さ
せて該底面に脂質膜を形成させる。これにリン酸
緩衝液またはヘペスバツフア（Hepes buffer）
を添加して、ミキサーで振とうした後、アルゴ
ン、窒素、ヘリウム等の不活性ガス雰囲気下に超
音波処理することによりモノマーリポソームが得
られる。 このようにして得られるモノマーリポソーム
は、紫外線あるいはガンマ線、電子線等の放射
線、特に紫外線を照射することにより２個の脂肪
族基における３個の共役二重結合が容易に重合し
て高分子リポソームである本発明の医用担体が形
成される。このような照射処理によりモノマーリ
ポソームの高分子化により医用担体の安定性は増
大する。この医用担体には医薬物質、酵素、ヘモ
グロビン等を担持させることができる。 しかして、被担持物質が親水性である場合に
は、高分子リポソーム内に封入されて担持され、
一方、疎水性である場合には、高分子リポソーム
の脂肪族部分に担持される。 担持方法としては、種々あるが、重合性のリポ
ソーム形成脂質を前記被担持物質と混合したの
ち、超音波処理することによりモノマーリポソー
ムの懸濁液が形成され、これを遠心分離すること
によりモノマーリポソームに担持させることがで
きる。このような担持モノマーリポソームを紫外
線、放射線等により照射処理することにより担持
された高分子リポソームが得られる。 照射条件は、線源の種類によつて異なるが、例
えば紫外線の場合には、モノマーリポソーム懸濁
液を紫外線を透過し得る容器、例えば石英ガラス
製容器内に入れ、容器内を脱気あるいはアルゴ
ン、窒素、ヘリウム等の不活性ガス雰囲気に置換
後、水銀ランプ、キセノンランプ等の紫外線を放
射し得る光源を用いて、照射距離５〜20cm、好ま
しくは10〜15cmとして、サンプルを水冷あるいは
空冷しつつ、15分〜16時間好ましくは２〜12時間
紫外線を照射する。 つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説
明する。 重合性のリポソーム形成脂質の製造例 エレオステアリン酸無水物の製造 エレオステアリン酸80ｇに相当する桐油脂肪酸
を脱水蒸留直後の四塩化炭素600mlに溶解した、
この溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド32.6
ｇを加え、容器内をアルゴンガスで置換して密封
し、そのまま25℃で24時間放置（時々撹拌）し
た。不溶成分を濾別し、蒸留乾固した。これをジ
クロロメタンを展開溶媒としてシリカゲルで精製
したところ、29％の収率でエレオステアリン酸無
水物が得られた。 卵黄レシチン（ホスフアチジルコリン） 加水分解物カドミウム錯体の製造 卵黄レシチン（キユーピーPL−100）45ｇを脱
水エーテル450mlに溶解し、不溶物を濾別後、10
％濃度のテトラブチルアンモニウムヒドロキシド
のメタノール溶液50mlを加え、25℃の温度で激し
く振とうした。反応の進行に伴なつて溶液は白濁
し、次第に層分離してくるので、これを静置し、
褐色油状物を充分沈澱させ、上澄をデカンテーシ
ヨンした。褐色油状物を脱水エーテル100mlで３
回洗浄したのち、脱水メタノール125mlに加熱溶
解させ、沸点還流下に脱色剤１ｇを加えて熱時濾
過した。冷却後、濾液に脱水エーテル250mlを加
え、析出沈澱を残してデカンテーシヨンし、沈澱
を熱湯40mlに溶解させた。これに塩化カドミウム
５／２水和物８ｇを純水20mlに溶解したものを加え、
さらに活性炭2.5ｇおよび脱色剤２ｇを加えて沸
点還流後、濾紙および0.25μｍミリポアフイルタ
ーにて濾過した。これにエタノール100〜150mlを
加えたところ、着色沈澱が生成したので、これを
除去して白濁溶液のみを採取し、さらにエタノー
ル100〜150mlを加えて激しく振とうしたところ、
白色結晶が析出してきた。０〜５℃の温度で一夜
静置後、析出結晶を濾集し、脱水メタノール、脱
水エーテルおよび脱水ベンゼンの順で結晶を洗浄
し、さらに五酸化リン上で80℃の温度で終夜真空
乾燥したところ、56％の収率でホスフアチジルコ
リン加水分解物のカドミウム錯体が得られた。 エステル化による重合性脂質の製造 卵黄レシチン加水分解物カドミウム錯体6.74ｇ
に、蒸留直後のクロロホルム160mlを加えて撹拌
下に懸濁させた。これに桐油脂肪酸無水物24.70
ｇおよび触媒である４−ジメチルアミノピリジン
5.61ｇを加え、容器内をアルゴンガスで置換した
のち、密栓し、暗所で25℃の温度で60時間撹拌し
ながら反応させた。このとき、白色不溶物が析出
したので、これを濾別し、溶媒を室温下減圧留去
後、メタノール／クロロホルム／水＝５／４／１
混合溶媒100mlに再溶解させる。この溶液を再度
濾過して濾液をイオン交換樹脂AG−501−X8(D)
（Bio−Rad）カラムに注入し、先の混合溶媒500
mlで洗い落した。この溶媒を25℃の温度で減圧留
去したのち、クロロホルムに再溶解してシリカゲ
ルカラムによる精製を行なつたところ、30％の収
率でエレオステアリン酸ホスフアチジルコリンが
得られた。その赤外線吸収スペクトルは、第１図
のとおりであつた。 重合性リン脂質からのリポソームの製造 エレオステアリン酸ホスフアジルコリン200mg
をクロロホルム６mlに溶解した。このようにして
得られた脂質溶液をナス型フラスコに入れ、エバ
ポレータで溶媒を完全に除去してナス型フラスコ
底面に脂質膜を形成させた。これにヘペスバツフ
ア（Hepes buffer）（10ｍＭ、PH8.0）10mlを添加
してボルテツクスミキサーで振とうした後、チツ
プ型超音波照射機（40〜50W）でアルゴン気流下
に10分間処理した。処理液は白濁状態から透明分
散液となり、リポソームの形成が確認された。ま
た、走査型電子顕微鏡により直径0.2〜0.5μｍの
球状粒子が観察され、リポソームの形成が確認さ
れた。 実施例 １ リポソームの重合（医用担体の製造） 75Wの水銀ランプを光源として照射距離12cm、
サンプル濃度10mg／mlとし、脱気下において、水
温25℃の水浴中で紫外線を照射したところ、第２
図に示すようにトリエンに基づく272nｍにおけ
る吸光度が照射時間の経過とともに減少している
ことから重合が進行していることが確認された。 実施例 ２ ヘモグロビンカプセル化リポソームの調製 重合性のリポソーム形成脂質の製造例で得られ
たエレオステアリン酸ホスフアチジルコリン46mg
（58μmol）に、コレステロール22.4mg（58μmol）
を含有するクロロホルム溶液および桐油脂肪酸
2.4mg（8.5μmol）を含有するクロロホルム溶液を
加え、得られる溶液を50mlのナス型フラスコに入
れ、窒素を吹付けてフラスコ底面に薄膜を形成さ
せ、エバポレータで25℃の温度で１時間乾燥させ
たのち、25℃の温度で２時間半真空乾燥を行なつ
た。ついで、一酸化炭素化したヘモグロビンを10
％含有する生理食塩水溶液10mlを加え、ボルテツ
クスミキサーで振とうしたのち、バス型超音波照
射機（20W）でアルゴン気流下に30分処理した。
これにリン酸緩衝液（PH7.4）40mlを加え遠心分
離（10000rpm、10分間）後、沈澱にリン酸緩衝
液（PH7.4）11mlを加えた。 得られた懸濁液のうち3.5mlを分取し、一酸化
炭素置換後、暗所にて終夜撹拌したのち、
5000rpmで10分間遠心分離し、これにリン酸緩衝
液（PH7.4）を加えて３mlに定容したモノマーリ
ポソーム懸濁液を得た。このモノマーリポソーム
懸濁液0.4mlを牛血漿またはリン酸緩衝液3.6mlに
加えた。 また、得られた懸濁液のうち3.5mlを分取し、
一酸化炭素置換後、75Wの水銀ランプを光源とし
て照射距離12cmで25℃の温度で12時間撹拌下紫外
線照射を行ない、ついで5000rpmで10分間遠心分
離し、これにリン酸緩衝液（PH7.4）を加えて３
mlに定容したポリマーリポソーム懸濁液を得た。
このポリマーリポソーム懸濁液0.4mlを牛血漿ま
たはリン酸緩衝液3.6mlに加えた。 ヘモグロビン漏出試験 ヘモグロビンリポソームのモノマーおよびポリ
マーのそれぞれを牛血漿およびリン酸緩衝液中に
一定時間放置し、その懸濁液全体の可視スペクト
ル（ヘモグロビンに基づく400nｍ付近のピーク）
と、これを遠心分離（牛血漿；10000rpm、リン
酸緩衝液；5000rpm、10分）した上清のスペクト
ルを比較し、リポソームからのヘモグロビン漏出
を定量した。その結果は、第１表のとおりであつ
た。 比較例 つぎの化学式で示されるジエンホスフアチジル
コリン45mg（60μmol）、コレステロール23.2mg
（60μmol）および桐油脂肪酸2.4mg（8.5μmol）を
用いてリポソームの重合例２と同様な方法でヘモ
グロビンカプセル化リポソームを調製した。 得られたヘモグロビンリポソームのモノマーお
よびポリマーについて、リポソームの重合例２と
同様なヘモグロビン漏出試験を行なつたところ、
第２表のとおりであつた。
【表】
【表】
第１表から明らかなように、エレオステアリン
酸ホスフアチジルコリンモノマーリポソームから
のHb漏出が、牛血漿中において経時的に増大す
るのに対し、ポリマーリポソームでは１週間後に
おいてもヘモグロビンの漏出が全く認められず、
高分子化によるリポソーム安定性向上が顕著に表
われた。一方、第２表から明らかなようにジエン
ホスフアチジルコリン系では、ポリマーリポソー
ムにおいてもヘモグロビンの漏出が観測され、高
分子化による効果は低い。 発明の具体的効果 以上述べたように、本発明による医用担体は、
前記一般式で示すように、その疎水基中にエレ
オステアリン酸に由来する３個の共役二重結合が
存在するので、該脂質から形成されるモノマーリ
ポソームは紫外線の照射により容易に重合し、ま
た重合後のリポソームである担体は天然のリン脂
質のみよりなるリポソームに比較して安定性が向
上している。このため、本発明のポリマーリポソ
ームである医用担体に医薬物質、酵素、ヘモグロ
ビン等を担持させれば、極めて優れた医薬、人工
赤血球等が得られる。
酸ホスフアチジルコリンモノマーリポソームから
のHb漏出が、牛血漿中において経時的に増大す
るのに対し、ポリマーリポソームでは１週間後に
おいてもヘモグロビンの漏出が全く認められず、
高分子化によるリポソーム安定性向上が顕著に表
われた。一方、第２表から明らかなようにジエン
ホスフアチジルコリン系では、ポリマーリポソー
ムにおいてもヘモグロビンの漏出が観測され、高
分子化による効果は低い。 発明の具体的効果 以上述べたように、本発明による医用担体は、
前記一般式で示すように、その疎水基中にエレ
オステアリン酸に由来する３個の共役二重結合が
存在するので、該脂質から形成されるモノマーリ
ポソームは紫外線の照射により容易に重合し、ま
た重合後のリポソームである担体は天然のリン脂
質のみよりなるリポソームに比較して安定性が向
上している。このため、本発明のポリマーリポソ
ームである医用担体に医薬物質、酵素、ヘモグロ
ビン等を担持させれば、極めて優れた医薬、人工
赤血球等が得られる。
第１図は本発明による医用担体の重合前の主構
成成分であるリポソーム形成脂質の赤外線吸収ス
ペクトルの一例を示すチヤートであり、また第２
図はリポソーム形成脂質から形成される本発明の
医用担体の紫外線照射による重合の程度を示す紫
外線吸収スペクトルの一例を示すチヤートであ
る。
成成分であるリポソーム形成脂質の赤外線吸収ス
ペクトルの一例を示すチヤートであり、また第２
図はリポソーム形成脂質から形成される本発明の
医用担体の紫外線照射による重合の程度を示す紫
外線吸収スペクトルの一例を示すチヤートであ
る。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ つぎの一般式で表わされるリポソーム形成
脂質を主構成成分とするリポソームを紫外線また
は放射線で照射処理してなる医用担体。 （ただし、Ｒは（−CH2）−2N（CH3）3、（−CH2）−
2NH3または−CH2−CH（NH3）−COOで
ある。） ２ Ｒは（−CH2）−2N（CH3）3である特許請求の
範囲第１項に記載の医用担体。 ３ 照射処理は紫外線で行なわれてなる特許請求
の範囲第１項または第２項に記載の医用担体。 ４ ヘモグロビン担持用である特許請求の範囲第
１項ないし第３項のいずれか一つに記載の医用担
体。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27489584A JPS61155336A (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 医用担体 |
| CA000498632A CA1243038A (en) | 1984-12-28 | 1985-12-24 | Polymerizable liposome-forming lipid, method for production thereof, and use thereof |
| AU51676/85A AU559292B2 (en) | 1984-12-28 | 1985-12-24 | Polymerisable liposome-forming lipids |
| EP85116607A EP0186211B1 (en) | 1984-12-28 | 1985-12-27 | Polymerizable liposome-forming lipid, method for production thereof, and use thereof |
| DE8585116607T DE3568436D1 (en) | 1984-12-28 | 1985-12-27 | Polymerizable liposome-forming lipid, method for production thereof, and use thereof |
| ES550447A ES8700055A1 (es) | 1984-12-28 | 1985-12-27 | Procedimiento para la fabricacion de un lipido formador de liposoma polimerizable |
| US07/073,175 US4861521A (en) | 1984-12-28 | 1987-07-14 | Polymerizable liposome-forming lipid, and method for production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP27489584A JPS61155336A (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 医用担体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61155336A JPS61155336A (ja) | 1986-07-15 |
| JPS6332330B2 true JPS6332330B2 (ja) | 1988-06-29 |
Family
ID=17548021
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP27489584A Granted JPS61155336A (ja) | 1984-12-28 | 1984-12-28 | 医用担体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61155336A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2911550B2 (ja) * | 1990-06-15 | 1999-06-23 | 日本化薬株式会社 | リポソーム製剤 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1578776A (en) * | 1976-06-10 | 1980-11-12 | Univ Illinois | Hemoglobin liposome and method of making the same |
| JPS56135492A (en) * | 1979-12-20 | 1981-10-22 | Chiyatsupuman Denisu | Biocompatible surfaces |
| DE3010185A1 (de) * | 1980-03-17 | 1981-09-24 | Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen | Polymerisierbare phospholipide, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur herstellung polymerer phospholipide |
| JPS61129190A (ja) * | 1984-11-27 | 1986-06-17 | Nippon Oil & Fats Co Ltd | 重合性グリセロリン脂質 |
-
1984
- 1984-12-28 JP JP27489584A patent/JPS61155336A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61155336A (ja) | 1986-07-15 |
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