JPS6338038B2 - - Google Patents
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- JPS6338038B2 JPS6338038B2 JP11437380A JP11437380A JPS6338038B2 JP S6338038 B2 JPS6338038 B2 JP S6338038B2 JP 11437380 A JP11437380 A JP 11437380A JP 11437380 A JP11437380 A JP 11437380A JP S6338038 B2 JPS6338038 B2 JP S6338038B2
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- chloroform
- acetone
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
本発明は一般式〔〕
（式中、R1およびR2は水素原子またはアセチ
ル基を表わす。ただし、R1が水素原子の場合は
R2はアセチル基、R2が水素原子の場合はR1はア
セチル基とする。）で表わされるテトロカルシン
類（以下、R1が水素原子でR2がアセチル基の化
合物をテトロカルシンＥ―１，R1がアセチル基
でR2が水素原子の化合物をテトロカルシンＥ―
２とする。）およびその塩およびテトロカルシン
Ｅ―１およびＥ―２の製造法に関する。 本発明者らは有用な抗生物質を見い出す目的で
天然界より数多くの微生物を入手して抗生物質の
生産について研究した。その結果宮城県仙台市内
の土壌から分離した菌株（KY11091と称する）
を培地に培養すると培養物中に新規な抗生物質
DC―11，DC―11―Ａ―２，DC―11―Ａ―３，
DC―11―Ｂなどが生産されることを見い出した。
これらはいずれもその物理化学的物質から極めて
類似した構造式を有する化合物と考えられ、後に
本発明者らによつてテトロカルシン類と総称する
こととにした。DC―11，DC―11―Ａ―２，DC
―11―Ａ―３，DC―11―Ｂはそれぞれテトロカ
ルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロカルシン
Ｃ，テトロカルシンＤと命名されている。DC―
11に関してはすでに同一出願人により特願昭53−
45916（特開昭54−138501）および特願昭53−
153027（特開昭53−79322）に開示されている。
DC―11―Ａ―２，DC―11―Ａ―３，DC―11―
Ｂについても同一出願人による特願昭55−17498，
55−24924（特開昭56−115794，56−122392、以上
２件DC―11―Ａ―２），54−152253，55−24925
（特開昭56−75500，56−122393、以上２件DC―
11―Ａ―３），55―24926（特開昭56−122394、DC
―11―Ｂ）に記載されている。またさらにテトロ
ノライド類については特願昭55−80482（特開昭57
−7479）に記載されている。 上記においてテトロカルシンＡおよびＢについ
てはその後次の化学構造を有することが明らかに
なつた。 本発明者らはさらに研究を重ねた結果、上記菌
株培養物中に既出願に記載された物質とは異る新
規物質テトロカルシンＥ―１およびテトロカルシ
ンＥ―２を見い出しこれらを単離した。またテト
ロカルシンＥ―１およびテトロカルシンＥ―２は
テトロカルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロカ
ルシンＤの単独または混合物を化学的に分解して
も得られることを見い出した。このようにして得
られたテトロカルシンＥ―１およびテトロカルシ
ンＥ―２は抗菌作用を示す。またそれらの構造か
ら明らかなように既出願のテトロノライド類やテ
トロカルシン類およびそれらの誘導体製造の原料
として利用できる。 さらにそれ自身も抗腫瘍性を示すことが期待で
きる。 これらの化合物の具体的な理化学的性質は次の
通りである。 (1) テトロカルシンＥ―１ 融点：207〜210℃ 元素分析値 計算値：Ｃ：61.6％ Ｈ：7.0％ Ｎ：2.9％ 実測値：Ｃ：61.3％ Ｈ：6.9％ Ｎ：3.0％ （C49H66N2O17として計算） 赤外部吸収スペクトル（KBr錠剤法）：第１
図 PMRスペクトル（CDCl3中、TMS基準）：
第２図 CMRスペクトルδ（ppm）（CDCl3中、TMS
基準） 206.1，201.3，192.4，170.4，166.5，
157.3，149.4，141.3，136.3，135.7，
126.6，125.5，123.3，118.3，100.9，
99.7，96.4，91.5，85.6，83.9，77.8，
75.1，69.4，69.2，65.5，62.1，54.1，
53.7，52.8，51.2，44.8，43.4，41.7，
38.4，35.9，35.3，34.2，31.1，30.7，
29.7，25.3，21.9，21.1，17.5，16.9，
16.1，15.0，14.4，14.3 比旋光度〔α〕28 D＝−31.6゜（ｃ，1.0，アセト
ン） (2) テトロカルシンＥ―２ 融点：205〜208℃ 元素分析 計算値：Ｃ：61.6％ Ｈ：7.0％ Ｎ：2.9％ 実測値：Ｃ：61.4％ Ｈ：7.1％ Ｎ：2.9％ （C49H66N2O17として計算） 赤外部吸収スペクトル（KBr錠剤法）：第３
図 PMRスペクトル（CDCl3中、TMS基準）：
第４図 CMRスペクトルδ（ppm）（CDCl3中，TMS
基準） 206.2，201.4，192.4，171.3，166.5，
157.3，149.5，141.2，136.2，136.0，
126.1，125.8，123.0，118.2，100.8，
97.7，96.4，91.5，83.9，83.8，77.7，
71.6，69.7，69.3（２本），64.6，54.2，
53.7，52.7，51.2，44.8，43.2，41.5，
38.4，35.9，34.4，33.1，31.1，30.6，
29.7，25.3，21.9，21.4，17.6，16.9，
16.0，15.0，14.3，13.9 比旋光度〔α〕28 D＝−27.4゜（ｃ，1.0，アセト
ン） 次にテトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ
―２の薄層でクロマトグラフイーにおける挙動を
第１表に示す。 第１表 シリカゲルプレート（商品名DC―
Fertigplatteu Kieselgel 60F254，E.Merck）を
用いたとき。 展開剤：クロロホルム：メタノール＝９：１
（容量比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.57 〃 Ｂ 0.52 〃 Ｃ 0.56 〃 Ｄ 0.53 〃 Ｅ―１ 0.77 〃 Ｅ―２ 0.65 展開剤：トルエン：アセトン＝35：65（容量
比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.55 テトロカルシンＥ―１ 0.64 テトロカルシンＥ―２ 0.60 展開剤：酢酸エチル：酢酸＝20：１（容量比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.42 テトロカルシンＥ―１ 0.67 テトロカルシンＥ―２ 0.62 次にテトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ
―２の各種微生物に対する抗菌活性（PH7.0の培
地使用）を第２表に示す。
ル基を表わす。ただし、R1が水素原子の場合は
R2はアセチル基、R2が水素原子の場合はR1はア
セチル基とする。）で表わされるテトロカルシン
類（以下、R1が水素原子でR2がアセチル基の化
合物をテトロカルシンＥ―１，R1がアセチル基
でR2が水素原子の化合物をテトロカルシンＥ―
２とする。）およびその塩およびテトロカルシン
Ｅ―１およびＥ―２の製造法に関する。 本発明者らは有用な抗生物質を見い出す目的で
天然界より数多くの微生物を入手して抗生物質の
生産について研究した。その結果宮城県仙台市内
の土壌から分離した菌株（KY11091と称する）
を培地に培養すると培養物中に新規な抗生物質
DC―11，DC―11―Ａ―２，DC―11―Ａ―３，
DC―11―Ｂなどが生産されることを見い出した。
これらはいずれもその物理化学的物質から極めて
類似した構造式を有する化合物と考えられ、後に
本発明者らによつてテトロカルシン類と総称する
こととにした。DC―11，DC―11―Ａ―２，DC
―11―Ａ―３，DC―11―Ｂはそれぞれテトロカ
ルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロカルシン
Ｃ，テトロカルシンＤと命名されている。DC―
11に関してはすでに同一出願人により特願昭53−
45916（特開昭54−138501）および特願昭53−
153027（特開昭53−79322）に開示されている。
DC―11―Ａ―２，DC―11―Ａ―３，DC―11―
Ｂについても同一出願人による特願昭55−17498，
55−24924（特開昭56−115794，56−122392、以上
２件DC―11―Ａ―２），54−152253，55−24925
（特開昭56−75500，56−122393、以上２件DC―
11―Ａ―３），55―24926（特開昭56−122394、DC
―11―Ｂ）に記載されている。またさらにテトロ
ノライド類については特願昭55−80482（特開昭57
−7479）に記載されている。 上記においてテトロカルシンＡおよびＢについ
てはその後次の化学構造を有することが明らかに
なつた。 本発明者らはさらに研究を重ねた結果、上記菌
株培養物中に既出願に記載された物質とは異る新
規物質テトロカルシンＥ―１およびテトロカルシ
ンＥ―２を見い出しこれらを単離した。またテト
ロカルシンＥ―１およびテトロカルシンＥ―２は
テトロカルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロカ
ルシンＤの単独または混合物を化学的に分解して
も得られることを見い出した。このようにして得
られたテトロカルシンＥ―１およびテトロカルシ
ンＥ―２は抗菌作用を示す。またそれらの構造か
ら明らかなように既出願のテトロノライド類やテ
トロカルシン類およびそれらの誘導体製造の原料
として利用できる。 さらにそれ自身も抗腫瘍性を示すことが期待で
きる。 これらの化合物の具体的な理化学的性質は次の
通りである。 (1) テトロカルシンＥ―１ 融点：207〜210℃ 元素分析値 計算値：Ｃ：61.6％ Ｈ：7.0％ Ｎ：2.9％ 実測値：Ｃ：61.3％ Ｈ：6.9％ Ｎ：3.0％ （C49H66N2O17として計算） 赤外部吸収スペクトル（KBr錠剤法）：第１
図 PMRスペクトル（CDCl3中、TMS基準）：
第２図 CMRスペクトルδ（ppm）（CDCl3中、TMS
基準） 206.1，201.3，192.4，170.4，166.5，
157.3，149.4，141.3，136.3，135.7，
126.6，125.5，123.3，118.3，100.9，
99.7，96.4，91.5，85.6，83.9，77.8，
75.1，69.4，69.2，65.5，62.1，54.1，
53.7，52.8，51.2，44.8，43.4，41.7，
38.4，35.9，35.3，34.2，31.1，30.7，
29.7，25.3，21.9，21.1，17.5，16.9，
16.1，15.0，14.4，14.3 比旋光度〔α〕28 D＝−31.6゜（ｃ，1.0，アセト
ン） (2) テトロカルシンＥ―２ 融点：205〜208℃ 元素分析 計算値：Ｃ：61.6％ Ｈ：7.0％ Ｎ：2.9％ 実測値：Ｃ：61.4％ Ｈ：7.1％ Ｎ：2.9％ （C49H66N2O17として計算） 赤外部吸収スペクトル（KBr錠剤法）：第３
図 PMRスペクトル（CDCl3中、TMS基準）：
第４図 CMRスペクトルδ（ppm）（CDCl3中，TMS
基準） 206.2，201.4，192.4，171.3，166.5，
157.3，149.5，141.2，136.2，136.0，
126.1，125.8，123.0，118.2，100.8，
97.7，96.4，91.5，83.9，83.8，77.7，
71.6，69.7，69.3（２本），64.6，54.2，
53.7，52.7，51.2，44.8，43.2，41.5，
38.4，35.9，34.4，33.1，31.1，30.6，
29.7，25.3，21.9，21.4，17.6，16.9，
16.0，15.0，14.3，13.9 比旋光度〔α〕28 D＝−27.4゜（ｃ，1.0，アセト
ン） 次にテトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ
―２の薄層でクロマトグラフイーにおける挙動を
第１表に示す。 第１表 シリカゲルプレート（商品名DC―
Fertigplatteu Kieselgel 60F254，E.Merck）を
用いたとき。 展開剤：クロロホルム：メタノール＝９：１
（容量比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.57 〃 Ｂ 0.52 〃 Ｃ 0.56 〃 Ｄ 0.53 〃 Ｅ―１ 0.77 〃 Ｅ―２ 0.65 展開剤：トルエン：アセトン＝35：65（容量
比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.55 テトロカルシンＥ―１ 0.64 テトロカルシンＥ―２ 0.60 展開剤：酢酸エチル：酢酸＝20：１（容量比） 物 質 Rf値 テトロカルシンＡ 0.42 テトロカルシンＥ―１ 0.67 テトロカルシンＥ―２ 0.62 次にテトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ
―２の各種微生物に対する抗菌活性（PH7.0の培
地使用）を第２表に示す。
【表】
サ
ATCC 9992
上記の理化学的性質等よりテトロカルシンＥ―
１とＥ―２とを区別することができるのみなら
ず、これらと他のテトロカルシン類とを区別する
こともできる。 次に本発明のテトロカルシン類の製造法につい
て述べる。 テトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ―２
は、前述のとおり、醗酵法でも製造できるし、ま
たテトロカルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロ
カルシンＤなどを加水分解することによつても製
造できる。 テトロカルシンＥ―１およびテトロカルシンＥ
―２を微生物の培養物中から得るには、ミクロモ
ノスボラ属に属し、テトロカルシンＥ―１およ
び／またはテトロカルシンＥ―２生産能を有する
微生物を栄養培地に培養し、該化合物を培養物中
に蓄積せしめ該培養物からテトロカルシンＥ―１
および／またはテトロカルシンＥ―２を採取する
ことによつてテトロカルシンＥ―１および／また
はテトロカルシンＥ―２が得られる。 使用しうる微生物としてはミクロモノスポラ属
に属しテトロカルシンＥ―１および／またはテト
ロカルシンＥ―２生産能を有する微生物であれ
ば、いずれの微生物も用いることができるが好適
な菌としては、ミクロモノスポラ・チヤルセア
KY11091株があげられる。該菌株は微工研菌寄
第4458号、NRRL11289として、それぞれ寄託さ
れている。該菌株の菌学的性質は特願昭53−4596
（特開昭54−138501）、特願昭54−152253（特開昭
56−75500）、特願昭55−17498（特開昭56−
115794）、特願昭55−24926（特開昭56−122394）
明細書に記載されている。 次に培養方法について述べる。 本発明の培養においては通常の放線菌の培養法
が一般に用いられる。培養のための栄養源として
は下記に示すごとくいろいろのものが用いられ
る。炭素源としてはブドウ糖、殿粉、デキストリ
ン、マンノース、フラクトース、シユークロー
ス、糖蜜などが単独または組み合わせて用いられ
る。さらに、菌の資化能によつては炭化水素、ア
ルコール類、有機酸なども用いうる。無機および
有機の窒素化合物として塩化アンモン、硫酸アン
モン、硝酸アンモン、硝酸ソーダ、尿素などがま
た天然の窒素源としてはペプトン、肉エキス、酵
母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・リカ
ー、大豆粉、カザミノ酸などが単独または組み合
わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食
塩、塩化カリ、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウ
ム、燐酸二水素カリウム、燐酸水素二カリウム、
硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫
酸亜鉛、硫酸銅などの無機塩類を加える。さらに
使用菌の生育やテトロカルシンＥ―１およびテト
ロカルシンＥ―２の生産を促進する微量成分例え
ばビタミンB1、ビオチンなどを適当に添加する
ことができる。 培養法としては、液体培養法、とくに深部撹拌
培養法がもつとも適している。培養温度は25〜40
℃、特に28〜38℃が最適で培地のPHはアンモニア
水や炭酸アンモン溶液などを添加して、PH４〜
10、好ましくは６〜８で培養を行なうことが望ま
しい。 液体培養で通常１日ないし７日培養を行なう
と、目的物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止
し、菌体を別して得られる培養液中より目的物
を単離精製する。 培養液からのテトロカルシンＥ―１およびテ
トロカルシンＥ―２の単離精製には微生物代謝生
産物をその培養液から単離するためにふつう用い
られる分離・精製の方法が利用される。 例えば、培養生産物を培養液と菌体とに分離
し、培養液そのまま（PH6.0）非イオン性多孔性
樹脂（商品名「HP―20」三菱化成製など）を通
過させ、抗菌活性を有する成分を吸着させた後、
メタノール、アセトン、酢酸エチルなどを用いて
吸着物質を脱着させる。この脱着液を濃縮乾固
し、水に溶解して活性炭素に吸着させる。活性炭
素からはアセトン、酢酸エチルなどの有機溶媒で
活性物質を溶出する。この溶出液を濃縮乾固しク
ロロホルムに溶解させ、予めクロロホルムに懸濁
後カラム充填したシリカゲルを用いてクロマトグ
ラフイーを行う。まずクロロホルムを通塔するこ
とによつて不純物である黄色系の色素が除去され
る。次いでクロロホルム：メタノール（98：２、
容量比）の混合液で活性物質を溶出することがで
きる。ここではテトロカルシンＡ、テトロカルシ
ンＢ、テトロカルシンＣ、テトロカルシンＤ、テ
トロノライド類化合物Ｆ―１、テトロカルシンＥ
―１、テトロカルシンＥ―２の混合物として溶出
させる。これらの分離を行うには、この活性画分
を濃縮乾固し、少量のクロロホルム：メタノー
ル：水（３：１：１、容量比）の混合物の下層溶
媒に溶解する。これを前記下層溶媒で充填したシ
リカゲルのカラムに通塔し、同じ溶媒で溶出する
とテトロカルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―
２、テトロノライド類化合物Ｆ―１、テトロカル
シンＡ、テトロカルシンＢ、テトロカルシンＤ、
テトロカルシンＣの順に溶出されてくる。テトロ
カルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―２の多く含
まれる画分をとり、それぞれをさらに再クロマト
処理に付すか、またはシリカゲル薄層クロマトで
処理することによつてテトロカルシンＥ―１、Ｅ
―２をそれぞれ得ることができる。薄層クロマト
による場合はシリカゲル薄層（商品名DC
FertigPlatten Kieselgel 60F254，E.Merck）を
用い、クロロホルム：メタノール（９：１、容量
比）で展開後相当する部分をかきとり、該展開溶
媒もしくはアセトン等で溶出し、溶出液を濃縮乾
固する。 さらに必要に応じ抽出、晶析等の手段を加えて
もよい。また分離を完全にするために、上記と同
じクロマトグラフイーを繰返すかあるいはセフア
デツクスLH―20（Pharmacia Fine Chemicals
Inc.，スウエーデン）のカラムに通塔する操作を
加えてもよい。 次にテトロカルシンＥ―１、テトロカルシンＥ
―２の加水分解による製造法について述べる。 テトロカルシンＡ，Ｂ，Ｄのいずれかまたはこ
れらの混合物（その組成は問わない）を塩酸、硫
酸などの酸水溶液と有機溶媒（アセトンなど）の
混合物中で加水分解する。加水分解は例えば実施
例３に示したごとき条件下に行えばよい。加水分
解後溶媒を留去し、残水溶液を酢酸エチルで抽出
し、酢酸エチル層を濃縮乾固後、クロロホルムに
溶解する。これを予めクロロホルムで充填したシ
リカゲルのカラムに通塔し、クロロホルム：メタ
ノール（100：0.5、容量比）で展開するとテトロ
カルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―２の順に溶
出されてくる。これを再クロマト法、薄層クロマ
ト法などでさらに精製して純粋なテトロカルシン
Ｅ―１、テトロカルシンＥ―２を得ることができ
る。 ここでは単一物質から２種の物質テトロカルシ
ンＥ―１、テトロカルシンＥ―２が得られてき
た。その後の実験からテトロカルシンＥ―１が本
来母化合物中に含まれていて、加水分解中および
分解後溶液中に存在しているときに隣酸する水酸
基にアセチル基が転移することによつてテトロカ
ルシンＥ―２が生成したと考えられる。また一方
テトロカルシンＥ―２もまたアセチル基の転移に
よつてテトロカルシンＥ―１に変ることができ
る。このようなアセチル基の転移は、テトロカル
シンＥ―１およびテトロカルシンＥ―１の純品を
溶液にすると徐々に変換をしてテトロカルシンＥ
―１とＥ―２の混合物ができることからも証明さ
れた。さらに同様の反応が培養液中でも起つてい
ると容易に推定できる。 次に実施例をあげて本発明化合物を具体的製法
を示す。 実施例中、物質の動向は、バチルス・ズブチリ
スNo.10707を用いるバイオアツセイまたはTLCク
ロマトスキヤンナー法（島津クロマトスキヤンナ
ーCS910）（紫外部反射法、ダブルビーム、シン
グルスキヤン、波長サンプル260nm、リフアレン
ス350nm）を用いて追跡した。 実施例 １ 種菌としてミクロモノスポラ・チヤルセア
KY11091を用いた。該菌株を２容量の三角フ
フラスコ中の種培地〔KCl ４ｇ／MgSO4・
7H2O0.5ｇ／、KH2PO41.5ｇ／、硫安5.0
ｇ／、シユークロース20ｇ／、フラクトース
10ｇ／、グルコース10ｇ／、コーンスチーブ
リカー5.0ｇ／、CaCO320ｇ／PH7.0〕300ml
に植菌し、30℃で48時間振とう（220r.p.m）培養
した。かくして得られた種培養液を30容量のジ
ヤーフアーメンター中の下記組成の発酵培地15
に５％（容量）の割合で移し、30℃で通気撹拌方
式（回転数250r.p.m通気量15／min）により培
養を行つた。 発酵培地組成：可溶性デンプン60ｇ／、大豆
粕粉末10ｇ／、ペプトン10ｇ／、
K2HPO40.5ｇ／、MgSO4・7H2O0.5
ｇ／、CaCO31ｇ／、PH7.2（殺菌前）
にNaOHで調整する。 培養中培地のPHは制御しないで、72時間培養し
た。培養液より菌体および沈殿物を別し、別液
13を得た。まず液13を１の非イオン性多
孔性樹脂（商品名「HP―10」三菱化成製）に通
塔して活性物質を吸着させ水洗後さらに30％
（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液で洗い不純物を除去す
る。次いでアセトンで溶出する。アセトン画分を
濃縮乾固し、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液に溶
解する。この溶液を活性炭500mlを充填したカラ
ムに吸着させる。30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液
で洗滌後アセトンで活性画分を溶出する。この操
作で不純物として存在する色素の大部分を除くこ
とができる。活性画分を濃縮乾固し、少量のクロ
ロホルム（約10ml）に溶解する。このクロロホル
ム溶液を予めクロロホルムを溶媒として充填した
シリカゲル〔商品名：クロマトグラフ用シリカゲ
ル（100〜200メツシユ）関東化学、以下も同じ〕
（500ml）のカラムに静かに乗せ、まずクロロホル
ムで充分（約２）に洗い、次いでクロロホル
ム：メタノール（98：２、容量比）で溶出を行う
とテトロカルシンＡ〜Ｄ、テトロノライド類化合
物Ｅ―１、テトロカルシンＥ―１、Ｅ―２が混合
して溶出される。これを濃縮乾固し、少量のクロ
ロホルム：メタノール：H2O（３：１：１、容量
比）の混合物の下層溶媒に溶解する。これを前記
下層溶媒で充填したシリカゲルカラム（500ml）
に静かに乗せ、同じ溶媒で展開するとテトロカル
シンＥ―１，Ｅ―２、テトロノライド類化合物Ｆ
―１、テトロカルシンＡ、Ｂ、Ｄ、Ｃの順に溶出
されてくる。さらに同様にして再クロマトを行つ
て、テトロカルシンＥ―１、Ｅ―２をそれぞれ主
成分とする分画を濃縮乾固する。これをアセトン
またはクロロホルムに溶解し、シリカゲル薄層を
用い、クロロホルム：メタノール（９：１、容量
比）で展開した。Ｅ―１に相当する部分もしくは
Ｅ―２に相当する部分をかきとり、それぞれを展
開溶媒又はアセトンで溶出後、濃縮乾固し酢酸エ
チルに溶解する。これを0.1N HClと振りまぜ溶
媒層を取り、濃縮乾固する。このとき乾固したも
のを酢酸エチルに再溶解後ヘキサンで沈殿させる
ことによつても粉末が得られる。このようにして
約５mgのテトロカルシンＥ―１と約３mgのテトロ
カルシンＥ―２を得た。ここで得たテトロカルシ
ンＥ―１，Ｅ―２の理化学的性質、抗菌活性は前
記の通りである。 実施例 ２ 実施例１において、発酵培地組成を次のものに
代えて行う以外は実施例１と同様に培養を行つ
た。 発酵培地組成：可溶性デンプン40ｇ／、大豆
粕粉末30ｇ／、デキストリン５ｇ／、
コーンスチーブリカー５ｇ／、
K2HPO40.5ｇ／、MgSO4・7H2O0.5
ｇ／、CaCO31ｇ／、PH7.0（殺菌前）
にNaOHで調整する。 培養液を、実施例１と同様に処理して、テトロ
カルシンＥ―１，Ｅ―２をそれぞれ約４mg、約２
mg得た。これらの理化学的性質、抗菌活性は実施
例１で得られたものとよく一致した。 実施例 ３ テトロカルシンＡ、Ｂ、Ｄの混合物（組成比は
８：1.7：0.3、重量比）３ｇを50％アセトン２
に溶解し、PH20にHClで調整した後、50℃で17時
間還流して分解させた。分解液を減圧下で濃縮
し、アセトンを除去した後、500mlの酢酸エチル
を加えて抽出した。抽出液を濃縮乾固し、クロロ
ホルムに溶解し、予めクロロホルムで充填したシ
リカゲルのカラム（500ml）に、静かに乗せ、ク
ロロホルム：メタノール（100：0.5、容量比）展
開した。テトロカルシンＥ―１，Ｅ―２を含む画
分を集め、それぞれ濃縮後石油エーテルで沈殿さ
せた。この方法でテトロカルシンＥ―１，Ｅ―２
をそれぞれ150mg、160mgを得た。これらの理化学
的性質、抗菌活性などは実施例１で得られたもの
とよく一致した。
ATCC 9992
上記の理化学的性質等よりテトロカルシンＥ―
１とＥ―２とを区別することができるのみなら
ず、これらと他のテトロカルシン類とを区別する
こともできる。 次に本発明のテトロカルシン類の製造法につい
て述べる。 テトロカルシンＥ―１，テトロカルシンＥ―２
は、前述のとおり、醗酵法でも製造できるし、ま
たテトロカルシンＡ，テトロカルシンＢ，テトロ
カルシンＤなどを加水分解することによつても製
造できる。 テトロカルシンＥ―１およびテトロカルシンＥ
―２を微生物の培養物中から得るには、ミクロモ
ノスボラ属に属し、テトロカルシンＥ―１およ
び／またはテトロカルシンＥ―２生産能を有する
微生物を栄養培地に培養し、該化合物を培養物中
に蓄積せしめ該培養物からテトロカルシンＥ―１
および／またはテトロカルシンＥ―２を採取する
ことによつてテトロカルシンＥ―１および／また
はテトロカルシンＥ―２が得られる。 使用しうる微生物としてはミクロモノスポラ属
に属しテトロカルシンＥ―１および／またはテト
ロカルシンＥ―２生産能を有する微生物であれ
ば、いずれの微生物も用いることができるが好適
な菌としては、ミクロモノスポラ・チヤルセア
KY11091株があげられる。該菌株は微工研菌寄
第4458号、NRRL11289として、それぞれ寄託さ
れている。該菌株の菌学的性質は特願昭53−4596
（特開昭54−138501）、特願昭54−152253（特開昭
56−75500）、特願昭55−17498（特開昭56−
115794）、特願昭55−24926（特開昭56−122394）
明細書に記載されている。 次に培養方法について述べる。 本発明の培養においては通常の放線菌の培養法
が一般に用いられる。培養のための栄養源として
は下記に示すごとくいろいろのものが用いられ
る。炭素源としてはブドウ糖、殿粉、デキストリ
ン、マンノース、フラクトース、シユークロー
ス、糖蜜などが単独または組み合わせて用いられ
る。さらに、菌の資化能によつては炭化水素、ア
ルコール類、有機酸なども用いうる。無機および
有機の窒素化合物として塩化アンモン、硫酸アン
モン、硝酸アンモン、硝酸ソーダ、尿素などがま
た天然の窒素源としてはペプトン、肉エキス、酵
母エキス、乾燥酵母、コーン・スチーブ・リカ
ー、大豆粉、カザミノ酸などが単独または組み合
わせて用いられる。そのほか、必要に応じて食
塩、塩化カリ、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウ
ム、燐酸二水素カリウム、燐酸水素二カリウム、
硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫
酸亜鉛、硫酸銅などの無機塩類を加える。さらに
使用菌の生育やテトロカルシンＥ―１およびテト
ロカルシンＥ―２の生産を促進する微量成分例え
ばビタミンB1、ビオチンなどを適当に添加する
ことができる。 培養法としては、液体培養法、とくに深部撹拌
培養法がもつとも適している。培養温度は25〜40
℃、特に28〜38℃が最適で培地のPHはアンモニア
水や炭酸アンモン溶液などを添加して、PH４〜
10、好ましくは６〜８で培養を行なうことが望ま
しい。 液体培養で通常１日ないし７日培養を行なう
と、目的物質が培養液中に生成蓄積される。培養
液中の生成量が最大に達したときに培養を停止
し、菌体を別して得られる培養液中より目的物
を単離精製する。 培養液からのテトロカルシンＥ―１およびテ
トロカルシンＥ―２の単離精製には微生物代謝生
産物をその培養液から単離するためにふつう用い
られる分離・精製の方法が利用される。 例えば、培養生産物を培養液と菌体とに分離
し、培養液そのまま（PH6.0）非イオン性多孔性
樹脂（商品名「HP―20」三菱化成製など）を通
過させ、抗菌活性を有する成分を吸着させた後、
メタノール、アセトン、酢酸エチルなどを用いて
吸着物質を脱着させる。この脱着液を濃縮乾固
し、水に溶解して活性炭素に吸着させる。活性炭
素からはアセトン、酢酸エチルなどの有機溶媒で
活性物質を溶出する。この溶出液を濃縮乾固しク
ロロホルムに溶解させ、予めクロロホルムに懸濁
後カラム充填したシリカゲルを用いてクロマトグ
ラフイーを行う。まずクロロホルムを通塔するこ
とによつて不純物である黄色系の色素が除去され
る。次いでクロロホルム：メタノール（98：２、
容量比）の混合液で活性物質を溶出することがで
きる。ここではテトロカルシンＡ、テトロカルシ
ンＢ、テトロカルシンＣ、テトロカルシンＤ、テ
トロノライド類化合物Ｆ―１、テトロカルシンＥ
―１、テトロカルシンＥ―２の混合物として溶出
させる。これらの分離を行うには、この活性画分
を濃縮乾固し、少量のクロロホルム：メタノー
ル：水（３：１：１、容量比）の混合物の下層溶
媒に溶解する。これを前記下層溶媒で充填したシ
リカゲルのカラムに通塔し、同じ溶媒で溶出する
とテトロカルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―
２、テトロノライド類化合物Ｆ―１、テトロカル
シンＡ、テトロカルシンＢ、テトロカルシンＤ、
テトロカルシンＣの順に溶出されてくる。テトロ
カルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―２の多く含
まれる画分をとり、それぞれをさらに再クロマト
処理に付すか、またはシリカゲル薄層クロマトで
処理することによつてテトロカルシンＥ―１、Ｅ
―２をそれぞれ得ることができる。薄層クロマト
による場合はシリカゲル薄層（商品名DC
FertigPlatten Kieselgel 60F254，E.Merck）を
用い、クロロホルム：メタノール（９：１、容量
比）で展開後相当する部分をかきとり、該展開溶
媒もしくはアセトン等で溶出し、溶出液を濃縮乾
固する。 さらに必要に応じ抽出、晶析等の手段を加えて
もよい。また分離を完全にするために、上記と同
じクロマトグラフイーを繰返すかあるいはセフア
デツクスLH―20（Pharmacia Fine Chemicals
Inc.，スウエーデン）のカラムに通塔する操作を
加えてもよい。 次にテトロカルシンＥ―１、テトロカルシンＥ
―２の加水分解による製造法について述べる。 テトロカルシンＡ，Ｂ，Ｄのいずれかまたはこ
れらの混合物（その組成は問わない）を塩酸、硫
酸などの酸水溶液と有機溶媒（アセトンなど）の
混合物中で加水分解する。加水分解は例えば実施
例３に示したごとき条件下に行えばよい。加水分
解後溶媒を留去し、残水溶液を酢酸エチルで抽出
し、酢酸エチル層を濃縮乾固後、クロロホルムに
溶解する。これを予めクロロホルムで充填したシ
リカゲルのカラムに通塔し、クロロホルム：メタ
ノール（100：0.5、容量比）で展開するとテトロ
カルシンＥ―１、テトロカルシンＥ―２の順に溶
出されてくる。これを再クロマト法、薄層クロマ
ト法などでさらに精製して純粋なテトロカルシン
Ｅ―１、テトロカルシンＥ―２を得ることができ
る。 ここでは単一物質から２種の物質テトロカルシ
ンＥ―１、テトロカルシンＥ―２が得られてき
た。その後の実験からテトロカルシンＥ―１が本
来母化合物中に含まれていて、加水分解中および
分解後溶液中に存在しているときに隣酸する水酸
基にアセチル基が転移することによつてテトロカ
ルシンＥ―２が生成したと考えられる。また一方
テトロカルシンＥ―２もまたアセチル基の転移に
よつてテトロカルシンＥ―１に変ることができ
る。このようなアセチル基の転移は、テトロカル
シンＥ―１およびテトロカルシンＥ―１の純品を
溶液にすると徐々に変換をしてテトロカルシンＥ
―１とＥ―２の混合物ができることからも証明さ
れた。さらに同様の反応が培養液中でも起つてい
ると容易に推定できる。 次に実施例をあげて本発明化合物を具体的製法
を示す。 実施例中、物質の動向は、バチルス・ズブチリ
スNo.10707を用いるバイオアツセイまたはTLCク
ロマトスキヤンナー法（島津クロマトスキヤンナ
ーCS910）（紫外部反射法、ダブルビーム、シン
グルスキヤン、波長サンプル260nm、リフアレン
ス350nm）を用いて追跡した。 実施例 １ 種菌としてミクロモノスポラ・チヤルセア
KY11091を用いた。該菌株を２容量の三角フ
フラスコ中の種培地〔KCl ４ｇ／MgSO4・
7H2O0.5ｇ／、KH2PO41.5ｇ／、硫安5.0
ｇ／、シユークロース20ｇ／、フラクトース
10ｇ／、グルコース10ｇ／、コーンスチーブ
リカー5.0ｇ／、CaCO320ｇ／PH7.0〕300ml
に植菌し、30℃で48時間振とう（220r.p.m）培養
した。かくして得られた種培養液を30容量のジ
ヤーフアーメンター中の下記組成の発酵培地15
に５％（容量）の割合で移し、30℃で通気撹拌方
式（回転数250r.p.m通気量15／min）により培
養を行つた。 発酵培地組成：可溶性デンプン60ｇ／、大豆
粕粉末10ｇ／、ペプトン10ｇ／、
K2HPO40.5ｇ／、MgSO4・7H2O0.5
ｇ／、CaCO31ｇ／、PH7.2（殺菌前）
にNaOHで調整する。 培養中培地のPHは制御しないで、72時間培養し
た。培養液より菌体および沈殿物を別し、別液
13を得た。まず液13を１の非イオン性多
孔性樹脂（商品名「HP―10」三菱化成製）に通
塔して活性物質を吸着させ水洗後さらに30％
（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液で洗い不純物を除去す
る。次いでアセトンで溶出する。アセトン画分を
濃縮乾固し、30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液に溶
解する。この溶液を活性炭500mlを充填したカラ
ムに吸着させる。30％（Ｖ／Ｖ）アセトン水溶液
で洗滌後アセトンで活性画分を溶出する。この操
作で不純物として存在する色素の大部分を除くこ
とができる。活性画分を濃縮乾固し、少量のクロ
ロホルム（約10ml）に溶解する。このクロロホル
ム溶液を予めクロロホルムを溶媒として充填した
シリカゲル〔商品名：クロマトグラフ用シリカゲ
ル（100〜200メツシユ）関東化学、以下も同じ〕
（500ml）のカラムに静かに乗せ、まずクロロホル
ムで充分（約２）に洗い、次いでクロロホル
ム：メタノール（98：２、容量比）で溶出を行う
とテトロカルシンＡ〜Ｄ、テトロノライド類化合
物Ｅ―１、テトロカルシンＥ―１、Ｅ―２が混合
して溶出される。これを濃縮乾固し、少量のクロ
ロホルム：メタノール：H2O（３：１：１、容量
比）の混合物の下層溶媒に溶解する。これを前記
下層溶媒で充填したシリカゲルカラム（500ml）
に静かに乗せ、同じ溶媒で展開するとテトロカル
シンＥ―１，Ｅ―２、テトロノライド類化合物Ｆ
―１、テトロカルシンＡ、Ｂ、Ｄ、Ｃの順に溶出
されてくる。さらに同様にして再クロマトを行つ
て、テトロカルシンＥ―１、Ｅ―２をそれぞれ主
成分とする分画を濃縮乾固する。これをアセトン
またはクロロホルムに溶解し、シリカゲル薄層を
用い、クロロホルム：メタノール（９：１、容量
比）で展開した。Ｅ―１に相当する部分もしくは
Ｅ―２に相当する部分をかきとり、それぞれを展
開溶媒又はアセトンで溶出後、濃縮乾固し酢酸エ
チルに溶解する。これを0.1N HClと振りまぜ溶
媒層を取り、濃縮乾固する。このとき乾固したも
のを酢酸エチルに再溶解後ヘキサンで沈殿させる
ことによつても粉末が得られる。このようにして
約５mgのテトロカルシンＥ―１と約３mgのテトロ
カルシンＥ―２を得た。ここで得たテトロカルシ
ンＥ―１，Ｅ―２の理化学的性質、抗菌活性は前
記の通りである。 実施例 ２ 実施例１において、発酵培地組成を次のものに
代えて行う以外は実施例１と同様に培養を行つ
た。 発酵培地組成：可溶性デンプン40ｇ／、大豆
粕粉末30ｇ／、デキストリン５ｇ／、
コーンスチーブリカー５ｇ／、
K2HPO40.5ｇ／、MgSO4・7H2O0.5
ｇ／、CaCO31ｇ／、PH7.0（殺菌前）
にNaOHで調整する。 培養液を、実施例１と同様に処理して、テトロ
カルシンＥ―１，Ｅ―２をそれぞれ約４mg、約２
mg得た。これらの理化学的性質、抗菌活性は実施
例１で得られたものとよく一致した。 実施例 ３ テトロカルシンＡ、Ｂ、Ｄの混合物（組成比は
８：1.7：0.3、重量比）３ｇを50％アセトン２
に溶解し、PH20にHClで調整した後、50℃で17時
間還流して分解させた。分解液を減圧下で濃縮
し、アセトンを除去した後、500mlの酢酸エチル
を加えて抽出した。抽出液を濃縮乾固し、クロロ
ホルムに溶解し、予めクロロホルムで充填したシ
リカゲルのカラム（500ml）に、静かに乗せ、ク
ロロホルム：メタノール（100：0.5、容量比）展
開した。テトロカルシンＥ―１，Ｅ―２を含む画
分を集め、それぞれ濃縮後石油エーテルで沈殿さ
せた。この方法でテトロカルシンＥ―１，Ｅ―２
をそれぞれ150mg、160mgを得た。これらの理化学
的性質、抗菌活性などは実施例１で得られたもの
とよく一致した。
第１図はテトロカルシンＥ―１の赤外部吸収ス
ペクトルを示す。第２図はテトロカルシンＥ―１
のPMRスペクトルを示す。第３図はテトロカル
シンＥ―２の赤外部吸収スペクトルを示す。第４
図はテトロカルシンＥ―２のPMRスペクトルを
示す。
ペクトルを示す。第２図はテトロカルシンＥ―１
のPMRスペクトルを示す。第３図はテトロカル
シンＥ―２の赤外部吸収スペクトルを示す。第４
図はテトロカルシンＥ―２のPMRスペクトルを
示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 一般式 （式中、R1およびR2は水素原子またはアセチ
ル基を表わす。ただし、R1が水素原子の場合は
R2はアセチル基、R2が水素原子の場合はR1はア
セチル基とする。）で表わされるテトロカルシン
類およびその塩。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11437380A JPS5738796A (en) | 1980-08-20 | 1980-08-20 | Tetrocarcins and their preparations |
| US06/252,062 US4346075A (en) | 1980-06-14 | 1981-04-08 | Antibiotic DC-11 and process for production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11437380A JPS5738796A (en) | 1980-08-20 | 1980-08-20 | Tetrocarcins and their preparations |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5738796A JPS5738796A (en) | 1982-03-03 |
| JPS6338038B2 true JPS6338038B2 (ja) | 1988-07-28 |
Family
ID=14636067
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11437380A Granted JPS5738796A (en) | 1980-06-14 | 1980-08-20 | Tetrocarcins and their preparations |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5738796A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11643701B2 (en) | 2019-01-29 | 2023-05-09 | Jfe Steel Corporation | High-strength hot-dip galvanized steel sheet and manufacturing method therefor |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1110960A4 (en) * | 1998-08-31 | 2001-12-12 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Apoptosis inducing agents |
-
1980
- 1980-08-20 JP JP11437380A patent/JPS5738796A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11643701B2 (en) | 2019-01-29 | 2023-05-09 | Jfe Steel Corporation | High-strength hot-dip galvanized steel sheet and manufacturing method therefor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5738796A (en) | 1982-03-03 |
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