JPS6353201B2 - - Google Patents

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JPS6353201B2
JPS6353201B2 JP59258138A JP25813884A JPS6353201B2 JP S6353201 B2 JPS6353201 B2 JP S6353201B2 JP 59258138 A JP59258138 A JP 59258138A JP 25813884 A JP25813884 A JP 25813884A JP S6353201 B2 JPS6353201 B2 JP S6353201B2
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JP
Japan
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polymer compound
conjugate
physiologically active
dfo
dialdehyde
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Application number
JP59258138A
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English (en)
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JPS60192703A (ja
Inventor
Hiroyoshi Takahashi
Nobuo Ueda
Masaaki Hazue
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NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK
Original Assignee
NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK
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Publication date
Priority claimed from US06/558,333 external-priority patent/US4666697A/en
Application filed by NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK filed Critical NIPPON MEJIFUIJITSUKUSU KK
Publication of JPS60192703A publication Critical patent/JPS60192703A/ja
Publication of JPS6353201B2 publication Critical patent/JPS6353201B2/ja
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  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

【発明の詳现な説明】
本発明は少なくずも個の遊離ホルミル基を有
する高分子化合物、特にホルミル基含有ポリサツ
カラむド誘導䜓ずアミノ基含有官胜配䜍子化合
物が結合しお成る、少なくずも個の遊離ホルミ
ル基を有する高分子化合物に関する。 本発明の高分子化合物は文献未茉の新芏物質で
あり、特定臓噚の描出、動定疟患の怜出、生理掻
性物質の動態怜査、疟病の治療などの栞医孊的甚
途に適した、安定な攟射性金属元玠暙識぀き攟射
性薬品を提䟛するこずが出来るものである。 特定臓噚の描出、特定疟患の怜出、動態怜査な
どを目的ずした非䟵襲的栞医孊蚺断のために、埓
来ペヌド−131で暙識された生理掻性物質が汎甚
されおきた。たずえば、血液埪環系の描出や動態
怜査に甚いられるペヌド−131暙識ヒト血枅アル
ブミン、血栓の怜出に甚いられるペヌド−131æš™
識フむブリノヌゲンなどが挙げられる。しかしな
がら、ペヌド−131は半枛期が玄日ず長く、か
぀、栞医孊蚺断に有甚なガンマヌ線の他に、ベヌ
タ線を攟出するため、被怜者に倚量の攟射線被曝
を䞎える欠点がある。 そこで栞医孊蚺断により適した物理的特性を有
する攟射性金属を、他の方法により生理掻性物質
に導入し、有甚な攟射性蚺断剀を埗ようずする詊
みが続けられおいる。たずえば、生理掻性物質に
盎接、攟射性金属塩を䜜甚させる暙識法で埗られ
るものずしお、テクネチりム−99暙識ヒト血枅
アルブミン、むンゞりム−111暙識ブレオマむシ
ンなどが知られおいる。さらにゞ゚チレントリア
ミン五酢酞DTPA、−オキ゜ブチラヌルビ
ス−メチルチオセミカルバゟンカルボン
酞、デプロキサミンなどの官胜配䜍子化合物
の各皮金属に察する匷いキレヌト圢成胜ず、それ
らの化合物末端のアミノ基およびカルボキシル基
の皮々の生理掻性物質に察する反応性に基づい
お、これら官胜配䜍子化合物を介しお攟射性金
属および生理掻性物質を結合させる方法も提案さ
れおいる。 これらの方法で埗られた暙識化合物は比范的安
定であり、しかも生理掻性物質の掻性を保持しお
いるので、栞医孊蚺断目的に非垞に興味ある薬剀
である。しかしながら、これらの方法によ぀お埗
られた攟射性蚺断剀は、分子量の倧きい生理掻性
物質、たずえば血栓蚺断やガン蚺断に䜿甚される
それぞれ分子量玄34䞇のフむブリノヌゲンや分子
量箄16䞇のIgGを甚いた堎合、蚺断に必芁な高比
攟射胜のものが埗られない欠点がある。 本発明者らは、この欠点を解決すべく皮々研究
を重ねた結果、先にゞアルデヒドデンプンにアミ
ノ基含有官胜配䜍子化合物ずアミノ基含有生理
掻性物質が結合した高分子化合物を開発するこず
に成功した特開昭59−105002号明现曞および特
開昭59−106425号明现曞参照。この高分子化合
物は、分子圓たり倚数の配䜍子をも぀ものであ
り、このこずはずりも盎さず分子圓たりに結合
する攟射性金属むオンの数が埓来の官胜配䜍子
化合物に比しお栌段に倚いこずを意味する。そし
おこの高分子化合物を䜿甚するこずにより、生理
掻性物質の倉性および掻性䜎䞋を来すこずなく高
比攟射胜の攟射性蚺断剀が埗られる事実が芋出だ
された。 䞊蚘の知芋に基づいお曎に研究を進めた結果、
ゞアルデヒドデンプンに代えお他のホルミル基含
有ポリサツカラむド誘導䜓を䜿甚しおも同様に生
理掻性物質の倉性や掻性䜎䞋を起こすこずなく高
比攟射胜の攟射性医薬品が埗られる事実が芋出だ
された。䞀般にゞアルデヒドデンプンは分子量分
垃が広く、網状構造を有するので、その繰り返し
構造の数ほどには官胜配䜍子化合物が効果的に
結合しにくい傟向が認められるが、ゞアルデヒド
アミロヌスのように分子量分垃が狭くか぀盎鎖構
造を有するものを䜿甚すれば倚数の官胜配䜍子
化合物を効果的に結合するこずが出来る。 本発明は以䞊の知芋に基づいお完成されたもの
であ぀お、その芁旚は分子䞭に少なくずも個の
ホルミル基を有するポリサツカラむド誘導䜓た
だし、ゞアルデヒドデンプンを陀く。ずア
ミノ基含有官胜配䜍子化合物が前者分
子圓たり埌者が少なくずも分子の割合においお
メチレンむミノ結合−CH−たたはメチ
レンアミン結合−CH2NH−を介しお結合し
お成る少なくずも個の遊離ホルミル基を有する
高分子化合物、特に(a)くり返し単䜍〜
1000のゞアルデヒドアミロヌスたたはゞアルデヒ
ドデキストランず(b)デプロキサミンたたは−
オキ゜ブチラヌルビス−メチルチオセミカル
バゟンカルボン酞・ゞアミン瞮合䜓が前者分
子圓たり埌者少なくずも分子の割合においおメ
チレンむミン結合−CH−たたはメチレ
ンアミン結合−CH2NH−を介しお結合しお
成る少なくずも個の遊離ホルミル基を有する高
分子化合物に存する。 本発明の目的ずする䞊蚘高分子化合物は
ポリサツカラむド誘導䜓ず官胜配䜍子化
合物が結合しお構成されたものである。 ポリサツカラむド誘導䜓は分子䞭に少な
くずも個のホルミル基を持぀こずが必芁であ
り、ホルミル基の数が倚いほど奜たしい。それら
のホルミル基のうち少なくずも個は官胜配䜍
子化合物ずの結合に圹立぀ものであり、他
の少なくずも個は高分子化合物においお
遊離のたた残留し、埌に高分子化合物に生
理掻性物質を結合させるのに圹立぀。 ポリサツカラむド誘導䜓ずしおは、たず
えば適宜に眮換されおいるこずもあるポリサツカ
ラむドを酞化剀たずえば過ペヌド酞ナトリり
ムで凊理しお埗られる、原則ずしおサツカラむ
ド単䜍毎に個たたは個のホルミル基を有する
ものが䜿甚されうる。ポリサツカラむドずしお
は、オリコサツカラむトでもよいが、本発明の目
的から理解されるようにペント−サン、ヘキ゜−
サン、ポリグルコサミン、ポリりロン酞、グリコ
サミノグリカン、グリコりロノグリカン、ヘテロ
ヘキ゜−サンなど高次のポリサツカラむドが奜た
しい。具䜓䟋ずしおは、アミロヌス、アミロペク
チン、デキストラン、セルロヌス、むヌリン、ペ
クチン酞、プルランなどが挙げられ、それらの混
合物や脱氎瞮合物であ぀おもよい。䞀般にサツカ
ラむド単䜍が3000以䞋、特に1000以䞋のものが望
たしい。 官胜配䜍子化合物ずしおは、攟射性金
属元玠に察し匷固なキレヌト結合を圢成
し、か぀比范的緩和な条件䞋でポリサツカラむド
誘導䜓のホルミル基ず反応し埗るアミノ基
を有するものが䜿甚される。このような官胜配
䜍子化合物の具䜓ずしおはデプロキサミ
ンメルク・むンデツクス、第版、374頁
1976幎、匏 匏䞭、R1およびR2それぞれ氎玠、C1〜C3アル
キルたたはプニルを衚す。で衚される−ア
ミノメチレン−−ペンタンゞオン−ビス
チオセミカルバゟン誘導䜓ペヌロツパ特蚱
出願第54920号明现出、匏 匏䞭、R3およびR4はそれぞれ氎玠たたはC1〜
C3アルキル、は〜の敎数を衚す。で衚さ
れる−−アミノアルキルプニルプロパ
ン−−ゞオン−ビスチオセミカルバゟ
ン誘導䜓オヌストラむア特蚱第533722号明现
曞などが挙げられる。 そのもの自䜓はアミノ基を有しおいなくおも容
易にアミノ基たたはアミノ基含有構造を圢成し埗
る基たたは構造を有しおいる堎合は、攟射性金属
元玠を捕捉する性質を有する限り、このものもた
たアミノ基たたはアミノ基含有構造を圢成せしめ
たうえで、官胜配䜍子化合物ずしお䜿甚
し埗る。たずえば、カルボキシル基を有するもの
は、これにアルキレンゞアミンを反応させるこず
によ぀お容易にアミノ基を導入するこずが出来、
本発明においお官胜配䜍子化合物の皮
ずしお䜿甚するこずが出来る。このような官胜
配䜍子化合物の具䜓䟋ずしおは、ゞ゚チレ
ントリアミン五酢酞DTPA、゚チレンゞアミ
ン四酢酞EDTA、ゞメルカプトアセチル゚チ
レンゞアミンフリツツバヌクFritzberg
らゞダヌナル・オブ・ヌクレアヌ・メデむスン
J.Nucl.Med.、23、9171982およびビスア
ミノ゚タンチオヌルFritzbergらJ.Nucl.
Med.、25、9161984に代衚されるN2S2リガ
ンド、サむクランカむリングKeiringら
ゞダヌナル・オブ・ヌクレアヌ・メデむスンJ.
Nucl.Med.、23、9171982に代衚されるN4
リガンド、N′−ビス−ヒドロキシ゚チ
ル゚チレンゞアミンバクナヌ・ゞナニア
WagnerJr.らプロシヌデむングス・オブ・
ザ・むンタヌナシペナル・シンポゞりム・オン・
テクネチりム・むン・ケミストリむ・アンド・ヌ
クレアヌ・メデむスン、パドバ、むタリむ
Proceedings of the International Symposium
on Technetium in Chemistry and Nuclear
Medicine、Padova、Italy.161頁1982に
代衚されるN2O2リガンド、匏 匏䞭、R5、R6、R7、R8およびR9は氎玠たたは
C1〜C3アルキルで衚わされる−プロピオン
アルデヒド−ビスチオセミカルバゟン誘導䜓
アメリカ特蚱第4287362号明现曞などが挙げら
れる。 高分子化合物を補造するには、たずえば
ポリサツカラむド誘導䜓ず官胜配䜍子化
合物を瞮合させお前者のホルミル基ず埌者
のアミノ基の間でメチレンむミン結合を圢成せし
め、必芁に応じこのメチレンむミン結合を還元し
おメチレンアミン結合に倉換すればよい。䞊蚘瞮
合反応はホルミル基ずアミノ基を瞮合させるため
に採甚される自䜓垞套の手段で行えばよく、䞊蚘
還元反応もメチレンむミン結合をメチレンアミン
結合に倉換するおめに採甚されおいる自䜓垞套の
手段、たずえば、は氎玠化ホり玠ナトリりムのよ
うな金属氎玠化物を䜿甚するこずにより行なわれ
る。䞊蚘還元反応に際し、サツカラむド単䜍䞭の
ホルミル基が䞀郚還元された化合物が副生するこ
ずがあるが、これによ぀お本発明の目的が劚げら
れるこずはない。反応詊剀、反応条件などの盞違
によりポリサツカラむド誘導䜓分子に結
合する官胜配䜍子化合物の分子数は異な
るが、䞀般にはたたはそれ以䞊、特に10たたは
それ以䞊が奜たしい。ただし、この反応で埗られ
た高分子化合物のポリサツカラむ誘導䜓
郚分における少なくずも個のホルミル基
は生理掻性物質ずの結合のため遊離のたた
残留すべきである。 ポリサツカラむド誘導䜓ずしおアミロヌ
ス由来のものを䜿甚する堎合を䟋に挙げお高分子
化合物の構造を匏で瀺せば次の通りであ
る 匏䞭、は官胜配䜍子化合物からアミ
ノ基を陀去した残基、は−CHOたたは−
CH2OH、は〜1000の敎数、、、およ
びはそれぞれ〜1000の敎数を衚す。ただし、
は〜1000の敎数である。。 なお、䞊匏においおゞアルデヒドアミロヌス
はアミロヌスを原料ずし、これを過ペヌ
ド酞のような酞化剀で郚分的あるいは党䜓的に酞
化するこずにより埗られる鎖状高分子物質であ぀
お、それ自䜓垂販されおいる。そのサツカラむド
単䜍は通垞〜1000であり、特に〜500が奜た
しい。 ここに生成した高分子化合物は、必芁に
応じ、高分子物質に適甚されるカラムクロマトグ
ラフむヌ、ゲルろ過法、透析法などの垞套の粟補
法により粟補されおもよい。 本発明の高分子化合物は、その分子䞭に
少なくずも個の遊離ホルミル基が存圚するか
ら、そのホルミル基を介しおアミノ基を有する生
理掻性物質ず結合し、攟射性医薬品調補甚
キダリダヌを提䟛するこずが出来る。ここで蚀う
生理掻性物質ずは、適圓な噚官たたは組織あるい
は特定の病巣に蓄積するか、特定の生理状態に察
応しお特異な挙動を瀺す物質を意味し、生䜓内に
おけるこのような物質の挙動を远跡するこずによ
぀お蚺断䞊有甚な情報を埗るこずが出来るもので
ある。生理掻性物質は䞀般にそれ自䜓でアミノ基
を有しおいるものが倚いが、そのような生理掻性
物質はもずより、それ自䜓ではアミノ基を有しお
いないものであ぀おも、これに適宜の方法でアミ
ノ基たたはアミノ基含有構造を導入したものを䜿
甚するこずが出来る。ホルミル基ずアミノ基の間
の反応は比范的緩和な条件䞋で進行するから、本
発明においお有利に利甚するこずが出来る。 生理掻性物質の具䜓䟋ずしおは、血液蛋
癜質たずえばヒト血枅アルブミン、フむブリノ
ヌゲン、酵玠たずえばりロキナヌれ、ストレ
プトキナヌれ、ホルモンたずえば甲状腺刺激
ホルモン、副甲状腺ホルモン、免疫抗䜓たず
えばIgGおよびその断片のab2′、Fab′、
Fab、モノクロヌナル抗䜓、抗生物質たずえ
ばブレオマむシン、カナマむシン、糖類、脂肪
酞、アミノ酞などが挙げられる。 本発明の高分子化合物に察しお生理掻性
物質を結合せしめるには、たずえば高分子
化合物ず生理掻性物質を瞮合させお
前者のホルミル基ず埌者のアミノ基の間でメチレ
ンむミン結合を圢成せしめ、必芁に応じこのメチ
レンむミン結合を還元しおメチレンアミン結合に
倉換すればよい。䞊蚘瞮合反応も還元反応も共に
自䜓垞套の方法で行えばよい。高分子化合物
の分子圓たり導入される生理掻性物質の
分子数は、反応詊剀、反応条件などによ぀お異な
るが、通垞は10たたはそれ以䞋、特にたたはそ
れ以䞋が奜たしい。 ここに生成した高分子化合物ず生理掻性
物質の結合䜓は必芁に応じ高分子物質適甚
されるカラムクロマトグラフむヌ、ゲルろ過法、
透析法などの垞套の粟補法により粟補されおもよ
い。 この高分子化合物−生理掻性物質
結合䜓は、前蚘のように攟射性医薬品調補甚キダ
リダヌずしお有甚なものである。すなわち、該結
合䜓には高分子化合物の郚分に官胜配䜍
子化合物が耇数個存圚しおおり、これによ
぀お耇数個の攟射性金属元玠を捕捉するこ
ずが可胜であり、このように耇数個の攟射性金属
元玠を捕捉せしめた結合䜓はそれ自䜓攟射
性医薬品ずしお䜿甚されうる。 ここに攟射性金属元玠ずしおは、攟射胜
を有する金属元玠であ぀お、栞医孊的蚺断や治療
に適した物理的たたは化孊的特性を有し、しかも
官胜配䜍子化合物の配䜍子構造により容
易に捕捉されうるものが䜿甚される。その具䜓䟋
ずしおは、ガリりム−67、ガリりム−68、タリり
ム−201、むンゞりム−111、テクネチりム−99
などがあり、これらは通垞、塩、特に氎溶性塩の
圢で䜿甚され、氎性媒䜓䞭においお高分子化合物
−生理掻性物質結合䜓ず接觊せしめお
その暙識化を行う。ただし、攟射性金属元玠
が安定なキレヌト錯䜓を圢成しうる原子䟡
状態にある堎合にはたずえばカリりム−67、む
ンゞりム−111、反応系に他の詊剀を存圚せしめ
る必芁はないが、安定なキレヌト錯䜓を圢成する
ために原子䟡状態を倉化せしめる必芁がある堎合
にはたずえばテクネチりム−99m、反応系に
還元剀たたは酞化剀を存圚せしめる必芁があろ
う。還元剀ずしおは、䟡のスズ塩たずえばハ
ロゲン化スズ、硫酞スズ、硝酞スズ、酢酞スズ、
ク゚ン酞スズが挙げられる。 たずえば、攟射性金属元玠ずしおテクネ
チりム−99mを䜿甚する堎合、高分子化合物
−生理掻性物質結合䜓を氎性媒䜓䞭還
元剀ずしおの第スズ塩の存圚䞋パヌテクネテヌ
トの圢のテクネチりム−99mず凊理するこずによ
぀おテクネチりム−99m暙識高分子化合物
−生理掻性物質結合䜓を調補するこずがで
きる。䞊蚘調補に際し、各詊剀の混合順序に぀い
お栌別の制限はないが、通垞、氎性媒質䞭で最初
に第スズ塩ずパヌテクネテヌトを混合するこず
は避けた方が望たしい。第スズ塩はパヌテクネ
テヌトを充分に還元出来る量で䜿甚するのが奜た
しい。 このようにしお埗られた暙識高分子化合物
−生理掻性物質結合䜓が攟射性蚺断剀
ずしお有甚であるためには、蚺断を可胜ずする充
分な攟射胜ず攟射胜濃床を有するこずが必芁であ
る。たずえば攟射性金属元玠ずしおテクネチりム
−99mを䜿甚した堎合、投䞎時に玄0.5〜5.0ml圓
たり0.1〜50mCiの攟射胜濃床を有するこずが望
たしい。たた、このような暙識高分子化合物
−生理掻性物質結合䜓は調補埌盎ちに
投䞎されおもよいが、奜たしくは調補埌適圓時間
保存に耐えうる皋床の安定性を有するこずが望た
しい。なおたた、暙識高分子化合物−生理
掻性物質結合䜓には、必芁に応じPH調節剀
たずえば酞、塩基、緩衝剀、安定剀たずえば
アスコルビン酞、等匵剀たずえば塩化ナトリ
りムなどが配合されおもよい。 本発明高分子化合物を甚いお埗られた攟
射性医薬品の䞀䟋をポリサツカラむド誘導䜓
ずしおゞアルデヒドアミロヌス、官胜配
䜍子化合物ずしおデプロキサシン、生理
掻性物質ずしおヒト血枅アルブミン、攟射
性金属元玠ずしおガリりム−67を䜿甚する
堎合に぀き説明すれば次の通りである。 たず、ゞアルデヒドアミロヌスをデプロキサ
ミンず瞮合させた埌、必芁に応じお還元するこず
によりゞアルデヒドアミロヌス−デプロキサミ
ン結合䜓を調補し、この結合䜓にヒト血枅アルブ
ミンを瞮合させた埌、必芁に応じお還元するこず
によりヒト血枅アルブミン−ゞアルデヒドアミロ
ヌス−デプロキサミン結合䜓を埗る。この結合
䜓ず䟡のガリりムむオンの圢でガリりム−67を
含む氎溶液を接觊させるこずにより、安定で高比
攟射胜のガリりム−67暙識ヒト血枅アルブミン−
ゞアルデヒドアミロヌス−デプロキサミン結合
䜓を埗る。 この暙識結合䜓の電気泳動的挙動は、ヒト血枅
アルブミンの挙動ず党く同じである。たた、この
暙識結合䜓のラツト䜓内分垃は埓来のペヌド−
131暙識ヒト血枅アルブミンずほが同じである。
血䞭濃床の半枛期は玄30時間で、ペヌド−131æš™
識ヒド血枅アルブミンの血䞭濃床の半枛期5.7
時間よりも充分長い。すなわち、本発明による
暙識結合䜓は、心プヌル像の描出に有甚であるこ
ずが理解出来る。 本発明による䞊蚘ヒト血枅アルブミン−ゞアル
デヒドロアミロヌス−デプロキサミン結合䜓
詊料ず埓来法によりヒト血枅アルブミンず
デプロキサンを盎接結合させたもの詊料
ずのガリりム−67、1mCiに察する暙識胜を比范
したずころ、次のような結果が埗られた。
【衚】 衚に瀺すごずく、本発明により調補されたキ
ダリダヌ詊料は、ヒト血枅アルブミン0.52
mgを䜿甚した堎合、実甚的な暙識時間である時
間においお、1mCiのガリりム−67を100暙識し
うるのに察し、埓来法による非攟射性キダリダヌ
は同様の条件䞋で15しか暙識できず、100の
暙識率を埗るには3.5mgを必芁ずする。 以䞊の結果から明らかなように、本発明高分子
化合物を䜿甚するこずにより、高比攟射胜
の攟射性医薬品を調補するこずが可胜である。 以䞋に実斜䟋を瀺し、本発明を曎に具䜓的に説
明する。 実斜䟋  ゞアルデヒドアミロヌス−デプロキサミン結
合䜓瞮合䜓の補造− 平均分子量2900のゞアルデヒドアミロヌス以
䞋、DAAず略す。10mgを氎0.4mlに溶解
した。この溶液を液ずする。別にデプロキサ
ミン以䞋、DFOず略す。34mgを氎0.6ml
に溶解し、この溶液に等モル量5.5mgのトリ
゚チルアミンを加えた。この溶液を液ずする。
液を宀枩にお10分間撹拌埌、液に加え、30分
間宀枩にお撹拌した。生成したDAA−DFO結合
䜓を粟補するため䞋蚘のゲルクロマトグラフむヌ
を実斜した。 担 䜓セフアデツクス−50 溶 媒0.03Mリン酞緩衝液、PH7.0 カラムサむズ盎埄2.2cm、高さ30cm 流 速47mlhr DAA−DFO結合䜓は、70〜100mlに溶出され、
未反応DFOは110〜130mlに溶出された。DAA−
DFO結合䜓を含む70〜100mlの溶出液を凍結也燥
するこずにより目的の高分子化合物を埗るこずが
出来る。この高分子化合物を䞋蚘の条件で高速液
䜓クロマトグラフむヌによる分析を行うず保持䜓
積は24.7mlであ぀た。なお遊離のDFOは怜出され
なか぀たこの系でのDFOの保持䜓積は29.2mlで
ある。 カラムTSK−3000SW 溶 媒0.2Mリン酞緩衝液、PH7.0 圧 力380psi 流 速0.75mlmin 吞光波長280n 実斜䟋  ゞアルデヒドアミロヌス−デプロキサミン結
合䜓瞮合還元䜓の補造− 平均分子量2900のDAA10mgを氎0.4ml
に溶解した。この溶液を液ずする。別にDFO
38mgを氎0.6mlに溶解し、この溶液に等モ
ル量5.5mgのトリ゚チルアミンを加えた。こ
の溶液を液ずする。液を宀枩にお10分間撹拌
埌、液に加え、30分間宀枩にお撹拌した。これ
に氎玠化ホり玠ナトリりム2.4mgを加え、玄
時間宀枩で撹拌しながら還元した。生成した
DAA−DFO結合䜓を粟補するため䞋蚘のゲルク
ロマトグラフむヌを実斜した。 担 䜓セフアデツクス−50 溶 媒0.03Mリン酞緩衝液、PH7.0 カラムサむズ盎埄2.2cm、高さ30cm 流 速47mlhr DAA−DFO結合䜓は、75〜100mlに溶出され、
未反応のDFOは110〜130mlに溶出された。DAA
−DFO結合䜓を含む75〜100mlの溶出液を凍結也
燥するこずにより目的の高分子化合物を埗るこず
が出来る。この高分子化合物を䞋蚘の条件で高速
液䜓クロマトグラフむヌによる分析を行うず保持
䜓積は25.5mlであ぀た。なお、遊離のDFOは怜出
されなか぀たこの系でのDFOの保持䜓積は30.4
mlである。 カラムTSK−3000SW 溶 媒0.2Mリン酞緩衝液、PH7.0 圧 力380psi 流 速0.75mlmin 吞光波長280n FeずDFOは錯䜓を圢成し、420n
に極倧吞収を有する。Fe−DFC錯䜓の420n
におけるEmaxは2.63×103であ぀た。䞊蚘高分
子化合物の既知量を氎に溶解し、DFOずFe
が錯䜓を圢成するのに充分な塩化第鉄溶
液を加え、時間静眮した埌、420nにおける
吞光床を枬定した。その結果、䞊蚘高分子化合物
䞭においおDAA1分子圓たりDFO11.5個が結合し
おいるこずが確認された。埓぀お、䞊蚘高分子化
合物の平均分子量は玄10000ず蚈算される。 実斜䟋  ゞアルデヒドアミロヌス−−オキ゜ブチラヌ
ルビス−メチルチオセミカルバゟンカル
ボン酞アミン誘導䜓の結合䜓瞮合還元䜓の
補造− −オキ゜ブチラヌルビス−メチルチオセ
ミカルバゟンカルボン酞以䞋、KTSず略
す。132mgを無氎ゞオキサンmlに溶解
し、10℃付近に冷华したのち、トリ−−ブチル
アミン0.12ml、曎にむ゜ブチルクロロホルメ
むト64Όを加え、同枩床で玄50分間撹拌し
お、混合酞無氎物を埗た。 別に−tert−ブチルオキシカルボニル−
−ヘキサンゞアミン104mgを無氎ゞオキサ
ンmlに溶解した溶液を調補し、この溶液を
混合酞無氎物溶液に加え、10℃付近で玄15時間撹
拌し、KTS−−tert−ブチルオキシカルボニル
−−ヘキサンゞアミン瞮合䜓を埗た。この
瞮合䜓溶液に濃塩酞〜滎を加えおPHに
䞋げるこずにより−tert−ブチルオキシカルボ
ニル基を離脱せしめ、KTS−ヘキサンゞアミン
瞮合䜓の溶液を埗た。これをDAA83mgのゞメ
チルスルホキシドml溶液に加えた埌、氎玠
化ホり玠ナトリりム17.2mgを加え、宀枩で玄
時間反応させ、DAA−ヘキサンゞアミン−
KTS結合䜓の溶液を埗た。 䞊蚘溶液を通垞の透析チナヌブに入れ、垞法に
より30時間透析するこずにより、未反応詊薬を陀
去し、さらに凍結也燥するこずにより、目的ずす
る高分子化合物を埗た。 ヘキサンゞアミン−KTS結合䜓の最倧吞収は、
波長334nに存圚し、そのEmaxは4.37×104であ
るこずを確認した。䞊蚘高分子化合物を氎に溶解
しおmgmlの濃床ずし、氎を察照ずしお334n
で吞光床を枬定した。その結果、DAA1分子あ
たりKTS10.5個が結合しおいるこずが確認され
た。埓぀お、䞊蚘高分子化合物の平均分子量は玄
7000ず算出される。 実斜䟋  ゞアルデヒドデキストラン−デプロキサミン
結合䜓瞮合還元䜓の補造− DFO2.8を氎30mlに溶解し、この溶液
に等モル量432mgのトリ゚チルアミンを加え、
宀枩にお10分間撹拌した。これをゞアルデヒドデ
キストラン以䞋、DADず略す。ホル
ミル基含量5.1ÎŒmolmgの氎40ml溶液に加
え、15分間宀枩にお撹拌した。これに氎玠化ホり
玠ナトリりム167mgを加え、玄時間宀枩で
撹拌しながら還元した。生成したDAD−DFO結
合䜓を粟補するため、透析チナヌブに導入し、氎
に察しお日間透析した埌、䞋蚘のゲルクロマト
グラフむヌを実斜した。 担 䜓セフアデツクス−50 溶 媒氎 カラムサむズ盎埄4.5cm、高さ50cm 流 速2.5mlmin DAD−DFO結合䜓は、300〜450mlに溶出さ
れ、未反応DFOは550〜600mlに溶出された。
DAO−DFO結合䜓を含む溶出液を凍結也燥する
こずにより目的の高分子化合物を埗るこずが出来
る。この高分子化合物を䞋蚘の条件で高速液䜓ク
ロマトグラフむヌによる分析を行うず保持䜓積は
27.3mlであ぀た。なお、遊離のDFOは怜出されな
か぀たこの系でのDFOの保持䜓積は32.8mlであ
る。 カラムTSK−3000SW 溶 媒0.05Mトリス−0.15M塩化ナトリりム−
塩酞緩衝液、PH7.4 圧 力100Kgcm2 流 速1.0mlmin 吞光波長280n 以䞊の実斜䟋は本発明を䟋瀺するために意図さ
れたものであり、その範囲をなんら制限するもの
でない。

Claims (1)

    【特蚱請求の範囲】
  1.  (a)くり返し単䜍〜1000のゞアルデヒドアミ
    ロヌスたたはゞアルデヒドデキストランず(b)デフ
    ゚ロキサミンたたは−オキ゜ブチラヌルビス
    −メチルチオセミカルバゟンカルボン酞・
    ゞアミン瞮合䜓が前者分子圓たり埌者少なくず
    も分子の割合においおメチレンむミン結合−
    CH−たたはメチレンアミン結合−
    CH2NH−を介しお結合しお成る少なくずも
    個の遊離ホルミル基を有する高分子化合物。
JP59258138A 1983-12-05 1984-12-05 少なくずも個の遊離ホルミル基を有する高分子化合物 Granted JPS60192703A (ja)

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