JPS6354400A - 脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法 - Google Patents
脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法Info
- Publication number
- JPS6354400A JPS6354400A JP19722186A JP19722186A JPS6354400A JP S6354400 A JPS6354400 A JP S6354400A JP 19722186 A JP19722186 A JP 19722186A JP 19722186 A JP19722186 A JP 19722186A JP S6354400 A JPS6354400 A JP S6354400A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- antibody protein
- monomolecular film
- antibody
- film
- water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〈産業上の利用分野〉
本発明は抗体タンパクを固定化する方法に関する。更に
詳しくは、水溶性抗体タンパクを、その抗原−抗体反応
活性を完全に保持しながら固体基板上に該タンパクを高
密度に固定化する方法に閉覆る。
詳しくは、水溶性抗体タンパクを、その抗原−抗体反応
活性を完全に保持しながら固体基板上に該タンパクを高
密度に固定化する方法に閉覆る。
く背景及び従来技術〉
抗体タンパクの抗原−抗体反応を利用した診断技術に於
て、抗体タンパクを固体基板上に固定化する方法がこれ
まで数多く提案されてぎた。これらの内、あるものは、
抗体タンパクのアミノ基又はカルボキシル基と反応又は
吸着結合できる官能基を有する固体表面に固定化するも
のであるが、この場合、固定化のための反応条付の設定
によっては、抗体タンパクの変性や、非特異的反応によ
る活性部位の失活が起りや覆いという問題点がおった。
て、抗体タンパクを固体基板上に固定化する方法がこれ
まで数多く提案されてぎた。これらの内、あるものは、
抗体タンパクのアミノ基又はカルボキシル基と反応又は
吸着結合できる官能基を有する固体表面に固定化するも
のであるが、この場合、固定化のための反応条付の設定
によっては、抗体タンパクの変性や、非特異的反応によ
る活性部位の失活が起りや覆いという問題点がおった。
また、親水性ゲルの中に抗体タンパクを抱き込ませて、
固体基板上に固定化する方法も可能性のある方法である
が、この場合、抗原タンパクがゲル中の抗体タンパクに
接近でき難くなり、抗原−抗体反応を利用した診断材料
としての感度低下を招き易い。こうした方法に対して近
年、水面上に脂質膜を展開し、これに水中から水溶性酵
素（例、カタラーＬ、フエリヂン、ヘミグロビン。
固体基板上に固定化する方法も可能性のある方法である
が、この場合、抗原タンパクがゲル中の抗体タンパクに
接近でき難くなり、抗原−抗体反応を利用した診断材料
としての感度低下を招き易い。こうした方法に対して近
年、水面上に脂質膜を展開し、これに水中から水溶性酵
素（例、カタラーＬ、フエリヂン、ヘミグロビン。
グルコースオキシダーゼ、ｅｔｃ、）や抗体タンパク［
免疫グロブリンＧ （Ｉ（ＪＧ）、 ＩｇＥ、 ｅｔｃ
ｌを吸肴固走化する試みが報告されている［バイオキミ
カ・エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、） ２２５ｉ、 ３
８２ （１９７１）やジャーノール・オブ・セルラー・
バイオケミストリー （Ｊ、 Ｃｅ１ｌ。
免疫グロブリンＧ （Ｉ（ＪＧ）、 ＩｇＥ、 ｅｔｃ
ｌを吸肴固走化する試みが報告されている［バイオキミ
カ・エト・バイオフィジカ・アクタ（Ｂｉｏｃｈｅｍ、
Ｂｉｏ−ｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ、） ２２５ｉ、 ３
８２ （１９７１）やジャーノール・オブ・セルラー・
バイオケミストリー （Ｊ、 Ｃｅ１ｌ。
８ｉ０Ｃ１ｌｅｌ［１，）翻、 ２３９ （１９８５）
等参照］。
等参照］。
これらは確かにタンパクを、その活性を保持したまま固
定化する優れた方法であるが、この方法に於て従来用い
られてきた脂質膜は、スデアリン酸、アラキン酸及びシ
バルミｌ〜イルホスフフ・デジルコリン（ＤＰＰＣ）等
の如く、水に対して可溶＋！（少くとも、１μ９／１ｉ
水の溶解度）のもの、又は水中で二分子膜ベシクルを形
成しやすいもの（ＤＰＰＣ等）であった。従って、水面
上で該膜に吸着された抗体タンパクは、時間が経つにつ
れ、脂ｖ１膜と共に再び水中に再溶解したり、−旦固体
基板上に累積した後でも抗原水溶液に浸漬した際、脱離
しやすいという問題点を有していた。
定化する優れた方法であるが、この方法に於て従来用い
られてきた脂質膜は、スデアリン酸、アラキン酸及びシ
バルミｌ〜イルホスフフ・デジルコリン（ＤＰＰＣ）等
の如く、水に対して可溶＋！（少くとも、１μ９／１ｉ
水の溶解度）のもの、又は水中で二分子膜ベシクルを形
成しやすいもの（ＤＰＰＣ等）であった。従って、水面
上で該膜に吸着された抗体タンパクは、時間が経つにつ
れ、脂ｖ１膜と共に再び水中に再溶解したり、−旦固体
基板上に累積した後でも抗原水溶液に浸漬した際、脱離
しやすいという問題点を有していた。
〈発明の目的〉
本発明者らは、かかる従来技術の欠点を克服し、高い抗
原−抗体反応活性の保持率と、高密度な抗体タンパクの
固定化を可能にすべく鋭意検討の結果、本発明に到達し
たものである。
原−抗体反応活性の保持率と、高密度な抗体タンパクの
固定化を可能にすべく鋭意検討の結果、本発明に到達し
たものである。
〈発明の開示〉
すなわら本発明は、水相面上に展開された炭素原子数１
４へ−２３の長鎖脂肪酸の多価金属塩及び／又はニスデ
ルの単分子膜に当該水相中に溶解した水溶性抗体タンパ
クを接触させることにより当該水相界面で抗体タンパク
−単分子膜復合体を形成させ、それを固体基板上に積層
“することを特徴とする脂質単分子膜により抗体タンパ
クを固定化する方法である。
４へ−２３の長鎖脂肪酸の多価金属塩及び／又はニスデ
ルの単分子膜に当該水相中に溶解した水溶性抗体タンパ
クを接触させることにより当該水相界面で抗体タンパク
−単分子膜復合体を形成させ、それを固体基板上に積層
“することを特徴とする脂質単分子膜により抗体タンパ
クを固定化する方法である。
本発明でいう抗体タンパクとは、抗原−抗体反応を起し
うる水溶性タンパクの総称であり、その分子中に抗原認
識部位（Ｆａｂと略）と疎水性末端部位（ＦＣと略）を
右している。
うる水溶性タンパクの総称であり、その分子中に抗原認
識部位（Ｆａｂと略）と疎水性末端部位（ＦＣと略）を
右している。
かかる抗体タンパクの具体例と（）ては、免疫グロブリ
ンＧ（ＩｇＧと略称） 、 ＩｇＥ 、 ＩｇＨ及びこ
れらの抗体、絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ ）抗体
、ガン胎児性抗Ｄｆｉ （ＣＥＡ）抗体等があげられる
。
ンＧ（ＩｇＧと略称） 、 ＩｇＥ 、 ＩｇＨ及びこ
れらの抗体、絨毛性性腺刺激ホルモン（ＨＣＧ ）抗体
、ガン胎児性抗Ｄｆｉ （ＣＥＡ）抗体等があげられる
。
これらの抗体タンパクの固定化にあたっては、Ｆａｂ部
分を変性しないように１にとが肝要であるが、前述の如
〈従来の化学反応による固定化の場合Ｆａｂ部分も反応
に関与して抗体タンパクの活性低下を招いていた。本発
明においては抗体タンパクは、後述の脂質単分子膜中に
Ｆｃ部位で疎水的に相豆作用しながら高密度にくみ込ま
れるか、イオン的相互作用により免疫活性を高く保持し
たまま単分子膜に吸着固定される。
分を変性しないように１にとが肝要であるが、前述の如
〈従来の化学反応による固定化の場合Ｆａｂ部分も反応
に関与して抗体タンパクの活性低下を招いていた。本発
明においては抗体タンパクは、後述の脂質単分子膜中に
Ｆｃ部位で疎水的に相豆作用しながら高密度にくみ込ま
れるか、イオン的相互作用により免疫活性を高く保持し
たまま単分子膜に吸着固定される。
上記の抗体タンパクを固定化するための脂質単分子膜と
しては、水面上で固体上の凝縮単分子膜を形成し、水に
実質的に溶解しないものが好ましい。そのようなものと
して、炭素原子数１４〜２２の長鎖脂肪酸の多価金属塩
及び／又はエステルが用いられる。このような脂肪酸と
してはミリスチン酸（Ｃ１３）−１２□Ｃｏ（］−１＞
、バルミチン酸（Ｃ１５）−＋３ｉ ｃ ｏ ｏト１）
、ステアリン酸（Ｃ１７Ｈ３５ＣＯＯＨ）、アラギン酸
（Ｃ１９Ｈ３９ＣＯＱＨ）、ベヘン酸（Ｃ２１Ｈ４３Ｃ
ＯＯ）−１）が代表的なものどして挙げらｔＬル。従つ
Ｔｃｎ Ｈ２ｎ＋Ｉ Ｃ００Ｍ （ｎ ＝１４〜２２、
Ｍ＝デアルリ土類金属、カドミウム、アルミニウム等の
多価金属イオン）で表わされる長鎖脂肪酸の多価金属塩
及び前記脂肪酸のメタノール又はエタノールとの二［ス
テルである。
しては、水面上で固体上の凝縮単分子膜を形成し、水に
実質的に溶解しないものが好ましい。そのようなものと
して、炭素原子数１４〜２２の長鎖脂肪酸の多価金属塩
及び／又はエステルが用いられる。このような脂肪酸と
してはミリスチン酸（Ｃ１３）−１２□Ｃｏ（］−１＞
、バルミチン酸（Ｃ１５）−＋３ｉ ｃ ｏ ｏト１）
、ステアリン酸（Ｃ１７Ｈ３５ＣＯＯＨ）、アラギン酸
（Ｃ１９Ｈ３９ＣＯＱＨ）、ベヘン酸（Ｃ２１Ｈ４３Ｃ
ＯＯ）−１）が代表的なものどして挙げらｔＬル。従つ
Ｔｃｎ Ｈ２ｎ＋Ｉ Ｃ００Ｍ （ｎ ＝１４〜２２、
Ｍ＝デアルリ土類金属、カドミウム、アルミニウム等の
多価金属イオン）で表わされる長鎖脂肪酸の多価金属塩
及び前記脂肪酸のメタノール又はエタノールとの二［ス
テルである。
これらは例えばカルボン酸又はそのエステルの状態でベ
ンピンやクロロホルム等の有機溶媒に溶解させ、０．５
〜１．５ミリモル／１の溶液となしたのら、これを蒸溜
水又は多価金属塩（例えば、塩化バリウム、塩化カドミ
ウム、塩化アルミニウム）を含む、ｐＨ６，５〜７．５
の水溶液表面上に展開することにより、本発明に用いる
単分子膜となしうる。
ンピンやクロロホルム等の有機溶媒に溶解させ、０．５
〜１．５ミリモル／１の溶液となしたのら、これを蒸溜
水又は多価金属塩（例えば、塩化バリウム、塩化カドミ
ウム、塩化アルミニウム）を含む、ｐＨ６，５〜７．５
の水溶液表面上に展開することにより、本発明に用いる
単分子膜となしうる。
次いで、該単分子膜を、その表面圧力が１〜３０ｍＮ（
ミリＮ）／ｍになるように圧縮したのら、そのままの圧
縮条イ１で膜面下の水相に前記の抗体タンパクを注入す
る。所定時間（通常、３０分〜１時間）、該抗体タンパ
クと水面］−の単分子膜とを接触させておくことにより
、タンパクと該単分子膜との複合化が完了する。この時
点で抗体タンパクと単分子膜との複合体膜を、表面バカ
３０〜５０ミリＮ／ｍにて再び圧縮したのら、固体基板
上にラングミュア・ブロジエツ１へ法又は水平付着法（
詳細は新実験化学講座第１８巻第４３９頁参照）により
一層又は複数層積層することができる。
ミリＮ）／ｍになるように圧縮したのら、そのままの圧
縮条イ１で膜面下の水相に前記の抗体タンパクを注入す
る。所定時間（通常、３０分〜１時間）、該抗体タンパ
クと水面］−の単分子膜とを接触させておくことにより
、タンパクと該単分子膜との複合化が完了する。この時
点で抗体タンパクと単分子膜との複合体膜を、表面バカ
３０〜５０ミリＮ／ｍにて再び圧縮したのら、固体基板
上にラングミュア・ブロジエツ１へ法又は水平付着法（
詳細は新実験化学講座第１８巻第４３９頁参照）により
一層又は複数層積層することができる。
その際の抗体タンパクの固体基板上への固定化量は、積
層時の水面展間膜の基板への転移比及びＵ Ｖ−吸収ス
ベクトル強度より線用される。
層時の水面展間膜の基板への転移比及びＵ Ｖ−吸収ス
ベクトル強度より線用される。
かくして（７られた基板上の復合体は、抗体タンパクの
抗原−抗体反応活性を酵素免疫診断法（Ｅ■Δ）により
求めた結果、寸ぐれた活性を示すものであった。
抗原−抗体反応活性を酵素免疫診断法（Ｅ■Δ）により
求めた結果、寸ぐれた活性を示すものであった。
以下、実施例により本発明を更に詳しく説明づる。
実施例１
ステアリンＫ （０１７Ｎ３５ＣＯ２）−１）ｉｏＨを
２５ｄの蒸留クロ［１ホルムに溶解し、５６２ ｃｍ２
の水槽表面積を有する表面圧−面積曲線（以下、π−Ａ
曲線と略す）測定用水槽に張った塩化バリウム３×ｔｏ
−５Ｍ炭酸水素カリウム４ Ｘ １０’ Ｍ混合水溶液
上にウルトラマイクロピペットを用いて、上記溶液１５
０１１１を徐々に滴下した。滴下終了後水面展開膜を５
分間静置してからヒ１−ＩｑＧ水溶液を濃度０、０３ｍ
ｃ＋／ ｒｄ！になるように水槽中へ注入（ツた。１時
門静置後什切仮の移動を開始しπ−八へ線を測定した。
２５ｄの蒸留クロ［１ホルムに溶解し、５６２ ｃｍ２
の水槽表面積を有する表面圧−面積曲線（以下、π−Ａ
曲線と略す）測定用水槽に張った塩化バリウム３×ｔｏ
−５Ｍ炭酸水素カリウム４ Ｘ １０’ Ｍ混合水溶液
上にウルトラマイクロピペットを用いて、上記溶液１５
０１１１を徐々に滴下した。滴下終了後水面展開膜を５
分間静置してからヒ１−ＩｑＧ水溶液を濃度０、０３ｍ
ｃ＋／ ｒｄ！になるように水槽中へ注入（ツた。１時
門静置後什切仮の移動を開始しπ−八へ線を測定した。
その結果、π−八へ線はステアリン酸を単独展開した場
合に比して膨張したものとなった。
合に比して膨張したものとなった。
この水面展開膜を３０ミリＮ／ｎ１の表面圧力Ｊ・で圧
縮しながら、疎水化処理（シランカップリング処理）を
施した石英板」二に垂直浸漬引き上げ法（以降１８法と
略）によって２層累積した。
縮しながら、疎水化処理（シランカップリング処理）を
施した石英板」二に垂直浸漬引き上げ法（以降１８法と
略）によって２層累積した。
平均累積比は０１７４であった。紫外吸収スペク［−ル
測定によると、【−ｉ矢板十のヒトＩｇＧの被覆率は３
．０ ｘｔＯ−８ｍｏｌ ／ ｒｄであった。
測定によると、【−ｉ矢板十のヒトＩｇＧの被覆率は３
．０ ｘｔＯ−８ｍｏｌ ／ ｒｄであった。
次いでこの累積膜にベルオキシターゼ標識抗ヒト１ｇＧ
抗体（２０μ１．／ｍｅ）液を作用させた後、オルトフ
ェニレンジアミン、過酸化水素混合溶液中に浸漬した処
、呈色（褐色）か認められ、累積膜中のヒトＩｇＧの抗
原活性が保持されていることがわかった。
抗体（２０μ１．／ｍｅ）液を作用させた後、オルトフ
ェニレンジアミン、過酸化水素混合溶液中に浸漬した処
、呈色（褐色）か認められ、累積膜中のヒトＩｇＧの抗
原活性が保持されていることがわかった。
比較例
実施例１と同様に調製したステアリン酸溶液１５０１１
１をπ−・Δ測定用水槽に張った蒸溜水上に徐々に滴下
した。）内Ｆ終了後水面展開膜を５分間静置してから表
面圧３０ミリＮ／ｍに保つよう仕切板を移動させた処、
水面展開膜の面積は減少しつづけ、ステアリン酸の蒸溜
水中への溶解が見られた。
１をπ−・Δ測定用水槽に張った蒸溜水上に徐々に滴下
した。）内Ｆ終了後水面展開膜を５分間静置してから表
面圧３０ミリＮ／ｍに保つよう仕切板を移動させた処、
水面展開膜の面積は減少しつづけ、ステアリン酸の蒸溜
水中への溶解が見られた。
実施例２
実施例１に於て、ステアリン酸の代りに、パルミチン酸
を用いて同様に塩化バリウムと炭酸水素カリウムの稀薄
水溶液表面上に展開した後、３０分静置後、３０ミリＮ
／ｍの表面圧下で圧縮しながら、石英がラス基板に２層
累積した。その際の累積比は０．７２であった。このも
のは、実施例１と同様にして抗原活性を評価した処、水
溶液状態での抗原活性と同等の活性を有していた。
を用いて同様に塩化バリウムと炭酸水素カリウムの稀薄
水溶液表面上に展開した後、３０分静置後、３０ミリＮ
／ｍの表面圧下で圧縮しながら、石英がラス基板に２層
累積した。その際の累積比は０．７２であった。このも
のは、実施例１と同様にして抗原活性を評価した処、水
溶液状態での抗原活性と同等の活性を有していた。
−９゛
Claims (1)
- 水相面上に展開された炭素原子数１４〜２２の長鎖脂肪
酸の多価金属塩及び／又はエステルの単分子膜に当該水
相中に溶解した水溶性抗体タンパクを接触させることに
より当該水相界面で抗体タンパク−単分子膜複合体を形
成させ、それを固体基板上に積層することを特徴とする
脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19722186A JPS6354400A (ja) | 1986-08-25 | 1986-08-25 | 脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19722186A JPS6354400A (ja) | 1986-08-25 | 1986-08-25 | 脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6354400A true JPS6354400A (ja) | 1988-03-08 |
| JPH047760B2 JPH047760B2 (ja) | 1992-02-12 |
Family
ID=16370848
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19722186A Granted JPS6354400A (ja) | 1986-08-25 | 1986-08-25 | 脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6354400A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5230227A (en) * | 1989-09-07 | 1993-07-27 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Washing machine |
| JP2013244261A (ja) * | 2012-05-28 | 2013-12-09 | Toyota Boshoku Corp | 車両用シート |
-
1986
- 1986-08-25 JP JP19722186A patent/JPS6354400A/ja active Granted
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5230227A (en) * | 1989-09-07 | 1993-07-27 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Washing machine |
| JP2013244261A (ja) * | 2012-05-28 | 2013-12-09 | Toyota Boshoku Corp | 車両用シート |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH047760B2 (ja) | 1992-02-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4987032A (en) | Functional organic thin film and method of manufacture thereof | |
| Asanov et al. | Regenerable biosensor platform: a total internal reflection fluorescence cell with electrochemical control | |
| JP3226555B2 (ja) | ドープ・ゾル−ゲル硝子の使用方法、ドープ・ゾル−ゲル硝子および該硝子の製造方法 | |
| JP7061224B2 (ja) | バイオセンシングフィルムの製造方法、バイオセンシングフィルム及び監視装置 | |
| US5955335A (en) | Biomaterial immobilization on an Si3 N4 surface containing Si-NH2 groups with a heterobifunctional cross-linking agent | |
| US4172827A (en) | Method for concentration and purification of antigens and antibodies | |
| JPH03505222A (ja) | 担体にたん白質、ペプチド、補酵素等々を固定化する方法 | |
| EP0748658A3 (en) | A method for manufacturing a chemically adsorbed film and a chemical adsorbent solution for the method | |
| JPH0543600A (ja) | 抗体または抗原固定化絹フイブロイン膜および免疫測定用センサー | |
| JPH0561279B2 (ja) | ||
| JPS6354400A (ja) | 脂質単分子膜により抗体タンパクを固定化する方法 | |
| JPS60155129A (ja) | 固定化抗原または抗体の製造方法 | |
| US7914663B2 (en) | Structure, porous body, sensor, process of structure and detecting method for specimen | |
| CN114761353B (zh) | 通用高容量蛋白质捕获和可调电化学释放 | |
| EP0784791B1 (de) | Biosensor mit auf einer signalaktiven oberfläche kovalent fixiertem biomaterial | |
| EP0923735B1 (en) | Method for improving the performance of an immunoreagent in an immunoassay | |
| JPH047759B2 (ja) | ||
| JPH0473749B2 (ja) | ||
| Santafe et al. | Chelating Langmuir− Blodgett film: a new versatile chemiluminescent sensing layer for biosensor applications | |
| JPH02272081A (ja) | 機能性有機薄膜 | |
| JPH07122622B2 (ja) | 免疫センサ− | |
| Miyasaka et al. | A novel photoreactive amphiphile of nitrophenylazide for immobilization of bioactive proteins | |
| JPS63171642A (ja) | 機能性有機薄膜 | |
| Moreau et al. | Preparation of aqueous sol–gel silica and titania multi-layered thin films and their evaluation as biomolecular encapsulation hosts | |
| JP2957625B2 (ja) | オプティカルセンサー |