JPS6357519A - 発癌プロモ−タ−抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、オレアナン系トリテルペン化合物を有効成分
とする発癌プロモーター抑制剤に関するものである。

（従来の技術及び問題点） 化学発癌には、イニシェーションとプロモーションの質
的に異なる二つのプロセスが関与している。イニシェー
ションはイニシエーターによって生じるＤＮＡの変化で
あり、非可逆的な反応である。一方、プロモーションは
イニシエートキした細胞をさらに癌化へ促進する長期の
プロセスを意味し、その際に作用する物質が発癌プロモ
ーターである。特に、クロトン油、或いはその有効成分
である１２−０−　ｔｅｔｒａｄｅｃａｎｏｙｌｐｈｏ
ｒｂｏｌ　−１３−ａｃｅｔａｔｅ　（Ｔ　Ｐ　Ａ　）
等は、従来から強力な発癌プロモーターとして知られて
いる。現在では、ＴＰＡと同等の強力な活性を有し、こ
れと全く化学構造が異なる新しい発癌プロモーターも環
境中に見出されている。かかる化学発癌二段階説におい
て説明されるように、発癌プロモーションを抑制する薬
剤の開発が発癌を防止するための重要な課題となってい
た。

本発明者等は、トリテルペン化合物、即ち、竹節人参よ
り得られるオレアノール酸、延命皮より抽出されたとこ
ろの数種類の化合物がプロモーション抑制の活性がある
ことを見出し、本発明を完成したものである。

（発明の構成） 発癌プロモーター抑制剤として有用な本願化合物は、一
般式： （但し、式中Ｒは−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ，ＯＲ，Ｒ，は
−ＣＨ、０１（又は−ＣＨ，、Ｒ，は　ＬＨを表わす）
で表わされるオレアナン系トリテルペン化合物である。

１８位の水素の配向は□であり、本化合物はβ型である
ことを示す。上記一般式（Ｉ）に含まれる化合物として
は、 （１）式： で示される１８β−オシアン−１２−エン−３β、２８
−ジオール、 （２）式： で示すれる１８β−オシアン−１２−エン−３β、２３
−ジオール、 （３）式： で示される１８β−オシアン−１２−エン−３β、２３
．２８−　トリオール、 が挙げられる。これらはすべて１８β−型である。

以下、これらの化合物は化合物（１）〜（３）として弓
Ｉ用される。

化合物（１）は、竹節人参中にエリスロジオールとして
含有きれているが、通常上記生薬の成分であるオレアノ
ール酸を還元することにより得られる。化合物（りは、
生薬延命皮から得られる天然薬物へデラゲニンであり、
また化合物（３）はへデラゲニンを還元修飾して得られ
るものであって、これらは公知の化合物であり一般に低
毒性である。

天然にはそのままの形で存在しない化合物（１）及び■
）の製造法の詳細については後述する。

本発明に係る発癌プロモーター抑制剤は、一般式（Ｉ）
で表わされる化合物を有効成分とするものであり、常法
により製造される。また投与方法としては経口、非経口
のいずれをも選択できる。

投与量は患者の年齢、症状等により異なるが、一般には
経口投与では成人−人一日当り１００〜２００ｍｇの範
囲で用いることにより所期の効果が期待できる。

剤形は、製剤上許容される無害の一種、或いは数種の賦
形剤、例えば、乳糖、バレイショデンブン、炭酸カルシ
ウム、又はアルギン酸ナトリウム等を配剤した散剤、顆
粒剤、錠剤等とすることができる。

非経口の場合の投与量は、成人−人一日当り上記経口投
与の６０％の量が適当であり、注射剤とする場合は溶媒
は注射用蒸留水、又はポリエチレングリコール等が使用
され、或いはこれに分散剤を添加してもよい。

以下、本願化合物についての実験例を掲げる。

（実験例■〉 ＴＰＡによって引き起こされる細胞のリン脂質合成亢進
を抑制する効力について、培養細胞を用イタｉｎ　ｖｉ
ｔｒｏの系で検定した。

使用した細胞はヒト子宮頚癌細胞ＨｅＬａで、Ｅａｇｌ
ｅ’ｓ　ｍｉｎｉｍｕｍ　ｃａｌｆ　ｅｓｓｅｎｔｉａ
ｌ　ｍｅｄｉｕｍ　−１０％ｎｅｗｂｏｒｎ　ｃａｌｆ
　ｓｅｒｕｍで培養し、培養容器の全面に単層にはえた
ものを実験に供した。

化合物（１）〜０）をｄｉｍｅｔｈｙｌ　５ｕｌｆｏｘ
ｉｄｅ／　ｅｔｈａｎｏｌ（１／１．　ｖ／ｖ）に溶解
し、細胞培養液中に添加した。一方、対照には上記溶媒
のみを加えた。

４０分後にＴ　Ｐ　Ａ　（５０ｎＭ）及び放射性無機リ
ン酸■Ｐｉ（２０μＣｉ／デイツシユ、直径３５　ｍｍ
）を加え、さらに４時間培養を続けた。その後、細胞の
リン脂質を抽出し、その中へ取り込まれた３！ｐｉの放
射活性を測定した。結果を表１に示す。

“１．濃度：２５μｇ／ｌｎｌ ＄２．　　いずれの化合物も添加しなかった場合に見ら
れるＴＰＡの効果を基準として、各化合物による抑制効
果を％で表示した。

各個は、二回の実験結果の平均値である。

次に、上記の実験で１００．０％の抑制率を示した化合
物■）について、種々の濃度における抗プロモーター作
用の比較を行なった。結果を表２に示す。

本化合物は、２．５μｇ／ｍ　ｌの低濃度でも抑制効果
があることが判明した。

表２ （実験例■） 化合物（３）によるマウス皮膚発癌の抑制発癌プロモー
ターには、種々の物質が知られているが、発癌プロモー
ション過程を初期の段階（第一次段階）、及びそれ以後
の段階（第二次段階）に分けて考えると、ＴＰＡなどは
第一次、及び第二次の両段階を進行させる能力を有する
完全型プロモーターのグループに属し、ｍｅｚｅｒｅｉ
ｎなどは第二次段階のみを進行させ、第一次段階では無
効である不完全型プロモーターのグループに属する。

したがって、イニシェーションをかけた動物をｍｅｚｅ
ｒｅｉｎで単独処置をしても腫瘍の発生はみられないが
、予めプロモーションの第一次段階を進行させ得る化合
物で処置した後、それに続いてｍｅｚｅｒｅｉｎを作用
させ読けると腫瘍が発生する。

このような発癌実験系において、化合物（３）が発癌抑
制作用を示すかどうかについて検討した。

方法： マウスを二群に分け、夫々の群のマウスの背部皮膚にそ
れ単独では腫瘍を発生許せない量の７．１２−ｄｉｍｅ
ｔｈｙｌｂｅｎｚ［ａ］　ａｎｔｈｒａｃｅｎｅを塗布
することによってイニシェーションをかけた後、発癌プ
ロモーション過程の第一次段階のみを進行させ得る量の
ＴＰＡを塗布する。それに続いて、ｍｅｚｅｒｅｉｎを
週に二回ずつ塗布し続ける。そして一方の群には発癌プ
ロモーション過程の第一次段階で化合物０）を塗布（Ｔ
ＰＡ塗布と同時、及び１８時間後に夫々１゜μｍｏｌｅ
ｓ／マウスずつ塗布）を行ない、他の群にはなんら処置
を施さなかった。

このような系において、ＴＰＡ塗布時に化合物０）によ
る処置を行なった場合、腫瘍の発生が抑制されるか否か
を観察した。

結果； 化合物ａ）による処置を行なわなかった群では、プロモ
ーション開始後３０透口において、６０％のマウスに腫
瘍が発生し、マウス−匹あたりの平均腫瘍個数は１．４
７であった。

これに対して、化合物（３）による処置を行なった群で
は、腫瘍発生率２０％、マウス−匹あたりの平均腫瘍発
生個数は０．４０であり、化合物０）に抗プロモーショ
ン作用のあることが明らかとなった。

（参考例■） 化合物（１）の製造 オレアノール酸１ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド１
０ｒｎＱに溶かし、２５％水酸化ナトリウム溶液を１ｍ
ｆｆ１加え、室温で１時間攪拌する。攪拌液に臭化エチ
ル１ｍｌを加えて室温で２０時間反応させる。

反応液に５％塩酸を２０ｍ１加えて酸性とする。

その溶液中に沈殿が生じなくなるまで水を加え沈殿を濾
過して、液が中性になるまで水洗する。沈殿を減圧にて
乾燥させてエチル−オシアン−１２−エン−３β−才一
ルー２８−オニイトをほぼ定量的に得る。

一方、シールした攪拌機、乾燥管を付した還流冷却器、
側管付滴下ロートを付した５０ｍｊ！入り三ロフラスコ
に乾燥テトラヒドロフラン１０ｍ２を入れ、きらに水素
化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウ
ムの７０％トルエン溶液３　ｍｌを加え、オイルバス上
で還流する。乾燥テトラヒドロフラン２０ｍｊ！に溶か
したエチル−オシアン−１２−エン−３β−オール−２
８−オニイト１ｇを側管付滴下ロートでＮ、ガスを通気
しながら滴下する。滴下後１次間還流し、反応液を室温
に戻して１０％塩酸を徐々に加え、ｐｔｔａ〜４に調整
する。アルミニウム錯体は発泡しながら分解して沈殿を
生ずる。沈殿物を濾過し濾液をクロロホルム５０＋ｎｅ
で３回抽出する０合したクロロホルム液を水洗後無水硫
酸ナトリウムで６時間乾燥する。硫酸ナトリウムを濾過
除去し、溶媒を４０°Ｃ以下で留去すると化合物（１）
を定量的に得る。

化合物（１） 分子′ｖｉ：４４２ 融　点：２３６〜２３７℃ 比旋光度：＋７７°（ＣＨ（、！！、ｓ）目（ｎｍｒス
ペクトル（ＣＤＣＩ２ｓ）　δｐｐｍ（ＴＭＳ）１４４
．２　（ｓ、　Ｃ−１３） １２２．３　（ｄ、　Ｃ−１２） ７９．０　（ｄ、　Ｃ−３＞ ６９．６　（ｓ、　Ｃ−２８） ５５．２　（ｄ、　Ｃ−５） ４７．６　（ｄ、　Ｃ−９） （参考例■） 化合物（３）の製造 ヘデラゲニン１ｇをヘキサメチルリン酸トリアミド１０
　ｍｌに溶かし、２５％水酸化ナトリウム溶液を１ｍｌ
加え、室温で１時間攪拌する。攪拌液１こ臭化エテル１
ｍｊ２を加えて室温で２０時間反応させる。

反応液に５％塩酸を２０ｍ２加えて酸性とする。

その溶液中に沈殿が生じなくなるまで水を加え沈殿を濾
過して液が中性になるまで水洗する。沈殿を減圧にて乾
燥させてエチル−矛しアンー１２−エンー３β−オール
ー２８．２３オニイトをほぼ定量的に得る。

一方、シールした攪拌機、乾燥管を付した還流冷却器、
側管付滴下ロートを付した５０ｍ、ｌ：入り三ロフラス
コに乾燥テトラヒドロフラン１０ｍ１を入れ、さらに水
素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリ
ウムの７０％トルエン溶液３ｍｆｉを加え、オイルバス
上で還流する。乾燥テトラヒドロフラン２０ｍ１に溶か
したエチル−オシアン−１２−エン−３β、２３−ジオ
ール−２８−オニイト１ｇを側管付滴下ロートでＮ、ガ
スを通気しながら滴下する。滴下後１次間還流し、反応
液を室温に戻して１０％塩酸を徐々に加え、ｐＨ３〜４
に調整する。

アルミニウム錯体は発泡しながら分解して沈殿を生ずる
。沈殿物を濾過し濾液をクロロホルム５０　ｍｌで３回
抽出する。合したクロロホルム液を水洗後無水硫酸ナト
リウムで６時間乾燥する。硫酸ナトリウムを濾過除去し
、溶媒を４０°Ｃ以下で留去すると化合物０）を定量的
に得る。

化合物（３） 分子量＝４５８ 融　点：２１６〜２１７℃ 比旋光度：　＋７８．４°（ＣＨＣＦ２ｓ）口Ｃｎｍｒ
スペクトル（ＣａＤｓＮ）　　Ｓ　ｐｐｍ（ＴＭＳ）１
４４．２　（ｓ、　Ｃ−１３） １２１．４　（ｄ、　Ｃ（２） ７２．４　（ｄ、　Ｃ−３） ６７．６　＜ｓ、　Ｃ−２８＞ ４７．５　（ｄ、　Ｃ−５） ４７．０　（ｄ、　Ｃ−９＞

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （但し、式中Ｒは−ＣＯＯＨ又は−ＣＨ＿２ＯＨ、Ｒ＿
   １は−ＣＨ＿２ＯＨ又は―ＣＨ＿３、Ｒ＿２は▲数式、
   化学式、表等があります▼を表わす）で示されるオレア
   ナン系トリテルペン化合物を有効成分とする発癌ブロモ
   ーター抑制剤。
2. （２）オレアナン系トリテルペン化合物が式：▲数式、
   化学式、表等があります▼ で示される１８β−オレアン−１２−エン−３β、２８
   −ジオールである特許請求の範囲第１項に記載の発癌ブ
   ロモーター抑制剤。
3. （３）オレアナン系トリテルペン化合物が式：▲数式、
   化学式、表等があります▼ で示される１８β−オレアン−１２−エン−３β，２３
   −ジオールである特許請求の範囲第１項に記載の発癌ブ
   ロモーター抑制剤。
4. （４）オレアナン系トリテルペン化合物が式：▲数式、
   化学式、表等があります▼ で示される１８β−オレアン−１２−エン−３β，２３
   ，２８−トリオールである特許請求の範囲第１項に記載
   の発癌ブロモーター抑制剤。