JPS6359680B2 - - Google Patents
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- JPS6359680B2 JPS6359680B2 JP54069800A JP6980079A JPS6359680B2 JP S6359680 B2 JPS6359680 B2 JP S6359680B2 JP 54069800 A JP54069800 A JP 54069800A JP 6980079 A JP6980079 A JP 6980079A JP S6359680 B2 JPS6359680 B2 JP S6359680B2
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- adenosine
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/30—Nucleotides
- C12P19/32—Nucleotides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two N-atoms in the same ring, e.g. purine nucleotides, nicotineamide-adenine dinucleotide
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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- Biochemistry (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアデノシン−5′−トリフオスフエート
（以下ATPと略称する）を発酵法により製造する
方法に関する。 ATPは生体内で高エネルギーリン酸化合物と
してエネルギー代謝に重要な役割を示しているも
ので、医薬、生化学試薬として重要視されてい
る。また、近年、ATPを使用するバイオリアク
ターに於てATPを効率よく使用するために、
ATP再生系にアデノシン−5′−ジフオスフエー
トをATPに再生する酵素ピルビン酸キナーゼを
使用することが検討されているなどフラビン・ア
デニンジヌクレオチド、ニコチンアミド・アデニ
ンジヌクレオチドなどの補酵素や生化学物質を生
産する上に於てATPの安価な供給が望まれてい
る。 従来、ATPの製造法としては直接動物の筋肉
から単離精製する方法、有機化学的合成法、5′−
アデニル酸を酵素的にリン酸化する方法および発
酵法などがある。これらのうち、発酵法として
は、例えばアデニンまたはその誘導体を含む培地
にブレビバクテリウム・アンモニアゲネスに属す
る細菌を培養してATPを生成蓄積する方法（特
公昭41−17634号）、ATP生産能を有する微生物
を界面活性剤を含む培地に培養し、培養物から
ATPを採取する方法（特公昭49−28996号）、培
地中におけるATPの生成が最大に達した時点で
フエノール性水酸基を有する化合物を添加する方
法（特開昭53−6490号）などが提案されている。 しかし、これらの発酵法による従来法ではいず
れも培地中にアデニンもしくはその誘導体、例え
ばアデノシンを存在させて発酵させるものであ
り、このアデニンやその誘導体を基質としてこれ
をリン酸化することによりATPを生成蓄積させ
るものである。したがつて、従来法は高価なアデ
ニン又はその誘導体を原料とするものであるから
工業上有利な方法とは言えない。 本発明者はATPを発酵法により工業的に安価
に製造し得る方法について検討した結果、アデニ
ンもしくはその誘導体に代えてメタノールもしく
はメタノールと同一代謝経路を示す化学物質、お
よび特定範囲量の無機リン酸を基質として含む培
地にメタノール資化性を有するATP生産菌を培
養することにより、ATPが高濃度で培地中に蓄
積することを見出し、本発明をなすに至つた。 したがつて、本発明はATPを工業的に有利に
製造し得る方法を供給することを目的とする。 以下本発明を詳しく説明する。 本発明は前述したごとく、メタノールもしくは
メタノールと同一代謝経路を示す化学物質を基質
として含む培地を使用するものであるから、本発
明で利用するATP生産菌はメタノール資化性を
有するものでなければならない。メタノール資化
性を有するATP生産菌としては次のものが例示
し得る。 メチロモナス属（Methylomonas）に属するメ
チロモナス・プロバスFERM−P3193、メチロモ
ナス・メチロフオーラATCC21369；シユードモ
ナス属（Pseudomonas）に属するシユードモナ
ス・メチロトロフアNCIB10508、シユードモナ
ス・ロセアNCIB10597、シユードモナス・イン
スエータATCC21276、シユードモナス・メタノ
リカATCC21704、シユードモナス・メタニカ
ATCC21439；プロタミノバクター属
（Protaminobacter）に属するプロタミノバクタ
ー・ルーバーATCC8457、プロタミノバクター・
カンジダスATCC21372；アクロモバクター属
（Achromobacter）に属するアクロモバクター・
メタノロフイラATCC21275；コリネバクテリウ
ム属（Corynebacterium）に属するコリネバクテ
リウム・エスピーATCC21232；およびバチルス
属（Bacillus）に属するバチルス・セレウス
ATCC14579、バチルス・ズブチリスvar.
NB1001FERM−P1373。 上掲した細菌を利用して有用物質を生産する技
術として、従来、メタノールを基質とする培地で
の培養による蛋白源としての菌体の増殖（特開昭
52−28988号）、フラビン・アデニンジヌクレオチ
ドの生産〔J.Ferment.Technol.55、630（1977）〕、
ビタミンB12の生産〔Appl.Microbiol.30、477
（1975）〕、脂質、多糖類の生産昭和53年度日本農
芸化学会大会講演要旨集、シンポジウムC1、微
生物の利用551〜556）、ならびにアミノ酸の生産
（前記講演要旨集）等が報告されているが、ATP
生産を目的とした上記細菌の利用についての報告
は未だみられない。 本発明は上掲したメタノール資化性を有する
ATP生産菌を、メタノール又はメタノールと同
一代謝経路を示す化学物質を基質とし、かつ無機
リン酸塩をリン酸根（PO4）として４〜35ｇ／
を含む培地で培養することを特徴とする。ここで
“メタノールと同一代謝経路を示す化学物質”と
はメタン、メチルアミン、ホルムアルデヒド、ギ
酸のごとくメタノールと同一代謝経路で利用し得
る物質を意味する。メタノールならびに上記物質
は培地の炭素源として使用されるものであつて、
それらの培地中における濃度は高すぎると細菌の
生育を阻害するので留意すべきである。一般にそ
の濃度はメタノール、メチルアミンでは0.2〜４
容量％、ギ酸、ホルムアルデヒドでは0.01〜0.1
容量％が適当であり、メタンについてはその溶解
度に相当する濃度で使用するとよい。 また、これらの炭素源は培養当初に培地に全量
添加してもよいが、最初は培地における炭素源の
濃度を低くしておき、培養の進行とともに炭素源
の消費に応じて追加的に補給すると、ATPの生
産上さらに好結果が得られる。 本発明は上述したごとき炭素源に加えて無機リ
ン酸塩をPO4として４〜35ｇ／培地に存在させ
ることを必要とするものであるが、このような培
地における無機リン酸塩の濃度は通常の細菌培地
の数倍乃至数十倍に相当するものである。 なお、培地中の無機リン酸（PO4として）の濃
度が４ｇ／より低いとATPの生産の増加がみ
られず、一方35ｇ／より高くなるとATP生産
菌の増殖が抑制されてATPの生産量を低減する
ことになる。因みに、無機リン酸は培養により生
産されたATPが菌体外に分泌されてフオスフア
ターゼにより分解されるのを防止する作用をす
る。 ここで用いる無機リン酸塩は通常の発酵培地に
使用されるものであつて、例えば
（NH4）2HPO4、KH2PO4、K2HPO4のごときも
のが例示し得る。本発明では培地組成分として上
述した炭素源および無機リン酸塩に加えて、カリ
ウム、マグネシウム、鉄、マンガンなどの無機
塩、場合によつては亜鉛、コバルト、モリブデン
のごとき金属の無機塩；アンモニア、アンモニウ
ム塩、尿素、硝酸塩のごとき蓄素源を使用し得
る。また、界面活性剤や消泡剤を必要に応じて培
地へ添加することもできる。 本発明で使用する倍地組成を例示すると下記の
とおりである。 炭素源 0.05〜２容量％ （NH4）2HPO4 ５〜45ｇ／ （PO4として3.5〜32ｇ／） KH2PO4 0.5〜2.5ｇ／ （PO4として0.35〜１、75ｇ／） K2HPO4 0.5〜2.5ｇ／ （PO4として0.275〜1.37ｇ／） （NH4）2SO4 ０〜1.0ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5〜5.0ｇ／ FeSO4・7H2O 0.05〜0.5ｇ／ CaCl2・2H2O ０〜0.2ｇ／ MnSO4・4H2O ０〜0.2ｇ／ 上述したごとき培地中における前掲のATP生
産菌の培養は、一般に、PH5.8〜9.0、好ましくは
6.0〜8.0、温度15〜50℃、好ましくは30〜40℃、
通気量0.5〜4.0V.V.M（空気量／培養液／
min）の条件下に40〜600rpmで撹拌しながら２
日乃至９日間行うとよい。なお、培地のPHの調整
はアンモニアのごときアルカリ性物質又は硫酸の
ごとき酸性物質、さらにはリン酸バツフアーのご
とき緩衝剤、尿素、炭酸カルシウムなどを使用し
得るが、アルカリ性物質を使用するときはアンモ
ニアは窒素源にもなるので特に好適である。 上述のごとき培養条件下で発酵させることによ
りATPを培地中に２〜12ｇ／の高濃度で蓄積
させることができる。発酵終了後菌体を除去し、
生成したATPを公知の手法により分離、採取す
る。例えば、発酵済培地から菌体を除去したのち
の上澄液について活性炭ならびにアニオン交換樹
脂を利用した吸着、溶出による分画処理および濃
縮沈殿処理の組合せによりATPは採取し得る。 本発明によると実施例に示すごとく、培地にア
デニンやその誘導体を添加しなくてもATPを２
ｇ／以上の高濃度で培地中に生成、蓄積し得
る。 以下に実施例を例示して本発明の効果を具体的
に説明する。 なお、各実施例中の培地中におけるATPの生
成量は下記のように表わされるATPとルシフエ
リン−ルシフエラーゼとの反応原理を利用し次の
ごとくして測定した。 (1) ルシフエリン＋ルシフエラーゼ＋ATPMg2 ―――→ アデニル−ルシフエリン＋ピロリン酸塩 (2) アデニル−ルシフエリンO2 ―――→ アデニル−
オキシルシフエリン 上記(2)の反応で発生するケイ光の560〜580nｍ
の波長域の光の強さをCHEM−
GLOWPHOTOMETERJ4−7441（American
Instrument Company製）を用いて、一定時間測
定してその積分量を求め、これを予め作成してあ
る既知のATP標準液検量線と対比して、培養液
中のATPの生成量を測定する。 実施例 １ （NH4）2HPO47.0ｇ、KH2PO41.0ｇ、
K2HPO41.0ｇ、MgSO4、7H2O1.0ｇおよび
FeSO4・7H2O0.1ｇをイオン交換水１に溶解し
た培地を300ml容の三角フラスコに各100ml分注
し、殺菌処理後メタノール1.6ｇ宛を夫々に添加
してなる各培地に、上記組成の寒天斜面培地で予
め培養したメチロモナス・プロバスFERM−Ｐ
No.3193をそれぞれ接種し、30℃で振盪培養した。
培養開始後４日目に培養液中にATP2.8ｇ／が
生成蓄積する。 この培養液１を80℃に５分間加温処理し、冷
却後遠心分離して菌体を除き、上澄液を3N塩酸
でPH3.5に調整したものを活性炭処理してATPを
活性炭に吸着させた後、1.4％アンモニア含有50
％アルコール溶液で活性炭に吸着したATPを溶
出する。この溶出液を低温下で減圧濃縮して過剰
のアンモニアを除いてPH8.0附近にする。 次いて、この濃縮液を予めCl型調整した強塩基
性陰イオン交換樹脂ダウエツクス１−X2（Cl）カ
ラムにATPを吸着させる。この吸着物をイオン
交換水で洗浄したのち、塩酸と塩化ナトリウムの
混合液（0.02M−HCl溶液（PH1.7）にNaClを溶
解して0.2M−Cl溶液としたもの）で溶出して
ATP画分を分取する。 この溶出液を苛性ソーダで中和後、これを活性
炭の充てんされているカラムに通し、15％アンモ
ニア水で溶出し、得られる溶出液を濃縮してアン
モニアを飛散させる。該濃縮液にメタノールを添
加することによりATPのナトリウム塩の結晶2.2
ｇを得た。 実施例 ２ （NH4）2HPO47.0ｇ、KH2PO41.0ｇ、
K2HPO41.0ｇ、MgSO4・7H2O2ｇ、FeSO4・
7H2O0.2ｇおよび消泡剤KS−66 0.2mlをイオン交
換水１に溶解した培地20を30容ジヤー・フ
アーメンターに仕込み、1.2Kg／cm2の加圧下120℃
で30分間殺菌処理する。冷却後、上記培地にメタ
ノール200mlを添加し、あらかじめ上記と同一の
培地で培養した母菌（メチロモナス・プロバス
FERM−ＰNo.3193）を２％接種し、35℃で500r.
p.mで撹拌しながら、毎分10／20液量／min
（0.5V.V.M）の通気をおこない、菌の増殖につれ
て毎分20／20／min（1.0V.V.M）と通気量を
増加させ、96時間培養をおこなう。 培養中のPHは14％アンモニア水で6.0〜7.2に自
動制御し、消費されるメタノールはガスクロマト
グラフイーで測定して0.3〜2.0％になるように自
動添加する。培養開始後96時間で培養液中に
ATP5.3ｇ／が生成蓄積する。培養液中のATP
は実施例１に記載と同じ方法により回収する。 実施例 ３ 実施例２で使用した培地成分のうち
（NH4）2HPO4の量を20ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP12ｇ／が生成・蓄積する。
ATPは実施例１と同じ方法により回収する。 実施例 ４ 実施例２で使用した培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を30ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP7ｇ／が生成・蓄積する。
ATPは実施例１と同じ方法により回収する。 比較例 １ 実施例２で使用の培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を３ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP0.2ｇ／が生成するにとど
まる。 比較例 ２ 実施例２で使用の培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を50ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP1.0ｇ／が生成するにすぎ
ない。 実施例 ５ 下記表に示す各菌株を用い、実施例３に記載と
同じ培養条件で培養したときのATP生産量を下
記表に示す。 【表】
（以下ATPと略称する）を発酵法により製造する
方法に関する。 ATPは生体内で高エネルギーリン酸化合物と
してエネルギー代謝に重要な役割を示しているも
ので、医薬、生化学試薬として重要視されてい
る。また、近年、ATPを使用するバイオリアク
ターに於てATPを効率よく使用するために、
ATP再生系にアデノシン−5′−ジフオスフエー
トをATPに再生する酵素ピルビン酸キナーゼを
使用することが検討されているなどフラビン・ア
デニンジヌクレオチド、ニコチンアミド・アデニ
ンジヌクレオチドなどの補酵素や生化学物質を生
産する上に於てATPの安価な供給が望まれてい
る。 従来、ATPの製造法としては直接動物の筋肉
から単離精製する方法、有機化学的合成法、5′−
アデニル酸を酵素的にリン酸化する方法および発
酵法などがある。これらのうち、発酵法として
は、例えばアデニンまたはその誘導体を含む培地
にブレビバクテリウム・アンモニアゲネスに属す
る細菌を培養してATPを生成蓄積する方法（特
公昭41−17634号）、ATP生産能を有する微生物
を界面活性剤を含む培地に培養し、培養物から
ATPを採取する方法（特公昭49−28996号）、培
地中におけるATPの生成が最大に達した時点で
フエノール性水酸基を有する化合物を添加する方
法（特開昭53−6490号）などが提案されている。 しかし、これらの発酵法による従来法ではいず
れも培地中にアデニンもしくはその誘導体、例え
ばアデノシンを存在させて発酵させるものであ
り、このアデニンやその誘導体を基質としてこれ
をリン酸化することによりATPを生成蓄積させ
るものである。したがつて、従来法は高価なアデ
ニン又はその誘導体を原料とするものであるから
工業上有利な方法とは言えない。 本発明者はATPを発酵法により工業的に安価
に製造し得る方法について検討した結果、アデニ
ンもしくはその誘導体に代えてメタノールもしく
はメタノールと同一代謝経路を示す化学物質、お
よび特定範囲量の無機リン酸を基質として含む培
地にメタノール資化性を有するATP生産菌を培
養することにより、ATPが高濃度で培地中に蓄
積することを見出し、本発明をなすに至つた。 したがつて、本発明はATPを工業的に有利に
製造し得る方法を供給することを目的とする。 以下本発明を詳しく説明する。 本発明は前述したごとく、メタノールもしくは
メタノールと同一代謝経路を示す化学物質を基質
として含む培地を使用するものであるから、本発
明で利用するATP生産菌はメタノール資化性を
有するものでなければならない。メタノール資化
性を有するATP生産菌としては次のものが例示
し得る。 メチロモナス属（Methylomonas）に属するメ
チロモナス・プロバスFERM−P3193、メチロモ
ナス・メチロフオーラATCC21369；シユードモ
ナス属（Pseudomonas）に属するシユードモナ
ス・メチロトロフアNCIB10508、シユードモナ
ス・ロセアNCIB10597、シユードモナス・イン
スエータATCC21276、シユードモナス・メタノ
リカATCC21704、シユードモナス・メタニカ
ATCC21439；プロタミノバクター属
（Protaminobacter）に属するプロタミノバクタ
ー・ルーバーATCC8457、プロタミノバクター・
カンジダスATCC21372；アクロモバクター属
（Achromobacter）に属するアクロモバクター・
メタノロフイラATCC21275；コリネバクテリウ
ム属（Corynebacterium）に属するコリネバクテ
リウム・エスピーATCC21232；およびバチルス
属（Bacillus）に属するバチルス・セレウス
ATCC14579、バチルス・ズブチリスvar.
NB1001FERM−P1373。 上掲した細菌を利用して有用物質を生産する技
術として、従来、メタノールを基質とする培地で
の培養による蛋白源としての菌体の増殖（特開昭
52−28988号）、フラビン・アデニンジヌクレオチ
ドの生産〔J.Ferment.Technol.55、630（1977）〕、
ビタミンB12の生産〔Appl.Microbiol.30、477
（1975）〕、脂質、多糖類の生産昭和53年度日本農
芸化学会大会講演要旨集、シンポジウムC1、微
生物の利用551〜556）、ならびにアミノ酸の生産
（前記講演要旨集）等が報告されているが、ATP
生産を目的とした上記細菌の利用についての報告
は未だみられない。 本発明は上掲したメタノール資化性を有する
ATP生産菌を、メタノール又はメタノールと同
一代謝経路を示す化学物質を基質とし、かつ無機
リン酸塩をリン酸根（PO4）として４〜35ｇ／
を含む培地で培養することを特徴とする。ここで
“メタノールと同一代謝経路を示す化学物質”と
はメタン、メチルアミン、ホルムアルデヒド、ギ
酸のごとくメタノールと同一代謝経路で利用し得
る物質を意味する。メタノールならびに上記物質
は培地の炭素源として使用されるものであつて、
それらの培地中における濃度は高すぎると細菌の
生育を阻害するので留意すべきである。一般にそ
の濃度はメタノール、メチルアミンでは0.2〜４
容量％、ギ酸、ホルムアルデヒドでは0.01〜0.1
容量％が適当であり、メタンについてはその溶解
度に相当する濃度で使用するとよい。 また、これらの炭素源は培養当初に培地に全量
添加してもよいが、最初は培地における炭素源の
濃度を低くしておき、培養の進行とともに炭素源
の消費に応じて追加的に補給すると、ATPの生
産上さらに好結果が得られる。 本発明は上述したごとき炭素源に加えて無機リ
ン酸塩をPO4として４〜35ｇ／培地に存在させ
ることを必要とするものであるが、このような培
地における無機リン酸塩の濃度は通常の細菌培地
の数倍乃至数十倍に相当するものである。 なお、培地中の無機リン酸（PO4として）の濃
度が４ｇ／より低いとATPの生産の増加がみ
られず、一方35ｇ／より高くなるとATP生産
菌の増殖が抑制されてATPの生産量を低減する
ことになる。因みに、無機リン酸は培養により生
産されたATPが菌体外に分泌されてフオスフア
ターゼにより分解されるのを防止する作用をす
る。 ここで用いる無機リン酸塩は通常の発酵培地に
使用されるものであつて、例えば
（NH4）2HPO4、KH2PO4、K2HPO4のごときも
のが例示し得る。本発明では培地組成分として上
述した炭素源および無機リン酸塩に加えて、カリ
ウム、マグネシウム、鉄、マンガンなどの無機
塩、場合によつては亜鉛、コバルト、モリブデン
のごとき金属の無機塩；アンモニア、アンモニウ
ム塩、尿素、硝酸塩のごとき蓄素源を使用し得
る。また、界面活性剤や消泡剤を必要に応じて培
地へ添加することもできる。 本発明で使用する倍地組成を例示すると下記の
とおりである。 炭素源 0.05〜２容量％ （NH4）2HPO4 ５〜45ｇ／ （PO4として3.5〜32ｇ／） KH2PO4 0.5〜2.5ｇ／ （PO4として0.35〜１、75ｇ／） K2HPO4 0.5〜2.5ｇ／ （PO4として0.275〜1.37ｇ／） （NH4）2SO4 ０〜1.0ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5〜5.0ｇ／ FeSO4・7H2O 0.05〜0.5ｇ／ CaCl2・2H2O ０〜0.2ｇ／ MnSO4・4H2O ０〜0.2ｇ／ 上述したごとき培地中における前掲のATP生
産菌の培養は、一般に、PH5.8〜9.0、好ましくは
6.0〜8.0、温度15〜50℃、好ましくは30〜40℃、
通気量0.5〜4.0V.V.M（空気量／培養液／
min）の条件下に40〜600rpmで撹拌しながら２
日乃至９日間行うとよい。なお、培地のPHの調整
はアンモニアのごときアルカリ性物質又は硫酸の
ごとき酸性物質、さらにはリン酸バツフアーのご
とき緩衝剤、尿素、炭酸カルシウムなどを使用し
得るが、アルカリ性物質を使用するときはアンモ
ニアは窒素源にもなるので特に好適である。 上述のごとき培養条件下で発酵させることによ
りATPを培地中に２〜12ｇ／の高濃度で蓄積
させることができる。発酵終了後菌体を除去し、
生成したATPを公知の手法により分離、採取す
る。例えば、発酵済培地から菌体を除去したのち
の上澄液について活性炭ならびにアニオン交換樹
脂を利用した吸着、溶出による分画処理および濃
縮沈殿処理の組合せによりATPは採取し得る。 本発明によると実施例に示すごとく、培地にア
デニンやその誘導体を添加しなくてもATPを２
ｇ／以上の高濃度で培地中に生成、蓄積し得
る。 以下に実施例を例示して本発明の効果を具体的
に説明する。 なお、各実施例中の培地中におけるATPの生
成量は下記のように表わされるATPとルシフエ
リン−ルシフエラーゼとの反応原理を利用し次の
ごとくして測定した。 (1) ルシフエリン＋ルシフエラーゼ＋ATPMg2 ―――→ アデニル−ルシフエリン＋ピロリン酸塩 (2) アデニル−ルシフエリンO2 ―――→ アデニル−
オキシルシフエリン 上記(2)の反応で発生するケイ光の560〜580nｍ
の波長域の光の強さをCHEM−
GLOWPHOTOMETERJ4−7441（American
Instrument Company製）を用いて、一定時間測
定してその積分量を求め、これを予め作成してあ
る既知のATP標準液検量線と対比して、培養液
中のATPの生成量を測定する。 実施例 １ （NH4）2HPO47.0ｇ、KH2PO41.0ｇ、
K2HPO41.0ｇ、MgSO4、7H2O1.0ｇおよび
FeSO4・7H2O0.1ｇをイオン交換水１に溶解し
た培地を300ml容の三角フラスコに各100ml分注
し、殺菌処理後メタノール1.6ｇ宛を夫々に添加
してなる各培地に、上記組成の寒天斜面培地で予
め培養したメチロモナス・プロバスFERM−Ｐ
No.3193をそれぞれ接種し、30℃で振盪培養した。
培養開始後４日目に培養液中にATP2.8ｇ／が
生成蓄積する。 この培養液１を80℃に５分間加温処理し、冷
却後遠心分離して菌体を除き、上澄液を3N塩酸
でPH3.5に調整したものを活性炭処理してATPを
活性炭に吸着させた後、1.4％アンモニア含有50
％アルコール溶液で活性炭に吸着したATPを溶
出する。この溶出液を低温下で減圧濃縮して過剰
のアンモニアを除いてPH8.0附近にする。 次いて、この濃縮液を予めCl型調整した強塩基
性陰イオン交換樹脂ダウエツクス１−X2（Cl）カ
ラムにATPを吸着させる。この吸着物をイオン
交換水で洗浄したのち、塩酸と塩化ナトリウムの
混合液（0.02M−HCl溶液（PH1.7）にNaClを溶
解して0.2M−Cl溶液としたもの）で溶出して
ATP画分を分取する。 この溶出液を苛性ソーダで中和後、これを活性
炭の充てんされているカラムに通し、15％アンモ
ニア水で溶出し、得られる溶出液を濃縮してアン
モニアを飛散させる。該濃縮液にメタノールを添
加することによりATPのナトリウム塩の結晶2.2
ｇを得た。 実施例 ２ （NH4）2HPO47.0ｇ、KH2PO41.0ｇ、
K2HPO41.0ｇ、MgSO4・7H2O2ｇ、FeSO4・
7H2O0.2ｇおよび消泡剤KS−66 0.2mlをイオン交
換水１に溶解した培地20を30容ジヤー・フ
アーメンターに仕込み、1.2Kg／cm2の加圧下120℃
で30分間殺菌処理する。冷却後、上記培地にメタ
ノール200mlを添加し、あらかじめ上記と同一の
培地で培養した母菌（メチロモナス・プロバス
FERM−ＰNo.3193）を２％接種し、35℃で500r.
p.mで撹拌しながら、毎分10／20液量／min
（0.5V.V.M）の通気をおこない、菌の増殖につれ
て毎分20／20／min（1.0V.V.M）と通気量を
増加させ、96時間培養をおこなう。 培養中のPHは14％アンモニア水で6.0〜7.2に自
動制御し、消費されるメタノールはガスクロマト
グラフイーで測定して0.3〜2.0％になるように自
動添加する。培養開始後96時間で培養液中に
ATP5.3ｇ／が生成蓄積する。培養液中のATP
は実施例１に記載と同じ方法により回収する。 実施例 ３ 実施例２で使用した培地成分のうち
（NH4）2HPO4の量を20ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP12ｇ／が生成・蓄積する。
ATPは実施例１と同じ方法により回収する。 実施例 ４ 実施例２で使用した培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を30ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP7ｇ／が生成・蓄積する。
ATPは実施例１と同じ方法により回収する。 比較例 １ 実施例２で使用の培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を３ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP0.2ｇ／が生成するにとど
まる。 比較例 ２ 実施例２で使用の培地成分のうち、
（NH4）2HPO4の量を50ｇ／とする以外は実施
例２と同じ条件で培養を行なう。培養開始後96時
間で培養液中にATP1.0ｇ／が生成するにすぎ
ない。 実施例 ５ 下記表に示す各菌株を用い、実施例３に記載と
同じ培養条件で培養したときのATP生産量を下
記表に示す。 【表】
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ メチロモナス属、シユードモナス属、プロタ
ミノバクター属、アクロモバクター属、コリネバ
クテリウム属およびバチルス属からなる群から選
択される属に属するメタノール資化性を有するア
デノシン−5′−トリフオスフエート生産菌を、メ
タノール又はメタノールと同一代謝経路を示す化
学物質および無機リン酸塩をリン酸根（PO4）と
して４〜35ｇ／を基質として含む培地中で培養
してアデノシン−5′−トリフオスフエートを生成
蓄積せしめて採取することを特徴とするアデノシ
ン−5′−トリフオスフエートの製造方法。 ２ メタノールと同一代謝経路を示す化学物質が
メタン、メチルアミン、ホルムアルデヒドおよび
ギ酸からなる群から選択されるものである特許請
求の範囲第１項に記載の製造方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6980079A JPS55162996A (en) | 1979-06-04 | 1979-06-04 | Preparation of adenosine-5'-triphosphate through fermentation process |
| DE19803020851 DE3020851C2 (de) | 1979-06-04 | 1980-06-02 | Adenosin-5'-Triphosphat |
| GB8017934A GB2052504B (en) | 1979-06-04 | 1980-06-02 | Process for the preparation of adenosine-5'-triphosphate by fermentation |
| SU802933104A SU1144619A3 (ru) | 1979-06-04 | 1980-06-03 | Способ получени аденозин-5 -трифосфата |
| FR8012332A FR2458588A1 (fr) | 1979-06-04 | 1980-06-03 | Procede pour preparer de l'adenosine-5'-triphosphate par fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP6980079A JPS55162996A (en) | 1979-06-04 | 1979-06-04 | Preparation of adenosine-5'-triphosphate through fermentation process |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS55162996A JPS55162996A (en) | 1980-12-18 |
| JPS6359680B2 true JPS6359680B2 (ja) | 1988-11-21 |
Family
ID=13413170
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP6980079A Granted JPS55162996A (en) | 1979-06-04 | 1979-06-04 | Preparation of adenosine-5'-triphosphate through fermentation process |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS55162996A (ja) |
| DE (1) | DE3020851C2 (ja) |
| FR (1) | FR2458588A1 (ja) |
| GB (1) | GB2052504B (ja) |
| SU (1) | SU1144619A3 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004261150A (ja) | 2003-03-04 | 2004-09-24 | Ajinomoto Co Inc | 目的物質の製造法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JPS51139677A (en) * | 1975-05-24 | 1976-12-02 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Process for cultivating methanol-assimilating microorganisms |
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-
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-
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- 1980-06-02 GB GB8017934A patent/GB2052504B/en not_active Expired
- 1980-06-03 FR FR8012332A patent/FR2458588A1/fr active Granted
- 1980-06-03 SU SU802933104A patent/SU1144619A3/ru active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2458588B1 (ja) | 1983-07-29 |
| FR2458588A1 (fr) | 1981-01-02 |
| DE3020851C2 (de) | 1982-04-15 |
| SU1144619A3 (ru) | 1985-03-07 |
| GB2052504A (en) | 1981-01-28 |
| DE3020851A1 (de) | 1980-12-11 |
| JPS55162996A (en) | 1980-12-18 |
| GB2052504B (en) | 1983-08-10 |
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