JPS6361624B2 - - Google Patents
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- JPS6361624B2 JPS6361624B2 JP54162155A JP16215579A JPS6361624B2 JP S6361624 B2 JPS6361624 B2 JP S6361624B2 JP 54162155 A JP54162155 A JP 54162155A JP 16215579 A JP16215579 A JP 16215579A JP S6361624 B2 JPS6361624 B2 JP S6361624B2
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- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は肝炎Be抗原を単離する方法に関する。
本発明の精製された肝炎Be抗原（HBeAg）のた
めの出発物質は肝炎Ｂ面抗原（HBsAg）を含有
する人の生物学的液体である。人体生物学的液体
中にHBsAgが存在することは特定の結果がHBe
AgまたはHBeAbの存在に対してマイナスの反応
を示した場合でもHBeAgまたはHBeAbの存在を
示す標識として役立つ。生物学的液体はHBsAg
を含有するいかなる人体生物学的液体であつても
よく、たとえば、血漿または経血が使用しうる。
最も容易に入手しうる生物学的液体は血漿であ
る。血漿は常用方法たとえば遠心器により血球と
血漿とを分離する操作を含むいわゆるプラズマフ
オレシス（plasmaphoresis）により得られる。
人体生物学的液体中のHBsAgのレベルは公知方
法により任意適当な手段を用いて、例えば反転受
動血漿凝集反応または補体結合によつて測定する
ことができる。生物学的液体が血漿である場合
は、血漿をCaCl2で処理してフイブリンを凝結さ
せ、これを次に遠心分離により除去する。転化さ
れた血漿を次に硫酸アンモニウムで沈殿させると
グロブリンに富んだ留分が得られる。このグロブ
リン沈殿物を遠心分離により集めそして生理食塩
液に溶解しそして生理食塩液に対して透析して硫
酸アンモニウムの大部分を除去する。人の生物学
的液体のHBeAgまたはHBeAbは等密度バンデイ
ング（isopycnic banding）のステツプと速度帯
域別バンデイング（rate zonal banding）のス
テツプによつて単離される。
本発明の精製された肝炎Be抗原（HBeAg）のた
めの出発物質は肝炎Ｂ面抗原（HBsAg）を含有
する人の生物学的液体である。人体生物学的液体
中にHBsAgが存在することは特定の結果がHBe
AgまたはHBeAbの存在に対してマイナスの反応
を示した場合でもHBeAgまたはHBeAbの存在を
示す標識として役立つ。生物学的液体はHBsAg
を含有するいかなる人体生物学的液体であつても
よく、たとえば、血漿または経血が使用しうる。
最も容易に入手しうる生物学的液体は血漿であ
る。血漿は常用方法たとえば遠心器により血球と
血漿とを分離する操作を含むいわゆるプラズマフ
オレシス（plasmaphoresis）により得られる。
人体生物学的液体中のHBsAgのレベルは公知方
法により任意適当な手段を用いて、例えば反転受
動血漿凝集反応または補体結合によつて測定する
ことができる。生物学的液体が血漿である場合
は、血漿をCaCl2で処理してフイブリンを凝結さ
せ、これを次に遠心分離により除去する。転化さ
れた血漿を次に硫酸アンモニウムで沈殿させると
グロブリンに富んだ留分が得られる。このグロブ
リン沈殿物を遠心分離により集めそして生理食塩
液に溶解しそして生理食塩液に対して透析して硫
酸アンモニウムの大部分を除去する。人の生物学
的液体のHBeAgまたはHBeAbは等密度バンデイ
ング（isopycnic banding）のステツプと速度帯
域別バンデイング（rate zonal banding）のス
テツプによつて単離される。
等密度バンデイングにおいては、すでに幾分か
精製された濃縮物が、単離される特定物質の密度
を含むある１つの密度勾配をその中に有する液体
媒質と接触せしめられる。この液体媒質は次に超
遠心分離にかけられ漿液の各成分がその個々の密
度に従つて密度勾配の全体に亘つて平衡分配され
る。この媒質の順次留分を移動させそして所望の
抗原を含む留分すなわち約1.04乃至1.15ｇ／c.c.の
密度を有する留分を分離する。上記勾配を形成す
る各溶液の濃度は約1.0から約1.41ｇ／c.c.までの
密度を包含するように選択される。この液体媒質
は線形勾配のものでも段階勾配のものでも使用し
うる。しかし、その固有分別能がより高い理由か
らして段階勾配の形態のものを使用するのが好ま
しい。
精製された濃縮物が、単離される特定物質の密度
を含むある１つの密度勾配をその中に有する液体
媒質と接触せしめられる。この液体媒質は次に超
遠心分離にかけられ漿液の各成分がその個々の密
度に従つて密度勾配の全体に亘つて平衡分配され
る。この媒質の順次留分を移動させそして所望の
抗原を含む留分すなわち約1.04乃至1.15ｇ／c.c.の
密度を有する留分を分離する。上記勾配を形成す
る各溶液の濃度は約1.0から約1.41ｇ／c.c.までの
密度を包含するように選択される。この液体媒質
は線形勾配のものでも段階勾配のものでも使用し
うる。しかし、その固有分別能がより高い理由か
らして段階勾配の形態のものを使用するのが好ま
しい。
速度帯域別バンデイングにおいては、上記等密
度バンデイング段階で得られた1.20〜1.22密度範
囲の留分がその中に密度勾配を有する液体媒質と
接触せしめられて超遠心分離にかけられる。ただ
し、この時には速度帯域別バンデイングの技術が
用いられる。すなわち、その速度および時間にお
いては平衡に到達せず、HBeAgおよび他の残留
漿液成分がその媒質中でのそれらの沈降係数に従
つてその媒質中に分配されるような速度ならびに
時間で超遠心分離される。この際の段階勾配を形
成する各溶液の濃度は約1.0から約1.28ｇ／c.c.の
密度範囲を包含するよう選択される。この速度帯
域別バンデイングの工程はHBeAgまたはHBeAb
が1.04乃至1.15ｇ／c.c.の密度領域に到達するまで
実施される。この時点で、そのHBeAgまたは
HBeAbがHBsAgおよび血漿の高分子マクログロ
ブリン成分から分離される。
度バンデイング段階で得られた1.20〜1.22密度範
囲の留分がその中に密度勾配を有する液体媒質と
接触せしめられて超遠心分離にかけられる。ただ
し、この時には速度帯域別バンデイングの技術が
用いられる。すなわち、その速度および時間にお
いては平衡に到達せず、HBeAgおよび他の残留
漿液成分がその媒質中でのそれらの沈降係数に従
つてその媒質中に分配されるような速度ならびに
時間で超遠心分離される。この際の段階勾配を形
成する各溶液の濃度は約1.0から約1.28ｇ／c.c.の
密度範囲を包含するよう選択される。この速度帯
域別バンデイングの工程はHBeAgまたはHBeAb
が1.04乃至1.15ｇ／c.c.の密度領域に到達するまで
実施される。この時点で、そのHBeAgまたは
HBeAbがHBsAgおよび血漿の高分子マクログロ
ブリン成分から分離される。
等密度バンデイングおよび速度帯域別バンデイ
ングの段階で使用される液体媒質は適当範囲内の
いかなる密度勾配であつてもよい。かかる溶液の
ための従来技術による溶質を例示すればスクロー
ス、臭化カリウム、塩化セシウム、酒石酸カリウ
ム等である。
ングの段階で使用される液体媒質は適当範囲内の
いかなる密度勾配であつてもよい。かかる溶液の
ための従来技術による溶質を例示すればスクロー
ス、臭化カリウム、塩化セシウム、酒石酸カリウ
ム等である。
上記等密度バンデイング工程は遠心器たとえば
エレクロヌクレオニクス−Ｋ（Electronucleonics
−Ｋ）中で、その定置ロータに生理食塩液を充填
し、そして段階勾配が形成されるまで順次その生
理食塩液を各液体媒質溶液分の密度の増加の順に
上方に移動させることによつて実施するのが好都
合である。生物学的液体は底からいくつかの最高
密度溶液を引き出しながらロータの頂部に導入さ
れる。典型的には生物学的液体の量は段階勾配の
液体の約15乃至40％である。遠心器はプログラム
された速度制御装置を通じて初期再配向位相の間
の混合を防止するような速度に制御される。平衡
に到達しそしてその産物がその適当密度点となつ
た時にロータの速度を同じ速度制御装置を介して
スピードダウンさせて元の配置に再配向される時
の混合を防止する。そのあと、勾配液を下から抜
き出しそして適当密度留分を捕集する。同じよう
な操作が速度帯域別バンデイングにおいても使用
される。
エレクロヌクレオニクス−Ｋ（Electronucleonics
−Ｋ）中で、その定置ロータに生理食塩液を充填
し、そして段階勾配が形成されるまで順次その生
理食塩液を各液体媒質溶液分の密度の増加の順に
上方に移動させることによつて実施するのが好都
合である。生物学的液体は底からいくつかの最高
密度溶液を引き出しながらロータの頂部に導入さ
れる。典型的には生物学的液体の量は段階勾配の
液体の約15乃至40％である。遠心器はプログラム
された速度制御装置を通じて初期再配向位相の間
の混合を防止するような速度に制御される。平衡
に到達しそしてその産物がその適当密度点となつ
た時にロータの速度を同じ速度制御装置を介して
スピードダウンさせて元の配置に再配向される時
の混合を防止する。そのあと、勾配液を下から抜
き出しそして適当密度留分を捕集する。同じよう
な操作が速度帯域別バンデイングにおいても使用
される。
等密度バンデイング段階（NaBr）からと速度
帯域別バンデイング段階（スクロース）からとの
1.04〜1.15密度範囲留分は１つに合体される。こ
のHBeAg留分は透析されそして典型的には約４
倍濃度に濃縮される。この透析および濃縮作業の
ためにはアミコン中空繊維装置（Amicon
hollow fiber equipmentが有効である。
帯域別バンデイング段階（スクロース）からとの
1.04〜1.15密度範囲留分は１つに合体される。こ
のHBeAg留分は透析されそして典型的には約４
倍濃度に濃縮される。この透析および濃縮作業の
ためにはアミコン中空繊維装置（Amicon
hollow fiber equipmentが有効である。
本発明の１つの実施態様によれば、多重負荷技
術の使用いかんにかかわらず、勾配は臭化ナトリ
ウムを用いて形成される。従来使用されてきた物
質に比較して、臭化ナトリウムはいくつかの顕著
な利点を有する。臭化ナトリウムの溶解性は冷蔵
庫温度（２〜６℃）において勾配形成に各種高密
度溶液を使用することを可能ならしめる。臭化ナ
トリウムを使用することは塩化セシウムのような
塩を使用するよりも明らかに経済的に有利である
ばかりでなく残存するセシウムイオンおよびHBs
Agと結合したセシウムイオンにより生じる被素
の問題がないという利点を持つ。臭化ナトリウム
勾配液中においては、生物理学的特性の故に
HBeAgに結合させたイオンはナトリウム塩の形
態であり、これは人の生物学的系と非常に親和性
があり、毒性の問題は生じない。
術の使用いかんにかかわらず、勾配は臭化ナトリ
ウムを用いて形成される。従来使用されてきた物
質に比較して、臭化ナトリウムはいくつかの顕著
な利点を有する。臭化ナトリウムの溶解性は冷蔵
庫温度（２〜６℃）において勾配形成に各種高密
度溶液を使用することを可能ならしめる。臭化ナ
トリウムを使用することは塩化セシウムのような
塩を使用するよりも明らかに経済的に有利である
ばかりでなく残存するセシウムイオンおよびHBs
Agと結合したセシウムイオンにより生じる被素
の問題がないという利点を持つ。臭化ナトリウム
勾配液中においては、生物理学的特性の故に
HBeAgに結合させたイオンはナトリウム塩の形
態であり、これは人の生物学的系と非常に親和性
があり、毒性の問題は生じない。
KBrに関して見た低温時のNaBrのすぐれた溶
解性は生物学的物質の安定性にとつてより有益な
低温の使用を可能ならしめる。線形勾配よりも段
階勾配の使用が好ましいのは次の理由による。す
なわち、段階勾配ではその段階境界に不純物が堆
積され、したがつて単一の勾配中で大量の血漿を
処理することが可能であるからである。
解性は生物学的物質の安定性にとつてより有益な
低温の使用を可能ならしめる。線形勾配よりも段
階勾配の使用が好ましいのは次の理由による。す
なわち、段階勾配ではその段階境界に不純物が堆
積され、したがつて単一の勾配中で大量の血漿を
処理することが可能であるからである。
以下に本発明の実施例を記す。これは本発明を
限定するものではない。なお、実施例２〜７は参
考例である。
限定するものではない。なお、実施例２〜７は参
考例である。
実施例 １
補体結合によつて測定したHBsAg力価が256
である血漿20を2.77％のCaCl2の2.2と混合し
そして複数の大きい遠心器に移した。37℃
（H2O浴）に２時間保持したのち、凝結した血漿
を遠心分離して転化血清を清澄化した。その上澄
み液を等量の硫酸アンモニウム溶液（450mg／ml）
と混合しそして５℃で一晩貯蔵した。形成された
沈殿をJA−10ロータ（１バツチ当りの容量３）
を用いて３分間、7000Xgでバツチ遠心分離して
捕集した。遠心分離後のペレツトを約2.25の生
理食塩液に懸濁した。この濃縮懸濁物を次に生理
食塩液40に対して透析して硫酸アンモニウムを
除去した。
である血漿20を2.77％のCaCl2の2.2と混合し
そして複数の大きい遠心器に移した。37℃
（H2O浴）に２時間保持したのち、凝結した血漿
を遠心分離して転化血清を清澄化した。その上澄
み液を等量の硫酸アンモニウム溶液（450mg／ml）
と混合しそして５℃で一晩貯蔵した。形成された
沈殿をJA−10ロータ（１バツチ当りの容量３）
を用いて３分間、7000Xgでバツチ遠心分離して
捕集した。遠心分離後のペレツトを約2.25の生
理食塩液に懸濁した。この濃縮懸濁物を次に生理
食塩液40に対して透析して硫酸アンモニウムを
除去した。
遠心器、エレクレロヌクレニクス−Ｋのロータ
にリン酸塩緩衝液8400mlを充填した。装置のガス
抜きのためロータを10000rpmまでランニングさ
せたのち、その定置ロータの底に下記の段階勾配
液を送入した。
にリン酸塩緩衝液8400mlを充填した。装置のガス
抜きのためロータを10000rpmまでランニングさ
せたのち、その定置ロータの底に下記の段階勾配
液を送入した。
１ 10％NaBr2000ml、ｄ＝1.08
２ 20％NaBr1000ml、ｄ＝1.17
３ 30％NaBr1500ml、ｄ＝1.28
４ 40％NaBr3900ml、ｄ＝1.41
透析した上記懸濁物2250mlをロータの底から40
％NaBrの2250mlを送り出しながら定置ロータの
頂部に導入した。このロータを30000rpmまで加
速しそしてこの速度で18時間運転を続けた。ロー
タを停止させたのち、1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲
にあるHBeAgに富んだ物質1000mlを集めた。
％NaBrの2250mlを送り出しながら定置ロータの
頂部に導入した。このロータを30000rpmまで加
速しそしてこの速度で18時間運転を続けた。ロー
タを停止させたのち、1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲
にあるHBeAgに富んだ物質1000mlを集めた。
さらに高い1.17〜1.22ｇ／c.c.の密度範囲の物質
を２番目に捕集した（3000ml）。HBsAgに富むこ
の物質をリン酸塩緩衝生理食塩液（PBS）に対
して透析しそして1000mlまで濃縮した。この作業
にはアミコン中空繊維装置を使用した。
を２番目に捕集した（3000ml）。HBsAgに富むこ
の物質をリン酸塩緩衝生理食塩液（PBS）に対
して透析しそして1000mlまで濃縮した。この作業
にはアミコン中空繊維装置を使用した。
次いでそのロータにリン酸緩衝液を充填し、上
記と同様にガス抜きし、そして定置ロータの底部
へ下記の段階勾配液を送入した。
記と同様にガス抜きし、そして定置ロータの底部
へ下記の段階勾配液を送入した。
１ ５％スクロース2000ml、ｄ＝1.02
２ 15％スクロース1650ml、ｄ＝1.06
３ 25％スクロース1750ml、ｄ＝1.10
４ 50％スクロース4300ml、ｄ＝1.23
前記NaBr等密度バンデイング工程で得られた
第２番目の高密度範囲物質100mlをロータの頂部
にロータ底部から50％スクロース100mlを送出し
ながら導入した。このあと、ロータを28000rpm
の速度で18時間運転した。ロータを停止させたの
ち、1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲のHBeAgに富んだ
物質1000mlを集めた。
第２番目の高密度範囲物質100mlをロータの頂部
にロータ底部から50％スクロース100mlを送出し
ながら導入した。このあと、ロータを28000rpm
の速度で18時間運転した。ロータを停止させたの
ち、1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲のHBeAgに富んだ
物質1000mlを集めた。
上記等密度バンデイング工程（NaBr）と速度
帯域別バンデイング工程（スクロース）とから得
られた1.05〜1.15密度の各留分を１つに合体した
（約２）。このHBeAg留分をPBSに対して透析
しそして500mlまで４倍に濃縮した。この透析と
濃縮との作業にはアミコン中空繊維装置が使用さ
れる。
帯域別バンデイング工程（スクロース）とから得
られた1.05〜1.15密度の各留分を１つに合体した
（約２）。このHBeAg留分をPBSに対して透析
しそして500mlまで４倍に濃縮した。この透析と
濃縮との作業にはアミコン中空繊維装置が使用さ
れる。
尚、前記等密度バンデイング工程（NaBr）で
得られた1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲にあるHBeAg
に富んだ物質を直接に、上記と同様にPBSに対
し透析し、そして濃縮し、HBeAgを得ることも
できる。
得られた1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲にあるHBeAg
に富んだ物質を直接に、上記と同様にPBSに対
し透析し、そして濃縮し、HBeAgを得ることも
できる。
更に、前記速度帯域別バンデイング工程（スク
ロース）から得られた1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲
にあるHBeAgに富んだ留分を直接に、上記と同
様にPBSに対し透析し、そして濃縮し、HBeAg
を得ることもできる。
ロース）から得られた1.05〜1.15ｇ／c.c.密度範囲
にあるHBeAgに富んだ留分を直接に、上記と同
様にPBSに対し透析し、そして濃縮し、HBeAg
を得ることもできる。
実施例 ２
補体結合による測定でHBsAg力価が128であ
る血漿20を2.77％CaCl2の2.2と混合しそして
複数の大型遠心器に移した。37℃（H2O浴）に
２時間保持したのち、凝結した血漿を遠心分離に
かけて転化血清を清澄化した。その上澄み液を等
量の硫酸アンモニウム溶液（450mg／ml）と混合
しそして一晩５℃で貯蔵した。生じた沈殿をJA
−10ロータ（１バツチ当りの容量３）を用いて
30分間7000Xgでバツチ遠心分離して捕集した。
遠心分離後のペレトを約2.25の生理食塩液に懸
濁した。この濃縮懸濁物を次に40の生理食塩液
に対して透析して硫酸アンモニウムを除去した。
る血漿20を2.77％CaCl2の2.2と混合しそして
複数の大型遠心器に移した。37℃（H2O浴）に
２時間保持したのち、凝結した血漿を遠心分離に
かけて転化血清を清澄化した。その上澄み液を等
量の硫酸アンモニウム溶液（450mg／ml）と混合
しそして一晩５℃で貯蔵した。生じた沈殿をJA
−10ロータ（１バツチ当りの容量３）を用いて
30分間7000Xgでバツチ遠心分離して捕集した。
遠心分離後のペレトを約2.25の生理食塩液に懸
濁した。この濃縮懸濁物を次に40の生理食塩液
に対して透析して硫酸アンモニウムを除去した。
遠心器、エレクロヌクレオニクス−Ｋのロータ
にリン酸塩緩衝液8400mlを充填した。装置のガス
抜きのためロータを10000rpmまでランニングさ
せたのち、その定置ロータの底部へ下部の段階勾
配液を送入した。
にリン酸塩緩衝液8400mlを充填した。装置のガス
抜きのためロータを10000rpmまでランニングさ
せたのち、その定置ロータの底部へ下部の段階勾
配液を送入した。
１ 10％NaBr2000ml、ｄ＝1.08
２ 20％NaBr1000ml、ｄ＝1.17
３ 30％NaBr1500ml、ｄ＝1.28
４ 40％NaBr3900ml、ｄ＝1.41
上記の透析した懸濁物2250mlを定置ロータの頂
部へ、底部から40％NaBrの2250mlを定置しなが
ら導入した。しかるのち、ロータ速度を3000rpm
まで加速しそしてこの速度で18時間運転を継続し
た。ロータを停止したのち、1.04〜1.15ｇ／c.c.の
密度範囲にあるHBeAgに富んだ物質1500mlを集
めた。
部へ、底部から40％NaBrの2250mlを定置しなが
ら導入した。しかるのち、ロータ速度を3000rpm
まで加速しそしてこの速度で18時間運転を継続し
た。ロータを停止したのち、1.04〜1.15ｇ／c.c.の
密度範囲にあるHBeAgに富んだ物質1500mlを集
めた。
第２番目の捕集（3000ml）を密度がより高い
1.17〜1.22ｇ／c.c.の範囲の物質について行なつ
た。HBsAgに富むこの物質をPBSに対して透析
しそして1000mlまで濃縮した。この操作にはアミ
コン中空繊維装置が使用された。
1.17〜1.22ｇ／c.c.の範囲の物質について行なつ
た。HBsAgに富むこの物質をPBSに対して透析
しそして1000mlまで濃縮した。この操作にはアミ
コン中空繊維装置が使用された。
次にロータにリン酸塩緩衝液を充填し、上記と
同様にガス抜きしそして定置ロータの底部へ下記
の段階勾配液を送入した。
同様にガス抜きしそして定置ロータの底部へ下記
の段階勾配液を送入した。
１ ５％スクロース2000ml、ｄ＝1.02
２ 15％スクロース1650ml、ｄ＝1.06
３ 25％スクロース1750ml、ｄ＝1.10
４ 50％スクロース4300ml、ｄ＝1.23
前記NaBr等密度バンデイング工程から得られ
た第２番目の高い密度範囲留分1000mlをロータの
頂部へ、底部から50％スクロースの1000mlを送出
しながら導入した。このあとロータを28000rpm
の速度で18時間運転した。ロータを停止した後
に、1.04〜1.15ｇ／c.c.密度範囲のHBeAgに富む留
分1500mlを捕集した。
た第２番目の高い密度範囲留分1000mlをロータの
頂部へ、底部から50％スクロースの1000mlを送出
しながら導入した。このあとロータを28000rpm
の速度で18時間運転した。ロータを停止した後
に、1.04〜1.15ｇ／c.c.密度範囲のHBeAgに富む留
分1500mlを捕集した。
等密度バンデイング工程（NaBr）ならびに速
度帯域別バンデイング工程（スクロース）からの
1.04〜1.15密度範囲の留分を１つにまとめた（約
３）。このHBeAb留分をPBSに対して透析しそ
して500mlまで６倍に濃縮した。この透析と濃縮
の操作にはアミコン中空繊維装置が使用された。
度帯域別バンデイング工程（スクロース）からの
1.04〜1.15密度範囲の留分を１つにまとめた（約
３）。このHBeAb留分をPBSに対して透析しそ
して500mlまで６倍に濃縮した。この透析と濃縮
の操作にはアミコン中空繊維装置が使用された。
実施例 ３
0.8％アガロースレオフオレシス（Agarose
Rheophoresis）プレート（Abbott Labs製）を
用いて免疫拡散判定試験を実施した。プレートか
らプラスチツクリングを慎重にはずしそして寒天
が無傷のままであるかどうかをチエツクするため
トラフにトリス緩衝液を充填した。そして６個の
外側の穴にHBeAbの有無の定を受ける被験血漿
各50μを充填した。実施例１のNaBrによる分
離段階で得られたHBeAgに富んだ物質の一部を
PBSに対して透析しそして４倍に濃縮した。こ
の濃縮物質の20μを中央の穴に充填した。この
レオフオレシスプレートを調湿したプラスチツク
の箱に入れて室温で培養させた。培養７日目にそ
の結果を記録した。沈殿が形成されたことで被験
血漿中にHBeAbの存在することが確認された。
結果を最終的に記録するため、その培養プレート
を写真にとつた。
Rheophoresis）プレート（Abbott Labs製）を
用いて免疫拡散判定試験を実施した。プレートか
らプラスチツクリングを慎重にはずしそして寒天
が無傷のままであるかどうかをチエツクするため
トラフにトリス緩衝液を充填した。そして６個の
外側の穴にHBeAbの有無の定を受ける被験血漿
各50μを充填した。実施例１のNaBrによる分
離段階で得られたHBeAgに富んだ物質の一部を
PBSに対して透析しそして４倍に濃縮した。こ
の濃縮物質の20μを中央の穴に充填した。この
レオフオレシスプレートを調湿したプラスチツク
の箱に入れて室温で培養させた。培養７日目にそ
の結果を記録した。沈殿が形成されたことで被験
血漿中にHBeAbの存在することが確認された。
結果を最終的に記録するため、その培養プレート
を写真にとつた。
実施例 ４
実施例３と同様に0.8％アガロースレオフオレ
シスプレート（Abbott Labs製）を用いて免疫拡
散判定試験を行なつた。プレートからプラスチツ
クリングを慎重にはずしそして寒天が無傷のまま
であるかをチエツクするためトリス緩衝液をトラ
フに充填した。外側の６個の穴にHBeAgの存在
を判定する被験血漿を各50μずつ充填した。実
施例２のNaBrによる分離段階で得られたHBe
Abに富む物質の一部をPBSに対して透析しそし
て５倍に濃縮した。この濃縮物質の20μの中央
の穴に入れた。このレオフオレシスプレートを調
湿されたプラスチツク箱に入れて室温で培養させ
た。培養７日目にその結果を記録した。被験血漿
中のHBeAgの存在が沈殿が生じることにより確
認された。結果の最終的記録として培養プレート
の写真をとつた。
シスプレート（Abbott Labs製）を用いて免疫拡
散判定試験を行なつた。プレートからプラスチツ
クリングを慎重にはずしそして寒天が無傷のまま
であるかをチエツクするためトリス緩衝液をトラ
フに充填した。外側の６個の穴にHBeAgの存在
を判定する被験血漿を各50μずつ充填した。実
施例２のNaBrによる分離段階で得られたHBe
Abに富む物質の一部をPBSに対して透析しそし
て５倍に濃縮した。この濃縮物質の20μの中央
の穴に入れた。このレオフオレシスプレートを調
湿されたプラスチツク箱に入れて室温で培養させ
た。培養７日目にその結果を記録した。被験血漿
中のHBeAgの存在が沈殿が生じることにより確
認された。結果の最終的記録として培養プレート
の写真をとつた。
実施例 ５
NaBrによる分離段階で得られたHBeAbに富
んだ物質の代りにスクロースによる分離段階で得
られたHBeAgに富む物質を用いて実施例４の試
験をくり返した。被験血漿中のHBeAgの存在が
沈殿の形成により確認された。
んだ物質の代りにスクロースによる分離段階で得
られたHBeAgに富む物質を用いて実施例４の試
験をくり返した。被験血漿中のHBeAgの存在が
沈殿の形成により確認された。
実施例 ６
実施例１の最終段階で得られた合体したHBe
Ag留分の20μを中央の穴に充填した点のみを相
違点として実施例３の試験を反復した。沈殿の存
在が被験血漿中のHBeAbの存在を確認させた。
Ag留分の20μを中央の穴に充填した点のみを相
違点として実施例３の試験を反復した。沈殿の存
在が被験血漿中のHBeAbの存在を確認させた。
実施例 ７
実施例２の最終段階で得られた合体したHBe
Ab留分を中央の穴に充填したことをのみを相違
点として実施例４の操作を反復した。沈殿の形成
により被験血漿中のHBeAgの存在が確認された。
Ab留分を中央の穴に充填したことをのみを相違
点として実施例４の操作を反復した。沈殿の形成
により被験血漿中のHBeAgの存在が確認された。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 肝炎Ｂ面抗原を含有する人間の生物学的液体
を等密度バンデイングにかけ、密度範囲が約1.04
乃至1.15ｇ／c.c.である留分を回収し、そして回収
された留分を透析しそして濃縮する段階よりなる
ことを特徴とする肝炎Be抗原の単離法。 ２ 濃縮段階で分子量が約100000以下である物質
を除去する特許請求の範囲第１項の方法。 ３ 上記人間の生物学的液体が清澄化された血漿
である特許請求の範囲第１項の方法。 ４ 等密度バンデイングがNaBrの水溶液中で実
施される特許請求の範囲第１項の方法。 ５ 補体結合によつて測定されたHBsAg力価が
少なくとも約256であり、そして HBeAgが単離される特許請求の範囲第１項の
方法。 ６ 肝炎Ｂ面抗原を含有する人間の生物学的液体
を等密度バンデイングにかけ、密度範囲が約1.04
乃至1.15ｇ／c.c.である第１の留分を回収し、密度
範囲が約1.17乃至1.22ｇ／c.c.である第２の留分を
回収し、その第２の留分を透析しそして濃縮し、
その濃縮された第２の留分を速度帯域別バンデイ
ングにかけそして密度範囲が約1.04乃至1.15ｇ／
c.c.である第３留分を回収し、そしてその第３留分
を透析しそして濃縮することを特徴とする肝炎
Be抗原の単離法。 ７ 上記人間の生物学的液体が清澄化された血漿
である特許請求の範囲第６項の方法。 ８ 肝炎Ｂ面抗原を含有する人間の生物学的液体
を等密度バンデイングにかけ、密度範囲が約1.04
乃至1.15ｇ／c.c.である第１の留分を回収し、密度
範囲が約1.17乃至1.22ｇ／c.c.である第２の留分を
回収し、その第２の留分を透析し濃縮し、その濃
縮した第２留分を速度帯域別バンデイングにかけ
そして密度範囲が約1.04乃至1.15ｇ／c.c.である第
３の留分を回収し、第１と第３の留分とを合体し
そして合体した留分を透析且つ濃縮することを特
徴とする肝炎Be抗原の単離法。 ９ 上記人間の生物学的液体が清澄化した血漿で
ある特許請求の範囲第８項の方法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US05/968,896 US4204989A (en) | 1978-12-13 | 1978-12-13 | Isolation of hepatitis B e antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5583714A JPS5583714A (en) | 1980-06-24 |
| JPS6361624B2 true JPS6361624B2 (ja) | 1988-11-29 |
Family
ID=25514908
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP16215579A Granted JPS5583714A (en) | 1978-12-13 | 1979-12-13 | Isolation of hepatitis be antigen |
| JP63065867A Granted JPS63264499A (ja) | 1978-12-13 | 1988-03-22 | 肝炎Ｂｅ抗体の単離法 |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63065867A Granted JPS63264499A (ja) | 1978-12-13 | 1988-03-22 | 肝炎Ｂｅ抗体の単離法 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4204989A (ja) |
| EP (1) | EP0012686B1 (ja) |
| JP (2) | JPS5583714A (ja) |
| AT (1) | ATE2048T1 (ja) |
| CA (1) | CA1129768A (ja) |
| DE (1) | DE2964390D1 (ja) |
| DK (1) | DK528279A (ja) |
| IE (1) | IE48665B1 (ja) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2470795A1 (fr) * | 1979-12-07 | 1981-06-12 | Pasteur Institut | Procede de purification de particules d'origine biologique, notamment de l'antigene de surface du virus de l'hepatite b (aghbs) et les produits obtenus |
| US4349539A (en) * | 1980-08-15 | 1982-09-14 | Merck & Co., Inc. | Separation of hepatitis B surface antigen |
| JPH0625069B2 (ja) * | 1981-01-29 | 1994-04-06 | ブリティッシュ・テクノロジー・グループ・リミテッド | Ｂ型肝炎ワクチン製造方法 |
| AU8746582A (en) * | 1981-09-02 | 1983-03-10 | Biogen N.V. | Hepatitis b virus e type antigen |
| CA1232849A (en) * | 1983-12-01 | 1988-02-16 | The Washington University | Circulating antigens of dirofilaria immitis, monoclonal antibodies specific therefor and methods of preparing such antibodies and detecting such antigens |
| US5101018A (en) * | 1989-06-12 | 1992-03-31 | International Minerals & Chemical Corp. | Method for recovering recombinant proteins |
| US5047511A (en) * | 1989-08-28 | 1991-09-10 | Pitman-Moore, Inc. | Method for recovering recombinant proteins |
| JPH0660773U (ja) * | 1993-01-25 | 1994-08-23 | 株式会社中川水力 | 電動サ−ボモ−タ方式電気調速機 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3636191A (en) * | 1969-10-08 | 1972-01-18 | Cancer Res Inst | Vaccine against viral hepatitis and process |
| US3887697A (en) * | 1971-08-09 | 1975-06-03 | Us Health | Hemagglutination method for australia antigen and antibody thereto |
| GB1356413A (en) * | 1971-09-09 | 1974-06-12 | Pfizer Ltd | Method of obtaining purified australia antigen from blood serum |
| US3994870A (en) * | 1974-01-31 | 1976-11-30 | The Community Blood Council Of Greater New York, Inc. | Purification of hepatitis B surface antigen |
| US3992517A (en) * | 1975-02-19 | 1976-11-16 | Pfizer Inc. | Detection of hepatitis B surface antigen by latex agglutination |
| US4024243A (en) * | 1975-06-16 | 1977-05-17 | Merck & Co., Inc. | Process for isolating hepatitis B antigen |
| FR2336141A1 (fr) * | 1975-12-23 | 1977-07-22 | Trepo Christian | Nouveau medicament permettant de traiter les infections aigues ou chroniques dues au virus de l'hepatite b |
| US4088748A (en) * | 1976-11-02 | 1978-05-09 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis B surface antigen |
| US4118477A (en) * | 1977-02-14 | 1978-10-03 | Merck & Co., Inc. | Hepatitis B antigen |
| US4102996A (en) * | 1977-04-20 | 1978-07-25 | Merck & Co., Inc. | Method of preparing hepatitis B core antigen |
-
1978
- 1978-12-13 US US05/968,896 patent/US4204989A/en not_active Expired - Lifetime
-
1979
- 1979-12-06 CA CA341,330A patent/CA1129768A/en not_active Expired
- 1979-12-10 DE DE7979400996T patent/DE2964390D1/de not_active Expired
- 1979-12-10 EP EP79400996A patent/EP0012686B1/en not_active Expired
- 1979-12-10 AT AT79400996T patent/ATE2048T1/de not_active IP Right Cessation
- 1979-12-11 IE IE2390/79A patent/IE48665B1/en not_active IP Right Cessation
- 1979-12-12 DK DK528279A patent/DK528279A/da not_active Application Discontinuation
- 1979-12-13 JP JP16215579A patent/JPS5583714A/ja active Granted
-
1988
- 1988-03-22 JP JP63065867A patent/JPS63264499A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK528279A (da) | 1980-06-14 |
| JPS63264499A (ja) | 1988-11-01 |
| IE792390L (en) | 1980-06-13 |
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| JPS5583714A (en) | 1980-06-24 |
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| IE48665B1 (en) | 1985-04-03 |
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