KR0154504B1

KR0154504B1 - 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR0154504B1
Application number: KR1019950025225A
Authority: KR
Inventors: 복성해; 권병목; 정태숙; 김영국; 손광희; 김성욱
Original assignee: 김은영; 한국과학기술연구원
Priority date: 1995-08-17
Filing date: 1995-08-17
Publication date: 1998-11-16
Anticipated expiration: 2015-08-17
Also published as: KR970010757A

Abstract

본 발명은 미생물 대사산물로부터 분리되어 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해 활성을 나타내는 신규 테트라사이클릭 화합물 및 그의 제조방법에 관한 것으로, 본 발명에 따라 토양으로부터 채취하여 분리 동정한 곰팡이 균주 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064(KCTC 8676P)의 대사 산물로부터 분리되거나 이로부터 변형된 테트라사이클릭 화합물 KRIBB-BP005d, m, w 및 wOH는 CETP를 저해하여 혈액내 콜레스텔ㄹ 및 저밀도 지질단백질의 수치를 감소시킬 수 있으므로, 동맥경화증을 비롯한 각종 심혈관 질환의 예방 및 치료제로서 이용될 수 있다.

Description

콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제 및 이의 제조방법

제1도 및 제2도는 각각 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRRIBB-BP005m의 수소 및 탄소 NMR 스텍트럼이고,

제3도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005d의 수소 NMR 스펙트럼이고,

제4도 및 제5도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005w의 수소 NMR 스펙트럼 및 cosy 스펙트럼이고,

제6도 및 제7도는 각각 KRIBB-BP005m의 HMQC 스펙트럼 및 질량분석 스펙트럼이고,

제8도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005wOH의 수소 NMR 스펙트럼이다.

본 발명은 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질(cholesteryl ester transfer protein, CETP) 저해 활성을 나타내는 신규 화합물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 미생물 대사산물로부터 얻은 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해 활성을 나타내는 신규 테트라사이클릭 화합물 및 이들을 미생물로부터 분리하는 방법에 관한 것이다.

동맥경화증은 현대 사회에 있어서 가장 큰 사망 요인의 하나로 부각되고 있으며, 심장마비, 협심증, 그리고 여러 유형의 뇌일혈의 근본 요인이 되기도 한다. 이러한 이유로 동맥경화증에 대해 많은 연구가 진행되어 왔으며, 특히 저밀도 지단백질내 콜레스테롤 에스테르의 농도를 감소시킴으로써 각종 심혈관 질환의 예방 및 치료제를 개발하려는 노력이 활발히 진행되고 있다. 고밀도 및 저밀도 지단백질(HDL 및 LDL)의 대사는 매우 복잡하여 많은 연구에도 불구하고 그 작용기작이 완벽하게 밝혀지지는 않았지만, 이들 지단백질은 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질(cholesteryl ester transfer protein, 이하 CETP로 약칭한다)의 작용에 의해 서로 연관되어 있는 것으로 알려져 있다.

혈장 단백질인 CETP는 고밀도 지단백질(HDL)로부터 저밀도 지단백질(LDL)과 초저밀도 지단백질(VLDL)로 콜레스테릴 에스테르를 전이하고, LDL과 VLDL로 HDL로 트리글리세라이드의 역방향 전이를 촉진하는 역할을 한다. 유전적으로 CETP가 결핍된 사람에 있어서는 LDL 내의 콜레스테릴 에스테르의 양이 감소하는 반면 HDL 내의 콜레스테릴 에스테르의 양이 증가하는 현상이 관찰되며, 사람의 CETP로 형질전환된 쥐에 있어서 LDL 내의 콜레스테릴 에스테르의 양이 증가된다는 연구 결과로부터, 혈장 HDL과 LDL 내 콜레스테릴 에스테르의 양은 혈장 단백질인 CETP의 활성에 의해 크게 영향을 받는다는 것을 알 수 있다.

혈장 CETP의 활성이 감소되면 항죽상동맥종(anti-atherogenic) HDL의 증가가 예상되며 죽상동맥종 VLDL과 LDL이 감소되어 관상동맥질환의 발병률이 감소된다. 보다 자세히 설명하면, 1986년에 일본에서 발견된 CETP가 결핍된 한 가계 구성원을 대상으로 한 연구에서, CETP 결핍에 의해 HDL의 콜레스테릴 에스테르를 LDL로 운반하는 것이 중지되어 상대적으로 LDL에 콜레스테릴이 적게 분포되는 결과를 초래한다는 것이 밝혀졌는데(표 1 참조), 이러한 CETP 결핍은 정상적인 삶을 영위하는데 아무런 장해를 주지 않을 뿐만 아니라 고령의 가계 구성원들에게 있어서도 심혈관계 질환이 발병하는 것을 거의 찾아볼 수 없는 것으로 나타났다(N. Engl. J. Med., 323, 1234(1990): Nature, 342, 448(1989); 및 Nature, 342, 448(1989)). 이와 같이 VLDL과 LDL은 동맥경화의 진전과 관련이 있고, HDL은 항죽상동맥종과 연관되어 있기 때문에 CETP를 `죽상동맥종' 단백질이라 하며, CETP 바련이 동맥경화의 진전속도를 가속화시키는 것으로 보인다. 사람의 CETP로 형질전환된 쥐는 정상 쥐보다 악성 동맥경화 현상을 나타내었는데, 동맥경화에 대한 심화 정도는 주로 CETP로부터 유도된 지단백질의 양과 관계가 크다.

CETP는 467개의 아미노산으로 구성되어 있으며, 분자량이 약 68,000 내지 70,000 달톤인 소수성 당단백질로, 콜레스테릴 에스테르, 트리글리세라이드 및 인지질에 대한 결합 부위를 가지며, 운반체가 종래된 충돌기작을 통해 지방을 운반하는 것으로 생각된다.

앞에서 언급한 바와 같이 CETP는 과량의 콜레스테롤을 혈액 내에 장시간 동안 머무르게 하여, 그 결과 콜레스테롤을 필요 이상으로 섭취하는 현대인에게 동맥경화증을 비롯한 각종 심혈관계 질환의 원인을 제공한다고 알려져 있다. 이러한 사실은 CETP 발현이 없는 쥐, 돼지 등과 같은 동물과 최근 일본에서 발견된 CETP 결핍 가계에서 동맥경화증에 대한 강한 저항성이 나타난다는 보고와, CETP가 발현된 쥐의 관상동맥 내면에 거품 세포의 형성이 현저히 증가되었다는 보고로부터 확인되며, 이에 따라서 선진 각국을 중심으로 CETP 저해제 개발을 통해 신규 동맥경화증 치료제를 개발하려는 노력이 활발히 진행되고 있다.

이에 본 발명자는 미생물 대사산물로부터 CETP 저해활성이 높은 물질을 탐색하던 중, 토양으로부터 분리된 곰팡이균인 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064(KCTC 8676P, 이하 `F1064'로 지칭함)의 배양액으로부터 CETP 저해활성을 나타내는 신규 화합물 KRIBB-BP005d, m, w를 분리하고, KRIBB-BP005w로부터 KRIBB-BP005wOH를 합성하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질의 작용을 저해하는 신규 화합물 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 하기 일반식(Ⅰ)을 갖는 화합물을 제공한다.

상기식에서,

X 및 Y는 각각 독립적으로 H 또는 OH이거나, 함께 O를 나타낸다.

본 발명에서는 또한 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064(KCTC 8676P)를 배양하고, 배양액을 원심분리하여 균체를 수확하고, 균체를 아세톤으로 추출하고, 아세톤 추출액을 농축시켜 실리카겔 칼럼 크로마토그래피하는 것을 포함하는, 상기 일반식(Ⅰ)의 화합물의 제조방법을 제공한다.

이하 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 따라 미생물의 대사 산물로부터 분리 정제된, CETP 저해 활성을 갖는 상기 일반식(Ⅰ)의 화합물에서, X가 OH이고 Y가 H인 화합물을 KRIBB-BP005d로, X 및 Y가 둘다 H인 경우를 KRIBB-BP005m으로, X 및 Y가 함께 O를 나타내는 경우를 KRIBB-BP005w로 명명하였다.

또한, 상기 일반식(Ⅰ)에서 X가 H이고 Y가 OH인 화합물은 KRIBB-BP005w를 수소화보론 나트륨을 이용하여 환원시킴으로써 얻을 수 있으며 이 화합물을 KRIBB-BP005wOH로 명명하였다.

본 발명에 따른 CETP 저해 화합물은 곰팡이균인 트리코세시움 로지움 F1064의 대사산물로부터 분리하여 얻을 수 있는데, 그 분리과정은 다음과 같다; 토양으로부터 F1064 균주를 분리 동정하고, 이를 포도당 2%, 효모추출물 0.2%, 폴리펩톤 0.5%, 제1인산염 0.1% 및 황산마그네슘 0.05%를 포함하는 멸균 배지(pH 6.5)에 접종한 후 26℃에서 3일간 진탕 배양한다. 종균 배양액을 수용성 전분 2%, SE50(입수처: Deltown chemurgic corp) 0.4%, CN50BT(입수처: Deltown chemurgic corp) 0.3%, 제2인산염 0.1%, 황산마그네슘 0.05%, 염화나트륨 0.2%, 탄산칼슘 0.3%, 황산철 20mg/100ml 및 염화코발트 5mg/100ml을 포함하는 멸균 배지(pH 7.0)에 접종하여 26℃에서 120시간동안 배양한다. 수득된 배양액을 원심분리하여 상등액을 버리고 균체를 모아서 아세톤으로 추출한다. 활성 물질을 함유하는 유기용매층을 감압 농축시킨 후 실리카겔 크로마토그래피(헥산:에틸아세테이트 구배)를 수행하고 수득된 각 분획을 박층 크로마토그래피(TLC, 전개 용매: 에틸아세테이트:헥산(6:4)를 수행하여 CETP 저해활성을 갖는 화합물 KRIBB-BP005d, KRIBB-BP005m 및 KRIBB-BP005w를 수득한다.

상기와 같이 수득된 화합물 KRIBB-BP005w를 수소화보론 나트륨으로 환원시켜 CETP 저해활성을 갖는 화합물 KRIBB-BP005wOH를 수득할 수 있다.

본 발명의 테트라사이클릭 화합물은 CETP를 저해하여 혈액내 콜레스테롤 및 저밀도 지단백질의 수치를 감소시킬 수 있으므로, 동맥경화증을 비롯한 각종 심혈관 질환의 예방 및 치료제로서 이용될 수 있다.

즉, 본 발명에 따른 CETP 저해 활성을 갖는 KRIBB-BP005d, m, w 및 wOH를 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립, 현탁택, 유화액 또는 비경구투여용 제제와 같은 단위투여형 또는 수회투여형 제제로 제형화하여 심혈관 질환의 예방 및 치료제로 사용할 수 있다.

본 발명의 테트라사이클릭 화합물을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물은 목적하는 바에 따라 비경구 투여하거나 경구투여할 수 있으며, 하루에 체중 1kg당 KRIBB-BP005d,, w 및 wOH는 3 내지 4mg, 그리고 KRIBB-BP005m은 2 내지 3mg의 양으로 투여될 수 있다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 사용될 특정 화합물, 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이 투여시간, 투여방법, 배설율, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.

이하에서 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들만으로 한정되는 것은 아니다.

[실시예 1]

미생물의 분리 및 동정

대한민국 지리산에서 채취한 토양시료를 멸균수에 희석하여 통상적으로 사용되는 포테이토-덱스트로즈 한천 평판배지에 도말하고 27℃에서 5일간 배양한 후 생성된 곰팡이 균총으로부터 곰팡이 세포를 순수 분리하였다.

상기 곰팡이 균주를 문헌[R. A., Samson and J. I. Pitt, Advances in Penicillium and Aspergillus systematics, Plenum Press, New York and London, (1985); 및 R. A., Samson and J. I. Pitt, Modern Condepta in Penicillium and Aspergillus systematics, Plenum Press, New York and London, (1989)]에 기술된 방법에 따라 동정한 결과 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum)으로 확인되었다. 분리된 곰팡이 균주는 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064로 명명하고 1995년 7월 10일자로 한국과학기술연구원 부설 생명공학연구원 부설 생명공학연구소 유전자 은행에 기탁번호 제KCTC 8676P호로서 기탁하였다.

[실시예 2]

KRIBB-BP005d, m 및 w의 분리 및 정제

실시예 1에서 분리한 곰팡이 F1064 균주를 포도당 2%, 효모추출물 0.2%, 폴리펩톤 0.5%, 제1인산염 0.1%, 및 황산마그네슘 0.05%를 포함하는 멸균 배지(pH 6.5) 200ml가 들어있는 1ℓ 삼각 플라스크에 접종한 후 26℃에서 3일간 진탕 배양하였다. 상기 종균 배양액 2ml를 수용성 전분 2%, SE50(입수처: Deltown chemurgic corp) 0.4%, CN50BT(입수처: Deltown chemurgic corp) 0.3%, 제2인산염 0.1%, 황산마그네슘 0.05%, 염화나트륨 0.2%, 탄산칼슘 0.3%, 황산철 20mg 염화망간 10mg 황산아연 10mg 및 염화코발트 5mg을 포함하는 멸균(121℃에서 15분) 배지(pH 7.0) 100ml를 함유한 삼각 플라스크에 접종하여, 교반속도 100rpm, 통기속도 0.3VVM 및 용존산소 0.6% 조건에서 26℃로 120시간동안 배양하였다.

수득된 배양액 1ℓ를 7000rpm으로 15분간 원심분리한 후, 상등액을 버리고 균체만 모아서 1ℓ의 아세톤으로 추출하였다. 활성물질을 함유한 것으로 확인된 유기용매층을 감압하에 농축시켰다. 이어서 120g의 실리카겔 60(Mercktk, 230-400 메쉬)을 400ml의 헥산 용액에 현탁시킨 후 칼럼(4.5×50cm)에 충진하고, 상기에서 얻은 농축액을 메틸엔 클로라이드에 녹여 칼럼 상단에 로딩하였다. 100:0(v:v) 헥산:에틸아세테이트 용액으롭터 에틸아세테이트의 비율을 높이면서 단계적으로 용출시켜 각각 30ml의 분획들을 수집하였다. 각 분획을 박층 크로마토그래피(TLC, 전개용매=헥산:에틸아세테이트(6:4)로 분석하여 Rf치가 각각 0.3, 0.6, 0.8인 KRIBB-BP005d, KRIBB-BP005m 및 KRIBB-BP005w를 분리하였다. 이들 각 화합물의 수율은 각각 5.6mg, 7.3mg 및 11.5mg이었다.

[실시예 3]

KRIBB-BP005wOH의 합성

잘 건조된 2경 플라스크에 마그네틱 바를 넣고 격막(septum)으로 잘 막은 다음, 질소 가스를 불어 넣은 풍선을 그 위에 꽂아 산소와의 접촉을 막으면서, 얼음욕으로 0℃를 계속 유지하였다. 이어서, 정제된 테트라하이드로푸란(THF) 2ml에 30mg(0.1mmol)의 실시예 2에서 분리 정제한 KRIBB-BP005w를 녹여 반응 용기에 담고, 수소화보론 나트륨을 반응물질의 1.5배 정도 과량(약 0.15mmol)으로 첨가한 후 30분간 잘 교반하였다. 반응이 완료되면, 염화암모늄과 물을 첨가하여 반응을 중지시키고, 에틸아세테이트를 첨가하여 수층과 유기층으로 분배한 후, 분액 깔대기를 이용하여 유기층을 모았다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 감압하에서 유기용매를 제거한 다음 잔류물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 정제하여 KRIBB-BP005wOH 24mg을 얻었다(수율 80%).

[실시예 4]

KRIBB-BP005d, m, w 및 wOH의 구조 분석

상기와 같이 수득된 화합물 KRIBB-BP005d, m 및 w는 다음과 같은 분석방법에 의해 구조를 결정하였다.

(1) 자외선-가시광선 흡광도 분석

정제된 각 화합물 0.1mg을 100% 메탄올 2ml에 녹여 자외선-가시광선 분광기(Shimadzu사, UV-265)를 사용하여 흡수파장을 분석하였으며, 210nm에서 흡수 피크가 나타나는 것을 확인하였다.

(2) 분자량 분석

VG70-VSEQ 질량 분석기(vacuum generator, 영국)를 이용하여 고분해능 전자충격(high resolution electron impaction, HREI)-MS 방법으로 분자량 및 분자식을 결정하였다.

(3) 핵자기 공명(NMR) 분석

활성물질을 완전히 건조시켜 CDCl₃0.5ml에 녹인 후 직경 5mm 튜브에 넣어 공명기(Bruker AM-300)를 이용하여 NMR 분석을 행하였다.¹H-NMR은 300.13MHz로,¹³C-NMR은 75.47MHz로 측정하였으며, 500MHz NMR을 이용하여 2-D NMR(Cosy 및 HMQC) 실험을 수행하여 보다 자세한 입체구조를 결정하였다.

제1도 및 제2도는 각각 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005m의 수소 및 탄소 NMR 스펙트럼이고; 제3도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005d의 수소 NMR 스펙트럼이며; 제4도 및 제5도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005w의 수소 NMR 스펙트럼 및 cosy 스펙트럼이고; 제6도 및 제7도는 각각 KRIBB-BP005m의 HMQC 스펙트럼 및 질량분석 스펙트럼이며; 제8도는 본 발명에 따른 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제인 KRIBB-BP005wOH의 수소 NMR 스펙트럼이다.

상기와 같이 구조 분석된 KRIBB-BP005d, m 및 w의 이화학적 성상은 다음과 같다.

(1)KRIBB-BP005d의 이화학적 성상

·외관(appearance) : 무색고체

·분자식 : C₂₀H₃₀O₃

·분자량

측정치[M]⁺: 318.2186; 계산치 : 318.2195

·자외선 홉광치(UV) : 210nm

·적외선 스펙트럼(IR) : 3518, 2931, 1762, 1700, 1462, 1145, 933cm^-1

·용해도

가용성 용매 : 메탄올, CHCl₃

불용성 용매 : 물

(2)KRIBB-BP005m의 이화학적 성상

·외관 : 무색고체

·분자식 : C₂₀H₃₀O₂

·분자량

측정치[M]⁺: 302.2239; 계산치 : 302.2245

·자외선 홉광치(UV) : 210nm

·적외선 스펙트럼(IR) : 2935, 1750, 1465, 1145, 937cm^-1

·용해도

가용성 용매 : 메탄올, CHCl₃

불용성 용매 : 물

(3)KRIBB-BP005w의 이화학적 성상

·외관 : 무색고체

·분자식 : C₂₀H₂₈O₃

·분자량

측정치[M]⁺: 316.2003; 계산치 : 316.2038

·자외선 홉광치(UV) : 210nm

·적외선 스펙트럼(IR) : 2924, 1759, 1712, 1141, 937cm^-1

·용해도

가용성 용매 : DMSO, CHCL₃

불용성 용매 : 물

(4)KRIBB-BP005wOH의 이화학적 성상

·외관 : 황색액체

·분자식 : C₂₀H₃₀O₃

·분자량

측정치[M]⁺: 319.2257; 계산치 : 319.2273

·자외선 홉광치(UV) : 210nm

·적외선 스펙트럼(IR) : 3514, 2924, 1747, 1458, 1284, 920cm^-1

·용해도

가용성 용매 : 메탄올, CHC₃

불용성 용매 : 물

[실시예 5]

콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해활성 측정

콜레스테릴 에스테르 전이 단백질의 활성은 [³H]CETP 섬광근접 분석법(scintillation proximity assay, SPA)을 이용하여 측정하였다. 즉, [³H] 콜레스테릴 에스테르가 HDL로부터 비오틴과 결합된 LDL로 운반되고, 이 비오틴-LDL 결합체는 아비딘(Avidin)과 결합된 섬광 분자(형광미세구(fluomicrosphere)와 결합하여³H의 β-방출체가 수용액상에서 섬광 분자와 매우 가까운 거리에 인접함으로써 에너지(빛)을 내게 되며, 이 빛의 강도를 측정함으로써 CETP의 활성을 검색하게 되는 것이다.

먼저 CETP 활성을 측정하기 전에 모든 시약을 얼음물로 냉각하였다. 1ml 원심분리튜브에 10ul의 분석 완충액(50mM Hepes, 0.15M NaCl, 0.1%(w/v) NaN₃, pH 7.4), 10ul의 [³H] 콜레스테릴 에스테르-H이 및 10ul의 비오틴-LDL을 혼합한 후, 사람의 혈장으로부터 분리한 CETP 10ul(30ng)을 첨가하여 반응을 수행하였다. 이때 공사료는 10ul의 CETP 대신에 10ul의 물을 첨가하였으며, 대조구로는 10ul의 시료 대신에 물 또는 메탄올을 첨가하여 동일한 조건에서 반응시켰다.

37℃에서 4시간 동안 반응시킨 후, 200ul의 SPA 비이드를 첨가하여 반응을 정지시키고, 평형에 도달하도록 실온에서 1시간 동안 정치시켰다. CETP 활성저해도는 반응시킨 원심분리튜브에서 액체섬광 계수기를 이용하여 HDL로부터 LDL로 전이된 콜레스테릴 에스테르의 양을 CPM(count per minute) 단위로 측정하여 하기 식에 의해 계산하였다.

상기 방법에 따라, 본 발명의 KRIBB-BP005d, m, w 및 wOH가 CETP의 활성을 50% 저해하는 농도(IC₅₀)를 측정하여 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

또한, 본 발명의 화합물들을 가지고 ICR 생쥐에서 복강내 주사로 LD을 측정한 결과, 500 내지 600mg/kg 체중으로 나타났다.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따라 토양으로부터 채취하여 분리 동정한 곰팡이 균주 트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064(KCTC 8676P)의 대사 산물로부터 분리되거나 이들로부터 변형된 테트라사이클릭 화합물 KRIBB-BP005d, m, w 및 wOH는, CETP를 저해하여 혈액내 콜레스테롤 및 저밀도 지질단백질의 수치를 감소시킬 수 있으므로, 동맥경화증을 비롯한 각종 심혈관 질환의 예방 및 치료제로서 이용될 수 있다.

Claims

하기 일반식(Ⅰ)을 갖는 화합물;

상기식에서, X 및 Y는 각각 독립적으로 H 또는 OH이거나, 함께 O를 나타낸다.
트리코세시움 로지움(Trichothecium roseum) F1064(KCTC 8676P) 균주를 배양하고, 배양액을 원심분리하여 균체를 수확하고, 균체를 아세톤으로 추출하고, 아세톤 추출액을 농축시켜 실리카겔 칼럼 크로마토그래피하는 것을 포함하는, 상기 일반식(Ⅰ)의 화합물의 제조방법.
제2항에 있어서, X 및 Y가 함께 O를 나타내는 화합물을 수소화보론 나트륨으로 환원시키는 단계를 더욱 포함하는 X가 H이고 Y가 OH인 일반식(Ⅰ)의 화합물의 제조방법.
제1항의 화합물을 포함하는 콜레스테릴 에스테르 전이 단백질 저해제 조성물.