JPH09202797A

JPH09202797A - ５α−還元酵素阻害化合物ｄ１０６７３３１

Info

Publication number: JPH09202797A
Application number: JP8010280A
Authority: JP
Inventors: Michihiro Sugano; 道裕菅野; Yoko Ogura; 陽子小倉; Emiko Hatano; 恵美子波田野; Takakazu Hamada; 孝和浜田; Takeshi Hosoya; 剛細矢
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1996-01-24
Filing date: 1996-01-24
Publication date: 1997-08-05

Abstract

(57)【要約】【課題】本発明は、５α−還元酵素阻害作用を有し、前
立腺肥大症の予防薬および／または治療薬などの医薬と
して有用な化合物を提供する。【解決手段】式（Ｉ）【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は５α−還元酵素阻害
作用を有する新規なｄ１０６７３３１またはその塩に関
する。

【０００２】

【従来の技術】前立腺肥大症は、男性の加齢に伴う疾患
であり、近年の平均寿命の延長によりその疾患者数は著
しく増加している。本疾患の基本的病態は肥大血節の増
大による尿道抵抗の増加で、症状は排尿障害、残尿感で
ある。ところで、前立腺肥大症組織では正常前立腺組織
と比較して、５α−ジヒドロテストステロン（５α−Ｄ
ＨＴ）含量が有意に高いことが知られている。この５α
−ＤＨＴはおもに男性の生殖器である前立腺で、テスト
ステロンからテストステロン−５α−還元酵素によって
合成される。そこでテストステロン−５α−還元酵素を
阻害し、５α−ＤＨＴを低下させることで前立腺肥大症
を治療しようとする薬剤の開発が行われている。現在ま
でに開発されている薬剤としては、４−アザステロイド
骨格を有するフィナステロイド(G. H. Rasmusson, J.
R. Berman et al., J. Med. Chem.,29巻、 2298-2315頁
(1986年))がある。またステロイド骨格をもたない合成
化合物としてはベンズアニリド骨格を有するＯＮＯ−３
８０５(EP 0 291 245 A2)が知られている。また天然物
由来の物としては、フェナジン骨格を有するＷＳ−９６
５９ＡおよびＢ (O. Nakayama, M. Kohsaka et al., J.
Antibiot., 42巻、1221−1240頁 (1989年))、リボフラ
ビン(O. Nakayama, M. Kohsaka et al., J.Antibiot.,
43 巻、 1615-1616頁 (1990年))が知られている。

【０００３】一方、ステロイド骨格を有する化合物とし
ては例えば△^{4、6、8(14)、22}cholesta-3-one (M.Kobayash
i ら、Chem.Pharm.Bull., 40巻、 72-74 頁 (1992年) )
や△^{4、6、8(14)、22}−ergostatetraen-3-one (H.Morimoto
ら、Liebigs Ann.Chem.,708 巻、 230-240 頁(1967 年)
）が知られているが、これらの化合物の薬理活性は知
られていない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明者等はアスペル
ギルス（Aspergillus)属に属するＳＡＮＫ２２２９
５株の培養液から５α−還元酵素阻害作用を有する新規
化合物ｄ１０６７３３１が生産されることを見出して本
発明を完成した。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）式
（Ｉ）

【０００６】

【化２】

【０００７】を有するｄ１０６７３３１またはその塩に
関する。

【０００８】また、本発明は、（２）アスペルギルス
（Aspergillus)属に属するｄ１０６７３３１生産菌を培
養し、その培養物から、ｄ１０６７３３１を採取するこ
とからなるｄ１０６７３３１の製法、に関する。

【０００９】更に詳細には、本発明は、（３）アスペ
ルギルス属に属するｄ１０６７３３１生産菌がアスペル
ギルステレウストム（Aspergillus terreus Thom) Ｓ
ＡＮＫ２２２９５株である（２）記載の製法、に関す
る。

【００１０】また、本発明は、（４）ｄ１０６７３３
１またはその塩からなる医薬、に関する。

【００１１】更に詳細には、本発明は、（５）ｄ１０
６７３３１またはその塩を有効成分とする５α−還元酵
素阻害化合物、に関する。

【００１２】特に、本発明は、（６）ｄ１０６７３３
１またはその塩を有効成分とする前立腺肥大症の予防薬
または治療薬、に関する。

【００１３】本発明のｄ１０６７３３１は、下記の理化
学的性状を有する。

【００１４】１）物質の性状：淡白色粉末２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₄₀Ｏ₃ （高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：４２４（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは、次に示す通
りである。 2970, 1650, 1640, 1590, 1050, 1030 。

【００１５】５）¹ Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：
ｐｐｍ）重ベンゼン中、内部基準にテトラメチルシランを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル(360 MHz) は、以下の
通りである。 6.31 (1H, d, J=9.4 Hz), 5.95 (1H, s), 5.82 (1H,
d, J=9.6 Hz),5.27 (1H, dd, J=15.2, 8.0 Hz), 5.19
(1H, dd, J=15.2, 8.2 Hz),3.80 (1H, dd, J=10.4, 7.2
Hz), 3.66 (1H, dd, J=10.4, 5.4 Hz),2.40 (1H, m),
2.40 (1H, m), 2.19 (1H, m), 2.16 (1H, m),2.16
(1H, m), 2.01 (1H, m), 2.01 (1H, m), 1.93 (1H,
m),1.83 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.
44 (1H, m),1.31 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.21 (1H,
m), 1.14 (3H, s),1.13 (3H, s), 1.04 (1H, m),
0.98 (3H, d, J=6.7), 0.79 (3H, s),0.77 (3H, s)。

【００１６】６）¹³Ｃー核磁気共鳴スペクトル：（δ：
ｐｐｍ）重ベンゼン中、内部基準にテトラメチルシランを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル(90 MHz)は、以下の通
りである。 197.6 (s), 162.7 (s), 154.5 (s), 140.1(d), 13
3.2 (d),126.7 (d), 125.7 (d), 125.4 (s), 124.5
(d), 73.3 (s),64.9 (t), 55.9 (d), 55.5 (d),
45.0 (d), 44.3 (s),40.1 (d), 37.1 (s), 36.4
(t), 34.9 (t), 34.7 (t),30.3 (q), 28.4 (t),
26.6 (q), 25.7 (t), 21.4 (q),19.5 (t), 19.4
(q), 16.9 (q) 。

【００１７】７）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ
（ε）エタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは、以下
の通りである。 282 (3820), 350 (14950)。

【００１８】８）溶解性：メタノール、エタノール、ア
セトン、ジメチルスルホキシド、ベンゼン、クロロホル
ム、ジエチルエーテル、酢酸エチルに可溶。水に不溶。

【００１９】９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。

【００２０】１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．１５吸着剤；逆相プレート（ＲＰ−１８Ｆ２５４、メ
ルク社製）展開溶媒；メタノールー水＝９：１。

【００２１】本発明のｄ１０６７３３１は、常法に従
って塩にすることができる。ｄ１０６７３３１の塩と
しては、ｄ１０６７３３１に比べて医学的に使用され、
薬理上受け入れられる、即ち活性を低下せしめない、毒
性を増加せしめない、ものであれば特に限定はない。な
お、医薬以外の用途、例えば中間体として使用する場合
は、なんら限定はない。その様な塩としては、好適には
ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、のようなアル
カリ金属塩；カルシウム塩、マグネシウム塩、のような
アルカリ土類金属塩；アルミニウム塩、鉄塩、亜鉛塩、
銅塩、ニッケル塩、コバルト塩等の金属塩；アンモニウ
ム塩；ｔ−オクチルアミン塩、ジベンジルアミン塩、モ
ルホリン塩、グルコサミン塩、フェニルグリシンアルキ
ルエステル塩、エチレンジアミン塩、Ｎ−メチルグルカ
ミン塩、グアニジン塩、ジエチルアミン塩、トリエチル
アミン塩、ジシクロヘキシルアミン塩、Ｎ，Ｎ’−ジベ
ンジルエチレンジアミン塩、クロロプロカイン塩、プロ
カイン塩、ジエタノールアミン塩、Ｎ−ベンジル−フェ
ネチルアミン塩、ピペラジン塩、テトラメチルアンモニ
ア塩、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩のよ
うな有機塩等のアミン塩；を挙げることができる。好適
には薬理上許容される塩である。

【００２２】更に、本発明のｄ１０６７３３１は種々
の立体異性体を有する。本発明においては、これらの異
性体の等量および非等量混合物がすべて単一の式で示さ
れている。従って、本発明においてはこれらの異性体お
よびこれらの異性体の混合物をもすべて含むものであ
る。

【００２３】更に本発明において、ｄ１０６７３３１
が溶剤和物（例えば水和物）を形成する場合には、これ
らもすべて含むものである。

【００２４】例えば、本発明のｄ１０６７３３１が、
大気中に放置されたり、または再結晶をすることによ
り、水分を吸収し、吸着水が付着したり、水和物を形成
する場合がある。本発明にはこのような溶剤和物も含ま
れる。

【００２５】更に本発明において、生体内において代謝
されてｄ１０６７３３１に変換される化合物、いわゆ
るプロドラッグもすべて含むものである。

【００２６】本発明の新規化合物ｄ１０６７３３１を
生産する上記ＳＡＮＫ２２２９５株の菌学的性状は
次の通りである。

【００２７】ＣＹＡ培地上のコロニーの直径は２５℃で
１週間培養すると４９−５１ｍｍに達する。表面はビロ
ード状から羊毛状で、中心部では綿毛状を呈し、同心円
状・放射状にしわを形成する。培地中に黄色い可溶性色
素が浸出する。分生子は褐色である。ＭＥＡ培地上のコ
ロニーの直径は２５℃で１週間培養すると４９−５１ｍ
ｍに達する。表面は顆粒状である。菌糸は白色である。
分生子は疎で黄褐色を呈する。裏面はオリーブブラウン
色を呈する。３７℃でのコロニーの直径は６３−７１ｍ
ｍである。ＣＹ２０Ｓ培地上のコロニーの直径は２５℃
で１週間培養すると６６−７１ｍｍである。表面の色は
ＣＹＡ培地上のそれに類似する。分生子頭は柱状とな
る。柄は平滑で、無色、長さは１００−２５０μｍであ
る。頂球は幅１２−２０μｍ、球状から楕円状を呈し、
フィアライドは大きさ５−７×２−３μｍで、頂球の約
２／３を覆い、メトレと共にしっかり束なっている。
分生子は球形で、表面は平滑であり、直径は２−２．５
μｍある。無色で球形から卵形をした厚壁細胞が、培地
中に埋没した菌糸から生じる。以上のような特徴から、
本菌に該当するものを検索したとことろ、”A laborato
ry guide to commonAspergillus species and their te
leomorphs”，Klich M.A., Pitt, J.I. (1988),”CSIRO
”， Korenerup A. and Wanscher J.H.(1978)， ”M
ethuen handbook of colour” Eyre Methuen, London.
Klich and Pitt (1988) 記載されているアスペルギル
ステレウストム（Aspergillus terreus Thom) の記
載とよく一致した。よって、本菌株をアスペルギルス
テレウストム（Aspergillusterreus Thom) と同定し
た。

【００２８】尚、ＳＡＮＫ２２２９５株は、アスペル
ギルステレウストム（Aspergillus terreus Thom)
ＳＡＮＫ２２２９５株として、１９９５年０８月３０
日に通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所に寄
託され、寄託番号ＦＥＲＭＢＰ−５２１０が付され
た。

【００２９】周知の通り、アスペルギルス属は自然界に
おいて、または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放
射線照射、化学薬品処理等）により、変異を起こしやす
く、本発明のＳＡＮＫ２２２９５株もその点は同じで
ある。本発明にいうＳＡＮＫ２２２９５株はそのすべて
の変異株を包含する。また、これらの変異株の中には、
遺伝的方法、例えば、組み換え、形質導入、形質転換等
により得られたものも包含される。即ち、ｄ１０６７３
３１を生産するＳＡＮＫ２２２９５株、それらの変異
株およびそれらと明確に区別されない菌株はすべてＳＡ
ＮＫ２２２９５株に包含される。

【００３０】なお、以上において用いられた培地組成を
下記に示す。また、色調の表示は”Kornerup and Wansc
her (1978)”に従った。

【００３１】ＣＹＡ培地(Czapek yeast agar) リン酸水素二カリウム１ｇ Czapek concentrate * １０ｍｌイースト・エキストラクト５ｇシュークロース３０ｇ寒天１５ｇ蒸留水．１０００ｍｌ ──────────────────────────────。

【００３２】ＭＥＡ培地(Malt extract agar) マルト・エキストラクト２０ｇペプトン１ｇグルコース２０ｇ寒天１５ｇ蒸留水．１０００ｍｌ ──────────────────────────────。

【００３３】ＣＹＡ２０Ｓリン酸水素二カリウム１ｇ Czapek concentrate * １０ｍｌイースト・エキストラクト５ｇシュークロース２００ｇ寒天１５ｇ蒸留水．１０００ｍｌ ──────────────────────────────。

【００３４】 *Ｃｚａｐｅｋｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ硝酸ナトリウム３０ｇ塩化カリウム５ｇ硫酸マグネシウム・７水和物５ｇ硫酸第一鉄・７水和物０．１ｇ硫酸亜鉛・７水和物０．１ｇ硫酸第二銅・７水和物０．０５ｇ蒸留水．１０００ｍｌ ──────────────────────────────。

【００３５】

【発明の実施の形態】本発明のｄ１０６７３３１を得
るため、これらの微生物の培養は他の発酵生成物を生産
するために用いられるような培地中で行なわれる。この
ような培地中には、微生物が資化出来る炭素源、窒素源
および無機塩を含有する。

【００３６】一般に、炭素源としてはグルコース、フラ
クトース、マルトース、シュークロース、マンニトー
ル、グリセロール、デキストリン、オート麦、ライ麦、
トウモロコシデンプン、ジャガイモ、トウモロコシ粉、
大豆油、綿実油、糖蜜、クエン酸、酒石酸などをあげる
ことができる。これらの炭素源は当該培地に単独で用い
てもよいし、同培地にいくつかの炭素源を組み合わせて
用いることもできる。

【００３７】培地に用いる炭素源の正確な量は、培地中
の他の成分にもよるが、通常、培地量の１−１０重量
％で変量する。好適には７−９重量％であり、最適に
は８重量％である。

【００３８】窒素源としては、一般に蛋白質を含有する
物質を発酵工程に用いる。適当な窒素源としては、大豆
粉、フスマ、落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、
ファーマミン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプト
ン、肉エキス、イースト、イーストエキス、マルトエキ
ス、硝酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニ
ウム等である。いろいろの窒素源は、０．１−６重量％
の範囲で用いる。好適には２−４重量％であり、最適に
は３重量％である。

【００３９】炭素源および窒素源は、一般に組み合わせ
て用いるが、純粋な形態である必要がない。微量の生育
因子、ビタミンおよび鉱物栄養を含むより純度の低いも
のをもちいてもよい。また、ナトリウム、カリウム、マ
グネシウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェー
ト、サルフェート、クロライド、カーボネート等のイオ
ンを得ることの出来る通常の塩類を培地中に加えてもよ
い。また、菌の資化しうる硫黄化合物を培地に添加する
と、目的物の生成量が増大する場合がある。例えば、硫
酸亜鉛、硫酸銅、硫酸第一鉄、硫酸アンモニウムのよう
な硫酸塩、チオ硫酸アンモニウムのようなチオ硫酸塩、
亜硫酸アンモニウムのような亜硫酸塩等の無機硫黄化合
物；シスチン、システィン、Ｌ−チアゾリジン−４−カ
ルボン酸のような含硫アミノ酸、ヒポタウリン、グルタ
チオンのような含硫ペプチド等の有機硫黄化合物硫酸
第一鉄、硫酸銅のような重金属類、ビタミンＢ₁ 、ビオ
チンのようなビタミン類、サイアミンのような菌体増殖
促進物質等も必要に応じて添加してもよい。また、マン
ガン、鉄、モリブデン、亜鉛、その他の微量金属が含ま
れる。更に必要ならば、特に、栄養培地がかなり泡立つ
ならば、シリコンオイル、ポリアルキレングリコールエ
ーテル、植物油、動物油、界面活性剤のような消泡剤を
培地に添加しても良い（特に、液体培養に際しては、好
適である）。ＳＡＮＫ２２２９５株を培養しｄ１０
６７３３１を生産する培地のｐＨは、５．０−８．０
に変化させることが出来る。好ましくはｐＨは、７前後
である。

【００４０】菌の生育温度は４℃ から３２℃ ま
でであるが２０℃ から３０℃の範囲が生育良好で
あり、更にｄ１０６７３３１の生産には、２３℃ 付
近が好適である。

【００４１】培養方法としては、特に制限はなく、微生
物一般に用いられる培養法であればよく、撹拌培養法、
振とう培養法、通気培養法などを使用することができ
る。好適には、好気的な液体培養法である撹拌培養法、
振とう培養法、または通気培養法であり、更に好適に
は、振とう培養法である。なお、工業的には、通気撹拌
培養法が好適である。

【００４２】小規模な培養においては、２０℃ から
２６℃で数日間振とう培養を行うのが良好である。培養
は三角フラスコ中で、１ー２段階の種の発育工程により
開始する。種発育段階の培地は、炭素源および窒素源を
併用出来る。種フラスコは定温インキュベーター中で
２３℃、１乃至３日間振とうするか、または充分に成長
するまで振とうする。成長した種は第二の種培地、また
は生産培地に接種するのに用いる。中間の発育工程を用
いる場合には、本質的に同様の方法で成長させ、生産培
地に接種するためにそれを部分的に用いる。接種したフ
ラスコを一定温度で１乃至３日間、または生産量が最
大に達するまで振とうし、インキュベーションが終わっ
たらフラスコの含有物を遠心分離またはろ過する。

【００４３】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば、栄養培地をタンクの中で作成出来る。栄養培
地を１２５℃ まで加熱して滅菌し、冷却後、滅菌培地
にあらかじめ成長させてあった種を接種する。培養は
２０℃乃至２６℃で通気撹拌して行う。この方法は、
多量の化合物を得るのに適している。

【００４４】培養の経過に伴って生産されるｄ１０６
７３３１の量の経時変化は、高速液体クロマトグラフィ
ーを用いて測定することが出来る。通常は、振とう培養
法で５日間から８日間の培養でｄ１０６７３３１の生
産量は最高値に達する。

【００４５】培養終了後、培養液中の液体部分及び菌体
内に存在するｄ１０６７３３１は、培養液と同容量程
度のアセトンなどのケトン類、アセトニトリルなどのニ
トリル類のような有機溶媒を添加し、混合することによ
り抽出する。抽出液中に存在する菌体、その他の固形部
分を珪藻土をろ過助剤とする、ろ過操作または遠心分離
によって分別し、そのろ液または上清中および菌体中に
存在するｄ１０６７３３１を、５α−還元酵素阻害活
性を指標にしてその物理化学的性状を利用し抽出精製す
ることにより得られる。例えば、ろ液または上清中に存
在するｄ１０６７３３１は、最初に濃縮操作で混在す
る有機溶媒を除去した後、中性または酸性ｐＨ条件下
で水と混和しない有機溶剤、例えばブタノールなどのア
ルコール類、メチルエチルケトンなどのケトン類、酢酸
エチルなどのエステル類、クロロホルム、塩化エチレ
ン、塩化メチレンなどのハロゲン化炭化水素類を用いて
単独または、それらの組み合わせにより抽出精製するこ
とができる。

【００４６】あるいは吸着剤として、例えば活性炭また
は吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ
−４ (ローム・アンド・ハース社製) 等や、ダイアイオ
ンＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＣＨＰ−２０Ｐ、ＨＰ−５
０（三菱化成（株) 社製) 等が使用される。ｄ１０６
７３３１を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過させ
て不純物を吸着させて取り除くか、またはｄ１０６７
３３１を吸着させた後、アセトン水などの含水ケトン
類、メタノール水、ブタノール水などの含水メタノール
類を用いて溶出させることにより得られる。また、菌体
内に存在するｄ１０６７３３１は、５０−９０％含水
アセトンなどの含水ケトン類または含水メタノール類な
どの含水アルコール類により抽出し、次いで有機溶剤を
除去した後、ろ液と同様な抽出精製操作を行なうことに
より得られる。

【００４７】このようにして得られたｄ１０６７３３
１は、更にシリカゲル、マグネシウムーシリカゲル系の
フロリジルのような担体を用いた吸着カラムクロマトグ
ラフィー、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシ
ア社製) などを用いた分配カラムクロマトグラフィー、
セファデックスＧ−２５（ファルマシア社製) などを
用いたゲルろ過クロマトグラフィー、および順相、逆相
カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー等で精製す
ることが出来る。以上の分離、精製の手段を単独または
適宜組み合わせ反復用いることによりｄ１０６７３３１
を分離精製することができる。

【００４８】本発明のｄ１０６７３３１は、文献未載
の新規化合物であり、動物（例、ヒト、イヌ、ネコ、ウ
サギ等) において、５α−還元酵素阻害作用を示すこと
から、５α−還元酵素阻害化合物、例えば前立腺肥大症
の予防薬または治療薬、として有用である。

【００４９】本発明のｄ１０６７３３１を５α−還元
酵素阻害化合物、例えば前立腺肥大症の予防薬または治
療薬として用いる場合、種々の形態で投与される。その
投与形態としては特に限定はなく、各種製剤形態、患者
の年齢、性別その他の条件、疾患の程度等に応じて決定
される。例えば錠剤、丸剤、散剤、顆粒剤、シロップ
剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤の場
合には経口投与される。また注射剤の場合には単独であ
るいはぶどう糖、アミノ酸等の通常の補液と混合して静
脈内投与され、更には必要に応じて単独で筋肉内、皮
内、皮下もしくは腹腔内投与される。坐剤の場合には直
腸内投与される。

【００５０】これらの各種製剤は、常法に従って主薬に
賦形剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、溶解剤、矯味矯臭、
コーティング剤等既知の医薬製剤分野において通常使用
しうる既知の補助剤を用いて製剤化することができる。

【００５１】錠剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ぶどう糖、尿素、澱粉、
炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等
の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、単シロッ
プ、ぶどう糖液、澱粉液、ゼラチン溶液、カルボキシメ
チルセルロース、セラック、メチルセルロース、リン酸
カリウム、ポリビニルピロリドン糖の結合剤、乾燥澱
粉、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ラミナラン
末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシ
エチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナ
トリウム、ステアリン酸モノグリセリド、澱粉、乳糖等
の崩壊剤、白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加
油等の崩壊抑制剤、第４級アンモニウム塩基、ラウリル
硫酸ナトリウム等の吸収促進剤、グリセリン、澱粉等の
保湿剤、澱粉、乳糖、カオリン、ベントナイト、コロイ
ド状ケイ酸等の吸着剤、精製タルク、ステアリン酸塩、
硼酸末、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等が例示で
きる。更に錠剤は必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、
例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコ
ーティング錠あるいは二重錠、多層錠とすることができ
る。

【００５２】丸剤の形態に成形するに際しては、担体と
してこの分野で従来公知のものを広く使用でき、例えば
ぶどう糖、乳糖、澱粉、カカオ脂、硬化植物油、カオリ
ン、タルク等の賦形剤、アラビアゴム末、トラガント
末、ゼラチン、エタノール等の結合剤、ラミナランカン
テン等の崩壊剤等が例示できる。坐剤の形態に成形する
に際しては、担体としてこの分野で従来公知のものを広
く使用でき、例えばポリエチレングリコール、カカオ
脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼ
ラチン、半合成グリセライド等を挙げることができる。

【００５３】注射剤として調製される場合には、液剤お
よび懸濁剤は殺菌され、且つ血液と等張であるのが好ま
しく、これら液剤、乳剤および懸濁剤の形態に成形する
に際しては、希釈剤としてこの分野において慣用されて
いるものを全て使用でき、例えば水、エチルアルコー
ル、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリル
アルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、
ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類等を挙
げることができる。なお、この場合、等張性の溶液を調
製するに十分な量の食塩、ぶどう糖、あるいはグリセリ
ンを医薬製剤中に含有せしめてもよく、また通常の溶解
補助剤、緩衝剤、無痛化剤等を添加してもよい。

【００５４】更に必要に応じて着色剤、保存剤、香料、
風味剤、甘味剤等や他の医薬品を含有せしめてもよい。

【００５５】上記医薬製剤中に含まれる有効成分化合物
の量は、特に限定されず広範囲に適宜選択されるが、通
常全組成物中１−７０重量％、好ましくは１−３０重量
％含まれる量とするのが適当である。

【００５６】その投与量は症状、年齢、体重、投与方法
および剤形等によって異なるが通常は成人に対して１
日、上限として２、０００ｍｇ（好ましくは２００ｍ
ｇ、更に好ましくは２０ｍｇ）であり、下限として０．
００１ｍｇ（好ましくは０．０１ｍｇ、更に好ましくは
０．１ｍｇ）を投与することができる。

【００５７】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

【００５８】実施例１ｄ１０６７３３１（１）培養ＳＡＮＫ２２２９５株を、下記の組成の前培養培地
１００ｍｌを含む５００ｍｌの三角フラスコ（種フラス
コ）に接種した。次いでこれを２８℃で５日間、２１０
ｒｐｍのロータリー振盪機で前培養を行った。

【００５９】

【表１】前培養培地組成グリセロール５０ｇジャガイモ２０ｇイーストエキストラクト５ｇマルトエキストラクト５ｇ水道水１０００ｍｌ ──────────────────────── （ｐＨ無調整）。

【００６０】本培養は次のように行った。即ち、滅菌し
た上記の培地組成で、１００ｍｌを含む５００ｍｌの
三角フラスコ５０本に種培養液１ｍｌを入れ、２８℃で
７日間、２１０ｒｐｍのロータリー振盪機で培養を行っ
た。

【００６１】（２）単離三角フラスコ５０本分の培養液を吸引ろ過した。得られ
た菌体に８０％アセトンを３．０リットル加え、抽出
した。抽出液を吸引ろ過して、アセトンを除去した。こ
の作業を２回繰り返し、得られた水溶液をｐＨ３に調
整し等量の酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和
食塩水で洗浄し、次いで無水硫酸ナトリウムで脱水し、
ろ過後、溶剤を留去すると、５．７ｇの茶褐色の抽出
物が得られた。この抽出物にアセトンを加えて溶解し、
４００ｍｌのＨＰ−２０カラムクロマトグラフィーに付
した。このカラムをそれぞれ８００ｍｌの水、４０％
含水アセトン、６０％含水アセトンで洗浄し、８０％ア
セトンで溶出した。５α−還元酵素阻害活性の認められ
た画分を濃縮したところ、１．６ｇの茶褐色の物質を得
た。これを再び、アセトニトリルに溶解し、１４０ｍｌ
のコスモシルカラムクロマトグラフィーに付し、６０％
含水アセトンで溶出したところ活性の認められた７
１．７ｍｇの分画を得た。この物質をメタノールに溶解
し高速液体クロマトグラフィー（ＳｅｎｓｈｕＰＥＧ
ＡＳＩＬＯＤＳ２０φ×２５０ｍｍ，７０％アセト
ニトリル）に付した。分取した画分を更に高速液体クロ
マトグラフィー（ＳｅｎｓｈｕＰＥＧＡＳＩＬＯＤ
Ｓ１０φ×２５０ｍｍ，６０％アセトニトリル）に付
すと、ｄ１０６７３３１１．７ｍｇが得られた。

【００６２】

【試験例】次に、ｄ１０６７３３１の５α−還元酵素
阻害作用について述べる。

【００６３】試験例１（１）ラット前立腺からの５α−還元酵素の調製５α−還元酵素の調製はリアングらの方法（Endocrinol
ogy, 117巻、５７１−５７９頁（１９８５年) ）に
準じて行った。即ち、成熟雄ラット（３５０−４００
ｇ：Ｓｐａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ) の前立腺腹葉をはさ
みで小片に細切後、組織の約３倍量の緩衝液（０．３３
Ｍシュクロース、１ｍＭジチオスレイトール、５０ｍＭ
ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドホスフェートー
還元体（ＮＡＤＰＨ）、０．００１％フェニルメチルス
ルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）を含む２０ｍＭリ
ン酸カリウム緩衝液 (ｐＨ７．４) を加え、まずポリ
トロン（ＫＩＮＥＭＡＴＩＣＡＧｍｂ）で、次いでテ
フロンーガラスホモジナイザーでホモジナイズした。得
られたホモジネートを遠心分離 (１００、０００×ｇ、
６０分) し、沈殿物を上記緩衝液に懸濁し、再び同条件
で遠心分離して洗浄した。この沈殿物をラット５α−還
元酵素とし、上記緩衝液を加えて、蛋白量を約２０ｍ
ｇ／ｍｌに調製後、−８０℃で凍結保存した。

【００６４】（２）ラットの５α−還元酵素阻害試験５α−還元酵素阻害試験はリアングらの方法（Endocrin
ology, 117巻、 571-579 頁(1985 年) ）に準じて行っ
た。即ち、ラットの５α−還元酵素（蛋白量２００μ
ｇ) 、２μＭ［¹⁴Ｃ］テストステロン、１ｍＭジチオス
レイトール、１．５ｍＭＮＡＤＰＨを含む４０ｍＭ
リン酸カリウム緩衝液 (ｐＨ７．０) にジメチルスル
ホキシド（場合によってはエタノールを用いて）に溶解
した検体２ｍｌ（対照群には溶媒のみ）を加え、総液量
が１００μｌになるように調製した後、３７℃で２５
分間ー４０分間インキュベートした。その後、１００
ｍｌのエタノールを加えて反応を停止し、この反応液の
うちの２５μｌを薄層クロマトプレート（ＬＫ６ＤＦ
ｓｉｌｉｃａｐｌａｔｅ、Ｗｈａｔｍａｎ社製）に
スポットし、酢酸エチル−シクロヘキサン（１：１）混
合液で室温中で２度展開した。薄層クロマトプレート上
の放射活性はバイオイメージアナライザー（富士写真フ
ィルム（株）社製）を用いて測定した。ラットの５α−
還元酵素活性は、加えた［¹⁴Ｃ］テストステロンのう
ち、［¹⁴Ｃ］５α−ジヒドロテストステロンとなった割
合（変換率（％）) で表し、検体の５α−還元酵素阻害
活性は次式を用いて求めた。

【００６５】検体の５α−還元酵素阻害活性＝｛１ー
（検体添加群の変換率／（対照群の変換率）｝x １００
（％）更に、検体の濃度を変えて上式を用いて阻害活性（％）
を求め、その値から５０％阻害濃度（ＩＣ₅₀）を求め
た。

【００６６】ｄ１０６７３３１の５α−還元酵素阻害活
性（ＩＣ₅₀）は５．８６ｍｇ／ｍｌであった。

【００６７】

【製剤例】次に、製剤例をあげる。製剤例１経口用カプセル剤

【００６８】

【表２】処方ｄ１０６７３３１３０ｍｇ乳糖１７０ｍｇトウモロコシ澱粉１５０ｍｇステアリン酸マグネシウム２ｍｇ ─────────────────────────── ３５２ｍｇ上記処方の粉末を混合し、３０メッシュのふるいを通し
た後、この粉末３５２ｍｇをゼラチンカプセルに入れ、
カプセル剤とする。

【００６９】

【発明の効果】本発明のｄ１０６７３３１は５α−還
元酵素阻害作用を有し、前立腺肥大症の予防薬または治
療薬などの医薬として有用である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｒ 1:66） (72)発明者浜田孝和東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内 (72)発明者細矢剛茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】を有するｄ１０６７３３１またはその塩。
【請求項２】下記の性状を有するｄ１０６７３３１：１）物質の性状：淡白色粉末２）分子式：Ｃ₂₈Ｈ₄₀Ｏ₃ （高分解能マススペクトル
法により測定）３）分子量：４２４（質量分析法により測定）４）赤外線吸収スペクトル：ν_max ｃｍ^-1 液膜中で測定した赤外線吸収スペクトルは、次に示す通
りである。 2970, 1650, 1640, 1590, 1050, 1030 ５）¹ Ｈ−核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重ベンゼン中、内部基準にテトラメチルシランを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル(360 MHz) は、以下の
通りである。 6.31 (1H, d, J=9.4 Hz), 5.95 (1H, s), 5.82 (1H,
d, J=9.6 Hz),5.27 (1H, dd, J=15.2, 8.0 Hz), 5.19
(1H, dd, J=15.2, 8.2 Hz),3.80 (1H, dd, J=10.4, 7.2
Hz), 3.66 (1H, dd, J=10.4, 5.4 Hz),2.40 (1H, m),
2.40 (1H, m), 2.19 (1H, m), 2.16 (1H, m),2.16
(1H, m), 2.01 (1H, m), 2.01 (1H, m), 1.93 (1H,
m),1.83 (1H, m), 1.62 (1H, m), 1.56 (1H, m), 1.
44 (1H, m),1.31 (1H, m), 1.31 (1H, m), 1.21 (1H,
m), 1.14 (3H, s),1.13 (3H, s), 1.04 (1H, m),
0.98 (3H, d, J=6.7), 0.79 (3H, s),0.77 (3H, s)。６）¹³Ｃー核磁気共鳴スペクトル：（δ：ｐｐｍ）重ベンゼン中、内部基準にテトラメチルシランを使用し
て測定した核磁気共鳴スペクトル(90 MHz)は、以下の通
りである。 197.6 (s), 162.7 (s), 154.5 (s), 140.1(d), 13
3.2 (d),126.7 (d), 125.7 (d), 125.4 (s), 124.5
(d), 73.3 (s),64.9 (t), 55.9 (d), 55.5 (d),
45.0 (d), 44.3 (s),40.1 (d), 37.1 (s), 36.4
(t), 34.9 (t), 34.7 (t),30.3 (q), 28.4 (t),
26.6 (q), 25.7 (t), 21.4 (q),19.5 (t), 19.4
(q), 16.9 (q) 。７）紫外線吸収スペクトル：λ_max ｎｍ（ε）エタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルは、以下
の通りである。 282 (3820), 350 (14950) ８）溶解性：メタノール、エタノール、アセトン、ジメ
チルスルホキシド、ベンゼン、クロロホルム、ジエチル
エーテル、酢酸エチルに可溶。水に不溶。９）呈色反応：硫酸、ヨードに陽性。１０）薄層クロマトグラフィー：Ｒｆ値；０．１５吸着剤；逆相プレート（ＲＰ−１８Ｆ２５４、メ
ルク社製）展開溶媒；メタノールー水＝９：１またはその塩。
【請求項３】アスペルギルス属に属するｄ１０６７３３
１生産菌を培養し、その培養物から、ｄ１０６７３３１
を採取することからなるｄ１０６７３３１の製法。
【請求項４】アスペルギルス属に属するｄ１０６７３３
１生産菌がアスペルギルステレウストムＳＡＮＫ
２２２９５株である請求項３記載の製法。
【請求項５】ｄ１０６７３３１またはその塩からなる医
薬。
【請求項６】ｄ１０６７３３１またはその塩を有効成分
とする５α−還元酵素阻害化合物。
【請求項７】ｄ１０６７３３１またはその塩を有効成分
とする前立腺肥大症の予防薬または治療薬。