LU84465A1 - Nouveau sel de l'hexamethylenetetramine,son procede de preparation et son application en therapeutique - Google Patents

Description

D. 51.892

8 fl A ß (EaND-DUCHÉ DE LUXEMBOURG

............................TT J» U sJ

du nnvpmhrp 1 QR2 Monsieur le Ministre de l’Économie et des Classes Moyennes

Titre délivré · d» .

........................................ Service de la Propriété Intellectuelle

' ~ ~ LUXEMBOURG

Demande de Brevet d’invention I. Requête ...La.....soc.lé.té-..ddLte.:......AU.S.ON.XA.....EARMACE.U.T.IC.X..........Y.±a..Jhaux.èat±na. (1) ...Ko.....24.7.3 ο.,.....A....E.OMEZIA......(Rome.)......Italie.,......représentée.....par.....KLonaieux---- -. Jac.queÂ..~de....ÂuyÂer./-....a.g.iÂfl.an.t..:_ftn™.q.ttali.té.....de....jnanda.t.a±xe—:--------------------- (2)

V

dépose(nt) ce ....jâ.ix....n.o.vembx.fi.....lRoô.„qua.txe.-Y±n.g.fcr.de.ux________________________ (3) à_______1.5_________heures, au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, à Luxembourg : 1. la présente requête pour l’obtention d’un brevet d’invention concernant : ''Nouveau.sul-delLbexamé.th.y.lènetétxamin.e,......son..procécLé...da------------ (4) ? —préparation.....et.....son..ap.plica.t.io:a..en.....thérapeutique.."..________ 2. la délégation de pouvoir, datée de .. P.OMRZIA_____________________________le 11.....o ctobx.ô. -L9S2 3. la description en langue fraqçai bb__________________de l’invention en deux exemplaires; 4...........//.......... ... planches de dessin, en deux exemplaires; 5. la quittance des taxes versées au Bureau de l’Enregistrement à Luxembourg, le.....l.Q....no.v.enLhrÂ....19.8.2...............................................................................................................................................................

déclare(nt) en assumant la responsabilité de cette déclaration, que l’(es) inventeurs) est (sont) : ....^.....Leo.nardo.....DE....y.IMCEN.T.I.IS.,......Isonzo...Street.....42..,......à....ROME..,...„Italie____ (5) revendique(nt) pour la susdite demande de brevet la priorité d’une (des) demande(s) de (6)..........................br evet-.........................................déposée(s) éii (7) ..........Xtalèa...............................................—....................

le.....1er.....mars.....19.8.2..........{No.»......19.9o.o....A/&21...................................................................................................................— (8) ) ' au nom de l.a.....déposante............................................................................................................................................................................... (9) é^t^isenl) p*5ur lui (elle) et, si désigné, pour son mandataire, à Luxembourg............................ .

.....3·5·τ.....bld·.....Royal...................................... ..................................—......................................................................................................................... (10) . sollicite(nt) la délivrance d’un brevet d’invention pour l’objet décrit et représenté dans les ' \1 annexes susmépitionifees, —λ avec ajournement de cette délivrance à...............././.......................................mois. (Il) \Le .irfàndat^r.e..X.........M.......ΛΛ \ Π. Procès-verbal de Dépôt

La susdite demande de brevet d’invention a été déposée au Ministère de l’Économie et des Classes Moyennes, Service de la Propriété Intellectuelle à Luxembourg, en date du : \ .1 o novambre 1982

Pr. le N Ustre à 15...............heures j0 \ S> \V ide l’Économie et deiÆasses Moyennes, A 68007 / L·--- / D. 51.892

REVENDICATION DE LA PRIORITE

<r i , ..................

^ de la demande de brevet ! MMddtèKof d’étflfté/

En ITALIE

Il ............... ................... i 1

Du 1er mars 1982 Mémoire Descriptif déposé à l'appui d’une demande de

BREVET D’INVENTION

au

Luxembourg w au nom de : ausonia farmaceutici s.r.i.

< DOUr * "Nouveau sel de 1'hexaméthylènetétraminè, son procédé " ' de préparation et son application en· thérapeutique".

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Λ 1 ν La présente invention concerne un composé nouveau, à savoir le N- acétyl-thiazolidine-H-carboxylate d'hexaméthylènetétramine, répondant à la formule (i) : 5 (Τλ \ CH^CO—N-j COOH . (i)

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^ , L'hexaméthylènetétramine est un médicament connu utilisé depuis des années comme agent chimiothérapeutique pour le traitement des infections des voies urinaires ; l'hexaméthylènetétramine est facilement absorbée et éliminée dans l'urine sous une forme inchangée (90 %) ; dans une urine acide, l’hexa-méthylènetitramine est convertie eh son métabolite pharmacologiquement actif,· 2Q à savoir le formaldéhyde "(environ 15 % de la dose totale). On peut consulter à ce propos Martindale - The Extra Pharmacopoeia 27 ème Edition, page 1ΐ)θ6.

Pendant le traitement chimiothérapeutique par l'hexaméthylènetétramine, on doit acidifier l'urine du patient ; c'est aussi dans ce"but qiie pour les traitements thérapeutiques on utilise les sels d'hexaméthylèneté- „ 25 tramine, les sels les plus connus étant l'hippurate et le mandêlate.

L'hippurate d'hexaméthylènetétramine est toutefois contre-indiqué chez les patients souffrant d'une insuffisance hépatique et on est obligé d'employer des agents acidifiants à chaque fois que des bactéries destructrices ’-w de l'tirée sont présentes dans l'urine. On doit constamment utiliser des substances acidifiantes lorsqu'on administre le mandêlate d'hexaméthylène-,tétramine à des fins thérapeutiques.

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On a maintenant trouvé que le N-acétyl~thiazolidine-U-carboxylate . d'hexaméthylènetétramine (i) ne possède pas seulement une activité antibacté rienne plus forte que celle de l'hexaméthylènetétramine, mais est également 2^ doté de propriétés mucoséerétolytiques remarquables et d'une activité protectrice contre les affections du foie, ce qui rend ce produit particulièrement approprié pour soigner des patients souffrant de maladies du foie d'un type aigu et chronique.

L'invention concerne donc également des compositions pharmaceutiques * 2 i contenant, à titre d'agent actif, le composé de formule (i).

Enfin l'invention concerne un procédé de préparation du composé (i), caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir dans des solvants polaires l'acide N-acétyl-thiazolidine-U-carboxylique et 1 'hexaméthylènetétramine en 5 des proportions sensiblement stoechiométriques, puis à isoler le sel (l) par une précipitation effectuée à l'aide de solvants non polaires. Parmi les solvants polaires, on préfère les alcanols inférieurs tels que le méthanol, l'éthanol et l'isopropanol. Parmi les solvants non polaires, on préfère l'éther diêthylique et l'éther diisopropylique. En variante, on peut isoler 10 le sel (i) par évaporation du solvant.

«, L'exemple suivant sert à illustrer l'invention sans aucunement en ‘ limiter la portée.

• . EXEMPLE

On dissout dans 1 litre de méthanol 1 mole d'acide lî-acétyl-thiazolidine-^-carboxylique et 1 mole d'hexaméthylènetétramine (urotropine). On soumet au reflux le mélange résultant pendant 30 minutes puis distille 800 ml de méthanol. On ajoute de l'éther isopropylique jusqu'à ce que le ‘ mélange devienne nettement troublé. On laisse le mélange résultant au repos '20 : dans de la glace jusqu'à précipitation complète (pendant 10 à hÔ heures).

On sépare par filtration le produit cristallin formé et on sèche •sous vide à 30°C environ. Le rendement est presque quantitatif.

Le sel (l) ainsi obtenu présente un point de fusion de 2^0 à 2^5°C (déc.) il est extrêmement soluble dans l'eau, soluble dans les alcanols inférieurs et insoluble dans l'acétone et l'éther.

* 3

Analyse élémentaire

C12H21N5°3S -(poids moléculaire : 315,28) I

Calculé : C = 1*5,71 % 1 H = 6,71 % ; H = 22,20 % 5 Trouvé : C = 1*5,58 % ; H = 6,79 # ; N = 22,03 JÉ

Spectre IR (pâte au nujol ; les bandes d'absorption sont exprimées en ~1x cm ) :

Elongation 0 - H 3U00

Elongation C - H thiazolidine 2980-2810

^ Elongation C - H urotropine 2U6O-26OO

Elongation C = H amide et carboxylate 1650-1620

Spectre RMN-H^ (détecté dans le sulfoxyde d'hexadeutêrodiméthyle standard interne TMS ; les déplacements chimiques sont exprimées en S') : 15 2,1 (d, 3H, C0-CH3) ; 3,1-3,¾ (m, 2H, S-ÇHg-COOH) ; l*,3-!*i9(ni, 15H, 12H d'urotropine ; N-ÇH^-S ; N-ÇH-COOü) ; 7,5 (s, 1H mobile).

Les caractéristiques biologiques du composé (I), qu’on désignera 2q par la suite par l'abréviation AFP 829 dans un but de brièveté,· sont mises en évidence dans ce qui suit : TOXICITE .

On détermine la toxicité aiguë de AFP 829 par comparaison avec l'acide thiazolidine-l*-carboxylique (TCA) et 1 *hexaméthylènetétramine (EMTA) , 25 par voie orale chez des souris Swiss et des rats Wistar et on. calcule c.ette. toxicité par le procédé de Litchfield et Wilcoxon £J. Pharm. Exp. Therap. 96. 99-113(19^90.

La DL^q indiquée dans le tableau I ci-dessous montre que le composé testé ne possède qu'une très faible toxicité.

30

. TABLEAU I

Espèce Voie“d4administration DL^q (mg/kg)

___AFP 289 EMTA TCA

35 souris orale 1350 1500 1*00 rats orale 2100 * 1050 800 1+ ACTIVITE ANTIBACTERIENNE Activité in vitro

On détermine l’activité antibactêrienne in vitro de AFP 829 par comparaison avec l'hexaméthylènetétramine (EMTA), à l’égard de 90.souches de différentes espèces bactériennes Gram-positives et Gram-négatives qui ont été 5 récemment isolées à partir d'échantillons cliniques, en déterminant la concentration inhibitrice minimum (C.I.M.) c'est-à-dire la plus faible concentration antibactérienne capable d'inhiber la croissance des bactéries.

Pour effectuer ces essais, on utilise les souches bactériennes ci— . après : 10

Gram-positives (35 souches) : - Staphylococcus aureus (15 souches) - Streptococcus pyogenes (15 souches) - Streptococcus faecalis ( 5 souches) 15 Gram-négatives (55 souches) : - Salmonella spp (10 souches) - Pseudomonas aeruginosa (10 souches.) - Proteus spp (10 souches) - E. coli . (10 souches) 20 — Klebsiella spp ( T souches) <r - Serratia spp ( 5 souches) - Citrobacter spp ( 3 souches).

Comme milieu de culture, on utilise l'agar-agar Mueller Hinton à pH 5V5· On dissout les composés à tester dans une solution saline stérile et on les dilue avec cette -solution ; on verse 1 ml de chaque solution diluée ainsi obtenue dans une boîte de Pétri et on ajoute ensuite 19 ml d'agar-agar Mueller Hinton.

Les concentrations finales d’hexaméthylènetêtramine (EMTA) sont 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,2, 15,6, 7,8 et 3,9/^g/ml.

30 . ^

Les concentrâtiors de AFP 829 sont équimolaires à celles de ÉMTA.

On effectue l'inoculation des bactéries à l'aide d'un inoculateur à points multiples et un bouillon de culture après une croissance de 18 heures, pour chaque souche à examiner. Avec ce procédé, l'inoculât bactérien est égal à environ 10 unités de formation de colonies (UFC) par point. On lit les résultats 35 - après avoir soumis les plaques à une culture pendant 18 heures à 37°C.

Les résultats sont présentés dans les tableaux II et III et on peut constater que AFP 829 est actif à l'égard de tous les micro-organismes utilisés aussi bien Gram-positifs que Gram-négatifs ; aucun micro-organisme n'est résistant à des concentrations supérieures à 125/cg/ml et on notera que lemédicamenttemoin EMTA est lui-même" un peu moins actif.

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ü'® û) ο α Ρ -P Ch g Λ ο υ ß φ ä · * co g Cd g £ -- Λ · . 4J β _ co_ co ω 7 ♦Activité in vivo Excrétion urinaire L'excrétion urinaire de AFP 829 comparée à l'excrétion d'hexaméthylène-tétramine (EMTA) est déterminée sur des rats Sprague Davley privés de nourriture pendant· 16 heures et pesant chacun en moyenne 300 g. On dissout les composés à tester dans de l'eau ordinaire à des doses équimolaires : AFP 829 = 135 mg/rat : EMTA = 6θ mg/rat.

Chaque groupe d'animaux reçoit les substances par voie i.p. dans 50 ml d'une solution saline stérile ; on place les animaux dans des cages ^ métaboliques en laissant un libre accès à l'eau. On recueille les échantillons d'urine aux intervalles de temps suivants : 0 - 1,30 heure 1,30 - .2,30 heures ^ 2,30 - U,30 heures 11·,30 - 6,30 heures 1 ml d'un bouillon nutritif à pH 5»5 contenant environ 1,10 ^ unité de formation de colonies d'une souche de Ps. aeruginosa sensible à l'action des deux substances, est ajouté à 1 ml de l'urine ou de la solution témoin des 20 deux médicaments dissoùs dans l'eau distillée.

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On dilue successivement les échantillons de la solution témoin et d’urine à deux reprises en utilisant le même bouillon contenant les micro- h organismes, jusqu'à obtenir une dilution de 1 : 20^8.

Après une incubation durant unewnuit à 37°C, on détermine la dilution 25 maximale (dilution limite) des substances ou échantillons inhibant la croissance bactérienne.

On détermine ensuite la concentration des substances dans les échantillons urinaires en utilisant la formule ci-dessous :

Dilution limite de l'urine 30 étudiée__^ Concentration initiale de la solution

Dilution limite de la témoin solution témoin

Les tests montrent que les deux substances sont excrétées dans y. l'urine sous une forme biologiquement active ; cependant AFP 829 est excrété avec un degré nettement supérieur d'activité antibaetêrienne par rapport à EMTA utilisée comme composé témoin de référence (voir tableau IV).

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Activité mucosécrétdytique »

On détermine l'activité mucosécrétolytique chez les rats Wistar males après- une administration de AFP 829 par voie orale. Pour cette détermination, on utilise le procédé décrit par H. Mawatari Mawatari, Kagoshima ^ Daiagaku, Igaku Zasshi, 27, 561 (19î6)^J . Comme témoin de référence, on utilise un médicament ayant une activité connue à savoir le carboxyméthylcystêine.

Les résultats obtenus sont répertoriés dans le tableau V.

TABLEAU V

10 -r-:-----

Dose administrée Nombre % d'augmentation de “ Composé mg/kg/p.o. d'animaux fluorescéine sodique par comparaison avec les témoins AFP 829 250 10 96,1 15 Carboxymethyl- - 2 Q 10 33 h cystéine ' 1

Les valeurs ci-dessus montrent que AFP 829 possède une activité mucosécrétolytique puissante, nettement plus élevée que celle de la substance témoin (carboxyméthylcystêine).

20 ^

Facteurs pharmacbcinétiques

Les essais effectués sur des animaux de laboratoire après administration par voie orale de doses éqùimoléculaires de AFP 829 et EMTA montrent que l'administration de AFP 829 pérmet une absorption plus rapide et une excrétion 25 urinaire plus rapide de EMTA par comparaison avec les témoins traités avec EMTA.

AFP 829 et EMTA apparaissent sélectivement dans l’urine simultanément avec leurs métabolites actifs.

Ces considérations soulignent l'utilité du composé (l) en qualité 30 d'agent chimiothérapeutique pour les voies urinaires et intestinales.

La présente invention concerne egalement tous les aspects industriels en rapport avec l'emploi de AFP 829 en qualité d'agent pour le traitement des affections bactériennes des voies urinaires et des voies intestinales et pour le traitement du catarrhe de la vessie et du catarrhe intestinal. En consé-35 quence, un aspect essentiel de l'invention réside dans les compositions pharmaceutiques contenant des quantités prédéterminées de AFP 829. Le composé selon l'invention peut être administré par voie orale, par exemple sous forme de comprimés, pilules, gélules, sachets, sirops, etc.

Les compositions ci-après sont présentées à titre d'exemple : \ 10 « (a) comprimés et pilules contenant 500 à 1000 mg de AFP 829 ainsi que des excipients, des agents de désintégration, etc, d'un usage courant ^n pharmacie ; (h) gélules de 500 mg de AFP 829 î 5 (c) sachets à dose unique contenant chacun 500 à 1000 mg de AFP 829 ; ' ' (d) sirop, suspension ou gouttes contenant 5 à 10 % de AFP 829 ainsi que des édulcorants, des agents aromatisants et des agents de conservation dont l'emploi est courant dans l'industrie pharmaceutique.

Enfin, le nouveau dérivé selon l'invention pourra avantageusement 10 être administré chez l'humain, à des doses de l'ordre de 500 à 2000 mg/jour.

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Claims (3)

1. Nouveau dérive de l'hexaméthylènetétramine, caractérisé en ce qu'il est le N-aeétyl-thiazolidine-h-carboxylate d’hexaméthylènetétramine répondant à la formule (i) : 5 ' . ' ' . I /1 : · ^ A/

2. Procédé de préparation du compose (i) selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir dans des solvants polaires , l'acide N-acétyl-thiazolidine-H-carboxylique et l'hexaméthylènetétramine en des proportions sensiblement stoechiométriques, puis à isoler le sel i(l) en le précipitant par addition de solvants non polaires. 20

3· A titre de médicament, le composé selon la revendication 1. 1*. Compositions pharmaceutiques ayant notamment une activité antibactérienne ’ et mucosêcrêtolytique , caractérisées en ce qu'elles contiennent à titre d'agent actif le N-acétyl-thiazolidine-U-carboxylate d'hexaméthyline-tétramine de formule (i) en association avec un véhicule pharmaceutiquement 25 acceptable.