MC1740A1 - Glyocides et procede pour leur preparation - Google Patents

Description

Glycosides et procédé pour leur préparation

La présente invention concerne des glycosides ayant une excellente activité immunologique, et un procédé pour leur préparation ; en particulier, elle concerne les dérivés de l'acide N-acétyl neuraminique contenus dans les glycosides et un procédé 5 pour leur préparation.

On sait que les acides neuraminiques N-substitués tels que l'acide N-acétylneuraminique et autres sont présents dans de nombreux animaux et à la surface de la cellule de diverses bactéries, sous la forme d'un complexe d'acide sialique tel que les glycoprotéines, glycoli-10 pides, oligosaccharides et polysaccharides.

Récemment, des acides neuraminiques N-substitués sont devenus des substances importantes en médecine et dans les produits pharmaceutiques concernant les fonctions nerveuses, les cancers, les inflammations, l'immunité, les infections virales, la différenciation, les récepteurs 15 hormonaux, etc., et ont été repérés comme molécule active unique se trouvant à la surface de la cellule. Toutefois, le rôle des acides neuraminiques N-substitués dans le complexe de l'acide sialique n'a pas été déterminé jusqu'à présent avec certitude.

De plus, des acides neuraminiques N-substitués ont été étudiés 20 par de nombreux chimistes organiciens qui ont obtenu de nombreux dérivés simples de ces acides. Mais jusqu'à présent, on n'a pas obtenu de dérivé présentant une excellente activité immunologique.

D'un autre côté, la durée moyenne de la vie humaine a été prolongée en raison des progrès accomplis concernant le traitement des tumeurs 25 malignes de l'organe hématopoïtique, de nombreux types de cancer et des affections du collagène. Par ailleurs, avec l'accroissement important de l'utilisation des médicaments, par exemple des médicaments

- 2 -

pour l'hormone corticotrope ou immunosuppresseur, un certain nombre d'effets secondaires indésirables sont apparus en commun avec la diminution de la capacité immunologique.

Dans ces conditions, les inventeurs de la présente invention 5 se sont tournés avec une attention particulière vers l'acide sialique qui est un ingrédient bio-inhérent, et ont poursuivi leurs recherches sur les agents de contrôle de l'immunité ayant quelques effets secondaires, à cause de sa modification chimique et de son action de contrôle de la surveillance immunologique. Comme résultat de cette 10 recherche,les inventeurs ont réussi à trouver les nouveaux composés selon la présente invention, ayant un effet immunorégulateur, où la cellule de suppresseur T est activée et la production d'immunoglobu-line de la cellule B est restreinte.

Le principal objet de la présente invention est de fournir de 15 nouveaux composés ayant une excellente activité immunologique, en particulier concernant l'effet d'immunorégulation.

Un autre objectif de l'invention est de proposer des procédés efficaces pour préparer les nouveaux composés.

Ces objectifs seront mieux compris à l'aide de la description 20 ci-après.

Conformément à la présente invention, il est proposé de nouveaux glycosides répondant à la formule générale (I) suivante :

or3

dans laquelle est un groupe

- 3 -

0

ch2-o-ch2-ch2-o-

un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou un sel de groupe carboxyle, est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou un sel de groupe carboxyle, lorsque est un groupe

0

hn

0

A

n

10

ch2-o-ch2-ch2-o-

R^ est un groupe

15

ch2-o-ch2-ch2-o-

20 lorsque R^ est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou un sel de groupe carboxyle, et R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle.

Le groupe alcoxycarbonyle selon la présente invention peut être constitué, à titre d'exemple, par un groupe méthoxycarbonyle, un 25 groupe éthoxycarbonyle ou autre.

Le sel de groupe carboxyle peut être par exemple un sel de métal alcalin ou un sel de métal alcalinoterreux tel que les sels de sodium, de potassium, de calcium et autres, du groupe carboxyle.

- 4 -

Le composé (I) de la présente invention comprend un dérivé de configuration 3 (dérivé 3) dans lequel est un groupe

ch20ch2ch20-

10 et un dérivé de configuration a (dérivé a) dans lequel R^ est un groupe

15

I

ch2oœ2ch2o-

20 Les composés selon la présente invention, représentés par la formule générale (I), peuvent être préparés par un procédé représenté par la série de formules suivante, à partir de méthyl-2-chloro-4,7,8,9-tétra-0-acétyl-$-D-N-acétylneuraminate {désigné ci-après par composé (II)} et de 5-fluoro-l- {(2-hydroxyéthoxy) méthyl} uracile {désigné 25 ci-après par composé (III)} , et obtenus comme composés, (IV) à (XI) . Les composés (IV) à (XI) ont été dénommés comme suit :

Composé (IV) :

1—0—{ méthyl(5-N-acétyl-3,5-didésoxy-4,7,8,9-tétra-O-acétyl-B -D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétrahydropyrimidin-l-yl)méthyl} -éthane diol

Composé (V) :

1-0-{méthyl (5-N-acétyl-3,5-didésoxy-4,7,8,9-tétra-0-acétyl-35 a-D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-1,2,3,4-tétrahydropyrimidin-l-yl)méthyl} -éthane diol

- 5 -

Composé (VI) :

1-0- {méthyl(5-N-acétyl-3,5-didesoxy-$ -D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétra-hydropyrimidin-l-yl ) méthyl } -éthane diol

5

Composé (VII) :

1-0- {méthyl(5-N-acétyl-3,5- d}d£soxy-a-D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétra-hydropyrimidin-l-yl) méthyl} éthane diol

10

Composé (VIII) :

1-0 {sodium (5-N-acétyl-3,5-didésoxy- B-D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétra-hydropyrimidin-l-yl)méthyl} -éthane diol

15

Composé (IX) :

1-0- {sodium (5-N-acétyl-3,5-didésoxy-a -D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onate }-2-0- {2,4-dioxo-5-flu.oro-l,2,3,4-tétrahydropyrimidin-l-yl) méthyl} -éthane diol

20

Composé (X) :

1-0- { (5-N-acëtyl-3,5-didésoxy-8 -D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onique acide} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétra-hydropyrimidin-l-yl)méthyl} -éthane diol

25

Composé (XI) :

1-0- {(5-N-acétyl-3,5-didesoxy-a -D-glycéro-D-galacto-2-nonulopyranosyl)onique acide} -2-0- {(2,4-dioxo-5-fluoro-l,2,3,4-tétra-hydropyrimidin-l-yl) méthyl} -éthane diol

30

(V) dérivé a

(TU) dérivé a

- 6-2 -

(VI) Dérivé 3

Cm) dérivé 3

(VII) Dérivé a

EN

COONa | |j m dérivé a r

- 7 -

Les composés (II) et (III) décrits ci-dessus sont des composés connus. Le composé (II) est préparé par synthèse, par exemple selon un procédé décrit par Kuhn : Chem.Ber., 99,611 (1966). Par ailleurs, le composé (III) est obtenu par exemple suivant un procédé décrit 5 par Morris J. Robins : Can. J. Chem. 60, 547 (1982).

Un mélange des nouveaux produits (IV)(dérivé 3) et (V) (dérivé a) est obtenu par la réaction de Koenigs-Knorr entre les composés (II) et (III). La réaction de Koenigs-Knorr peut être effectuée en présence de HgBr^, HgÉCN)^ ou un mélange de ces composés, ou en présence 10 de CF^SO^Ag (trifluorométhane-sulfonate d'argent). La réaction peut être effectuée de préférence en présence de CF^SO^Ag car ce composé permet d'obtenir un rendement total en composés (IV) et (V) plus élevé que HgBr^ et autres.

De plus, la réaction effectuée en présence de CF^SO^Ag peut être 15 effectuée de préférence dans un solvant comme le tétrahydrofurane,

1'acétonitrile, le chlorure de méthylène ou autres, à des températures allant de la température ambiante à -50° C, pendant 5 à 60 minutes environ. En particulier, il est préférable que la durée de la réaction soit d'environ 20 minutes et que le solvant soit le tétrahydro-20 furane. Les nouveaux composés (IV) (dérivé 6) et (V) (dérivé a)

selon la présente invention peuvent être alors séparés et purifiés par chromatographie sur colonne de silica gel du produit obtenu ci-dessus .

Le nouveau composé (VI) (dérivé 8) peut être obtenu en outre par 25 transesterification du composé (IV) en utilisant le méthoxyde de sodium dans le méthanol). De même, le nouveau composé (VII) (dérivé a)

selon l'invention peut être obtenu à partir du composé (V).

Les composés (VIII)(dérivé 8) et (IX)(dérivé a) peuvent être obtenus alors par hydrolyse des composés (VI) et (VII) dans une 30 solution d'hydroxyde de sodium. Les composés de type acide libre (X) (dérivé 8) et (XI) (dérivé a) peuvent être obtenus par acidification des solutions aqueuses des composés (VIII) et (IX) ou hydrolyse des composés (VI) et (VII) dans une solution d'hydroxyde de sodium,

suivie d'une acidification.

35 Le procédé de préparation des présents composés représenté par la série de formules chimiques, va être représenté concrètement dans

- 8 -

dans les exemples ci-après.

Conformément à la présente invention, les composés répondant à la formule (I) ont une excellente activité capable d'ajuster la force du système immunitaire. Cette activité peut être vérifiée par 5 le procédé suivant.

Activité contre l'activation des lymphocytes de la rate chez la souris par Con A :

Comme une cellule T est activée de façon non spécifique par 10 Con A, un glycoside selon la présente invention a été ajouté à la réaction et ensuite, son action a été étudiée. Cela signifie que Con A et un composé de formule (I),par exemple un des composés préparés dans les exemples ci-après, ont été ajoutés respectivement aux lymphocytes de la rate (SPC) prélevés sur une souris BALB/C et 15 le mélange a été soumis à une culture de 20 heures environ sur microplaques, avec 5 % de CO^ introduit dans le mélange à 37° C. De la thymidine marquée au tritium a été ajoutée au mélange obtenu et ensuite, le SPC a été recueilli après environ 10 heures de cul-

2

ture à 37°C. La proportion de H-thymidine absorbée par le SPC a été 20 déterminée par un compteur de scintillations.

Par rapport à un composé selon la formule (I), on a observé une promotion et un renforcement de la ^H-thymidine absorbée, ainsi qu'une amélioration de l'activité contre l'activation des cellules T par le Con A.

25

Activité contre la production d'immunoglobuline des lymphocytes de la rate chez la souris :

Comme pour les dérivés d'acide neuraminique N-substitué selon la présente invention qui ont été indiqués dans 1'activation des 30 cellules T dans l'expérience précédente, l'activité contre la production d'immunoglobuline a été également étudiée par mesure du nombre des cellules formant des plaques (PFC).

Tout d'abord, des cellules sanguines rouges de mouton et un des composés de formule (I), par exemple un composé préparé dans les 35 exemples ci-après, ont été ajoutés au SPC et le mélange a été

_ 9 _

soumis à une culture à 37° C pendant 5 jours. Du SRBC et du complément ont été ajoutés à nouveau au SPC sensibilisé ainsi obtenu. Le nombre des PFC a été compté après la culture du mélange dans une chambre de Cunningham à une température de 37° C pendant 5 3 à 12 heures.

Etant donné qu'une diminution du nombre des PFC a été observée et que la viabilité de la cellule était la même que pour la cellule témoin, on a pu vérifier que le répression de la production d'immunoglobuline a été renforcée.

10 Les composés selon la présente invention présentaient une excel lente activité dans les deux essais décrits ci-dessus. En conséquence, on a considéré que la production d'immunoglobuline a été réduite par activation d'une cellule T de suppresseur.

Jusqu'à présent, une diminution de l'activité des cellules T 15 de suppresseur a été observée dans les maladies autoimmunes telles que la maladie du collagène. En conséquence, on peut s'attendre à ce que les dérivés de l'acide neuraminique N-substitué selon la présente invention ayant une fonction d'activation des cellules T de suppresseur, soient efficaces dans .les applications cliniques 20 en tant qu'agent d'ajustement de la résistance du système immunitaire .

L'invention sera mieux comprise à l'aide des exemples non limitatifs suivants.

25 Exemple 1

Procédé de préparation des composés (IV) et (V) :

120 ml d'une solution de tétrahydrofurane anhydre contenant 2,54 g (12,44 mmoles) de composé (III) ont été additionnés de 50 ml d'une solution d'acétonitrile anhydre contenant 1,12 g (4,44 mmoles) 30 de cyanure mercurique et 2,24 g (6,21 mmoles) de bromure mercurique. Après addition de 7,74 g d'une poudre dé tamis moléculaire 4 A, le mélange a été agité à la température ambiante pendant 1 heure.

Ensuite, 35 ml d'une solution d'acétonitrile anhydre contenant 4,64 g (9,10 mmoles) de composé (II) ont été ajoutés au mélange 35 obtenu ci-dessus, et agités à la température ambiante pendant 46 heures.

- 10 -

La suspension obtenue a été neutralisée ensuite avec de l'amber-listw A-21 et filtrée. Le filtrat résultant a été distillé sous pression réduite, et le résidu a été dissout dans de l'acétate d'éthyle, absorbé sur 10 g de silicagel (Wakogel C-300) et distillé 5 sous pression réduite, puis séparé en fractions par chromatographie sur colonne { phase solide : silicagel (Wakogel C-300) 100 g, solvant éluant : chloroforme / méthanol = 30/1 }. Les matières premières ont été récupérées à partir de la première fraction et un mélange de composés (IV) et (V) a été obtenu. Le mélange a été séparé en fractions 10 par chromatographie sur colonne { phase solide : silicagel (Wakogel C-300), solvant éluant : toluène / méthanol = 10/l} , puis les solvants de deux fractions ont été éliminés par distillation, le résidu a été dissout dans l'eau et soumis au séchage par congélation. Il a été obtenu 1,82 g (rendement : 29,6 %) de composé (IV) (dérivé 8) 15 et 1,87 g (rendement : 30,4 %) de composé (V) (dérivé a), sous forme de cristaux amorphes incolores pures. Le rendement total des composés (IV) et (V) était de 60 % •

Propriétés physiques du composé (IV)

20 Point de décomposition Analyse élémentaire

Calculé 25 Trouvé

100 - 109°C C27H36FN3°16-1H2°

C N C N

47,11 6,10 47,15 5,80

Poids moléculaire (P.M.) = 688,42

H : 5,45

H : 5,41

IR KBr -1 2mas cm)

3400 (-NH-), 1720 (-C0-0-

1670 (V C=0 amide I),

1550 (V C=0 amide II),

1230 (C-O-C)

- 11 -

400 MHz

(CDCJ^)

1,894, 2,027, 2,035, 2,063,

2,149 (15H, ail S, CT^CO - X5) 2,342 (1H, dd, J= 13, 1Hz, J=4,9Hz, 3-Heq)

10

3,802 (3H, S, -C00CH3)

3,539 ; 3,656 (2H, m; m,-0CH2CH_2-0-

3,716 ; 3,907 (2H, m; m,-OO^CÏ^-O-

4,780 (1H, d, J=10,7Hz,

15

\ /H )

N II

5,603 (1H, d, j =10,7Hz,

20

O H

>C'

N H

25

94

{a} jp - 5,750

5,107 - 5,174 (lH,m, 4-H) 7,457 (1H, d, j=5,2Hz, pyrimidine-6-H) (C=l, AcOEt)

30

- 12 -

5 Propriétés physiques du composé (V) Point de décomposition 94 - 105°C

10

15

20

25

Analyse élémentaire Calculé

Trouvé

-r*, KBr IRV -1 ;max cm ;11 ;1 -RMNPpm ;H 400 MHz ;C27H36FN3°16'10 H2° C: 46,50 N: 6,03 C: 46,51 N: 5,90 ;P.M.= 697,43 H: 5,52 ;H : 5,24 ;3350 (-NH-), 1720 (-C0-0-), ;1670 (v C=0, amide I), ;1550 (v C=0, amide II), ;122o (C-O-C) ;(CDC£ 3) ;1,888, 2,040, 2,148, ;2,153 (15H, ail S, CH3CO-X5) 2,578 (1H, dd, J=12, 7Hz, J=4,8Hz, 3-Heq) ;3,808 (3H,S, -C00CH3) ;3,475 ; 3,906 (2H, m; m,-0CH.2CH2-0-) ;3,737 (2H, m, -0CH2ÇH2-0-) ;5,173 (1H, d, J=10, 7Hz ;30 ;\/s ;35 ;5,210 (1H, d, j=10,7Hz ;- 13 - ;V, ;/\ ;(a) 24 ;D ;10 ;Exemple 2 ;Procédé de préparation des composés (IV) et (V) (2) : ;70 ml d'une solution de tétrahydrofurane anhydre contenant 1,54 g (7,55 mmoles) de composé (III) et 2,96 g (5,81 mmoles) de 15 composé (II) ont été additionnés de 4,61 g de tamis moléculaire pulvérulent 4A et agités à la température ambiante pendant 30 minutes. La solution de mélange obtenue a été alors refroidie à -15 à -20°C, additionnée de 8ml d'une solution de tétrahydrofurane anhydre contenant 2,09 (8,13 mmoles) de trifluorométhane-20 sulfonate d'argent et agitée pendant 20 minutes. ;Après filtration de la suspension obtenue et évaporation du solvant du filtrat produit, sous pression réduite, le résidu a été repris par 200 ml d'acétate d'éthyle, lavé à l'eau saturée de chlorure de sodium et à l'eau saturée de carbonate acide de sodium, et 25 séché sur Na^SO^. On a obtenu 4,23 g de résidu après filtration et évaporation du solvant sous pression réduite. Ces 4,23 g de résidu ont été dissouts dans l'acétate d'éthyle et séparés en fractions par chromatographie sur silicagel{ phase solide : silicagel (Wakogel C-300) 423 g, solvant d'élution : toluène / méthanol = 10/l} . On a 30 obtenu une première fraction (mélange de matières de départ et de composé (IV) et une deuxième fraction (contenant le composé (V)). ;Après évaporation du solvant, le résidu de la première fraction ;4,800 - 4,903 (1H, m, 4-H) ;7,530 (1H, d, j=5,2Hz, pyrimidine-6-H) ;- 8,08° (C=l, AcOEt) ;- 14 - ;a été séparé en fractions par chromatographie sur colonne{ phase solide : silicagel (Wakogel C-300), solvant d'élution : chloroforme / méthanol = 4o/l} . Le solvant a été évaporé de la fraction contenant le composé (IV), le résidu a été dissout dans l'eau et 5 soumis au séchage par congélation. On a obtenu 0,77 g (rendement : 19,6 %) de composé (IV) dérivé 8) sous forme de produit pur. Après évaporation du solvant de la deuxième fraction, le résidu a été dissous dans l'eau et soumis au séchage par congélation ; on a obtenu ainsi 2,70 g (rendement : 68,7 %) de composé (V) (dérivé a) 10 sous forme de produit pur. Le rendement total en composés (IV) et (V) était de 88,3 %. ;Exemple 3 ;Préparation du composé (VI) : ;15 420 mg (0,62 mmole) de composé (IV) obtenu dans les exemples ;1 et 2 ont été dissouts dans 100 ml d'une solution 0,01N de métho-xyde de sodium-méthanol et agités à la température ambiante pendant 1 heure et demie. La solution réactionnelle obtenue a été additionnée de Dowex 50W-X8, forme H, neutralisée et filtrée. Ensuite, le filtrat 20 résultant a été concentré et séché. Le résidu a été soumis à une chromatographie sur colonne {phase solide : silicagel (Wakogel C-200), solvant d'élution : chloroforme / méthanol = 5/3 }. Le solvant a été évaporé de la fraction séparée, et le résidu obtenu a été dissous dans l'eau et soumis au séchage par congélation. On a obtenu 25 ainsi 270 mg (rendement: 86 %) de composé (VI) (dérivé 8) sous forme de cristaux amorphes purs incolores ;Propriétés physiques du produit Point de décomposition 138 - 142°C ;7 ;30 Analyse élémentaire C H FN O .— H 0 P.M.= 572,51 ;-Ly 2o j 12 2. 2. ;Calculé C: 39,86 H:6,16 ;N: 7,34 ;Trouvé C: 39,62 H:5,90 ;N: 7,13 ;- 15 - ;10 ;15 ;KBy" ;IRV -1 ' 3400 (-NH-, -0H-) , 1710 (-C0-0-), ;max cm ;1670 (v C=0 amide I), ;1560 (v C=0 amide II), ;VKœ MHz (CDCl3 + D20> ;1,758 (1H, dd, j=12,4Hz, ;J=ll,9Hz, 3-Hax) ;2,035 (3H, S, CH^CONH-) ;2,347 (1H, dd, j=12,4Hz, J=4,8Hz, 3-Heq) ;3,320 - 4,080 (13H, m, sialyl-H, ;-CH2CH2"0-) ;3,823 (3H, S, COOCH^) ;7,940 (1H, d, j=5,4Hz, pyrimidine-6-H) ;20 f i 19,5 ;^ D - 17,9 (C=l, DMF) ;25 Exemple 4 ;Préparation du composé (VII) : ;En suivant le mode opératoire de l'exemple 3, mais en utilisant le composé (V) obtenu dans }|ss exemples 1 et 2 à la place du composé (IV) , on a obtenu 221 mg (rendement : 80%) de composé (VII) (dérivé Oi) ;30 Propriétés physiques du produit ;Point de décomposition 147 - 150°C ;19 ;Analyse élémentaire C19H28FN3°12* H2° P.M.= 543,69

10

35 Calculé

C: 41,97 N: 7,73

H: 5,90

- 16 -

15

Trouvé C: 41,77 H: 5,72

N: 7,59

KBï"

IRV -1 : 3400 (-NH-, -0H-),

max cm

1710 (-C0-0-), 1670 (VC=0, amide I), 1560 (vC=0 amide II)

(CDCJL + D 0)

H-RMN Mu 3 2

10 Z 1,758 (1H, dd, J=12,4 Hz,

J=ll,1Hz, 3-Hax)

2,010 (3H, S, CT^CONH-)

2,637 (1H, dd, J=12,4Hz, J=4,5hz, 3-Heq) 3,484 - 3,972 (13H, m, sialyl-H, -CH2CH2-0-)

20 3,836 (3H, S, -COOCH3)

7,906 (1H, d, J=5,3Hz, pyrimidine-6-H)

{a} 19,5 - 33,4° (C=l, DMF)

25

Exemple 5

Préparation du composé (VIII) :

30 650 mg (1,28 mmole ) du composé (VI) obtenu dans l'exemple 3

ont été additionnés de 2ml d'eau et mis en suspension, puis additionnés de 2 ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium IN et agités à la température ambiante pendant 20 minutes. Une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium IN a été introduite dans le mélange obtenu 35 jusqu'à obtention d'un pH du mélange réactionnel compris entre 10 et 11, et le mélange résultant a été agité pendant 5 minutes. Le

- 17 -

:®

mélange réactionnel a été additionné d'AmberlitewIRC-50, son pH a été ajusté entre 5 et 6 et le mélange a été filtré. Le filtrat obtenu a été soumis au séchage par congélation, et l'on a obtenu 636 mg(rendement : 96,1 %) de composé (VIII), sous forme de cris-5 taux amorphes incolores.

Propriétés du physiques du produit

Point de décomposition Analyse élémentaire

10 Calculé

Trouve

15

20

25

30

IRV KBr -1 max cm

{a}

19,5 D

- 15,50

Vrmn „

400 MHz

196

201 °C

14

C18H25FN3Na012-5" H2° C: 38,07 N: 7,40

C: 37,80

N: 7,20

PM= 567,86 H: 5,43

H: 5,25

3400(-NH, -OH),

1700, 1670 (V C=0 amide I),

1610 (-C00 ~ ),

1560 (V C=0 amide II).

(C=l, h2o)

(DMSO - d6, t-BuOH)

1,465 (1H, t, J=ll,9Hz, 3-Hax) 1,871 (3H, S, CH3C0NH-)

2,083 (1H, dd, J=ll,9Hz, 4,5Hz, 3-Heq)

3,331 - 3,669

(10H, m, sialyl-H, -O-C^CH -0-) 3,808 (1H, m, 4H)

5,052 (1H, d, J=10,3Hz,

35

O H

- 18 -

5,090 (1H, d, J=10,3Hz,

0

\ /

C

./V

10

5,276 (1H, -OH)

8,113 (1H, d, J=6,6Hz, pyrimidine 6'H)

8,245 (1H, d, J=7,3Hz, CH3CONH-)

Exemple 6

Préparation du composé (IX) :

En suivant le mode opératoire de l'exemple 5, mais en utilisant 15 372 mg (0,73 mmole ) de composé (VII) obtenu dans l'exemple 4, à la place du composé (VI) et 1,5 ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de socium IN, on a obtenu 373 mg(rendement : 98,6%) de composé (IX).

Propriétés physiques du produit 20 Point de décomposition Analyse élémentaire

Calculé

25

Trouvé

178 - 183°C

C18H25FN3Na°12-4H2° C: 36,68

N: 7,13 C: 36,39

P.M.= 589,48 H: 5,64

H: 5,51

N:

6,95

-r., KBr IRV -1

max cm

3400 (-NH,-OH),

1700, 1670 (V C=0 amide I)

1610 (-C00 ~),

1560 (V C=0, amide II)

{a}

19,5

4,50

(C=l, H20)

- 19 -

10

lH -RMN ppm

400 Hz (DMS0-d6, t-BuOH)

1,242 (1H, t, J=ll,7Hz, 3-Hax) 1,888 (3H, S, CH CONH)

2,650 (1H, dd, J=ll,7Hz, 4,6Hz, 3-Heq)

3,18 - 3,58 (10H, m, sialyl-H,

-o-ch2ch2-o-)

3,725 (1H, m, 4-H)

4,793 (1H, m, -OH)

5,035 (2H, S, -0CH2NCC. )

5,235 (1H, S, -OH)

6,338 (1H, S, -OH)

8,118 (2H, d, J=6,4Hz, Pyrimidine-6'H)

2Q 8,439 (1H, d, J=6,1Hz, CH^CONH-)

15

Exemple 7

Préparation du composé (X) (1) :

25 Une solution de 100 mg (1,28 mmole ) de composé (VIII) obtenu dans l'exemple 5, et 30 ml d'eau distillée ont été additionnées d'environ 3 ml de Dowex 50W-X8 (forme H) et agites à la température ambiante pendant 1 heure. Le pH de la solution obtenue était de 4. Le filtrat obtenu par filtration du mélange réactionnel a été 30 soumis au séchage par congélation et l'on a obtenu 84 mg(rendement : 89,2%) de composé (X) sous forme de cristaux amorphes incolores.

Propriétés physiques du produit Point de décomposition 138 - 148°C

35 Analyse élémentaire C H FN-0 .-^H O P.M.= 515,25

lo Zo J 12 10 2

20 -

Calculé

Trouvé

IRV KBr -1 : max cm

C: 41,96 H: 5,52

N: 8,16

C: 41,70 H: 5,20

N: 8,08 3400(-OH, -NH-),

1700(-C00H), 1680(-NHCO-)

10

15

20

1H-RMN ppm

400 MHz

{a} J9,5 - 16,80

(DMSO-d,-)

6

1,620 (1H, t, J=12,5Hz, 3-Hax),

1,961 (3H, S, CH CONH-)

2,257 (1H, dd, J=12,5Hz,

4,5Hz, 3-Heq)

3,90 - 3,89 (1H, m, 4-H),

5,136 (2H, S, -OCH Ne: )

7,972 (1H, d, J=6,0Hz, pyrimidine-6'H)

(C=l, h2o)

Exemple 8

Préparation du composé (XI)(1) :

En suivant le mode opératoire de l'exemple 7 mais en utilisant 102 mg (0,20 mmole ) du composé (IX) obtenu dans l'exemple 6 à la place du composé (VIII), on a obtenu 90,4 mg (rendement : 92,4%) de composé (XI)

Propriétés physiques du composé (XI)

Point de décomposition 123 - 128°C

Analyse élémentaire C18H26FN3°12'H2° P'M" = 513,45

- 21 -

15

20

Calculé

Trouvé

10

IRV KBr -1 max cm

400 MHz

C: 42,11 H: 3,70

N: 8,18

C: 41,85 H: 3,41

N: 8,10

3400(-0H, -NH-),

1700 (-C00H), 1680(-NHC0-),

(DMSO-d ),

6

1,572 (1H, t, J=12,2Hz, 3-Hax),

1,953 (3H, S, CH_,C0NH-) , 2,655 (1H, dd, J=12,2Hz,

4,5Hz, 3-Heq), 3,82 - 3,90 (1H, m, 4-H), 5,124 (2H, S, -OCH ) 7,975 (1H, d, J=6,0Hz, pyrimidine-6'H)

{a}

19,5

5,80 (C=l, H20)

25 Exemple 9

Préparation du composé (X) (2) :

100 mg (0,196 mmole ) du composé (VI) obtenu dans l'exemple 3 ont été disssous dans 2ml d'eau et additionnés de 0,2ml d'une solution aqueuse d'hydroxyde de sodium IN. Après agitation à la tempéra-30 ture ambiante pendant 3 heures, le mélange réactionnel a été additionné de Dowex 50W-X8 (type H), agité pendant environ 30 minutes, filtré et lavé à l'eau. Le filtrat et la solution de lavage ont été soumis au séchage par congélation et l'on a obtenu 90 mg (rendement : 93 %) du composé (X).

- 22 -

Exemple 10

Préparation du composé (XI) (2) :

En suivant le mode opératoire de l'exemple 9, mais en utilisant le composé (VII) obtenu dans l'exemple 4 à la place du composé (VI), on a obtenu 88 mg (rendement : 91%) de composé (XI).

- 23 -

Claims (8)

Revendications

1. Glycosides répondant à la formule générale chjconh

10

dans laquelle R^ est un groupe or.

0

hn

15

n'

CI]

ch -0-ch -ch -0-2 2 2

un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou des sels du groupe 2° carboxyle au choix, R2 est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou des sels du groupe carboxyle lorsque R^ est le groupe.

25

hn n'

30

R est le groupe

35

ch2-o-ch2-ch2-o-

0

hn'

ch2-0-ch2-ch2-0-

- 24 -

lorsque est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou un sel du groupe carboxyle, et R^ est un atome d'hydrogène ou un groupe acétyle.

10

15

que R^ est le groupe

2. Glycosides selon la revendication 1, caractérisées §n ce

0

HN '

* N

I

ch2-o-ch2-ch2-o-

et R£ est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou des sels du groupe carboxyle.

3. Glycosides selon la revendication 1, caractérisées en ce

20

25

que R^ est un groupe alcoxycarbonyle, un groupe carboxyle ou un sel du groupe carboxyle et R^ est un groupe

0

HN'

0

N

30

ch2-0-ch2-ch2-0- '

4. Glycoside selon la revendication 1, caractérisée en ce que le groupe alcoxycarbonyle est un groupe méthoxycarbonyle.

5. Procédé de préparation de glycosides répondant aux formules

0R4

CHjCONH

et

- 25 -

ch3 conh

10

dans lesquelles R^ est un groupe acétyle, R^ est un groupe métho-

0

xycarbonyle et R^ est un groupe

15

hn n

ch2och2ch2o-

20 procédé caractérisé en ce qu'on fait réagir le composé II

25

ch5conh avec le composé III

c00ch3 {

0

30

hn O^^N

(m)

35

ch2och2ch2oh en présence de trifluorométhane - sulfonate d'argent.

- 26 -

6. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que la réaction est effectuée dans un solvant.

7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que 5 le solvant est choisi parmi les tétrahydrofurane, acétonitrite et chlorure de méthylène.

8. Procédé selon la revendication 5, caractérisé en ce que la réaction est effectuée à des températures comprises entre la

10 température ambiante et -50°C, pendant environ 5 à 60 minutes.

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