MC1969A1 - Procedes pour preparer des composes antitumoraux,formulation pharmaceutique contenant ces composes,leurs utilisations en medecine et pharmacie,et composes intermediaires pour leur preparation - Google Patents

Description

2

La présente invention concerne des composés hétérocycliques qui se sont montrés doués d'activité cyto-toxique. Plus particulièrement, l'invention concerne des dérivés d'imidazopyridazine, des procédés pour leur prépa-5 ration, des formulations pharmaceutiques les contenant et leur utilisation comme agents cytotoxiques, notamment comme agents antitumoraux.

ont donné naissance à de nombreux agents antitumoraux possé-2q dant des degrés différents d'efficacité. Les agents classiques cliniquement employés comprennent 1'adriamycine, 11actinomycine D, le méthotrexate, le 5-fluoruracile, le cis-platine, la vincristine et la vinblastine. Cependant, il est connu que ces agents antitumoraux actuellement dis-ponibles sont affectés de divers inconvénients, tels que la toxicité pour les cellules saines et la résistance de certains types de tumeurs.

est connue pour être un inhibiteur de la fonction des 2Q microtubules. D'autres composés qui manifestent une activité inhibitrice sur les microtubules et qui ont été signalés comme des agents antitumoraux potentiels sont le nocodazole, le tubulazole et NSC-181 928 :

Les recherches en chimiothérapie anticancéreuse

Outre son activité antitumorale, la vincristine

25

NOCODAZOLE

30

35

3

rJCÇT

NHC02£t

NH2

nsc-181928

Cependant/ aucun de ces composés n'a encore été confirmé cliniquement.

2Q II existe donc un besoin constant d'agents anti tumoraux nouveaux et meilleurs.

La. Demanderesse a maintenant découvert une nouvelle classe de dérivés d'imidazopyridazine qui manifestent une puissante activité antitumorale.

Sous un premier aspect/ la présente invention fournit un composé de formule générale (I) :

20

(I)

dans laquelle

R"*" représente un groupe aryle carbocyclique ou 25 hétérocyclique facultativement substitué/ ou un groupe aryle/ alcényle/ cycloalkyle ou cycloalcényle facultativement substitué ;

2

R représente un groupe alkyle/ alcényle/ alcy-nyle/ cycloalkyle ou cycloalcényle facultativement substi-3Q tué/ ou un groupe aryle ou aralkyle carbocyclique ou hétérocyclique facultativement substitué ;

3

R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle ; et/ soit

X représente un atome d'oxygène ou de soufre/ un

4 4

groupe -C^- ou un groupe NR où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C^-C^ ; et

4

Y représente un groupe -CI^- ou -Cf^C^- î

soit

X-Y représentent ensemble le groupe -CH=CH- ;

et ses sels et dérivés physiologiquement fonctionnels.

1 2

5 En ce qui concerne les groupes R et R de la formule générale (I)/ un groupe aryle carbocyclique peut contenir 6 ou 10 chaînons cycliques/ comme par exemple un groupe phényle ou naphtyle/ et contient au moins un noyau aromatique. Un groupe aryle hétérocyclique peut contenir j_q 5 à 10 atomes dans le noyau/ dont l'un au moins est un hétéroatome. Le noyau hétérocyclique contient typiquement

1 à 4 hétéroatomes choisis parmi l'azote/ l'oxygène et le soufre. Des exemples de groupes hétérocycliques appropriés comprennent les noyaux thiényle, furyle/ pyridyle/ indolyle

25 et quinolyle.

Les substituants qui peuvent être présents sur le groupe aryle carbocyclique ou hétérocyclique comprennent les atomes d'halogènes (par exemple le fluor/ le chlore et èe brome)/ et les groupes alkyle en C^-C^/ alcoxy en 2q [qui peuvent eux-mêmes être substitués par un groupe alcoxy en (alcoxy en 0^-02)-(alcoxy en 0^-02)]/

amino (facultativement substitué par un ou deux groupes alkyle en C^-C^)/ halogénalkyle en (par exemple tri-

fluorométhyle-) / alkylthio en C2.~C4f carkoxy/ alcoxycarbonyle 25 en ?2~C5' -SO^H/ cyano et phényle. Le groupe aryle carbocyclique ou hétérocyclique peut convenablement porter 1 à 4 substituants.

Sauf indication contraire/ les groupes alkyle R"*"

2

et R présents dans la formule générale (I) peuvent être des 3Q groupes alkyle à chaîne droite ou ramifiée et ils peuvent compter 1 à 10 atomes de carbone/ par exemple 3 à 10 atomes de carbone. Un groupe alcényle ou alcynyle peut compter

2 à 10 atomes de carbone/ par exemple 3 à 10 atomes de carbone. Un groupe cycloalkyle ou cycloalcényle peut compter

25 3 à 10 atomes de carbone. Les substituants qui peuvent être présents sur un groupe alkyle/ alcényle/ alcynyle/ cyclo-

5

alkyle ou cycloalcényle comprennent les atomes d'halogène et les groupes alcoxy en hydroxy/ amino (facultati vement substitué par un ou deux groupes alkyle en C^-C^)/ halogénalkyle en C^.~C4 (Par exemple trifluorométhyle), 5 alkylthio en C2-C4' carboxy/ alcoxycarbonyle en -SO-H et cyano.

2

Lorsque R représente un groupe aralkyle, celui-ci peut compter 1 à 4 atomes de carbone dans sa portion alkyle et sa portion aryle peut être un groupe carbocyclique 10 ou hétérocyclique tel que défini ci-dessus pour Rl et R2.

Lorsque R"*" représente un groupe alkyle/ celui-ci compte de préférence plus de deux atomes de carbone, comme par exemple un groupe alkyle en C^-Cg.

Lorsque R^ représente un groupe alkyle/ celui-ci 3_5 compte de préférence 1 à 6 atomes de carbone/ par exemple

1 à 4 atomes de carbone.

3 4

Lorsque R ou R représente un groupe alkyle/ celui-ci peut être à chaîne droite ou ramifiée et peut contenir 1 à 4 atomes de carbone.

20 Certains composés de formule (I) peuvent former des sels. Ainsi/ les composés (I) qui contiennent un groupe amino basique peuvent former des sels avec les acides/ et les composés (I) qui contiennent un groupe acide peuvent former des sels avec les bases.

25 Les sels d'addition d'acides appropriés.comprennent ceux formés à partir des acides chlorhydrique/ bromhydrique/ nitrique/ perchlorique/ sulfurique, citrique/ tartrique/ phosphorique/ lactique/ benzoïque/ glutamique/ oxalique/ aspartique/ 'pyruvique/ acétique/ succinique/ fumarique/ 30 maléique/ oxalacétique/ iséthionique/ stéarique/ phtalique/ méthanesulfonique/ p-toluènesulfonique/ benzènesulfonique/ lactobionique et glucuronique. Les sels de base appropriés comprennent des sels de bases minérales tels que les sels de métaux alcalins (par exemple le sodium et le potassium) et 35 les sels de métaux alcalino-terreux (par exemple le calcium) • des sels de bases organiques/ par exemple les sels de

6

phényléthylbenzylamine, dibenzyléthylènediamine, éthanol-amine et diéthanolamine : et des sels d'acides aminés tels que la lysine et l'arginine. De préférence, les sels seront pharmaceutiquement acceptables.

5 Dans les composés de formule générale (I)/ R"1" re présente de préférence un groupe phényle ou naphtyle facultativement substitué ou un groupe aryle hétérocyclique penta- ou hexagonal facultativement substitué contenant 1 à 4/ par exemple 1 ou 2, hétéroatomes choisis parmi l'azote, 10 l'oxygène et le soufre. Les substituants préférés qui peuvent être présents dans le groupe R"'" comprennent les groupes alcoxy en C^-C^.; alkyle en et mono- ou di ( alkyle en C^-C^-amino et les atomes d'halogènes. R1 représente, de préférence encore, un groupe alkyle non substitué, par 15 exemple un groupe alkyle en C^-C^.

R^ représente de préférence un groupe phényle ou un groupe alkyle en facultativement substitué. Les substituants préférés qui peuvent être présents dans le 2

groupe R comprennent les atomes d'halogènes et les groupes 20 halogénalkyle en (par exemple trifluorométhyle),

alcoxy en Ci-C4' hydroxy et mono- ou di (alkyle en amino et les groupes hétérocycliques penta- ou hexagonaux fixés par l'azote (par exemple morpholino, pipéridino et pyrrol 25 ^4*

méthyle.

2

pyrrolidino). Avantageusement, R est un groupe alkyle en

3

R est de préférence l'hydrogène ou le groupe

30

Y représente de préférence Le groupe -Y-X-

représente de préférence -CE^O-, -CE^S-, -CE^Cï^- ou -CH=CH-.

Une sous-classe particulièrement préférée de composés de formule (I) consiste en ceux dans lesquels :

R"*" représente un groupe phényle ou naphtyle qui peut être substitué par 1 à 4 substituants choisis parmi 35 les groupes alcoxy en (par exemple méthoxy ou éthoxy)

et alkyle en (par exemple méthyle, éthyle, n-propyle,

7

isopropyle/ n-butyle ou tert.-butyle) et les halogènes (par exemple le brome ou le chlore) :

i Û a 1 Û on C ..

'1 4

2

R représente un groupe alkyle en C,-C, (de préférence méthyle ou éthyle) ;

3

5 R représente l'hydrogène ou le groupe méthyle ;

et

Y-X représente le groupe -CH20-,

et leurs sels et dérivés physiologiquement fonctionnels.

Des composés selon la présente invention qui sont 2Q particulièrement préférés en raison de leur activité comprennent les suivants :

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(3,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b)-15 pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[5-(1-naphtylméthyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle, 20 N-[6-(3-méthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-

2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(2,3-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(2,5-diméthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]-25 pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle,

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle, 30 N-méthyl-N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo-

fl , 2-b] pyridazine-2-yl ] carbamate de méthyle,

N-[6-(2-bromo-3,4,'5-triméthoxybenzyloxy)imidazo-[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-35 pyridazine-2-yl]carbamate de n-propyle,

N- [ 6- ( 3 ,4, 5-triméthoxybenzyloxy )im.idazo[l,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de n-butyle,

UO

10

15

20

25

30

8

N-[6-(3/4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de 2-méthoxyéthyle,

N-£6-(3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzyloxy)imidazo p., 2-b] -

et leurs dérivés physiologiquement fonctionnels.

Les composés de la présente invention sont doués d'activité cytotoxique/ c'est-à-dire qu'ils sont toxiques envers certaines cellules vivantes qui sont nuisibles aux mammifères/ par exemple les cellules tumorales.

L'activité antitumorale des composés de formule générale (I) a été mise en évidence dans un certain nombre d'essais étalonnés/ tant "in vitro" que "in vivo"/ principalement par l'activité contre des lignées cellulaires de leucémie murine/ par exemple P388.

Ainsi/ oh a constaté que les composés de formule générale (I) manifestent une puissante activité antitumo-rale contre P388 "in vitro" dans des études de prolifération et dans des épreuves plus rigoureuses par formation de colonies. "In vivo"/ les composés de l'invention réalisent une réduction du nombre de cellules tumorales chez des .souris porteuses de tumeurs ascitiques de leucémie P388/0/ et une augmentation correspondante de la durée de survie/ par comparaison avec un groupe témoin non traité porteur de tumeurs.

Il a été rapporté qu'une activité dans l'essai étalonné "in vivo" sur les tumeurs ci-dessus ést.révélatrice d'une activité antitumorale chez l'homme (A. Goldin et coll. dans Methods in Cancer Research/ éd. V.T. DeVita Jr. et H. Busch/ _16/ 198-199/ Academic Press/ N.Y./ 1979).

On a également constaté que les composés de 11 invention contrecarrent l.a fonction de la tubuline/ comme démontré par l'inhibition de la polymérisation de la tubu-line "in vitro".

Il a été antérieurement rapporté que les composés qui agissent comme des inhibiteurs de microtubules s'avèrent bloquer la migration directionnelle de cellules tumo-

pyridazine-2-yl}carbamate de méthyle,

9

10

raies. On pense par conséquent que les composés de la présente invention posdèdent ces propriétés anti-invasives et anti-métastatiques.

Outre les propriétés décrites ci-dessus/ on a constaté que plusieurs composés préférés de l'invention manifestent une activité contre diverses lignées de cellules tumorales humaines "in vitro" (carcinome du côlon DLD-1/ adénocarcinome du côlon humain WiDr, carcinome du côlon humain HCT-116 et carcinome du poumon humain A549)/ ce qui indique que ces composés sont doués d'une activité antitumorale à large spectre.

Un composé particulièrement préféré en raison de son activité est le N-[6-(3/4/5-triméthoxybenzyloxy)-imidazof1/2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle/ et ses 15 dérivés physiologiquement fonctionnels. On a en outre constaté que ce composé manifeste une bonne activité contre diverses tumeurs murines "in vivo" (mélanome B16 et leucémie L1210). De plus/ on a également constaté qu'il manifeste avantageusement une bonne activité "in vivo" contre des 20 souches de P388 qui sont résistantes aux principaux- agents antitumoraux employés cliniquement/ y compris le cyclo-phosphamide/ le méthotrexate/ 1'-actinomycine D/ la vincristine/ 1'adriamycine/ le 5-fluoruracile/ le cis-platine/ la bis-chloronitro-urée et l'amsacrine. Il est considéré 25 que les" tumeurs résistantes à 1'adriamycine/ la vincristine et 1'actinomycine D sont en fait résistantes à une grande diversité de médicaments antitumoraux.

Sans vouloir être tenu une théorie/ on pense que certains composés selon l'invention se comportent comme des

30 précurseurs de médicament. Ainsi/ les composés de formule

3

(I) dans lesquels R est un groupe alkyle exercent une plus forte activité "in vivo" que celle à laquelle on peut s'attendre d'après leur activité "in vitro"/ et on pense qu'ils sont convertis "in vivo" en un composé de formule 35 (i) dans lequel R"'" est l'hydrogène.

Sous un autre aspect/ la présente invention four

10

nit également un procédé pour préparer les composés de formule générale (I)/ ce procédé comprenant :

(A) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (II) :

1^" — Y —X

(II)

(dans laquelle R / X et Y sont tels que définis précédemment) -, q avec un composé de formule générale (iii). :

r3

l 2

zch9conco„r (iii)

2 3

(dans laquelle R et R sont comme définis précédemment et Z représente un atome d'halogène/ par exemple un atome de 22 chlore ou de brome) ;

(B) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (iv) :

20

NCO, R

(IV)

2 3

(dans laquelle R et R sont comme définis précédemment et Z représente un groupe partant tel qu'un atome d'halogène ou un groupe suifonate/ par exemple méthanesulfonate ou p-

-c toluènesulfonate) avec un composé de formule générale (V)

il'

R CH X H - (V)

1 1

(dans laquelle R est comme défini précédemment et X repré-

4

sente un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe NR tel que défini précédemment) ;

(C) la réaction d'un composé de formule (VI)

-Nv 0

.h

30

.y x

(VI)

35

avec un alcool approprié R OH ; ou

(d)

la réaction d'un composé de formule (VII) :

11

r- y — x-

(vii)

2

avec un réactif servant à introduire le groupe -CC^R i et (E) la conversion d'un composé de formule (I) en un autre composé de formule (I)/ par exemple en échangeant un

2

groupe estérifiant R contre un autre groupe estérifiant

2

R ; ou en alkylant un composé de formule (I) da-ns lequel

3

R représente l'hydrogène ; puis/ si nécessaire et/ou appro prié/ par salification.

Le procédé général (A) peut commodément être exécuté dans un solvant aprotique tel que le diméthylforma-mide, la 1/3-diméthylimidazolidinone ou 1'hexaméthylphos-phoramide, et à une température non extrême, par exemple entre 50 et 120°C.

Les composés de formule générale (II) dans lesquels X représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un

4

groupe NR peuvent être préparés par la réaction d'un alcool thiol ou aminé approprié de formule (V) telle que définie ci-dessus, avec un composé de formule (VIII) :

nh,

(viii)

(dans laquelle est comme défini précédemment).

La réaction est généralement conduite en présence d'une base telle que le tert.-butylate de potassium, dans un solvant tel que le diméthoxyéthane. D'autres bases et solvants qui peuvent être utilisés dans cette réaction comprennent l'hydrure de sodium dans un solvant aprotique tel que le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxyde, et le méthylate ou éthylate de sodium dans un alcool tel que le méthanol ou l'éthanol, ou un solvant aprotique tel que ceux mentionnés ci-dessus.

\

12

Les composés de formule (II) dans lesquels X et Y représentent ensemble le groupe -CH=CH- peuvent être préparés à partir d'un composé de formule (IX) par des réactions successives avec un agent halogénant tel que le trichlorure de phosphore et l'ammoniac :

R -CH=C H-

R —CH=CH

al

R -CH=CH

NH,

10

15

(ix)

( IXA)

(HA)

Les composés de formule (IX) peuvent être préparés en faisant réagir un arylaldéhyde approprié R CHO avec l'acide 3-oxo-pentanoïque (acide lévulinique) en présence d'une base dans de l'alcool aqueux, puis en faisant réagir avec de l'hydrazine en conditions acides pour obtenir un composé de formule (X) :

20

R HC=CH.

NH

(X)

25

30

35

qui peut être déshydrogéné/ par exemple au moyen du bioxyde de sélénium dans un alcool tel que l'éthanol, pour obtenir un composé de formule (IX).

Lorsqu'on désire préparer des composés de formule (II) dans lesquels X et Y sont tous deux des groupes méthylène/ le fragment éthényle du composé de formule (IX) ou (X) peut être tout d'abord réduit, par exemple par hydrogénation catalytique en utilisant, par exemple, du palladium sur charbon.

Les composés de formule (III) peuvent être préparés en faisant réagir 1'halogénacétamide correspondant de formule (XI) :

R

zch2conh

CXI)

13

O

avec le chlorure d'oxalyle, et un alcool R OH, selon le procédé bien connu dans la technique.

Les alcools de formule générale (V) peuvent être préparés à partir des acides carboxyliques ou carboxaldé-5 hydes correspondants en suivant des méthodes bien établies, par exemple par réduction au moyen de borohydrure de sodium dans un solvant tel que le méthanol ou l'éthanol, ou au moyen d1hydrure de lithium et d'aluminium dans un solvant tel que l'éther de diéthyle ou le tétrahydrofuranne.

Un thiol de formule générale (V) peut être pré-

13 3

paré à partir de l'halogénure correspondant R C^Z (où Z est un atome d'halogène) par réaction avec la thiourée dans un solvant tel que l'éthanol, pour obtenir le sel d'isothiouronium correspondant, et hydrolyse subséquente, 15 par exemple au moyen d'une solution d'hydroxyde de sodium.

Les aminés de formule générale (V) peuvent être préparées de manière classique, par réaction d'un halogé-nure correspondant avec l'ammoniac.

La réaction d'un composé de formule générale 20 (IV) avec un composé de formule générale (V) selon le procédé (B) est généralement exécutée en présence d'une base. Des bases appropriées comprennent les alcoolates de métaux alcalins tels que le méthylate, l'éthylate ou le tert.-butylate de sodium ou de potassium. La réaction peut être 25 commodément conduite dans un solvant tel que le diméthoxy-éthane, un alcool tel que le méthanol ou l'éthanol, ou un solvant aprotique tel que le diméthylformamide ou le diméthylsulfoxyde.

Les composés de formule générale (IV) peuvent 30 être préparés en faisant réagir un composé de formule (VII) avec un composé de formule (III) d'une manière analogue au procédé (A) décrit ci-dessus.

Le procédé général (C) peut être exécuté en chauffant un composé de formule (VI) à une température 35 comprise dans l'intervalle de 80 à 150°C, facultativement

14

10

en présence d'un solvant/ et en le faisant réagir avec un alcool R^OH.

Des solvants appropriés comprennent des solvants organiques inertes tels que les hydrocarbures, par exemple

2

le benzène ou le toluène. En variante, l'alcool R OH peut lui-même jouer le rôle du solvant.

On pense que le procédé (C) évolue en passant par un dérivé intermédiaire du type isocyanate de formule (XII) :

R1-

N =C = 0 (XII)

15 Les dérivés du type azoture d'acyle de formule

(VI) peuvent être préparés à partir des acides carboxy-liques correspondants par la formation d'un dérivé d'acide activé (par exemple un halogénure d'acide tel qu'un chlorure d'acide formé par réaction avec un agent halogénant 20 tel que le chlorure d'oxalyle, le chlorure de thionyle ou le pentachlorure de phosphore), puis par réaction avec un azoture, par exemple un azoture de métal alcalin, commodément dans une solution aqueuse d'éther, par exemple du dioxanne aqueux. Les dérivés du type acide carboxylique 25 correspondant.aux composés (VI) peuvent eux-mêmes être préparés en faisant réagir un composé de formule (II) avec le bromopyruvate d'éthyle-en employant des conditions analogues à celles du procédé général (A) ci-dessus, pour obtenir un ester, puis en hydrolysant pour obtenir l'acide 30 désiré.

Dans le procédé (D), un réactif servant à intro-2

duire le groupe -C^R peut être 1 ' halogénof ormiate correspondant, par exemple un halogénoformiate d'alkyle tel que le chloroformiate de méthyle ou d'éthyle. Les composés de 35 formule (VII) peuvent eux-mêmes être préparés à partir d'un composé de formule (I) par élimination d'un groupe

15

2

-CC^R (de préférence un groupe labile tel que tert.-butoxycarbonyle) dans des conditions acides (en utilisant par exemple un acide carboxylique facultativement halogéné tel que l'acide formique, chloroformique ou trifluoracé-tique)/ facultativement en présence d'un solvant/ par exemple un hydrocarbure halogéné tel que le dichloro-méthane.. Ainsi/ selon un mode de réalisation particulier du procédé (D)/ un composé de formule (I) peut être converti en un autre composé de formule (I)/ par élimination

2

d'un groupe -CO„R et réaction pour introduire un autre 2

groupe -CC^R comme décrit ci-dessus.

La conversion d'un composé de formule (I) en un autre composé de formule (I) selon le procédé général ... . (E) peut être réalisée/' par exemple/ en remplaçant un

2

groupe estérifiant R dans le composé de formule (I) par

2

un autre groupe R / en chauffant le composé (I) avec un alcool approprié en présence d'une base/ par exemple un alcoolate de métal alcalin tel que le tert.-butylate de potassium/ à une température comprise dans l'intervalle de 50 ..à 180°C- Bien que cet échange, d'ester puisse être effectué comme une étape réactionnelle séparée/ il peut aussi commodément être effectué au cours de la réaction entre un' composé de formule (IV) avec un composé de formule (V) selon le procédé général (B).

La conversion mutuelle selon le procédé (E)

peut également être réalisée par alkylation d'un composé

3

dans lequel R est un atome d'hydrogène/ pour obtenir un

3

composé dans lequel R est un groupe alkyle. L'alkylation peut être exécutée d'une manière classique/ par exemple en utilisant un halogénure d'alkyle, tel que l'iodure de méthyle ou d'éthyle/ en présence d'une base, telle que l'hydrure de sodium.

Ceux des composés intermédiaires de formules (II) à (XI) qui sont nouveaux constituent un aspect supplémentaire de la présente invention. Les composés intermédiaires préférés sont ceux des formules (II)/ (IV) et (VI).

16

Les composés de la présente invention sont utiles pour le traitement de tumeurs. Ils peuvent être employés pour traiter diverses formes de cancers, y compris des leucémies, lymphomes, sarcomes et tumeurs solides.

L'invention fournit en outre un procédé pour le traitement de tumeurs chez les animaux, y compris les mammifères, et notamment les êtres humains, qui consiste à administrer une quantité cliniquement efficace d'un composé de formule (I) ou d'un de ses sels pharmaceutiquement acceptables ou dérivés physiologiquement fonctionnels,

sous une forme pharmaceutiquement efficace, une ou plusieurs fois par jour ou selon tout autre schéma posologi-que approprié, par voie orale, rectale ou parentérale, ou par application topique.

De plus, à titre d'aspect supplémentaire ou alternatif de l'invention, il est fourni un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel de composé de formule (I)

pour son emploi en thérapie, par exemple comme agent anti-20 tumoral.

La quantité de composé de formule (I) qui est nécessaire pour être efficace comme agent cytotoxique est évidemment variable et, en fin de compte, est laissée à l'appréciation du médecin ou vétérinaire traitant. Les 25 "facteurs à considérer comprennent l'affection à traiter, la voie d'administration et la nature de la formulation, le poids corporel, la surface corporelle, l'âge et l'état général du mammifère, et le composé particulier à administrer. Une dose antitumorale efficace convenable se situe 30 dans l'intervalle d'environ 0,01 à environ 120 mg/kg de poids corporel, par exemple 0,1 à environ 120 mg/kg de poids corporel, de préférence dans l'intervalle d'environ 0,1 à 50 mg/kg, par exemple 0,5 à 5 -mg/kg. La dose quotidienne totale peut être administrée sous forme d'une dose 35 unique ou de doses fractionnaires, par exemple deux à six fois par jour, ou par perfusion intraveineuse pendant une

I

17

durée déterminée. Par exemple, pour un mammifère pesant 75 kg, la gamme des doses est d'environ 8 à 9000 mg par jour, et une dose typique peut être d'environ 50 mg par jour. Si des doses fractionnaires séparées sont indiquées, le traitement peut typiquement consister en 15 mg d'un composé de formule (I) administrés jusqu'à 4 fois par jour

Bien que le composé actif puisse être administré seul, il est préférable de le présenter dans une formulation pharmaceutique. Les formulations de la présente invention, à usage médical, contiennent un composé de formul (I) ou un sel de celui-ci, en association avec un ou plusieurs supports pharmaceutiquement acceptables et, faculta tivement, d'autres ingrédients exerçant une action thérapeutique. Le ou les suppprts doivent être pharmaceutiquement acceptables en ce sens qu'ils doivent être compatible avec les autres ingrédients de la formulation et ne pas être préjudiciables à leur receveur.

La présente invention fournit par conséquent une formulation pharmaceutique comprenant un composé de formul (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel de composé de formule (I), en association avec un support pharmaceutiquement acceptable pour ce composé, sel ou dérivé.

Il est également fourni un procédé pour la préparation d'une formulation pharmaceutique, qui consiste à mettre en association un composé de formule (I) ou un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel de composé de formule (I), avec un support pharmaceutiquement acceptable pour ce composé, sel ou dérivé .

Les formulations selon la présente invention englobent celles qui sont adaptées à l'administration par voie orale, topique, rectale ou parentérale (y compris sous-cutanée, intramusculaire et intraveineuse). Les formulations préférées sont celles qui sont adaptées à l'administration par voie orale ou parentérale.

18

Les formulations peuvent commodément être présentées sous forme posologique unitaire et peuvent être préparées par n'importe lesquels des procédés bien connus dans l'art de la pharmacie. Tous ces procédés comprennent l'étape qui consiste à mettre le composé actif en association avec un support qui se compose d'un ou plusieurs ingrédients secondaires. En général/ les formulations sont préparées en mettant uniformément et intimement le composé actif en association avec un support liquide ou un support solide finement divisé/ ou les deux/ puis/ si nécessaire, en conformant le produit sous la forme désirée.

Les formulations de la présente invention qui sont adaptées à l'administration par voie orale peuvent être présentées sous forme d'unités discrètes telles que des capsules/ cachets/ comprimés ou pastilles/ contenant chacun une quantité prédéterminée du composé actif ; sous forme d'une poudre ou de granulés : ou sous forme d'une solution ou suspension dans un liquide aqueux ou non aqueux/ par exemple un sirop/ un élixir/ une émulsion ou une potion.

Un comprimé peut être fabriqué par compression ou moulage/ facultativement avec un ou plusieurs ingrédients secondaires. Des comprimés pressés peuvent être préparés en comprimant/ dans une machine appropriée/ le composé actif sous une forme à écoulement libre'/ telle qu'une poudre ou des granulés/ facultativement mélangé avec un liant/ un lubrifiant/ un diluant inerte/ un agent tensio-actif ou un agent dispersant. Des comprimés moulés peuvent être préparés en moulant/ dans une machine appropriée/ un mélange du composé actif sous forme pulvérulente avec un quelconque support approprié.

Un sirop peut être préparé en ajoutant le composé actif à une solution aqueuse concentrée d'un sucre/ par exemple le saccharose/ auquel peuvent également être ajoutés de quelconques ingrédients secondaires. Ce ou ces ingrédients secondaires peuvent inclure des agents aromatisants.

0/t

un agent servant à retarder la cristallisation du sucre ou un agent servant à augmenter la solubilité de quelconques autres ingrédients, par exemple un polyalcool tel que le glycérol ou le sorbitol.

Les formulations adaptées à l'administration par voie rectale peuvent être présentées sous forme d'un suppositoire avec un support classique tel que le beurre de cacao.

Les formulations adaptées à l'administration par voie parentérale consistent commodément en une préparation aqueuse stérile du composé actif, qui est de préférence isotonique vis-à-vis du sang du receveur. Ces formulations -consistent avantageusement-en une solution d'un sel d'addition d'acide pharmaceutiquement et pharmacologiquement acceptable d'un composé de formule (I), cette solution étant isotonique vis-à-vis du sang du receveur.

Des formulations utiles englobent également des solutions concentrées --ou des substances solides contenant le composé de formule ~(l)., qui, par dilution avec un solvant approprié, donnent une_solution adaptée à l'administration par voie parentérale comme ci-dessus.

Outre les ingrédients susmentionnés, les formulations de la présente invention peuvent, de plus, contenir un ou plusieurs ingrédients secondaires choisis parmi des diluants, "tampons, agents aromatisants, liants, agents tensio-actifs, épaississants, lubrifiants, conservateurs (y compris des antioxydants), etc.

Sous un autre aspect, la présente invention propose l'utilisation d'un composé de formule (I) ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel de composé de formule (I), pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de tumeurs..

L'invention va maintenant être illustrée par les exemples non limitatifs suivants.

Les spectres de résonance magnétique nucléaire des protons sont relevés au moyen d'une machine de RMN FT Bruker AH200 ou Bruker HFX90.

20

Les abréviations suivantes sont employées dans

10

15

20

25

30

les préparations et les exemples : DME : diméthoxyéthane DMEU : 1/3-diméthyl-2-imidazolidone HLA : hydrure de lithium et d'aluminium Préparation de Composés Intermédiaires

Composé Intermédiaire 1 : 3-amino-6-(3/4/5-triméthoxy-

(0,1 mole) d'alcool 3,4,5-triméthoxybenzylique (Aldrich) dissous dans.20 ml de DME à une suspension de 11,22 g (0,1 mole) de tert.-butylate de potassium dans 80 ml de DME, tout en agitant sous N2 et en refroidissant dans un bain de glace. Au bout de 0,5 heure, on traite le mélange par 12,95 g (0,1 mole) de 3-amino-6-chloropyridazine (Helv. Chim. Acta. , 1954, _37, 121, J. Druey, Kd. Meier et K. Eichenberger) et, au bout de 1,5 heure, on le chauffe au reflux pendant 3 heures. On refroidit le mélange et le filtre et on lave à l'éther le solide séparé par filtra-tion. On évapore le filtrat sous vide pour obtenir une huile que l'on partage entre l'acétate d'éthyle et l'eau. On lave la phase organique avec de l'eau, la déshydrate sur Na2S0^ et .l'évaporé pour obtenir une huile (A) que l'on chromatographie sur gel de silice en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol. -On rassemble les fractions éluées pour obtenir une huile (B) que l'on triture avec du chloroforme et de l'éther de diisopropyle pour obtenir 9,44 g du composé du titre sous forme d'un solide d'un blanc cassé ; P.F. 142-144°C ; RMN : <£__

n

( CDCl-, ) : 6,87 (1H, J,=8,8Hz, 5-H), 6,78 (1H, J7;T3 = 8,8Hz, «j Ab AD

4-H), 6,72 (2H, s, PhH), 5,38 (2H, s, CH2), 4,45 (2H,

large s, NH2), 3,87 (6H, s, OMe) et 3,84 (3H, s, OMe). Composé Intermédiaire 2 : 3-amino-6-(2,5-diméthoxybenzyl-

oxy)pyridazine On ajoute 30,6 g (0,182 mole) d'alcool 2,5-diméthoxybenzylique dans 20 ml de DME à 20,38 g (0,182 mole)

benzyloxy)pyridazine On ajoute en une période de 15 minutes 19,82 g

21

de tert.-butylate de potassium dans 60 ml de DME, tout en agitant sous N2 et en refroidissant dans un bain de glace. Au bout de 0,5 heure, on traite le mélange par la 3-amino-6-chloropyridazine et, au bout de 1,5 heure, on le chauffe au reflux pendant 5 heures, puis on le refroidit et le filtre. On évapore le filtrat sous vide et l'on partage le résidu entre l'acétate d'éthyle et l'eau. On lave la phase organique avec de l'eau, la déshydrate sur Na2SO^ et l'évaporé pour obtenir un solide (A) que l'on recristallise dans le toluène pour obtenir un solide (B). On chromatographie ce dernier sur gel de silice en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol pour obtenir 27 g du composé du titre sous forme d'un solide blanc ; P.F. 94-94,5°C î RMN (CDClQ) : 7,05 (1H, m, PhH),

n «3

6,90-6,73 (4H, m, ArH), 5,42 (2H, s, CH2), 4,5 (2H, large s, NH2) et 3,78 et 3,75 (6H, s, OMe).

Composés Intermédiaires 3 à 12

On prépare les composés suivants à partir des alcools appropriés en suivant le mode opératoire général décrit pour les Composés Intermédiaires 1 et 2 :

(3) 3-amino-6-(1-naphtylméthyloxy)pyridazine, P.F. 143-

144°C ; RMN (DMSO-d,) : 8,00 (3H, m, H naphtalé-

ri b niques), 7,55 (4H, m, H naphtaléniques), 6,97 (1H, JAB=8,8Hz, 4-H), 6,89 (1H, JAB=8,8Hz, 5-H), 6,0 (2H, s, CH2) et 5,80 (2H, s, NH2).

(A partir du 1-naphtylméthanol, Aldrich)

(4) 3-amino-6-(3-méthoxybenzyloxy)pyridazine, P.F. 55-60°C, RMN ( DMSO-dg ) :7,38 (1H, dd, J = 8-4Hz, PhH), 7,13-6,89 (5H, m, ArH), 6,05 (2H, s, NH2), 5,35 (2H), s, CH2) et 3,82 (3H, s, OMe).

(5) 3-amino-6-(3,5-diméthoxybenzyloxy)pyridazine, P.F. 89-92°C, RMN (DMSO-dc) : 6,88 (1H, =8,8Hz,

n D Ad

5-H), 6,75 (1H, J =8,8Hz, 4-H), 6,62 (2H, d, 2'-H et

AJ5

6'-H), 6,42 (1H, t, 4'-H), 5,35 (2H, s, CH2), 4,53

(2H, large s, NH2) et 3,75 (6H, s, OMe).

f\

22

(6) 3-amino-6-(3-méthylbenzyloxy)pyridazine, RMN S^ (DMSO-dg) : 7,40-7,10 (4H, m, PhH), 6,90 (2H, JAB=8,8Hz, 4-H et 5-H), 5,91 (2H, large s, NH2)/ 5,17 (2H, s, CH2) et 2,31 (3H, s, Me) ; M/Z 215 (M+, 30 %), 198 (9), 123 (23), 111(31) et 105(100).

(7) 3-amino-6-(3-diméthylaminobenzyloxy)pyridazine, P.F. 127-129°C, RMN (DMSO-dc) : 7,25 (1H, t, 51 —H ) , 7,00

n b

(1H, J =8,8Hz, 4-H), 6,92 (1H, J._=8,8Hz, 5-H), 6,90-Ad Ad

6,70 (3H, m, 2'-, 4'- et 6'-H), 5,95 (2H, s, CH2), 5,30 (2H, large, NH2) et 2,98 (6H, s, NMe2).

(A partir d'alcool 3-diméthylaminobenzylique, préparé par réduction par HLA de l'acide 3-diméthylaminobenzoï-que, Aldrich).

(8) 3-amino-6-(2-méthoxybenzyloxy)pyridazine, P.F. 166-168°C, RMN (CDClo) : 7,8 (1H, dd, J=6,7 et 2,2Hz,

n >3

PhH), 7,30 (1H, dd, J=6,6 et 2,2Hz, PhH), 6,98 (1H, dt, J=6,6Hz, PhH), 6,92 (1H, d, J=6,6Hz, PhH), 6,90 (1H, J. =8, 8Hz, 5-H), 6,78 (1H, =8,8Hz, 4-H), 5,5 (2H, s,

Ad Ad

CH2), 4,42 (2H, large s, NH2) et 3,87 (3H, s, OMe).

(9) 3-amino-6-[3,5-diméthoxy-(4-méthoxyéthoxyméthoxy)-benzyloxy]pyridazine, P.F. 110-114°C, RMN ^ (CDCl^) : 6,88 (1H, J =8,8Hz, 5-H), 6,78 (1H, J=8,8Hz, 4-H),

Ad Ad

6,7 (2H, 5-, 2'- et 6'-H), 5,35 (2H, s, CH2), 5,2 (2H, s, CH2), 4,49 (2H, large s, NH2), 4,05 (2H, m, CH2), 3,85 (6H, s, OMe), 3,61-3,51 (2H, m, CH^) et 3,35 (3H, s, OMe).

(10) 3-amino-6-(3-chlorobenzyloxy)pyridazine, RMN (DMSO-

n d,) : 7,51-7,32 (4H, m, PhH), 6,91 (2H, J^D=8,8Hz, 4H

O Ad et 5-H), 5,92 ( 2H, large s/nh2) et 5/34 (2H, s, CH2) ; M/Z 235 (M+, 68 %), 218(10), 125(65) et 97(100).

(11) 3-amino-6-(2-thiénylméthyloxy)pyridazine, P.F. 101-

103 °C, RMN"^„ (DMSO-d,) : 7,52 (1H, d, 5'—H), 7,20 ri o

(1H, d, 3'-H), 7,02 (1H, dd, 4'-H), 6,94 et 6,85 (2H, JAB=8,8Hz, 4-H et 5-H), 5,95 (2H, s, CH2) et 5,50 (2H/ s, NH2).

23

10

(12) On prépare la 3-amino-6-(3/4/5-triméthoxybenzylthio)-pyridazine en suivant le procédé décrit pour les Composés Intermédiaires 1 et 2 en utilisant le 3,4,5-triméthoxybenzylthiol et la 3-amino-6-chloro-pyridazine pour obtenir le produit/ P.F. 143-146°C/ RMN S,

H

7/07 et 6,63 (2H, J,=8,8Hz, 4-H et 5-H),

Ad

(CDClg)

6,66 (2H, s, PhH), 4,63 (2H, large s, NH2), 4,44 (2H, s, CH2)/ 3,85 (6H, s, OMe) et 3,84 (3H, s, OMe).

Composé Intermédiaire 13 : N-chloracétylcarbamate de

2-méthoxyéthyle On suit le mode opératoire décrit par R.J. Bochis

15

20

25

30

35

posé du titre ; P.F

'. 97

-99°C ; RMN $„ (DMSO-H.

dg) : 11,07

(1H, large s, NH)/

4,56

(2H/ s, C1CH2),

4/28

(2H, m,

C0.0CH2), 3,62 (2H,

m,

CH_20Me) et 3,34

( 3H /

s, Me).

Les composés intermédiaires de formule (III)

suivants sont connus d'

après les références de la litté-

rature indiquées :

Z-CH

2conhco2r2

Composé Intermédiaire N°

Z

r2

Référence de la littérature

14

Cl ch3

a

15

Br tert.-butyle b

16

Cl

-ch2ch3

c

17

Cl

-ch2ch2ch3

c

18

Cl

-(ch2)3ch3

c

19

Cl

-isopropyle d

(a) R.J. Bochis et coll

. / J. Med. Chem.

1978

, 21 235

(b) N.J. Léonard et k.a

. Cruikshank - J

. Org

. Chem., 1985,

50, 2480

(c) M. Pianka et D.J. Pelton, J. Chem.

Soc./ i960, 9 8.3

(d) G.I. Derkach et V.P. Belaya/ Zh Obsch. Khim, 1966, 36, 1942.

Composés Intermédiaires 20 à 32

On prépare les composés suivants par le mode h 0

24

10

15

20

25

30

opératoire général décrit pour les Composés Intermédiaires (1) et (2)/ en utilisant l'alcool approprié comme matière de départ.

Composé Intermédiaire 20 : 3-amino-6-(2, 3-diméthoxybenzyl-

(Aldrich) pour obtenir le composé du titre ; P.F. 103-106°C; RMN $„ (CDC1-) :7,12-7,05 (2H, m, 5' et 6'H) ; 6,91 (1H,

n 3

m, 41H ) à 6,85 (1H, J =9Hz, 5H), 6,77 (1H, J =9Hz, 4H ) ;

Ad Ad

5,50 (2H, s, ArCH2) 4,50 (2H, large s, NH2) et 3,89 (6H, s, OCH3).

Composé Intermédiaire 21 : (3-amino-6-(3,5-diméthoxy-4-éthoxy-

benzyloxy)pyridazine

Partir de l'alcool 3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzy-

lique pour obtenir le composé du titre; p.F. 169-171°C ;

RMN ^ (CDC1-).: 6,89 (1H, J,=8,8Hz, 5H) ; 6,79 (1H, n 3 Ad

J =8,8Hz, 4H) ; 6,70 (2H, s, ArH) : 5,38 (2H, s, ArCH„) ;

Ad «c

4,48 (2H,large s, NH2) : 4,06 (2H, q, J=7Hz, ÇH2CH3) ;

3,88 ( 6H, s, OCH3) et 1,38 (3H, t, J = 7Hz, CH^H,, ) .

On prépare l'alcool 3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzy-lique de la façon suivante :

a) 3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzaldéhyde

On agite et chauffe à 60-70°C pendant 6 heures un mélange de 50 g (0,275 mole) de syringaldéhyde, 85,8 g (0,55 mole) d'iodure de méthyle et 151,7 g (1,09 mole) de carbonate de potassium dans 60 ml de diméthyl-formamide (DMF). On refroidit le mélange et l'évaporé sous vide, puis on le traite avec de l'eau et 1'épuise à l'éther de diéthyle. On déshydrate les extraits sur Na2SO^ et les évapore pour obtenir 59 g du composé du titre sous forme d'un solide blanc,pur par CCM, que l'on utilise sans autre purification.

b) Alcool 3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzyligue

On dissout 59 g (0,28 mole) du produit venant de la réaction précédente dans 600 ml d'un mélange méthanol-éthanol à 1:1 et le traite par 10,8 g (0,285

oxy)pyridazine Partir de l'alcool 2,3-diméthoxybenzylique

25

mole) de borohydrure de sodium, par portions, en une période de 1 heure. On agite le mélange pendant 24 heures a la température ambiante, puis on le traite lentement par 50 ml d'eau pour obtenir un précipité. On évapore le n

mélange pour chasser les solvants organiques, le traite par 300 ml d'eau et 1'épuise au chloroforme. On déshydrate les extraits sur Na2S04 et les évapore pour obtenir un solide blanc que l'on recristallise dans l'éther pour obtenir 2.6 g du composé du titre sous forme d'aiguilles blanches.

Composé Intermédiaire 22 : 3-amino-6-(2-tert.-butylbenzyl-

oxy)pyridazine Partir de l'alcool 2-tert.-butylbenzylique pour obtenir le composé du titre ; P.F. 147-149°C ; RMN S

n

15 (DMSO) : 7,4 (2H, m, ArH), 7,28 (2H, m, ArH), 6,9 (1H, JA =

Ab

8Hz, 4H), 6,85 (1H, J_=8Hz, 5H), 6,0 (2H, large s, NH„),

Ab Z

5,5 (2H, s, CH2), 1/4 (9H, s, Me3).

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

2-tert.-butylbenzoïque (M. Crawford et F.H.C. Stewart, 20 J» Chem. Soc. 1952, 4444). ...

Composé Intermédiaire 23 : 3-amino-6-(2-éthylbenzyloxy)-

pyridazine Partir de l'alcool 2-éthylbenzylique.

Alcool préparé à partir de l'acide 2-éthyl-25 benzoïque (M. Crawford et F.H.C. Stewart, J. C-hem. Soc.

1952, 4444) par réduction par HLA.

Composé Intermédiaire 24 : 3-amino-6-(2,5-diméthylbenzyl-

oxy)pyridazine Partir de l'alcool 2,5-diméthylbenzylique pour 30 obtenir le composé du titre, P.F. 109-lllcC.

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

2,5-diméthylbenzoïque (Aldrich).

Composé Intermédiaire 25 : 3-amino-6-(3,4,5-triméthyl-

benzyloxy) pyridazine

O C

Partir de l'alcool 3,4,5-triméthylbenzylique. Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

26

3,4,5-triméthylbenzoïque (G.H. Kosolapoff/ J. Am. Chem. Soc. 69/ 1652/ 1947).

Composé Intermédiaire 26 : 3-amino-6-(2-phénylbenzyloxy)-

pyridazine

5 Partir de l'alcool 2-phénylbenzylique.

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

2-phénylbenzoîque (Aldrich).

Composé Intermédiaire 27 : 3-amino-6-(3-diéthylaminobenzyl-

oxy)pyridazine

10 Partir de l'alcool 3-diéthylaminobenzylique pour obtenir le composé du titre/ P.F. 115-118°C.

<fR (DMSO) : 7/15 (1H, t, 5'H)/ 6,95 (1H, Jab=8Hz, 4H ) , 6,85 (1H, Jab=8 Hz, 5H), 6/75 (1H/ large s, 2'H), 6,65 (2H, m, 4 ' H+61H ) , 5,9 (2H/ s, NH2 ) , 5,25 (2H, s, CH20)., 3,3 (4H, 15 quad., 2xCH2N), 1/05 (6H/ t/ 2xMe).

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

3-diéthylaminobenzoxque (P. Griess/ Chem. Ber./ 5_ 1041/ 1872).

Composé Intermédiaire 28 : 3-amino-6-(3-méthylaminobenzyI-

oxy)pyridazine Partir de l'alcool 3-méthylaminobenzylique pour obtenir le composé du titre sous forme d'une gomme.

£ (DMSO) : 7/1 (1H/ t, 5'H), 6/95 (lH, J =8Hz, 4H), 6,85

n Ab

(1H, J,=8Hz, 5H ) / 6,6 (2H, m, 2ArH ) , 6,45 (lH, d, ArH),

Ab

5,95 (2H', s, NH2 ) , 5,65 (lH, large s, NH), 5,2 (2H, s, CH20), 2,65 (3H, s, MeN).

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide 3-méthylaminobenzoïque (J. Houben et W. Brassert. Chem. Ber., 43 209, 1910).

Composé Intermédiaire 29 : 3-amino-6-(3-méthoxy-l-naphtyl-

méthoxy)pyridazine Partir du 3-méthoxy-l-naphtylméthanol pour obtenir le composé du titre, P.F. 167-170°C.

<fH (DMSO) : 7,95 2H, 2d, 2ArH) , 7,40 (3H, m, 3ArH) , 7,30 35 (1H, s, 2'H), 7,0 (1H/ J B=8Hz, 4H)/ 6,90 (lH, JAB=8Hz,

5H), 6,00 (2H, s, NH2), 5,75 (2H, s, CH20), 3,90 (3H,s, OMe).

20

25

30

27

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide 3-méthoxy-l-naphtoïque (R. Lesser et G. Gad, Chem. Ber., 58B, 2551 - 9, 1925) .

Composé Intermédiaire 30 : 3-amino-6-[2-(3,4,5-triméthoxy-

phényl)éthoxy]pyridazine Partir du 2-(3,4,5-triméthoxyphényl)éthanol pour obtenir une huile.

£ (DMSO) : 6,95 (lH, J_=8Hz, 4H), 6,90 (lH, J_=8Hz, 5H),

n Ad Ad

é,60 (2H, s, 2ArH), 6,25 (2H, large s, NH2), 4,45 (2H, t, CH20), 3,75 (6H, s, 3MeO et 5MeO), 3,58 (3H, s, 4MeO), 3,0 (2H, t, CH2).

Alcool préparé par réduction par HLA de l'acide

3,4,5-triméthoxyphénylacétique (Aldrich). -

Composé Intermédiaire 31- : 3-ami.no-6- ( 2-pyr.idylméthoxy ) -

pyridazine

Partir du 2-pyridylméthanol (Aldrich) pour obtenir le composé du titre', P.F. 114-115°C. RMN S (DMSO-d,,) :

n u

8,65 (1H, d, 61-H), 7,85 (lH, tr de d, 5'-H), 7,55 (lH, d, 31 -H_) , 7y45 (1H, m, 4'-H), 7,10 (lH, J,=8,8Hz, 4-H),

Ad

6,95 (1H, JAB=8,8Hz, 5-H), 6,05 (2H, s, NH2), 5,45 (2H, s,

CV:

Composé Intermédiaire 32 : 3-amino-6-(2-furfuryloxy)-

pyridazine

Partir de l'alcool furfurylique pour obtenir le

25 composé du titre, P.F. 96-99°C. RMN £ (DMSO-d,) : 7,70

n ' o

(1H, d, 51—H), 6,90 (1H, J =8,8Hz, 4-H), 6,85 (lH, J =

Ad Ad

8,8Hz, 5-H), 6,60 (lH, d, 4'-H), 6,50 (lH, s, 3'-H), 5,95 (2H, s, NH2), 5,30 (2H, s, CH2).

Exemple' 1

30 N-[6—(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthylë

On chauffe à 100°C pendant 3 heures, tout en agitant, sous N2, 29,1 g (0,1 mole) de Composé Intermédiaire 1 et 15,15 g (0,1 mole) de N-chloracétylcarbamate de 35 méthyle dans 100 ml de 1,3-diméthyl-2-imidazolidinone

(DMEU) anhydre. On refroidit le mélnge, on le verse dans

10

15

28

une solution glacée de bicarbonate de sodium et on le filtre pour obtenir un solide quel'on lave à l'eau. On dissout le solide dans du chloroforme contenant 5 % de méthanol et on l'élue à travers une colonne de Florisil. Par 5 évaporation, on obtient un solide que l'on recristallise dans un mélange diméthylformamide-eau pour obtenir 14 g du composé du titre sous forme d'une poudre blanche. P.F. 217-220°C/ RMN (DMSO-d,) : 10,36 (lH, large s,

ri O

NH), 7,87 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,85 (lH, s, 3-H), 6,87

AB

10 (1H, J =8,8Hz, 7-H), 6,85 (2H, s, PhH), 5,25 (2H, s, CH„),

Ad Z

3,79, 3,70 et 3,56 (2H, S, OMe).

Exemple 2

N- [ 6- ( 2 , 5-diméthoxybenzyloxy) imidazo [ 1, 2-.b] pyridaz i ne-2-yl]carbamate d'éthyle 15 On chauffe à 100°C pendant 3 heures, tout en agi tant, sous N2/ 2,61 g (10 mmoles) du Composé Intermédiaire 2, 1,04 g (10 mmoles) de 2,6-lutidine et 1,66 g (10 mmoles) de N-chloracétylcarbamate d'éthyle dans 10 ml de DMEU anhydre. On refroidit le mélange et le filtre, et on lave 20 le solide avec de l'eau et de l'éther, puis le fait passer à travers du Florisil en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol. Par évaporation de l'éluat, on obtient un solide que l'on recristallise dans un mélange diméthylformamide-eau pour obtenir 1,26 g du composé du 25 titre sous forme d'une poudre blanche ; P.F. 210-211°C ; RMN (DMSO-dg) : '10/24 (lH, large s, NH), 7,85 (2H, m, 3-H et 8-H), 7,10-6,86 (4H, m, 7-H et PhH), 5,27 (2H, s, CH2Ar), 4,17 (2H, q, J=6,6Hz, CH_2CH3), 3,78 et 3,73 (6H, s, OMe) et 1,27 (3H, t, J=6,6Hz, CH^H-, ) .

30 Exemple 3

N-[6-(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On chauffe à 100°C pendant 4 heures, tout en agitant, sous N2, 12,0 g (0,046 mole) du Composé Intermé-35 diaire 2, 4,92 g (0/046 mole) de 2,6-lutidine et 6,97 g (0/046 mole) de N-chloracétylcarbamate de méthyle dans

29

10

46 ml de DMEU. On ajoute le mélange à de l'eau glacée, puis le filtre pour obtenir un solide que l'on recristallise dans un mélange diméthylformamide-eau pour obtenir 2,46 g du composé du titre sous forme d'une poudre brun clair ;

P.F. 228-230°C ; RMN S„ (DMSO-d,) : 10,30 (lH, large s,

n o

NH), 7,88 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,85 (lH, s, 3-H), 7,12-

Ad

6,85 (4H, m, ArH), 5,32 (2H, s, CH2) et 3,79, 3,72 et 3,69 (9H, s, OMe).

Exemples 4 à 22

On prépare les composés suivants par le mode opératoire général décrit dans les Exemples 1 à 3, en faisant réagir les 3-amino-pyridazines substituées à la position 6'avec'les"chlôracétylcarbamates appropriés.

(4) N-[6-(3/4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyrida-zine-2-yl]carbamate de n-propyle, P.F. 174-175°C,

RMN (DMSO-d,) : 10,25 (lH, large s, NH), 7,87

n D

(1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,85 (lH, s, 3-H), 6,87 (lH,

Ad

J =8,8Hz, 7-H), 6,85 (2H, s, PhH), 5,26 (2H, s,

Ad

CH2Ar), 4,07 (2H, t, J=6Hz, CH2CH2CH3), 3,80 (6H, s, 20OMe), 3,68 (3H, s, OMe), 1,55 (2H, dt, J=6Hz,

CH^CH^CH^ ) et 0,94 (3H, t, J = 6Hz, CH^H^H^ ) .

(5) N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo 11,2-b]-

.pyridazine-2-yl]carbamate de n-butyle, P.F. 185-187°C,

RMN £ (DMSO-d,) : 10,23 (lH, large s, NH), 7,85 (lH, ,c H b

Jab=8,8Hz, 8-H), 7,8 (1H, s, 3-H), 6,86 (lH, J&B=

8,8Hz, 7-H), 6,65 (2H, s, PhH), 5,27 (2H, s, CH Ar),

4,12 (2H, t, J=6Hz, CH2CH2CH2CH3), 3,80 (6H, s, OMe),

3,67 (3H, s, OMe), 1,61 (2H, m, CH^CH^H^CH., ) , 1,38

(2H, m, CH2CH2CH2CH3) et 0,92 (3H, t, J=6Hz,

30 CH2CH2CH2CH3).

(6) N—[6—(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridiazine-2-yl ] carbamate de n-propyle, P.F. 199-200°C, RMN

ri

(DMSO-d^) : 9,93 (lH, large s, NH), 7?87 (2H, m, 3-H et 8-H), 7,17-6,89 (4H, m, 7-H et PhH), 5,42 (2H, s, 35 CH2Ar), 4,17 (2H, T, J = 6Hz, CH^CH^CH., ) , 3,85 et 3,80

(6H, s, OMe), 1,73 (2H, dt, J=6Hz, CH2ÇH2CH3) et 1,04

30

(3H/ t, J=6Hz, CH2CH2ÇH3).

(7) N-[6-(3,4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-

pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle, P.F. 204-206°C/

RMN c^H ( DMSO-dg ) : 10,25 (lH, large s, NH ) , 7,85

(1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,83 (1H, s, 3-H), 6,85 (lH,

Ab

J =8,8Hz, 7-H), 6,64 (2H, s, PhH), 5,27 (2H, s,

Ab

CH2Ar), 4,15 (2H, q , J=6Hz, ÇH2CH3), 3,28 (6H, s, OMe), 3,16 (3H, s, OMe) et 1,25 (3H, t, J=6Hz,

ch2çh3).

(8) N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyrida-zine-2-yl]carbamate de 2-méthoxyéthyle, P.F. 183-185°C, RMN <?H ( DMSO—dg ) : 10,36 (lH, large s, NH ) , 7,85 (lH, J =8,8Hz, 8-H), 7,83 (lH, s, 3-H), 6,85 (lH, J =8,8Hz,

Ab Ab

7-H), 6,84 (2H, s, PhH), 5,26 (2H, s, CH2Ar),,4,25

(2H, m,COCH2), 3,79 (6H, s, OMe), 3,18 (3H, s, OMe),

3,08 (2H, m, CH^OMe) et 3,32 (3H, s, CH2OMe).

( 9 ) N- [6- ( 1-naphtylmé.thyloxy) imidazo [ 1, 2-b] -pyridazine-

2-yl]carbamate de méthyle, P.F. 243-246°C, (DMSO-

ri dg) : 10,05 (lH, large s, NH), 8,25-7,55 (9H, m, H

naphtaléniques et 3-H et 8-H), 6,92 (1H, J =8,8Hz,

Ab

7—H), 5,92 (2H, s, CH2)et 3,80 (3H, s, OMe).

(10) N-[6-(2-méthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-

2-yl] carbamate de méthyle, P.F. 241-243°C, (DMSO-

h dg) : 10,1 (1H, large s, NH), 7,92 (lH, s, 3-H), 7,65

25 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,45 (lH, d, J=7Hz, PhH), 7,35

Ab

(1H, dd, J=7Hz, PhH), 6,95 (2H, m, PhH), 6,72 (lH,

JAB=8,8Hz, 7-H), 5,36 (2H, s, CH2), 3,89 (3H, s, OMe), et 3,77 (3H, s, OMe).

(11) N-[6-(3/5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b)pyridazine-

30 2-yl]carbamate de méthyle, P.F. 236-238°C, S (DMSO-

ôa) : 10,30 (1H, large s, NH), 7,88 (1H, J_=8,8Hz, u Ab

8-H), 7,82 (1H, s, 3-H), 6,90 (lH, J.= 8,8Hz, 7-H),

Ab

6,66 (2H, d, J=0,9Hz, 2'-H et 6'-H), 6,46 (lH, t, J=0,9Hz, 41-H), 5,36 (2H, s, CH2), 3,78 (6H, s, OMe) et 35 3,70 (3H, s, OMe).

I\

10

15

31

(12) N-[6-(3-méthylbenzyloxy)imidazo[l/2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle, P.F. 205-208°C, RMN (DMSO-dg) : 9,95 (lH, large s, NH), 7,85 (lH, s, 3-H), 7,80 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,30 (3H, m, 2'-H, 4'-H et 6'-H),

Ab

5 7,15 (1H, m, 51—H), 6,82 (lH, J =8,8Hz, 7-H), 5,80

Ab

(2H, s, CH2), 3,72 (3H, s, OMe) et 2,34 (3H, s, Me).

(13) N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyrida-

zine-2-yl]carbamate de t-butyle, P.F. 191,5-192,50C,

RMN ê (DMSO-d,) : 9,95 (lH, large s, NH), 7,85 (lH, ri b

J._=8,8Hz, 8-H), 7,79 (lH, large s, 3-H), 6,87 (lH,

Ab

Jab=8,8Hz, 7-H), 6,86 (2H, s, PhH), 5,25 (2H, s, CH2),

3.79 (6H, s, OMe), 3,68 (3H, s, OMe) et 1,50 (9H, s, t-Bu).

(14) N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzylthio)imidazo[1,2-b]pyri-15 dazine-2-yl]carbamate de méthyle, P.F. 221-223°C,

RMN S (DMSO—dg) ; 10,51 (lH, large s, NH), 8,11 (1H, s, 3-H), 7,87 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,17 (lH,

Ab

JAB=8,8Hz, 7-H), 6,88 (2H, s, PhH), 4,49 (2H, s, CH2), 3,83 (6H, s, OMe) et 3,70 (3H, s, OMe). 20 (15) N-[6-(diméthylaminobenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-

2-yl ] carbamate de méthyle, P.F. 200-203°C, RMN cT

n

(DMSO—dg) : 10,05 (lH, large s, NH), 7,93 (lH, s, 3-H),

7,90 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,30 (lH, t, 5'-H), 6,95-Ab

6.80 (4H, m, 21-H, 4'-H, 61-H et 7-H), 5,40 (2H, s, 25 ch2 ) , 3,78 (3H, s, MeO) et 2,98 (6H, s, NM,e2).

(16) N-[6-(3-méthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle, P.F. 184-189,5°C, RMN

ri

(CDCl^) : 10,55 (1H, large s, NH), 8,02 (lH, large s,

3-H), 7,75 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,32 (lH, dd, J=7,5Hz,

Ab

30 5'-H), 7,07 (2H, m, ArH), 6,88 (lH, dd, J=7,5 et 2Hz,

ArH), 6,70 (1H, J =8,8Hz, 7-H), 5,34 (2H, s, CH„),

Ab Z

3,88 et 3,83 (6H, s, OMe).

(17) N-(6-benzyloxyimidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl)carbamate d'éthyle, P.F. >211°C (décomposition), RMN ^ (DMSO-

n

35 5 ) : 10,25 (1H, large s, NH), 7,87 (lH, J. =8,8Hz,

u Ab

8-H), 7,72 (1H, s, 3-H), 7,57-7,37 (5H, m, Ph), 5,35

32

(2H, s, CH2Ar), 4,15 (2H, q, J=6Hz, CH_2CH3) et 1,27 (3'H/ t, J=6Hz, CH2£H3). (18) N-[6-n-butylthioimidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl] carbamate de méthyle, P.F. 170-171°C, RMN £ (DMSO-dg) : 5 10,40 (1H, large s, NH), 7,94 (lH, s, 3H), 7,76 (lH,

Jab=8,8Hz, 8-H), 7,06 (lH, JAB=8,8Hz, 7-H), 3,72 (3H, s, OMe), 3,18 (2H, t, J=6Hz, CH2S), 1,68 (2H, m, CH_2CH2S), 1,44 (2H, m, -ÇH2CH2CH2S) et 0,93 (3H, t, J=6Hz, CH3CH2CH2S). 10 (19) N-(6-benzylthioimidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl)carbamate de méthyle, P.F. 223-225°C (décomposition), RMN S„ (DMSO-d».) : 10,42 (1H, large s, NH), 7,99 (lH, s,

ri u

3-H), 7,77 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,52-7,20 (5H, m,

Ab

Ph), 7,07 (1H, J =8,8Hz, 7-H), 4,45 (2H, s, CH,) et

Ab Z

15 3,68 (3H, s, OMe).

(20) N-[6-(3,5-diméthoxy-4-(méthoxyéthoxyméthoxy)benzyloxy)-imidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

P.F. 149-150°C, RMN (CDC1-) : 9,58 (lH, large s,

n J

NH), 8,02 (lH, large s, 3-H), 7,75 (lH, JAB=8,8Hz,

20 8-H), 6,75 (1H, J =8,8Hz, 7-H), 6,70 (2H, s, 2'-H et

Ab

61-H), 5,29 (2H, s, CH2), 5,18 (2H, s, CH2), 4,08-3,91 (2H, m, CH2)/ 3,85 (9H, s, OMe), 3,6-3,45 (2H, m, CH2) et 3,35 (3H, s, OMe).

(21) N-[6-(3-chlorobenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]-25 carbamate de méthyle, P.F. 268-270°C, RMN (DMSO-

dg) : 10,32 (1H, large s, NH), 7,87 (lH, JAB=8,8Hz,

8-H), 7,83 (1H, s, 3-H), 7,61 (lH, s, 2'-H), 7,53-7,41

(3H, m, PhH), 6,91 (lH, JAB=8,8Hz, 7-H), 5,38 (2H, s,

CH2) et 3,68 (3H, s, OMe).

30 (22) N-[6-(2-thiénylméthylimidazo[1,2-b]pyridazine-2-y1]-

carbamate de méthyle, P.F. 207-209°C, RMN (DMSO-

dg), 10,38 (1H, largè s, NH), 7,85 (1H, s, 3-H), 7,82

(1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,58 (lH, d, 5'-H), 7,30 (lH, d, Ab

31-H), 7,05 (1H, t, 41-H), 6,82 (lH, JAB=8,8Hz, 7-H), 35 5,56 (2H/ s, CH2) et 3,66 (3H, s, OMe).

33

Exemple 23

N-[6-(3/4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l/2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de 2,2,2-trifluoréthyle a) 6-(3/4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l/2-b]pyridazine-

5 2-carboxylate d'éthyle

On ajoute 117 g (0/6 mole) de bromopyruvate d'éthyle à 174/6 g (0/6 mole) de 3-amino-6-(3,4/5-trimétho-

xy)pyridazine et 62/4 g (0/6 mole) de 2/6-lutidine dans

600 ml de DMF anhydre/ tout en agitant/ sous N2. On chauffe

10 le mélange à 100°C pendant 3 heures/ on le refroidit et on le concentre sous vide/ puis on le traite avec de l'eau et on le filtre pour obtenir un solide brun que l'on lave avec de l'eau et de l'éther. On cristallise le solide dans DMF

et de l'eau pour obtenir 88 g du composé du titre sous forme

15 d'un solide cristallin ; P.F. 159-163°C : RMN (CDCl^) :

8/31 (1H, s, 3H), 7,84 (lH/ J =8/8Hz, 8-H), 6,82 (lH/

Ad

JAB=8,8Hz, 7-H), 6/70 (2H, S, ArH), 5,30 (2H, s, CH2Ar), 4,45 (2H, q, J=7Hz, 0CH2CH3), 3/88 (6H/ s, OCH3), 3/86 (3H/ s, OCH3) et 1,44 (3H, t, J=7Hz, CH3 ) .

20 b) Acide 6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-carboxyligue

On chauffe au reflux pendant 20 minutes/ tout en agitant/ 1/94 g (5 mmoles) du produit de l'étape (a) avec 1 ml d'une solution 10M (10 mmoles) d'hydroxyde de sodium, 25 9 ml d'eau et 5 ml de méthanol. On refroidit le mélange et on l'acidifie avec de l'acide chlorhydrique dilué, et on le filtre pour obtenir un solide que l'on sèche sous vide à 60°C pour obtenir 1,5 g du composé du titre sous forme d'une poudre ; P.F. 224-226°C (déc.) ; RMN <^"u (DMSO-d,) :

ri o

30 8,56 (1H, s, 3H), 8,07 (lH, J =8,8Hz, 8-H), 7,05 (lH,

Ad

J=8,8Hz, 7-H)/ 6/88 (2H, s, ArH)/ 5/29 (2H, s, CH0Ar)/

Ad

3,82 (6H, s, OCH3)/ 3,68 (3H, s, 0CH3) et 3,32 (lH, large s, C02H).

c) Azoture d'acide 6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo-35 [1,2-b]pyridazine-2-carboxylique

On ajoute 0,13 ml (1,5 mmole) de chlorure d'oxa-

34

lyle à 0/36 g (1 mmole) du produit de l'étape (b) et 0/079 g (1 mmole) de pyridine dans 5 ml de benzène anhydre/ tout en agitant/ sous N2. On chauffe le mélange au reflux pendant 3 heures/ le refroidit et l'évaporé sous vide pour 5 obtenir un solide gris*

On traite ce solide par 10 ml de dioxanne/ 10 ml d'eau et un excès d'azoture de sodium/ et on l'agite éner-giquement pendant une nuit à la température ambiante. On filtre le mélange et on sèche le solide sous vide pour obte-10 nir 0/29 g du composé du titre sous forme d'une poudre ; P.F. >139°C (déc.) ; RMN £„ (CDC1-) : 8,35 (lH/ s, 3H),

n 3

7,85 (1H, J =8,8Hz, 8-H)/ 6,85 (lH, J._=8,8Hz, 7-H), 6,70 Ad Ad

(2H, s, ArH), 5,31 (2H, s, CH2Ar), 3,90 (6H, s, OCH3) et 3,88 (3H, s, OCH3).

15 d) N- [ 6- ( 3 ,4, 5-triméthoxybenzyloxy ) imida.zo [ 1, 2-b] pyrida-zine-2-yl]carbamate de 2,2,2-trifluoréthyle

On chauffe au reflux, tout en agitant,sous N2, 2/3 g (6 mmoles) du produit de l'étape (c)/ environ 3 ml de 2/2/2-trifluoréthanol et 60 ml de toluène/ jusqu'à ce 20 que la CCM montre une réaction complète (environ 2 heures).

On refroidit le mélange pendant une n-uit et on le filtre pour obtenir un solide que l'on lave avec de l'éther et sèche pour obtenir 0/43 g du composé du titre sous forme d'une poudre ; P.F. 205-210°C (déc.) ; RMN (DMSO-d,-) :

ri b

25 10,81 (1H, large s, NH), 7/88 (lH, J =8,8Hz, 8-H), 7,85

Ad '

(lH, S/ 3-H)/ 6/90 (1H/ J =8HZ/ 7-H)/ 6/85 (2H/ s, ArH)/

Ad

5/25 (2H/ s, CH2Ar), 4,83 (2H, q, J=9Hz, CH2CF3), 3,76 (6H/ s, 0CH3) et 3,65 (3H, s, 0CH3).

Exemple 24

30 N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l/2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de 2-hydroxyéthyle

On suit un mode opératoire analogue à celui décrit à l'Exemple 23(d), sauf que l'on chromatographie le produit brut sur Si02 en éluant avec du chloroforme conte-35 nant 5 % de méthanol, avec cristallisation subséquente dans un mélange DMF-eau pour obtenir le composé du titre sous

35

forme d'une poudre ; P.F. 193-195°C ; RMN cf (DMSO-dg) : 10,35 (1H, large s, NH ) , 7,8.5 (1H, J=8,8Hz, 8-H), 7,83

Ab

(1H/ s, 3-H), 6,86 (1H, J =8,8Hz, 3-H), 6,84 (2H, s, ArH),

AD

5,25 (2H, s, CH2Ar), 4,82 (lH, t, J=4Hz, OH), 4,15 (2H, m), 5 3,80 (6H, s, OCH3) et 3,66 (5H, m, OCH2 et 0CH3).

Exemple 25

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de 2-(1-morpholino)éthyle

On suit un mode opératoire analogue à celui dé--'-0 crit à l'Exemple 23(d), sauf que l'on chromatographie le produit brut sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol et on le fait bouillir dans un peu d'éthanol pour obtenir le composé du titre sous forme d'une poudre ; P.F. 161-162°C ; RMN (DMSO-d,) : 10,30 (lH,

H o

15 large s, NH), 7,88 (lH, s, 3-H), 7,85 (lH, J7VT3 = 8,8Hz, 8-H),

- - Ab

6,87 (1H, uL =8, 8Hz -7-H), 6,85 (2H, s, ArH), 5,26 (2H,

Ab —

s, CH2Ar), 4,22 (2H, t, J=7Hz, C0.0CH2), 3,80 (6H, s, OCH3), 3,68 (3H, s, 0CH3), 3,58 (4H, m, CH20CH2), 2,59 (2H, t, J=5Hz, CO.OCH2ÇH2N) et 2,45 (4H, m, CH2NCH2). 20 Exemple 26 . •.

N-[N-méthyl-6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On ajoute, par portions, 1,26 g (31,5 mmoles) d'hydrure de sodium à 60 % à une suspension sous agitation 25 de 9,51 g (24,5 mmoles) de N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)-imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle dans 100 ml de. DMEU, sous N2 à la température ambiante. On traite le mélange par 4,9 g (2,1 ml, 35 mmoles) d'iodo-méthane et, après .'1 heure de plus, on traite le mélange 30 par (3es équivalents molaires d'hydrure de sodium et d'iodo-méthane. Au bout de 2 heures, on verse le mélange dans 100 ml d'eau et l'on filtre pour obtenir un solide blanc que l'on chromatographie sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 2 % de méthanol. On recristallise le pro-35 duit dans un mélange DMF—eau pour obtenir 8,29 g du composé du titre sous forme d'une poudre blanche ; P.F. 177-

36

178°C ; RMN (DMSO-d,) : 8,04 (1H, s, 3H), 7,96 (lH,

ri D

J =8,8Hz, 8-H), 6,92 (lH, J =8,8Hz, 7-H), 6,86 (2H, s,

Ad Ab

ArH), 5,25 (2H, s, CH2)/ 3,79 (9H, s, OCH3), 3,68 (3H, s, CO.OCH3) et 3,42 (3H, s, NCH3).

Exemple 27

N-[N-éthyl-6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On suit un mode opératoire analogue à celui décrit à l'Exemple 26 pour obtenir le composé du titre sous forme d'un solide blanc ; P.F. 153-155°C ; RMN (DMSO-

Jri d,) : 8,04 (lH, s, 3H), 7,96 (lH, J =8,8Hz, 8-H), 6,92

D Ab

(1H, J '=8,8Hz, 7-H), 6,86 (2H, s, ArH), 5,25 (2H, s,

Ab

ArCH2), 3,90 (2H, q, CH2CH3), 3,78 (9H, s, ArOCH3), 3,66 (3H, s, NCH3) et 1,19 (3H, t, CH2ÇH3).

Exemple 28

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyl)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de 2,3-dihydroxypropyle

On fait réagir le produit de l'Exemple 23(c) avec du solcétal en suivant un mode opératoire analogue à celui décrit à l'Exemple 23(d), sauf qu'à l'achèvement de la réaction entre 1'azoture d'acyle et le solcétal, on .évapore le mélange brut sous vide, puis on le chauffe à 60-70°C pendant 0,5 heure avec de l'acide chlorhydrique dilué et de l'éthanol. On neutralise le mélange réactionnel avec une solution de bicarbonate de sodium, l'évaporé sous vide et le chromatographie sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 7 % de méthanol pour obtenir le composé du titre sous forme d'un solide blanc ; P.F. 175-176°C t RMN S

ri

(DMSO-dg) : 10,28 (lH, large s , NH), 7,88 (lH, JAB=8,8Hz, 8-H), 7,86 (1H, s,3-H), 6,87 (lH, J =8,8Hz, 7-H), 6,85

Ab

(2H, s, ArH), 5,28 (2H, s, ArCH2), 4,90 (lH, d, J=4Hz, 2'-OH), 4,65 (1H, t,' J=4Hz, 1'-OH), 4,20-4,0 (2H, m, C0.0CH2), 3,80 (6H, s, OCH3), 3,80-3,70 (lH, m, HO-CH), 3,69 (3H, s, OCH3) et 3,40 (2H, t, J=4Hz, HOCH_2 ) .

37

Exemple 29

N-[6-(3 ; 4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1/2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de 2-diméthylaminoéthyle

On fait réagir le produit de l'Exemple 23(c) avec 5 du 2-diméthylamino-éthanol en suivant un mode opératoire analogue à celui décrit à l'Exemple 23(d)/ sauf que l'on chromatographie le produit brut sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol pour obtenir un solide que l'on lave avec de l'éthanol et sèche pour obtenir le 10 composé du titre sous forme d'une poudre blanche t P.F.

185-186°C ; RMN £ (DMSO-d,) : 10/32 (lH, large s, m), 7,88

n D

(1H, JAB=8,8Hz, 8-H)/ 7/85 (1H, s, 3H), 6,89 (lH, JAB=8,8Hz, 7-H), 6,85 (2H, s, ArH)/ 5/77 (2H, s, ArCH2)/ 4/60 (2H/ t, J=4Hz/>CO.OCH2), 3,80 (6H, s, OCH3)/ 3/69 (3H/ s, 0CH3), 15 2,50 (2Hr t, CH2N) et 2,21 (6H/ s, NMe2).

Exemple 30

N-[6-(3/4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-

2-yl]carbamate de phényle

On fait réagir le produit de l'Exemple 23(c) avec 20 du phénol en suivant un mode opératoire similaire à celui décrit à l'Exemple 23(d) sauf que l'on chromatographie le produit brut sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 5 % de méthanol pour obtenir un solide blanc que l'on lave avec de 1'acétonitrile et sèche pour obtenir le com-25 posé du-titre sous forme d'une poudre blanche ; P.F. 210-2130 C ; RMN S (CDCl3) : 10/12 (lH, large s , NH ) , 8,05 (lH, s, 3H), 7,80 (1H, JAB=8,8Hz, 8-H)/ 7,55-7,15 (5H, m,

Ph), 6,69 (2H, s, ArH), 6,67 (1H, J=8,8HZ/ 7-H)/ 5,28

Ab

(2H, s, ArCH2) et 3/90 (9H, s, 0CH3).

30 Exemple 31

3-amino-6-(2-bromo-3 ,4, 5-triméthoxybenzyloxy ) pyridazine a) On traite goutte à goutte, en une période de

5 minutes, 2,91 g (10 mmoles) de 3-amino-6-(3,4/5-triméthoxybenzyloxy )pyridazine (Composé Intermédiaire 1) dans 35 20 ml d'acide acétique par une solution de 1/59 g (10 mmoles) de brome dans 2 ml d'acide acétique. Au bout de 0,5

38

heure, on filtre le mélange pour obtenir un solide de couleur crème que l'on met en suspension dans l'eau et alcali nise avec une solution d'hydroxyde de sodium. On épuise le mélange au chloroforme et on lave les extraits avec de l'eau, les déshydrate sur Na2SO^ et les évapore sous vide pour obtenir un solide de couleur crème que l'on recristal lise dans le toluène pour obtenir 2,76 g du composé du titre sous forme d'aiguilles de couleur crème ; P.F. 160-161°C ; RMN £ (CDC1-) : 6,93 (lH, s, ArH), 6,91 (1H,

ri u

J7vn=8,8Hz, 5-H), 6,80 (lH, J=8,8Hz, 4-H), 5,49 (2H, s,

Ab Ab

CH2), 4,95 (2H, large s, NH2), 3,91 (3H, s, 0CH3), 3,90 (3H, s, 0CH3) et 3,89 (3H, s, OCH3).

b) N-[6-(2-bromo-3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On suit un mode opératoire similaire à celui décrit dans les Exemples 1 à 3 pour obtenir le composé du titre sous forme d'une poudre blanche ; P.F. 218-219°C ; RMN (CDCl^) : 9,45 (1H, large s, NH), 8,03 (lH, large n o s, 3-H), 7/75 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 6,94 (lH, S/ ArH)/

Ab

6,75 (1H/ J =8/8Hz, 7H), 5,40 (2H, s, ArCH,) et AB Z

3,96-3,86 (12H, m, 0CH3).

Exemples 32 à 45

En suivant un mode opératoire analogue à celui décrit dans les Exemples 1 à 3, on prépare les composés suivants :

Exemple 32

N-[6-(2,3-diméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl3carbamate de méthyle

P.F. 210-211 ° C, "RMN cT (DMSO-d,) : 10,35 (lH, large s, NH)

ri b

7,86 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,84 (lH, s, 3H), 7,10 (3H, s, Ab

PhH), 6,88 (1H, J =8,8Hz, 7-H), 5,35 (2H, s, CH,) et

Ab Z

3,86, 3,80 et 3,72 (9H, s, OCH3).

Exemple 33

N-[6-(3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyri-dazine-2-yl]carbamate de méthyle

P.F. 190-193°C, RMN S (DMSO-d,), 10,33 (lH, large s, NH),

n b

39

7,88 (1H, J =8,8Hz, 8-H), 7,85 (1H, s, 3-H), 6,88 (lH,

Ad

J,. =8, 8Hz, 7-H), 6,85 (2H, s, ArH), 5,77 (2H, s, ArCH„ ) ,

Ad Z

3,90 (2H, a, J=7Hz, CH2CH3), 3,80 (6H, s, ArOCH3), 3,69 (3H, s, CO.OCH3) et 1,24 (3H, t, J=7Hz, CH2£H3). 5 Exemple 34

N-[6-(2-tert.-butylbenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

P.F. 220-223°C ; RMN cT (DMSO) : 9,95 (lH, large s, NH),

II

7,85 (1H, s, 3-H), 7,8 (lH, J =8Hz, 8-H), 7,5 (2H, m,

Ad

10 ArH), 7,28 (2H, m, ArH), 6,8 (lH, J =8Hz, 7-H), 5,5 (2H,

Ad s, CH2), 3,7 (3H, s, OMe), 1,4 (9H, s, Me^).

(A partir du Composé Intermédiaire 22).

Exemple 35

N-[6-(2-éthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-y1]-

15 carbamate de méthyle

P.F. 190-191 ° C ; RMN (DMSO) : 9,95 (lH, large s, NH ) ,

ri

7,85 (1H, s, 3H), 7,8 (lH, J =8Hz, 8-H), 7,45 (1H, d,

Ad

ArH), 7,3 (3H, m, ArH), 6,8 (lH, J.=8Hz, 7-H), 5,4 (2H,

Ad s, 0-CH2), 3,7 (3H, s, OMe), 2,7 (2H, quad., CH2), 1,2 20 (3H, t, Me).

(A partir du Composé Intermédiaire 23).

Exemple 36

N-[6-(2,5-diméthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de n-propyle 25 -P.F. 196-197°C, RMN ^_(DMS0) : 9,85 (lH, large, s, NH),

ri

7,85 (1H, S, 3H), 7,80 (lH, J =8Hz, 8-H), 7,25 (lH, s,

Ad

61-H), 7,1 (2H, 2d, 31-H et 4'-H), 6,8 (lH, J,=8Hz, 7-H),

Ad

5,35 (2H, s, 0CH2), 4,1 (2H, t, OCH2), 2,3 (6H, 2s, 2 x ArMe), 1,7 (2H, quad., CH2), 0,95 (3H, t, Me). 30 (A partir du chloracétylcarbamate de n-propyle et du Composé Intermédiaire 24).

Exemple 37

N-[6-(3,4,5-triméthylbenzyloxy)imidazo[2,1-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle 35 P.F. 227-229°C ; RMN à (DMSO) : 9,90 (lH, large s, NH),

n

7,85 (1H, S, 3-H), 7,75 (1H, J.=8Hz, 8-H), 7,15 (2H, s,

Ad

40

ArH), 6,80 (1H, J=8Hz, 7-H), 5,25 (2H, s, 0CHo), 3,7

Ab A

(3H, s, OMe), 2,28 (6H, s, 2 x ArMe), 2,15 (3H, s, ArMe). (A partir du Composé Intermédiaire 25).

Exemple 38

5 N-[6-(2-phénylbenzyloxy)imidazo[l,2-bj pyridazine-2-yl]-carbamate de méthyle

P.F. 203-204°C ; RMN $ (DMSO) : 9,92 (lH, large s, NH),

ri

7,75 (1H, J =8Hz, 8-H), 7,70 (lH, s, 3-H), 7,4 (9H, m,

Ab

9ArH), 6,75 (lH, J =8Hz, 7-H), 5,3 (2H, s, 0CH-), 3,7

Ab A

10 (3H, s, OCH3).

(A partir du Composé Intermédiaire 26).

Exemple 39

Chlorhydrate de N-[6-(3-diéthylaminobenzyloxy)imidazo-[1,2-b]pyridazine-2-yl3carbamate de méthyle 15 P.F. 220-225°C ; RMN cT (DMSO) : 10,35 (1H, large s, NH ) ,

n

7,9 (1H/.J =8Hz, 8-H), 7,8 (lH, s, 3-H), 7,6 (4H, m,

Ab

4 x ArH), 6,9 (lH, J =8Hz, 7-H), 5,4 (2H, s, CH„0), 3,7

Ab £

(3H, s, OMe), 3,5 (4H, large s, 2 x CH2N), 1,05 (6H, t, 2 x Me).

20 (A partir du Composé Intermédiaire 27)

Exemple 40

Chlorhydrate de N-[6-(3-méthylaminobenzyloxy)imidazo-

[l,2-b3pyridazine-2-yljcarbamate de méthyle

P.F. 213-215°C (déc.) ; RMN S (DMSO) : 10,4 (lH, large s,

n

25 NH), 7,9 (1H, J._)8Hz, 8-H), 7,85 (lH, s, 3-H);, 7,3 (4H,

Ab m, 4ArH), 6,9 (lH, J =8Hz, 7-H), 5,4 (2H, s, CH„0), 3,7

Ab Z

(3H, s, OMe), 2,85 (3H, s, MeN).

(A partir du Composé Intermédiaire 28).

Exemple 41

30 N- [ 6- ( 3-d.iméthylaminobenzyloxy ) imidazo [ 1, 2-b ] pyridazine-2-yl3carbamate d'éthyle

P.F. 204-208 ° C ; RMN cfu (DMSO) : 9,95 (1H, large s, NH ) ,

ri

7,85 (1H, s, 3-H), 7,80 (lH, J,=8Hz, 8-H), 7,2 (lH, t,

Ab

5'-H), 6,85 (lH, J,. =8Hz, 7-H), 6,75 (3H, m, 3ArH ) , 5,3

Ab

35 (2H, s, CH20), 4,2 (2H, quad., 0CH2), 2,9 (6H, s, Me2N), 1,25 (3H, t, Me).

(A partir du Composé Intermédiaire 7) f

\

H)

41

Exemple 42

N-[6-(1-naphtylméthoxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle

P.F. 240-245 °C ; RMN S (DMSO) : 10,0 (1H, large s, NH ) ,

ri

5 8/2 (lH, m, ArH), 8,05 (2H, m, 2ArH), 7,95 (lH/ s, 3-H), 7,90 ( 1H/ Jab=8Hz, 8—H), 7,85 (1H, d, 2'-H), 7,65 (3H, m, 3ArH), 6,90 (lH, J =8Hz, 7-H), 5,95 (2H, s, CHo0), 4,25

Ab

(2H, quad., OCH2), 1,35 (3H, t, Me).

(A partir du Composé Intermédiaire 3).

10 Exemple 43

N-[6-(1-naphtylméthoxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de n-propyle

P.F. 208-210°C ; RMN S (DMSO) : 10,25 (lH, large s, NH),

ri

8,15 (1H, m, ArH), 8,00 (2H, m, 2ArH), 7,90 (lH, s, 3-H), 15 7,85 (1H, J =8Hz, 8-H), 7,75 (lH, d, 2'-H), 7,60 (3H, m,

Aii

3ArH ) , 6,85 (lH, J^T3=8Hz, 7-H), 5,8 (2H, s, OCH„ ) , 4,1

Ab Z

(2H, t, OCH2), 1,65 (2H, m, CH2), 0,9 (3H, t, Me).

(A partir du- Composé Intermédiaire 3)

Exemple 44

20 N-[6-(3-méthoxy-l-naphtylméthoxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

RMN £„ (DMSO) : 10,0 (lH, large s, NH), 8,1 (lH, d, ArH),

ri

7,9 (2H, m, ArH + 3-H), 7,85 (lH, J =8Hz, 8-H), 6,85 (1H,

Ab

JAB=8Hz, 7-H), 5,8 (2H, s, CH20), 3,90 (3H, s, OMe), 3,7 25 (3H, s, OMe).''

(A partir du Composé Intermédiaire 29).

Exemple 45

N- [ 6- [ 2- ( 3 ,4, 5-triméthoxyphé.nyl ) éthoxy ] imidazo [ 1, 2-b ] -pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle 30 P.F. 203-2060C : RMN & (DMSO) : 9,95 (lH, large s, NH), 7,80 (1H, s, 3-H), 7,75 (lH, J =8Hz, 8-H), 6,8 (lH,

Ab

JAB=8Hz, 7-H), 6,65 (2H, s, 2ArH), 4,5 (2H, t, CH20), 3,8 (6H, s, 3MeO, 5MeO), 3,7 (3H, s, OMe), 3,65 (3H, s, 4MeO), 3,0 (2H, t, CH2).

35 (A partir du Composé Intermédiaire 30).

\

42

Exemple 46

N-[6-(3/4/5-triméthoxyphénéthyl)imidazo[1, 2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle a) Acide 4-oxo-6-(3/4/5-triméthoxyphénéthyl)hex-5-énoïque 5 On ajoute une solution de 50 g (0,43 mole)

d'acide lévulique dans 200 ml d'eau à un mélange de 85 g (0,43 mole) de 3,4,5-triméthoxybenzaldéhyde dans 150 ml d'éthanol et de 700 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium à 5%. On chauffe le mélange sous agitation énergique jus-10 qu'à ce que la totalité de l'aldéhyde se soit dissoute,

puis on le verse sur environ 2 kg de glace. On l'acidifie ensuite jusqu'à pH 3-4 et on l'abandonne pendant une .nuit. On sépare par filtration la matière cristalline formée, la sèche sous vide, puis la recristallise dans l'éthanol pour 15 obtenir 30,08 g de cristaux jaune pâle ; P.F. 187-189°C. RMN S (DMSO-dg) : 7,57 (lH, d, JAlBl=18,0Hz, CH), 7,08 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 6,91 (lH, d, J =18,0Hz, CH), 3,83

Ab

(6H, s, 3'-MeO et 5'-MeO), 3,70 (lH, s, 4'-MeO), 3,33 (1H, large m non résolu, C02H), 2,92 (2H, t, JA2B2~^'°HZ/ 20 CH2) et 2,50 (2H, t, Ja2b2=7,0Hz, CH2).

b) 4,5-dihydro-6- (3,4, 5-triméthoxy-o<.-styryl )pyridazine-3(2H)-one

On dissout 20 g (0,068 mole) d'acide 4-oxo-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)hex-5-énoïque dans 240.ml 25 d'acide acétique cristallisable, puis on ajoute 3,4 g

(0,068 mo.le) d'hydrate d'hydrazine. On chauffe le mélange au reflux pendant 2,5 heures,on le refroidit et on le verse dans environ 2 litres d'eau. Après repos pendant une nuit, on sépare les cristaux formés par filtration à la trompe 30 et on les sèche sous vide pour obtenir 13,58 g du produit. On en recristallise une portion de 3,5 g dans le méthanol pour obtenir 3,18 g de cristaux jaune pâle : P.F. 173-175°C. RMN ( CDCl _ ) : 8,91 (lH, large s, NH ) , 6,82 (2H, s, CH,

n ô

CH), 6,70 (2H, s, CH, CH), 3,89 (6H, s, 3'-MeO et 5'-MeO), 35 3,87 (3H, s, 4'-MeO), 2,82 (2H, t, J =9,0Hz) et 2,56 (2H,

Ab t, J,d=9,0Hz).

43

c) 4/5-àihydro-6-(3,4/5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine-3-(2H)-one

On hydrogène à 85°C,sous 1 MPa de / 5 g (0,017 mole) de 4,5-dihydro-6-(3,4,5-triméthoxy-tf-styryl)pyrida-5 zine-3(2H)-one sur 150 ml d'acide acétique cristallisable en présence de 0,25 g de catalyseur à 10 % de Pd/C jusqu'à ce que l'absorption requise d'hydrogène ait eu lieu. On filtre ensuite le mélange à travers Hyflo et l'on évapore le filtrat sous vide à 35°C. On chasse les traces res-10 tantes d'acide acétique cristallisable par entraînement azéotrope avec du toluène et l'on purifie davantage les 4,9 g de solide brun par chromatographie sur gel de silice en utilisant du dichlorométhane contenant 1 % de méthanol comme éluant. En chassant le solvant des fractions appro-15 priées, on obtient 3,04 g du produit sous forme d'un solide blanc P.F. 116-117°C.

RMN cf„ (CDC1-) : 8,46 (lH, s, large, NH), 6,43 (2H, s,

n 3

2 ' -H, 6'-H), 3,83 (6H, s, 3'-MeO et 5'-MeO), 3,81 (3H, s, 4'-MeO), 2,84 (2H, t, J,=7Hz, CH0), 2,61 (2H, t, J =7Hz)

Ad Z Ad

20 et 1,95 (4H, m partiellement résolu, •

d) 6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine-3(2H)—one

On chauffe au reflux, pendant 4,5 jours, 1,72 g (5,93 mmoles) de 4,5-dihydro-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)-pyridazine-3(2H)-one et 0,98 g (8,83 mmoles) de bioxyde de 25 sélénium dans 80 -ml d'éthanol. On ajoute un sypplément de 0,5 g (4,51 mmoles) de bioxyde de sélénium et l'on chauffe le mélange au reflux pendant 5 jours de plus. On filtre le mélange pour éliminer le sélénium qui s'est séparé et l'on évapore le filtrat sous vide pour obtenir 2,21 g d'un so-30 lide poisseux brun. On soumet ce solide à une chromatographie instantanée sur silice en éluant avec 1 à 2 % de méthanol dans le dichlorométhane. En rassemblant les fractions appropriées, on obtient 1,43 g du produit sous forme d'un solide cristallin d'un brun -sable ; P.F. 122-124°C. 35 RMN (CDC13) : 11,64 (1H, large s, NH), 7,08 (1H, d,

JAB=6Hz, CH hétérocyclique), 6,89 (lH, d, JAB=6Hz, CH hété-

44

10

rocyclique)/ 6,48 (2H, s, 2'-H, 61—H), 3,83 (9H, 2s, 3'-MeO et 5'-MeO, 4»-MeO) et 2,82 (4H, s, CH2-CH2). e ) 3-chloro-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine

On chauffe à 100°C pendant 1 heure un mélange de 2,80 g (9,65 mmoles) de 6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)-pyridazine-3(2H)-one et 70 ml d1oxychlorure de phosphore, on le refroidit à la température ambiante et on l'hydrolyse en ajoutant de l'eau peu à peu, avec précaution, en une période de 3 heures, de telle façon que la température ne dépasse pas 30°C. On alcalinise ensuite le mélange jusqu'à pH 12 par l'addition de 700 ml d'une solution d'hydroxyde de sodium 10N, puis l'abandonne à 4°C pendant une nuit. On sépare le précipité par filtration à la trompe, on le lave bien avec de l'eau pour éliminer les sels miné-15 raux et on reprend dans du dichlorométhane le résidu restant sur la plaque frittée. Après déshydratation sur sulfate de sodium, l'élimination du solvant donne 2,84 g d'un solide brun clair que l'on purifie par chromatographie instantanée sur silice en utilisant du dichloro-20 méthane contenant 10 % d'acétate d'éthyle comme éluant.

On rassemble les fractions appropriées pour obtenir 2,16 g d'un solide blanc ; P.F. 105-106°C.

RMN <^H (CDC13) : 7,38 (lH, d, JAB=9Hz, CH hét.), 7,16 (lH, d, JAB=9Hz, CH hét.), 6,37 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 3,82 (9H, 25 s, 3'-MeO, 4'-MeO et 5'-MeO), 3,37 (2H, t, Ja2b2=9Hz, CH2) et 3,04 (2H, t, ja2b2=9HZ/ ch2)* f) 3-amino-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine

On chauffe à 150°C pendant 65 heures, dans un autoclave en acier inoxydable, 1,97 g (6,38 mmoles) de 30 3-chloro-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine dans 800 ml d'ammoniac méthanolique saturé, puis on laisse refroidir. On évapore ensuite le mélange sous vide pour obtenir 2,84 g d'un solide poisseux brun foncé que l'on soumet à une chromatographie instantanée sur silice en 35 utilisant du dichlorométhane contenant 3 % de méthanol comme éluant. En rassemblant les fractions appropriées,

45

on obtient 0,56 g du produit sous forme d'un solide blanc ; P.F. 130-132°C.

RMN & (CDCl.) 6,96 (lH, d, J =9,0Hz, CH hét.), 6,67 (lH,

ri O Ad large,, . d:, JA=9,0Hz, CH hét.), 6,42 (2H, s, 2'-H, 6 '-H ) ,

'Ab

5 4,74 et 1,98 (2H, large s, -NH2), 3,83 (9H, s, 3'-MeO,

4'-MeO, 5'-MeO), 3,13 (2H, m partiellement résolu, CH2), et 3,01 (2H, m partiellement résolu, CH2).

g ) N-[6-( 3,4 / 5-triméthoxyphénéthyl )imidazo[l,.2-b] pyrida-zine-2-yl]carbamate de méthyle 10 On chauffe à 100°C, tout en agitant pendant

4 heures, sous azote, 0,50 g (1,73 mmole) de 3-amino-6-(3,4,5-triméthoxyphénéthyl)pyridazine et 0,26 g (1,74 mmole) de N-chloracétylcarbamate de méthyle dans 15 ml d'hexaméthylphosphoramide anhydre (distillé sous vide sur 15 CaH2). On refroidit ensuite le mélange et on le verse dans 150 ml d'eau, sur quoi il se forme un précipité. Après repos pendant une nuit, on sépare le précipité par filtration et on le sèche sous vide pour obtenir 0,53 g d'un solide cristallin de couleur crème. On purifie davantage 20 celui-ci par chromatographie instantanée sur silice avec du dichlorométhane contenant 1 à 2 % de méthanol comme éluant, et cristallisation dans l'acétate d'éthyle, pour obtenir 0,18 g de cristaux d'un blanc cassé ; P.F. 175-176°C.

25 RMN cf (CDCl,;) : 10,17 (lH, large s, NH) , 8,18 (lH, large ri u s, 3-H hét.) ; 7,77 (1H, d, J =10Hz, CH hét.), 6,85 (1H,

Ad d, J =10Hz, CH hét.), 6,42 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 3,88

Ad

(3H, s, C02Me) et 3,82 (9H, s, 3-MeO, 4'-MeO, 5'-MeO), 3,12 (2H, m partiellement résolu, CH2 ) et 3,02 (2H, rri par-30 tiellement résolu, CH2).

Exemple 47

N- [6- ( 3 ,4, 5-triméthoxy-OC-styryl ) imidazo [ 1, 2-b ] pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle a ) 6- ( 3 ,4, 5-triméthoxy-Q<-styryl ) pyridazine-3 ( 2H ) -one 35 On chauffe au reflux, pendant 80 heures, 10,0 g

(34,4 mmoles) du composé de l'Exemple 46(b) et 10 g (90,1

46

10

15

mmoles) de bioxyde de sélénium dans 300 ml d'éthanol. On ajoute une autre charge de 10 g de bioxyde de sélénium et on poursuit le reflux pendant 40 heures de plus. On filtre ensuite le mélange réactionnel à travers Hyflo, on l'évaporé et l'on sèche le résidu sous vide pour obtenir 14,48 g d'un solide poisseux brun foncé. On chromatographie ensuite ce dernier sur silice en utilisant du dichlorométhane contenant 1 à 2 % de méthanol. En rassemblant les fractions appropriées, puis en cristallisant dans le méthanol, on obtient 5,57 g du produit sous forme d'un solide brun-sable ;• P.F. 194-196°C.

RMN (CDC13) : 11,95 (lH, large, NH), 7,66 (lH, d, Jab=10Hz, CH hét.), 7,10 (lH, d, Ja2b2=18Hz, CH), 7,01 (1H, d, JAlB1=10Hz, CH hét.), 6,92 (lH, d, Ja2b2=18Hz, CH), 6,74 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 3,91 (6H, s, 3'-MeO, 5'-MeO.) et 3,88 (3H, 4'-MeO).

b) 3-chloro-6-(3,4,5-triméthoxy-fl-styryl)pyridazine On chauffe à 100°C pendant 1,25 heure 5,3 g

(0,018 mole) de 6-(3,4,5-triméthoxy-K-styryl)pyridazine-3(2H)-one dans 150 ml d1oxychlorure de phosphore. On ajoute ensuite le mélange à 3 litres d'eau en une période de 2 heures, tout en maintenant la température dans l'intervalle de 10-30°C. On alcalinise ensuite avec précaution le mélange jusqu'à pH 10 avec 1,3 litre d'une solution d'hydroxyde de sodium 10N. Après repos pendant une nuit, on sépare le précipité par filtration et on le sèche sous vide pour obtenir 6,24 g du produit sous forme d'un solide brun-sable. Une portion recristallisée dans l'éthanol présente un P.F. de 162-163/5°C.

30 RMN <^H (CDC13) : 7,64 (lH, d, JAlBl=10Hz, CH hét.), 7,54

(1H, d, Ja2b2=18.Hz, CH), 7,48 (lH, d, JAlB1=10Hz, CH hét.), 7,27 (1H, d, JA2B2=18Hz, CH), 6,82 (2H, s, 2'-H, 6'-H), 3,92 (6H, s, 3'-Me0 et 5'-MeO) et 3,88 (3H, s, 4'-MeO).

c) 3-amino6-(triméthoxy-^-styryl)pyridazine

3^ On chauffe à 150°C pendant 100 heures, dans un autoclave en acier inoxydable, 5,5 g (17,1 mmoles) de

20

25

47

3-chloro-6- ( 3 / 4 / 5-triméthoxy-û(-styryl ) pyridazine dans 800 ml d'ammoniac méthanolique saturé, puis on laisse refroidir. Par élimination du solvant et chromatographie sur silice avec du dichlorométhane contenant 2 % de mé-5 thanol, on obtient 1/58 g du produit sous forme d'un solide brun clair ; P.F. 139-142°C.

RMN <fH (CDCl3) : 7/49 ( 1H / d, JAlBl=10Hz' CH ) ' 7 ' 24 (2H' 2 x d superposés/ jajbj/ JA2B2 = (lOHzx 2xCH)/ 6/75 (3H/ d superposé à s/ Ja2b2=10Hz, CH/ 2'-H, 6'-H), 4/85 (2H/ 10 large s, NH2)/ 3/92 (6H/ s, 3-MeO et 5-MeO) et 3/87 (3H/ S/ 4-MeO).

d) N-[6-(3/4/5-t-riméthoxy-fl-styryl)imidazo[l/2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On -chauffe à 100°C pendant 4 heures/ tout en 15 agitant/ 1/36 g (4/72 mmoles) de 3-amino-6-(3/4/5-

triméthoxy-^-styryl)pyridazine et 0/68 g (4/49 mmoles) de N-chloracétylcarbamate de méthyle dans 30 ml d'hexa-méthylphosphoramide (distillé sous vide sur CaH2). On refroidit ensuite le mélange et on le verse dans 40 ml 20 d'eau. On sépare par filtration le précipité qui s'est formé et on le sèche sous vide pour obtenir 1/0 g d'un solide brun-jaune. On chromatographie celui-ci sur silice pour obtenir 0,4 g du produit sous forme d'un solide jaune pâle ; P.F. 217-219°C.

25 RMN 5„ (DMSO-d,) : 10/49 (lH/ large s, NH)/ 7/99 (1H,

ri D

S/ 3-H hét.), 7/94 (2H, d, JAlBl=10Hz, CH hét.), 7,60 (2H, d, JA2B2=18HZ/ CH)/ 7/58 (2H/ d, JAlB1=10Hz, CH hét.), 7,28 (2H, d, JA2B2=18Hz, CH), 7,04 {2E, s, 2'-H, 6'-H)/ 3/87 (6H/ s, 3'-MeO et 5'-MeO), [3,72 '(3H/ s) et 30 3,70 (2H, s)3 (C02Me et 4'-MeO).

Exemple 48

N-[6-(3,4/5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l/2-b]pyridazine-2-yl3carbamate de méthyle

On chauffe au reflux/ pendant 24 heures/ 1,0 g 35 (2/6 mmoles) d'azoture d'acide 6-(3/4,5-triméthoxybenzyl-oxy)imidazo[1/2-b]pyridazine-2-carboxylique (Exemple 23(c))

4B

dans 20 ml de toluène et environ 1,5 ml de méthanol. On refroidit le mélange et l'évaporé sous vide pour obtenir un solide jaune que l'on recristallise dans DMF et de l'eau pour obtenir 1,05 g du composé du titre ; P.F. 5 213-215°C et spectre RMN identique à celui du produit de l'Exemple 1.

Exemple 49

N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]pyridazine-

2-yl]carbamate de méthyle

10 a) Trifluoracétate de 2-amino-6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy imidazo [1,2-b]pyridazine

On dissout 0,43 g (1 mmole) de N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de tert.-butyle (Exemple 13) dans 2 ml de d^chloro-15 méthane, et l'on traite par 1 ml d'acide trifluoracétique. Au bout de 2 heures à la température ambiante, on évapore le mélange sous vide pour obtenir une huile brune que l'on triture avec de l'éther de diéthyle pour obtenir 0,25 g du composé du titre sous forme d'un solide de couleur 20 crème ; P.F. 150-157°C.

RMN ^ (DMSO) 8,0 (lH, JAB=8,8Hz, 8-H), 7,48 (lH, s,

3-H), 7,16 (1H, JAB=8,8Hz, 7-H), 6,44 (2H, s, CH2), 4,5 (large s, NH^), 3,89 (6H, s, OMe) et 3,75 (3H, s, OMe). b) N-[6-(3,4-,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[l,2-b]-

25 pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

On met en suspension 1,0 g (3,03 mmoles) du produit de l'étape (a) dans du dichlorométhane et l'on secoue avec une solution diluée d'hydroxyde de sodium. On déshydrate la phase organique sur Na2S0^ et l'évaporé pour 30 obtenir une huile brune que l'on dissout dans du dichlorométhane et qu'on traite, sous agitation, avec 0,42 ml (3,03 mmoles) de triéthylamine, 0,23 ml (3,03 mmoles) de chloroformiate de méthyle et 18 mg (0,3 mmole) de 4-diméthylaminopyridine. On agite le mélange à la tempéra-35 ture ambiante pendant 17 heures, puis on le chauffe au reflux pendant 2 heures et l'évaporé sous vide. On par

49

10

tage le solide résultant entre du chloroforme et de l'eau et l'on sépare la phase organique/ la déshydrate sur Na2SO^ et l'évaporé pour obtenir un solide que l'on chromatographie sur Si02 en éluant avec du chloroforme contenant 2 % de méthanol. On recristallise le produit dans un mélange DMF-^O pour obtenir 0/27 g du composé du titre ; P.F. 210-212°C/ spectre RMN identique à celui du produit de l'Exemple 1.

Exemples 50 à 52

On prépare les composés suivants en suivant un mode opératoire analogue à celui décrit dans les Exemples 1 à 3.

Exemple 50

N-[6-(2/5-diméthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle

P.F. 208-209°C ; RMN 6„ (DMSO-d,) : 10,05 (lH, large s,

ri b

NH), 7,95 (1H, J =8/8Hz, 8-H), 7,85 (lH, s, 3-H), 7,35

Ab

(1H, s, 6 ' —H ) ,- 7,20 (2H, J =8,8Hz, 7-H + d, 3'- ou 4'-H),

Ad

6,90 (1H, d, 3'- ou 4'-H), 5,90 (2H, s, CH2), 3,80 (3H, s, 20 OMe), 2,4 (3H, s, Me), 2,35 (3H, s, Me).

(A partir du Composé Intermédiaire 24).

Exemple 51

N-[6-(2-pyridylméthoxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]-carbamate de méthyle 25 P.F. 231-233°C (déc.) ; RMN (DMSO-dc) : 9,95 (lH, large ri b s, NH), 8,55 (1H, d, 6'~H), 7,85 (3H, m, 8-H + 3-H + 5'—H), 7,55 (1H, d, 31—H), 7,35 (lH, m, 4'-H), 6,90 (lH, J =

Ad

8,8Hz, 7-H), 5,45 (2H, s, CH2), 3,70 (3H, s, OMe).

(A partir du Composé Intermédiaire 31).

30 Exemple 52

N-[6-(2-furfuryloxy)imidazo[l,2-b]pyridazine-2-yl]-carbamate de méthyle

P.F. 220-224°C ; RMN (DMSO-dg) : 10,05 (lH, large s, NH), 7,95 (1H, s, 3-H), 7,90 (lH, J =8,8Hz, 8-H), 7,75

Ad

35 (ih, large, 5'-H), 6,90 (1h, j =8,8Hz, 7-h), 6,75 (lh,

Ad d, 4'-H), 6,55 (lH, large s, 3'-H), 5,45 (2H, s, CH2),3,80 (3H, s, OMe), (A partir du Composé Intermédiaire 32).

50

Résultats d'Essais Biologiques

A) Etude sur la polymérisation de la tubuline

MATIERES ET METHODES

1. Préparation de tubuline a) Cervelle de cheval fraîche b) Tampons :

BBG BB BB2G

MES*/NaOH lOOmM Comme BBG, Comme BBG/

EGTA* 2mM mais sans mais avec

MgSO^ ImM glycérol glycérol 8M

Glycérol 4M et GTP* ImM

Dithioérythritol 2mM pH 6,9 à 23°C

* MES = acide 2-(N-morpholino)éthanesulfonique EGTA = acide éthylène-glycol-bis(éther de ^-amino-ét.hyle ) -N / N / N ' / N ' -tétraacétique GTP = guanosine-triphosphate On exécute toutes les manipulations à 4°C/ sauf indication contraire. On lave la cervelle de cheval dans du tampon BBG refroidi à la glace et l'on retire les méninges et vaisseaux sanguins superficiels. Après pesée/ on hache les substances corticales cérébrales/ les homogénéise dans 75 ml de tampon BBG/100 g de cervelle/ les centrifuge à 6500 £ pendant 15 minutes et/ après avoir retiré le surnageant/ .on les centrifuge de nouveau à 100 000 ç[ pendant 75 minutes. On mesure le volume V (ml) du surnageant et l'on ajoute V/10 ml de GTP (sel de Li) 10 mM dans H2O. On fait incuber le mélange dans les tube de centrifugation bouchés pendant 30 minutes à 34°C dans un bain d'eau à secousses pour polymériser la tubuline. Après polymérisation/ on équilibre les tubes et on les centrifuge à 100 000 cf. "pendant 1 heure à 27°C dans un rotor préalablement chauffé. On remet en suspension le culot de centrifugation rapide dans V/4 ml de tampon BB et l'on agite la préparation sur de la glace pendant 30 minutes et la centrifuge à 100 000 £ pendant 1 heure

51

4°C pour enlever les microtubules stables au froid. On ajoute un volume égal de tampon BB2G au surnageant que l'on congèle rapidement par échantillons de 5 ml dans des capsules à pesée mises à flotter sur une bouillie de glace 5 carbonique/éthanol/ et conserve pendant une nuit à -80°C. Au bout d'environ 18 heures/ on dégèle les échantillons congelés de tubuline/ on ajoute du GTP 10 mM dans H^O pour obtenir une concentration finale ImM, et l'on mesure le nouveau volume W (ml). On répète le cycle de polymérisa-10 tion/dépolymérisation exactement comme ci-dessus/ mais en remplaçant V par W/ pour obtenir de la tubuline ayant subi deux cycles.

2..Dosage turbidimétrique de la polymérisation de la tubuline

15 Appareil : spectrophotomètre enregistreur muni d'une position 6 ; porte-cuvette thermostaté ; déviation à pleine échelle = 0/2 unité d'absorbance.

Dans une cuvette de spectrophotomètre de 1 ml, on mé-20 lange 100 jul de GTP (sel de Li) 10 mM préparé dans du tampon BB/ 10 yul de Ë^O ou DMSO - selon le solvant choisi pour le médicament - du tampon BB et de la préparation de tubuline de telle façon que l'accroissement final de A_c_

y ^ 350 nm soit de 0,15 unité après 16 minutes (approximativement 25 100 jUl de préparation de tubuline, soit 2/5 g de protéine) en un volume final de 1 ml à 37°C. Tous les réactifs sont conservés sur de la glace.

On amorce la polymérisation en élevant la température à 37°C. et l'on enregistre l'accroissement de A^q nm pour 30 des échantillons en triple par rapport à une cuvette de référence. L'échantillon de référence comprend un mélange d'incubation similaire/ mais soit dépourvu de tubuline/

2+

soit avec l'addition de Ca ImM. On calcule l'accroissement par rapport à la A^q nm initiale 10 minutes après 35 l'achèvement de la phase de latence (la polymérisation témoin est complète à 80 % dans ce laps de temps)/ et

52

10

15

20

25

30

on l'exprime en pourcentage de la valeur témoin, et ce pour une gamme de concentrations du médicament. On détermine la concentration de médicament requise pour obtenir une variation de 50 % (CI^q) par rapport à la valeur témoin.

Résultats

Composé de l'Exemple N'

1

2

3

4

5

7

8

9

11

12

Tableau 1

CI,-q (pM) de la polymérisation totale de la tubuline

0,42

0 ,14

0,41

0,37

0,49

0,52

0,23

0,89

4, 24

1,21

35

B) Epreuve par formation de colonies de P388D^

Méthode

Dans cette épreuve, des cellules provenant d'une lignée adaptée à la culture "in vitro" de néoplasme lymphoïde de souris, P388, sont tout d'abord exposées à des concentrations résultant de dilutions successives du composé d'essai durant une période de 24 heures en culture. Ensuite, on détermine l'aptitude de cellules ainsi traitées à former des colonies discrètes en une période de 14 jours après remise en suspension dans un milieu semi-solide exempt de médicament.

Tout d'abord, on dépose des cellules en phase de croissance exponentielle dans différentes fioles pour

3

culture tissulaire de 25 cm contenant chacune un volume final de 5 ml de milieu de culture RPMI 1640 tamponné de Hepes complété par 10 pour cent de sérum foetal de veau, des antibiotiques et le composé d'essai. Tous les

53

composés sont initialement formulés en concentrations appropriées dans DMSO/ dont.on ajoute ensuite 25 microlitres dans chaque fiole. Tous les composés sont évalués à des concentrations s'échelonnant en série par décréments de quatre fois à partir d'une concentration maximale sensiblement quatre fois plus grande que celle déjà connue pour inhiber à un taux d'environ 80 à 90 pour cent la prolifération de ces cellules dans une épreuve préliminaire de prolifération.

Après 24 heures d'exposition au composé d'essai on compte les cellules et on transfère un nombre connu de cellules vivantes dans un tube de centrifugeuse de 15 ml dans lequel on ajoute ensuite 4 ml d'une solution d'aga-rose à 0/25 pour cent/ à basse température de gélification dans du milieu de culture RPMI complet. Après 13 jours d'incubation à 37°C/ on ajoute 1 ml de violet de p-iodo-nitrotétrazolium à 1 % sur le dessus de chaque tube et on le laisse s'infiltrer à travers l'agarose pendant 24 à 48 heures de plus. Les cellules vivantes métabolisent ce colorant en produisant un produit cristallin rouge insoluble qui facilite le comptage des colonies. On prélève des échantillons dans chaque tube et l'on détermine le nombre de colonies contenant un minimum de 50 cellules. On détermine la concentration du composé qui est nécessaire pour inhiber la formation de colonies de 50 pour cent par rapport à des cellules témoins mises à incuber dans des conditions identiques, mais en l'absence du composé d'essai.

54

10

35

Résultats

Tableau 2

Epreuve par formation de colonies de P388 Composé de l'Exemple N° CI^q(M)

1

1,32

x co 1

o

1—1

2

5,16

X

o

1—1

1

o

1—1

3

2,15

X

10 9

4

5,12

X

10"9

5

1,26

X

00 1

o

1—1

7

6/34

X

10~9

8

2/93

X

10~9

11

4/10

X

10"8

C. Essai sur la leucémie lymphocytaire P388/0 15 Méthode

Dans cet essai/ on utilise des souris CD2-F^/ de même sexe, pesant environ 20 grammes avec une tolérance de 3 grammes- On.injecte par voie intrapéritonéale à des animaux témoins et des animaux d'essai/ au jour 0/ une 20 suspension de 10^ cellules de tumeur P388/0. Dans chaque essai/ on évalue plusieurs niveaux de dose qui encadrent la DL2q du composé ; le groupe correspondant à chaque niveau de dose contient 6 animaux. Les composés d'essai sont préparés soit dans du sérum physiologique contenant 25 0/05 %- de Tween 80/ soit dans de l'eau distillée contenant 5 % de dextrose/ et on les administre par voie intrapéritonéale aux jours 1/ 5 et 9 à compter de l'implantation des tumeurs. Les doses sont exprimées en mg/kg selon le poids corporel des animaux individuels. On prend note 30 du jour de la mort de chaque animal et l'on détermine le jour moyen de mort pour chaque groupe. La différence entre les durées médianes de survie pour les groupes traités et témoins est exprimée en pourcentage d'accroissement de la durée de vie (ADV %).

A

55

Résultats

10

15

20

25

30

35

Tableau 3

Essai sur la leucémie lymphocytaire P388/0

Survivants au jour 30

6/6

Composé de 1'Exemple Nc dose (mg/kq)

ADV !

1

10

300

2

7/3

31

3

50

136

4

20

44

5

150

61

7

5

111

8

10

44

9

200

180

11 ,

675

155

12

675

170

26

300

263

32

33

D. DLon

750 200

(souris)

280 240

Survivants au jour 60

2/6

1/6

0/6

1/6

3/6 (jour 51)

Méthode

On prépare les composés d'essai comme décrit pour l'essai (C) sur la leucémie lymphocytaire P388/0/ et on les administre par voie intrapéritonéale à divers niveaux de dose, à des groupes de 6 souris CD2-F^/ du même sexe, pesant 20+3 g/ aux jours 1/ 5 et 9. On observe les souris pendant une période s'étendant jusqu'à 14 jours à compter du jour 1/ et l'on prend note du nombre de morts dans chaque groupe et l'on détermine la DI^q-Résultats

Tableau 4

Composé de l'Exemple N'

1

2

3

4

5 7

^20-

(mg/kg)

20-30 5

200 20 140 15

56

8

15

9

450

11

?450

12

> 450

26

450

31

165

32

>450

E- Activité contre des tumeurs résistantes à des médicaments

En suivant un mode opératoire similaire à celui de l'essai sur la leucémie lymphocytaire P388/0, on évalue le composé de l'Exemple 1 contre des tumeurs P388/0 ayant été rendues résistantes aux agents antitumoraux d'usage clinique usuels suivants :

bis-chloronitroso-urée (BDNÛ)

cyclophosphamide (CPA)

adriamycine (ADR)

actinomycine D (ActD)

méthotrexate (MTX)

5-fluorouracile (5FU)

cis-platine (Cis-Pt)

vincristine (VCR)

Amsacrine (AMSA)

Résultats

Tableau 5

Activité "in vivo" du composé de l'Exemple 1 contre des tumeurs résistantes à des médicaments

Tumeur/Résistance Composé Dose optimale ADV % Survivants

(mg/kg)

au jour 60

P388/BCNU

Ex. 1

7,5

+131

0/6

BCNU

2,0

+36

0/6

P388/Cis-Pt

Ex. 1

10,0

+50

1/6

Cis-Pt

5,3

+21

0/6

P388/AMSA

Ex. 1

5,0

+134

4/6

(jour 31)

P388/ADR

Ex. 1

10,0

+90

0/6

ADR

4,5

+27

0/6

57

10

P388/MTX

Ex. 1

7,5

+100

1/6

MTX

3,0

+15

0/6

P388/ActD

Ex. 1

12,5

+109

1/6

ActD

0,5

+27

'0/6

P388/CPA ■

Ex. 1

12,5

+150

1/6

CPA

265,0

+55

0/6

P388/VCR

Ex. 1

12,5

+145

3/6

VCR

1,5

+36

0/6

P388/5FU

Ex. 1

10,0

+92

0/6

5FU

20,0

+71

0/6

15

20

25

30

35

F. Activité "in vitro" contre des lignées de cellules tumorales humaines Méthode

Des cellules provenant de lignées de cellules tumorales humaines DLD-1, HCT-116, WiDr et A549 sont exposées à des concentrations obtenues par dilutions successives des composés d'essai durant une période de 96 heures en culture. On évalue l'aptitude de ces cellules à proliférer durant la période d'essai.

On dépose des cellules en phase de croissance exponentielle dans des plaques de culture tissulaire à 96 alvéoles, contenant 100 ^ul/alvéole de milieu de culture RPMI 1640 complété par 10 % de sérum foetal de veau, des antibiotiques et le composé d'essai. Tous les composés sont initialement formulés aux concentrations appropriées dans DMSO ; les concentrations finales dans ce solvant étant de -vingt fois celle qui est requise dans la plaque. On procède ensuite à une dilution finale de 1 volume dans 10 volumes de milieu complet avant d'introduire 100 jdl dans chaque alvéole de la plaque. Tous les composés sont évalués à des concentrations s'échelonnant en série par décréments de quatre fois à partir d'une concentration maximale sensiblement quatre fois plus grande que celle déjà connue pour inhiber la prolifération à un taux d'en-

58

viron 80 à 90 % la prolifération de cellules provenant de néoplasme lymphoïde de souris, P388D1, dans une épreuve préliminaire de prolifération.

Au bout de 96 heures, on compare la proliféra-5 tion des cellules exposées au composé d'essai à celle de cellules témoins non traitées, en pro.cédant par l'une des deux méthodes suivantes :

a) On aspire les surnageants de culture et l'on fixe et colore les cellules en ajoutant 100 pl/alvéole

10 d'une solution de bleu de méthylène (5 g par litre d'étha-nol-eau à 50 %). Après 30 minutes à la température ambiante, on élimine par lavage le colorant non lié en plongeant les plaques dans l'eau. On solubilise pendant une nuit les cellules colorées, en utilisant 100 pl/alvéole 15 de Sarkosyl (Sigma) à 1 % dans une solution saline tamponnée au phosphate. On mesure les absorbances au moyen d'un spectrophotomètre pour plaques de dosage ELISA à une longueur d'onde de 620 nm. La CI^q est définie comme la concentration de médicament qui abaisse l'absorbance 20 à 50 % de celle trouvée sur les cultures témoins (sans médicament). On emploie cette méthode pour la lignée cellulaire de DLD-1.

b) On introduit dans chaque alvéole 20 jul de M.TT à 5 mg/ml dans PBS. Après une période d'incubation de

25 4 heures, on aspire le milieu de chaque alvéole et on le remplace par 200 yul de DMSO pour dissoudre les cristaux de formazan qui se sont formés. On mesure les absorbances au moyen d'un spectrophotomètre pour plaques de dosage ELISA à une longueur d'onde de 540 nm. La CI^Q est défi-30 nie comme la concentration de médicament qui abaisse l'absorbance à 50 % de celle trouvée sur les cultures témoins (sans- médicament). On emploie cette méthode pour les lignées cellulaires de WiDr, HCT-116 et A549.

59

Tableau 6

Activité

"in vitro"

contre des

1 ignées de cellu

tumorales humaines

Composé de l'Exemple N°

DLD-l(a)

WiDr^

CI50

HCT-116(b^

x 103) A549(b)

1

11/60

30,00

9,20

23,97

2

2,90

4,57

2,80

3,42

3

1,35

0,92

1,91

1,92

4

6,63

10,98

5,45

20,81

5

7,34

3,65

3,30

4,36

7

5,92

19,70

8,25

22,40

8

8,82

41,00

20,52

38,96

10

G. Activité "in vivo" du composé de l'Exemple 1 contre des tumeurs murines

15 En suivant un mode opératoire similaire à celui de l'essai sur la leucémie lymphocytaire P388/0/ on met à

l'essai le composé de l'Exemple 1 contre les tumeurs murines B16/ L1210 et M5076. On implante par voie intra-

6

péritonéale une suspension de 10 cellules tumorales dans 20 des animaux expérimentaux,.. auujour""zéro. On administre les cellules de tumeur Blô'.par..vo.ie -intrapéritonéale sous forme d'un broyât de cellules à 1:10 au jour zéro. On administre le composé d'essai par voie intrapéritonéale aux jours 1, 5 et 9. Pour les essais sur B16 et M5076, il 25 y a 10 souris par groupe traité/ et pour les -essais sur L1210/ il y a 6 souris par groupe traité. On prend note du jour de la mort de chaque animal et l'on calcule le ADV % (pourcentage d'accroissement de la durée de vie). Les résultats sont donnés sur le Tableau 7.

no

60

Tableau 7

Activité "in vivo" contre des tumeurs murines

Tumeur

Dose (mg/kg)

5 10 5

ADV % moyen (± E.S.M.)

Nombre d'expériences

M5076

28

134 (±72) 69 (±4)

1

L1210

2

B16

3

Exemples de Formulations

A. Comprimé

Composé de formule I (forme chlorhydrate) Amidon de maïs prégélatinisé Amidon-glycolate de sodium Stéarate de magnésium

100/0 mg 60/0 mg 20/0 mg 4 / 0 mg

On broie finement le composé de formule (I) et le mélange intimement avec les excipients en poudre/ c'est-à-dire l'amidon de maïs prégélatinisé et 1'amidon-glycolate de sodium. On humecte les poudres avec de l'eau purifiée pour former des granulés. On sèche les granulés et les mélange avec le stéarate de magnésium. On comprime ensuite la composition pour en faire des comprimés pesant chacun environ 184 mg.

B. Comprimé

Composé de formule (I) 100/00 mg

Amidon-glycolate de sodium , 20/0 mg

Lactose 83/8 mg

Stéarate de magnésium 4/2 mg

Polyvinylpyrrolidone 14/0 mg

On broie finement le composé de formule (I) et le mélange intimement avec les excipients en poudre/ c'est-à-dire 11amidon-glycolate de sodium et le lactose. On humecte les poudres avec une solution de polyvinylpyrrolidone dissoute dans de l'eau purifiée et de l'alcool dénaturé pour former des granulés. On sèche les granulés et les mélange avec le stéarate de magnésium. On comprime ensuite la composition pour en faire des com-

61

15

primés pesant chacun environ 122 mg.

C. Capsules

Composé de formule (i) 100/0 mg

Amidon de maïs 50/0 mg

5 Stéarate de magnésium 3/0 mg

On mélange le composé de formule (I) finement divisé avec l'amidon de maïs. On mélange la poudre séchée avec le stéarate de magnésium et on en remplit des capsules de gélatine à enveloppe dure.

20 D• Suspension

Composé de formule (I) 100/0 mg;

Cellulose dispersible 100/0 mg

Glycérine 500/0 mg

Saccharos-e 3500/0 mg

Aromatisant q.s.

Colorant q.s,.

Conservateur 0/1 %

Eau purifiée q.s. pour 5/0 ml

On met en suspension le composé de formule (I) dans la glycérine et une portion de l'eau purifiée. On dissout le saccharose et le conservateur dans une autre portion d'eau purifiée chaude/ puis l'on ajoute et dissout le colorant/ et ensuite la cellulose dispersible. On mélange les deux préparations et on les refroidit avant 25 d'ajouter l'aromatisant. On ajoute de l'eau purifiée jusqu'au volume final. On mélange bien la suspension résultante.

E. Préparation pour injection intraveineuse

Composé de formule (I) 5/0 mg

3Q Acide chlorhydrique selon les besoins pour l'ajustement du pH

Eau pour injections q.s. pour 1/0 ml

On ajoute le composé de formule (I) à une portion de l'eau pour injections. On ajuste le pH avec de 25 l'acide chlorhydrique pour dissoudre le composé. On ajoute de l'eau pour injections jusqu'à volume final et la dis20

62

solution est complète après un bon mélange. On stérilise la solution par filtration à travers un filtre à membrane de 0,22 micromètre et on en remplit aseptiquement des ampoules ou des flacons stériles de 10 ml.

63

Claims (11)

1. REVENDICATIONS 1. Procédé pour préparer un composé de formule générale (I) :

   R Y — X

   (I)

   dans laquelle :

   10 R"*" représente un groupe aryle carbocyclique fa cultativement substitué contenant 6 ou 10 chaînons cycliques et contenant au moins un noyau aromatique, un groupe aryle hétérocyclique facultativement substitué contenant 5 à 10 chaînons cycliques, ou un groupe alkyle en C2~cio' 15 alcényle en C2~cio' cycloalkyle en C3-Cj_0 ou cycloalcényle ■en C3~C2_o facultativement substitué :

   R2 représente un groupe alkyle en Cj_~C10'

   alcényle en C2~C10' alcYnyle en C2_C10' cYcl°alkyle en C3_C10 ou cycl°alc®nyle en ^3~^io facultativement substi-20 tué, un groupe aryle carbocyclique facultativement substitué contenant 6 ou 10 chaînons cycliques et contenant au

   moins un noyau aromatique, un groupe hétérocyclique facultativement substitué contenant 5 à 10 chaînons cycliques, ou un groupe aryl(alkyle en C^-C^) f cicultativement substi-25 tué dont la portion aryle est un groupe aryle- carbocyclique ou hétérocyclique tel que défini ci-dessus ;

   3

   R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en : et,

   soit

   30 X représente un atome d'oxygène ou de soufre, un

   4 4

   groupe -CH2~ ou un groupe NR où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en C^-C^ ; et

   Y représente un groupe -CH2- ou -CH2CH2-,

   soit

   35 X-Y représentent ensemble le groupe -CH=CH- ;

   et ses sels et dérivés physiologiquement fonctionnels,

   64

   caractérisé en ce qu'il comprend :

   (A) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (II) :

   ^ — y —x •

   NH,

   (II)

   (dans laquelle R , X et Y sont tels que définis pour la formule (l)) avec un composé de formule générale (III)

   „3

   zch2conco2r

   (III)

   2 3

   (dans laquelle-R et R sont tels que définis pour la formule (I) et Z représente un atome d'halogène) ;

   (B) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (IV) :

   (IV)

   2 3

   (dans laquelle R et R sont tels que définiç pour la formule (I) et Z représente un groupe partant) avec un composé de formule générale (V) :

   r1ch2x1h

   (v)

   (dans laquelle R est'tel que défini pour la formule (I) et X^ représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un

   4

   groupe NR tel que défini pour la formule (I)) ;

   (C) la réaction d'un composé de formule (VI) :

   -n.

   (VI)

   ^ n.

   65

   avec un alcool approprié R OH ; ou

   (D) la réaction d'un composé de formule (VII) :

   (VII)

   10

   15

   avec un réactif servant à introduire le groupe -C^R ; et/ facultativement/

   (E) la conversion d'un composé de formule (I) en un autre composé de formule (I)/ suivie/ si nécessaire et/ou approprié/ d'une salification.
2. 2. Procédé pour préparer un composé de formule

   (IA) :

   N-CO;

   i

   (IA)

   20

   25

   30

   35

   dans laquelle :

   R"*" représente un groupe aryle carbocyclique facultativement substitué contenant 6 ou 10 chaînons cycliques, un groupe aryle hétérocyclique facultativement substitué dont le noyau contient 5 à 7 atomes dont l'un au moins est un .hétéroatome/ le noyau hétérocyclique étant facultativement condensé. à..un noyau phénylique, ou un groupe alkyle en C]_-C2o/ alcényle en C2~C]_o' cYcloalkYle en C3 C10 titué ;

   ou cycloalcényle en ^acultativement subs-

   R

   représente un groupe alkyle en C2-C10' alc®~ nyle en C2~cio' alcYnYle en C2-C10 OU cYcl°alkyle en C3-C10 facultativement substitué/ un groupe aryle carbocyclique contenant 6 ou 10 chaînons cycliques, un groupe aryle hétérocyclique facultativement substitué dont le noyau contient 5 à 7 atomes dont l'un au moins est un hétéroatome, le noyau hétérocyclique étant facultativement

   A

   66

   10

   condensé à un noyau phénylique, ou un groupe aralkyle ;

   3

   R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en ' et soit

   X représente un atome d'oxygène ou de soufre,

   4 4

   un groupe -CE^- ou un groupe NR où R représente un atome d'hydrogène ou un groupe alkyle en ; et

   Y représente le groupe soit

   X-Y représentent ensemble le groupe -CH=CH- ; et ses sels, caractérisé en ce qu'il comprend

   (A) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (II) :

   15

   ^— y —y.

   nh,

   (II)

   20

   (dans laquelle R , X et Y sont tels que définis pour la formule (IA)) avec un composé de formule générale (III)

   R"

   zch2conco2r

   (III)

   25

   30

   2 3

   (dans laquelle R et R sont tels que définis pour la formule (IA) et Z représente un atome d'halogène) ;

   (B) la réaction d'un dérivé de pyridazine de formule générale (IV) :•

   nco2 r

   (IV)

   35

   2 3

   (dans laquelle R et R sont tels que définis pour la formule (IA) et Z?" représente un atome d'halogène) avec un n

   U*

   67

   35

   composé de formule générale (V) :

   R1CH„X1H (V)

   1

   (dans laquelle R est tel que défini pour la formule (IA) et représente un atome d'oxygène ou de soufre ou un groupe NR^ tel que défini pour la formule (IA)) ; ou (C) la réaction d'un composé de formule (VI) :

   R1 y-—x—L .. // <VI>

   10

   2

   avec un alcool approprié R OH : et/ facultativement/

   (D) la conversion d'un composé de formule (I) en un autre composé de formule (I)/ suivie/ si nécessaire 15 et/ou approprié/ d'une salification.
3. 3. Procédé selon la revendication 1/ caractérisé en ce que dans le composé de formule (I)/ R"1" représente un groupe phényle ou naphtyle facultativement substitué,

   un groupe aryle hétérocyclique penta- ou hexagonal facul-

   20 tativement substitué contenant 1 à 4 hétéroatomes choisis parmi l'azote/ l'oxygène et le soufre/ ou un groupe alkyle en C0-C,.

   3 6
4. 4. Procédé selon la revendication 1 ou 3/ carac-

   2

   térisé en ce que/ dans le composé de formule (I)/ R re-25 présente un groupe phényle ou un groupe alkyle en c-j_-C4 facultativement substitué.
5. 5. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1/ 3 et 4/ caractérisé en ce que; dans le composé de formu 30 méthyle.

   3

   de formule (I)/ R représente l'hydrogène ou le groupe
6. 6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1/ 3/ 4 et 5/ caractérisé en ce que/ dans le composé de formule (I)/ Y représente -CH^-/ X représente un atome d'oxygène ou de soufre ou -CH^-/ ou bien Y-X représentent ensemble -CH=CH-.
7. 7. Procédé selon la revendication 1/ caractérisé

   68

   10

   15

   20

   25

   30

   en ce que le composé préparé est choisi parmi les suivants : N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(3,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(1-naphtylméthyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]-carbamate de méthyle,

   N-[6-(3-méthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-y1]-carbamate de méthyle,

   N-[6—(. 2,3-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(2,5-diméthylbenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(2,5-diméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle,

   N- [6-( 3 ,4, 5-triméthoxybenzyloxy ) imidazo [ 1., 2-b]pyridazine-2-yl]carbamate d'éthyle,

   N-méthyl-N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine-2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(2-bromo-3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]-pyridazine—2-yl]carbamate de méthyle,

   N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de n-propyle,

   N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate de n-butyle,

   N-[6-(3,4,5-triméthoxybenzyloxy)imidazo[1,2-b]pyridazine-2-yl]carbamate dè 2-méthoxyéthyle,

   N-[6-(3,5-diméthoxy-4-éthoxybenzyloxy)imidazo [1,2-bJ-

   pyridazine-2-yl] carbamate de méthyle,

   et leurs dérivés physiologiquement fonctionnels.

   ce qu'elle comprend un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication l,ou un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel d'un tel composé, en association avec un support ou véhicule pharmaceutiquement acceptable pour ce composé, sel ou dérivé.
8. 8. Formulation pharmaceutique, caractérisée en

   69

   10

   15

   20
9. 9. Procédé pour préparer une formulation pharmaceutique telle que définie dans la revendication 8/ caractérisé en ce qu'il comprend la mise en association d'un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication 1, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel d'un tel composé, avec un support ou véhicule pharmaceutiquement acceptable pour ce composé, sel ou dérivé.
10. 10. Utilisation, comme agent antitumoral, d'un composé de formule (I)'tel que défini dans la revendication 1, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel d'un tel composé.
11. 11. Utilisation d'un composé de formule (I) tel que défini dans la revendication 1, ou d'un sel pharmaceutiquement acceptable ou dérivé physiologiquement fonctionnel d'un tel composé, pour la fabrication d'un médicament destiné au traitement de tumeurs.

    12. Nouveaux composés intermédiaires de formules (II), (III), (IV), (V), (VI) et (VII) telles que définies dans la revendication 1, et de formules (VIII), (IX), (X) et (XI) :

    nh,

    (viii)

    25

    n=n'

    30

    r -ch=ch.

    kN/NH

    O

    (IX)

    35

    r1_hc=ch

    (X)

    70

    3

    T

    ZCH CONH (XI)

    11 3

    dans lesquelles Z, Z / R et R sont tels que définis dans la revendication 1.

    1f)

    u