MD3600364T2 - Compoziții care conţin tulpină bacteriană din genul Megasphaera și utilizări ale acestora - Google Patents

Compoziții care conţin tulpină bacteriană din genul Megasphaera și utilizări ale acestora Download PDF

Info

Publication number
MD3600364T2
MD3600364T2 MDE20200145T MDE20200145T MD3600364T2 MD 3600364 T2 MD3600364 T2 MD 3600364T2 MD E20200145 T MDE20200145 T MD E20200145T MD E20200145 T MDE20200145 T MD E20200145T MD 3600364 T2 MD3600364 T2 MD 3600364T2
Authority
MD
Moldova
Prior art keywords
compositions
composition
disease
certain embodiments
bacterial strain
Prior art date
Application number
MDE20200145T
Other languages
English (en)
Inventor
Imke Elisabeth MULDER
Samantha Yuille
Anna Ettorre
Suaad Ahmed
Parthena Fotiadou
Joseph Roby Iringan Urcia
Helene Savignac
Original Assignee
4D Pharma Res Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1709468.1A external-priority patent/GB201709468D0/en
Priority claimed from GBGB1709534.0A external-priority patent/GB201709534D0/en
Priority claimed from GBGB1712851.3A external-priority patent/GB201712851D0/en
Priority claimed from GBGB1803826.5A external-priority patent/GB201803826D0/en
Priority claimed from GBGB1805991.5A external-priority patent/GB201805991D0/en
Priority claimed from GBGB1805990.7A external-priority patent/GB201805990D0/en
Priority claimed from GBGB1805989.9A external-priority patent/GB201805989D0/en
Priority claimed from GBGB1806780.1A external-priority patent/GB201806780D0/en
Priority claimed from GBGB1806779.3A external-priority patent/GB201806779D0/en
Application filed by 4D Pharma Res Ltd filed Critical 4D Pharma Res Ltd
Publication of MD3600364T2 publication Critical patent/MD3600364T2/ro

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0031—Rectum, anus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0043—Nose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/006—Oral mucosa, e.g. mucoadhesive forms, sublingual droplets; Buccal patches or films; Buccal sprays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Invenţia furnizează compoziţii cuprinzȃnd tulpini bacteriene pentru tratatrea şi prevenirea bolilor neurodegenerative.

Description

DOMENIUL TEHNIC
Această invenţie este în domeniul compoziţiilor cuprinzând tulpini bacteriene izolate din tractul digestiv de mamifer şi utilizarea de astfel de compoziţii în tratamentul bolilor.
FUNDAL INVENŢIEI
Se crede că intestinul uman este steril în utero, dar este expus la o largă varietate de microbi maternali şi din mediu imediat după naştere. Apoi, are loc o perioadă dinamică de colonizare microbiană şi succesiune, care este influenţată de factori cum ar fi modul de livrare, mediul, dieta şi genotipul gazdei, care toate impactează compoziţia mocrobiotei intestinale, în special în primii ani de viaţă. Ulterior, microbiota se stabilizează şi devine asemănătoare cu cea a unui adult [1]. Microbiota intestinului uman conţine mai mult de 500-1000 de filotipuri diferite aparţinând în mod esenţial la două divizii bacteriene majore, Bacteroidete şi Firmicute [2]. Relaţiile simbiotice de succes care apar din colonizarea bacteriană a intestinului uman au dat o largă varietate de funcţii metabolice, structurale, protectoare şi alte funcţii benefice. Sporirea activităţii metabolice a intestinului colonizat asigură că, componente alimentare altfel indigerabile sunt degradate cu eliberarea produselor secundare furnizȃnd o sursă de nutriţie importantă pentru gazdă. În mod similar, importanţa imunologică a microbiotei intestinale este bine recunoscută şi este exemplificată la animalele fără germeni care au un sistem imunitar alterat care este reconstituit funcţional după introducerea bacteriei comensale [3-5].
Modificări dramatice în compoziţia microbiotei au fost documentate în tulburările gastrointestinale cum ar fi boala inflamatorie intestinală (IBD). De exemplu, nivelurile de bacterie Clostridium cluster XIVa sunt reduse la pacienţii cu IBD în timp ce numărul de E. coli este crescut, sugerând un defazaj în echilibrul simbionţilor şi patobionţilor din intestin [6- 9].
În recunoaşterea potenţialului efect pozitiv pe care anumite tulpini bacteriene îl pot avea asupra intestinului animalului, diferite tulpini au fost propuse pentru utilizare în tratamentul diferitelor boli (vezi, de exemplu, [10-13]). De asemenea, anumite tulpini, incluzând mai alest tulpinile Lactobacillus şi Bifidobacterie, au fost propuse pentru utilizare în tratarea diferitelor boli inflamatorii şi autoimune care nu sunt direct legate de intestin (vezi [14] şi [15] pentru revizii). Totuşi, relaţia între diferite boli şi diferite tulpini bacteriene, şi efectele precise ale anumitor tulpini bacteriene asupra intestinului şi la un nivel sistemic şi pe orice tip particular de boli este slab caracterizată, în special pentru tulburările neurodegenerative.
Recent, s-a manifestat un interes crescut în domeniu referitor la alterările din microbiomul intestinal care poate juca un rol patofiziologic în bolile creierului uman [16]. Dovezile preclinice şi clinice sugerează puternic o legătură între dezvoltarea creierului şi microbiotă [17]. Un corp în creştere din literatura preclinică a demonstrat semnalizarea bidirecţională între creier şi microbiomul intestinal, care implică multiple sisteme de semnalizare neurocrine şi endocrine. Într-adevăr, nivelurile crescute de specii Clostridium în microbiome au fost legate de tulburări ale creierului [18], şi un dezechilibru de filă Bacteroidete şi Firmicute a fost de asemenea implicat în dezvoltarea tulburărilor creierului [19]. Sugestiile că nivelurile alterate de comensale intestinale, incluzându-le pe cele de Bifidobacterie, Lactobacillus, Sutterella, Prevotella şi Ruminococcus genera şi ale familiei de Alcaligenaceae sunt implicate în tulburările imuno-mediate ale sistemului nervos central (CNS), sunt investigate prin studii sugerând o lipsă de alterare la microbiotă între pacienţi şi subiecţii sănătoşi [19]. S-a sugerat de asemenea că administrarea de probiotice poate fi benefică în tratamentul tulburărilor neurologice. Totuşi, aceste studii au eşuat în a concluziona că compoziţiile probiotice per se pot obţine beneficii terapeutice faţă de tratamentul neurodegenerării şi nu au prezentat nici un efect util pentru nici o bacterie particulară [20, 21]. Acest lucru indică faptul că, în prezent, efectul practic al legăturii între microbiom şi bolile creierului uman este slab caracterizat. Corespunzător, sunt necesare studii analitice mai directe pentru a identifica impactul terapeutic al alterării microbiomului asupra tulburărilor neurodegenerative.
Există a cerinţă în domeniu pentru noi metode pentru tratarea tulburărilor neurodegenerative. Există de asemenea o cerinţă pentru caracterizarea efectelor potenţiale ale bacteriei intestinale astfel încât să poată fi dezvoltate noi terapii utilizând bacteria intestinală.
US 2004/005304 descrie o compoziţie pentru tratamentul unei tulburări neurologice şi a afecţiunii gstrointestinale asociate. US 2004/170617 descrie o metodă de tratare sau prevenire a unei boli asociate cu o floră gastrointestinală anormală. US 2004/120963 descrie un aliment sau hrană cuprinzând o compoziţie care cuprinde ca un ingredient activ bacteria sau produse procesate ale acesteia capabile să transforme acidul lactic în acid butiric. Padmanabhan, R. şi colab., Standards in Genomic Sciences 8(3) (p,525-538), descriu tulpina NP3 de Megasphaera massiliensis. Nallabelli N. şi colab., Scientific Reports 6(1), descriu analiza secvenţei genome de tulpină DISK18 de Megasphaera sp.. US 2016/271188 descrie compoziţii probiotice pentru tratamentul tulburărilor gastrointestinale.
REZUMATUL INVENŢIEI
Inventatorii au dezvoltat noi terapii pentru tratarea şi prevenirea tulburărilor neurodegenerative. Inventatorii au identificat că tulpinile bacteriene din genul Megasphaera pot fi eficiente pentru tratarea bolilor neurodegenerative. Cum s-a descris în exemple, administrarea de compoziţii cuprinzând Megasphaera massiliensis poate proteja împotriva speciilor reactive de oxigen şi preveni inflamaţia, acţionȃnd astfel ca neuroprotector. Inventatorii au identificat de asemenea că tratamentul cu Megasphaera massiliensis poate reduce activarea de molecule proinflamatoare, cum ar fi NFκB şi IL-6, prin LPS şi α-sinucleină mutantă. Inventatorii au identificat că tratamentul cu Megasphaera massiliensis poate reduce activitatea de deacetilare histonă şi peroxidarea lipidă in vitro, care pot ajuta la reducerea morţii celulei şi apoptozei. Inventatorii au identificat de asemenea că Megasphaera massiliensis poate produce indol care poate atenua inflamaţia şi stresul oxidativ. Mai mult, inventatorii au demonstrat că tratamentul cu Megasphaera massiliensis poate creştere nivelurile kinurenine.
Inventatorii au identificat de asemenea că Megasphaera massiliensis produce anumiţi acizi organici incluzând acidul hexanoic, acidul valeric şi acidul 4-hidroxifeniacetic. Inventatorii au descoperit de asemenea că Megasphaera massiliensis poate creştere activarea de citokine pro-inflamatorii IL-8, care poate ajuta la promovarea mielinării neuronale. Inventatorii au identificat de asemenea că tratamentul cu o combinaţie de Megasphaera massiliensis şi acid retinoic poate creşte secreţia factorului neurotrofic derivat din creier (BDNF), care poate ajuta la promovarea neurogenezei şi neuritogenezei şi/sau preveni moartea celulei. Inventatorii au identificat de asemenea că tratamentul cu Megasphaera massiliensis, care poate produce acid valeric, poate reduce deacetilarea histonă, care poate ajuta la reducerea morţii celulei şi apoptozei. Mai mult, inventatorii au descoperit de asemenea că Megasphaera massiliensis poate produce acid hexanoic, care poate fi neuroprotector sau neurorestaurator, de exemplu prin promovarea creşterii de neurite. Inventatorii au descoperit că Megasphaera massiliensis care poate produce acid hexanoic, creştere expresia de MAP2 (proteină 2 asociată cu microtuburi), despre care se crede că este esenţială pentru formarea de microtuburi în neuritogeneză. Prin urmare, inventatorii au descoperit că Megasphaera massiliensis care poate produce acid hexanoic, poate fi utilizată pentru a promova creşterea neuritelor. Megasphaera massiliensis şi alte bacterii care produc acizi organici ca acidul hexanoic, acidul valeric şi acidul 4-hidroxifenilacetic pot fi prin urmare utile pentru tratarea tulburărilor neurodegenerative.
Invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a unei tulburări neurodegenerative, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s rARN care este cel puţin 95% identică cu SEQ ID NO:2.
În anumite realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând tulpina bacteriană de mai sus din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a unei boli sau afecţiuni selectate din grupul constând din: boală Parkinson, incluzând pralizie supranucleară progresivă, paralizie supranucleară progresivă, sindrom Steele-Richardson-Olszewski, hidrocefalee cu presiune normală, parkinsonism vascular sau arteriosclerotic şi parkinsonism indus de medicamente; boală Alzheimer, incluzând sindromul Benson; scleroză multiplă; boală Huntington; scleroză laterală amiotrofică; boală Lou Gehrig; boală neuronală motoare; boală prion; ataxie spinocerebrală; atrofie musculară spinală; demenţă, incluzând corp Lewy, demenţă vasculară şi frontotemporală; afazie progresivă primară; depreciere cognitivă uşoară; depreciere cognitivă asociată cu HIV şi degenerare corticobasală.
În realizările preferate, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând tulpina bacteriană de mai sus din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a bolii Parkinson, cum ar fi Parkinsonul din mediu, sau familial asociat cu stări inflamatorii generale. Inventatorii au identificat că tratamentul cu tulpini de Megasphaera poate reduce activarea moleculelor proinflamatorii, cum ar fi NFκB şi IL-6, prin LPS şi α-sinucleină mutantă în modelele in vitro ale Parkinsonului din mediu şi familial. În realizările preferate, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană a speciilor Megasphaera massiliensis, pentru utilizare în tratamentul bolii Parkinson. Compoziţiile utilizând Megasphaera massiliensis pot fi în special eficiente pentru tratarea Parkinsonului.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a debutului timpuriu al bolii neurodegenerative. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare într-o metodă de prevenire sau de întȃrziere a debutului sau progresului unei tulburări neurodegenerative.
În realizările preferate ale invenţiei, tulpina bacteriană din compoziţie este de Megasphaera massiliensis. Pot fi de asemenea utilizate tulpini strâns înrudite, cum ar fi tulpinile bacteriene care au o secvenţă 16S rARN care este cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identică cu secvenţa 16S rARN a unei tulpini bacteriene de Megasphaera massiliensis. Tulpina bacteriană are o secvenţă 16S rARN care este cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identică cu SEQ ID NO:2. Preferabil, tulpina bacteriană pentru utilizare în invenţie are secvenţa 16S rARN reprezentată de SEQ ID NO:2.
În anumite realizări, compoziţia invenţiei este pentru administrare orală. Administrarea orală a tulpinilor invenţiei poate fi eficientă pentru tulburările neurodegenerative. De asemenea, administrarea orală este convenabilă pentru pacienţi şi practicieni şi permite livrarea la şi/sau colonizarea parţială sau totală a intestinului.
În anumite realizări, compoziţia invenţiei cuprinde unul sau mai mulţi excipienţi sau purtători acceptabili farmaceutic.
În anumite realizări, compoziţia invenţiei cuprinde o tulpină bacteriană care a fost liofilizată. Liofilizarea este o tehnică eficientă şi convenabilă pentru prepararea de compoziţii stabile care permit livrarea bacteriei.
În anumite realizări, invenţia furnizează un produs alimentar cuprinzând compoziţia cum s-a descris mai sus.
În anumite realizări, invenţia furnizează o compoziţie de vaccin cuprinzând compoziţia cum s-a descris mai sus.
În dezvoltarea invenţiei de mai sus, inventatorii au identificat şi caracterizat o tulpină bacteriană care este în special utilă pentru terapie. Tulpina Megasphaera massiliensis a invenţiei este prezentată a fi eficientă pentru tratarea bolilor descrise aici, cum ar fi bolile neurodegenerative. Prin urmare, într-un alt aspect, invenţia furnizează o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787. Invenţia furnizează de asemenea compoziţii cuprinzând astfel de celule, sau culturi biologic pure de astfel de celule. Invenţia furnizează de asemenea o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub număr de acces NCIMB 42787, pentru utilizare în terapie, în particular pentru bolile descrise aici.
În anumite realizări ale invenţiei, compoziţia este pentru utilizare în tratarea leziunii creierului. Activitatea neuroprotectoare a compoziţiilor invenţiei şi abilitatea lor de a reduce nivelurile de activitate de deacetilază histonă (HDAC) le poate face utile pentru tratarea leziunii creierului. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral, cum ar fi tratarea leziunii creierului care rezultă dintr-un accident vascular cerebral.
SCURTĂ DESCRIERE A DESENELOR
Figura 1: Viabilitatea celulară a celulelor neuroblastom
Figura 2: Reglarea negativă a secreţiei de IL-6
Figura 3 Secreţie de IL-8
Figura 4: Inhibare de secreţie IL-6 şi IL-8 α- sinucleină
Figura 5: Inhibare de α- sinucleină indusă de activarea promotorului NFκB
Figura 6: Inhibare de LPS indusă de activarea promotorului NFκB
Figura 7: Modificare în capacitatea antioxidantă
Figura 8: Modificare în capacitatea antioxidantă totală (oxidare lipidă)
Figura 9: Modificare în activitatea de deacetilază histonă (HDAC)
Figura 10: Nivel producţie de indol
Figura 11: Nivel de producţie de Kirunenine
Figura 12: Niveluri medii de dopamină (DA) (Figura 12A), niveluri de DOPAC (Figura 12B) şi niveluri de HVA (Figura 12C) în striatum. Date sunt afişate ca medie + SEM.
Figura 13: Promovarea creşterii de neurite: microscopie luminoasă şi expresia genei MAP2 (Figura 13A), imunomicroscopie cu fluorescenţă faloidină (Figura 13B)
Figura 14: Modificare în nivelurile ROS în (a) celulele U373 şi (b) celulele SHSY-5Y
Figura 15: Neuroprotecţie - viabilitate celulară. Figura 15 prezintă acelaşi date ca Figura 1.
Figura 16 Modificări induse de tulpină în activitatea de deacetilază histonă a întregii celule şi a lizatului celular (Figura 16A), modificări induse de acid în activitatea de deacetilază histonă (Figura 16B), producţia de metaboliţi de către tulpini (Figura 16C)
Figura 17 Inhibare HDAC1 (Figura 17A), inhibare HDAC2 (Figura 17B), inhbare HDAC3 (Figura 17C)
Figura 18 Inhibare de HDAC de clasă I (Figura 18A); inhibare de HDAC1 (Figura 18B); inhibare de HDAC2 (Figura 18C); inhibare de HDAC3 (Figura 18D)
Figura 19: Nivel de producţie de BDNF
Figura 20: Niveluri de producţie de metaboliţi - neurotransmiţători în creier
Figura 21: Niveluri de producţie de metaboliţi - acizi organici în supernatant
Figura 22: Efect asupra funcţionării barierei intestinale.
Figura 23: Producţie de neurotransmiţători în creier
Figura 24: Modificări în expresia receptorului hipocampal - A) receptor de oxitocină, B) receptor vasopresină, C) receptor glucocorticoid şi D) receptor mineralocorticoid
Figura 25: Modificări în expresia hipocampală de A) hormon de eliberare a corticotropinei (CRH), B) expresia BDNF şi C) TLR4
Figura 26: A) Modificări în expresia hipocampală a receptorului 1 hormonal de eliberare a corticotropinei (CRFR1) şi B) expresia receptorului 2 hormonal de eliberare a corticotropinei (CRFR2)
Figura 27: Modificări în expresia hipocampală de A) factor de necroză tumorală, B) interleukină 1b şi C) IL-6
Figura 28: A) Modificări în expresia hipocampală a integrinei Alfa M (CD11b) şi B) Modificări în expresia hipocampală a receptorului de serotonin 1A (receptor 5-HT1A)
Figura 29: A) Modificări în subunitatea 2A de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat hipocampal (Grin2A) şi B) expresia subunităţii 2B de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat (Grin2B)
Figura 30: Modificări în expresia hipocampală de A) receptor 2 de acid A gama-aminobutiric (GABA A2), B) receptor 1 de acid B gama-aminobutiric (GABA BR1) şi C) receptor 1 de dopamină (DRD1)
Figura 31: Modificări în expreia receptorului de amigdale - A) receptor de oxitocină, B) receptor de vasopresină, C) receptor de glucocorticoid şi D) receptor de mineralocorticoid
Figura 32: Modificări în expresia de amigdale de A) factor neurotrofic derivat din creier (BDNF), B) receptor 4 asemănător cu Toll (TLR-4), C) receptor 1 hormonal de eliberarea corticotropinei (CRFR1) şi D) receptor 2 hormonal de eliberarea corticotropinei (CRFR2)
Figura 33: Modificări în expresia de amigdale de A) integrină Alfa M (CD11b), B) Interleukină-6 (IL-6), C) subunitate 2A de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat (Grin2A) şi D) subunitate 2B de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat (Grin2B)
Figura 34: Modificări în expresia de amigdale de A) subunitate 2 alfa a receptorului GABA-A (GABRA2), B) subunitate 1 a receptorului de tip B GABA-A (GABBR1) şi C) receptor 1 de dopamină (DRD1)
Figura 35: Modificări în expresia cortexului prefrontal de A) receptor de oxitocină, B) factor neurotrofic derivat din creier (BDNF), C) receptor de mineralocorticoid şi D) receptor de glucocorticoid
Figura 36: Modificări în expresia cortexului prefrontal de A) receptor 4 asemănător cu Toll (TLR-4), B) receptor 1 hormonal de eliberarea corticotropinei (CRFR1), C) receptor 2 hormonal de eliberarea corticotropinei (CRFR2) şi D) integrină Alfa M (CD11b)
Figura 37: Modificări în expresia cortexului prefrontal de A) interleukină-6 (IL-6), B) subunitate 2A de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat (Grin2A), C) subunitate 2B de tip NMDA a receptorului ionotropic glutamat (Grin2B) şi D) subunitate 2 alfa a receptorului GABA-A (GABRA2)
Figura 38: Modificări în expresia cortexului prefrontal de A) subunitate 1 a receptorului de tip B a receptorului GABA-A (GABBR1) şi B) receptor 1 de dopamină (DRD1)
Figura 39: Modificări în expresia colonului de A) triptofan hidroxilază-1 (Tph1) şi B) indolamină2,3-dioxigenază-1 (IDO1)
Figura 40: Modificări în expresia ileumului de A) triptofan hidroxilază-1 (Tph1) şi B) indolamină2,3-dioxigenază-1 (IDO1)
Figura 41: Modificări în circulaţia nivelurilor metabolite de triptofan A) Kinurenine, B) triptofan şi C) indicele Kinurenină/triptofan de metabolism
Figura 42: Efect asupra producţiei de interferon-y de la splenocitele de şoarece de la şoarecii alimentaţi cu MRx0029
Figura 43: Efect asupra producţiei de interleukină-1β de la splenocite
Figura 44: Efect asupra producţiei de interleukină-6 de la splenocite
Figura 45: Efect asupra producţiei de factor de necroză tumorală de la splenocite
Figura 46: Efect asupra producţiei de interleukină-10 de la splenocite
Figura 47: Efect asupra producţiei de chemoatractant CXCL1 de la splenocite
Figura 48: Modificări în nivelurile de acid gras ale catenei scurte cecale
Figura 49: Modificări induse de MRx0029 şi MRX005 în nivelurile de expresie ale genei de actină, vilin, ocludin TJP1, TJP2, MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 şi NSE.
Figura 50: Diferenţiere celulară SHSY5Y indusă de MRx0005 şi MRx0029. (A-C) Imagini reprezentative de celule etichetate imuno cu faloidină şi MAP2. (D-F) imagini ale A-C îmbinate cu imagini DAPI. Celule imunoetichetate cu tuburi β3 (G-I). (J-L) îmbinate cu imagini DAPI. Amplificare x630. Analiză de pete Western a efectelor tratamentului MRx0005 şi MRx0029 pe celule SHSY5Y. Membranele petelor Western au fost sondate cu anticorpi la MAP2 (M) şi tuburi b3 (N). Actina a fost utilizată ca control de încărcare. Panourile de jos: pete reprezentative de la unul din şase experimente separate; panourile de sus: intensitate densitometrică relativă.
DIVULGARE INVENŢIEI
Tulpini bacteriene
Compoziţiile invenţiei cuprind o tulpină bacteriană din genul Megasphaera, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s rARN care este cel puţin 95% identică cu SEQ ID NO:2. Exemplele demonstrează că bacteriile din acest gen sunt utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative. Tulpinile bacteriene preferate sunt ale speciilor Megasphaera massiliensis.
Exemple de specii Megasphaera pentru utilizare în invenţie includ Megasphaera elsdenii, Megasphaera cerevisiae, Megasphaera massiliensis, Megasphaera indica, Megasphaera paucivorans, Megasphaera sueciensis şi Megasphaera micronuciformis. Un exemplu suplimentar al unei specii Megasphaera pentru utilizare în invenţie este Megasphaera hexanoica. Megasphaera sunt microbi gastrointestinali obligatoriu anaerobi, de fermentare a lactatelor de către mamifere rumegătoare şi nerumegătoare, incluzând oamenii.
Tulpina de tip M. massiliensis este NP3 (=CSUR P245=DSM 26228)[22]. Numărul de acces GenBank pentru secvenţa genetică 16S rRNA de tulpină NP3 de M. massiliensis este JX424772,1 (divulgată aici ca SEQ ID NO:1).
Bacteria Megasphaera massiliensis testată în exemple este referită în acest document ca tulpină MRx0029. O secvenţă 16S rARN pentru tulpina MRx0029 care a fost testată este prevăzută în SEQ ID NO:2.
Tulpina MRx0029 a fost depozitată cu autoritatea de depozitare internaţională NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Scoţia) de către 4D Pharma Research Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Cornhill Road, Aberdeen, AB25 2ZS, Scoţia) pe 13 iulie 2017 ca „Megasphaera massiliensis MRx0029« şi i-a fost asignat numărul de acces NCIMB 42787.
Tulpinile bacteriene strâns înrudite cu tulpina testată în exemple sunt de asemenea de aşteptat să fie eficiente pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative. În anumite realizări, tulpina bacteriană divulgată aici are o secvenţă 16S rARN care este cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identică cu secvenţa 16S rARN a unei tulpini bacteriene de Megasphaera massiliensis. Tulpina bacteriană pentru utilizare în invenţie are o secvenţă 16S rARN care este cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identică cu SEQ ID NO:2. Preferabil, tulpina bacteriană pentru utilizare în invenţie are secvenţa 16S rARN reprezentată de SEQ ID NO:2.
Tulpinile bacteriene care sunt biotipuri de tulpini MRx0029 sau NP3 sunt de asemenea de aşteptat să fie eficiente pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative. Un biotip este o tulpină strâns înrudită care are aceleaşi sau foarte similare caracteristici fiziologice şi biochimice.
Tulpinile care sunt biotipuri de tulpini MRx0029 sau NP3 şi care sunt adecvate pentru utilizare în invenţie pot fi identificate prin secvenţierea altor secvenţe de nucleotidă pentru tulpinile MRx0029 sau NP3. De exemplu, substanţial întregul genom poate fi secvenţiat şi o tulpină biotip pentru utilizare în invenţie poate avea cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identitate de secvenţă de-a lungul a cel puţin 80% din întregul său genom (de exemplu de-a lungul a cel puţin 85%, 90%, 95% sau 99%, sau de-a lungul întregului său genom). Alte secvenţe adecvate pentru utilizare în identificarea tulpinilor biotip pot include hsp60 sau secvenţe repetitive cum ar fi BOX, ERIC, (GTG)5, sau REP sau [23]. Tulpinile biotip pot avea secvenţe cu cel puţin 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identitate de secvenţă cu secvenţa corespunzătoare a tulpinilor MRx0029 sau NP3.
Alternativ, tulpinile care sunt biotipuri de tulpini MRx0029 sau NP3 şi care sunt adecvate pentru utilizare în invenţie pot fi identificate prin utilizarea tulpinilor MRx0029 sau NP3 şi analiza de fragment restricţionat şi/sau analiza PCR, de exemplu prin utilizarea de polimorfism cu lungimea fragmentului amplificată fluorescent (FAFLP) şi amprentă (rep)-PCR a elementului ADN repetitiv, sau profilare de proteină, sau secvenţiere 16S parţială sau 23S ADNr. În realizările preferate, astfel de tehnici pot fi utilizate pentru a identifica alte tulpini Megasphaera massiliensis.
În anumite realizări, tulpinile care sunt biotipuri de tulpini MRx0029 sau NP3 şi care sunt adecvate pentru utilizare în invenţie sunt tulpini care furnizează acelaşi tipar ca tulpinile MRx0029 sau NP3 când sunt analizate prin analiză amplificată de restricţie ADN ribozomală (ARDRA), de exemplu când se utilizează enzima de restricţie Sau3AI (pentru exemple de metode şi ghidare vezi, de exemplu,[24]). Alternativ, tulpinile biotip sunt identificate ca tulpini care au aceleaşi tipare de fermentare ale carbohidratului ca tulpinile MRx0029 sau NP3.
Alte tulpini Megasphaera care sunt utile în compoziţiile şi metodele invenţiei, cum ar fi biotipurile de tulpini MRx0029 sau NP3, pot fi identificate utilizând orice metodă adecvată sau strategie, incluzând testele descrise în exemple. De exemplu, tulpinile pentru utilizare în invenţie pot fi identificate prin cultivare cu celule neuroblastom şi apoi evaluȃnd nivelurile de citokine şi nivelurile de neuroprotecţie sau neuroproliferare. În particular, tulpinile bacteriene care au tipare de creştere similare, antigeni de tip metabolic şi/sau de suprafaţă cu tulpinile MRx0029 sau NP3 pot fi utile în invenţie. O tulpină utilă va avea activitate modulatoare imună comparabilă cu a tulpinilor MRx0029 sau NP3. În particular, o tulpină biotip va declanşa efecte comparabile asupra modelelor de boală neurodegenerative şi efecte comparabile asupra nivelurilor de citokine cu efectele prezentate în exemple, care pot fi identificate prin utilizarea de protocoale de cultivare şi administrare descrise în exemple.
O tulpină în special preferată a invenţiei este tulpina Megasphaera massiliensis MRx0029. Aceasta este exemplul de tulpină testat în exemple şi prezentat pentru a fi eficient în tratarea bolii. Prin urmare, invenţia furnizează o celulă, cum ar fi o celulă izolată, de tulpină Megasphaera massiliensis MRx0029. Invenţia furnizează de asemenea o compoziţie cuprinzând o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis MRx0029. Invenţia furnizează de asemenea o cultură biologic pură de tulpină Megasphaera massiliensis MRx0029. Invenţia furnizează de asemenea o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis MRx0029, pentru utilizare în terapie, în particular pentru bolile descrise aici.
O tulpină în special preferată a invenţiei este tulpina Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787. Aceasta este exemplul de tulpină MRx0029 testat în exemple şi prezentat pentru a fi eficient în tratarea bolii. Prin urmare, invenţia furnizează o celulă, cum ar fi o celulă izolată, de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787. Invenţia furnizează de asemenea o compoziţie cuprinzând o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787. Invenţia furnizează de asemenea o cultură biologic pură de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787. Invenţia furnizează de asemenea o celulă de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787, pentru utilizare în terapie, în particular pentru bolile descrise aici.
Un derivat al tulpinei invenţiei poate fi o tulpină fiică (descendentă) sau o tulpină cultivată (subclonată) din cea originală. Un derivat al unei tulpini a invenţiei poate fi modificat, de exemplu la nivel genetic, fără îndepărtarea de la activitatea biologică. În particular, o tulpină derivată a invenţiei este activă terapeutic. O tulpină derivată va avea activitate terapeutică comparabilă cu cea a tulpinii MRx0029. În particular, o tulpină derivată va declanşa efecte comparabile asupra modelelor de boală neurodegenerative şi efecte comparabile asupra nivelurilor de citokine cu efectele prezentate în exemple, care pot fi identificate prin utilizarea protocoalelor de cultivare şi administrare descrise în exemple. Un derivat de tulpină MRx0029 va fi în general un biotip de tulpină MRx0029.
Referirile la celulele de tulpină Megasphaera massiliensis MRx0029 cuprind orice celule care au aceleaşi caracteristici de siguranţă şi eficacitate terapeutică ca tulpina MRx0029, şi astfel de celule sunt cuprinse în invenţie.
În realizările preferate, tulpinile bacteriene din compoziţiile invenţiei sunt viabile şi capabile de colonizarea parţială sau totală a intestinului.
Inventatorii au descoperit că tulpinile de Megasphaera massiliensis reduc activarea citokinelor inflamatorii cum ar fi IL-6 şi cresc activarea de citokine inflamatorii IL-8. IL-8 au fost implicate în formarea tecii de mielină [25]. Inflamaţia cronică indusă de IL-6 poate conduce în final la moartea celulei. Prin urmare, tulpinile bacteriene ale invenţiei sunt în special utile în tratamentul sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative. În unele realizări, tulpinile bacteriene sunt utile în tratamentul afecţiunilor caracterizate prin sporirea activării de IL-6. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratamentul sau prevenirea bolilor neurodegenerative caracterizate prin demielinizare. Multe boli neurodegenerative sunt caracterizate prin demielinizare. Demielinizarea împiedică propagarea potenţialelor de acţiune în neuroni, afectȃnd comunicarea eficientă în sistemul nervos. IL-8 s-a arătat că contribuie pozitiv la formarea şi refacerea tecii de mielină. Prin urmare, compoziţiile invenţiei sunt în special benefice în tratamentul sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative caracterizate de demielinizare, cum ar fi scleroza multiplă.
Inventatorii au descoperit că tulpinile de Megasphaera massiliensis ale invenţiei atenuează simptoamele bolilor neurodegenerative în modele de boală. De exemplu, inventatorii au descoperit că tulpinile de Megasphaera massiliensis promovează crşterea neuritelor in vitro, şi pot fi utilizate prin urmare în promovarea restaurării neuronale pentru tratamentul sau prevenirea bolilor neurodegenerative. Astfel, tulpinile bacteriene ale invenţiei sunt pentru utilizare în tratamentul sau prevenirea bolilor neurodegenerative.
Inventatorii au descoperit de asemenea că tulpinile bacteriene ale invenţiei cresc activarea de BDNF. BDNF este un factor de creştere neurotrofic care a arătat că sporeşte diferenţierea şi supravieţuirea neuronală. Astfel, compoziţiile invenţiei pot fi utilizate într-o metodă de sporire a supravieţuirii celulei nervoase în tratamentul sau prevenirea bolilor neurodegenerative.
O bacterie suplimentară care poate fi utilizată în compoziţiile invenţiei este specia Parabacteroides distasonis. Exemplele demonstrează că Parabacteroides distasonis şi Megasphaera massiliensis au ambele activităţi neuroprotectoare, dar produc diferiţi metaboliţi şi pot avea mecanisme de acţiune diferite şi activităţi neuroprotectoare specifice. Prin urmare, aceste specii pot fi în special eficiente când sunt utilizate în combinaţie. În realizările preferate, compoziţia cuprinde o tulpină din specia Parabacteroides distasonis şi o tulpină din specia Megasphaera massiliensis.
Bacteria Parabacteroides distasonis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42382 a fost testată în exemple şi este de asemenea cea la care se face referire în acest document ca tulpină MRx0005. MRX0005, MRX005, MRx005 şi MRx0005 sunt utilizate aici interschimbabil. O secvenţă 16S rARN pentru tulpina MRx0005 care a fost testată este prevăzută în SEQ ID NO:17. Tulpina MRx0005 a fost depozitată cu autoritatea de depozitare internaţională NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Scoţia) de către GT Biologics Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB25 2ZS, Scoţia) pe 12 martie 2015 ca „Parabacteroides sp 755« şi i-a fost asignat numărul de acces NCIMB 42382. GT Biologics Ltd. şi-a schimbat ulterior numele în 4D Pharma Research Limited.
În realizările preferate, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând tulpina depozitată la NCIMB sub numărul de acces NCIMB 42787, sau un derivat sau biotip ai acesteia, şi tulpina depozitată la NCIMB sub numărul de acces NCIMB 42382, sau un derivat sau biotip ai acesteia, preferabil pentru utilizare în terapie, preferabil pentru utilizare în tratarea unei boli neurodegenerative cum ar fi boala Parkinson.
Utilizări terapeutice
După cum s-a demonstrat în exemple, compoziţiile bacteriene ale invenţiei sunt eficiente pentru tratarea tulburărilor neurodegenerative. În particular, tratamentul cu compoziţiile invenţiei creşte neuro-proliferarea şi acţionează ca neuroprotector împotriva agenţilor care distrug neuronii dopaminergici.
Prin urmare, compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative care sunt rezultatul morţii neuronilor.
Compoziţiile invenţiei pot scade activarea promotorilor NFκB, care activează producţia de citokine, de exemplu IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα şi IL-6. Tratarea celulelor cu α-sinucleină mutantă este un model pentru Parkinsonul familial. O mutaţie punctuală la poziţia 53 de la adenină la treonină conduce la plierea incorectă a α-sinucleinei. α-sinucleina incorect pliată se agregă ulterior în fibrile insolubile care formează corpi Lewy. Prin urmare, compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative care sunt rezultatul neuroinflamaţiei, plierii inadecvate a proteinei şi/sau din expunerea la mediu. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru tratamentul Parkinsonului familial. Activarea de promotori NFκB este mediată prin ligandul TLR4. TLR4 este cunoscut pentru medierea morţii celulei în modelul MPTP la şoarece, care simulează boala Parkinson. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru a inhiba abilitatea de semnalizare TLR4 pentru a activa promotorul NFκB. De o anumită relevanţă pentru PD, ambii TLR2 şi TLR4 au fost găsiţi ca fiind reglaţi pozitiv în creierele pacienţilor cu PD [26]. Mai mult α-sin a fost descris ca ligand pentru TLR2 [27] şi am demonstrat că α-sin este de asemenea un ligand pentru TLR4 utilizând celule HEK-TLR4 [28].
Compoziţiile invenţiei scad secreţia de citokine pro-inflamatorii cum ar fi IL-6, care poate fi indusă de lipopolizaharidă (LPS). Tratamentul celulelor cu LPS simulează Parkinsonul cauzat de factorii de mediu. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru a scădea secreţia de IL-6. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru tratamentul Parkinsonului de mediu.
Exemple de boli neurodegenerative pentru a fi tratate cu compoziţiile invenţiei includ: boală Parkinson, incluzând paralizie supranucleară progresivă, paralizie supranucleară progresivă, sindrom Steele-Richardson-Olszewski, hidrocefalee cu presiune normală, parkinsonism vascular sau arteriosclerotic şi parkinsonism indus de medicamente; boală Alzheimer, incluzând sindromul Benson; scleroză multiplă; boală Huntington; scleroză laterală amiotrofică; boală Lou Gehrig; boală neuronală motoare; boală prion; ataxie spinocerebrală; atrofie musculară spinală; demenţă, incluzând corp Lewy, demenţă vasculară şi frontotemporală; afazie progresivă primară; depreciere cognitivă uşoară; depreciere cognitivă asociată cu HIV, şi degenerare corticobasală. O altă boală pentru a fi tratată cu compoziţiile invenţiei este neuropatia inflamatorie progresivă.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea morţii neuronilor, în particular, în tratamentul tulburărilor neurodegenerative. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în protejarea neuronilor, în particular în tratamentul tulburărilor neurodegenerative.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea sau prevenirea pierderii de celule dopaminergice în substantia nigra. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea sau prevenirea degenerării neuronilor dopaminergici în substantia nigra pars compacta. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea sau prevenirea degenerării neuronilor dopaminergici în substantia nigra pars compacta şi pierderea ulterioară a fibrelor lor nervoase proiectate în striatum. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea sau prevenirea pierderii de neuroni dopaminergici nigrostriatali.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în creşterea nivelurilor de dopamină. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în creşterea nivelurilor de DOPAC (acid 3,4-dihidroxifeniacetic). În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în creşterea nivelurilor de dopamină şi DOPAC. În anumite realizări, nivelurile de dopamină şi/sau DOPAC sunt crescute în striatum. Nivelurile de dopamină şi DOPAC pot fi măsurate utilizând orice metodă adecvată cunoscută în domeniu, cum ar fi o metodă radioenzimatică, de exemplu în plasmă sau CSF (de exemplu cum s-a descris în [29]), sau o metodă HPLC cu fază inversă, probabil cu detecţie electrochimică, de exemplu în plasmă sau CSF (de exemplu cum s-a descris în [30]).
Proprietăţile neuroprotectoare ale compoziţiilor invenţiei, aşa cum se arată în exemple, înseamnă că, compoziţiile pot fi în special eficiente pentru prevenirea sau întârzierea debutului sau progresului tulburărilor neurodegenerative. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în întȃrzierea debutului sau progresului tulburărilor neurodegenerative.
Compoziţiile invenţiei pot creşte secreţia de IL-8. IL-8 s-a arătat că joacă un rol în mielinarea neuronală. În unele realizări, compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru a creşte secreţia de IL-8.
Compoziţiile terapeutice ale invenţiei pot creştere activarea de BDNF. BDNF acţionează asupra anumitor neuroni ai sistemului nervos central pentru a susţine supravieţuirea neuronilor existenţi şi a ajuta creşterea şi dezvoltarea de noi neuroni şi sinapse. BDNF este activ în hipocampus, cortex şi partea din faţă a creierului bazal, şi este important pentru memoria pe termen lung. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate prin urmare pentru a creşte secreţia de BDNF. Compoziţiile pot fi utilizate prin urmare în tratamentul bolilor neurodegenerative asociate cu deprecierea memoriei pe termen lung. Compoziţiile invenţiei pot fi utilizate pentru îmbunătăţirea memoriei pe termen lung, în particular pentru îmbunătăţirea memoriei pe termen lung, care este alterată de o boală neurodegenerativă.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei cresc activitatea metabolică mitocondrială în celulele neuronale.
Modularea axei microbiotă-intestin-creier
Comunicaţia între intestin şi creier (axa microbiotă-intestin-creier) are loc printr-un sistem de comunicaţie neurohumoral bidirecţional. Dovezile recente arată că microbiota care rezidă în intestin poate modula dezvoltarea creierului şi produce fenotipuri comportamentale prin axa microbiotă-intestin-creier. Într-adevăr, un număr de revizii sugerează un rol al axei microbiotă-intestin-creier în menţinerea funcţionalităţii sistemului nervos central şi implică disfuncţia axei microbiotă-intestin-creier în dezvoltarea de tulburări şi afecţiuni ale sistemului nervos central [16],[19],[31].
Comunicaţia bidirecţională între creier şi intestin (adică axa intestin-creier) include sistemul nervos central, sistemele neuroendocrin şi neuroimunitar, incluzând axa hipotalamus-pituitară-adrenală (HPA), braţele simpatice şi parasimpatice ale sistemului nervos autonom (ANS), incluzând sistemul nervos enteric (ENS) şi nervul vag, şi microbiota intestinală.
După cum s-a demonstrat în exemple, compoziţiile prezentei invenţii pot modula axa microbiotă-intestin-creier şi reduce moartea celulei asociate cu tulburările neurodegenerative. Corespunzător, compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative, în particular acele tulburări şi afecţiuni asociate cu disfuncţia axei microbiotă-intestin-creier.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea sau prevenirea unei boli sau afecţiuni selectate din grupul constând din: boală Parkinson, incluzând paralizie supranucleară progresivă, paralizie supranucleară progresivă, sindrom Steele-Richardson-Olszewski, hidrocefalee cu presiune normală, parkinsonism vascular sau arteriosclerotic şi parkinsonism indus de medicamente; boală Alzheimer, incluzând sindromul Benson; scleroză multiplă; boală Huntington; scleroză laterală amiotrofică; boală Lou Gehrig; boală neuronală motoare; boală prion; ataxie spinocerebrală; atrofie musculară spinală; demenţă, incluzând corp Lewy, demenţă vasculară şi frontotemporală; afazie progresivă primară; depreciere cognitivă uşoară; depreciere cognitivă asociată cu HIV, şi degenerare corticobasală.
Compoziţiile invenţiei pot fi în special utile pentru tratarea sau prevenirea bolii cronice, tratarea sau prevenirea bolii la pacienţii care nu au răspuns la alte terapii (cum ar fi tratament cu Levodopa, agonişti de dopamină, inhibitori MAO-B, inhibitori COMT, antagonişto glutamat, şi/sau anticolinergice), şi/sau tratarea sau prevenirea deteriorării ţesutului şi simptoame asociate cu disfuncţia axei microbiotă-intestin-creier.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează CNS. În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează sistemul nervos autonom (ANS). În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează sistemul nervos enteric (ENS). În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează axa hipotalamică, pituitară, adrenală (HPA). În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează calea neuroendocrină. În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează calea neuroimună. În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează CNS, ANS, ENS, axa HPA şi/sau căile neuroendocrină şi neuroimună. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de metaboliţi comensali şi/sau permeabilitatea gastrointestinală a unui subiect.
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de către sistemele neurale. Corespunzător, în unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea în sistemele neurale. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea sistemului nervos central. În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea în neuronii senzoriali. În alte realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea în neuronii motori. În unele realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea în ANS. În unele realizări, ANS este sistemul nervos parasimpatic. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea nervului vag. În alte realizări, ANS este sistemul nervos simpatic. În alte realizări, compoziţiile invenţiei modulează semnalizarea în sistemul nervos enteric. În anumite realizări, semnalizarea neuronilor ANS şi ENS răspunde direct la conţinuturile de luminal ale tractului gastrointestinal. În alte realizări, semnalizarea neuronilor ANS şi ENS răspunde indirect la substanţele neurochimice produse de bacteria luminală. În alte realizări, semnalizarea neuronilor ANS şi ENS răspunde la substanţele neurochimice produse de bacteria luminală sau de celulele enteroendocrine. În anumite realizări preferate, neuronii ENS activează aferentele vagale care influenţează funcţiile CNS. În unele realizări, compoziţiile invenţiei reglează activitatea celulelor enterocromafine.
Boli neurodegenerative
Boala Parkinson
Boala Parkinson este o boală neurodegenerativă uzuală caracterizată neuropatologic prin degenerarea populaţiilor eterogene de celule neurale (celule care produc dopamină). Diagnosticul clinic al bolii Parkinson necesită bradikinezie şi cel puţin unul dintre următoarele simptoame de bază: tremur de repaus; rigiditate musculară şi depreciere reflexivă posturală. Alte semne şi simptoame care pot fi prezente sau se pot dezvolta în timpul progresului bolii sunt tulburările autonome (sialoree, seboree, constipaţie, tulburări de micţiune, funcţionare sexuală, hipotensiune ortostatică, hiperhidroză), tulburări de somn şi tulburări în sens de miros sau în sens de temperatură. Boala Parkinson este o boală neurodegenerativă care se poate dezvolta sau persista din cauza disfuncţiei axei microbiotă-intestin-creier. Prin urmare, în realizările preferate, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea bolii Parkinson la un subiect.
În alte realizări preferate, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a bolii Parkinson, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s rARN care este cel puţin 95% identică cu SEQ ID NO:2. Compoziţiile cuprinzând o tulpină bacteriană din genul Megasphaera pot îmbunătăţi funcţiile motoare şi cognitive în modele de boală Parkinson. Tratamentul cu tulpini Megasphaera poate modula semnalizarea în sistemele nervoase central, autonom şi enteric; poate modula activitatea căii axei HPA; poate modula căile de neuroendocrine şi/sau neuroimune; şi poate modula nivelurile de metaboliţi comensali, markeri inflamatori şi/sau permeabilitatea gastrointestinală a unui subiect, care sunt toate implicate în neuropatologia bolii Parkinson. În realizările preferate, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană a speciilor Megasphaera massiliensis pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a bolii Parkinson. Compoziţiile utilizând Megasphaera massiliensis pot fi în special eficiente pentru tratarea bolii Parkinson.
În realizările preferate, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame ale bolii Parkinson la un subiect. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame de bază ale bolii Parkinson la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează bradikinezia la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează tremurul de repaus; rigiditatea musculară şi/sau deprecierea reflexivă posturală la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame asociate cu progresul bolii Parkinson selectate dintre tulburările autonome (sialoree, seboree, constipaţie, tulburări de micţiune, funcţionare sexuală, hipotensiune ortostatică, hiperhidroză), tulburări de somn şi tulburări în sens de miros sau în sens de temperatură.
În realizările preferate, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează simptoamele depresive comorbide cu boala Parkinson. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc memoria verbală şi/sau funcţiile executive. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc atenţia, memoria de lucru, fluenţa verbală şi/sau anxietatea.
În alte realizări preferate, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează disfuncţiile cognitive comorbide cu boala Parkinson.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează progresul bolii Parkinson. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează complicaţiile motoare mai târzii. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează fluctuaţiile motoare tȃrzii. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează pierderea neuronală. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele de demenţă ale bolii Parkinson (PDD). În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează deprecierea funcţiei executive, atenţiei şi/sau a memoriei de lucru. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc neurotransmiterea dopaminergică. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează neurotransmiterea domaminergică alterată.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele bolii Parkinson în conformitate cu o scară simptomatică sau de diagnoză. În anumite realizări, testele pentru evaluarea îmbunătăţirii simptomatice a funcţiei motoare în boala Parkinson sunt constituite de scara de notare unificată a bolii Parkinson. În particular, UPDRS II consideră activitatea de viaţă zilnică şi UPDRS III consideră examinarea motoare.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele asociate cu PDD în conformitate cu un test simptomatic sau de diagnosticare şi/sau scară. În anumite realizări, testul sau scara sunt selectate dintre testul de învăţare verbală Hopkins - revizuit (HVLT-R); sistemul de funcţii executive Delis-Kaplan (D-KEFS) testul de interferenţă culoare-cuvânt; scara de notare a depresiei Hamilton (HAM-D 17; depresie); scara de notare a anxietăţii Hamilton (HAM-A; anxietate) şi scara de notare unificată a bolii Parkinson (UPDRS; severitatea simptomului PD).
În unele realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc scara de impresie clinică globală - îmbunătăţire globală (CGI-I) pentru evaluare psihiatrică şi tulburări neurologice. În unele realizări, compoziţiile invenţiei afişează un efect pozitiv asupra deprecierii sociale globale şi ocupaţionale a subiectului cu boală Parkinson.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică reducerea sau prevenirea pierderii de celule dopaminergice în substantia nigra. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică reducerea sau prevenirea degenerării neuronilor dopaminergici în substantia nigra pars compacta. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică reducerea sau prevenirea degenerării neuronilor dopaminergici în substantia nigra pars compacta şi pierderea ulterioară a fibrei lor nervoase de proiectare în striatum. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică reducerea sau prevenirea pierderii de neuroni dopaminergici nigrostriatali.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică creşterea nivelurilor de dopamină. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică creşterea nivelurilor de DOPAC. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurologice cum ar fi boala Parkinson la un subiect în care respectiva utilizare implică creşterea nivelurilor de dopamină şi DOPAC. În anumite realizări, nivelurile de dopamină şi/sau DOPAC sunt crescute în striatum.
Boala Alzheimer şi demenţa
În DSM-5, termenul demenţă a fost înlocuit cu termenii de tulburare neurocognitivă majoră şi tulburare neurocognitivă uşoară. Tulburarea neurocognitivă este o clasă eterogenă de boli psihiatrice. Cea mai uzuală tulburare neurocognitivă este boala Alzheimer, urmată de demenţa vasculară sau forme amestecate din cele două. Alte forme de tulburări neurodegenerative (de exemplu boală cu corpi Lewy, demenţă frontotemporală, demenţă Parkinson, boală Creutzfeldt-Jakob, boală Huntington, şi sindrom Wernicke-Korsakoff) sunt însoţite de demenţă.
Boala Alzheimer şi demenţa sunt de asemenea caracterizate prin pierdere neuronală, astfel încȃt efectele neuroprotectoare şi neuroproliferative prezentate în exemplele pentru compoziţiile invenţiei au indicat că acestea pot fi utile pentru tratarea sau prevenirea acestor afecţiuni.
Criteriile simptomatice pentru demenţă sub DSM-5 sunt dovada scăderii cognitive semnificative de la un nivel anterior de performanţă în unul sau mai multe domenii cognitive selectate dintre: învăţare şi memorie; limbaj; funcţie executivă; atenţie complexă; cogniţie perceptuală-motoare şi socială. Deficitul cognitiv trebuie să interfere cu independenţa activităţii zilnice. În plus, deficitul cognitiv nu apare exclusiv în contextul unui delir şi nu este mai bine explicat de o altă tulburare mentală (de exemplu MDD sau schizofrenie).
În plus faţă de simptomul primar, subiecţii cu tulburări neurodegenerative afişează simptoame comportamentale şi psihiatrice incluzând agitare, agresiune, depresie, anxietate, apatie, psihoză şi perturbări ale ciclului somn-veghe.
Tulburările neurodegenerative se pot dezvolta sau persista din cauza disfuncţiei axei microbiotă-intestin-creier. Prin urmare, în realizările preferate, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative la un subiect. În realizările preferate, tulburarea neurodegenerativă este boala Alzheimer. În alte realizări, tulburarea neurodegenerativă este selectată dintre demenţele vasculare; forme amestecate de boală Alzheimer şi demenţă vasculară; boală cu corpi Lewy; demenţă frontotemporală; demenţă Parkinson; boală Creutzfeldt-Jakob; boală Huntington; şi sindrom Wernicke-Korsakoff.
În realizări preferate, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame ale tulburărilor neurodegenerative la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează apariţia scăderii cognitive la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc nivelul de performanţă al unui subiect cu tulburări neurodegenerative în unul sau mai multe domenii cognitive selectate dintre: învăţare şi memorie; limbaj; funcţie executivă; atenţie complexă; cogniţie perceptuală-motoare şi socială. În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează apariţia unuia sau mai multor simptoame comportamentale şi psihiatrice asociate cu tulburările neurodegenerative selectate dintre agitare, agresiune, depresie, anxietate, apatie, psihoză şi perturbări ale ciclului somn-veghe.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează boala simptomatică prin intervenţia în mecanismele patogene suspectate la o etapă preclinică. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc modificarea bolii, cu încetinirea sau oprirea progresului simptomului. În unele realizări, încetinirea sau oprirea progresului simptomului se corelează cu dovada în întȃrzierea sublinierii procesului neuropatologic. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele tulburărilor neurodegenerative cuprinzând sporiri cognitive şi îmbunătăţiri funcţionale. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele comportamentale şi psihiatrice de demenţă (BPSD). În realizările preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc abilitatea unui subiect cu tulburare neurodegenerativă de a întreprinde activităţile zilnice.
În realizările preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc atȃt cogniţia cȃt şi funcţionarea la un subiect cu boală Alzheimer. În unele realizări, compoziţia invenţiei îmbunătăţeşte obiectivul cognitiv la un subiect cu boală Alzheimer. În unele realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc obiectivul funcţional la un subiect cu boală Alzheimer. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc obiectivul cognitiv şi funcţional la un subiect cu boală Alzheimer. În încă alte realizări preferate, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc obiectivul clinic global (obiectivul global) la un subiect cu boală Alzheimer.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc simptoamele tulburărilor neurodegenerative în conformitate cu un test simptomatic sau de diagnoză. În anumite realizări, testele pentru evaluarea îmbunătăţirii simptomatice a bolii Alzheimer (şi a altor tulburări neurodegenerative) sunt selectate dintre obiectiv cognitiv, activităţi de trai zilnice, modificări de evaluare globală, teste de sănătate asociate cu calitatea vieţii şi teste de evaluare a simptoamelor comportamentale şi psihiatrice ale tulburărilor neurodegenerative.
În anumite realizări, testele de obiectiv cognitiv pentru evaluarea îmbunătăţirilor simptomatice utilizează subscara cognitivă a scării de evaluare a bolii Alzheimer (ADAS-cog) şi scara ADAS clasică. În anumite realizări, îmbunătăţirea simptomatică a cogniţiei este evaluată utilizând bateria de test neurofiziologic pentru utilizare în boala Alzheimer (NTB).
În unele realizări, evaluarea globală a testului de modificare utilizează scara de impresie clinică globală - îmbunătăţire globală (CGI-I) pentru evaluare psihiatrică şi tulburări neurologice. În unele realizări, scara globală este impresia pe bază de interviu a medicului referitoare la plus modificări (CIBIC-plus). În unele realizări, scara globală este impresia globală a medicului din unitatea de studiu a asociaţiei bolii referitoare la modificări (ADCS-CGIC).
În anumite realizări, măsurile de sănătate asociate cu calitatea vieţii sunt QOL asociat cu boala Alzheimer (ADRQL) şi QOL al bolii Alzheimer (QOL-AD).
În anumite realizări, testele de evaluarea simptoamelor comportamentale şi psihiatrice ale tulburărilor neurodegenerative sunt selectate de scara de notare a bolii Alzheimer în patologia comportamentală (BEHAVE-AD); scara de notare comportamentală pentru demenţă (BRSD); inventarul neuropsihiatric (NPI); şi inventarul de agitaţie Cohen-Mansfield (CMAI).
În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt în special eficiente în prevenirea, reducerea sau atenuarea tulburărilor neurodegenerative când s-au utilizat în combinaţie cu o altă terapie pentru tratarea tulburărilor neurodegenerative. În anumite realizări, astfel de terapii includ inhibitori de acetilcolinesterază incluzând donepezil (Aricept®), galantamină (Razadyne®) şi rivastigmine (Exelon ®), şi memantină.
Scleroza multiplă
Scleroza multiplă (MS) este o boală de demielinare în care teaca de mielină care înconjoară neuronii din creier şi măduva spinării este deteriorată. Cauzele exacte de bază ale MS nu sunt cunoscute, dar se crede că variază între indivizi. Anumite forme de MS sunt ereditare. Factorii de mediu se crede de asemenea că contribuie la MS. La unii indivizi, o combinaţie atȃt genetică cȃt şi de factori de mediu poate declanşa debutul de MS.
Există a largă varietate a simptoamelor asociate cu MS. Subiecţii pot prezenta aproape orice simptom neurologic asociat cu deprecierea controlului autonom, vizual, motor sau senzorial. Simptoamele exacte vor varia depinzând de locul deteriorării/demielinării neuronale.
IL-8 au fost implicat în formarea tecilor de mielină. Compoziţiile invenţiei pot fi prin urmare utilizate în remielinarea neuronilor la subiecţii cu MS. Compoziţiile invenţiei pot fi de asemenea utilizate pentru a proteja neuronii de demielinare. Cu alte cuvinte, compoziţiile invenţiei pot fi utilizate într-o metodă de tratare sau prevenire a sclerozei multiple prin refacerea sau prevenirea pierderii de teci de mielină neuronală.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame ale MS la un subiect. În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează oboseala la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează tremurul de repaus, slăbiciunea muşchilor, spasmul muscular, rigiditatea muşchilor, paraestezia şi/sau ataxia la un subiect. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame asociate cu progresul MS selectate din lista constând din tulburări autonome: constipaţie, tulburări de micţiune, funcţionare sexuală, disfagie, disartrie, sincopă, vȃrtej şi/sau ameţeală; tulburări de somn; şi tulburări în sens de miros sau în sens de temperatură. În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează unul sau mai multe simptoame oculare asociate cu MS. În unele realizări, simptomul ocular este selectat din lista constând din pierderea vederii, durere oculară, orbire la culoare, vedere dublă şi/sau mişcări involuntare ale ochiului la un subiect.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează ameţeala, vȃrtejul, durerea neuropată, durerea musculoskeletală, disfuncţia cognitivă, incontinenţa intestinală, disfagia, disartria, sau orice combinaţie a acestora.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei previn, reduc sau atenuează simptoamele depresive sau de anxietate comorbide cu MS.
În unele realizări, îmbunătăţirea simptoamelor este determinată utilizând criteriile McDonald 2017 pentru diagnosticarea MS.
În anumite realizări, tratamentul cu compoziţiile invenţiei conduc la o reducere în incidenţa MS sau severitatea MS. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea incidenţei de recidivă sau a severităţii de recidivă. În anumite realizări, tratamentul cu compoziţiile invenţiei previne o scădere în funcţionarea motoare sau conduce la îmbunătăţirea funcţionării motoare asociate cu MS. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în prevenirea scăderii în funcţionarea motoare sau pentru utilizare în îmbunătăţirea funcţionării motoare în tratamentul MS. În anumite realizări, tratamentul cu compoziţiile invenţiei previne dezvoltarea paraliziei în MS. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în prevenirea paraliziei în tratamentul MS.
În anumite realizări compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în prevenirea sclerozei multiple la un pacient care a fost identificat cu risc de scleroză multiplă, sau care a fost diagnosticat cu scleroză multiplă în stadiu timpuriu sau cu sleroză multiplă cu „recidivare-remitere«. Compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru prevenirea dezvoltării de MS. Compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru prevenirea progresului de MS. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare la un pacient identificat ca având o predispoziţie genetică la MS, cum ar fi complexul fenotip de clasă II al complexului de histocompatibilitate major (MHC), antigenul de leucocită uman (HLA)-DR2 sau HLA-DR4.
Compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru gestionarea sau atenuarea sclerozei multiple. Compoziţiile invenţiei pot fi în special utile pentru reducerea simptoamelor asociate cu scleroza multiplă. Tratamentul sau prevenirea sclerozei multiple se pot referi la, de exemplu, o ameliorare a severităţii simptomelor sau la o reducere în frecvenţa de exacerbare sau la intervalul de declanşare care sunt o problemă pentru pacient. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei încetinesc sau stopează progresul bolii.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea MS cu recidivă-remisie. În realizări alternative, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea MS progresive, cum ar fi MS progresivă secundară (SPMS), care se dezvoltă în timpul urmăririi diagnosticului de RRMS, MS progresivă primară (PPMS) care prezintă deteriorare neurologică continuă graduală şi MS cu recidivă progresivă (PRMS), care este similară cu PPMS dar care se suprapune cu recidiva.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unuia sau mai multor simptoame de MS selectate din grupul constând din: oboseală, probleme de vedere, amorţeală, furnicături, spasm muscular, rigiditate musculară, slăbiciune a muşchilor, probleme de mobilitate, durere, probleme de gȃndire, învăţare şi planificare, depresie şi anxietate, probleme sexuale, probleme de vezică, probleme intestinale, dificultăţi de vorbire şi înghiţire.
Factori neurochimici, neuropeptide şi neurotransmiţători şi axa microbiotă-intestin-creier
Cum s-a evidenţiat mai sus, axa microbiotă-intestin-creier este modulată de către un număr de diferite sisteme fiziologice. Axa microbiotă-intestin-creier este modulată de către un număr de molecule de semnalizare. Alterările în nivelurile acestor molecule de semnalizare conduc la boli neurodegenerative. Experimentele efectuate de inventatori au indicat că administrarea de specii de Megasphaera, şi în particular de Megasphaera massiliensis, poate modula nivelurile de indol şi kinurenine. Dereglarea acestor metaboliţi poate conduce la boli neurodegenerative, cum ar fi boala Parkinson.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de monoamine ale creierului şi de metaboliţi ai acestora. În realizările preferate metabolitul este kinurenina. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează kinurenina, care este calea principală de metabolism a triptofanului, care serveşte ca o cale pentru producţia de dinucleotidă adenină nicotinamidă (NAD+). Kinurenina poate fi metabolizată la compuşi neuroactivi cum ar fi acidul kinurenic (KYNA) şi 3-hidroxi-1-kinurenină (3-OH-1-KYN), şi în etape suplimentare la acid chinolinic (QUIN). Dereglarea căii de kinurenină poate conduce la activarea sistemului imunitar şi la acumularea de potenţiali compuşi neurotoxici. Alterările în metabolismul kinureninelor pot fi implicate în dezvoltarea bolii Parkinson. S-a demonstrat că nivelurile de kinurenină au scăzut în cortexul frontal, putamen şi substantia nigra pars compacta ale pacienţilor cu PD [32]. Prin urmare, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în creşterea nivelurilor de kinurenină în tratamentul bolii Parkinson.
În anumite realizări ale invenţiei compoziţiile invenţiei pot creştere nivelurile de kinurenină. S-a arătat că nivelurile crescute de kinurenină au atenuat moartea celulei neuronale îndusă de MPP+- in vitro la o linie celulară de neuroblastom dopaminergic uman [33]. În anumite realizări kinurenina şi acidul kinurenic, pot activa receptorul de hidrocarbură aril GI activat (Ahr) şi receptorii GPR35. Activarea receptorului Ahr induce producţia de IL-22, care poate inhiba inflamaţia locală. Activarea de GPR35 induce producţia de trifosfat de inozitol şi mobilizarea de Ca2+.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de indol. În realizări preferate metabolitul este kinurenină. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează kynurenina, care este principala cale a metabolismului triptofanului.
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de către nivelurile de factori neurochimici, neuropeptide şi neurotransmiţători. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de factori neurochimici, neuropeptide şi neurotransmiţători. Corespunzător, în anumite realizări preferate, compoziţiile invenţiei alterează direct biochimia CNS.
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de către nivelurile de acid γ-aminobutiric (GABA). Corespunzător, în realizările preferate, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de GABA. GABA este un neurotransmiţător inhibitor care reduce excitabilitatea neuronală. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei cresc nivelurile de GABA. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei scad nivelurile de GABA. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei alterează neurotransmiterea GABAergică. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelul de transcripţie GABA în diferite regiuni ale sistemului nervos central. În anumite realizări, GABA derivat din comensale traversează bariera hematoencefalică şi afectează direct neurotransmiterea. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei conduc la o reducere a GABA în hipocampus, amigdale şi/sau locus coeruleus. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei conduc la o creştere a GABA în regiunile corticale.
Răspuns imun
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de către alterări în răspunsul imun şi factorii şi markerii inflamatori. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot modula răspunsul imun. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile sistemice ale moleculelor de semnalizare neuroimune în circulaţie. În anumite realizări preferate, compoziţiile invenţiei modulează producţia de citokine pro-inflamatorii şi inflamaţia. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează starea inflamatorie. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei scad producţia şi secreţia de IL-6. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei scad activarea promotorului NFκB. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt capabile să moduleze activarea producţiei de IL-6 prin lipopolizaharidă endotoxină pro-inflamatoare potentă (LPS). În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt capabile să moduleze activarea prootorului NFκB prin LPS şi proteine mutante α-sinucleine cum ar fi A53T. Creşterea nivelurilor de circulaţie ale citokinelor sunt strâns asociate cu diferite tulburări neurodegenerative, incluzând Parkinson, demenţă şi Alzheimer. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea nivelurilor de IL-6 niveluri şi/sau a nivelurilor de NFκB în tratamentul unei tulburări neurodegenerative.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei cresc secreţia de IL-8. IL-8 s-a arătat că induce formarea sau refacerea tecii de mielină sau conservă eficient comunicaţia neuronală. Astfel, în unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în inducerea formării tecii de mielină în tratamentul bolilor neurodegenerative. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în refacerea comunicaţiei neuronale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în conservarea comunicaţiei neuronale.
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de către nivelurile de metaboliţi comensali. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile sistemice de metaboliţi microbiotă. În anumite realizări preferate, compoziţiile invenţiei modulează nivelul de acizi graşi cu catenă scurtă (SCFA). În anumite realizări nivelul de SCFA este crescut sau scăzut. În unele realizări, SCFA este acid butiric (BA) (sau butirat). În unele realizări, SCFA este acid propionic (PPA). În unele realizări, SCFA este acid acetic. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează abilitatea SCFA de a traversa bariera hematoencefalică.
Acetilarea şi deacetilarea histonă sunt regulatori epigenetici importanţi ai expresiei genetice. Un dezechilibru în acetilarea şi deacetilarea histonă poate conduce la apoptoză. Dereglarea unor astfel de histone acetiltransferază a fost implicată în patogeneza asociată cu bolile neurodegenerative asociate cu vârsta, cum ar fi boala Parkinson, boala Huntington, boala Alzheimer, scleroza laterală amiotrofică şi scăderea cognitivă [34]. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot modula acitivitatea de deacetilază histonă. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot reduce activitatea de deacetilază histonă. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot reduce activitatea de acetilază histonă.
Pacienţii cu boli neurodegenerative, incluzând boala Parkinson, boala Huntington, boala Alzheimer şi scleroza laterală amiotrofică, prezintă niveluri ridicate de peroxidare a lipidei. Lipida este vulnerabilă la oxidarea prin specii reactive de oxigen, şi creierul este bogat în acizi graşi polinesaturaţi. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot modula peroxidarea lipidei. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot reduce peroxidarea lipidei. Reducerea deteriorării oxidative cauzată de speciile reactive de oxigen poate fi utilizată pentru a ţinti devreme stadiile bolilor neurodegenerative. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea stadiului timpuriu de neurodegenerare. De asemenea corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în prevenirea dezvoltării unei tulburări neurodegenerative. În astfel de realizări, compoziţiile invenţiei pot fi utilizate la un pacient care a fost identificat cu risc de a dezvolta o tulburare neurodegenerativă.
Semnalizarea axei microbiotă-intesin-creier este modulată de nivelurile de permeabilitate gastrointestinală. Corespunzător, în unele realizări, compoziţiile invenţiei alterează integritatea epiteliului tractului gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează permeabilitate tractului gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează funcţionarea barierei şi integritatea tractului gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează motilitatea tractului gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează translocarea de metaboliţi comensali şi a moleculelor de semnalizare inflamatorii în fluxul sanguin din lumenul tractului gastrointestinal.
Semnalizarea axei microbiotă-intestin-creier este modulată de compoziţia microbiomă din tractul gastrointestinal. Corespunzător, în anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează compoziţia microbiomă a tractului gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn disbioza microbiomă şi creşterea asociată în metaboliţii toxici (de exemplu LPS). În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile de Clostridium din tractul gastrointestinal. În realizările preferate, compoziţiile invenţiei reduc nivelul de Clostridium din tractul gastrointestinal. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc nivelurile de jejuni campilobacteri. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează proliferarea bacteriilor anaerobe nocive şi producţia de neurotoxine produsă de aceste bacterii. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile microbiome de lactobacili şi/sau bifidobacterii. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei modulează nivelurile microbiome de Sutterella, Prevotella, Ruminococcus genera şi/sau din familia Alcaligenaceae. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei cresc nivelul de Lactobacillus plantarum şi/sau Saccharomyces boulardii.
Leziunea creierului
Exemplele demonstrează că, compoziţiile invenţiei sunt neuroprotectoare şi au activitate inhibitoare HDAC. HDAC2 este o ţintă crucială pentru recuperarea funcţională dintr-un accident vascular cerebral [35] şi inhibarea HDAC poate preveni leziunea materiei albe [36], deci compoziţiile invenţiei pot fi utile în tratamentul leziunii creierului.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului. În unele realizări, leziunea creierului este o leziune traumatică a creierului. În unele realizări, leziunea creierului este o leziune dobândită a creierului. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă din traumă. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă dintr-o tumoare. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă dintr-un accident vascular cerebral. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierlui care rezultă dintr-o hemoragie a creierului. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă din encefalită. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă din hipoxia cerebrală. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului care rezultă din anoxia cerebrală.
În realizările preferate, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral. Efectele prezentate în exemple sunt în special relevante pentru tratamentul accidentului vascular cerebral. Accidentul vascular cerebral are loc când curgerea sângelui în cel puţin o parte a creierului este întreruptă. Fără o alimentare adecvată cu sânge pentru a furniza oxigen şi nutrienţi ţesutului cerebral şi pentru a îndepărta deşeurile produse din ţesutul cerebral, celulele creierului încep să moară rapid. Simptoamele accidentului vascular cerebral sunt dependente de regiunea creierului care este afectată de curgerea inadecvată a sângelui. Simptoamele includ paralizie, amorţeală sau slăbiciune a muşchilor, pierderea echilibrului, ameţeală, dureri de cap severe bruşte, deprecierea vorbirii, pierdere de memorie, pierderea abilităţii de mişcare, confuzie bruscă, deprecierea vederii, comă sau chiar deces. Un accident vascular cerebral este de asemenea referit ca atac cerebral sau accident cardiovascular (CVA). Simptoamele accidentului vascular cerebral pot fi scurte dacă curgerea adecvată a sângelui este restabilită într-o perioadă scurtă de timp. Totuşi, dacă curgerea inadecvată a sângelui continuă pe o perioadă de timp semnificativă, simptoamele pot fi permanente.
În unele realizări, accidentul vascular cerebral este ischemia cerebrală. Ischemia cerebrală apare când există o curgere insuficientă de sânge la ţesuturile creierului pentru a îndeplini cererea metabolică. În unele realizări, ischemia cerebrală este ischemie cerebrală focală, adică limitată la o regiune specifică a creierului. În unele realizări ischemia cerebrală este ischemie cerebrală globală, adică care cuprinde o zonă largă a ţesutului cerebral. Ischemia cerebrală focală are loc în mod obişnuit când un vas cerebral devine blocat, parţial sau complet, reducȃnd fluxul de sânge la o regiune specifică a creierului. În unele realizări ischemia cerebrală focală este accidentul vascular cerebral ischemic. În unele realizări, accidentul vascular cerebral ischemic este trombotic, adică cauzat de o trombă sau cheag de sânge, care se dezvoltă într-un vas cerebral şi restricţionează sau blochează curgerea sângelui. În unele realizări accidentul vascular cerebral ischemic este un accident vascular cerebral trombotic. În unele realizări, accidentul vascular cerebral ischemic este embolic, adică cauzat de o embolie, sau o masă neataşată care trece prin fluxul sanguin şi restricţionează sau blochează curgerea sângelui la un loc distant faţă de punctul său de origine. În unele realizări accidentul vascular cerebral ischemic este un accident vascular cerebral embolic. Ischemia cerebrală globală are loc în mod obişnuit când curgerea sângelui la creier ca întreg este blocată sau redusă. În unele realizări ischemia cerebrală globală este cauzată de hipoperfuzie, adică din cauza şocului. În unele realizări ischemia cerebrală globală este un rezultat al unui stop cardiac.
În unele realizări subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o ischemie cerebrală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o ischemie cerebrală focală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un accident vascular cerebral ischemic. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un accident vascular cerebral trombotic. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un accident vascular cerebral embolic. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit ischemie cerebrală globală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit hioperfuzie. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un stop cardiac.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea ischemiei cerebrale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea ischemiei cerebrale focale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral ischemic. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral trombotic. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral embolic. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea ischemiei cerebrale globale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea hipoperfuziei.
În unele realizări, accidentul vascular cerebral este un accident vascular cerebral hemoragic. Accidentul vascular cerebral hemoragic este cauzat de sȃngerarea în sau în jurul creierului conducând la umflarea, presiunea şi deteriorarea celulelor şi ţesuturilor creierului. Accidentul vascular cerebral hemoragic este în mod obişnuit un rezultat al unui vas de sȃnge slăbit care se rupe şi sȃngerează în înconjurul creierului. În unele realizări, accidentul vascular cerebral hemoragic este o hemoragie intracerebrală, adică cauzată de sȃngerarea în ţesutul cerebral însuşi. În unele realizări hemoragia intracerebrală este cauzată de o hemoragie intraparenchimală. În unele realizări hemoragia intracerebrală este cauzată de o hemoragie intraventriculară. În unele realizări accidentul vascular cerebral hemoragic este o hemoragie subarahnoidă adică sȃngerarea care apare exterior ţesutului cerebral dar încă în cavitatea craniană. În unele realizări, accidentul vascular cerebral hemoragic este un rezultat al angiopatiei amiloide cerebrale. În unele realizări, accidentul vascular cerebral hemoragic este un rezultat al unui anevrism al creierului. În unele realizări, accidentul vascular cerebral hemoragic este un rezultat al malformării anteriovenoase cerebrale (AVM).
În unele realizări subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un accident vascular cerebral hemoragic. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o hemoragie intracerebrală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o hemoragie intraparenchimală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o hemoragie intraventriculară. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o hemoragie subarahnoidă. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit o angiopatie amiloidă cerebrală. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un anevrism al creierului. În unele realizări, subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un AVM cerebral.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral hemoragic. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unei hemoragii intracerebrale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unei hemoragii intraparenchimale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unei hemoragii intraventriculare. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unei hemoragii subarahnoide. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unei angiopatii amiloide cerebrale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unui anevrism al creierului. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unui AVM cerebral.
Restabilirea curgerii adecvate a sângelui la creier după o perioadă de întrerupere, deşi eficientă în atenuarea simptoamelor asociate cu accidentul vascular cerebral, poate conduce paradoxal la deteriorarea în continuare a ţesutului cerebral. În timpul perioadei de întrerupere, ţesutul afectat suferă de o lipsă de oxigen şi nutrienţi, şi restabilirea bruscă a curgerii sângelui poate conduce la inflamaţie şi deteriorare oxidativă prin inducerea de stres oxidativ. Acest lucru este cunoscut ca leziune de reperfuzie, şi este bine documentat, nu numai după un accident vascular cerebral, ci de asemenea şi după un atac de cord sau altă deteriorare a ţesutului când aportul de sânge se întoarce în ţesut după o perioadă de ischemie sau lipsă de oxigen. În unele realizări subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit de leziune de reperfuzie ca rezultat al accidentului vascular cerebral. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii de reperfuzie ca rezultat al accidentului vascular cerebral.
Un atac ischemic tranzitoriu (TIA), referit adesea ca mini-accident vascular cerebral, este un semnal de alarmă recunoscut pentru un accident vascular cerebral mai serios. Subiecţii care au suferit unul sau mai multe TIA sunt prin urmare la un risc mai mare de accident vascular cerebral. În unele realizări subiectul diagnosticat cu leziunea creierului a suferit un TIA. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea unui TIA. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului la un subiect care a suferit un TIA.
Presiunea sanguină ridicată, colesterolul ridicat din sânge, un istoric familial al accidentului vascular cerebral, bolile de inimă, diabetul, anevrismul creierului, malformaţiile arteriovenoase, boala celulei sickle, vasculita, tulburările de sȃngerare, utilizarea unor medicamente anti-inflamatoare nonsteroidiene (NSAID), fumatul, consumul mare de cantităţi de alcool, utilizarea medicamentelor ilegale, obezitatea, lipsa de activitate fizică şi o dietă nesănătoasă sunt toate considerate a fi factori de risc pentru accidentul vascular cerebral. În particular, scăderea presiunii sanguine a fost prezentată ca o concluzie pentru a preveni atȃt accidentul vascular cerebral ischemic cȃt şi pe cel hemoragic [37, 38]. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în tratarea leziunii creierului la un subiect care are cel puţin un factor de risc pentru accidentul vascular cerebral. În unele realizări subiectul are doi factori de risc pentru accidentul vascular cerebral. În unele realizări subiectul are trei factori de risc pentru accidentul vascular cerebral. În unele realizări subiectul are patru factori de risc pentru accidentul vascular cerebral. În unele realizări subiectul are mai mult de patru factori de risc pentru accidentul vascular cerebral. În unele realizări subiectul are presiune sanguină ridicată. În unele realizări subiectul are colesterol ridicat în sânge. În unele realizări subiectul are un istoric familial al accidentului vascular cerebral. În unele realizări subiectul are o boală de inimă. În unele realizări subiectul are diabet. În unele realizări subiectul are un anevrism al creierului. În unele realizări subiectul are malformaţii arteriovenoase. În unele realizări subiectul are vasculită. În unele realizări subiectul are boala celulei sickle. În unele realizări subiectul are o tulburare de sȃngerare. În unele realizări subiectul are un istoric de utilizare a unor medicamente anti-inflamatoare nonsteroidiene (NSAID). În unele realizări subiectul fumează. În unele realizări subiectul consumă cantităţi mari de alcool. În unele realizări subiectul utilizeează medicamente ilegale. În unele realizări subiectul este obez. În unele realizări subiectul este supraponderal. În unele realizări subiectul are o lipsă de activitate fizică. În unele realizări subiectul are o dietă nesănătoasă.
Exemplele au indicat că compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea leziunii creierului şi ajută la recuperare când se administrează înainte de a avea loc evenimentul leziunii. Prin urmare, compoziţiile invenţiei pot fi în special utile pentru tratarea leziunii creierului când se administrează la subiecţii cu risc de leziune a creierului, cum ar fi accidentul vascular cerebral.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în reducerea deteriorării cauzate de o potenţială leziune a creierului, preferabil un accident vascular cerebral. Compoziţiile pot reduce deteriorarea cauzată când ele sunt administrate înainte ca potenţiala leziune a creierului să aibă loc, în particular când se administrează unui pacient identificat cu risc de leziune a creierului.
Exemplele au indicat că compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru tratarea leziunii creierului şi ajuta la recuperare când se administrează după ce are loc evenimentul leziunii. Prin urmare, compoziţiile invenţiei pot fi în special utile pentru tratarea leziunii creierului când se administrează la subiecţi după o leziune a creierului, cum ar fi accidentul vascular cerebral.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin reducerea deteriorării motorii. În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin îmbunătăţirea funcţionării motorii. În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin îmbunătăţirea rezistenţei muşchilor. În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin îmbunătăţirea memoriei. În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin îmbunătăţirea recunoaşterii sociale. În unele realizări, compoziţiile invenţiei tratează leziunea creierului prin îmbunătăţirea funcţionării neurologice.
Tratamentul leziunii creierului se poate referi la, de exemplu, o ameliorare a severităţii simptoamelor. Tratamentul leziunii creierului se poate referi de asemenea la o reducere a deprecierii neurologice după accidentul vascular cerebral. Compoziţiile invenţiei pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral pot fi furnizate către subiect înaintea debutuluiul accidentului vascular cerebral, de exemplu la un pacient identificat cu risc de accident vascular cerebral. Compoziţiile invenţiei pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral pot fi furnizate după ce accidentul vascular cerebral a avut loc, de exemplu, în timpul recuperării. Compoziţiile invenţiei pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral pot fi furnizate în timpul fazei acute de recuperare (adică până la o săptămână după accidentul vascular cerebral). Compoziţiile invenţiei pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral pot fi furnizate în timpul fazei subacute de recuperare (adică de la o săptămână până la trei luni după accidentul vascular cerebral). Compoziţiile invenţiei pentru utilizare în tratarea accidentului vascular cerebral pot fi furnizate în timpul fazei cronice de recuperare (de la trei luni după accidentul vascular cerebral).
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în combinaţie cu un agent activ secundar. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în combinaţie cu aspirina sau cu un activator plasminogen al ţesutului (tPA). Alţi agenţi secundari includ alte antitrombocite (cum ar fi clopidogrel), anticoagulanţi (cum ar fi heparin, warfarin, apixaban, dabigatran, edoxaban sau rivaroxaban), antihipertensive (cum ar fi diuretice, inhibitori ai ACE, blocanţi ai canalelor de calciu, beta-blocanţi sau alfa-blocanţi) sau statine. Compoziţiile invenţiei pot îmbunătăţi răspunsul pacientului la agentul activ secundar.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc efectul ischemiei asupra ţesuturilor. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc cantitatea de ţesut deteriorată cauzată de ischemie. În anumite realizări, ţesuturile deteriorate de ischemie sunt ţesuturi cerebrale. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc necroza sau numărul de celule necrotice. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc apoptoza sau numărul de celule apoptotice. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei reduc numărul celule necrotice şi apoptotice. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn moartea celulei prin necroză şi/sau apoptoză. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei previn moartea celulei prin necroză şi/sau apoptoză cauzate de ischemie. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc recuperarea ţesutului deteriorat de ischemie. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc viteza de îndepărtare a celulelor necrotice şi/sau celulelor apoptotice. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc eficacitatea îndepărtării celulelor necrotice şi/sau a celulelor apoptotice. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc înlocuirea şi/sau regenerarea celulelor în ţesuturi. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc înlocuirea şi/sau regenerarea celulelor în ţesuturile deteriorate de ischemie. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei îmbunătăţesc histologia globală a ţesutului (de exemplu după o biopsie).
Moduri de administrare
Preferabil, compoziţiile invenţiei trebuie să fie administrate în tractul gastrointestinal pentru a permite livrarea la, şi/sau colonizarea parţială sau totală a intestinului cu tulpina bacteriană a invenţiei. În general, compoziţiile invenţiei sunt administrate oral, dar ele pot fi administrate rectal, intranazal, sau pe cale bucală sau sublinguală.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot fi administrate ca spumă, ca pulverizator sau ca gel.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei pot fi administrate ca supozitoare, cum ar fi un supozitor rectal, de exemplu în forma unui ulei de teobromă (unt de cacao), grăsime sintetică dură (de exemplu suppocire, witepsol), glicero-gelatină, polietilen glicol, sau compoziţie de săpun cu glicerină.
În anumite realizări, compoziţia invenţiei este administrată în tractul gastrointestinal printr-un tub, cum ar fi un tub nasogastric, un tub orogastric, un tub gastric, un tub de jejunostomie (tub J), gastrostomie endoscopică percutanată (PEG), sau un port, cum ar fi un port pe peretele pieptului care furnizează acces la stomac, jejun şi alte porturi de acces adecvate.
Compoziţiile invenţiei pot fi administrate o dată, sau pot fi administrate secvenţial ca parte a unui regim de tratament. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei trebuie să fie administrate zilnic.
În anumite realizări ale invenţiei, tratamentul conform invenţiei este însoţit de evaluarea microbiotei intestinale a pacientului. Tratamentul poate fi repetat dacă livrarea şi/sau colonizarea parţială sau totală cu tulpina invenţiei nu este obţinută astfel încât nu se observă eficacitatea, sau tratamentul poate fi oprit dacă livrarea şi/sau colonizarea parţială sau totală este cu succes şi se observă eficacitatea.
În anumite realizări, compoziţia invenţiei poate fi administrată unui animal însărcinat, de exemplu un mamifer cum ar fi un om pentru a preveni dezvoltarea unei boli inflamatorii sau autoimune la copilul acestuia în utero şi/sau după ce este născut.
Compoziţiile invenţiei pot fi administrate unui pacient care a fost diagnosticat cu o boală neurodegenerativă, sau care a fost identificat cu risc de o boală neurodegenerativă. Compoziţiile pot fi de asemenea administrate ca măsură profilactică pentru a preveni dezvoltarea bolii neurodegenerative la un pacient sănătos.
Compoziţiile invenţiei pot fi administrate unui pacient care a fost identificat ca având o microbiotă intestinală anormală. De exemplu, pacientul poate avea o colonizare redusă sau absentă de Megasphaera, şi în particular de Megasphaera massiliensis.
Compoziţiile invenţiei pot fi administrate ca produs alimentar, cum ar fi un supliment nutriţional.
În general, compoziţiile invenţiei sunt pentru tratamentul oamenilor, deşi ele pot fi utilizate pentru a trata animale incluzând mamifere monogastrice cum ar fi păsările de curte, porcii, pisicile, câinii, caii sau iepurii. Compoziţiile invenţiei pot fi utile pentru amplificarea creşterii şi performanţei animalelor. Dacă sunt administrate la animale, poate fi utilizat gavajul oral.
Compoziţii
În general, compoziţia invenţiei cuprinde bacterii. În realizările preferate ale invenţiei, compoziţia este formulată în formă criodesicată. De exemplu, compoziţia invenţiei poate cuprinde granule sau capsule de gelatină, de exemplu capsule de gelatină tari, cuprinzând o tulpină bacteriană a invenţiei.
Preferabil, compoziţia invenţiei cuprinde bacterii liofilizate. Liofilizarea bacteriei este o procedură bine-stabilită şi ghidarea relevantă este disponibilă în, de exemplu, referirile [39], [], [41]].
Alternativ, compoziţia invenţiei poate cuprinde o cultură bacteriană vie, activă.
În unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei nu a fost inactivată, de exemplu, nu a fost inactivată la căldură. În unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei nu a fost omorȃtă, de exemplu, nu a fost omorȃtă la căldură. În unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei nu a fost atenuată, de exemplu, nu a fost atenuată la căldură. De exemplu, în unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei nu a fost omorȃtă, inactivată şi/sau atenuată. De exemplu, în unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei este vie. De exemplu, în unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei este viabilă. De exemplu, în unele realizări, tulpină bacteriană din compoziţia invenţiei este capabilă să colonizeze parţial sau total intestinul. De exemplu, în unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţia invenţiei este viabilă şi capabilă să colonizeze parţial sau total intestinul.
În unele realizări, compoziţia cuprinde un amestec de tulpini bacteriene vii şi tulpini bacteriene care au fost omorȃte.
În realizările preferate, compoziţia invenţiei este încapsulată pentru a permite livrarea tulpinii bacteriene în intestin. Încapsularea protejează compoziţia de degradare până la livrarea la locaţia ţintă prin, de exemplu, ruperea cu stimuli chimici sau fizici cum ar fi presiunea, activitatea enzimatică, sau dezintegrarea fizică, care poate fi declanşată de modificări în pH. Poate fi utilizată orice metodă de încapsulare adecvată. Exemple de tehnici de încapsulare includ captarea într-o matrice poroasă, ataşarea sau adsorbţia pe suprafeţe solide purtătoare, auto-agregarea prin floculare sau cu agenţi de reticulare, şi conţinutul mecanic de după o membrană sau microcapsulă microporoasă. Ghidarea pe încapsulare care poate fi utilă pentru prepararea compoziţiilor invenţiei este disponibilă în, de exemplu, referirile [42] şi [43].
Compoziţia poate fi administrată oral şi poate fi în forma unei tablete, capsule sau pulberi. Produsele încapsulate sunt preferate deoarece Megasphaera sunt anaerobe. Alte ingrediente (cum ar fi vitamina C, de exemplu), pot fi incluse ca debarasatori de oxigen şi substraturi prebiotice pentru a îmbunătăţi livrarea şi/sau colonizarea parţială sau totală şi supravieţuirea in vivo. Alternativ, compoziţia probiotică a invenţiei poate fi administrată oral ca aliment sau produs nutriţional, cum ar fi produse lactate fermentate pe bază de lapte sau zer, sau ca produs farmaceutic.
Compoziţia poate fi formulată ca probiotic.
O compoziţie a invenţiei include o cantitate eficientă terapeutic dintr-o tulpină bacteriană a invenţiei. O cantitate eficientă terapeutic dintr-o tulpină bacteriană este suficientă pentru a exercita un efect benefic asupra unui pacient. O cantitate eficientă terapeutic dintr-o tulpină bacteriană poate fi suficientă pentru a conduce la livrarea la şi/sau colonizarea parţială sau totală a intestinului pacientului.
O doză zilnică adecvată de bacterie, de exemplu pentru un adult uman, poate fi de la aproximativ 1 x 103 până la aproximativ 1 x 1011 unităţi de formare a coloniilor (CFU); de exemplu, de la aproximativ 1 x 107 până la aproximativ 1 x 1010 CFU; într-un alt exemplu, de la aproximativ 1 x 106 până la aproximativ 1 x 1010 CFU.
În anumite realizări, compoziţia conţine tulpina bacteriană într-o cantitate de la aproximativ 1 x 106 până la aproximativ 1 x 1011 CFU/g, în raport cu greutatea compoziţiei; de exemplu, de la aproximativ 1 x 108 până la aproximativ 1 x 1010 CFU/g. Doza poate fi, de exemplu, de 1 g, 3g, 5g, şi 10g.
De obicei, un probiotic, cum ar fi compoziţia invenţiei, este opţional combinat cu cel puţin un compus prebiotic adecvat. Un compus prebiotic este uzual un carbohidrat nedigerabil cum ar fi o oligo sau polizaharidă, sau un alcool din zahăr, care nu este degradat sau absorbit în tractul digestiv superior. Prebioticele cunoscute includ produse comerciale cum ar fi inulina şi transgalacto-oligozaharidele.
În anumite realizări, compoziţia probiotică a prezentei invenţii include un compus prebiotic într-o cantitate de la aproximativ 1 până la aproximativ 30% din masă, în raport cu greutatea totală a compoziţiei, (de exemplu de la 5 până la 20% din masă). Carbohidraţii pot fi selectaţi din grupul constând din: fructo-oligozaharide (sau FOS), fructo-oligozaharide cu catenă scurtă, inulină, isomalt-oligozaharide, pectine, xilo-oligozaharide (sau XOS), chitosan-oligozaharide (sau COS), beta-glucani, gumă arabilă modificată şi amidonuri rezistente, polidextroze, D-tagatoze, fibre de acacia, roşcovă, ovăz, şi fibre citrice. Într-un aspect, prebioticele sunt fructo-oligozaharide cu catenă scurtă (pentru simplitate prezentate aici mai jos ca FOSs-c.c); respectivele FOSs-c.c. nu sunt carbohidraţi digerabili, obţinuţi în general prin conversia sfeclei de zahăr şi incluzând o moleculă de zaharoză la care sunt legate trei molecule de glucoză.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt utilizate în combinaţie cu un alt compus terapeutic pentru tratarea sau prevenirea tulburării neurodegenerative. În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt administrate cu supliment nutriţional care modulează neuroprotecţia sau neuroproliferarea. În realizările preferate, suplimentul nutriţional cuprinde sau constă din vitamine nutriţionale. În anumite realizări, vitaminele sunt vitamina B6, magneziu, dimetilglicină (vitamină B16) şi vitamina C. În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt administrate în combinaţie cu un alt probiotic.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei sunt pentru utilizare în amplificarea efectului unui agent secundar asupra unei boli neurodegenerative. Efectele modulatoare imune ale compoziţiilor invenţiei pot face creierul mai susceptibil la terapii convenţionale cum ar fi Levodopa, agonişti de dopaminăi, inhibitori MAO-B, inhibitori COMT, antagonişti de glutamat, sau anticolinergice, care sunt exemple de agenţi secundari pentru a fi administraţi în combinaţie (secvenţial sau în acelaşi timp) cu compoziţiile invenţiei.
Compoziţiile invenţiei pot cuprinde excipienţi sau purtători acceptabili farmaceutic. Exemple de astfel de excipienţi adecvaţi pot fi găsite în referinţa [44]. Purtătorii sau diluanţii acceptabili pentru utilizare terapeutică sunt bine cunoscuţi în domeniul farmaceutic şi sunt descrişi, de exemplu, în referinţa [45]. Exemple de purtători adecvaţi includ lactoză, amidon, glucoză, metil celuloză, stearat de magneziu, manitol, sorbitol şi altele asemenea. Exemple de diluanţi adecvaţi includ etanol, glicerol şi apă. Alegerea purtătorului, excipientului sau diluantului farmaceutic, poate fi selectată cu privire la calea de administrare intenţionată şi practica farmaceutică standard. Compoziţiile farmaceutice pot cuprinde ca, sau în plus faţă de, purtător, excipient sau diluant orice lianţi, lubrifianţi, agenţi de punere în suspensie, agenţi de acoperire, agenţi de solubilizare adecvaţi. Exemple de lianţi adecvaţi includ amidon, gelatină, zaharuri naturale cum ar fi glucoză, lactoză anhidră, lactoză cu curgere liberă, beta-lactoză, îndulcitori din porumb, gume naturale şi sintetice, cum ar fi acacia, tragacant sau alginat de sodiu, carboximetil celuloză şi polietilen glicol. Exemple de lubrifianţi adecvaţi includ oleat de sodiu, stearat de sodiu, stearat de magneziu, benzoat de sodiu, acetat de sodiu, clorură de sodiu şi altele asemenea. Conservanţii, stabilizatorii, coloranţii şi chiar agenţii de aromatizare pot fi furnizaţi în compoziţia farmaceutică. Exemple de conservanţi includ benzoat de sodiu, acid sorbic şi esteri ai acidului p-hidroxibenzoic. Antioxidanţii şi agenţii de punere în suspensie pot fi de asemenea utilizaţi.
Compoziţiile invenţiei pot fi formulate ca produse alimentare. De exemplu, un produs alimentar poate furniza beneficii nutriţionale în plus faţă de efectul terapeutic al invenţiei, cum ar fi într-un supliment nutriţional. În mod similar, un produs alimentar poate fi formulat pentru a ameliora gustul compoziţiei invenţiei sau pentru a face compoziţia mai atractivă pentru consum, fiind mai asemănătoare cu un produs alimentar comun, mai degrabă decât cu o compoziţie farmaceutică. În anumite realizări, compoziţia invenţiei este formulată ca produs pe bază de lapte. Termenul „produs pe bază de lapte« înseamnă orice produs pe bază de lapte sau zer, lichid sau semi-solid, care are un conţinut de grăsime variabil. Produsul pe bază de lapte poate fi, de exemplu, lapte de vacă, lapte de capră, lapte de oaie, lapte degresat, lapte integral, lapte recombinat din lapte praf şi zer fără orice procesare, sau un produs procesat, cum ar fi iaurtul, laptele prins, caşul, laptele acru, laptele acru integral, laptele de unt şi alte produse de lapte acru. Un alt grup important include băuturile din lapte, cum ar fi băuturi din zer, lapte fermentat, lapte condensat, lapte pentru nou născuţi sau copii; lapte aromat, îngheţată; lapte care conţine alimente cum ar fi dulciurile.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind una sau mai multe tulpini bacteriene din genul Megasphaera şi nu conţin bacterii din nici un alt gen, sau care cuprind numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii dintr-un alt gen. Astfel, în unele realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând una sau mai multe tulpini bacteriene din genul Megasphaera, care nu conţine bacterii din nici un alt gen sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii dintr-un alt gen, pentru utilizare în terapie.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind una sau mai multe tulpini bacteriene ale speciilor Megasphaera massiliensis şi nu conţin bacterii din nici o altă specie, sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii din alte specii. Astfel, în unele realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând una sau mai multe tulpini bacteriene ale speciilor Megasphaera massiliensis, care nu conţine bacterii din nici o altă specie sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii dintr-o altă specie, pentru utilizare în terapie.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind una sau mai multe tulpini bacteriene ale speciilor Megasphaera massiliensis şi nu conţin bacterii din nici o altă specie de Megasphaera, sau care cuprind numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii dintr-o altă specie de Megasphaera. Astfel, în unele realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând una sau mai multe tulpini bacteriene ale speciilor Megasphaera massiliensis, care nu conţine bacterii din nici o altă specie Megasphaera sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii de la o altă specie Megasphaera, pentru utilizare în terapie.
În anumite realizări, compoziţiile invenţiei conţin o singură tulpină bacteriană sau specie şi nu conţin nici o altă tulpină bacteriană sau specie. Astfel de compoziţii pot cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de alte tulpini bacteriene sau specii. Astfel de compoziţii pot fi o cultură care este substanţial fără alte specii de organisme.
În unele realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o singură tulpină bacteriană din genul Megasphaera, care nu conţine bacterii din nici o altă tulpină sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii dintr-o altă tulpină pentru utilizare în terapie.
În unele realizări, invenţia furnizează o compoziţie cuprinzând o singură tulpină bacteriană a speciilor Megasphaera massiliensis, care nu conţine bacterii din nici o altă tulpină sau care cuprinde numai de minimis sau cantităţi irelevante biologic de bacterii de la o altă tulpină pentru utilizare în terapie.
În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind mai mult de o tulpină bacteriană. De exemplu, în unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind mai mult de o tulpină din aceeaşi specie (de exemplu mai mult de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 sau 45 tulpini), şi, opţional, nu conţin bacterii de la nici o altă specie. În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind mai puţin de 50 tulpini din aceeaşi specie (de exemplu mai puţin de 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 sau 3 tulpini), şi, opţional, nu conţin bacterii din nici o altă specie. În unele realizări, compoziţiile invenţiei cuprind 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25, sau 31-50 tulpini de la aceeaşi specie şi, opţional, nu conţin bacterii de la nici o altă specie. Invenţia cuprinde orice combinaţie a celor anterioare.
În unele realizări, compoziţia cuprinde un consorţiu microbian. De exemplu, în unele realizări, compoziţia cuprinde tulpina bacteriană Megasphaera ca parte a unui consorţiu microbian. De exemplu, în unele realizări, tulpina bacteriană Megasphaera este prezentă în combinaţie cu una sau mai multe (de exemplu cel puţin 2, 3, 4, 5, 10, 15 sau 20) alte tulpini bacteriene din alt gen, cu care ea poate trăi simbiotic in vivo în intestin. De exemplu, în unele realizări, compoziţia cuprinde o tulpină bacteriană de Megasphaera în combinaţie cu o tulpină bacteriană dintr-un gen diferit. În unele realizări, consorţiul microbian cuprinde două sau mai multe tulpini bacteriene obţinute dintr-o mostră de excremente a unui singur organism, de exemplu un om. În unele realizări, consorţiul microbian nu este găsit împreună în natură. De exemplu, în unele realizări, consorţiul microbian cuprinde tulpini bacteriene obţinute de la mostre de excremente de la cel puţin două organisme diferite. În unele realizări, cele două organisme diferite sunt de la aceeaşi specie, de exemplu de la doi oameni diferiţi. În unele realizări, cele două organisme diferite sunt un copil uman şi un adult uman. În unele realizări, cele două organisme diferite sunt un om şi un mamifer non-uman.
În unele realizări, compoziţia invenţiei cuprinde suplimentar o tulpină bacteriană care are aceleaşi caracteristici de siguranţă şi eficacitate terapeutică ca tulpina MRx0029, dar care nu este MRx0029, sau care nu este o Megasphaera massiliensis.
În unele realizări în care compoziţia invenţiei cuprinde mai mult de o tulpină bacteriană, specie sau gen, tulpinile bacteriene individuale, speciile sau genurile pot fi pentru administrare separată, simultană sau secvenţială. De exemplu, compoziţia poate cuprinde toate din cele mai mult de o tulpină bacteriană, specie sau gen, sau tulpinile bacteriene, speciile sau genurile pot fi depozitate separat şi pot fi administrate separat, simultan sau secvenţial. În unele realizări, mai mult de o tulpină bacteriană, specie sau gen sunt depozitate separat dar sunt amestecate împreună înainte de utilizare.
În unele realizări, tulpina bacteriană pentru utilizare în invenţie este obţinută din excremente de adult uman. În unele realizări în care compoziţia invenţiei cuprinde mai mult de o tulpină bacteriană, toate dintre tulpinile bacteriene sunt obţinute din excremente de adult uman sau dacă alte tulpini bacteriene sunt prezente, ele sunt prezente numai în cantităţi de minimis. Bacteria poate a fost cultivată ulterior de a fi obţinută din excremente de adult uman şi de a fi utilizată într-o compoziţie a invenţiei.
Cum s-a menţionat mai sus, în unele realizări, una sau mai multe tulpini bacteriene Megasphaera este/sunt singurul agent activ terapeutic într-o compoziţie a invenţiei. În unele realizări, tulpina bacteriană din compoziţie este singurul agent activ terapeutic într-o compoziţie a invenţiei.
Compoziţiile pentru utilizare conform invenţiei pot sau pot să nu necesite aprobarea de piaţă.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care respectiva tulpină bacteriană este liofilizată. În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care respectiva tulpină bacteriană este pulverizată uscat. În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care tulpina bacteriană este liofilizată sau pulverizată uscat şi în care este vie. În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care tulpina bacteriană este liofilizată sau pulverizată uscat şi în care este viabilă. În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care tulpina bacteriană este liofilizată sau pulverizată uscat şi în care este capabilă să colonizeze parţial sau total intestinul. În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care tulpina bacteriană este liofilizată sau pulverizată uscat şi în care este viabilă şi capabilă să colonizeze parţial sau total intestinul.
În unele cazuri, tulpina bacteriană liofilizată este reconstituită înainte de administrare. În unele cazuri, reconstituirea este prin utilizarea unui diluant descris aici.
Compoziţiile invenţiei pot cuprinde excipienţi, diluanţi sau purtători acceptabili farmaceutic.
În anumite realizări, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică cuprinzând: o tulpină bacteriană a invenţiei; şi un excipient, purtător sau diluant acceptabil farmaceutic; în care tulpina bacteriană este într-o cantitate suficientă pentru a trata o tulburare neurodegenerativă când este administrată unui subiect care are nevoie de aceasta.
În anumite realizări, invenţia furnizează o compoziţie farmaceutică cuprinzând: o tulpină bacteriană a invenţiei; şi un excipient, purtător sau diluant acceptabil farmaceutic; în care tulpina bacteriană este într-o cantitate suficientă pentru a trata sau preveni o tulburare neurodegenerativă.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care cantitatea de tulpină bacteriană este de la aproximativ 1 × 103 până la aproximativ 1 × 1011 unităţi de formare a coloniilor pe gram faţă de greutatea compoziţiei.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care compoziţia este administrată la o doză de 1 g, 3 g, 5 g sau 10 g.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care compoziţia este administrată printr-o metodă selectată din grupul constând din orală, rectală, subcutanată, nazală, bucală, şi sublinguală.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, cuprinzând un purtător selectat din grupul constând din lactoză, amidon, glucoză, metil celuloză, stearat de magneziu, manitol şi sorbitol.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, cuprinzând un diluant selectat din grupul constând din etanol, glicerol şi apă.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, cuprinzând un excipient selectat din grupul constând din amidon, gelatină, glucoză, lactoză anhidră, lactoză curgatoare liber, beta-lactoză, îndulcitor din porumb, acacia, tragacant, alginat de sodiu, carboximetil celuloză, polietilen glicol, oleat de sodiu, stearat de sodiu, stearat de magneziu, benzoat de sodiu, acetat de sodiu şi clorură de sodiu.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, cuprinzând în plus cel puţin un conservant, un antioxidant şi un stabilizator.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, cuprinzând un conservant selectat din grupul constând din benzoat de sodiu, acid sorbic şi esteri de acid p-hidroxibenzoic.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care respectiva tulpină bacteriană este liofilizată.
În anumite realizări, invenţia furnizează compoziţia farmaceutică de mai sus, în care când compoziţia este depozitată într-un recipient etanşat la aproximativ 4°C sau la aproximativ 25°C şi recipientul este plasat într-o atmosferă având 50% umiditate relativă, cel puţin 80% din tulpina bacteriană după cum s-a măsurat în unităţi de formare a coloniilor, rămâne după o perioadă de cel puţin aproximativ: 1 lună, 3 luni, 6 luni, 1 an, 1,5 ani, 2 ani, 2,5 ani sau 3 ani.
În unele realizări, compoziţia invenţiei este furnizată într-un recipient etanşat cuprinzând o compoziţie cum s-a descris aici. În unele realizări, recipientul etanşat este un pliculeţ sau o sticlă. În unele realizări, compoziţia invenţiei este furnizată într-o seringă cuprinzând o compoziţie cum s-a descris aici.
Compoziţia din prezenta invenţie poate fi, în unele realizări, furnizată ca formulare farmaceutică. De exemplu, compoziţia poate fi furnizată ca tabletă sau capsulă. În unele realizări, capsula este o capsulă cu gelatină („gel-cap»).
În unele realizări, compoziţiile invenţiei sunt administrate oral. Administrarea orală poate implica înghiţirea, astfel încât compusul intră în tractul gastrointestinal, şi/sau administrarea bucală, linguală, sau sublinguală prin care compusul intră în fluxul sanguin direct din gură.
Formulările farmaceutice adecvate pentru administrare orală includ dopuri solide, microparticule solide, semi-solide şi lichide (incluzând faze multiple sau sisteme dispersate) cum ar fi tabletele; capsule moi sau tari conţinând multi sau nanoparticule, lichide (de exemplu soluţii apoase), emulsii sau pulberi; pastile (incluzându-le pe cele umplute cu lichid); gume; geluri; forme de dozare cu dispersare rapidă; filme; ovule; pulverizatoare; şi plasturi bucali/mucoadezivi.
În unele realizări formularea farmaceutică este o formulare enterică, adică o formulare gastro-rezistentă (de exemplu, rezistentă la pH-ul gastric) care este adecvată pentru livrarea compoziţiei invenţiei în intestin prin administrare orală. Formulările enterice pot fi în special utile când bacteria sau o altă componentă a compoziţiei este sensibilă la acid, de exemplu predispusă la degradarea în condiţii gastrice.
În unele realizări, formularea enterică cuprinde o acoperire enterică. În unele realizări, formularea este o formă de dozare acoperită enteric. De exemplu, formularea poate fi o tabletă acoperită enteric sau o capsulă acoperită enteric, sau altele asemenea. Acoperirea enterică poate fi o acoperire enterică convenţională, de exemplu, o acoperire convenţională pentru o tabletă, capsulă, sau altele asemenea pentru livrare orală. Formularea poate cuprinde un film de acoperire, de exemplu, un strat subţire de film al unui polimer enteric, de exemplu un polimer insolubil în acid.
În unele realizări, formularea enterică este intrinsec enterică, de exemplu, gastro-rezistentă fără a necesita o acoperire enterică. Astfel, în unele realizări, formularea este o formulare enterică care nu cuprinde o acoperire enterică. În unele realizări, formularea este o capsulă făcută dintr-un material termogel. În unele realizări, materialul termogel este un material celulozic, cum ar fi metilceluloză, hidroximetilceluloză sau hidroxipropilmetilceluloză (HPMC). În unele realizări, capsula cuprinde o carcasă care nu conţine nici un polimer de formare a filmului. În unele realizări, capsula cuprinde o carcasă şi carcasa cuprinde hidroxipropilmetilceluloză şi nu cuprinde nici un polimer de formare a filmului (de exemplu vezi [46]). În unele realizări, formularea este o capsulă enterică intrinsecă (de exemplu, Vcaps® de la Capsugel).
În unele realizări, formularea este o capsulă moale. Capsulele moi sunt capsule care pot, din cauza adăugării agenţilor de înmuiere, cum ar fi, de exemplu, glicerol, sorbitol, maltitol şi polietilen glicoli, prezenţi în carcasa capsulei, să aibă o anumită elasticitate şi moliciune. Capsulele moi pot fi produse, de exemplu, pe baza de gelatină sau amidon. Capsulele moi pe bază de gelatină sunt disponibile comercial de la diferiţi furnizori. Depinzând de metoda de administrare, cum ar fi, de exemplu, orală sau rectală, capsulele moi pot avea diferite forme, ele pot fi, de exemplu, rotunde, ovale, alungite sau în formă de torpilă. Capsulele moi pot fi produse prin procedee convenţionale, cum ar fi, de exemplu, procedeul Scherer, procedeul Accogel sau procedeul picătură sau suflare.
Metode de cultivare
Tulpinile bacteriene pentru utilizare din prezenta invenţie pot fi cultivate utilizând tehnici microbiologice standard cum s-a detaliat în, de exemplu, referirile [47], [] şi [49].
Mediul solid sau lichid utilizat pentru cultură poate fi agar YCFA sau mediu YCFA. Mediul YCFA poate include (pe 100ml, valori aproximative): Casitone (1,0 g), extract de drojdie (0,25 g), NaHCO3 (0,4 g), cisteină (0,1 g), K2HPO4 (0,045 g), KH2PO4 (0,045 g), NaCl (0,09 g), (NH4)2SO4 (0,09 g), MgSO4 · 7H2O (0,009 g), CaCl2 (0,009 g), resazurin (0,1 mg), hemin (1 mg), biotină (1 µg), cobalamin (1 µg), acid p-aminobenzoic (3 µg), acid folic (5 µg), şi piridoxamină (15 µg).
Tulpini bacteriene pentru utilizare în compoziţiile vaccinului
Inventatorii au identificat că tulpinile bacteriene ale invenţiei sunt utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative. Acest lucru este probabil un rezultat al efectului pe care tulpinile bacteriene ale invenţiei îl au asupra sistemului imunitar al gazdei. Prin urmare, compoziţiile invenţiei pot fi de asemenea utile pentru prevenirea tulburărilor neurodegenerative, când se administrează ca compoziţii vaccin. În anumite astfel de realizări, tulpinile bacteriene ale invenţiei pot fi omorȃte, inactivate sau atenuate. În anumite astfel de realizări, compoziţiile pot cuprinde un vaccin adjuvant. În anumite realizări, compoziţiile sunt pentru administrare prin injecţie, cum ar fi prin injecţie subcutanată.
General
Practica din prezenta invenţie va utiliza, dacă nu este indicat altfel, metode convenţionale de chimie, biochimie, biologie moleculară, imunologie şi farmacologie, din domeniul tehnicii. Astfel de tehnici sunt explicate complet în literatură. Vezi, de exemplu, referirile [50] şi [51, 57], etc.
Termenul „cuprinzând« cuprinde „incluzând« precum şi „constând« de exemplu o compoziţie „cuprinzând« X poate consta exclusiv din X sau poate include şi altceva suplimentar de exemplu X + Y.
Termenul „aproximativ« în relaţie cu o valoare numerică x este opţional şi înseamna, de exemplu, x±10%.
Cuvântul „substanţial« nu exclude „complet« de exemplu o compoziţie care este „substanţial fără« de la Y poate fi complet fără Y. Unde este necesar, cuvântul „substanţial« poate fi omis din definiţia invenţiei.
Referirile la un procentaj de identitate de secvenţă între două secvenţe de nucleotidă înseamnă că, atunci când sunt aliniate, acel procentaj de nucleotide este acelaşi în compararea celor două secvenţe. Această aliniere şi procentele de omologie sau de identitate de secvenţă pot fi determinate utilizând programe software cunoscute în domeniu, de exemplu cele descrise în secţiunea 7,7,18 din ref. [58]. O aliniere preferată este determinată prin algoritmul de căutare de omologie Smith-Waterman utilizând o căutare cu gol afin cu o penalizare de deschidere a golului de 12 şi o penalizare de extensie a golului de 2, matricea BLOSUM de 62. Algoritmul de căutare de omologie Smith-Waterman este divulgat în ref. [59].
Dacă nu se specifică explicit, un procedeu sau metodă cuprinzând numeroase etape poate cuprinde etape suplimentare la începutul sau sfȃrşitul metodei, sau poate cuprinde etpe de intervenţie suplimentare. De asemenea, etapele pot fi combinate, omise sau efectuate într-o ordine alternativă, dacă este adecvat.
Sunt descrise aici diferite realizări ale invenţiei. Se va aprecia că, caracteristicile specificate în fiecare realizare pot fi combinate cu alte caracteristici specificate, pentru a furniza alte realizări. În particular, realizările evidenţiate aici ca fiind adecvate, tipice sau preferate pot fi combinate una cu cealaltă (exceptȃnd situaţia când ele se exclud reciproc).
MODURI DE EFECTUARE A INVENŢIEI
Exemplul 1 - Eficacitatea inoculării bacteriene de a acţiona ca neuroprotector
Rezumat
Celulele neuroblastom au fost tratate cu compoziţii cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei. Celulele neuroblastom SH-SY5Y utilizate sunt producătoare de dopamină şi bine stabilite ca un model in vitro pentru studierea bolilor neurodegenerative. S-a aobservat abilitatea tulpinilor bacteriene de a creşte neuroproliferarea. Celulele neuroblastom au fost de asemenea tratate cu 1-metil-4-fenilpiridiniu neurotoxin dopaminergic (MPP), care induce permanent simptoamele bolii Parkinson în celulele neuroblastom. A fost investigată abilitatea tulpinilor bacteriene de a acţiona ca neuroprotector împotriva MPP.
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Linie celulară
Celulele neuroblastom SH-SY5Y au fost cumpărate de la ECCACC (Cat. no: 94030304) şi au fost crescute în MEM (Sigma Aldrich, cat n. M2279) suplimentate cu Nutrient Amestec F-12 Ham (Sigma Aldrich, cat n. N4888).
Metodă
Odată crescute, celulele neuroblastom SH-SY5Y au fost placate pe o placă cu 96 de godeuri la 11.000 celule/godeu şi incubate timp de 2 zile. Celulele au fost apoi transferate în mediu de diferenţiere (care conţine FBS la 1%) şi 10 uM acid retinoic (Sigma Aldrich, cat. n. R2625-100MG). Mediul de diferenţiere a fost înlocuit în fiecare altă zi şi celule au fost recoltate la 7 zile de diferenţiere. Celulele au fost pretratate cu sau fără MPP (Sigma Aldrich, cat. n. D048-1G) timp de 8 ore. Ulterior, celulele au fost tratate cu 10% supernatant bacterian şi incubate peste noapte. Viabilitatea celulară a fost măsurată utilizând reactivul CCK-8 (Sigma Aldrich, trusă de numărare celulară - 8, cat. n. 96992-3000TESTS-F) şi citită la o lungime de undă de 450 nm.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figura 1. Tratamentul celulelor neuroblastom cu MRx0029 sau MRX0005 a condus la o creştere în proliferarea neuronilor. Celulele neuroblastom care au fost tratate cu MPP împreună cu tulpina bacteriană au avut o viabilitate celulară crescută în comparaţie cu celulele tratate cu MPP singur (care au avut o viabilitate scăzută). Aceste date arată că tulpina bacteriană poate acţiona ca neuroprotector. Efectul protector a fost mai mare pentru celulele tratate cu MRX0029, care au salvat viabilitatea mai mult decȃt celulele de control pozitiv tratate cu Quercetin. Aceste date arată că tulpinile bacteriene pot acţiona ca neuroprotectori.
Exemplul 2 - Eficacitatea inoculării bacteriene pentru a reduce secreţia de IL-6.
Rezumat
Activarea citokinelor proinflamatoare a fost asociată cu deteriorarea neuronilor în boala neurodegenerativă. Lipopolizaharida (LPS) este un stimulator cunoscut de citokine proinflamatoare IL-6. Celulele astrocitom glioblastom umane au fost tratate cu compoziţii cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei în combinaţie cu LPS pentru a observa abilitatea lor de a modula nivelurile de IL-6.
Material şi metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
Linie celulară
MG U373 este un astrocitom glioblastom uman derivat dintr-o tumoare malignă şi a fost cumpărat de la Sigma-Aldrich (cat n. 08061901-1VL). Celulele astrocitom glioblastom umane MG U373 au fost crescute în MEM (Sigma Aldrich, cat n. M-2279) suplimentat cu 10% FBS, 1% Pen Strep, 4mM L-Glut, soluţie de aminoacid neesenţial MEM IX şi piruvat de sodiu IX.
Metodă
Odată crescute, celulele MG U373 au fost placate pe o placă cu 24 de godeuri la 100.000 celule/godeu. Celulele au fost tratate cu LPS (lug/mL) singur sau cu 10% supernatant de bacterie din MRx0029 timp de 24 ore. A fost efectuat de asemenea un control unde celulele au fost incubate în mediu netratat. După aceea celulele fără supernatanţi au fost colectate, centrifugate la 10.000g timp de 3min la 4°C. IL-6 a fost măsurat utilizând trusa ELISA IL-6 umană de la Peprotech (cat n.#900-K16) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figura 2. Tratamentul celulelor neuroblastom cu LPS şi tulpina bacteriană a condus la o scădere a nivelului de IL-6 secretată.
Exemplul 2b - Eficacitatea inoculării bacteriene pentru a modula secreţia de IL-8.
Rezumat
Deoarece neuro-inflamaţia joacă un rol pivotal în bolile neurodegenerative şi IL-8 s-a arătat că are efecte neuro-pozitive, a fost evaluat efectul compoziţiilor cuprinzând tulpinile bacteriene ale invenţiei şi LPS asupra activării IL-8. Celulele astrocitom glioblstom umane au fost tratate cu compoziţii cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei în combinaţie cu LPS pentru a observa abilitatea lor de a modula nivelurile de IL-8.
Material şi Metode
Tulpini bacteriene
Megasphaera massiliensis MRX0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Linie celulară
MG U373 este un astrocitom glioblastom uman derivat dintr-o tumoare malignă şi a fost cumpărat de la Sigma-Aldrich (cat n. 08061901-1VL). Celulele astrocitom glioblastom umane MG U373 au fost crescute în MEM (Sigma Aldrich, cat n. M-2279) suplimentat cu 10% FBS, 1% Pen Strep, 4mM L-Glut, soluţie de aminoacid neesenţial MEM IX şi piruvat de sodiu IX.
Metodă
Odată crescute, celulele MG U373 au fost placate pe o placă cu 24 de godeuri la 100.000 celule/godeu. Celulele au fost tratate cu LPS (lug/mL) singur sau cu 10% supernatant de bacterie din MRX0029 timp de 24 ore. După aceea celulele fără supernatanţi au fost colectate, centrifugate la 10.000g timp de 3min la 4°C. IL-8 a fost măsurat utilizând trusa ELISA IL-8 umană de la Peprotech (cat n.#900-K18) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figura 3. Tratamentul celulelor neuroblastom cu tulpinile bacteriene conduce la o creştere a secreţiei de IL-8 independent de prezenţa LPS.
Exemplul 2C - Eficacitatea inoculării bacteriene de a reduce inflamaţia indusă de α-sinucleină.
Rezumat
Neuroinflamaţia joacă un rol pivotal în boala Parkinson şi α-sinucleina a arătat că induce neuroinflamaţia in vivo. Prin urmare, a fost evaluată abilitatea tulpinilor bacteriene ale invenţiei de a inhiba inflamaţia indusă de α-sinucleină. O co-cultură de celule astrocitom glioblastom umane şi celule neuroblastom a fost expusă la α-sinucleina de tip sălbatic şi la izoformele mutante E46K şi A53T şi tratată cu compoziţii cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei. A fost apoi testată abilitatea tulpinilor bacteriene de a inhiba secreţia indusă de α-sinucleină de IL-6.
Material şi Metode
Tulpini bacteriene
Megasphaera massiliensis MRX0029; Parabacteroides distasonis MRX0005
Linie celulară
MG U373 este un astrocitom glioblastom uman derivat dintr-o tumoare malignă şi a fost cumpărat de la Sigma-Aldrich (cat n. 08061901-1VL). Celulele astrocitom glioblastom umane MG U373 au fost crescute în MEM (Sigma Aldrich, cat n. M-2279) suplimentat cu 10% FBS, 1% Pen Strep, 4mM L-Glut, soluţie de aminoacid neesenţial MEM IX şi piruvat de sodiu IX.
SH-SY5Y este o linie celulară de neurobastom umană derivată dintr-un neuroblastom malign şi poate fi cumpărată de la Sigma-Aldrich (cat n. 94030304-1VL). Celulele au fost crescute în 50 % MEM şi 50% mediu F-12 Ham de amestec de nutrient suplimentat cu 2mM L-glutamină, 10% căldură inactivată de FBS, 100 U/ml penicilină, 100 µg/ml streptomicină. Celulele din mediul de creştere au fost placate pe o placă cu 96 de godeuri la 11.000 celule/godeu şi plasate în incubator. După 2 zile, mediul a fost înlocuit cu mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS) şi 10 µM acid retinoic. Mediul de diferenţiere a fost înlocuit în fiecare altă zi şi celulele au fost utilizate după 7 zile de diferenţiere.
Metodă
Celulele SHSY5Y au fost placate pe plăci cu 12 godeuri la o densitate de 50.000 celule/godeu. Celulele au fost crescute în 50 % MEM şi 50% mediu F-12 Ham de amestec nutrient suplimentat cu 2mM L-glutamină, 10% căldură inactivată de FBS, 100 U/ml penicilină, 100 µg/ml streptomicină. Celulele din mediul de creştere au fost placate pe o placă cu 96 de godeuri la 11.000 celule/godeu şi plasate în incubator. După 2 zile, mediul au fost înlocuit cu mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS) şi 10 µM acid retinoic. Mediul de diferenţiere a fost înlocuit în fiecare altă zi şi celulele au fost utilizate după 7 zile de diferenţiere. U373 a fost placat pe plăci cu 12 trangodeuri (membrană de poliester de 0,4µm, Costar) la o densitate de 50.000celule/godeu timp de 72 ore. Celule au fost co-cultivate împreună timp de 24 ore înainte de tratamentul în mediul de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS fără acid retinoic).
Apoi celulele au fost tratate cu 25µg/ml α-sinucleină (Wt, A53T, E46K) în prezenţa sau absenţa a 10% supernatant de bacterie timp de 48 ore. Celulele fără supernatanţi au fost colectate, centrifugate la 10000g timp de 3 min la 4°C, alicate şi depozitate la -80°C. IL-6 şi IL-8 umane au fost măsurate cum s-a descris mai sus.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figura 4. Tratamentul celulelor cu α-sinucleină de tip sălbatic şi cu izomorfele mutante E46K şi A53T a indus o secreţie moderată de IL-6 (Figura 4A). Secreţia indusă de α-sin de IL-6 a fost inhibată în celulele tratate cu tulpinile bacteriene (Figura 4A). Reducerea secreţiei de IL-6 a fost cea mai mare la administrarea de MRX0029.
Exemplul 3 - Eficacitatea inoculării bacteriene de a reduce activarea NFκB
Rezumat
Activarea promotorului NFκB conduce la producţia de citokine proinflamatoare incluzând IL-1β, IL-1α, IL-18, TNFα şi IL-6. Promotorul NFκB poate fi activat cu α-sinucleină şi LPS prin stimularea ligandului TLR4. Mutaţiile în α-sinucleină, cum ar fi α-sinucleină A53T, sunt implicate în Parkinsonul familial. Tratamentul celulelor neuronale cu LPS simulează Parkinsonul cauzat de factorii de mediu. A fost investigată abilitatea compoziţiilor cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei de a inhiba activarea promotorului NFκB.
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
Linie celulară
TLR4 albastru Hek uman a fost cumpărat de la InvivoGen (cat n. hkb-htlr4). TLR4 albastru Hek uman a fost crescut în DMEM bogat în glucoză (Sigma Aldrich, cat n. D-6171) suplimentat cu 10% FBS, 1% Pen Strep, 4mM L-glut, normocin şi soluţie de selecţie albastră HEK IX.
Metodă
Odată crescute, celulele albastre Hek umane au fost placate în plăci cu 96 de godeuri la 25.000 celule/godeu în 4 replicate. Un set al celulelor a fost tratat cu α-sinucleină A53T (lug/mL) singur sau cu 10% supernatant de bacterie din MRx0029 timp de 22 ore. Al doilea set al celulelor a fost tratat cu LPS (10 ng/mL, de la serotipul enteric Salmonella Typhimurium, Sigma Aldrich, cat n. L6143) singur sau cu 10% supernatant de bacterie din MR029 timp de 22 ore. Celulele au fost ulterior centrifugate şi 20ul de supernatant a fost amestecat cu 200ul de reactiv albastru Quanti (InvivoGen, cat n. rep-qb2), incubate timp de 2 ore şi s-a citit absorbanţa la 655nm.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figurile 5 şi 6. Figura 5 arată că activarea promotorului NFκB de către α-sinucleină este inhibată de MRx0029. Figura 6 arată că activarea promotorului NFκB de către LPS este inhibată de MRx0029.
Exemplul 4 - Eficacitatea inoculării bacteriene de a altera capacitatea antioxidantă
Rezumat
Abilitatea compoziţiilor cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei de a altera capacitatea antioxidantă. Capacitatea antioxidantă a tulpinii bacteriene a fost stabilită utilizând bine cunoscutul test ABTS (acid 2,2'-azino-bis(3-etilbenzotiazolină-6-sulfonic)).
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
Metodă
Celulele bacteriene (106 sau mai multe) au fost colectate şi centrifugate. Ele au fost resuspendate în tampon de testare (utilizând de trei ori volumul de pelet). Suspensia a fost sonicată pe gheaţă timp de 5 minute şi apoi centrifugată la 12.000 x g timp de 10 minute. Supernatantul a fost îndepărtat şi măsurat utilizând trusa de test ABTS produsă de Sigma Aldrich (cod CS0790), în conformitate cu instrucţiunile fabricantului.
Rezultate
Rezultatele acestor experimente sunt prezentate în Figura 7. Figura 7 arată că MRx0029 are o capacitate antioxidantă de aproximativ 2mM în comparaţie cu Trolox.
Exemplul 5 - Eficacitatea inoculării bacteriene de a altera nivelurile de peroxidare ale lipidei
Rezumat
A fost investigată abilitatea compoziţiilor cuprinzând tulpinile bacteriene conform invenţiei de a altera nivelurile de peroxidare ale lipidei. Testul substanţelor reactive tiobarbiturice (TBAR) a fost utilizat pentru a măsura produsele secundare ale peroxidării lipidei.
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
Metodă
Celulele bacteriene (106 sau mai multe) au fost colectate şi centrifugate, a fost efectuată o etapă de spălare cu soluţie izotonică salină înainte ca peletul să fie resuspendat în tampon de testare cu clorură de potasiu. Suspensia a fost sonicată pe gheaţă timp de 10 minute şi apoi centrifugată la 10.000 x g timp de 10 minute. Supernatantul a fost îndepărtat şi nivelul de peroxidare al lipidei a fost evaluat utilizând testul de substanţe reactive tiobarbiturice.
Rezultate
Rezultatele experimentelor sunt prezentate în Figura 8. Figura 8 arată că MRx029 este capabilă să inhibe peroxidarea lipidei cu aproximativ 20 %, care este o capacitate antioxidantă mai ridicată decât a controlului pozitiv, hidroxitoluen butilat (1% m/v).
Exemplul 6 - Eficacitatea inoculării bacteriene asupra activităţii de deacetilază histonă
Rezumat
A fost investigată abilitatea compoziţiilor cuprinzând tulpini bacteriene conform invenţiei de a altera activitatea de deacetilază histonă. Dereglarea deacetilazei histone a fost implicată în patogeneza asociată cu bolile neurodegenerative asociate cu vârsta.
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
Linie celulară
Linia celulară HT-29 a fost utilizată deoarece este prezentă deacetilaza histonă.
Metodă
Celulele fără supernatanţi din culturi celulare de fază staţionară au fost izolate prin centrifugare şi filtrare într-un filtru de 0,22 uM. Celulele HT-29 au fost utilizate 3 zile post confluenţă şi lăsate în 1 mL DTS 24 ore înainte de începerea experimentului. Celulele HT-29 au fost provocate cu 10 % supernatant fără celule diluat în DTS şi au fost lăsat să incubeze timp de 48 ore. Proteinele nuclează au fost apoi extrase utilizând trusa de extragere Sigma Aldrich Nuclease şi mostrele au fost congelate instantaneu înainte de măsurarea activităţii HDAC. Activitatea HDAC a fost evaluată fluorometric utilizând trusa Sigma Aldrich (UK).
Rezultate
Rezultatele experimentelor sunt prezentate în Figura 9. Figura 9 arată că MRx0029 este capabilă să reducă nivelurile activităţii de deacetilază histonă.
Exemplul 7 - Nivel de producţiei de indol în bacterie
Rezumat
A fost investigată abilitatea bacteriei invenţiei de a produce indol. Indolul a fost implicat în atenuarea inflamaţiei şi stresului oxidativ.
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
ATCC 11775 este o tulpină bacteriană de referinţă care este cunoscută pentru producerea de indol.
Metodă
Celulele bacteriene intacte în fază staţionară au fost incubate cu 6mM Triptofan timp de 48 ore. Speciile bacteriene care posedă enzima triptofanază vor utiliza triptofan ca substrat pentru a produce indol. După o perioadă de incubare de 48 ore, supernatantul a fost îndepărtat şi adăugat la reactivul Kovac pentru cuantificarea indolului. Standardele, soluţiile stoc şi reactivii au fost preparaţi utilizând metode standardizate validate in-house.
Rezultate
Rezultatele experimentelor sunt prezentate în Figura 10. Figura 10 arată că MRx0029 are capacitatea de a produce indol din triptofan, la concentraţii de aproximativ 0,2mM.
Exemplul 8 - Nivelul de producţie de kinurenine în bacterie
Rezumat
A fost investigată abilitatea bacteriei invenţiei de a produce kinurenine. Dereglarea căii kinurenine poate conduce la activarea sistemului imunitar şi la acumularea de compuşi neurotoxici potenţiali. Alterările în metabolismul kinureninelor pot fi implicate în dezvoltarea bolii Parkinson.
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRx0029
DSM 17136 este o tulpină de Bacteroides copricola care este cunoscută pentru producerea de kinurenine.
Metodă
Supernatanţii fără celule din culturi celulare de fază staţionară au fost izolaţi prin centrifugare şi filtrare într-un filtru de 0,22 uM şi congelaţi până la utilizare. Kinureninele standard, soluţiile stoc şi reactivii au fost preparaţi utilizând metode standardizate validate in-house. Mostra a fost tratată cu acid tricloroacetic şi centrifugată la 10.000xg timp de 10 minute la 4°C. Supernatantul a fost colectat şi dispensat pe o placă cu 96 godeuri. Pentru detecţia kinureninelor a fost utilizat reactivul Ehrlich şi a fost adăugat într-un raport de 1:1.
Rezultate
Rezultatele experimentelor sunt prezentate în Figura 11. Figura 11 arată că MRx0029 are capacitatea de a produce kinureninele la o concentraţie de aproximativ 40 µM.
Exemplul 9 - Nivelurile de dopamină, DOPAC şi HVA în striatum la şoarecii MPTP trataţi cu bacterie
Boala Parkinson este o tulburare neurodegenerativă obişnuită ale cărei caracteristici clinice cardinale includ tremurul, încetinirea mişcării, rigiditatea, şi instabilitatea posturală. Aceste simptoame sunt cele care pot fi atribuite în primul rând degenerării neuronilor dopaminergici din substantia nigra pars compacta şi pierderea ulterioară a fibrei lor nervoase de proiectare în striatum [60]. Şoarecii trataţi cu MPTP (1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridină) pierd selectiv numere semnificative de neuroni dopaminergici nigrostriatali [61]. MPTP a indus pierderea de celule dopaminergice în substantia nigra imitȃnd condiţiile clinice din boala Parkinson şi este prin urmare un model util pentru a testa medicamentele anti-parkinson.
Scopul acestui studiu a fost de a evalua efectele bacteriilor anaerobe MRX0029 utilizând şoareci lezaţi cu MPTP.
48 de şoareci masculi au fost alocaţi până la 4 grupuri diferite de tratament (grupurile A, B, E şi I, cu n=12 animale în fiecare grup). Grupurile de tratament sunt prezentate în Tabelul 1 de mai jos şi programul de proiect este prezentat mai jos.
Tabelul 1: Grupurile de tratament
Grup n Tratament Leziune Substanţă Nivel siguranţă Doză Cale Program Substanţă Doză Cale Program A 12 Vehicul (PBS) - - p.o. 18 zile: ziua(-14) - ziua3 Vehicul (0,9% sol.salină) i.p. ziua0 B 12 Vehicul (PBS) - - p.o. 18 zile: ziua(-14) - ziua3 MPTP 4x 20 mg/kg i.p. ziua0 E 12 MRx0029 Megasphaera sp. (gly) S1/S2 2 x 10^8 bacterii p.o. 18 zile: ziua(-14) - ziua3 MPTP 4x 20 mg/kg i.p. ziua0 I 12 Vehicul (PBS) - - p.o. 18 zile: ziua(-14) - ziua3 MPTP 4x 20 mg/kg i.p. ziua0 7-nitroindazol - 50 mg/kg i.p. ziua0 (2x i.p.)
Grupurile A, B, E şi I au fost tratate zilnic timp de 18 zile prin gavaj oral cu bacterie (MRx0029 - grupul E), sau cu vehicul (PBS). Tratamentul oral a început cu 14 zile înainte de leziunea MPTP. Grupul I de animale a primit un vehicul zilnic de tratament (PBS) p.o. (per oral) şi a fost injectat i.p. (intraperitoneal) cu medicament de referinţă cu 30 min înainte şi la 90 min după prima MPTP în ziua 0. Volumul de aplicaţie pentru p.o. şi tratamentul cu vehicul a fost de 200 µl pe şoarece. Tulpina bacteriană a grupului E a fost din stocuri de glicerol (gly). Pentru tratamentul oral, gavajele pentru aplicaţii au fost depozitate într-o fiolă conţinând 70% etanol şi au fost spălate înainte şi după fiecare utilizare cu apă distilată. Fiecare grup de tratament a avut propriul gavaj şi fiolă de etanol şi fiolă de apă distilată. Tuburile şi gavajele nu au fost modificate între grupuri. Direct înainte de tratament, fiecare seringă a fost spălată cu N2.
În ziua 0, MPTP (20 mg/kg greutate corporală (b.w.) de 4 ori, interval de inter-tratament de 2 ore) a fost injectat i.p. la animalele din grupurile B, E şi I. Un grup de animale (A) a fost fals lezat prin administrare i.p. de vehicul MPTP (0,9% sol. salină). Volumul de aplicaţie a fost de 10 µl pe g de greutate corporală. Cântărirea animalelor a fost efectuată înainte de tratamentul MPTP, pentru a doza animalele în conformitate cu greutatea lor corporală actuală. După aceea animalele au primit zilnic tratamentul p.o..
Formularea preparărilor pentru dozarea şi prepararea stocurilor de glicerol pentru dozare
Nume de tulpină bacteriană: MRx0029 Megasphaera sp. Condiţii/stabilitate de depozitare: -80 °C Vehicul: 1x PBS Dozaje de tratament: 2 x 10^8 bacterii Administrare: 200µl Număr lot: n/a
Pentru grupul de tratament E (MRx0029)
1.) 1 stoc de glicerol a fost luat din congelator la -80°C şi plasat în condiţii anaerobe (pliculeţ cu jar anaerobic) la 37°C pentru dezgheţare (aceasta aluat 30-40 minute).
2.) Stocul de glicerol dezgheţat complet a fost centrifugat la 6000 x g timp de 10 min la temperatura camerei.
3.) Supernatantul a fost eliminat fără deranjarea peletului (de exemplu utilizând o pipetă).
4.) S-au adăugat 4,22 mL de 1 x PBS steril pre-încălzit (37°C) şi s-a amestecat uşor utilizând o pipetă.
5.) Şoarecii au fost dozaţi cu 200 µL de soluţie bacteriană. Animalele au fost dozate la 15 minute după resuspendarea peletului cu PBS.
Referinţa formulării grupului de medicament
Nume articol de referinţă: 7-Nitroindazol Condiţii/stabilitate de depozitare: -20°C Vehicul: Ulei de arahide Dozaje de tratament: 50 mg/kg Administrare: i.p. (cu 30 min înainte şi la 90 min după primul tratament MPTP) Număr lot: MKBS6671V
Cantitatea adecvată de 7-nitroindazol a fost dizolvată în ulei de arahide pentru a atinge concentraţia finală de 50 mg/kg.
Materiale şi Metode
Animale
Linie de şoarece: C57BL/6J (tulpină de şoarece JAX™) număr stoc de şoarece JAX™ Furnizor: Charles River Laboratories Vârsta de start: ∼10 săptămâni Sex: Masculin Număr de animale: 48
Manipularea specifică a animalelor şi randomizarea
Mănuşile au fost modificate între fiecare grup de tratament şi pulverizate cu 70% soluţie de etanol între fiecare cuşcă a aceluiaşi grup pentru a minimiza riscul de contaminare indiferent de cum au fost manipulate animalele (de exemplu: tratament, testare comportamentală, curăţarea şi luarea unei mostre de ţesut).
Tratamentul a fost randomizat şi alternat zilnic astfel încât să împiedice ca aceleaşi grupuri să fie tratate în acelaşi timp în fiecare zi. Animalele au fost randomizate pe cuşcă la luarea unei mostre de ţesut.
Luarea unei mostre de ţesut şi procesare
În ziua 4, animalele din toate grupurile au fost sacrificate şi creierele au fost colectate. Prin urmare, şoarecii au fost anesteziaţi profund cu injecţie de Pentobarbital (600mg/kg).
Sângele (aproximativ 500 µl) a fost colectat prin punctură în inimă. Şoarecii au fost apoi perfuzaţi transcardiac cu 0,9% soluţie salină şi creierele au fost îndepărtate şi hemisectate. Hemisfera lăsată a fost subdivizată în ţesut striatal (pentru HPLC), ţesutul de substantia nigra precum şi creierul rezidual, cântărite şi congelate imediat şi depozitate la -80°C. Instrumentele şi suprafeţele care au fost în contact cu animalele au fost curăţate cu 70% etanol înainte ca următorul animal să fie disecat.
Analiza biochimică a nivelurilor de dopamină, DOPAC şi HVA cu HPLC în striatum
Mostra striatală (n=6 de la fiecare grup de tratament; în total 24 mostre) a fost amestecată la un raport de 1:10 (m/v) cu 0,2 M acid percloric incluzând 100 µM EDTA-2Na şi omogenizată la 0°C într-un omogenizator cu micropistil de sticlă. După ce a stat timp de 30 min la gheaţă, omogenaţii au fost centrifugaţi la 10.000 RPM timp de 10 minute într-o centrifugă congelatoare Biofuge Fresco (Heraeus Instruments, Germania). Supernatanţii au fost aspiraţi cu grijă şi amestecaţi cu tampon 0,4 M acetat de Na, pH 3 la un raport 1:2 (v/v) şi filtraţi printr-un filtru centrifugal de 0,22 µm (Merck Millipore, Germania) timp de 4 min la 14.000 g la 4°C. Filtratele au fost depozitate la -80°C înainte de analiza HPLC.
Analiza HPLC
Concentraţiile de DA, DOPAC şi HVA în mostrele striatale au fost determinate prin cromatografie de lichide pe coloană cu detecţie electrochimică [62;63]. A fost utilizat sistemul HPLC (HTEC-500, Eicom Corp., Kyoto, Japonia) incluzând o pompă de microflux fără impulsuri, un degazor şi un detector amperometric echipat cu un electrod de carbon sticlos care operează la +0,45 V vs. un electrod de referinţă Ag/AgCl. Mostrele au fost injectate prin utilizarea unui microeşantiator CMA/200 (CMA/Microdialysis, Stockholm, Suedia). Cromatogramele au fost înregistrate şi integrate prin utilizarea unui sistem computerizat de achiziţie de date (DataApex, Praga, Republica Cehă). DA, DOPAC şi HVA au fost separate pe o coloană 150 x 2,1 i.d. mm (CA5-ODS, Eicom Corp., Kyoto, Japonia). Faza mobilă a constat în 0,1 M tampon fosfat la pH 6,0, 0,13 mM EDTA, 2,3 mM sodiu-1-octansulfonat şi 20 % (v/v) metanol. Limita de detecţie (raport semnal-zgomot = 3) pentru DA a fost estimată până la 0,5 fmol în 15 µl (0,03 nM) injectaţi pe coloană.
Rezultate
Administrarea de tulpini bacteriene a fost bine tolerată de animalele. Pe ziua de leziune MPTP şi dacă este necesar pe ziua de după aceea, a fost utilizată o lumină roşie pentru a încălzi animalele. Dacă animale au fost în condiţii rele (au simţit frig, au fost deshidratate, au avut un comportament anormal), ele au fost alimentate cu hrană umedă şi tratate cu soluţie salină subcutanată dacă a fost necesar.
Pentru analiza nivelurilor de dopamină, DOPAC şi HVA, a fost utilizat ţesutul striatal de la 6 animale pe grup de tratament. Datele au fost analizate utilizȃnd testul Kruskal-Wallis urmat de testul ulterior comparaţiei multiple Dunn sau de analiza unifactorială a varianţei urmată de testul ulterior Bonferroni (A vs. tot(*), B vs. tot, I vs. tot (#)). */# = p<0,05; ** = p<0,01; *** = p<0,001.
Animalele sănătoase din grupul A au avut niveluri ridicate de dopamină, DOPAC şi HVA în timp ce tratamentul MPTP la grupul B a redus acest număr şi controlul pozitiv (grupul I) a recuperat producţia într-o oarecare măsură (Figura 12). Animale din grupul I tind să aibă niveluri de dopamină mai ridicate decât grupul tratat cu bacterie şi grupul B. Nivelurile de DOPAC (un metabolit de dopamină) au fost în general semnificativ mai scăzute la animalele din grupul B în comparaţie cu nivelurile de DOPAC de la animalele nelezate din grupul A (Figura 12B).
Semnificativ, s-a descoperit că tratamentul cu MRx0029 (grupul E) recuperează producţia de dopamină şi DOPAC (Figurile 12A şi respectiv 12B). Tratamentul cu MRx0029 poate fi prin urmare utile pentru tratarea sau prevenirea tulburărilor neurodegenerative.
Exemplul 10 - Eficacitatea bacteriei de a altera creşterea neuritelor
Rezumat
Creşterea neuritelor este un proces important pentru dezvoltarea de conexiuni între neuroni. A fost testată prin urmare abilitatea tulpinilor bacteriene şi a acizilor organici de a induce creşterea neuritelor prin măsurarea nivelurilor transcripţionale de proteină MAP2 asociată microtuburilor, un marker specific de diferenţiere neuronală.
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRX0029.
Metodă
SHSY5Y au fost placate în plăci Petri de 10cm la o densitate de 2x106 celule. După 24 ore celulele au fost tratate în mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS fără RA) cu 10% supernatanţi de bacterie sau YCFA+, 10uM RA, 200uM acid hexanoic sau 200uM acid valproic, timp de 17 ore. După aceea, au fost luate imagini reprezentative utilizând un microscop de detaliu EVOS XL cu contrast de fază la o amplificare de 40X/0,65. Celulele au fost colectate, şi ARN-ul total a fost izolat în conformitate cu protocolul minitrusei RNeasy (Qiagen). ADNc-urile au fost făcute utilizând trusa de transcripţie inversă ADNc de mare capacitate (Applied Biosystems). Expresia genei a fost măsurată utilizând qPCR. GAPDH a fost utilizat ca control intern. Modificarea plierii a fost calculată în conformitate cu metoda 2(-ΔΔct).
Imunofluorescenţă şi microscopie confocală
Celulele au fost însămânţate pe lamele cameră cu 8 godeuri (Marienfeld Laborator Glassware) la 5x104 celule/godeu peste noapte şi au fost tratate cu 10% supernatant bacterian timp de 24 ore. Pentru diferenţiere, celulele au fost tratate cu 10nM acid retinoic timp de 5 zile înainte de tratarea cu supernatant bacterian. Celulele au fost apoi fixate cu 4% paraformaldehidă în PBS timp de 20 minute la temperatura camerei (RT). Celulele fixate au fost spălate cu PBS, şi permeabilizate cu 1% Triton X-100 în PBS timp de 10 minute. După spălarea cu PBS, lamelele au fost incubate cu tampon de blocare (4% BSA/PBS) timp de 1 oră la temperatura camerei înainte de adăugarea de anticorp anti-MAP2 (sc-74421, Santa Cruz Biotechnology Inc) diluat în 1% BSA/PBS timp de 12 ore la 4°C. Ele au fost apoi spălate de două ori cu PBS, urmat de incubare cu conjugat anti-şoarece Alexa Flour 488 (Molecular Probes Inc) şi Alexa Flour 594 conjugat faloidin (ab176757, Abcam) timp de 1 oră la temperatura camerei. După spălarea 3X cu PBS, lamelele au fost montate cu Vectorihield conţinând DAPI (Sigma, Aldrich). Lamelele au fost văzute utilizând un microscop Zeiss Axioscope echipat cu un obiectiv 63x/1,2 W Korr şi seturi de filtre adecvate pentru detecţia fluorocromilor utilizaţi. Timpii manuali de expunere pentru achiziţia digitală de imagini imunoetichetate cu MAP-2 au fost ţinuţi constanţi permiţând comparaţia între diferite godeuri şi tratamente. Timpii de expunere la faloidin (F-actină) şi DAPI au variat pentru a se potrivi domeniul de vedere. Domeniile randomizate de vedere au fost dobândite utilizând o cameră Qlmaging controlată de software-ul Image Pro Plus. Imaginile au fost salvate ca TIF şi deschise în Adobe Fotoshop CC 2015,1.2 şi se suprapun peste imaginile MAP-2, DAPI şi faloidin suprapuse şi îmbinate. Imaginile reprezentative au fost selectate pentru a ilustra diferenţele în abundenţă şi localizare ale proteinelor examinate.
Rezultate
Rezultatele sunt prezentate în Figura 13. Figura 13A prezintă imagini microscopice reprezentative de celule SHSY-5Y nediferenţiate incubate cu fiecare din acizii şi supernatanţii de bacterii. Tratamentul celulelor cu MRX0029 a indus un fenotip asemănător neuronului, prezentând caracteristici similare cu celulele tratate cu acid retinoic (care este utilizat pentru diferenţierea terminală a celulelor neuroblastom), unde corpurile celulelor sunt mai mari şi în formă piramidală, cu neuritele şi procesate ramificȃndu-se în reţea cu celulele vecine. Figura 13B arată că MRx0029 reglează pozitiv semnificativ MAP2 în celulele neuroblastom nediferenţiate. Colorarea suplimentară a faloidinului (un agent de legare la actina citoskeleton) a furnizat un aranjament diferit al structurii citoskeletale în celulele tratate cu MRx0029, care susţin suplimentar ipoteza de diferenţiere neuronală pentru MRx0029 (Fig. 13B).
Exemplul 11 - Eficacitatea inoculării bacteriene de a reduce nivelurile oxidative în celule
Fundal
Generarea de specii reactive de oxigen contribuie la patologia bolilor neurodegenerative. A fost investigată abilitatea tulpinilor bacteriene de a proteja celulele SHSY-5Y şi U373 diferenţiate de speciile reactive de oxigen (ROS) generate prin tratamentul cu terţ-butil peroxid de hidrogen (TBHP).
Material şi Metode
Tulpină bacteriană
Megasphaera massiliensis MRX0029
Metodă
Celulele SHSY-5Y au fost placate într-o placă neagră cu fund plat cu 96 godeuri la densitatea de 5000 celule/godeu şi plasate într-un incubator cu CO2. După 24 ore, mediul a fost înlocuit cu mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS) şi 10 µM acid retinoic. Mediul de diferenţiere a fost înlocuit în fiecare altă zi. În ziua 10 mediul de diferenţiere a fost îndepărtat şi celulele au fost spălate cu PBS pre-încălzit şi colorate cu o sondă moleculară DCFDA de 10uM timp de 20 minute în mediu de creştere conţinând 1% FBS. Apoi celulele au fost spălate din nou cu PBS pre-încălzit şi tratate cu 100uM TBHP în prezenţa sau absenţa a 10% supernatant de bacterie timp de 2 ore. Intensitatea fluorescentă a fost măsurată utilizând un cititor de placă TECAN la Ex/Em 485/530 nm.
Rezultate
Rezultatele experimentelor sunt prezentate în Figura 14. Figura 14b arată că MRX0029 este capabil să inhibe producţia de ROS în celulele neuroblastom SHSY-5Y diferenţiate. MRX0029 nu a avut un efect asupra generării de ROS în celulele astroglioblastom U373 (Figura 14a). Acest lucru arată că acest aspect al efectului antioxidant este specific neuronal.
Exemplul 12 - neuroprotecţia
Celulele SHSY-5Y diferenţiate RA au fost tratate cu MPP+, metabolitul activ al MPTP, un produs chimic utilizat pe larg pentru a imita in vitro şi in vivo unele din caracteristicile patologiei PD. Viabilitatea celulară a fost măsurată ca rată a respiraţiei mitocondriilor (Figura 15). Ambele MRx0005 şi MRx0029 au prezentat efecte semnificative şi promovează per se o creştere a activităţii metabolice a mitocondriilor în celulele SHSY-5Y. MRX0029 a prezentat protecţie completă faţă de MPP+, refăcȃnd viabilitatea celulară aproape la acelaşi nivel de celule netratate şi mai ridicat decât controlul pozitiv cu quercetin. Protecţia cu MRx0005 a fost de aproximativ 20% în comparaţie cu mostra tratată cu YCFA-MPP+, aproximativ aceeaşi observată pentru controlul pozitiv cu quercetin (Fig. 15).
Exemplul 13 - Analiză suplimentară a mecanismului de inhibare a deacetilării histone
Introducere
Microbiota intestinală, cu capacitatea sa imensă de diversitate şi metabolică, reprezintă un rezervor metabolic uriaş pentru producţia unei vaste varietăţi de molecule cu potenţial de a influenţa activitatea HDAC. Câteva studii au evaluat activitatea inhibitoare HDAC a metaboliţilor derivaţi microbian, alţii decât butiratul, care au arătat că inhibă HDAC şi sunt asociaţi cu îmbunătăţirea funcţionării motoare în boală Huntington [64]. Inventatorii au căutat prin urmare să determine care metaboliţi sunt responsabili pentru inhibarea HDAC şi să elucideze mai departe mecanismul prin care este obţinută inhibarea.
Material şi Metode
Cultura bacteriană şi colecţie de supernatant fără celule
Culturile pure de bacterii au fost crescute anaerobic în bulion YCFA până când ele au atins faza lor de creştere staţionară. Culturile au fost centrifugate la 5.000 x g timp de 5 minute şi supernatantul fără celule (CFS) a fost filtrat utilizând un filtru de 0,2 µM (Millipore, UK). O alicotă de 1 mL de CFS a fost depozitată la -80°C până la utilizare. Butiratul de sodiu, acizii hexanoic şi valeric au fost obţinuţi de la Sigma Aldrich (UK) şi suspensiile au fost preparate în bulion YCFA.
Cuantificarea SCFA şi MCFA a supernatanţilor bacterieni
Acizii graşi cu catenă scurtă (SCFA) şi acizii graşi cu catenă medie (MCFA) din supernatanţii bacterieni au fost analizaţi şi cuantificaţi prin MS Omics APS după cum urmează. Mostrele au fost acidulate utilizând acid clorhidric, şi s-au adăugat standarde interne etichetate cu deuteriu. Toate mostrele au fost analizate într-o ordine randomizată. Analiza a fost efectuată utilizând o coloană cu polaritate ridicată (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. Coloană 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm) instalată într-un GC (7890B, Agilent) cuplat cu un detector cvadripol (59977B, Agilent). Sistemul a fost controlat de ChemStation (Agilent). Seriile de date au fost convertite în format netCDF utilizând Chemstation (Agilent), înainte ca datele să fie importate şi procesate în Matlab R2014b (Mathworks, Inc.) utilizând software-ul PARADISe descris în [65].
Analiza specifică a activităţii HDAC
Activitatea specifică de inhibare HDAC a fost analizată pentru HDAC1, 2, 3, 4, 5, 6, 9 utilizând truse de test fluorogenice pentru fiecare tip de HDAC (BPS Bioscience, CA). Testele au fost efectuate în conformitate cu instrucţiunile fabricantului şi fiecare mostră a fost efectuată în replicate. Supernatanţii fără celule au fost diluaţi 1 în 10 şi expuşi la proteine HDAC specifice furnizate în trusă pentru a menţine consistenţa între metode.
Rezultate
Metaboliţii microbieni comensali intestinali care inhibă deacetilaza histonă sunt butiratul şi acidul valeric
MRx0029, al căror supernatant a prezentat o puternică inhibare HDAC atȃt în celulele întregi HT29 cȃt şi în lizatele celulare HT29, au produs acid valeric şi acid hexanoic la concentraţii medii de 5,08 mM şi respectiv 1,60 mM (Figurile 16A şi C).
Pentru a investiga care metaboliţi au fost responsabili pentru inhibarea HDAC indusă de tulpină, au fost măsurate diferite concentraţii de acid hexanoic, acid valeric şi butirat de sodiu pentru înhibarea lor HDAC a celulelor HT-29 întregi şi a lizatelor celulare HT-29. Rezultatele din Fig. 16B arată o inhibare semnificativă (P<0,05) a activităţii HDAC de către butiratul de sodiu asupra celulelor întregi precum şi asupra lizatelor celulare, în timp ce acidul hexanoic nu a arătat o activitate inhibitoare semnificativă. Acidul valeric a inhibat total activitatea HDAC (* (p<0,05), ** (p<0,005), *** (P<0,001), **** (p<0,0001)).
Inhibitorii potenţi de HDAC total au investigat HDAC din clasa I de ţinte.
A fost investigat profilul specific de inhibare HDAC al tulpinii bacteriene de test. Testele specifice de inhibare HDAC (BPS Biosciences, CA) au fost efectuate pentru HDAC din clasa I şi clasa II. Abilitatea tulpinii bacteriene de a inhiba enzimele HDAC a fost comparată cu cea a butiratului, şi a acizilor hexanoic şi valeric. Rezultatele noastre demonstrează că MRX0029, este un inhibitor foarte puternic al enzimelor HDAC din clasa 1 (HDAC 1, 2 şi 3). Inhibarea HDAC din clasa II nu a fost la fel de semnificativă (datele nu sunt prezentate).
Discuţie
Tulpina cu activitate inhibitoare HDAC a produs cantităţi semnificative de acid valeric şi acid hexanoic precum şi cantităţi semnificative de butirat de sodiu (Figura 16C). Când au fost testate ca substanţe pure, acidul valeric şi butiratul de sodiu au condus la o inhibare HDAC semnificativă (p<0,0001).
Interesant, rezultatele pentru activitatea HDAC specifică arată că tulpina testată este un inhibitor puternic de HDAC din clasa I, şi în special de HDAC2 (Figura 17 şi 18). HDAC din clasa I (HDAC1, 2, 3 şi 8) rezidă în nucleu şi sunt exprimate omniprezent în câteva tipuri de celule umane. HDAC 1-3 partajează mai mult de 50% omologie, dar au structuri şi funcţii celulare distincte [66]. Ele sunt implicate în primul rând în supravieţuirea, proliferarea şi diferenţierea celulei, şi astfel inhibarea lor poate fi utilă într-o largă matrice a bolilor [67]; [68]; [69]; [70]; [71].
Exemplul 14 - Nivelul de secreţie BDNF în celulele SHSY-5Y
Fundal
Factorul neurotrofic derivat din creier (BDNF) este o moleculă omniprezentă în creier, asociată cu dezvoltarea neurală, neuro-protecţia şi neuro-regenerarea. BDNF nu numai că protejează împotriva neurodegenerării, dar de asemenea şi împotriva tulburărilor mentale de depresie şi anxietate, care sunt destul de comune între pacienţii diagnosticaţi cu PD sau AD.
Metode
SH-SY5-SY au fost placate în plȃci cu 24 de godeuri la densitatea de 60.000 celule/godeu şi plasate în incubator. După 24 ore, mediul a fost înlocuit cu mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS) şi 10 µM acid retinoic. Mediul de diferenţiere a fost înlocuit în fiecare altă zi şi celulele au fost utilizate în ziua 10 de diferenţiere. Pentru tratament, mediul de diferenţiere a fost îndepărtat şi înlocuit cu 450ul de mediu deplin de creştere şi 50 µl de bacterie SN au fost adăugaţi pentru a trata godeurile sau a fost adăugat YCFA+ ca control negativ.
Rezultate
Rezultatele sunt prezentate în Figura 19, care arată că administrarea de MRX0029 în combinaţie cu acidul retinoic creşte secreţia de BDNF din celulele neuroblastom diferenţiate. Compoziţiile cuprinzând bacterii comensale şi acizi organici pot fi prin urmare utile în terapie.
Exemplul 15 - Producţia de metaboliţi - metaboliţi în creier
Fundal
Metaboliţii prezenţi în supernatanţii bacterieni pot influenţa direct răspunsul gazdei la stresul oxidativ, la comunicaţia celulă cu celulă şi la neuroprotecţie. Metaboliţii care joacă un rol cheie în procesele neurologice au fost măsuraţi în timpul urmăririi ex vivo a ţesutului cerebral al şoarecilor alimentaţi cu MRx0005 şi MRx0029.
Metode
Animale
Şoarecii masculi adulţi BALBc (Envigo, UK) au fost gazduiţi grupat sub un ciclu lumină-întuneric de 12 ore; mȃncarea standard pentru rozătoare şi apa au fost disponibile ad libitum. Toate experimentele au fost efectuate în conformitate cu indicaţiile europene conforme cu aprobarea de către University College Cork Animal Ethics Experimentation Committee. Animalele au fost în vȃrstă de 8 săptămâni la începerea experimentului.
Conceperea studiului
Animalele au fost lăsate să habiteze în camera lor de găzduire timp de o săptămână după sosirea în unitatea de animale. Ele primesc gavaj oral (doză de 200µL) de bioterapeutice vii la o doză de 1 X 109 CFU timp de 6 zile consecutive între 15:00 şi 17:00. În ziua 7, animalele sunt decapitate, şi ţesuturile sunt recoltate pentru experimente.
Colectarea de ţesut
Animale au fost sacrificate într-o manieră aleatoare referitoare la tratament şi afecţiunea de testat; luarea unei mostre a avut loc între 9,00 a.m. şi 1:00 p.m. Coloana de sânge a fost colectată în tuburi EDTA (acid etilen diamin tetra acetic) de potasiu şi centrifugată timp de 15 min la 4000 g. Plasma a fost izolată şi depozitată la -80°C pentru analiza ulterioară. Creierul a fost repede excizat, disecat şi fiecare regiune a creierului a fost congelată înclichetat pe gheaţă uscată şi depozitată la -80°C pentru analiza ulterioară. Splina a fost îndepărtată şi procesată imediat după sacrificare pentru stimulare imună ex-vivo. Ţesutul intestinal (2 cm segmente de ileum şi colon cele mai apropiate de cecum au fost excizate, şi a fost utilizat cel mai îndepărtat 1cm de ţesut de cecum) a fost montat în camere de utilizare pentru testul intestinal de permeabilitate. Cecumul a fost îndepărtat, cântărit şi depozitat la -80°C pentru analiza SCFA.
Analiza monoamină
Concentraţia neurotransmiţătorului a fost analizată prin HPLC pe mostre din trunchiul cerebral. Pe scurt, ţesutul trunchiului cerebral a fost sonicat în 500 µl de fază mobilă răcită stopită cu 4 ng/40 µl de N-Metil 5-HT (Sigma Chimic Co., UK) ca standard intern. Faza mobilă a conţinut 0,1 M acid citric, 5,6 mM acid octan-1-sulfonic (Sigma), 0,1 M fosfat diacid de sodiu, 0,01 mM EDTA (Alkem/Reagecon, plută) şi 9% (v/v) metanol (Alkem/Reagecon) şi a fost ajustată la pH 2,8 utilizând 4 N hidroxid de sodiu (Alkem/Reagecon). Omogenaţii au fost apoi centrifugaţi timp de 15 min la 22.000 Ч g la 4°C şi 40 µl de supernatant injectat pe sistemul HPLC care a constat dintr-un controlor de sistem SCL 10-Avp, un detector electrochimic LECD 6A (Shimadzu), o pompă LC-10AS, un cuptor CTO-10A, un autoinjector SIL-10A (cu mostră mai rece menţinută la 40°C) şi un degazor online Gastorr (ISS, UK). O coloană cu fază inversă (Kinetex 2,6 u C18 100 × 4,6 mm, Fenomenex) menţinută la 30°C a fost utilizată în separare (debit de 0,9 ml/min). Electrodul de lucru din carbon sticlos combinat cu un electrod de referinţă de Ag/AgCl (Shimdazu) operat +0,8V şi cromatogramele generate au fost analizate utilizând software-ul de clasă-VP5 (Shimadzu). Neurotransmiţătorii au fost identificaţi prin timpii lor de retenţie caracteristici după cum s-a determinat prin injecţii standard, care se desfăşoară la intervale regulate în timpul analizei mostrei. Au fost măsurate rapoartele înălţimilor maxime ale analitului versus standardul intern şi comparate cu injecţia standard. Rezultatele au fost exprimate ca ng de neurotransmiţător pe g de greutate proaspătă de ţesut.
Analiza metaboliţilor
Pentru analiza GC a metaboliţilor, mostrele de supernatanţi bacterieni au fost derivate cu cloroformiat de metil utilizând o versiune puţin modificată a protocolului descris în [72]. Toate mostrele au fost analizate într-o ordine randomizată. Analiza a fost efectuată utilizând GC (7890B, Agilent) cuplat cu un detector cvadripol (59977B, Agilent). Sistemul a fost controlat de ChemStation (Agilent). Seriile de date au fost convertite în format netCDF utilizând Chemstation (Agilent), înainte ca datele să fie importate şi procesate în Matlab R2014b (Mathworks, Inc.) utilizând software-ul PARADISe descris în [65].
Pentru analiza acidului gras, mostre au fost acidulate utilizând acid clorhidric, şi s-au adăugat standarde interne etichetate cu deuteriu. Toate mostrele au fost analizate într-o ordine randomizată. Analiza a fost efectuată utilizând o coloană cu polaritate ridicată (Zebron™ ZB-FFAP, GC Cap. Coloană 30 m x 0,25 mm x 0,25 µm) instalată într-un GC (7890B, Agilent) cuplat cu un detector cvadripol (59977B, Agilent). Sistemul a fost controlat de ChemStation (Agilent). Seria de date a fost convertită în format netCDF utilizând Chemstation (Agilent), înainte ca datele să fie importate şi procesate în Matlab R2014b (Mathworks, Inc.) utilizând software-ul PARADISe descris în [65].
Rezultate - producţia de neurotransmiţători
Rezultatele sunt prezentate în Figura 20, care arată că în creierele şoarecilor alimentaţi cu MRx0029, nivelurile de noradrenalină sunt crescute (p=0,0507), însoţite de o uşoară creştere a serotoninei şi 5-HIAA. Aceste date susţin analiza metaboliţilor prezentată mai jos, sugerând că MRx00029 este un producător major de acid 4-hidroxifenilacetic, un antioxidant cunoscut [73]. Mai important, acidul 4-hidroxifenilacetic este un intermediar sintetic de dopamină şi norepinefrină şi o moleculă bio-activă importantă [74]. De fapt, în PD, modificările degenerative se extind dincolo de sistemul dopaminergic, afectând în mod egal sistemele serotonergic şi noradrenergic, care conduc în schimb la niveluri scăzute de serotonină (5-hidroxitriptamină, 5-HT) şi noradrenalină (norepinefrină) atȃt în structurile striatale cȃt şi extra-striatale [75]. L-DOPA ţinteşte în principal caracteristicile legate de dopamină ale PD, totuşi nu adresează scăderile nici în 5-HT şi nici în noradrenalină. În plus faţă de acestea este că cu cȃt mai lungă este durata tratamentului de L-DOPA, cu atȃt mai vizibil este un interval de complicaţii motoare şi nonmotoare (de exemplu dischinezie, simptoame psihiatrice) [76]. Prin urmare, aceste date demonstrează că bacteria care produce acizi organici, cum ar fi acidul 4-hidroxifenilacetic, poate fi utilă în terapie, în particular în tratamentul bolilor neurodegenerative.
Rezultate - producţia de metaboliţi
Metaboliţii prezenţi în supernatanţii bacterieni pot influenţa direct răspunsul gazdei la stresul oxidativ, la comunicaţia celulă cu celulă şi la neuroprotecţie în special. Metaboliţii din supernatantul de culturi de MRX0029 şi MRX0005 au fost analizaţi şi rezultatele sunt prezentate în Figura 21.
Câţiva metaboliţi au prezentat o diferenţă frapantă între cele două tulpini analizate. Concentraţia de acid succinic a fost în special ridicată la MRx0005. Interesant, raportul mostră/mediu pentru acidul 4-hidroxifenilacetic a fost semnificativ mai ridicat la MRx0029 (Fig. 21A).
Analiza acidului gras în supernatanţi a dezvăluit o dihotomie interesantă la cele două tulpini: MRx0005 a produs în principal acid acetic şi propanoic, în timp ce MRx0029 a produs acid butanoic, pentanoic şi hexanoic, atȃt în formele liniare cȃt şi în cele ramificate (Fig. 21B). Cele două tulpini au arătat foarte diferit şi în particular, producţia de acid succinic şi acid 4-hidroxifenilacetic de către MRx0005 şi respectiv MRx0029 a fost notabilă (Figura 21A). Mai mult, MRx0005 pare să producă mai mulţi acizi graşi cu catenă scurtă C2 şi C3, în timp ce MRx00029 a produs mai mult C4 (butirat) şi atăt acizi graşi cu catenă medie liniară cȃt şi ramificată, incluzând acidul hexanoic.
Acidul succinic este un metabolit de ciclu Krebs implicat în fosforilarea oxidativă. Complexul de fosforilare oxidativă este o etapă cheie pentru traficul sinaptic al proteinelor şi veziculelor la regiunile proximală şi distală [77]. Disfuncţia sa a fost raportată în tulburările neurodegenerative incluzând boala Alzheimer, boala Parkinson şi ataxia spinocerebrală de tip 1 [78]. Aceste descoperiri sunt în special interesante deoarece acidul succinic poate augmenta activitatea mitocondrială şi susţine neuronii vulnerabili din boala neurodegenerativă în legătură cu proteinele pliate anormal incluzând PD [79]. BDNF şi acidul succinic au ambele o activitate protectoare similară nu numai în neuro-degenerare ci de asemenea şi în tulburările mentale ca depresia şi anxietatea, care sunt destul de obişnuite la pacienţii diagnosticaţi cu PD sau AD.
Figura 21B demonstrează de asemenea că MRX0029 este un producător de butirat (acid butanoic). Acest lucru poate fi semnificativ deoarece butiratul are un rol cunoscut de reducere a impermeabilităţii barierei hematoencefalice, care are un efect neuroprotector [80]. Această proprietate a MRx0029 (şi a altor bacterii neuroprotectoare) poate contribui la eficacitatea sa.
Exemplul 16 - Modularea expresiei ARNm a proteinelor de joncţiune strânsă de către MRx0029
Deoarece dovezile recente sugerează că disfuncţia intestinală şi inflamaţia constituie un simptom non-motor asociat cu PD, a fost investigată abilitatea tulpinilor bacteriene ale invenţiei de a cauza orice disfuncţie a barierei intestinale. HT29-mtx epitelial, monostraturile celulare de producere a mucinei [81] au fost utilizate ca un model in vitro pentru a evalua întreruperea barierei intestinale şi stimularea imună după tratamentul cu MRx0005 şi MRx0029. Celulele HT29-mtx diferenţiate expuse la forbol 12-miristat-13-acetat (PMA) au secretat o cantitate semnificativă de IL-8; în contrast, tratamentul timp de 24 ore cu supernatanţii bacterieni MRx005 şi MRx0029, a indus o secreţie chiar mai scăzută de IL-8 comparativ cu celulele atȃt tratate cȃt şi netratate cu YCFA (Fig. 22A).
A fost apoi investigată abilitatea MRx0005 şi MRx0029 de reglare a permeabilităţii epiteliale prin modificarea transducţiei semnalului intracelular implicată în expresia şi localizarea proteinelor implicate în formarea barierei intestinale.
ARN a fost izolat şi s-a efectuat analiza RT-PCR cantitativă (qRT-PCR) pentru a caracteriza modificările în expresia genei de proteine de joncţiune strânsă în timpul incubării cu MRx0005 şi MRx0029. Administrarea de MRx0029 a sporit expresia ARNm de ocludin, vlilin, proteine 1 şi 2 de joncţiune strânsă (respectiv TJP1 şi TJP2) după 2 ore de incubare (Fig. 22B). În contrast, expunerea la MRx0005 nu a alterat expresia genei de proteine de joncţiune strânsă care arată că cele două tulpini acţionează diferit asupra barierei intestinale.
Rezultatele in vitro au fost comparate cu datele de la analiza paralelă ex vivo pe intestinul şoarecilor alimentaţi cu MRx0005 şi MRx0029. Expresia genei de TJP2 şi ocludin a fost cuantificată în colon şi ileum. Datele ex vivo oglindesc perfect datele in vitro, că MRx0029 a fost capabilă să regleze pozitiv semnificativ TJP1 şi ocludin (p=0,073) în regiunea colonului intestinului murin (Fig. 22C+22D). MRx0029 a fost de asemenea capabil să scadă funcţia de permeabilitate din colon la aceiaşi şoareci (Fig. 22E+22F).
Materiale şi metode - extragerea ARN şi analiza qPCR
ARN total a fost extras utilizând mini trusa RNeasy (Qiagen, Manchester, JUK) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului, şi concentraţia de ARN a fost determinată prin absorbanţă la 260/280nm utilizând un spectrofotometru (nano-Drop ND-1000; Thermo Scientific, Wilmington, DE). Pentru analiza expresiei de ARNm, ADNc a fost preparat din ARN total utilizând trusa de transcripţie inversă ADNc de mare capacitate (Applied Biosystems, UK) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului. Reacţiile de transcipţie inversă au fost efectuate într-un termociclator (Biometra, Germania) la 25°C timp de 10min, 37°C timp de 120min, şi 85°C timp de 5 min, menţinute la 4°C. ADNc rezultat a fost amplificat în duplicate prin testul SYBR-Green PCR, şi produsele au fost detectate pe o maşină PCR în timp real QuantStudio 6 flex (Applied Biosystems, UK) utilizând un profil standardizat (denaturare iniţială de 95°C timp de 10 minute, urmată de 40 cicluri de 15 secunde de denaturare la 95°C şi 60 secunde de recoacere/extensie la 60/65°C, depinzând de iniţiatori. S-a adăugat o etapă de disociere după 40 de cicluri pentru a genera o curbă de topire. Analiza a fost efectuată utilizând software-ul în timp real Applied Biosystems QuantStudio PCR v1.2. Secvenţele iniţiatoare pentru actină, vilină, TJP1 şi TJP2 de ocludin sunt furnizate în lista de secvenţe.
Exemplul 16 - Testarea stabilităţii
O compoziţie descrisă aici conţinând cel puţin o tulpină bacteriană descrisă aici, este depozitată într-un recipient etanşat la 25°C sau 4°C şi recipientul este plasat într-o atmosferă având 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 90% sau 95% umiditate relativă. După 1 lună, 2 luni, 3 luni, 6 luni, 1 an, 1,5 ani, 2 ani, 2,5 ani sau 3 ani, cel puţin 50%, 60%, 70%, 80% sau 90% din tulpina bacteriană va rămâne cum s-a măsurat în unităţile de formare a coloniilor determinată de protocoale standard.
Exemplul 17
Metode
Animale
Animalele şi conceperea studiului utilizate au fost aceleaşi ca în exemplul 15.
Tulpini bacteriene
• 755: Parabacteroides distasonis (MRX005) • Megasphaera massiliensis (MRX0029)
Colectarea ţesutului
Animale au fost sacrificate într-o manieră aleatoare referitoare la tratament şi afecţiunea testată; luarea unei mostre a avut loc între 9,00 a.m. şi 2:30 p.m. Coloana de sânge a fost colectată în tuburi EDTA (acid etilen diamin tetra acetic) de potasiu şi centrifugate timp de 15 min la 4000 g. Plasma a fost izolată şi depozitată la -80°C pentru analiză ulterioară. Creierul a fost repede excizat, disecat şi fiecare regiune a creierului a fost congelată înclichetat pe gheaţă uscată şi depozitată la -80°C pentru analiză ulterioară. Splina a fost îndepărtată, colectată în 5 mL de mediu RPMI (cu L-glutamină şi bicarbonat de sodiu, R8758 Sigma + 10 % FBS (F7524, Sigma) + 1% Pen/Strep (P4333, Sigma)) şi procesată imediat după sacrificare pentru stimulare imună ex-vivo. Ţesutul intestinal (2-3 cm de segmente de ileum şi colon cele mai apropiate de cecum au fost excizate, şi s-au utilizat cei mai îndepărtaţi 1cm-2cm de ţesut de cecum) a fost montat în camere de utilizare pentru testul intestinal de permeabilitate. Cecumul a fost îndepărtat, cântărit şi depozitat la -80°C pentru analiza SCFA.
Analiza monoaminei
Concentraţia de neurotransmiţător a fost analizată cum s-a descris în Exemplul 10.
Testul de citokine splinale
Splinele au fost colectate imediat în 5mL de mediu RPMI după sacrificare şi cultivate imediat. Celule din splină au fost mai întȃi omogenizate în acest mediu RPMI, urmate de 5 minute de incubare cu 1ml de tampon de lizare RBC (11814389001 ROCHE, Sigma). S-a adăugat un mediu suplimentar de 10 ml de RPMI, urmat de 200G centrifugare timp de 5 minute. Supernatantul a fost apoi filtrat printr-un filtru de 40um. Celulele au fost numărate şi însămânţate (4.000.000/mL în medie). După 2,5 ore de adaptare, celulele au fost stimulate cu lipopolizaharidă (LPS-2 µg/ml) sau concanavalin A (ConA-2,5 µg/ml) timp de 24 ore. După stimulare, supernatanţii au fost recoltaţi pentru a evalua eliberarea citokinelor utilizând trusa V-PLEX (şoarece) cu panoul 1 proinflamator (Meso Scale Discovery, Mariland, SUA) pentru TNFα, IL-10, IL-1β, Interferon y, CXCL2 şi IL6. Analizele au fost efectuate utilizând MESO QuickPlex SQ 120, SECTOR Imager 2400, SECTOR Imager 6000, SECTOR S 600.
Analiza expresiei genei
ARN total a fost extras utilizând trusa de izolare ARMmi mirVana™ (Ambion/Llife tehnologii, Paisley, UK) şi tratat DNase (Turbo ADN-liber, Ambion/Life Technologies) în conformitate cu recomandările fabricanţilor. ARN a fost cuantificat utilizând un spectrofotometru NanoDrop™ (Thermo Fisher Scientific Inc., Wilmington, Delaware, SUA) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului. Calitatea ARN a fost evaluată utilizând bioanalizor Agilent (Agilent, Stockport, UK) în conformitate cu procedura fabricantului şi s-a calculat un număr de integritate ARN (RIN). ARN cu valoarea RIN >7 a fost utilizat pentru experimentele ulterioare. ARN a fost transcris invers la ADNc utilizând trusa ADNc de capacitate ridicată Applied Biosystems (Applied Biosystems, Warrington, UK) în conformitate cu instrucţiunile fabricantului. Pe scurt, transcriptaza inversă multiscrisă (50 U/µL) (1)(2)(1)(10) a fost adăugată ca o parte din amestecul principal la temperatura camerei, incubată la 25°C timp de 10 min, la 37°C timp de 2 ore,la 85°C timp de 5 min şi depozitată la 4°C. PCR cantitativ a fost efectuată utilizând sonde (6 carboxi fluoresceină - FAM) concepute de Applied Biosystems la genele de şoarece ţintite specific, în timp ce s-a utilizat β-actină ca un control endogen. Reacţiile de amplificare au conţinut 1 µl ADNc, 5 µl de amestec principal 2X PCR (Roche), 900 nM din fiecare iniţiator şi au fost aduse la un total de 10 µl prin adăugarea de apă fără RNase. Toate reacţiile au fost efectuate în triplicat utilizând plăci cu 96 de godeuri pe sistemul LightCycler®480. Condiţiile ciclice termice au fost cum s-au recomandat de fabricant (Roche) pentru 55 cicluri. Pentru a verifica contaminarea cu amplicon, fiecare rulare nu a conţinut controale şablon în triplicat pentru fiecare sondă utilizată. Valorile pragului de ciclu (Ct) au fost înregistrate. Datele au fost normalizate utilizând β-actină şi transformate utilizând metoda 2-ΔΔCT şi prezentate ca modificare de pliere vs. grupul de control.
Analiza acizilor graşi cu catenă scurtă în conţinutul cecal
Conţinutul cecumului a fost amestecat şi vortexat cu apă MilliQ şi incubat la temperatura camerei timp de 10 min. Supernatanţii au fost obţinuţi prin centrifugare (10000 g, 5 min, 4°C) la bacteria peletului şi la alte solide şi prin filtrare de 0,2µm. A fost transferat la o fiolă GC transparentă şi acidul 2-etilbutiric (Sigma) a fost utilizat ca standard intern. Concentraţia de SCFA a fost analizată utilizând un sistem de ionizare cu flacără Varian 3500 GC, ajustat cu o coloană ZB-FFAP (30 m x 0,32 mm x 0,25 mm; Fenomenex). S-a construit o curbă standard cu diferite concentraţii ale unui amestec standard conţinând acetat, propionat, iso-butirat, n-butirat, isovalerat şi valerat (Sigma). Maximele au fost integrate prin utilizarea software-ului versiunea 6.0 de pe staţia de lucru Varian Star Chromatography. Toate datele SCFA sunt exprimate ca µmol/g.
Analiza statistică
Datele distribuite normal sunt prezentate ca medie ± SEM; seturile de date neparametrice sunt prezentate ca mediană cu interval inter-cvartale. S-au aplicat teste t bidirecţionale neîmperecheate pentru a analiza datele parametrice şi testul Mann-Whitney a fost utilizat pentru cele neparametrice. Coeficientul de corelaţie al gradului Spearman a fost utilizat pentru analiza corelaţiei în seturile de date grupate. O valoare p < 0,05 a fost considerată semnificativă în toate cazurile.
Rezultate - Producţia de neurotransmiţători
Rezultatele din Figura 23 prezintă efectul tratamentului cu MRx005 asupra concentraţiei de neurotransmiţători în creierul şoarecilor. Cel mai notabil, tratamentul cu MRx005 conduce la o scadere a dopaminei.
Rezultate - expresia genei
Expresia genelor pentru receptorii neurotransmiţători [receptor serotonin 1a(5-HTR1a), receptorul D1 dopamină, subunitatea B1 a receptorului GABA, receptorul GABAA, receptorii NMDA2A (Grin2A) şi NMDA2B (Grin2b)], markerii inflamatori [IL-1β, IL6, CD11b, TNFα şi TLR4], şi markerii endocrini [factor de eliberare al corticosteronului (CRF), receptorii 1 şi 2 ai factorului de eliberare al corticosteronului (CRFR1, CRFR2), factorul neurotrofin derivat din creier (BDNF), receptorul vasopresin, receptorul oxitocin, receptorul glucocorticoid şi receptorul mineralocorticoid] a fost analizată în ţesutul cerebral din hipocampus, amigdale şi cortexul prefrontal.
Figurile 24-38 arată modificările în expresia genei după tratamentul cu MRX005 sau MRX0029 în hipocampal, amigdale şi cortexul prefrontal. Tratamentul cu MRx0029 a condus la o creştere în expresia receptorului glucocorticoid în amigdale (Figura 31C). Figura 32A arată că MRx005 a crescut semnificativ expresia de BDNF în amigdale, în timp ce tratamentul cu MRx0029 a crescut semnificativ expresia de TLR4 în amigdale (Figura 32).
Ambele MRx005 şi MRx0029 pot creşte expresia de CDllb în amigdale (Figura 33A), în timp ce expresia de IL-6, Grin2a şi Grin2b este redusă după tratamentul cu MRx005 (Figurile 33B-D). În plus, MRx005 şi MRx0029 au crescut semnificativ expresia de GABRA2 şi au crescut expresia de GABBR1 în amigdale.
Tratamentul cu MRx005 a condus la o creştere semnificativă în expresia de BDNF în cortexul prefrontal (Figura 35B).
Discuţie
Administrarea de MRx005 şi MRx0029 a cauzat modificări în expresia genei, în special în amigdale.
Rezultate - Efectul asupra expresiei de Tph1 şi IDO-1
Figura 39 arată că MRx0029 poate creşte semnificativ expresia de triptofan hidroxilază-1 (Tph1) în colon şi că tratamentul cu MRX005 poate creşte expresia de IDO-1 în colon. Tratamentul cu MRX005 a crescut expresia de Tph1 şi IDOl în ileum (Figura 40).
Indolamină-pirol 2,3-dioxigenază-1 (IDO-1) este prima enzimă şi limitatoare de viteză în calea triptofan/kinurenină în timp ce triptofan hidroxilază 1 (Tph1), o izoformă a enzimei triptofan hidroxilază, este responsabilă de sinteza de serotonină. Aceste date sugerează că MRx0029 şi MRx005 pot afecta nivelurile de serotonină şi calea triptofan/kinurenină.
Rezultate - Efectul asupra nivelurilor metabolite de triptofan
Figura 41 prezintă efectul tratamentului cu MRx005 asupra nivelurilor de kinurenine şi triptofan în circulaţie.
Rezultate - Efectul asupra expresiei de citokine din splenocite
Testul de splenocite ex-vivo implică provocarea splenocitelor (celule izolate din splină - un organ principal implicat în apărarea imună), cu o provocare bacterio sau viral-mimetică.
MRX005 a redus semnificativ nivelurile de interferon-y în splenocite după o provocare cu LPS (Figura 42). În plus, MRX005 a redus nivelurile de interleukină-6 şi factor de necroză tumorală după o provocare cu LPS (Figurile 44 şi respectiv 45). Tratamentul cu MRx0029 a condus la o reducere în interferon-y, interleukină-1β şi interleukină-6 după o provocare cu LPS (Figurile 42, 43 şi respectiv 44).
Tratamentul cu MRx005 şi MRx0029 a condus la o creştere în nivelurile de chemoatractant CXCL1 (Figura 47).
Rezultate - Efectul asupra nivelurilor cecale ale acizilor graşi cu catenă scurtă
Acizii graşi cu catenă scurtă (SCFA) sunt produşi când fibrele nedigerabile din dietă sunt fermentate de bacterii în intestin. Efectele administrării de MRX005 sunt prezentate în Figura 48.
Exemplul 18- Analiza ulterioară a modificărilor induse de MRX029 şi MRX005 în nivelurile de expresie ale genei
Metode
Linie celulară
Celule SH-SY5Y
Tulpini bacteriene
• 755: Parabacteroides distasonis (MRX005) • Megasphaera massiliensis (MRX0029) qPCR SHSY5Y au fost placate în plăci Petri de 10cm la o densitate de 2x106 celule. După 24 ore celulele au fost tratate în mediu de diferenţiere (mediu de creştere conţinând 1% FBS fără RA) cu 10% supernatanţi bacterieni sau YCFA+, 10uM RA, 200uM acid hexanoic sau 200uM acid valproic, timp de 17 ore. După aceea, au fost luate imagini reprezentative utilizând microscopul de detaliu EVOS XL cu contrast de fază la amplificare de 40X/0,65. Celulele au fost colectate, şi ARN total a fost izolat în conformitate cu protocolul mini trusei RNeasy (Qiagen). ADNc-urile au fost făcute utilizând trusa de transcripţie inversă ADNc de mare capacitate (Applied Biosystems). Expresia genei a fost măsurată utilizând qPCR. GAPDH a fost utilizat ca control intern. Modificarea plierii a fost calculată în conformitate cu metoda 2(-ΔΔct). Secvenţele iniţiatoare pentru MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 şi NSE sunt furnizate în lista de secvenţe.
Imuno-etichetarea şi imaginea celulei
Celulele au fost însămânţate pe lamele cameră cu 8 godeuri (Marienfeld Laborator Glassware) la 5x104 celule/godeu peste noapte şi au fost tratate cu 10% supernatant bacterian timp de 24 ore. Pentru diferenţiere, celulele au fost tratate cu 10 nM RA timp de 5 zile înainte de a fi tratate cu supernatant bacterian fără celule timp de 24 ore. După aceea, celulele au fost fixate cu 4% paraformaldehidă în PBS timp de 20 minute la temperatura camerei (RT). Celulele fixate au fost spălate cu PBS, şi permeabilizate cu 1% Triton X-100 în PBS timp de 10 minute. După spălarea cu PBS, lamelele au fost incubate cu tampon de blocare (4% BSA/PBS) timp de 1 oră la temperatura camerei înainte de adăugarea de anticorp anti-MAP2 sau β3-tubulină (sc-74421 şi sc-80005 respectiv, Santa Cruz Biotechnology Inc) diluat în 1% BSA/PBS timp de 12 ore la 4°C. Ele au fost apoi spălate de două ori cu PBS, urmate de incubare cu conjugat anti-şoarece Alexa Flour 488 (Molecular Probes Inc) şi conjugat faloidin Alexa Flour 594 (ab176757, Abcam) timp de 1 oră la temperatura camerei. După spălarea 3X cu PBS, lamelele au fost colorate cu DAPI şi montate cu Vectashield® (Vector Laboratories). Lamelele au fost urmărite utilizând un microscop Axioskop 50 (Zeiss) echipat cu un obiectiv 63x/1,2 W Korr şi seturi de filtre adecvate pentru detecţie fluorocromilor utilizaţi. Timpii manuali de expunere pentru achiziţia digitală de imagini imuno-etichetate cu MAP-2 au fost ţinuţi constanţi permiţând comparaţia între diferite godeuri şi tratamente. Timpii de expunere cu faloidin (F-actină) şi DAPI au variat pentru a se adapta domeniului de vedere. Domeniile randomizate de vedere au fost dobândite utilizând o cameră Qlmaging controlată de software-ul Image Pro Plus. Imaginile au fost salvate ca fişiere TIFF şi deschise în Adobe Fotoshop CC 2015,1.2. Imaginile de MAP-2, DAPI şi imaginile faloidin au fost apoi suprapuse şi îmbinate. Imaginile reprezentative au fost selectate pentru a ilustra diferenţele în abundenţă şi locaţie ale proteinelor examinate.
Imunopătarea
Celulele SH-SY5Y cultivate în condiţiile indicate descrise mai sus, au fost tratate cu MRx0005 şi MRx0029 timp de 24 ore şi apoi lizate în tampon RIPA conţinând amestec de inhibitori de protează (Roche Diagnostics, UK). Concentraţia de proteină a fost estimată utilizând trusa de testare a proteinei BCA (Pierce Biotechnology, Rockford, IL), separată cu SDS-PAGE şi transferată la o membrană PVDF. Membrana a fost apoi blocată cu 5% lapte uscat fără grăsime sau 5% BSA şi incubată peste noapte la 4°C cu anticorpi primari (respectiv MAP2 şi β3-tubulină). Petele au fost apoi incubate cu anticorp secundar conjugat (HRP) din peroxidază din hrean adecvată, şi proteinele au fost detectate prin trusa de detecţie a chemiluminiscenţei (Pierce Biotechnology, Rockford, IL). Pentru ambele MAP2 şi β3-tubulină, β-actina a servit drept control pentru a monitoriza variabilitatea de încărcare a proteinei între mostre.
Rezultate şi discuţie
Expresia genei
Figurile 13a (inserţie grafică) şi 49 arată că modificările induse de MRx0029 şi MRX005 în expresia nivelurilor de actină, vilin, ocludin TJP1, TJP2, MAP2, DRD2, GABRB3, SYP, PINK1, PARK7 şi NSE.
Microscopie şi imunopătare
Figura 50 prezintă modificarea în nivelul expresiei de MAP2 în celulele SHSY5Y după cum s-a determinat prin microscopie confocală. Nivelurile de expresie ale MAP2 şi B3-tubulinei au fost de asemenea cuantificate prin analiză de imunopătare. Rezultatele prezentate în figurile 50M şi N au indicat că MRX029 induce o creştere în expresia nivelului de MAP2.
Secvenţe
Iniţiatori utilizaţi pentru qPCR (cu SEQ ID NO în paranteze)
Nume Secvenţă directă Secvenţă inversă ACTB GATCAAGATCATTGCTCCTC (3) TTGTCAAGAAAGGGTGTAAC (4) GAPDH GGTATCGTGGAAGGACTCATG (5) ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTC (6) MAP2 CTCAGCACCGCTAACAGAGG (7) CATTGGCGCTTCTCTCCTC (8) Ocludin AAGAGGAATTTTGACACTGG (9) GCCATGTACTCTTCACTTTC (10) TJ1 AAGTCACACTGGTGAAATCC (11) CTCTTGCTGCCAAACTATCT (12) TJP2 CCCTCCCCTGGATCAGGAT (13) GCCATCAAACTCGTCCATCA (14) Vilin CATTACCTGCTCTACGTTTG (15) AGATGGACATAAGATGAGGTG (16)
Iniţiatori şi sonde utilizate pentru qPCR ex vivo (cu SEQ ID NO în paranteze)
Ex vivo:
Iniţiatori suplimentari utilizaţi în qPCR (cu SEQ ID NO în paranteze)
Gene ID Forward secvenţă Inversează secvenţă NSE CCCTGTATCGTAAGAACGGT (30) GCCACCATTGATCACGTTGA (31) PINK1 CCCAAGCAACTAGCCCCTC (32) GGCAGCACATCAGGGTAGTC (33) PARK7 GTAGCCGTGATGTGGTCATTT (34) CTGTGCGCCCAGATTACCT (35) SYP CTCGGCTTTGTGAAGGTGCT (36) GGCTTCA TGGCA TCAACTTCA (37)
REFERIRI
[1] Spor şi colab. (2011) Nat Rev Microbiol. 9(4):279-90.
[2] Eckburg şi colab. (2005) Science. 10;308(5728):1635-8.
[3] Macpherson şi colab. (2001) Microbes Infect. 3(12):1021-35
[4] Macpherson şi colab. (2002) Cell Mol Life Sci. 59(12):2088-96.
[5] Mazmanian şi colab. (2005) Cell 15;122(1):107-18.
[6] Frank şi colab. (2007) PNAS 104(34):13780-5.
[7] Scanlan şi colab. (2006) J Clin Microbiol. 44(11):3980-8.
[8] Kang şi colab. (2010) Inflamm Bowel Dis. 16(12):2034-42.
[9] Machiels şi colab. (2013) Gut. 63(8):1275-83.
[10] WO 2013/050792
[11] WO 03/046580
[12] WO 2013/008039
[13] WO 2014/167338
[14] Goldin şi Gorbach (2008) Clin Infect Dis. 46 Suppl 2:S96-100.
[15] Azad şi colab. (2013) BMJ. 347:f6471.
[16] Mayer şi colab (2014) The Journal of Neuroscience 34(46):15490 -15496
[17] Cryan şi Dinan (2015) Neuropsychofarmacology, 40: 241-2.
[18] Zhou şi Foster (2015) Neuropsychiatric Disease and Treatment 11: 715-723.
[19] Wang şi Kasper (2014) Brain Behav Immun. 38: 1-12.
[20] US2004/005304
[21] US2004/170617
[22] Padmanabhan şi colab. (2013) Standards in Genomic Sciences 8:525-538
[23] Masco şi colab. (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.
[24] Srůtkovб şi colab. (2011) J. Microbiol. Methods, 87(1):10-6.
[25] Kadi şi colab (2006) J Neuroimunol 174: 133-46
[26] Pal R şi colab (2016) Neurol Res. 38(12):1111-1122
[27] Daniele şi colab (2015) Sci Semnal 8(376):ra45
[28] Ahmed şi colab, manuscris în preparare
[29] Baraczka şi colab. (1983) J Neural Transm. 58(3-4):299-304.
[30] Eldrup şi colab. (1995) Acta Neurol Scand. 92(2):116-21.
[31] Wang şi colab. (2016) J Neurogastroenterol Motil 22: 589-605.
[32] Zadori şi colab (2012) Journal of Neural Transmission, 119, 2, 275-283
[33] Lee şi colab (2008) European J. Cell Biology 87:389-397
[34] Pirooznia şi Elefant (2013) Front Cell Neurosci. 7: 30.
[35] Tang, şi colab. (2017) J Am Heart Assoc, 6(10).
[36] Wang şi colab. (2015) PNAS, 112(9):2583-2858
[37] Psaty şi colab. (2003) JAMA, 289(19):2534-44
[38] Lancet. (1995) 346(8991-8992):1647-53
[39] Miyamoto-Shinohara şi colab. (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.
[40] Cryopreservation and Freeze-Drying Protocols, ed. by Day and McLellan, Humana Press.
[41] Leslie şi colab. (1995) Appl. Environ. Microbiol. 61, 3592-3597.
[42] Mitropoulou şi colab. (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.
[43] Kailasapathy şi colab. (2002) Curr Issues Intest Microbiol. 3(2):39-48.
[44] Handbook of Pharmaceutical Excipients, ediţia a 2-a, (1994), editat de A Wade şi PJ Weller
[45] Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)
[46] US 2016/0067188
[47] Handbook of Microbiological Media, ediţia a patra (2010) Ronald Atlas, CRC Press.
[48] Maintaining Cultures for Biotechnology and Industry (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press
[49] Strobel (2009) Methods Mol Biol. 581:247-61.
[50] Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy. ediţia 20, ISBN: 0683306472.
[51] Molecular Biology Techniques: An Intensive Laboratory Course, (Ream et al., eds., 1998, Academic Press).
[52] Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan, eds., Academic Press, Inc.)
[53] Handbook of Experimental Immunology, Vols. I-IV (D.M. Weir and C.C. Blackwell, eds, 1986, Blackwell Scientific Publications)
[54] Sambrook şi colab. (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd edition (Cold Spring Harbor Laboratory Press).
[55] Handbook of Surface and Colloidal Chemistry (Birdi, K.S. ed., CRC Press, 1997)
[56] Ausubel şi colab. (eds) (2002) Short protocols in molecular biology, 5th edition (Current Protocols).
[57] PCR (Introduction to Biotechniques Series), ed. a 2-a (Newton & Graham eds., 1997, Springer Verlag)
[58] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel şi colab., eds., 1987) Supliment 30
[59] Smith & Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2: 482-489.
[60] Pakkenberg şi colab. (1991) J Neurol Neurosurg Psychiatry, 54(1):30-3.
[61] Przedborski şi colab. (2000). Restor Neurol Neurosci. 16(2):135-142.
[62] Kehr J. (1999) Monitoring chemistry of brain microenvironment: biosensors, microdialysis and related techniques. Chapter 41. In: Modern techniques in neuroscience research. (Eds. U. Windhorst and H. Johansson) Springer-Verlag GmbH., Heidelberg, Germany. 1149-1198.
[63] Kehr J., şi Yoshitake T. (2006) Monitoring brain chemical signals by microdialysis. In: Encyclopedia of Sensors, Vol. 6. (Eds. C.A. Grimes, E.C. Dickey and M.V. Pishko) American Scientific Publishers, USA. 287-312.
[64]Abel şi Zukin (2008) Curr Opin Pharmacol, 2008. 8(1): 57-64
[65] Johnsen şi colab (2017) Journal of Chromatography A. 1503: 57-64
[66] West şi Johnstone (2014) J Clin Invest. 124, 30-39
[67] Glauben şi colab. (2006) J Immunol, 176: 5015-5022
[68] Angiolilli şi colab. (2017) Ann Rheum Dis, 76: 277-285
[69] Gonneaud şi colab. (2014) J Inflamm, 11: 43
[70] Alenghat şi colab. (2013) Nature, 504: 153-157
[71] Felice şi colab. (2015) Ailment Pharmacol Ther, 41: 26-38
[72] Smart şi colab (2010) Nature Protocols. 10:1709-29
[73] Weon şi colab. (2016)
[74] Huot şi colab., (2015) Parkinson's Disease
[75] Scatton şi colab. (1983) Brain Res, 275(2): 321-8
[76] Hely et a. (2005) Mov Disord. 20(2): 190-9
[77] Budd şi Nicholls (1998) Essays Biochem. 33:43-52
[78] Ebadi şi colab (2001) Biol Signals Recept. 10(3-4):224-253
[79] Ferro şi colab (2017) PLoS One 2017, 12(12):e0188425
[80] Michel şi Prat (2016) Ann Transl Med. 4(1): 15.
[81] Gagnon şi colab (2013) J Microbiological Methods. 94: 274-279
0-1 Formular PCT/RO/134 de indicaţii în legătură cu microorganismele depozitate sau alte materiale biologice (regula PCT 13bis) 0-1-1 Utilizarea preparatului Versiune de depunere PCT online 3.5.000.256e MT/FOP 20141031/0.20.5.20 0-2 Nr. cerere internaţională 0-3 Referinţa fişierului solicitantului sau agentului P070772WO 1 Indicaţiile făcute mai jos se referă la microorganismele depozitate sau la alte materiale biologice la care se face referire în descriere: 1-1 pagina 11 1-2 linia 16-20 1-3 Identificarea de depozit 1-3-1 Numele instituţiei de depozitare NCIMB National Collections of Industrial, Food and Marine Bacteria (NCIMB) 1-3-2 Adresa instituţiei de depozitare NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, United Kingdom 1-3-3 Data de depozitare 12 Martie 2015 (12.03.2015) 1-3-4 Număr de acces NCIMB 42382 1-5 Stări desemnate pentru care sunt făcute indicaţiile Toate desemnările 2 2-1 2-2 Indicaţiile făcute mai jos se referă la microorganismele depozitate sau la alte materiale biologice la care se face referire în descriere pe: pagină linie 8 12-15 2-3 Identificarea depozitului 2-3-1 Numele instituţiei de depozitare NCIMB National Collections of Industrial, Food and Marine Bacteria (NCIMB) 2-3-2 Adresa instituţiei de depozitare NCIMB Ltd, Ferguson Building, Craibstone Estate, Bucksburn, Aberdeen AB21 9YA, United Kingdom 2-3-3 Data de depozitare 13 Iulie 2017 (13.07.2017) 2-3-4 Număr de acces NCIMB 42787 2-5 Stările desemnate pentru care sunt făcute indicaţiile Toate desemnările
NUMAI PENTRU UTILIZAREA BIROULUI DE PRIMIRE
0-4 Aceast formular a fost primit cu cererea internaţională: (da sau nu) 0-4-1 Manager autorizat
NUMAI PENTRU UTILIZAREA BIROULUI INTERNAŢIONAL
0-5 Acest formular a fost a primit de biroul internaţional pe: 0-5-1 Manager autorizat
LISTĂ DE SECVENŢE
<110> 4D FARMA RESEARCH LIMITED
<120> COMPOZIŢII CUPRINZВND TULPINI BACTERIENE
<130> P077072
<141> 2018-06-13
<150> 1709468,1 <151> 2017-06-14
<150> 1709534,0 <151> 2017-06-15
<150> 1712851,3 <151> 2017-08-10
<150> 1803826,5 <151> 2018-03-09
<150> 1805989,9 <151> 2018-04-11
<150> 1805991,5 <151> 2018-04-11
<150> 1805990,7 <151> 2018-04-11
<150> 1806780,1 <151> 2018-04-25
<150> 1806779,3 <151> 2018-04-25
<160> 37
<170> SeqWin2010, versiunea 1,0
<210> 1
<211> 1519
<212> ADN
<213> Tulpină Megasphaera massiliensis NP3
<400> 1
<210> 2
<211> 1398
<212> ADN
<213> Tulpină Megasphaera massiliensis MRX0029
<400> 2
<210> 3
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 3
gatcaagatc attgctcctc 20
<210> 4
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 4
ttgtcaagaa agggtgtaac 20
<210> 5
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 5
ggtatcgtgg aaggactcat g 21
<210> 6
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 6
atgccagtga gcttcccgtt c 21
<210> 7
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 7
ctcagcaccg ctaacagagg 20
<210> 8
<211> 19
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 8
cattggcgct tctctcctc 19
<210> 9
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 9
aagaggaatt ttgacactgg 20
<210> 10
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 10
gccatgtact cttcactttc 20
<210> 11
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 11
aagtcacact ggtgaaatcc 20
<210> 12
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 12
ctcttgctgc caaactatct 20
<210> 13
<211> 19
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 13
ccctcccctg gatcaggat 19
<210> 14
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 14
gccatcaaac tcgtccatca 20
<210> 15
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 15
cattacctgc tctacgtttg 20
<210> 16
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 16
agatggacat aagatgaggt g 21
<210> 17
<211> 1403
<212> ADN
<213> Tulpină Parabacteroides distasonis MRX0005
<400> 17
<210> 18
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 18
gattactgct ctggctccta g 21
<210> 19
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 19
gactcatcgt actcctgctt g 21
<210> 20
<211> 22
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 20
ctggcctcac tgtccacctt cc 22
<210> 21
<211> 19
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 21
aatggtgaag gtcggtgtg 19
<210> 22
<211> 24
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 22
gtggagtcat actggaacat gtag 24
<210> 23
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 23
tgcaaatggc agccctggtg 20
<210> 24
<211> 23
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 24
gctgccttga tgtttacttt gac 23
<210> 25
<211> 23
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 25
gcaaccgaag tatgaaataa cca 23
<210> 26
<211> 27
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 26
accaggtgag aagagtgatg accatcc 27
<210> 27
<211> 19
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 27
agccagagtc cttcagaga 19
<210> 28
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 28
tccttagcca ctccttctgt 20
<210> 29
<211> 26
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 29
cctaccccaa tttccaatgc tctcct 26
<210> 30
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 30
ccctgtatcg taagaacggt 20
<210> 31
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 31
gccaccattg atcacgttga 20
<210> 32
<211> 19
<212> ADN
<213>
<400> 32
cccaagcaac tagcccctc 19
<210> 33
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 33
ggcagcacat cagggtagtc 20
<210> 34
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 34
gtagccgtga tgtggtcatt t 21
<210> 35
<211> 19
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 35
ctgtgcgccc agattacct 19
<210> 36
<211> 20
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 36
ctcggctttg tgaaggtgct 20
<210> 37
<211> 21
<212> ADN
<213> Secvenţă artificială
<220> <223>
<400> 37
ggcttcatgg catcaacttc a 21

Claims (15)

1. O compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenirea a unei tulburări neurodegenerative, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s ARNr care este cel puţin 95% identică cu SEQ ID NO:2.
2. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1, în care metoda este pentru tratarea sau prevenirea unei boli sau afecţiuni selectate din grupul constând din boala Parkinson, incluzând paralizia supranucleară progresivă, paralizia supranucleară progresivă, sindromul Steele-Richardson-Olszewski, hidrocefaleea cu presiune normală, parkinsonismul vascular sau arteriosclerotic şi parkinsonismul indus de medicamente; boala Alzheimer, incluzând sindromul Benson; scleroza multiplă; boala Huntington; scleroza laterală amiotrofică; boala Lou Gehrig; boala neuronului motor; boala prion; ataxia spinocerebrală; atrofia musculară spinală; demenţa, incluzând corp Lewy, demenţa vasculară şi frontotemporală; afazia progresivă primară; deprecierea cognitivă uşoară; deprecierea cognitivă asociată cu HIV şi degenerarea corticobazală.
3. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 2, în care compoziţia este pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a bolii Parkinson.
4. Compoziţia pentru utilizare conform oricăreia dintre revendicările 1-3, în care compoziţia este pentru utilizare într-o metodă de tratare sau prevenire a debutului timpuriu a unei boli neurodegenerative; şi/sau în care compoziţia este pentru utilizare într-o metodă de prevenire sau întȃrziere a debutului sau progresului unei tulburări neurodegenerative.
5. O compoziţie cuprinzând o tulpină bacteriană din genul Megasphaera, pentru utilizare într-o metodă de tratare a leziunii creierului, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s ARNr care este cel puţin 95%, identică cu SEQ ID NO:2.
6. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 5, în care leziunea creierului este accidentul vascular cerebral, cum ar fi ischemia cerebrală, ischemia cerebrală focală, accidentul vascular cerebral ischemic sau accidentul vascular cerebral hemoragic.
7. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu oricare din revendicările precedente, în care tulpina bacteriană este de Megasphaera massiliensis.
8. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu oricare din revendicările precedente, în care tulpina bacteriană are o secvenţă 16s ARNr care este cel puţin 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% sau 99,9% identică cu SEQ ID NO:2, sau în care tulpina bacteriană are secvenţa 16s ARNr reprezentată de SEQ ID NO:2.
9. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 1, în care compoziţia cuprinde o tulpină bacteriană a speciilor Megasphaera massiliensis într-o metodă de tratare sau prevenire a bolii Parkinson.
10. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu revendicarea 5, în care compoziţia cuprinde o tulpină bacteriană a speciilor Megasphaera massiliensis într-o metodă de tratare a leziunii creierului care rezultă dintr-un accident vascular cerebral.
11. Compoziţia pentru utilizare în conformitate cu oricare din revendicările precedente, în care compoziţia este pentru administrare orală, şi/sau în care compoziţia cuprinde unul sau mai mulţi excipienţi sau purtători acceptabili farmaceutic, şi/sau în care tulpina bacteriană este liofilizată; sau un produs alimentar cuprinzând respectiva compoziţie, pentru utilizarea oricărora din revendicările precedente.
12. O celulă din tulpina Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787.
13. O compoziţie cuprinzând celula conform revendicării 12, cuprinzând preferabil un purtător sau excipient acceptabil farmaceutic.
14. O cultură biologic pură de tulpini Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787.
15. O celulă de tulpină Megasphaera massiliensis depozitată sub numărul de acces NCIMB 42787 pentru utilizare în terapie, preferabil în care celula este pentru utilizare într-o metodă definită în oricare dintre revendicările 1-6.
MDE20200145T 2017-06-14 2018-06-14 Compoziții care conţin tulpină bacteriană din genul Megasphaera și utilizări ale acestora MD3600364T2 (ro)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1709468.1A GB201709468D0 (en) 2017-06-14 2017-06-14 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1709534.0A GB201709534D0 (en) 2017-06-15 2017-06-15 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1712851.3A GB201712851D0 (en) 2017-08-10 2017-08-10 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1803826.5A GB201803826D0 (en) 2018-03-09 2018-03-09 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1805991.5A GB201805991D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1805990.7A GB201805990D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compostions comprising bacterial strains
GBGB1805989.9A GB201805989D0 (en) 2018-04-11 2018-04-11 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1806780.1A GB201806780D0 (en) 2018-04-25 2018-04-25 Compositions comprising bacterial strains
GBGB1806779.3A GB201806779D0 (en) 2018-04-25 2018-04-25 Compositions comprising bacterial strains
PCT/EP2018/065858 WO2018229216A1 (en) 2017-06-14 2018-06-14 Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphera and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
MD3600364T2 true MD3600364T2 (ro) 2020-12-31

Family

ID=62784100

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20210810T MD3804737T2 (ro) 2017-06-14 2018-06-14 Compoziții care conțin tulpini bacteriene
MDE20200145T MD3600364T2 (ro) 2017-06-14 2018-06-14 Compoziții care conţin tulpină bacteriană din genul Megasphaera și utilizări ale acestora

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
MDE20210810T MD3804737T2 (ro) 2017-06-14 2018-06-14 Compoziții care conțin tulpini bacteriene

Country Status (26)

Country Link
US (3) US11007233B2 (ro)
EP (4) EP3638273A2 (ro)
JP (4) JP2020523326A (ro)
KR (2) KR102519483B1 (ro)
CN (2) CN111032061A (ro)
AU (4) AU2018285453B2 (ro)
BR (2) BR112019026677A2 (ro)
CA (3) CA3066561C (ro)
CY (2) CY1123565T1 (ro)
DK (2) DK3804737T3 (ro)
ES (2) ES2917415T3 (ro)
HR (2) HRP20220747T1 (ro)
HU (2) HUE052258T2 (ro)
IL (3) IL292373A (ro)
LT (2) LT3804737T (ro)
MA (3) MA49425A (ro)
MD (2) MD3804737T2 (ro)
MX (2) MX383130B (ro)
PL (2) PL3804737T3 (ro)
PT (2) PT3600364T (ro)
RS (2) RS60910B1 (ro)
SG (2) SG11201912153VA (ro)
SI (2) SI3600364T1 (ro)
SM (2) SMT202200272T1 (ro)
TW (2) TWI812624B (ro)
WO (2) WO2018229236A2 (ro)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2020523326A (ja) 2017-06-14 2020-08-06 フォーディー ファーマ リサーチ リミテッド４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ 細菌株を含む組成物
LT3743086T (lt) * 2018-05-11 2022-06-10 4D Pharma Research Limited Kompozicijos, apimančios bakterinius kamienus
EP3870154A4 (en) 2018-10-22 2022-07-27 Research Institute at Nationwide Children's Hospital COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF ANTIBIOTIC-INDUCED PATHOLOGIES USING PROBIOTICS IN BIOFILM STATE
WO2020120714A1 (en) * 2018-12-12 2020-06-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
KR102978329B1 (ko) * 2019-06-03 2026-06-17 더 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈 패혈증 및 괴사성 장염 유도된 신경발달 결핍의 예방을 위한 프리바이오틱 제형
EP4066844A1 (en) 2019-07-05 2022-10-05 4D Pharma Research Limited Compositions comprising anaerostipes hadrus
CN110420228A (zh) * 2019-09-16 2019-11-08 山东大学齐鲁医院 脆弱拟杆菌ych46在制备治疗或辅助治疗高血压的药物中的应用
AU2020355194B2 (en) * 2019-09-25 2026-06-18 Julius-Maximilians-Universität Würzburg Short-chain fatty acid pentanoate as enhancer for cellular therapy and anti-tumor therapy
AU2021342481A1 (en) 2020-09-18 2023-05-04 Evelo Biosciences, Inc. Solid dosage forms of bacteria
JP2022053525A (ja) * 2020-09-24 2022-04-05 森下仁丹株式会社 乳酸産生菌叢の保持剤ならびにそれを用いた経口組成物および乳酸産生菌叢の保持方法
CN112239741B (zh) * 2020-12-10 2022-05-27 慕恩（广州）生物科技有限公司 一种Megasphaera属的细菌MNC-992及其培养方法和应用
JP2024501481A (ja) 2020-12-14 2024-01-12 エヴェロ バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド 細胞外小胞調製物
CA3208064A1 (en) * 2021-02-10 2022-08-18 Zhongke Wisbiom（Beijing）Biotechnology Co., Ltd. Bifidobacterium animalis subsp. lactis and use thereof
WO2022187578A1 (en) 2021-03-05 2022-09-09 Evelo Biosciences, Inc. Solid dosage forms
TW202304415A (zh) 2021-04-08 2023-02-01 美商艾弗洛生物科技股份有限公司 含有細菌的藥物製劑
IL308253A (en) * 2021-05-12 2024-01-01 Biomica Ltd A microbial consortium and its uses
WO2023049268A1 (en) 2021-09-24 2023-03-30 Evelo Biosciences, Inc. Solid dosage forms containing bacteria and microbial extracellular vesicles
CA3237172A1 (en) * 2021-11-02 2023-05-11 Mach32 Inc. Devices, systems and methods for medicament delivery
CN114276948B (zh) * 2021-11-08 2023-06-20 泸州老窖股份有限公司 产己酸的赖氨酸芽孢杆菌及其用途
WO2023107537A1 (en) 2021-12-07 2023-06-15 Evelo Biosciences, Inc. Antibody compositions and methods for utilizing with extracellular vesicles and microbes
WO2023114293A1 (en) 2021-12-14 2023-06-22 Evelo Biosciences, Inc. Extracellular vesicle assays
CN116731894B (zh) * 2021-12-31 2025-05-20 深圳未知君生物科技有限公司 一种巨球形菌菌株及其应用
WO2024015522A1 (en) 2022-07-13 2024-01-18 Evelo Biosciences, Inc. Methods for analyzing extracellular vesicles and microbes
WO2024076723A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Evelo Biosciences, Inc. Processing extracellular vesicles
WO2024102226A1 (en) 2022-10-14 2024-05-16 Evelo Biosciences, Inc. Methods for assaying drug substances and drug products by using cell lines with nf-kb- inducible reporter genes
WO2024229110A1 (en) * 2023-05-01 2024-11-07 The Johns Hopkins University Indole lactate for the treatment of multiple sclerosis
CN117821621B (zh) * 2023-12-15 2024-08-13 深圳未知君生物科技有限公司 一种马氏巨球菌的分子标记及其应用
WO2025264544A1 (en) * 2024-06-20 2025-12-26 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for treating neurological disorders
CN118526523B (zh) * 2024-07-26 2025-01-28 山东大学齐鲁医院 一种治疗脑胶质母细胞瘤的药物组合物

Family Cites Families (406)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
JPS5031249B1 (ro) 1970-12-17 1975-10-08
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
JPS5710876B2 (ro) 1974-04-08 1982-03-01
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4138498A (en) * 1976-12-07 1979-02-06 W. R. Grace & Co. Ruminant feed additive
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
JPS5557520A (en) 1978-10-26 1980-04-28 Nisshin Flour Milling Co Ltd Preparation of carcinostatic substance
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
NL8300698A (nl) 1983-02-24 1984-09-17 Univ Leiden Werkwijze voor het inbouwen van vreemd dna in het genoom van tweezaadlobbige planten; agrobacterium tumefaciens bacterien en werkwijze voor het produceren daarvan; planten en plantecellen met gewijzigde genetische eigenschappen; werkwijze voor het bereiden van chemische en/of farmaceutische produkten.
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
DK122686D0 (da) 1986-03-17 1986-03-17 Novo Industri As Fremstilling af proteiner
FR2613624B1 (fr) 1987-04-10 1990-11-23 Roussy Inst Gustave Composition pharmaceutique, administrable par voie orale, destinee a reduire les effets des b-lactamines
DE68928665T2 (de) 1988-08-02 1998-11-12 Gastro Services Pty Ltd Behandlung von gastro-intestinalen krankheiten
US5443826A (en) 1988-08-02 1995-08-22 Borody; Thomas J. Treatment of gastro-intestinal disorders with a fecal composition or a composition of bacteroides and E. Coli
KR100225087B1 (ko) 1990-03-23 1999-10-15 한스 발터라벤 피타아제의 식물내 발현
ES2068586T5 (es) 1990-05-09 2004-12-01 Novozymes A/S Una preparacion de celulasa que comprende una enzima endoglucanasa.
GB9107305D0 (en) 1991-04-08 1991-05-22 Unilever Plc Probiotic
CA2100919A1 (en) 1992-07-20 1994-01-21 Takaharu Yamamoto Species-specific oligonucleotides for bifidobacteria and a method of detection using the same
WO1994013820A1 (en) 1992-12-10 1994-06-23 Gist-Brocades N.V. Production of heterologous proteins in filamentous fungi
US5741665A (en) 1994-05-10 1998-04-21 University Of Hawaii Light-regulated promoters for production of heterologous proteins in filamentous fungi
US5599795A (en) 1994-08-19 1997-02-04 Mccann; Michael Method for treatment of idiopathic inflammatory bowel disease (IIBD)
AUPM823094A0 (en) 1994-09-16 1994-10-13 Goodman Fielder Limited Probiotic compositions
AUPM864894A0 (en) 1994-10-07 1994-11-03 Borody, Thomas Julius Treatment of bowel-dependent neurological disorders
RU2078815C1 (ru) 1995-01-17 1997-05-10 Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н.Габричевского Штамм бактерий bifidobacterium breve, используемый для получения бактерийных лечебно-профилактических бифидосодержащих препаратов
JPH08259450A (ja) 1995-03-17 1996-10-08 Nichinichi Seiyaku Kk インターフェロン産生増強剤
US6861053B1 (en) 1999-08-11 2005-03-01 Cedars-Sinai Medical Center Methods of diagnosing or treating irritable bowel syndrome and other disorders caused by small intestinal bacterial overgrowth
EP0952773B1 (en) * 1995-09-15 2005-11-23 Dale N. Gerding Methods and compositions for prevention and treatment of clostridium difficile-associated diseases
AUPN698495A0 (en) 1995-12-06 1996-01-04 Pharma Pacific Pty Ltd Improved therapeutic formulation and method
SE508045C2 (sv) 1996-02-26 1998-08-17 Arla Ekonomisk Foerening Adhesionsinhibitorer, preparat innehållande desamma och förfarande för framställning därav
CA2249189A1 (en) 1996-03-20 1997-09-25 The University Of New South Wales Alteration of microbial populations in the gastrointestinal tract
AUPN881396A0 (en) 1996-03-20 1996-04-18 Arnott's Biscuits Limited Enhancement of microbial colonization of the gastrointestinal tract
ATE317005T1 (de) 1996-03-27 2006-02-15 Novozymes As Alkaline-phosphatase-defiziente, filamentöse pilze
US6033864A (en) 1996-04-12 2000-03-07 The Regents Of The University Of California Diagnosis, prevention and treatment of ulcerative colitis, and clinical subtypes thereof, using microbial UC pANCA antigens
WO1998043081A1 (en) 1997-03-26 1998-10-01 Ligand Pharmaceuticals Incorporated Treatment of gastrointestinal disease with ppar modulators
SE511524C2 (sv) 1997-06-02 1999-10-11 Essum Ab Lactobacillus casei rhamnosus-stam samt farmaceutisk beredning för bekämpning av patogena tarmbakterier
US5925657A (en) 1997-06-18 1999-07-20 The General Hospital Corporation Use of PPARγ agonists for inhibition of inflammatory cytokine production
AUPO758297A0 (en) 1997-06-27 1997-07-24 Rowe, James Baber Control of acidic gut syndrome
US6652866B1 (en) 1997-10-14 2003-11-25 David W. Hertha Method for treating diseases of fungal, yeast, and prion protein etiology
US5951977A (en) 1997-10-14 1999-09-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Competitive exclusion culture for swine
IT1298918B1 (it) 1998-02-20 2000-02-07 Mendes Srl Uso di batteri dotati di arginina deiminasi per indurre apoptosi e/o ridurre una reazione infiammatoria e composizioni farmaceutiche
DE19826928A1 (de) 1998-06-17 1999-12-23 Novartis Consumer Health Gmbh Arzneimittel, lebensfähige anaerobe Bakterien enthaltend, die die Sulfatreduktion sulfatreduzierender Bakterien hemmen
ID29150A (id) 1999-01-15 2001-08-02 Entpr Ireland Cs Penggunaan lactobacillus salivarius
US7090973B1 (en) 1999-04-09 2006-08-15 Oscient Pharmaceuticals Corporation Nucleic acid sequences relating to Bacteroides fragilis for diagnostics and therapeutics
AUPQ137699A0 (en) * 1999-07-02 1999-07-22 University Of New England, The Control of acidosis
WO2001016120A1 (en) 1999-08-27 2001-03-08 Eli Lilly And Company Biaryl-oxa(thia)zole derivatives and their use as ppars modulators
CA2395343C (en) 2000-02-08 2009-06-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Use of acid-stable proteases in animal feed
FR2808689B1 (fr) 2000-05-11 2004-09-03 Agronomique Inst Nat Rech Utilisation de souches acetogenes hydrogenotrophes pour la prevention ou le traitement de troubles digestifs
US20020013270A1 (en) * 2000-06-05 2002-01-31 Bolte Ellen R. Method for treating a mental disorder
US20040170617A1 (en) * 2000-06-05 2004-09-02 Finegold Sydney M. Method of treating diseases associated with abnormal gastrointestinal flora
AUPQ899700A0 (en) 2000-07-25 2000-08-17 Borody, Thomas Julius Probiotic recolonisation therapy
EP1414853A2 (en) 2000-11-27 2004-05-06 Washington University Method for studying the effects of commensal microflora on mammalian intestine and treatments of gastrointestinal-associated disease based thereon
WO2002050311A2 (en) * 2000-12-21 2002-06-27 Societe Des Produits Nestle S.A. Lactobacillus strain producing levan and its use in human or pet food products
DE10101793A1 (de) 2001-01-17 2002-08-01 Manfred Nilius Verwendung von SLPI zur Behandlung chronisch-entzündlicher Darmerkrankungen
EP1227152A1 (en) 2001-01-30 2002-07-31 Société des Produits Nestlé S.A. Bacterial strain and genome of bifidobacterium
KR100437497B1 (ko) 2001-03-07 2004-06-25 주식회사 프로바이오닉 로타바이러스 및 유해 미생물 억제 활성을 가지는 신규내산성 락토바실러스 루테리 프로바이오-16 및 이를함유하는 생균활성제
EP1243273A1 (en) 2001-03-22 2002-09-25 Societe Des Produits Nestle S.A. Composition comprising a prebiotic for decreasing infammatory process and abnormal activation of non-specific immune parameters
EP1389464A4 (en) 2001-04-06 2005-06-22 Combi Co COMPOSITIONS WITH A BACTERIUM THAT MAY CONVERT MILKYLIC ACID TO BUTTERIC ACID, AND METHOD FOR THE PREVENTION / TREATMENT OF HYPERLACTACIDEMIA IN CARCINOMA IN DIGESTIVE TRAIN AND COLON USING THESE COMPOSITIONS
WO2002085933A1 (en) 2001-04-20 2002-10-31 The Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
EP1260227A1 (en) 2001-05-23 2002-11-27 Societe Des Produits Nestle S.A. Lipoteichoic acid from lactic acid bacteria and its use to modulate immune responses mediated by gram-negative bacteria, potential pathogenic gram-positive bacteria
US20030092163A1 (en) 2001-07-26 2003-05-15 Collins John Kevin Probiotic bifidobacterium strains
MXPA04001999A (es) 2001-09-05 2004-07-16 Vsl Pharmaceuticals Inc Bacterias de acido lactico que comprende dinucleotidos de citosina-guanina no metilados para usarse en terapia.
GB0127916D0 (en) 2001-11-21 2002-01-16 Rowett Res Inst Method
WO2003045317A2 (en) 2001-11-27 2003-06-05 Washington University Therapeutic protein and treatments
EP1581119B1 (en) 2001-12-17 2013-01-30 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of inflammatory bowel disease
US7101565B2 (en) 2002-02-05 2006-09-05 Corpak Medsystems, Inc. Probiotic/prebiotic composition and delivery method
DE10206995B4 (de) 2002-02-19 2014-01-02 Orthomol Pharmazeutische Vertriebs Gmbh Mikronährstoffkombinationsprodukt mit Pro- und Prebiotika
JP2003261453A (ja) 2002-03-11 2003-09-16 Nippon Berumu Kk Ｅ．フェカリスからなる抗腫瘍剤及び放射線防護剤
SI1565547T2 (sl) 2002-06-28 2013-02-28 Biosearch S.A. Probiotiäśni sevi, postopek za izbiranje le-teh, njihovi sestavki in njihova uporaba
US20040005304A1 (en) * 2002-07-08 2004-01-08 Mak Wood, Inc. Novel compositions and methods for treating neurological disorders and associated gastrointestinal conditions
GB0307026D0 (en) 2003-03-27 2003-04-30 Rowett Res Inst Bacterial supplement
US20040230963A1 (en) * 2003-05-12 2004-11-18 Rothman Michael A. Method for updating firmware in an operating system agnostic manner
EP1481681A1 (en) 2003-05-30 2004-12-01 Claudio De Simone Lactic acid bacteria combination and compositions thereof
GB0316915D0 (en) 2003-07-18 2003-08-20 Glaxo Group Ltd Compounds
AU2003247193A1 (en) 2003-07-23 2005-02-04 M.D.Lab Corp. Acid tolerant probiotic lactobacillus plantarum probio-38 that can suppress the growth of pathogenic microorganism and tge coronavirus
US7485325B2 (en) 2003-08-06 2009-02-03 Gayle Dorothy Swain Animal food supplement compositions and methods of use
JP4683881B2 (ja) 2003-08-27 2011-05-18 有限会社アーク技研 抗腫瘍活性剤
CN102349927A (zh) * 2003-08-29 2012-02-15 Hdac默克研究有限责任公司 联合治疗癌症的方法
US8192733B2 (en) 2003-08-29 2012-06-05 Cobb & Associates Probiotic composition useful for dietary augmentation and/or combating disease states and adverse physiological conditions
WO2005030133A2 (en) 2003-09-22 2005-04-07 Yale University Treatment with agonists of toll-like receptors
GB0323039D0 (en) 2003-10-01 2003-11-05 Danisco Method
JP4740866B2 (ja) 2003-10-24 2011-08-03 ナムローゼ フェンノートシャップ ニュートリシア 乳児向けシンバイオティック組成物
US20050239706A1 (en) 2003-10-31 2005-10-27 Washington University In St. Louis Modulation of fiaf and the gastrointestinal microbiota as a means to control energy storage in a subject
US20090257993A1 (en) 2003-12-17 2009-10-15 M Rabet Laura Lactic Acid Producing Bacteria and Lung Function
ES2235642B2 (es) 2003-12-18 2006-03-01 Gat Formulation Gmbh Proceso de multi-microencapsulacion continuo para la mejora de la estabilidad y almacenamiento de ingredientes biologicamente activos.
CA2557800A1 (en) 2004-03-22 2005-10-06 Yossef Raviv Cellular and viral inactivation
WO2005107381A2 (en) 2004-05-07 2005-11-17 Hans-Gustaf Ljunggren Use of flagellin as an adjuvant for vaccine
US7638513B2 (en) 2004-06-02 2009-12-29 Schering Corporation Compounds for the treatment of inflammatory disorders
PE20060426A1 (es) 2004-06-02 2006-06-28 Schering Corp DERIVADOS DE ACIDO TARTARICO COMO INHIBIDORES DE MMPs, ADAMs, TACE Y TNF-alfa
CN101022826A (zh) 2004-06-07 2007-08-22 哈罗尔·戴维·贡 用于癌症治疗的细菌组合物
DK1765318T3 (da) 2004-06-30 2014-11-03 Nutrition Sciences N V S A Middelkæde fedtsyrer anvendelige som antimikrobielle midler
DK1629850T4 (da) 2004-08-24 2013-07-01 Nutricia Nv Næringssammensætning indeholdende ufordøjelige oligosaccharider
US20060062774A1 (en) 2004-09-21 2006-03-23 The Procter & Gamble Company Compositions for maintaining and restoring normal urogenital flora
JP5371169B2 (ja) 2004-09-24 2013-12-18 コンビ株式会社 薬剤耐性菌感染防除剤
KR100468522B1 (ko) 2004-10-12 2005-01-31 주식회사 프로바이오닉 코로나바이러스와 돼지 써코바이러스 2형의 생육을 억제하는 신규한 내산성 프로바이오틱 엔테로코커스훼시움 프로바이오-63
US20060115465A1 (en) 2004-10-29 2006-06-01 Macfarlane George Treatment of gastrointestinal disorders
ITMI20042189A1 (it) 2004-11-16 2005-02-16 Anidral Srl Composizione a base di batteri probiotici e suo uso nella prevenzione e-o nel trattamento di patologie e-o infezioni respiratorie e nel miglioramento della funzionalita' intestinale
PL2805625T5 (pl) 2005-02-28 2023-03-13 N.V. Nutricia Kompozycja odżywcza z prebiotykami i probiotykami
US20100048595A1 (en) 2005-03-23 2010-02-25 Washington University In St. Louis Use of archaea to modulate the nutrient harvesting functions of the gastrointestinal microbiota
US20090233888A1 (en) 2005-03-23 2009-09-17 Usc Stevens, University Of Southern California Treatment of disease conditions through modulation of hydrogen sulfide produced by small intestinal bacterial overgrowth
JP2006265212A (ja) 2005-03-25 2006-10-05 Institute Of Physical & Chemical Research Ｉｌ−２１産生誘導剤
US20100233312A9 (en) 2005-04-11 2010-09-16 The Procter & Gamble Company Compositions comprising probiotic and sweetener components
EP1714660A1 (en) 2005-04-21 2006-10-25 N.V. Nutricia Uronic acid and probiotics
PL1874917T3 (pl) 2005-04-26 2012-07-31 Teagasc The Agriculture And Food Dev Authority Kompozycja probiotyczna odpowiednia dla zwierząt
EP3530736A3 (en) 2005-05-09 2019-11-06 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
US7572474B2 (en) 2005-06-01 2009-08-11 Mead Johnson Nutrition Company Method for simulating the functional attributes of human milk oligosaccharides in formula-fed infants
US8075934B2 (en) 2008-10-24 2011-12-13 Mead Johnson Nutrition Company Nutritional composition with improved digestibility
JP2007084533A (ja) 2005-08-24 2007-04-05 Prima Meat Packers Ltd 免疫応答調節組成物及び該組成物を有効成分とする食品
US7625704B2 (en) 2005-08-31 2009-12-01 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods and compositions for identifying bacteria associated with bacteria vaginosis
DE602006009834D1 (de) 2005-09-01 2009-11-26 Schering Corp Verwendung von il-23 und il-17-antagonisten zur behandlung von autoimmuner entzündlicher augenerkrankung
WO2007035057A1 (en) 2005-09-23 2007-03-29 Gwangju Institute Of Science And Technology Composition for preventing or treating artritis comprising lactic acid bacteria and collangen as active ingredients
EP1776877A1 (en) 2005-10-21 2007-04-25 N.V. Nutricia Method for stimulating the intestinal flora
PT1940243E (pt) 2005-10-24 2011-10-17 Nestec Sa Formulação de fibras alimentares e método de administração
JP2007116991A (ja) 2005-10-28 2007-05-17 Eternal Light General Institute Inc 機能性食品
US7767420B2 (en) 2005-11-03 2010-08-03 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Heparan sulfate glycosaminoglycan lyase and uses thereof
JP2009520689A (ja) 2005-12-01 2009-05-28 シェーリング コーポレイション 炎症障害および微生物性疾患を処置するための化合物
WO2007098371A2 (en) 2006-02-16 2007-08-30 Wayne State University Use of flagellin to prevent and treat gram negative bacterial infection
US20080260906A1 (en) 2006-03-17 2008-10-23 Marko Stojanovic Compositions comprising probiotic and sweetener components
JP5031249B2 (ja) 2006-03-22 2012-09-19 学校法人北里研究所 炎症抑制作用のある菌体含有組成物
US20090252708A1 (en) 2006-05-18 2009-10-08 Biobalance Llc Biotherapeutic compositions comprising probiotic escherichia coli and uses thereof
AU2007267560B2 (en) 2006-05-26 2010-10-21 Nestec S.A. Methods of use and nutritional compositions of Touchi Extract
EP2046352A4 (en) 2006-06-06 2012-03-21 Univ Mcgill Fermented milk product and use thereof
TW200819540A (en) 2006-07-11 2008-05-01 Genelux Corp Methods and compositions for detection of microorganisms and cells and treatment of diseases and disorders
WO2008015374A2 (en) 2006-08-04 2008-02-07 Shs International Ltd Protein free formula
WO2008031438A2 (en) 2006-09-13 2008-03-20 Region Hovedstaden V/Gentofte Hospital Treatment of asthma, eczema and/or allergy using non-pathogenic organisms
US20080069861A1 (en) 2006-09-19 2008-03-20 National Starch And Chemical Investment Holding Corporation Probiotic/Non-Probiotic Combinations
CA2667167C (en) 2006-10-27 2014-02-18 Pfizer Products Inc. Hydroxypropyl methyl cellulose hard capsules and process of manufacture
US20080118473A1 (en) 2006-11-01 2008-05-22 The Procter & Gamble Company Methods of treating a respiratory condition comprising probiotic treatment
PL1920781T3 (pl) 2006-11-10 2015-06-30 Glycotope Gmbh Kompozycje zawierające core-1-dodatnie mikroorganizmy i ich zastosowanie w leczeniu lub profilaktyce nowotworów
WO2008064489A1 (en) 2006-12-01 2008-06-05 Mcmaster University Probiotics to inhibit inflammation
WO2008076696A2 (en) 2006-12-18 2008-06-26 Washington University In St. Louis The gut microbiome as a biomarker and therapeutic target for treating obesity or an obesity related disorder
DE102006062250A1 (de) 2006-12-22 2008-06-26 Roland Saur-Brosch Verwendung einer Zusammensetzung aus Mineralstoffen und/oder Vitaminen und gegebenenfalls acetogenen und/oder butyrogenen Bakterien zur oralen oder rektalen Verabreichung für die Behandlung und Vorbeugung von abdominalen Beschwerden
WO2008083157A2 (en) 2006-12-29 2008-07-10 Washington University In St. Louis Altering pgc-1alapha, ampk, fiaf, or the gastrointestinal microbiota as a means to modulate body fat and/or weight loss in a subject
JP2008195635A (ja) 2007-02-09 2008-08-28 Crossfield Bio Inc 馬用乳酸菌製剤
US9408818B2 (en) 2007-02-28 2016-08-09 Mead Johnson Nutrition Company Method for the utilization of and product containing inactivated probiotic
US8557233B2 (en) 2007-03-28 2013-10-15 Alimentary Heath Limited Probiotic bifidobacterium strains
NZ580006A (en) 2007-03-28 2012-03-30 Alimentary Health Ltd Probiotic bifidobacterium strain 41387
US20080299098A1 (en) 2007-04-24 2008-12-04 Chea-Yun Se Broad-Spectrum Antibacterial and Antifungal Activity of Lactobacillus Johnsonii D115
EP1997499A1 (en) 2007-05-31 2008-12-03 Puleva Biotech, S.A. Mammalian milk microorganisms, compositions containing them and their use for the treatment of mastitis
EP1997906A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Lactobacillus
EP1997905A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Nucleic acid amplification
EP1997907A1 (en) 2007-06-01 2008-12-03 Friesland Brands B.V. Bifidobacteria
WO2008153377A1 (en) 2007-06-15 2008-12-18 N.V. Nutricia Nutrition with non-viable bifidobacterium and non-digestible oligosaccharide
WO2009002145A1 (en) 2007-06-26 2008-12-31 N.V. Nutricia Lipid composition for improving function of brain functioning
ES2523575T3 (es) 2007-06-27 2014-11-27 Laboratorios Ordesa, S.L. Una nueva cepa de bifidobacterium y peptidos acitvos contra infecciones por rotavirus
US20110027348A1 (en) 2007-08-27 2011-02-03 Janos Feher Composition and method inhibiting inflammation
WO2009030254A1 (en) 2007-09-04 2009-03-12 Curevac Gmbh Complexes of rna and cationic peptides for transfection and for immunostimulation
WO2009043856A2 (en) 2007-10-01 2009-04-09 University College Cork, National University Of Ireland, Cork Modulation of tissue fatty acid composition of a host by human gut bacteria
EP2203551B1 (en) 2007-10-20 2013-08-21 Université de Liège Bifidobacterial species
ES2473625T3 (es) 2007-10-26 2014-07-07 Brenda E. Moore Composición probi�tica y métodos para inducir y mantener la pérdida de peso
EP2205642B1 (en) 2007-11-02 2016-01-27 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Non-anticoagulant polysaccharide compositions
EP2065048A1 (en) 2007-11-30 2009-06-03 Institut Pasteur Use of a L. casei strain, for the preparation of a composition for inhibiting mast cell activation
BRPI0821165B8 (pt) 2007-12-07 2021-05-25 Nutricia Nv uso de uma composição
US20100330190A1 (en) 2007-12-17 2010-12-30 Compans Richard W Immunogenic compositions and methods of use thereof
ES2343499B1 (es) 2007-12-24 2011-06-10 Consejo Superior De Investigaciones Cientificas Microorganismos para mejorar el estado de salud de individuos con desordenes relacionados con la ingesta de gluten.
RU2010132283A (ru) 2008-02-06 2012-03-20 Дзе Проктер Энд Гэмбл Компани (US) Композиции, способы и наборы для повышения иммунного ответа на респираторное заболевание
EP2103226A1 (en) 2008-03-18 2009-09-23 Friesland Brands B.V. Long-life probiotic food product
EP2110028A1 (en) * 2008-04-15 2009-10-21 Nestec S.A. Bifidobacterium longum and hippocampal BDNF expression
SG190562A1 (en) 2008-04-18 2013-06-28 Vaxinnate Corp Deletion mutants of flagellin and methods of use
US8741365B2 (en) 2008-05-13 2014-06-03 Glycotope Gmbh Fermentation process
MX2008006546A (es) 2008-05-21 2009-11-23 Sigma Alimentos Sa De Cv Bifidobacteria productora de ácido fólico, composición alimenticia y uso de la bifidobacteria.
CN102940652B (zh) 2008-05-28 2015-03-25 青岛东海药业有限公司 两形真杆菌制剂及其应用
CN101590081A (zh) 2008-05-28 2009-12-02 青岛东海药业有限公司 凸腹真杆菌和两形真杆菌制剂及其应用
US8586029B2 (en) 2008-06-04 2013-11-19 Trustees Of Dartmouth College Prevention or treatment of immune-relevant disease by modification of microfloral populations
CN101596216A (zh) * 2008-06-06 2009-12-09 萧湘 预防或治疗糖尿病和相关病症的微生物制剂
EP2133088A3 (en) 2008-06-09 2010-01-27 Nestec S.A. Rooibos and inflammation
WO2009151315A1 (en) 2008-06-13 2009-12-17 N.V. Nutricia Nutritional composition for infants delivered via caesarean section
WO2009154463A2 (en) 2008-06-20 2009-12-23 Stichting Top Institute Food And Nutrition Butyrate as a medicament to improve visceral perception in humans
EP2138186A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 Nestec S.A. Probiotics, secretory IgA and inflammation
WO2010002241A1 (en) 2008-06-30 2010-01-07 N.V. Nutricia Nutritional composition for infants delivered via caesarean section
KR101017448B1 (ko) 2008-09-18 2011-02-23 주식회사한국야쿠르트 대장의 건강 증진 효능을 갖는 비피도박테리움 롱검 에이취와이8004 및 이를 유효성분으로 함유하는 제품
US20100074870A1 (en) 2008-09-19 2010-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Probiotic infant products
US8137718B2 (en) 2008-09-19 2012-03-20 Mead Johnson Nutrition Company Probiotic infant products
KR101057357B1 (ko) 2008-09-22 2011-08-17 광주과학기술원 유산균 및 콜라겐을 유효성분으로 포함하는 관절염 예방 또는 치료용 약제학적 조성물 및 식품 조성물
WO2010036876A2 (en) 2008-09-25 2010-04-01 New York University Compositions and methods for characterizing and restoring gastrointestinal, skin, and nasal microbiota
WO2010037408A1 (en) 2008-09-30 2010-04-08 Curevac Gmbh Composition comprising a complexed (m)rna and a naked mrna for providing or enhancing an immunostimulatory response in a mammal and uses thereof
WO2010037402A1 (en) 2008-10-02 2010-04-08 Dako Denmark A/S Molecular vaccines for infectious disease
CN102231957A (zh) 2008-12-05 2011-11-02 雀巢产品技术援助有限公司 用于低出生体重婴儿的组合物
CN102325458B (zh) 2008-12-19 2014-02-26 雀巢产品技术援助有限公司 预防及治疗轮状病毒腹泻
IT1392672B1 (it) 2009-01-12 2012-03-16 Wyeth Consumer Healthcare S P A Composizioni comprendenti componenti probiotici e prebiotici e sali minerali, con lactoferrina
NZ594514A (en) 2009-03-05 2013-06-28 Abbott Lab Interleukin-17 BINDING PROTEINS
JP5710876B2 (ja) 2009-03-26 2015-04-30 クロスフィールドバイオ株式会社 新規ビフィドバクテリウム属微生物およびその利用
WO2010129839A1 (en) 2009-05-07 2010-11-11 Tate & Lyle Ingredients France SAS Compositions and methods for making alpha-(1,2)-branched alpha-(1,6) oligodextrans
US8784798B2 (en) 2009-05-11 2014-07-22 Nestec S.A. Bifidobacterium longum NCC2705 (CNCM I-2618) and immune disorders
EP2251020A1 (en) 2009-05-11 2010-11-17 Nestec S.A. Short-time high temperature treatment generates microbial preparations with anti-inflammatory profiles
EP2251022A1 (en) 2009-05-11 2010-11-17 Nestec S.A. Non-replicating micro-organisms and their immune boosting effect
KR20100128168A (ko) 2009-05-27 2010-12-07 중앙대학교 산학협력단 공액 리놀레산 생산능이 우수한 신규한 균주
US20100311686A1 (en) 2009-06-03 2010-12-09 Kasper Lloyd H Nutraceutical composition and methods for preventing or treating multiple sclerosis
WO2010143940A1 (en) 2009-06-12 2010-12-16 N.V. Nutricia Synergistic mixture of beta-galacto-oligosaccharides with beta-1,3 and beta-1,4/1,6 linkages
EP2443259A4 (en) 2009-06-16 2012-10-10 Univ Columbia BIOMARKERS FOR AUTISM AND USES THEREOF
US9050276B2 (en) * 2009-06-16 2015-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Autism-associated biomarkers and uses thereof
KR101087973B1 (ko) * 2009-06-30 2011-12-01 일동제약주식회사 신규한 락토바실루스 헬베티쿠스, 이의 배양 방법 및 용도
WO2011005756A1 (en) 2009-07-06 2011-01-13 Puretech Ventures, Llc Delivery of agents targeted to microbiota niches
CA2768301A1 (en) 2009-07-24 2011-01-27 Southwest Regional Pcr, Llc Universal microbial diagnosis, detection, quantification, and specimen-targeted therapy
MY163002A (en) 2009-08-18 2017-07-31 Nestec Sa A nutritional composition comprising bifidobacterium longum strains and reducing food allergy symptoms, especially in infants and children
US20110053829A1 (en) 2009-09-03 2011-03-03 Curevac Gmbh Disulfide-linked polyethyleneglycol/peptide conjugates for the transfection of nucleic acids
GB2473294B (en) 2009-09-08 2014-07-09 Mclaren Automotive Ltd Dynamics control
ES2660008T3 (es) 2009-09-23 2018-03-20 Thomas Julius Borody Terapia para infecciones entéricas crónicas
EP2308498A1 (en) 2009-09-30 2011-04-13 Nestec S.A. Administration of Bifidobacterium breve during infancy to prevent inflammation later in life
CA2776420A1 (en) 2009-10-05 2011-04-14 Aak Patent B.V. Methods for diagnosing irritable bowel syndrome
WO2011044208A1 (en) 2009-10-06 2011-04-14 Scott Dorfner Antibiotic formulations providing reduced gastrointentestinal side effects
PL2498789T3 (pl) 2009-11-11 2017-01-31 Alimentary Health Limited Probiotyczny szczep bifidobacterium
MY162183A (en) 2009-12-01 2017-05-31 Univ Putra Malaysia Probiotic composition for nutraceutical product
CA2780649C (en) 2009-12-18 2014-09-30 Hill's Pet Nutrition, Inc. Pet food compositions including probiotics and methods of manufacture and use thereof
JP5557520B2 (ja) 2009-12-22 2014-07-23 京楽産業．株式会社 遊技機の演出用動力伝達機構及びこれを備える遊技機
US20150104418A1 (en) 2014-12-18 2015-04-16 Microbios, Inc. Bacterial composition
FR2955774A1 (fr) 2010-02-02 2011-08-05 Aragan Preparation destinee a traiter l'exces ponderal et les desordres associes et applications de ladite preparation
NL2004201C2 (en) 2010-02-05 2011-08-08 Friesland Brands Bv Use of sialyl oligosaccharides to modulate the immune system.
NL2004200C2 (en) 2010-02-05 2011-08-08 Friesland Brands Bv Use of sialyl oligosaccharides in weight management.
IT1398553B1 (it) 2010-03-08 2013-03-01 Probiotical Spa Composizione comprendente batteri probiotici per il trattamento di patologie associate con le alterazioni del sistema immunitario.
JP5737646B2 (ja) 2010-03-24 2015-06-17 森下仁丹株式会社 抗アレルギー剤
WO2011121379A1 (en) 2010-03-30 2011-10-06 Assistance Publique - Hopitaux De Paris Use of bifidobacteria for preventing allergy in breastfed infants
US8951512B2 (en) 2010-05-04 2015-02-10 New York University Methods for treating bone disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota
WO2011149335A1 (en) 2010-05-25 2011-12-01 N.V. Nutricia Immune imprinting nutritional composition
CN102947441A (zh) 2010-06-01 2013-02-27 穆尔研究企业有限责任公司 来自拟杆菌属的细胞组分、其组合物和使用拟杆菌或其细胞组分的治疗方法
WO2011151941A1 (ja) 2010-06-04 2011-12-08 国立大学法人東京大学 制御性ｔ細胞の増殖または集積を誘導する作用を有する組成物
TWI417054B (zh) 2010-06-15 2013-12-01 Jen Shine Biotechnology Co Ltd 新穎糞腸球菌ｌｊｓ－０１及其益生用途
EP2397145A1 (en) 2010-06-18 2011-12-21 Nestec S.A. L. johnsonii La1, B. longum NCC2705 and immune disorders
FR2962045B1 (fr) 2010-07-05 2012-08-17 Bifinove Complexe macromoleculaire d'origine bacterienne et utilisation dudit complexe moleculaire pour prevenir et traiter les rhumatismes inflammatoires
CN101914452B (zh) * 2010-07-14 2011-12-07 洪亚辉 石杉碱甲高产菌株tcm-01
TWI401086B (zh) 2010-07-20 2013-07-11 Univ China Medical 胚芽乳酸桿菌及其用途
PL2598165T3 (pl) 2010-07-26 2018-02-28 Qu Biologics Inc. Immunogenne kompozycje przeciwzapalne
CA2807242C (en) 2010-08-04 2017-05-02 Thomas Julius Borody Compositions for fecal floral transplantation and methods for making and using them and devices for delivering them
WO2012024638A2 (en) 2010-08-20 2012-02-23 New York University Compositions and methods for treating obesity and related disorders by characterizing and restoring mammalian bacterial microbiota
KR101250463B1 (ko) 2010-10-12 2013-04-15 대한민국 신생아 분변에서 분리한 내산소성 비피도박테리움 롱검 비피더스 유산균 및 이를 이용한 프로바이오틱 조성물
CA2815259A1 (en) 2010-10-27 2012-05-03 Quantibact A/S Capture of target dna and rna by probes comprising intercalator molecules
CN102031235B (zh) 2010-11-09 2012-07-25 中国农业大学 一种粪肠球菌anse228及其应用
EP2455092A1 (en) 2010-11-11 2012-05-23 Nestec S.A. Non-replicating probiotic micro-organisms protect against upper respiratory tract infections
WO2012071380A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Oragenics, Inc. Use of bacteria to treat and prevent respiratory infections
CN102093967B (zh) 2010-12-02 2013-01-30 中国农业科学院特产研究所 一株水貂源屎肠球菌及其应用
ES2389547B1 (es) 2010-12-07 2013-08-08 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Bifidobacterium cect 7765 y su uso en la prevención y/o tratamiento del sobrepeso, la obesidad y patologías asociadas.
EP2663367A4 (en) 2011-01-10 2014-08-06 Cleveland Biolabs Inc USE OF GREAT-SIMILAR RECEPTOR AGONISTS FOR THE TREATMENT OF CANCER
DK2481299T3 (en) 2011-01-31 2017-02-06 Dr Fischer Gesundheitsprodukte Gmbh BIFIDOBACTERIUM BIFIDUM STREAMS FOR USE IN GASTROINTESTINAL DISEASES
JP5840368B2 (ja) 2011-02-02 2016-01-06 カルピス株式会社 関節炎予防改善用物質
CN103491969A (zh) 2011-02-09 2014-01-01 拉维沃公司 恢复和重建肠道微生物群的合生素组合物
BR112013022927A2 (pt) 2011-03-09 2016-12-06 Univ Minnesota composição, métodos para substituir ou suplementar ou modificar uma microbiota do cólon de um sujeito, e para tratar um sujeito, e, uso de uma composição
BRPI1100857A2 (pt) 2011-03-18 2013-05-21 Eduardo Nowill Alexandre agente imunomodulador e suas combinaÇÕes, seu uso e mÉtodo imunoterÁpico para a recontextualizaÇço, reprogramaÇço e reconduÇço do sistema imune em tempo real
WO2012140636A1 (en) 2011-04-11 2012-10-18 Alimentary Health Limited A probiotic formulation
WO2012142605A1 (en) 2011-04-15 2012-10-18 Samaritan Health Services Rapid recolonization deployment agent
CA2833633A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Jason Fisher Composition and method for enhancing an immune response
JP6129821B2 (ja) 2011-05-13 2017-05-17 グリコシン リミテッド ライアビリティー カンパニー プレバイオティクスとしての、精製された２’−フコシルラクトース、３−フコシルラクトース、およびラクトジフコテトラオースの使用
KR20120133133A (ko) 2011-05-30 2012-12-10 한국 한의학 연구원 생약 추출물 또는 이의 유산균 발효물을 포함하는 호흡기 질환의 예방 또는 치료용 조성물
WO2012170478A2 (en) 2011-06-06 2012-12-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Methods and kits for detecting adenomas, colorectal cancer, and uses thereof
GB201110095D0 (en) 2011-06-15 2011-07-27 Danisco Method of treatment
US9579353B2 (en) * 2011-06-10 2017-02-28 Prothera, Inc. Pharmaceutical compositions containing pediococcus and methods for reducing the symptoms of gastroenterological syndromes
JP2013005759A (ja) 2011-06-24 2013-01-10 Kyodo Milk Industry Co Ltd マウス腸内菌叢の推測方法
CN102408998B (zh) * 2011-06-28 2013-06-05 深圳大学 一种具有神经退行性疾病防治活性的海洋红树耐盐性内生真菌
US20140128585A1 (en) 2011-07-07 2014-05-08 Nagaoka Perfumery Co., Ltd. Fructose absorption inhibitor
GB201112091D0 (en) 2011-07-14 2011-08-31 Gt Biolog Ltd Bacterial strains isolated from pigs
WO2013008102A2 (en) 2011-07-14 2013-01-17 R.E.D. Laboratories N.V../ S.A. Methods and compositions for evaluating and/or treating chronic immune diseases
US20130022575A1 (en) 2011-07-19 2013-01-24 Microbial Rx Systems and methods of replacing intestinal flora
CN102304483A (zh) 2011-08-12 2012-01-04 北京金泰得生物科技股份有限公司 一株饲用屎肠球菌及其应用
KR101261872B1 (ko) 2011-08-23 2013-05-14 대한민국 (식품의약품안전처장) 장내 미생물 효소복합체 및 이의 제조방법
EP2756071B1 (en) 2011-09-14 2017-12-20 University Of Guelph Media supplements and methods to culture human gastrointestinal anaerobic microorganisms
GB201117313D0 (en) 2011-10-07 2011-11-16 Gt Biolog Ltd Bacterium for use in medicine
DK2750682T3 (en) 2011-10-11 2016-08-22 Achim Biotherapeutics Ab A composition comprising anaerobically cultured human intestinal flora
FI126711B (fi) 2011-10-12 2017-04-13 Gut Guide Oy Serotoniinivajeeseen liittyvän terveysriskin arvioiminen
CN103082292B (zh) 2011-11-02 2015-03-04 深圳华大基因研究院 罗斯氏菌(Roseburia)在治疗和预防肥胖相关疾病中的应用
CN102373172B (zh) 2011-11-03 2013-03-20 北京龙科方舟生物工程技术有限公司 一株屎肠球菌及其应用
CA2892588A1 (en) 2011-12-01 2013-06-06 School Corporation, Azabu Veterinary Medicine Educational Institution Human-derived bacteria that induce proliferation or accumulation of regulatory t cells
ES2408279B1 (es) 2011-12-15 2014-09-09 Universidad De Las Palmas De Gran Canaria Bacteria acido láctica probiótica
ITBG20120010A1 (it) 2012-02-24 2013-08-25 Milano Politecnico Dispositivo per l'addestramento chirurgico
ITMI20120471A1 (it) 2012-03-26 2013-09-27 Giovanni Mogna Composizione a base di ceppi di batteri bifidobacterium longum in grado di aiutare il prolungamento della vita
JP5792105B2 (ja) 2012-03-27 2015-10-07 森永乳業株式会社 ラクト−ｎ−ビオースｉの製造方法
JP6201982B2 (ja) 2012-03-30 2017-09-27 味の素株式会社 糖尿病誘起細菌
US20130280724A1 (en) 2012-04-11 2013-10-24 Nestec Sa Methods for diagnosing impending diarrhea
GB201206599D0 (en) 2012-04-13 2012-05-30 Univ Manchester Probiotic bacteria
MX2014012362A (es) 2012-04-13 2015-05-07 Trustees Boston College Composición prebiótica y métodos de uso.
US10130665B2 (en) 2012-05-18 2018-11-20 Genome Research Limited Method for identifying bacteria for bacteriotherapy
ES2436251B1 (es) 2012-05-25 2014-10-08 Consejo Superior De Investigaciones Científicas (Csic) Bacteroides cect 7771 y su uso en la prevención y tratamiento de sobrepeso, obesidad y alteraciones metabólicas e inmunológicas.
EP3659598A1 (en) 2012-06-04 2020-06-03 Gaurav Agrawal Compositions and methods for treating crohn's disease and related conditions and infections
CN102743420A (zh) 2012-06-06 2012-10-24 上海交通大学 改善肠道菌群结构的方法及应用
WO2014001368A1 (en) 2012-06-25 2014-01-03 Orega Biotech Il-17 antagonist antibodies
CN104582506B (zh) 2012-07-31 2016-10-19 雀巢产品技术援助有限公司 用于促进患有炎症性肠病(ibd)的患者的肌肉骨骼健康的营养组合物
WO2014019271A1 (en) 2012-08-01 2014-02-06 Bgi Shenzhen Biomarkers for diabetes and usages thereof
US10874701B2 (en) 2012-08-16 2020-12-29 University-Industry Cooperation Group Of Kyung Hee University Lactic acid bacteria capable of preventing and/or treating senescence and dementia
KR101426276B1 (ko) * 2012-08-16 2014-08-05 주식회사한국야쿠르트 심장질환 및 뇌졸중을 유발하는 거품세포 형성 억제 및 혈관 병변 형성을 억제하는 활성을 가지는 락토바실러스 플란타룸 ｈｙ７７１２를 유효성분으로 함유하는 제품
CN114949001A (zh) 2012-08-29 2022-08-30 加州理工学院 孤独症谱系障碍的诊断和治疗
BR112015004165A2 (pt) 2012-08-29 2017-07-04 Salix Pharmaceuticals Inc métodos e composições laxantes para o tratamento de constipação e condições e doenças gastrointestinais relacionadas
WO2014043593A2 (en) 2012-09-13 2014-03-20 Massachusetts Institute Of Technology Programmable drug delivery profiles of tumor-targeted bacteria
KR101473058B1 (ko) 2012-09-19 2014-12-16 주식회사 쎌바이오텍 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물
CN103652322B (zh) 2012-09-21 2016-02-10 临沂思科生物科技有限公司 一种含乳酸菌的复合益生菌饲料添加剂的制备方法
EP3401396A1 (en) 2012-10-03 2018-11-14 Metabogen AB Treating or preventing atherosclerosis or associated diseases by beta-carotene
FR2997091B1 (fr) 2012-10-22 2016-05-06 Fond Mediterranee Infection Utilisation d'un compose antioxydant pour la culture de bacteries sensibles a la tension en oxygene
WO2014070225A1 (en) 2012-10-30 2014-05-08 Deerland Enzymes, Inc. Prebiotic compositions comprising one or more types of bacteriophage
WO2014067976A1 (en) 2012-10-30 2014-05-08 Nestec S.A. Compositions comprising microparticles and probiotics to deliver a synergistic immune effect
WO2014070014A1 (en) 2012-11-01 2014-05-08 Rijksuniversiteit Groningen Methods and compositions for stimulating beneficial bacteria in the gastrointestinal tract
WO2014075745A1 (en) 2012-11-19 2014-05-22 Université Catholique de Louvain Use of akkermansia for treating metabolic disorders
MX2015006491A (es) 2012-11-23 2015-12-03 Seres Health Inc Composiciones bacterianas sinergicas y metodos de produccion y uso de las mismas.
CN104918624A (zh) 2012-11-26 2015-09-16 托马斯·朱利叶斯·波洛迪 恢复排泄物微生物群的组合物及其制造和使用方法
PT2931898E (pt) 2012-12-12 2016-06-16 Harvard College Manipulação e otimização de sistemas, métodos e composições para manipulação de sequências com domínios funcionais
CN105209621B (zh) 2012-12-12 2021-05-25 布罗德研究所有限公司 对用于序列操纵的改进的系统、方法和酶组合物进行的工程化和优化
SG10201707569YA (en) 2012-12-12 2017-10-30 Broad Inst Inc Delivery, Engineering and Optimization of Systems, Methods and Compositions for Sequence Manipulation and Therapeutic Applications
US20140193464A1 (en) 2013-01-08 2014-07-10 Imagilin Technology, Llc Effects of probiotics on humans and animals under environmental or biological changes
EP2951283A4 (en) 2013-02-04 2017-01-25 Seres Therapeutics, Inc. Compositions and methods
MX369877B (es) 2013-02-04 2019-11-25 Seres Therapeutics Inc Composiciones y metodos.
EP2958575B1 (en) 2013-02-22 2019-04-03 The Regents of The University of California Composition comprising lactobaccilus johnsonii 456 and its use in treating or preventing diseases
KR20150134356A (ko) 2013-03-05 2015-12-01 리엑스유니버시테이트 그로닝겐 염증을 억제하기 위한 페칼리 박테리움 프라우스니치이 htf-f (dsm 26943)의 용도
US20160040215A1 (en) 2013-03-14 2016-02-11 Seres Therapeutics, Inc. Methods for Pathogen Detection and Enrichment from Materials and Compositions
US9907755B2 (en) 2013-03-14 2018-03-06 Therabiome, Llc Targeted gastrointestinal tract delivery of probiotic organisms and/or therapeutic agents
EP2983662A4 (en) 2013-03-15 2016-09-21 MicroBiome Therapeutics LLC FIBER OF ACTIVATED SOYBEAN SLEEVES
JP2016519664A (ja) 2013-03-15 2016-07-07 セレス セラピューティクス インコーポレイテッド ネットワークを基にした微生物組成物及び方法
US9669059B2 (en) 2013-03-15 2017-06-06 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Butyrogenic bacteria as probiotics to treat clostridium difficile
CN103142656A (zh) 2013-03-18 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 脆弱拟杆菌在制备防治结肠癌组合物中的应用
CN103156888A (zh) 2013-03-18 2013-06-19 广州知光生物科技有限公司 脆弱拟杆菌在制备治疗炎症性肠病组合物中的应用
CN103146620A (zh) 2013-03-25 2013-06-12 广州知光生物科技有限公司 具有益生菌特性的脆弱拟杆菌
JP2014196260A (ja) 2013-03-29 2014-10-16 公立大学法人奈良県立医科大学 慢性閉塞性肺疾患の予防又は治療用組成物
GB201306536D0 (en) 2013-04-10 2013-05-22 Gt Biolog Ltd Polypeptide and immune modulation
WO2014182966A1 (en) 2013-05-10 2014-11-13 California Institute Of Technology Probiotic prevention and treatment of colon cancer
US10284649B2 (en) 2013-05-31 2019-05-07 Nec Corporation Distributed processing system
US9511099B2 (en) 2013-06-05 2016-12-06 Rebiotix, Inc. Microbiota restoration therapy (MRT), compositions and methods of manufacture
KR102099503B1 (ko) 2013-06-05 2020-04-09 리바이오틱스, 인코퍼레이티드 미생물상 복원 요법(mrt) 조성물
WO2014201037A2 (en) 2013-06-10 2014-12-18 New York University Methods for manipulating immune responses by altering microbiota
WO2014200334A1 (en) 2013-06-14 2014-12-18 N.V. Nutricia Synbiotic composition for treatment of infections in allergic patients
WO2015003001A1 (en) 2013-07-01 2015-01-08 The Washington University Methods for identifying supplements that increase gut colonization by an isolated bacterial species, and compositions derived therefrom
WO2015003305A1 (zh) 2013-07-08 2015-01-15 吉瑞高新科技股份有限公司 电子烟盒
US9764019B2 (en) 2013-07-09 2017-09-19 Vedanta Biosciences, Inc. Compositions containing combinations of bioactive molecules derived from microbiota for treatment of disease
WO2015013214A2 (en) 2013-07-21 2015-01-29 Whole Biome, Inc. Methods and systems for microbiome characterization, monitoring and treatment
US20160192689A1 (en) 2013-07-31 2016-07-07 Wikifoods, Inc. Encapsulated functional food compositions
EP3033091B1 (en) 2013-08-16 2022-09-07 Versitech Limited Probiotic composition and use thereof in the prevention and treatment of hepatocellular carcinoma
CN103509741B (zh) 2013-08-22 2015-02-18 河北农业大学 布劳特菌auh-jld56及其在牛蒡苷元转化中的应用
CN104415060A (zh) 2013-08-30 2015-03-18 深圳华大基因科技有限公司 可食用组合物及其制备方法和用途
ITMI20131467A1 (it) 2013-09-06 2015-03-07 Sofar Spa Uso di una composizione comprendente microrganismi per aumentare la produzione intestinale di acido butirrico, di acido folico o di niacina e/o per diminuire la produzione intestinale di acido succinico
US10203329B2 (en) 2013-09-12 2019-02-12 The Johns Hopkins University Biofilm formation to define risk for colon cancer
US10058576B2 (en) 2013-10-03 2018-08-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods comprising a defined microbiome and methods of use thereof
EP3071052B1 (en) 2013-10-18 2020-02-26 InnovaChildfood AB A nutritionally balanced composite meal for infants and small children and a method of producing said meal
PL229020B1 (pl) 2013-11-13 2018-05-30 Inst Biotechnologii Surowic I Szczepionek Biomed Spolka Akcyjna Nowy szczep Bifidobacterium breve
MX367109B (es) * 2013-11-25 2019-08-05 Seres Therapeutics Inc Composiciones bacterianas sinergicas y sus metodos de produccion y usos.
US9956282B2 (en) 2013-12-16 2018-05-01 Seres Therapeutics, Inc. Bacterial compositions and methods of use thereof for treatment of immune system disorders
CN103981115B (zh) 2013-12-24 2018-10-26 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一株高抗逆性屎肠球菌及其应用
CN103981117B (zh) 2013-12-24 2018-10-26 北京大伟嘉生物技术股份有限公司 一株高抗逆性屎肠球菌及其培养方法和应用
CN103820363B (zh) 2014-01-27 2016-02-24 福建省农业科学院生物技术研究所 一种屎肠球菌菌粉的制备与应用
CN103865846B (zh) 2014-02-27 2016-03-30 扬州绿保生物科技有限公司 一种屎肠球菌及其制备方法
CN103849590B (zh) 2014-03-25 2016-07-06 上海交通大学 一株耐酸短双歧杆菌BB8dpH及其应用
KR101683474B1 (ko) 2014-03-26 2016-12-08 주식회사 쎌바이오텍 과민성 대장 증후군 예방 또는 치료용 조성물
US9783858B2 (en) 2014-04-02 2017-10-10 Northwestern University Altered microbiome of chronic pelvic pain
KR101583546B1 (ko) 2014-04-09 2016-01-11 국립암센터 유전자 다형성을 이용한 소라페닙 치료에 대한 반응성 예측방법
WO2015156419A1 (en) 2014-04-10 2015-10-15 Riken Compositions and methods for induction of th17 cells
CN104195075B (zh) 2014-08-14 2017-04-19 生合生物科技股份有限公司 一种屎肠球菌ef08及包含它的饲料添加物和饲料
WO2015168534A1 (en) 2014-05-02 2015-11-05 Novogy, Inc. Therapeutic treatment of gastrointestinal microbial imbalances through competitive microbe displacement
JP6629840B2 (ja) 2014-05-08 2020-01-15 パノプテス・ファーマ・ゲーエムベーハー 眼の疾患および障害を処置するための化合物
CN106687130B (zh) 2014-08-05 2020-01-21 深圳华大基因科技有限公司 真杆菌属在预防和治疗结直肠癌相关疾病中的用途
WO2016019505A1 (en) 2014-08-05 2016-02-11 Bgi Shenzhen Co., Limited Use of eubacterium in the prevention and treatment for colorectal cancer related diseases
US10925953B2 (en) 2014-08-28 2021-02-23 Yale University Compositions and methods for treating an inflammatory disease or disorder
WO2016036615A1 (en) 2014-09-03 2016-03-10 California Institute Of Technology Microbe-based modulation of serotonin biosynthesis
CN104546935A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546933A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 粪拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546942A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多氏拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546940A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 平常拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546934B (zh) 2014-09-30 2019-04-09 深圳华大基因科技有限公司 粪副拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN104546932A (zh) 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 卵形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
WO2016057671A1 (en) 2014-10-07 2016-04-14 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for preventing and treating infection
CN107249611A (zh) 2014-10-24 2017-10-13 进化生物系统股份有限公司 活化的双歧杆菌及其应用方法
US10124025B2 (en) 2014-10-30 2018-11-13 California Institute Of Technology Compositions and methods comprising bacteria for improving behavior in neurodevelopmental disorders
KR20170086492A (ko) 2014-10-30 2017-07-26 캘리포니아 인스티튜트 오브 테크놀로지 신경발달 장애에서의 행동을 개선시키기 위한 박테리아를 포함하는 조성물 및 방법
EP4529950A3 (en) 2014-10-31 2025-08-20 Pendulum Therapeutics, Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment
CN104435000A (zh) 2014-11-12 2015-03-25 江南大学 乳酸菌对支气管哮喘治疗中的应用
MA41020A (fr) 2014-11-25 2017-10-03 Evelo Biosciences Inc Compositions probiotiques et prébiotiques, et leurs procédés d'utilisation pour la modulation du microbiome
ES3010296T3 (en) 2014-11-25 2025-04-02 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Intestinal microbiota and gvhd
PE20171138A1 (es) 2014-12-23 2017-08-09 4D Pharma Res Ltd Modulacion inmunitaria
DK3193901T3 (en) 2014-12-23 2018-05-28 4D Pharma Res Ltd PIRIN POLYPEPTIDE AND IMMUNMODULATION
CN104560820B (zh) 2014-12-30 2017-10-20 杭州师范大学 屎肠球菌kq2.6及应用
US20160199425A1 (en) * 2015-01-08 2016-07-14 Nubiome, Inc. Treatment and Prophylaxis for Parkinson's Disease
SG10201907660YA (en) 2015-01-23 2019-10-30 Univ Temple Use of short chain fatty acids in cancer prevention
CN105982919A (zh) 2015-02-26 2016-10-05 王汉成 生物减速剂抗癌技术
WO2016139217A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Ab-Biotics, S.A. Composition comprising anaerobically cultivated human intestinal microbiota
WO2016149449A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 Tufts University Compositions and methods for preventing colorectal cancer
EP3270938A4 (en) 2015-03-18 2018-12-19 Whole Biome Inc. Methods and compositions relating to microbial treatment and diagnosis of skin disorders
KR101745084B1 (ko) 2015-05-06 2017-06-09 한양대학교 산학협력단 메가스페라 헥사노이카 균주를 이용하여 헥사노익산을 생산하는 방법
KR20160131237A (ko) * 2015-05-06 2016-11-16 한양대학교 산학협력단 C5-c8 유기산을 생산하는 신규 균주 및 이를 이용하여 c5-c8 유기산을 생산하는 방법
HK1253064A1 (zh) 2015-06-01 2019-06-06 The University Of Chicago 通过操纵共生微生物菌群对癌症的治疗
EP3662917A1 (en) 2015-06-15 2020-06-10 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains
MA41010B1 (fr) 2015-06-15 2020-01-31 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
MA41060B1 (fr) 2015-06-15 2019-11-29 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
LT3360559T (lt) 2015-06-15 2019-12-27 4D Pharma Research Limited Kompozicijos, apimančios bakterijų kamienus
PE20180243A1 (es) 2015-06-15 2018-01-31 4D Pharma Res Ltd Composiciones que comprenden cepas bacterianas
US11771065B2 (en) 2015-08-20 2023-10-03 Api Holdings, Llc Formulations and methods for promoting honeybee health
CN105112333A (zh) 2015-08-31 2015-12-02 江南大学 一种具有良好肠道定殖能力的长双歧杆菌及筛选方法和应用
KR20180093903A (ko) 2015-11-03 2018-08-22 더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크. 음식 알레르기의 치료 및/또는 예방을 위한 치료용 미생물총
GB201520497D0 (en) 2015-11-20 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
MA41013A (fr) 2015-11-20 2017-08-30 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
GB201520631D0 (en) 2015-11-23 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
GB201520638D0 (en) 2015-11-23 2016-01-06 4D Pharma Res Ltd Compositions comprising bacterial strains
US20190247447A1 (en) 2015-11-24 2019-08-15 Seres Therapeutics, Inc. Designed bacterial compositions
EP3379935A4 (en) 2015-11-25 2019-08-28 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center METHOD AND COMPOSITIONS FOR REDUCING VANCOMYCIN RESISTANT ENTEROKOKKEN
JP2019503688A (ja) 2016-01-11 2019-02-14 ３ピーエルダブリュー リミテッド 多糖分解酵素を分泌するように遺伝子改変された乳酸利用細菌
MX373290B (es) 2016-03-04 2020-06-18 4D Pharma Plc Composiciones que comprenden cepas bacterianas.
AU2017234120B2 (en) 2016-03-14 2024-06-20 Holobiome, Inc. Modulation of the gut microbiome to treat mental disorders or diseases of the central nervous system
KR102658297B1 (ko) 2016-06-14 2024-04-18 베단타 바이오사이언시즈, 인크. 클로스트리디움 디피실레 감염의 치료
JP6898628B2 (ja) 2016-06-15 2021-07-07 国立大学法人広島大学 神経変性疾患治療剤
TWI802545B (zh) 2016-07-13 2023-05-21 英商４Ｄ製藥有限公司 包含細菌菌株之組合物
IT201600091033A1 (it) 2016-09-08 2018-03-08 Bioimmunizer Sagl Ceppi di batteri probiotici appartenenti al genere Bifidobacterium e loro estratti di cellule probiotiche (ECP) aventi proprietà immunostimolanti.
WO2018094190A2 (en) 2016-11-18 2018-05-24 Sanford Burnham Prebys Medical Discovery Institute Gut microbiota and treatment of cancer
GB201621123D0 (en) 2016-12-12 2017-01-25 4D Pharma Plc Compositions comprising bacterial strains
US20190314427A1 (en) 2016-12-16 2019-10-17 Evelo Biosciences, Inc. Methods of treating cancer using parabacteroides
WO2018112365A2 (en) 2016-12-16 2018-06-21 Evelo Biosciences, Inc. Methods of treating colorectal cancer and melanoma using parabacteroides goldsteinii
CN106890196A (zh) 2017-04-07 2017-06-27 青岛东海药业有限公司 酪酸梭菌在制备预防或治疗帕金森病制剂中的应用
MA41708A (fr) 2017-05-24 2020-04-08 4D Pharma Res Ltd Compositions comprenant des souches bactériennes
TWI767013B (zh) 2017-06-14 2022-06-11 英商4D製藥研究有限公司 包含細菌品系之組成物
JP2020523326A (ja) * 2017-06-14 2020-08-06 フォーディー ファーマ リサーチ リミテッド４Ｄ Ｐｈａｒｍａ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌｉｍｉｔｅｄ 細菌株を含む組成物
KR102563191B1 (ko) 2017-07-05 2023-08-02 에벨로 바이오사이언시즈, 인크. 비피도박테리움 애니멀리스 ssp. 락티스를 이용한 암 치료 조성물 및 방법
LT3743086T (lt) 2018-05-11 2022-06-10 4D Pharma Research Limited Kompozicijos, apimančios bakterinius kamienus
WO2020120714A1 (en) 2018-12-12 2020-06-18 4D Pharma Research Limited Compositions comprising bacterial strains

Also Published As

Publication number Publication date
RS63393B1 (sr) 2022-08-31
AU2020204099A1 (en) 2020-07-09
EP3600364A1 (en) 2020-02-05
IL271265A (en) 2020-01-30
NZ760605A (en) 2022-03-25
KR20200018463A (ko) 2020-02-19
ES2823053T3 (es) 2021-05-07
KR102519483B1 (ko) 2023-04-10
MX2021006456A (es) 2021-07-02
JP6837581B2 (ja) 2021-03-03
SG11201912153VA (en) 2020-01-30
US11007233B2 (en) 2021-05-18
TW201919668A (zh) 2019-06-01
CA3066557A1 (en) 2018-12-20
CY1125659T1 (el) 2024-02-16
PT3600364T (pt) 2020-10-19
AU2018285453A1 (en) 2020-02-06
US11660319B2 (en) 2023-05-30
SMT202000555T1 (it) 2020-11-10
DK3804737T3 (da) 2022-07-25
WO2018229216A1 (en) 2018-12-20
ES2917415T3 (es) 2022-07-08
MX383130B (es) 2025-03-13
LT3600364T (lt) 2020-10-26
CN111032061A (zh) 2020-04-17
HUE052258T2 (hu) 2021-04-28
WO2018229236A2 (en) 2018-12-20
EP3804737A1 (en) 2021-04-14
PT3804737T (pt) 2022-08-29
PL3600364T3 (pl) 2021-01-11
MA49010B1 (fr) 2020-11-30
SI3600364T1 (sl) 2020-10-30
AU2018283994A1 (en) 2020-02-06
CA3160116A1 (en) 2018-12-20
TWI812624B (zh) 2023-08-21
US20210315943A1 (en) 2021-10-14
CY1123565T1 (el) 2022-03-24
EP3804737B1 (en) 2022-05-18
RS60910B1 (sr) 2020-11-30
WO2018229236A3 (en) 2019-03-07
CA3066561C (en) 2022-07-19
US20200206280A1 (en) 2020-07-02
KR20200015575A (ko) 2020-02-12
MA49010A (fr) 2020-02-05
IL292373A (en) 2022-06-01
EP3638273A2 (en) 2020-04-22
TW201919667A (zh) 2019-06-01
SG11201912156QA (en) 2020-01-30
LT3804737T (lt) 2022-07-11
SMT202200272T1 (it) 2022-07-21
HUE059249T2 (hu) 2022-11-28
US20200215126A1 (en) 2020-07-09
CN110913876A (zh) 2020-03-24
NZ760654A (en) 2021-03-26
PL3804737T3 (pl) 2022-09-12
US11779613B2 (en) 2023-10-10
MA53937A (fr) 2021-04-14
SI3804737T1 (sl) 2022-07-29
AU2018285453B2 (en) 2020-03-19
HRP20220747T1 (hr) 2022-10-14
BR112019026667A2 (pt) 2020-06-23
MA53937B1 (fr) 2022-05-31
MD3804737T2 (ro) 2022-10-31
CA3066561A1 (en) 2018-12-20
AU2021203891A1 (en) 2021-07-08
EP3600364B1 (en) 2020-08-05
JP2020523313A (ja) 2020-08-06
AU2018283994B2 (en) 2021-03-18
HRP20201629T1 (hr) 2020-12-25
JP2021075556A (ja) 2021-05-20
DK3600364T3 (da) 2020-08-31
MA49425A (fr) 2020-04-22
IL271265B (en) 2022-06-01
JP2022088641A (ja) 2022-06-14
JP2020523326A (ja) 2020-08-06
IL271319A (en) 2020-01-30
EP4104843A1 (en) 2022-12-21
BR112019026677A2 (pt) 2020-06-30
NZ773323A (en) 2022-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2823053T3 (es) Composiciones que comprenden una cepa bacteriana del género Megasphaera y usos de las mismas
US12048720B2 (en) Compositions comprising bacterial strains
MD3638271T2 (ro) Compoziții cuprizând tulpini bacteriene
HK40054566A (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40048780B (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40048780A (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40020569A (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphaera and uses thereof
HK40020569B (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphaera and uses thereof
OA21082A (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megasphera and uses thereof.
OA19684A (en) Compositions comprising bacterial strains.
HK40021854B (en) Compositions comprising bacterial strains
HK40021854A (en) Compositions comprising bacterial strains
EA038133B1 (ru) Композиции, содержащие бактериальные штаммы
NZ760654B2 (en) Compositions comprising a bacterial strain of the genus megaspahera and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Patent for invention definitely lapsed due to non-payment of fees