NL193266C - Gelyofiliseerde of geprecipiteerde cefalosporine zwitterion en zoutcombinatie. - Google Patents

Description

1 193266

Gelyofiliseerde of geprecipiteerde cefalosporine zwitterion en zoutcombinatie

De onderhavige uitvinding heeft betrekking op een temperatuurstabiele breedspectrum antibioticum-samenstelling die bij verdunning tot een injecteerbare concentratie een pH van 3,5 tot 7 geeft en een 5 7-[a-(2-aminothiazol-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(1-methyl-1-pyrrolidinio)-methyl]-3-cephem-4- carboxylaat zwitteriongedeeite heeft. Een dergelijke samenstelling blijkt uit de niet vóórgepubliceerde Nederlandse octrooiaanvrage 8601991 van oudere rang.

De Britse octrooiaanvrage GB 2.167.302A beschrijft een stabiel preparaat van een soortgelijke cephem-verbinding welke wordt verkregen door lyofilisatie van een waterige oplossing van deze verbinding met een 10 alkalimetaalhalogenide.

In het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 wordt 7-[a-(2-aminothiazool-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(1 -methyl-1 -pyrrolidinio)-methyl]-3-cephem-4-carboxylaat beschreven in de zwitterionvorm en worden overeenkomstige zuuradditiezouten vermeld. Verder wordt getoond dat de zwitterionvorm een breder spectruinactiviteit dan ceftazidime en cefotaxime bezit. Naar het zwitterion wordt 15 verwezen als 7-[(Z)-2-2methoxyimino-2-(2-aminothiazool-4-yl)acetamido]-3-[(1-methyl-1 -pyrrolidinium)methyl]-3-cephem-4-carboxylaat.

Kessler et al., noemen in "Comparison of a New Cephalosporin, BMY-28142, with Other Broad-Spectrum β-Lactam Antibiotics”, Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Vol. 27, No. 2, biz. 207-216, februari 1985 het sulfaatzout.

20 Thans is gevonden dat de amorfe vaste stof, die gevormd wordt door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van het zwitterion, dat wil zeggen 7-[a-(2-aminothiazool-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(1 -methyl-1 -pyrrolidinio)-methyl]-3-cephem-4-carboxylaat zwitterion, en een zout of mengsel van twee of meer zouten, gekozen uit een bepaalde groep, de brede spectrum-antibioticumactiviteit van het zwitterion behoudt, maar een betere temperatuurstabiliteit in de vorm van een 25 droog poeder bezit en bij verdunning tot injecteerbare concentraties een pH geeft van ongeveer 3,5 tot ongeveer 7 en daardoor geschikt is voor gebruik voor intramusculaire en intraveneuze injectie zonder dat buffers of basen worden gebruikt.

De uitvinding heeft derhalve betrekking op een samenstelling van de in de aanhef omschreven aard, die gekenmerkt wordt doordat de samenstelling in essentie bestaat uit: 30 a. een amorfe vaste stof gevormd door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van (i) het zwitterion en (ii) een zout waarin het kationogene gedeelte natrium, lithium, calcium en/of magnesium en het anionogene gedeelte chloride, bromide en/of jodide is, 35 waarbij de molaire verhouding van het zwitterion tot het zout in de oplossing in het traject 0,5-2 ligt, of b. een solvaat van de amorfe vaste stof, en dat er bij de verdunning geen buffers of basen zijn gebruikt.

De volgens de uitvinding te gebruiken zouten zijn die waarin het kation gekozen wordt uit de groep bestaande uit natrium, lithium, calcium en magnesium, en het anion gekozen wordt uit de groep bestaande uit chloride, bromide en jodide. De zouten worden gekozen om een amorf vast product te verkrijgen met 40 een zodanige temperatuurstabiliteit dat het minder dan ongeveer 15-20% van zijn activiteit verliest bij bewaren in de vorm van een droog poeder gedurende 2-4 weken bij 45°C (1-2 weken bij 56°C), zoals bepaald met behulp van een HPLC-test.

De molverhouding van zwitterion tot zout in de aan lyofilisatie of aan co-solvensprecipitatie onderworpen oplossing varieert van ongeveer 0,5:1 tot ongeveer 2:1.

45 De samenstellingen volgens de uitvinding omvatten zowel de sulfaatvrije vorm als de sulfaatvorm.

Een geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion en natriumchloride. Een meer geprefereerde samenstelling omvat de bovengenoemde vaste stof, waarin het zwitterion en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1:1. Een nog meer geprefereerde samenstelling omvat de bovenstaand beschreven samenstelling met een molverhouding 1:1, gevormd door lyofilisatie van 50 een waterige oplossing van het zwitterion en natriumchloride.

Een andere geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion en calciumchloride. Meer geprefereerde samenstellingen omvatten de bovengenoemde vaste stof waarin het zwitterion en het calciumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1:0,5 of 1:1. Nog meer geprefereerde samenstellingen omvatten de bovenstaand beschreven samenstelling met een molverhouding van 55 1:0,5 of 1:1, gevormd door lyofilisatie van een waterige oplossing van het zwitterion en calciumchloride.

Andere geprefereerde samenstellingen omvatten amorfe vaste stoffen, gevormd uit zwitterion en een mengsel van natriumchloride en calciumchloride.

193266 2

Een bijzondere geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride, waarbij het zwitterion, het calciumchloride en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van (a) 1:0,5:0,5 of (b) 1:0,1-0,2:0,8-1,0. Het liefst is een dergelijke vaste stof verkregen door lyofilisatie van een waterige oplossing van zwitterion, calciumchloride en 5 natriumchloride.

Een bijzonder geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof gevormd (liefst door lyofilisatie) uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride, waarbij het zwitterion, het calciumchloride en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1:0,2:1. Deze vaste stof blijkt de beste combinatie van stabiliteit als droog poeder en in waterige oplossing en farmaceutische aanvaardbaarheid te bezitten. In 10 het bijzonder bezit hij een uitstekende stabiliteit als droog poeder bij kamertemperatuur en bij verhoogde temperaturen en heeft hij tevens medisch aanvaardbare calciumgehaltes voor gebruik bij de mens.

Een andere bijzonder geprefereerde samenstelling omvat een amorfe vaste stof, gevormd (liefst door lyofilisatie) uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride waarbij het zwitterion, het calciumchloride en het natriumchloride aanwezig zijn in een molverhouding van 1:0,5:0,5. Deze vaste stof blijkt zowel in de 15 vorm van een droog poeder als bij reconstitutie een uitstekende stabiliteit te bezitten.

Het hier gebruikte woord ”co-solvensprecipitatie” duidt op toevoeging van een non-solvens aan een waterige oplossing van zwitterion en zout, waardoor deze gezamenlijk precipiteren (co-precipitatie).

Het hier gebruikte begrip ’’droog poeder” duidt op een vochtgehalte van minder dan 5 gew.%.

Wanneer bij het beschrijven van samenstellingen binnen de omvang van de uitvinding het woord 20 ’’temperatuurstabiel” wordt gebruikt, wordt gedoeld op een zodanige temperatuurstabiliteit dat minder dan 15-20% activiteit verloren gaat bij bewaren gedurende 2-4 weken bij 45°C in de vorm van een droog poeder (1-2 weken bij 56°C) zoals bepaald met een HPLC-test.

Het woordgebruik ’’zonder gebruik te maken van buffers of basen” betekent dat de vaste stof gereconsti-tueerd wordt met steriel water en/of zoutoplossing, zonder dat de heersende pH verder met behulp van een 25 pH-instellende stof wordt bijgesteld.

Het voor het vormen van de hierin beschreven samenstellingen gebruikte zwitterion beantwoordt aan de structuurformule 1 van het formuleblad. Dit zwitterion kan gemakkelijk worden bereid op de wijze die beschreven is in het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899.

Geschikte zouten voor gebruik in de vormen van de samenstellingen volgens de uitvinding omvatten 30 bijvoorbeeld natriumchloride, natriumbromide, natriumjodide, lithiumchloride, lithiumjodide, calciumchloride, calciumbromide, calciumjodide en magnesiumchloride.

De molverhouding van zwitterion tot zout varieert bij voorkeur van ongeveer 1:1 tot ongeveer 2:1 en bedraagt liefst ongeveer 1:1.

Gevonden is ook dat geschikte samenstellingen gevormd kunnen worden uit mengsels van de vermelde 35 zouten alsmede uit de individuele zouten op zichzelf. De stabiliteitseigenschappen van dergelijke samenstellingen zullen ergens tussen de stabiliteiten van de samenstellingen, gevormd uit de individuele zouten van het mengsel, gelegen zijn. Bijvoorbeeld kan een vaste stof worden bereid uit zwitterion, calciumchloride en natriumchloride, en deze vaste stof zal stabiliteitseigenschappen hebben, die gelegen zijn tussen die van de samenstellingen zwitterion:NaCI en zwitterion:CaCI2. Gebruik van een mengsel kan voordelen bieden 40 wanneer men in hoge mate de gunstige stabiliteitseigenschappen van een zout wenst te realiseren, maar om fysiologische redenen de hoeveelheid van het zout in de toedieningsvorm wilt beperken. Voor het bereiden van samenstellingen uit twee of meer zouten worden eenvoudigweg de zouten gebruikt in hoeveelheden waardoor de totale molverhouding in het bovenstaand vermelde bereik ligt, dat wil zeggen het bereik van zwitterionrzout = 0,5:1 tot 2:1.

45 Zoals eerder opgemerkt wordt een voorkeurssamenstelling verkregen door lyofilisatie van een waterige oplossing van het zwitterion en natriumchloride in een molverhouding van 1:1. Deze samenstelling heeft een IR dat niet significant verschilt van dat van het zwitterion. Hij heeft echter een ontledingspunt volgens differentiële aftastcaloriemetrie met een exotherm bij ongeveer 197,4°C, vergeleken met 173,84°C voor het zwitterion, hetgeen wijst op de aanwezigheid van een andere verbinding dan het zwitterion. Zonder aan 50 enige theorie gebonden te willen zijn wordt vermoed dat de stof die aanwezig is, een complex is met Na+ dat het COCT van het zwitterion neutraliseert en Cl- dat door het N+ van het zwitterion is geneutraliseerd, dat wil zeggen een verbinding met de structuur volgens formule 2 van het formuleblad. In verband met deze theoretische speculatie, zal de hierin beschreven samenstelling, gevormd uit een oplossing van zwitterion en natriumchloride in een molverhouding van 1:1, soms worden aangeduid als het zwitterion:NaCI-1:1 55 complex, hoewel het bestaan van dit complex niet ondubbelzinnig is aangetoond.

Het zwitterion:NaCI 1:1 complex is farmaceutisch zeer aanvaardbaar. Het heeft een breed spectrum antibioticumactiviteit die nagenoeg gelijk is aan die van het zwitterion. Het heeft een bevredigende stabiliteit 3 193266 in oplossing gedurende ten minste 24 uur bij 25°C (bij een concentratie van 250 mg/ml zwitterion in steriel water treedt minder dan 10% verlies in activiteit op, zoals bepaald met HPCL), en heeft, in tegenstelling tot zwitterion, een bevredigende stabiliteit bij verhoogde temperaturen in de vorm van een droog poeder (ongeveer 10% verlies bij bewaren gedurende 4 weken bij 45°C, zoals bepaald met HPLC) en een 5 exceptionele stabiliteit in de vorm van een droog poeder bij normale koelkasttemperaturen (geen verlies in een periode van 6 maanden bij 4°C). Gedurende een volledige 24 uurs-periode na zijn reconstitutie tot een injecteerbare samenstelling (dat wil zeggen na reconstitutie tot een injecteerbare concentratie), behoudt de injecteerbare samenstelling een bevredigende pH, dat wil zeggen van ongeveer 4,2 tot ongeveer 6,2 zonder gebruik van buffers of basen en is de samenstelling iets minder toxisch dan het zwitterion.

10 Thans zal de bereiding van de samenstellingen nader worden toegelicht.

Zoals eerder is aangegeven bestaat één methode voor het bereiden van de samenstellingen volgens de uitvinding uit het lyofiliseren onder aseptische omstandigheden van een waterige oplossing van zwitterion en zout. Dit kan gemakkelijk worden uitgevoerd door bijvoorbeeld het zwitterion op te lossen in steriel water tot een concentratie van ongeveer 100 tot ongeveer 400 mg/ml, daarna de waterige zwitterionoplossing in een 15 vat te brengen, dat voorzien is van een roerder en daarmee te roeren, vervolgens het zout of mengsel van zouten in een hoeveelheid volgens de gekozen molverhouding toe te voegen en het roeren voort te zetten totdat het oplossen voltooid is, bijvoorbeeld ongeveer 15 minuten tot ongeveer 1 uur, vervolgens te filtreren, waarbij bijvoorbeeld een gesteriliseerd filterinrichting wordt gebruikt, daarna de gefiltreerde oplossing in flesjes te vullen en deze in lyofilisatiebakken te plaatsen die in een lyofilisator worden gebracht, vervolgens 20 bij -30 tot -40°C in te vriezen gedurende een periode van ongeveer 4 uur tot ongeveer 16 uur, daarna een vacuüm van 10 tot 100 millitorr te creëren en de temperatuur in te stellen op -10 tot -20°C gedurende 15 tot 20 uur en vervolgens bij 20 tot 30°C gedurende 40 tot 60 uur, en sublimaat te condenseren in een condensor bij een temperatuur van bijvoorbeeld -40 tot -60°C.

Zoals eerder is aangegeven bestaat de andere methode voor het bereiden van de hier beschreven 25 samenstellingen uit een co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing van zwitterion en zout. Dit kan gemakkelijk onder aseptische condities worden uitgevoerd, bijvoorbeeld door een waterige oplossing te vormen op de wijze die bovenstaand in verband met de lyofilisatiemethode is beschreven, maar waarbij in plaats van lyofilisatie uit te voeren een non-solvens wordt bijgemengd om het zwitterion-zoutcomplex te precipiteren en het precipitaat af te scheiden en te drogen. Normaal kan men vrijelijk kiezen of men de 30 oplossing van zwitterion en zout toevoegt aan het non-solvens of het non-solvens toevoegt aan de oplossing van zwitterion en zout. Het precipitaat kan gemakkelijk worden afgescheiden, bijvoorbeeld door filtratie, waarbij een gesteriliseerde vacuümfilterinrichting wordt gebruikt. Het drogen kan gemakkelijk worden uitgevoerd door drogen onder hoog vacuüm, bijvoorbeeld bij 40 tot 60°C. Het non-solvens is bij voorkeur aceton of isopropylalcohol, maar kan elk farmaceutisch veilig non-solvens voor het zwitterion en het zout 35 zijn, dat niet met deze stoffen reageert.

De samenstellingen volgens de uitvinding worden gevormd tot injecteerbare samenstellingen door ze te verdunnen met steriel water en/of zoutoplossing tot een samenstelling met een zwitterionactiviteit (basisconcentratie) van ongeveer 1 tot ongeveer 400 mg/ml, zoals bepaald met HPLC-tests, bij voorkeur ongeveer 2,5 tot ongeveer 250 mg/ml zoals bepaald met HPLC-tests. Bij voorkeur wordt verdunning tot 250 mg/ml 40 uitgevoerd met behulp van steriel water voor injectie, USP, en, wanneer een verdere verdunning nodig is, met behulp van 0,9% natriumchloride-injectievloeistof, USP. Voor intramusculaire of intraveneuze toediening aan een volwassen mens is normaliter een totale dosering van ongeveer 750 tot ongeveer 3000 mg per dag in onderverdeelde doses voldoende.

De hierin beschreven samenstellingen worden bij voorkeur vervoerd en bewaard in droge vorm onder 45 normale koelkastcondities (bijvoorbeeld bij 4°C), waarbij ze voor ten minste 1-2 jaren voor meer dan 90% actief zouden moeten blijven. Ze worden gemakkelijk omgezet in injecteerbare samenstellingen door reconstitutie, bijvoorbeeld door een verpleegster of dokter, vlak voor gebruik.

De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van de volgende voorbeelden.

50 Voorbeeld I

Synthese en testen van een zwitterion:NaCI 1:1 complex

Aan een vat, voorzien van een roerder, werden 800 ml van een waterige oplossing toegevoegd, die 250 g zwitterion bevatte. Terwijl de roerder met middelmatige snelheid werd geroteerd, werd 30,41 g NaCI toegevoegd om een molverhouding zwitterionrNaCI van 1:1 te verkrijgen. Water voor injectie USP werd 55 toegevoegd qs tot 1 I. Het roeren van de oplossing werd vervolgens nog 15 minuten voortgezet en met tussenpozen van 5-10 minuten daarna totdat monsters, verkregen tussen de roerperioden, geen significante hoeveelheid onopgeloste deeltjes meer vertoonden. De verkregen oplossing werd overgebracht in een 193266 4 roestvrijstalen drukvat en werd daaruit onder toepassing van stikstofgasdruk gevoerd door een steriliserende filterinrichting, voorzien van een voorfilter en een steriliserend filter, in een schone gesteriliseerde houder. Vervolgens werden porties van 4 ml (met 1 g zwitterionactiviteit) aseptisch gevuld in glazen flesjes van 10 cm3. Na het vullen werden de flesjes op losse wijze afgesloten met lyofilisatiestoppen. De flesjes werden 5 daarna in lyofilisatiebakken geplaatst, die in een lyofilisator werden gebracht waarin het product gedurende 4 uur bij -30 tot -40°C werd ingevroren. Daarna werd de condensor op de lyofilisator op -60°C ± 3°C ingesteld en werd de vrieseenheid uitgeschakeld. Toen de condensortemperatuur een waarde van -50°C bereikte, werd de vacuümpomp aangezet. Nadat het vacuüm een niveau van 0,2 mm had bereikt, werd de planktemperatuur ingesteld op -13°C ± 3°C, welke temperatuur 16-18 uur werd gehandhaafd. Daarna werd 10 de planktemperatuur ingesteld op +25°C en gedurende 48 werd een temperatuur van 25°C ± 2°C gehandhaafd. De lyofilisator werd daarna geïnactiveerd en de flesjes werden verwijderd. Het product was een amorfe vaste stof welke gekarakteriseerd werd als zwitteriomNaC11:1 complex.

Analyse : berekend voor C19H24N605S2CINa: %C, 42,34; %H, 4,49; %N, 15,59; %S, 11,90; %H20 (KF), geen; %Na (sulfaathoudende as), 4,27; %CI, 6,58. Gevonden (gecorrigeerd voor H20): %C, 41,96; %H, 15 4,57; %N, 14,73; %S, 12,28; %H20 (KF), 1,80; %Na (sulfaathoudende as), 3,15; %CI, 6,85.

Met IR werden geen significante verschillen waargenomen tussen het hier beschreven product en het zwitterion. Het ontledingspunt volgens differentiële aftastcaloriemetrie bleek echter bij meting een exotherm bij 197,4°C te zijn die duidelijk verschilde van die van het zwitterion (173,84°C), hetgeen erop duidde dat het verkregen product een van het zwitterion verschillende verbinding is.

20 In essentie hetzelfde product werd verkregen door 10-20 volumehoeveelheden isopropylalcohol toe te voegen aan de schone gesteriliseerde houder die de waterige oplossing van zwitterion en natriumchloride bevatte, onder vorming van een precipitaat, het precipitaat met behulp van vacuümfiltratie af te scheiden, het precipitaat te wassen met isopropylalcohol en bij een hoog vacuüm te drogen, waarbij een product werd verkregen in hoofdzaak droge vorm.

25 Voor de bepaling van de breedspectrumactiviteit van het hier verkregen product werden de minimale remmende concentraties (MIC’s) van het beschreven product en van het zwitterion bepaald met behulp van de tweevoudige seriegewijze agaroplossingsmethode in Mueller-Hinton agar. De gegevens zijn in onderstaande tabel A verzameld (hierin duidt de kolom Bristol A No. een bepaalde micro-organismestan aan).

30 TABEL A

MIC waarden (mg/ml)

Bristol A nummer Zwitterion Zwitterion:NaCI 1:1 complex 35 - 1. S. pneumoniae A9585 0,016 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,008 0,008 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 0,5 0,5 40 5. S. aureus/+50% serum A9537s 1 1 6. S aureus/Pen. Res. A9606 1 1 7. S. aureus/Meth. Res. 28°C A20699 >125 125 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 0,016 0,03 45 10. K. pneumoniae A9664 0,016 0,06 11. K. pneumoniae A20468 0,5 1 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacae A9656 0,03 0,06 14. P. mirabilis A9900 0,008 0,016 50 15. P. vulgaris A21559 0,03 0,03 16. M. morganii A15153 0,008 0,016 17. P. rettgeri A22424 0,13 0,25 18. S. marcescens A20019 0,03 0,03 19. Ps. aeruginosa A9843a 0,5 1 55 20. Ps. aeruginosa/Carb. Res. A21628 2 2 5 193266

De bovenstaande gegevens laten zien dat het hier gevormde product, dat wil zeggen het zwitterion:NaCI 1:1 complex nagenoeg een equivalente microbiologische activiteit bezit, in vergelijking tot het zwitterion. In het Amerikaanse octrooischrift 4.406.899 is aangetoond dat het zwitterion een breedspectrumactiviteit heeft, vergeleken met ceftazidime en cefotaxime.

5 De toxociteit van het zwitterion:NaCI 1:1 complex werd getest door toediening in de vorm van een enkele intraveneuze bolusinjectie aan Sprague-Dawley ratten. De LD50 voor gecombineerde gegevens van twee onderzoeken was 796 mg/kg met 95% betrouwbaarheidsgrenzen tussen 759 en 832 mg/kg. Dit kan worden vergeleken met een LD50 van 669 mg/kg met 95% betrouwbaarheidsgrenzen van 618 en 732 mg/kg voor het zwitterion. De responskrommen waren parallel, maar de sterkteverhouding wees erop dat het hier 10 beschreven product iets minder toxisch was dan het zwitterion.

Stabiliteiten bij verhoogde temperaturen werden bepaald door het zwitterion:NaCI 1:1 complex en het zwitterion in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteverliezen met HPLC te bepalen. De sterkteverliezen zijn in onderstaande tabel B vermeld. De vermelding van een bereik duidt op de uiterste waarden in meerdere proeven.

15 TABEL B Stabiliteit (droog) % verlies 2o -

Temperatuur Tijd Zwitterion Zwitterion:NaCI 1:1 complex 4°C 1 maand 0-1% 6 maanden niets 25 25°C 1 maand 1-5% 5 weken 3,0 18 weken 6-10% 37°C 1 maand 9-12,9 5 weken 6,0 30 12 weken 12,6 4 maanden 9-18,0 45°C 1 week 34,1 5,6 2 weken 8,3 4 weken 71 10,7 35 56°C 1 week 49,6 12 2 weken 16 4 weken 20 70°C 1 dag 34,4 12,7-23,0 2 dagen 46,2 21,7 40 3 dagen 55,2 34,0 100°C 1 dag 100 92

De stabiliteit in waterige oplossing werd voor het zwitterion:NaCI 1:1 complex bepaald door reconstructie in 45 verscheidene concentraties en bewaren bij 25°C gedurende de vermelde tijdsperiode. De reconstitutie tot 250 mg/ml (nominaal) werd uitgevoerd met steriel water voor injectie USP. Een verdere verdunning werd uitgevoerd met 0,9% waterige NaCI. De gegevens staan in onderstaande tabel C waarin een bereik duidt op de uiterste waarden in meerdere proeven.

50 TABEL C

Stabiliteit in waterige oplossing

Concentratie (mg/ml) Tijd (uren) % resterend pH

55 250 0 5,04-5,22 3 100-102 5,03-5,24 193266 6 TABEL C (vervolg)

Stabiliteit in waterige oplossing

Concentratie (mg/ml) Tijd (uren) % resterend pH

5 - 6 100-101 5,03-5,24 24 92,7-96,0 5,14-5,39 50 0 5,0-5,17 3 99,4 5,07-5,31 10 6 97-99,4 5,06-5,31 24 93,2-94,7 5,30-5,60 10 0 4,94-5,12 3 99,5-100,1 5,05-5,34 6 99,3-99,4 5,11-5,47 15 24 95,2-97,0 5,44-5,78 2.5 0 5,00-5,19 3 100,0 5,28-5,66 6 99,6-100,0 5,47-5,92 24 96,2-96,8 5,87-6,18 20 -

De stabiliteitsgegevens tonen een bevredigende stabiliteit in waterige oplossing gedurende ten minste 24 uur bij 25°C (kamertemperatuur).

25 Voorbeeld II

Synthese en testen van een samenstelling uit zwitterion en calciumchloride 4.6 g zwitterion werd opgelost in 14 ml water voor injectie dat 950 mg CaCI2 bevatte (1 mol equivalent). De verkregen oplossing werd door een 0,22 pm steriel filter gevoerd.

Het filtraat werd onder aseptische condities onder snel roeren in een testperiode van 5 minuten 30 toegevoegd aan 400 ml absolute ethanol. Een amorf precipitaat vormde zich. Het mengsel werd gedurende 0,5 uur gesuspendeerd.

De vaste stoffen werden door vacuüinfiltratie afgescheiden en gewassen met 40 ml ethanol dat aan het filtraat werd toegevoegd (dat hierin als filtraat A wordt aangeduid).

De met ethanol bevochtigde vaste stoffen werden in 0,5 uur in 100 ml absolute ethanol gesuspendeerd. 35 De verkregen amorfe vaste stoffen werden door vacuümfiltratie afgescheiden, gewassen met 20 ml ethanol, 50 ml ether en vervolgens onder hoogvacuüm gedurende vier uur bij 50°C gedroogd, waarbij 2,2 g product werd verkregen dat zwitterion en CaCI2 bevatte in een molverhouding van ongeveer 2:1.

Analyse: berekend voor C19H24N6O5S2(CI2Ca)05: %C, 42,56; %H, 4,51; %N, 15,68; %S, 11,96; %CI, 6,6; %Ca als as, 3,73; 40 gevonden: %C, 38,4; %H, 4,85; %N, 13,76; %S, 8,82; %CI, 5,44; %Ca als as, 3,59; %H20 (KF), 7,79, gevonden (op droge basis): %C, 41,65; %N, 14,92; %S, 9,57; %CI, 5,9; %Ca als as, 3,89.

Het bovenvermelde filtraat A werd onder verminderde druk bij 35°C tot 30 ml geconcentreerd. Een zeer dicht kubusachtig microdeeltje zonder dubbele breking werd verkregen.

De dichte vaste stoffen werden door vacuümfiltratie afgescheiden, gewassen met 15 ml absolute ethanol 45 en daarna met 20 ml ether en op de bovenstaand beschreven wijze gedroogd, waarbij 2,0 g amorf vast product werd verkregen met een zwitterion:CaCI2 molverhouding van ongeveer 1,5:1 (sesqui-zwitterion).

Analyse voor (C19H24N605S2)1i5 CaCI2: %C, 41,1; %H, 4,5; %N, 14,7; %S, 10,8; %CI, 8,33; %Ca als as, 4,8.

Gevonden: %C, 37,35; %H, 5,17; %N, 12,37; %S, 10,24; en %CI, 7,84; %Ca als as, 4,47; %H20 (KF), 50 3,24; % ethanol, 0,5 mol.

Gevonden (H20- en ethanol-vrije basis): %C, 40,01; %H, 4,88; %N, 13,3; %S, 10,57; en %CI, 8,3; %Ca als as, 4,7.

De in ethanol oplosbare en onoplosbare complexen vertoonden geen significante verschillen in HPLC en UV-spectra indien vergeleken met het zwitterion.

55 Voor de bepaling van de breedspectrumactiviteit van het hierin beschreven product, werden de minimale inhibitore concentraties (MIC’s) van het hier beschreven 1,5:1 molverhouding zwitterion:CaCI2 product en van het zwitterion bepaald met de tweevoudige seriegewijze agarverdunningsmethode in Mueller-Hinton 7 193266 agar. De gegevens staan in onderstaande tabel D, waarin de kolom Bristol A. nummer een bepaalde micro-organismestam aanduidt.

TABEL D

5 MIC waarden (mg/ml)

Bristol A Zwitterion Zwitterion:CaCI21,5:1 nummer Molverhouding Product 10 1. S. pneumoniae A9585 0,06 0,016 2. S. pyogenes A9604 0,016 0,016 3. S. faecalis A20688 16 16 4. S. aureus A9537 1 1 5. S. aureus/+50% serum A9537S 0,5 0,5 15 6. S aureus/Pen.-Res. A9606 1 1 7. S. aureus/Meth.-Res. 28°C A20699 125 63 8. E. coli A15119 0,016 0,016 9. E. coli A20341-1 0,03 0,016 10. K. pneumoniae A9664 0,03 0,03 20 11. K. pneumoniae A20468 1 1 12. E. cloacae A9659 0,016 0,016 13. E. cloacae A9656 0,13 0,25 14. P. mirabilis A9900 0,008 0,008 15. P. vulgaris A21559 0,03 0,03 25 16. M. morganii A15153 0,008 0,008 17. P. rettgeri A22424 0,03 0,03 18. S. marcescens A20019 0,03 0,016 19. Ps. aeruginosa A9843a 0,5 0,5 20. Ps. aeruginosa/Carb. Res. A21628 2 2 30 -—

De stabiiiteiten bij verhoogde temperatuur werden bepaald door het zwitterion:CaCI2 met een molverhouding van 1,5:1 en het zwitterion in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteverliezen met HPLC te bepalen. De sterkteverliezen worden getoond in tabel E. In tabel E duidt een bereikt op de uiterste 35 waarden in meerdere proeven.

TABEL E Stabiliteit (droog) 40 % verlies

Temperatuur Tijd Zwitterion Zwitterion:CaCI21,5:1

Molverhouding Product 45 37°C 2 maanden 3,5 45°C 1 week 34,1 0,4-0 2 weken 3,2-5,7 4 weken 71 56°C 1 week 49,6 0-5,3 50 2 weken 1,7-6,6 4 weken 13,7 70°C 1 dag 34,4 2 dagen 46,2 3 dagen 55,2 2,2-6,5 55 100°C 1 dag 100 20-30,0 193266 8

Voorbeeld III

Testen van andere samenstellingen

Stabiliteiten bij verhoogde temperatuur werden bepaald door zwitterion: zoutproducten met een molverhouding 1:1 en het zwitterion in de vorm van een droog poeder te bewaren en de sterkteveriiezen 5 met HPLC te bepalen. De sterkteveriiezen worden getoond in de onderstaande tabellen F en G. In de tabellen F en G duidt de vermelding van een bereik op de uiterste waarden in meerdere proeven.

TABEL F Stabiliteit (droog) 10 - % verlies

toegevoegd zout 100°C 70°C 56°C

1 dag 1 dag 2 dagen 3 dagen 1 week 2 weken 4 weken 15 -

Geen (Zwitterion 100 34,4 46,2 55,2 49,6 alleen)

NaBr 17,1 20,0 20,2

Nal 14,5 14,0 17,1 20 NaHS04 41,5 CH3S03Na 15,5 22,3 30,8 46,6 NH2S03Na 18,6 41,1 NH4CI 63,0 42,4 50,3

LiCI 3,2 8,6 0-9,0 2,5-10,0 17,0 25 Lil 3,1 3,1

MgCI2 30-45,0 17-25,0 12,2

ZnCI2 14,8 18,8 20

TABEL G

30 Stabiliteit (droog) % verlies

toegevoegd zout 45°C 37°C

35 _ 1 week 2 weken 4 weken 1 maand 2 maanden 3 maanden 4 maanden

Geen (Zwitterion 34,1 71 alleen) 40 NaBr 8,9 10,7

Nal 7,9 8,4

NaHS04 19,9 CH3S03Na 12,6 21,6 28,9 NH2S03Na 18,1 25,5 45 NH4CI 9,0 196 33,5 19,6

LiCI 0 0-4,5 6,4 1,0 4,0 3,5

Lil 0

MgCI2 8,3

ZnCI2 10,3 50 _______

Producten die de volgende zouten op basis van een 1:1 molverhouding bevatten, gaven procentuele verliezen van meer dan 15-20% indien ze gedurende 2-4 weken bij 45°C werden bewaard of 1-2 weken bij 56°C werden bewaard, en werden daarom niet binnen de omvang van de uitvinding opgenomen: NaF, 55 NaH2P04, NaHCQ3, NaP02H2, H0CH2CH2S03Na, KCI, LiF en FeCI3.

9 193266

Voorbeeld IV

Samenstellingen waarin zoutmengsels worden gebruikt

Verscheidene gelyofiliseerde samenstellingen, gevormd uit zwitterion alsmede mengsels van NaCI en CaCI2, werden bereid en hun temperatuurstabiliteiten werden bepaald zoals in de voorbeelden l-lll.

5 Onderstaande tabel H toont de sterkte die overblijft volgens HPLC tests van dergelijke samenstellingen, vergeleken met de samenstellingen die uit enkele zouten zijn gevormd.

TABEL H Stabiliteit (droog) 70 -

Formuleringen

Percentage sterkte dat overblijft

Tijd/temperatuur Zwitterion pH 5,1 Zwitterion/NaC11:1 pH 4,9 15 - 1 d-70°C 66 85,2 3d-70°C 54 76,6 1 W-56°C 45-58 81,9 20 2w-56°C 39-43 73,9 4w-56°C - 67,7 8w-56°C - 55,9 1 w-45°C 70 91,7 25 2w-45°C 49 87,5 4w-45°C 39 84,2 8w-45°C - 76,2 13w-45°C - 67,4 30 4w—37°C 69 90,4 8w—37°C - 85,4 13w-37°C - 80,9 13w-25°C 93,7 35-------------- w = weken d = dagen

vervolg tabel H

40 -—-----------—

Tijd/temperatuur Zwitterion:CaCI2 1:1 pH 4,9 Zwitterion:CaCI2 1:0,5 pH 4,6 1 d-70°C 94,2 88,7 3d-70°C 88,8 80,8 45 1 W-56°C 92,3 86,6 2w-56°C 86,9 78,4 4w-56°C 84,4 71,5 8w-56°C 79,0 62,5 50 1 w-45°C 96,2 94,3 2w-45°C 93,0 89,2 4w-45°C 92,9 85,8 8w-45°C 88,9 80,4 55 13w-45°C 86,3 75,3 193266 10 vervolg tabel H (vervolg)

Tijd/temperatuur Zwitterion:CaCI2 1:1 pH 4,9 Zwitterion:CaCI2 1:0,5 pH 4,6 5 4w—37°C 95,2 92,0 8w-37°C 93,5 87,3 13w-37°C 91,1 85,8 13w-25°C 96,4 95,6 10 .---

vervolg tabel H

Tijd/temperatuur Zwitterion:CaCI2:NaCI 1:0,5:0,5 pH Zwitterion:NaCI:CaCI2 1:0,8:0,2 pH 4,9 5,1 15 _ 1 d-70°C 94,7 91,4 3d-70°C 88,8 82,8 1 w-56°C 93,3 89,0 20 2w-56°C 88,5 84,0 4w-56°C 82,6 76,3 8w-56°C 74,2 67,2 1 w-45°C 98,1 95,8 25 2w-45°C 95,4 93,3 4w-45°C 91,3 88,9 8w-45°C 88,6 83,3 13w-45°C 85,3 79,3 30 4w-37°C 95,6 93,8 8w-37°C 92,6 90,6 13w-37°C 91,1 87,3 13w-25°C 97,4 96,7 35 _

vervolg tabel H

Tijd/temperatuur Zwitterion:NaCI:CaCI2 1:0,8:0,2 pH Zwitterion:NaCI:CaCI2 1:1:0,2 pH 4,6 40 _^_ 1 d-70°C 91,0 91,6 3d-70°C 82,4 83,0 45 1 w-56°C 88,7 89,8 2w-56°C 83,2 84,9 4w-56°C 77,4 78,4 8w-56°C 68,0 69,7 5Q 1 W-45°C 95,4 93,7 2w-45°C 92,2 93,5 4w-45°C 88,9 89,8 8w-45°C 83,7 83,4 13w-45°C 81,2 80,3 4w-37°C 94,4 94,5 55

Claims (2)

11 193266 vervolg tabel H (vervolg) Tijd/temperatuur Zwitterion:NaCI:CaCI2 1:0,8:0,2 pH Zwitterion:NaCI:CaCI2 1:1:0,2 pH 4,6 4,9 5 -—--— 8w-37°C 90,9 90,6 13w-37°C 90,3 90,1 13w-25°C 97,9 97,2 10 -

15 Temperatuurstabiele breedspectrum antibioticumsamenstelling die bij verdunning tot een injecteerbare concentratie een pH van 3,5 tot 7 geeft en een 7-[a-(2-aminothiazool-4-yl)-a-(Z)-methoxyiminoacetamido]-3-[(1 -methyl-1 -pyrrolidinio)-methyl]-3-cephem-4-carboxylaat zwitteriongedeelte heeft, met het kenmerk, dat de samenstelling in essentie bestaat uit: a. een amorfe vaste stof gevormd door lyofilisatie of co-solvensprecipitatie van een waterige oplossing 20 van (i) het zwitterion en (ii) een zout waarin het kationogene gedeelte natrium, lithium, calcium en/of magnesium en het anionogene gedeelte chloride, bromide en/of jodide is, waarbij de molaire verhouding van het zwitterion tot het zout in de oplossing in het traject 0,5-2 ligt, of 25 b. een solvaat van de amorfe vaste stof, en dat er bij de verdunning geen buffers of basen zijn gebruikt. Hierbij 1 blad tekening