NO20130246L - RNA interferens medierende små RNA molekyler - Google Patents

RNA interferens medierende små RNA molekyler

Info

Publication number
NO20130246L
NO20130246L NO20130246A NO20130246A NO20130246L NO 20130246 L NO20130246 L NO 20130246L NO 20130246 A NO20130246 A NO 20130246A NO 20130246 A NO20130246 A NO 20130246A NO 20130246 L NO20130246 L NO 20130246L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
rna
target
dsrna
sirna
gene
Prior art date
Application number
NO20130246A
Other languages
English (en)
Other versions
NO335426B1 (no
Inventor
Winfried Lendeckel
Matthias Wilm
Thomas Tuschl
Sayda Mahgoub Elbashir
Reinhard Luehrmann
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Europ Lab Molekularbiolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40529293&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20130246(L) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20130246L publication Critical patent/NO20130246L/no
Application filed by Max Planck Gesellschaft, Europ Lab Molekularbiolog filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of NO335426B1 publication Critical patent/NO335426B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/30—Production chemically synthesised

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Beskrivelse
Foreliggende oppfinnelse angår sekvens- og strukturelle egenskaper til dobbelttrådede (ds) RNA-molekyler som er nødvendige for å mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer slik som RNA-interferens og/eller DNA-metylering.
Betegnelsen "RNA-interferens" (RNAi) oppstod etter oppdagelsen av at injeksjon av dsRNA inn i nematoden C. elegans fører til spesifikk inaktivering av gener som har høy sekvenshomologi med det leverte dsRNA'et (Fire et al., 1998). RNAi ble deretter også observert i insekter, frosker (Oelgeschlager et al., 2000) og andre dyr inkludert mus (Svoboda et al., 2000; Wianny og Zernicka-Goetz, 2000) og forekommer også trolig i menneske. RNAi er nært koblet til den posttranskripsjonelle geninaktiverings (PTGS) -mekanismen for kosuppresjon i planter og undertrykking i sopp (Catalanotto et al., 2000; Cogoni og Macino, 1999; Dalmay et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Mourrain et al., 2000; Smardon et al., 2000) og noen komponenter i RNAi-maskineriet er også nødvendige for posttranskripsjonell inaktivering ved kosuppresjon (Catalanotto et al., 2000; Dernburg et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000). Temaet har også blitt beskrevet nylig (Bass, 2000; Bosherog Labouesse, 2000; Fire, 1999; Plasterk og Ketting, 2000; Sharp, 1999; Sijen og Kooter, 2000), se også hele nummeret av Plant Molecular Biology, vol. 43, utgave 2/3, (2000).
I planter kan innførte transgener, i tillegg til PTGS, også føre til transkripsjonen geninaktivering via RNA-styrt DNA-metylering av cytosiner (se referanser i Wassenegger, 2000). Genomiske mål som er så korte som 30 bp metyleres i planter på en RNA-styrt måte (Pelissier, 2000). DNA-metylering foreligger også i pattedyr.
Den naturlige funksjonen av RNAi og kosuppresjon ser ut til å være beskyttelse av genomet mot invasjon av mobile genetiske elementer slik som retrotransposoner og virus som produserer avvikende RNA eller dsRNA i vertscellen når de blir aktive (Jensen et al., 1999; Ketting et al., 1999; Ratcliff et al., 1999; Tabara et al., 1999). Spesifikk mRNA-nedbrytning hindrer transposon og virusreplikasjon, selv om noen virus kan overvinne eller hindre denne prosessen ved ekspresjon av proteiner som undertrykker PTGS (Lucy et al., 2000; Voinnet et al., 2000).
dsRNA utløser den spesifikke nedbrytningen av homologe RNA'er bare i regionen som har likhet med dsRNA'et (Zamore et al., 2000). dsRNA'et prosesseres til 21-23 nt RNA-fragmenter og mål-RNA kuttesetene er atskilt 21-23 nt fra hverandre. Det har derfor blitt indikert at 21-23 nt fragmentene er guide-RNA'ene for målgjenkjennelse (Zamore et al., 2000). Disse korte RNA'ene ble også detektert i ekstrakter fremstilt fra D. me/anogasfer Schneider 2-celler som ble transfektert med dsRNA før cellelysering (Hammond et al., 2000), fraksjonene som hadde sekvensspesifikk nukleaseaktivitet inneholdt imidlertid også en stor fraksjon av residualt dsRNA. Rollen 21-23 nt fragmentene har i å guide mRNA-kutting er videre støttet av observasjonen av at 21-23 nt fragmenter isolert fra prosessert dsRNA i en viss grad kan mediere spesifikk mRNA-nedbrytning (Zamore et al., 2000). RNA-molekyler med lignende størrelse akkumulerer også i plantevev som har PTGS (Hamilton og Baulcombe, 1999).
Her anvender vi det etablerte Drosophila in wfro-systemet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000) for å videre undersøke mekanismen til RNAi. Vi demonstrerer at korte 21 og 22 nt RNA'er, når de er baseparet med 3' overhengende ender, virker som guide-RNA'ene for sekvensspesifikk mRNA-nedbrytning. Korte 30 bp dsRNA'er kan ikke mediere RNAi i dette systemet, fordi de ikke lenger prosesseres til 21 og 22 nt RNA'er. Videre definerte vi mål-RNA kuttesetene i forhold til de 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'ene (siRNA'er) og gir bevis for at retningen av dsRNA-prosessering avgjør hvorvidt et sens eller et antisens mål-RNA kan bli kuttet av det dannede siRNP-endonukleasekomplekset. Videre kan siRNA'ene også være viktige verktøy for transkripsjonen modulering, f.eks. inaktivering, av mammalske gener ved å guide DNA-metylering.
Videre eksperimenter i humane in wVo-cellekultursystemer (HeLa-celler) viser at dobbelttrådede RNA-molekyler med en lengde på fortrinnsvis fra 19-25 nukleotider har RNAi-aktivitet. Derfor, til forskjell fra resultatene med Drosophila, er også 24 og 25 nt lange dobbelttrådede RNA-molekyler effektive for RNAi.
Målet med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye agenser som kan mediere målspesifikk RNA-interferens eller andre målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, slik som DNA-metylering, der nevnte agenser har en forbedret effektivitet og sikkerhet sammenlignet med tidligere agenser på området.
Løsningen på dette problemet er gitt med et isolert dobbelttrådet RNA-molekyl, der hver RNA-tråd har en lengde fra 19-25, spesielt fra 19-23 nukleotider, der nevnte RNA-molekyl kan mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering. Fortrinnsvis har minst én tråd et 3' overheng fra 1-5 nukleotider, mer foretrukket fra 1-3 nukleotider og mest foretrukket 2 nukleotider. Den andre tråden kan være rettendet eller har opp til 6 nukleotider 3' overheng. Hvis begge trådene til dsRNA'et er eksakt 21 eller 22 nt, er det dessuten mulig å observere noe RNA-interferens når begge endene er rette (0 nt overheng). RNA-molekylet er fortrinnsvis et syntetisk RNA-molekyl som er vesentlig fri for kontaminanter forekommende i celleekstrakter, f.eks. fra DrosopMa-embryoer. Videre er RNA-molekylet fortrinnsvis vesentlig fri for enhver ikke-mål-spesifikk kontaminant, spesielt ikke-mål-spesifikke RNA-molekyler f.eks. fra kontaminanter forekommende i celleekstrakter.
Videre angår foreliggende oppfinnelse anvendelse av isolerte dobbelttrådede RNA-molekyler, der hver RNA-tråd har en lengde fra 19-25 nukleotider, for mediering av målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNAi, i mammalske celler, spesielt i humane celler.
Overraskende ble det funnet at syntetisk korte, dobbelttrådede RNA-molekyler spesielt med overhengende 3' ender er sekvensspesifikke mediatorer av RNAi og medierer effektiv mål-RNA kutting, der kuttesetet er lokalisert nær senteret til regionen dekket av det guidende, korte RNA'et.
Fortrinnsvis har hver tråd av RNA-molekylet en lengde fra 20-22 nukleotider (eller 20-25 nukleotider i mammalske celler), der lengden av hver tråd kan være lik eller forskjellig. Fortrinnsvis er lengden av 3' overhenget fra 1-3 nukleotider, der lengden av overhenget kan være lik eller forskjellig for hver tråd. RNA-trådene har fortrinnsvis 3' hydroksylgrupper. 5-terminalen omfatter fortrinnsvis en fosfat-, difosfat-, trifosfat- eller hydroksylgruppe. De mest effektive dsRNA'ene er sammensatt av to 21 nt tråder som er paret slik at 1-3, spesielt 2 nt 3' overheng er til stede på begge endene av dsRNA'et.
Mål-RNA kuttereaksjonen guidet av siRNAer er svært sekvensspesifikk. Ikke alle posisjonene til et siRNA bidrar imidlertid like mye til målgjenkjennelse. Feilmatch i senteret av siRNA-dupleksen er mest kritisk og praktisk talt opphever mål-RNA kutting. Derimot bidrar ikke 3' nukleotidet til siRNA-tråden (f.eks. posisjon 21) som er komplementært til det enkelttrådede mål-RNA'et til spesifisitet av målgjenkjennelsen. Videre er ikke sekvensen til det uparede 2-nt 3' overhenget til siRNA-tråden med den samme polariteten som mål-RNA'et kritisk for mål-RNA kutting, ettersom bare antisens siRNA-tråden guider målgjenkjennelse. Fra de enkelttrådede overhengende nukleotidene trenger derfor bare den nest siste posisjonen i antisens-siRNA'et (f.eks. posisjon 20) å matche det bundne sens mål-mRNA'et.
Overraskende har de dobbelttrådede RNA-molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse en høy in wVo-stabilitet i serum eller i vekstmedium for cellekulturer. For å videre øke stabiliteten kan 3' overhengene bli stabilisert mot nedbrytning, f.eks. kan de bli valgt slik at de består av purinnukleotider, spesielt adenosin- eller guanosinnukleotider. Alternativt tolereres substitusjon av pyrimidinnukleotider med modifiserte analoger, f.eks. substitusjon av uridin 2 nt 3' overheng med 2'-deoksytymidin, og affiserer ikke effektiviteten til RNA-interferens. Fraværet av en 2' hydroksyl øker nukleaseresistensen til overhenget i vevsdyrkningsmedium signifikant.
I en spesielt foretrukket utførelsesform ifølge foreliggende oppfinnelse kan RNA-molekylet inneholde minst én modifisert nukleotidanalog. Nukleotidanalogene kan bli plassert i posisjoner hvor den målspesifikke aktiviteten, f.eks. den RNAi-medierende aktiviteten, ikke blir vesentlig påvirket, f.eks. i en region på 5-enden og/eller 3' enden av det dobbelttrådede RNA-molekylet. Spesielt kan overhengene bli stabilisert ved å inkorporere modifiserte nukleotidanaloger.
Foretrukne nukleotidanaloger velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider. Det bør imidlertid bli registrert at også nukleobasemodifiserte ribonukleotider, dvs. ribonukleotider, inneholdende en ikke-naturlig forekommende nukleobase i stedet for en naturlig forekommende nukleobase slik som uridiner eller cytidiner modifisert på 5-posisjonen, f.eks. 5-(2-amino)propyluridin, 5-bromuridin; adenosiner og guanosiner modifisert på 8-posisjonen, f.eks. 8-bromguanosin; deazanukleotider, f.eks. 7-deaza-adenosin; O- og N-alkylerte nukleotider, f.eks. N6-metyladenosin, er egnet. I foretrukne sukkermodifiserte ribonukleotider byttes 2' OH-gruppen med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR, NH2, NHR, NR2eller CN, der R er CrC6 alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller I. I foretrukne ryggradmodifiserte ribonukleotider byttes fosfoestergruppen koblet til tilgrensende ribonukleotider ut med en modifisert gruppe, f.eks. av fosfotioatgruppe. Det bør bli registrert at modifiseringene ovenfor kan bli kombinert.
Sekvensen til det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse må ha en tilstrekkelig likhet med et nukleinsyremålmolekyl for å mediere målspesifikk RNAi og/eller DNA-metylering. Fortrinnsvis har sekvensen en likhet på minst 50 %, spesielt på minst 70 %, med det ønskede målmolekylet i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Mer foretrukket er likheten minst 85 % og mest foretrukket 100 % i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Likheten av et dobbelttrådet RNA-molekyl med et forhåndsbestemt nukleinsyremålmolekyl, f.eks. et mRNA-målmolekyl, kan bli bestemt som følger:
I = _n_x 100
L
der I er likheten i prosent, n er antallet identiske nukleotider i den dobbelttrådede delen av dsRNA'et og målet, og L er lengden av sekvensoverlappingen mellom den dobbelttrådede delen av dsRNA'et og målet.
Alternativt kan likheten av det dobbelttrådede RNA-molekylet i forhold til målsekvensen også bli definert inkludert 3' overhenget, spesielt et overheng med en lengde fra 1-3 nukleotider. I dette tilfellet er sekvenslikheten fortrinnsvis minst 50 %, mer foretrukket minst 70 % og mest foretrukket minst 85 % i forhold til målsekvensen. For eksempel kan nukleotidene fra 3' overhenget og opp til 2 nukleotider fra 5' og/eller 3' terminalen av dobbelttråden bli modifisert uten signifikant tap av aktivitet.
Det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli fremstilt med en fremgangsmåte som omfatter trinnene: (a) syntetisere to RNA-tråder som hver har en lengde fra 19-25, f.eks. fra 19-23 nukleotider, der nevnte RNA-tråder kan danne et dobbelttrådet RNA-molekyl, der fortrinnsvis minst én tråd har et 3' overheng fra 1-5 nukleotider, (b) kombinere de syntetiserte RNA-trådene under betingelser der et dobbelttrådet RNA-molekyl dannes som kan mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering.
Fremgangsmåter for syntetisering av RNA-molekyler er kjent på området. I denne konteksten henvises det spesielt til kjemiske syntesefremgangsmåter som er beskrevet i Verma og Eckstein (1998).
De enkelttrådede RNA'ene kan også bli fremstilt med enzymatisk transkripsjon fra syntetiske DNA-templater eller fra DNA-plasmider isolert fra rekombinante bakterier. Typisk anvendes fag RNA-polymeraser slik som T7, T3 eller SP6 RNA-polymerase (Milligan og Uhlenbeck (1989)).
Et videre aspekt ved foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for mediering av målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering, i en celle eller en organisme omfattende trinnene: (a) la cellen eller organismen komme i kontakt med det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse under betingelser der målspesifikke nukleinsyremodifiseringer kan forekomme, og (b) mediere en målspesifikk nukleinsyremodifisering effektuert av det dobbelttrådede RNA'et mot en målnukleinsyre som har en sekvensdel som korresponderer vesentlig til det dobbelttrådede RNA'et.
Fortrinnsvis omfatter kontakttrinnet (a) innføring av det dobbelttrådede RNA-molekylet i en målcelle, f.eks. en isolert målcelle, f.eks. i cellekultur, en encellet mikroorganisme eller en målcelle eller et flertall av målceller i en flercellet organisme. Mer foretrukket omfatter innføringstrinnet en bærermediert levering, f.eks. med liposomale bærere eller med injeksjon.
Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for å bestemme funksjonen til et gen i en celle eller en organisme, eller til og med for modulering av funksjonen til et gen i en celle eller en organisme, som kan mediere RNA-interferens. Cellen er fortrinnsvis en eukaryot celle eller en cellelinje, f.eks. en plantecelle eller en dyrecelle, slik som en mammalsk celle, f.eks. en embryonal celle, en pluripotent stamcelle, en tumorcelle, f.eks. en teratokarsinomcelle, eller en virusinfisert celle. Organismen er fortrinnsvis en eukaryot organisme, f.eks. en plante eller et dyr, slik som et pattedyr, spesielt et menneske.
Målgenet som RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse er rettet mot kan være assosiert med en patologisk tilstand. For eksempel kan genet være et patogenassosiert gen, f.eks. et viralt gen, et tumorassosiert gen eller et gen assosiert med autoimmun sykdom. Målgenet kan også være et heterologt gen uttrykt i en rekombinant celle eller en genetisk modifisert organisme. Ved å bestemme eller modulere, spesielt inhibere, funksjonen til et slikt gen, kan verdifull informasjon og terapeutiske fordeler i landbruket eller i medisin eller veterinærmedisin bli fremskaffet.
dsRNA'et administreres vanligvis som en farmasøytisk sammensetning. Administreringen kan bli utført med kjente fremgangsmåter, der en nukleinsyre innføres i en ønsket målcelle in vitro eller in vivo. Mye anvendte genoverføringsteknikker omfatter kalsiumfosfat, DEAE-dekstran, elektroporering og mikroinjeksjon og virale metoder (Graham, F. L. og van der Eb, A. J. (1973) Virol. 52, 456; McCutchan, J. H. og Pagano, J. S. (1968), J. Nati. Cancer Inst. 41, 351; Chu, G. et al. (1987), Nucl. Acids Res. 15, 1311; Fraley, R. et al. (1980), J. Biol. Chem. 255,10431; Capecchi, M. R. (1980), Cell 22, 479). Et nytt tillegg til dette arsenalet av teknikker for innføring av DNA i celler er anvendelse av kationiske liposomer (Felgner, P. L. et al. (1987), Proe. Nati. Acad. Sei USA 84,
7413). Kommersielt tilgjengelige kationiske lipidformuleringer er f.eks. Tfx 50 (Promega) eller Lipofectamin2000 (Life Technologies).
Derfor angår oppfinnelsen også en farmasøytisk sammensetning inneholdende minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som beskrevet ovenfor som et aktivt stoff og en farmasøytisk bærer. Sammensetningen kan bli anvendt for diagnostiske og terapeutiske applikasjoner i human medisin eller i veterinærmedisin.
For diagnostiske eller terapeutiske applikasjoner kan sammensetningen være i form av en løsning, f.eks. en injiserbar løsning, en krem, salve, tablett, suspensjon eller lignende. Sammensetningen kan bli administrert på enhver egnet måte, f.eks. med injeksjon, med oral-, topisk-, nasal- og rektal applikasjon osv. Bæreren kan være enhver egnet farmasøytisk bærer. Fortrinnsvis anvendes en bærer som kan øke RNA-molekylenes evne til å gå inn i målcellene. Egnede eksempler på slike bærere er liposomer, spesielt kationiske liposomer. En videre foretrukket administreringsmåte er injeksjon.
En videre foretrukket applikasjon av RNAi-fremgangsmåten er en funksjonell analyse av eukaryote celler eller eukaryote ikke-humane organismer, fortrinnsvis mammalske celler eller organismer og mest foretrukket humane celler, f.eks. cellelinjer slik som HeLa eller 293, eller gnagere, f.eks. rotter og mus. Ved transfeksjon med egnede dobbelttrådede RNA-molekyler som er homologe med et forutbestemt målgen eller DNA-molekyler som koder for et egnet dobbelttrådet RNA-molekyl, kan en spesifikk knockout-fenotype bli oppnådd i en målcelle, f.eks.
i cellekultur eller i en målorganisme. Overraskende ble det funnet at nærvær av korte, dobbelttrådede RNA-molekyler ikke resulterer i en interferonrespons fra vertscellen eller vertsorganismen.
Derfor er ytterligere et aspekt ved foreliggende oppfinnelse en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som har en målgenspesifikk knockout-fenotype omfattende en minst delvis defekt ekspresjon av minst ett endogent målgen, der nevnte celle eller organisme er transfektert med minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen eller med et DNA som koder for minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen. Det bør bli registrert at foreliggende oppfinnelse tillater en målspesifikk knockout av flere ulike endogene gener pga. spesifisiteten til RNAi.
Genspesifikke knockout-fenotyper av celler eller ikke-humane organismer, spesielt av humane celler eller ikke-humane pattedyr, kan bli anvendt i analytiske prosedyrer, f.eks. i den funksjonelle og/eller fenotypiske analysen av komplekse fysiologiske prosesser, slik som analyse av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. For eksempel kan man fremstille knockout-fenotypene av humane gener i dyrkede celler som er antatt å være regulatorer av alternative spleisingsprosesser. Blant disse genene er spesielt medlemmene av SR-spleisingsfaktorfamilien, f.eks. ASF/SF2, SC35, SRp20, SRp40 eller SRp55. Videre kan effekten av SR-proteiner på mRNA-profilene av forutbestemte alternativt spleisede gener slik som CD44 bli analysert. Fortrinnsvis utføres analysen med høykapasitetsfremgangsmåter ved å anvende oligonukleotidbaserte brikker.
Ved anvendelse av RNAi-baserte knockout-teknologier, kan ekspresjonen av et endogent målgen bli inhibert i en målcelle eller en målorganisme. Det endogene genet kan bli komplementert med en eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, f.eks. et gen eller et cDNA, som eventuelt kan bli koblet til ytterligere en nukleinsyresekvens som koder for et detekterbart peptid eller polypeptid, f.eks. en affinitetsmarkør, spesielt en multippel affinitetsmarkør. Varianter eller muterte former av målgenet er forskjellige fra det endogene målgenet ved at de koder for et genprodukt som er forskjellig fra det endogene genproduktet på aminosyrenivået med substitusjoner, insersjoner og/eller delesjoner av enkle eller multiple aminosyrer. Variantene eller de muterte formene kan ha den samme biologiske aktiviteten som det endogene målgenet. På den annen side kan varianten eller det muterte målgenet også ha en biologisk aktivitet som er forskjellig fra den biologiske aktiviteten til det endogene målgenet, f.eks. en delvis deletert aktivitet, en fullstendig deletert aktivitet, en økt aktivitet osv.
Komplementasjonen kan bli utført med koekspresjon av polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. et fusjonsprotein omfattende målproteinet og affinitetsmarkøren og det dobbelttrådede RNA-molekylet for delesjon av det endogene genet i målcellen. Denne koekspresjonen kan bli utført ved å anvende en egnet ekspresjonsvektor som uttrykker både polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. det markørmodifiserte målproteinet og det dobbelttrådede RNA-molekylet eller alternativt ved å anvende en kombinasjon av ekspresjonsvektorer. Proteiner og proteinkomplekser som syntetiseres de novo i målcellen vil inneholde det eksogene genproduktet, f.eks. det modifiserte fusjonsproteinet. For å unngå suppresjon av den eksogene genproduktekspresjonen med RNAi-dupleksmolekylet, kan nukleotidsekvensen som koder for den eksogene nukleinsyren bli endret på DNA-nivået (med eller uten å forårsake mutasjoner på aminosyrenivået) i delen av sekvensen som er homolog med det dobbelttrådede RNA-molekylet. Alternativt kan det endogene målgenet bli komplementert med tilsvarende nukleotidsekvenser fra andre arter, f.eks. fra mus.
Foretrukne applikasjoner for cellen eller organismen ifølge foreliggende oppfinnelse er analysen av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. I en spesielt foretrukket utførelsesform utføres en analyse av en variant eller mutant form av ett eller flere målproteiner, der nevnte variant eller mutante former reinnføres i cellen eller organismen med en eksogen målnukleinsyre som beskrevet ovenfor. Kombinasjonen av delesjon av et endogent gen og opprettholdelse ("rescue") ved å anvende mutert mål, f.eks. delvis deletert eksogent mål, har fordeler sammenlignet med anvendelse av en knockout-celle. Videre er denne fremgangsmåten spesielt egnet for identifisering av funksjonelle domener til målproteinet. I ytterligere en foretrukket utførelsesform utføres en sammenligning f.eks. av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer og/eller fenotypiske karakteristika til minst to celler eller organismer. Disse organismene velges fra:
(i) en kontrollcelle eller kontrollorganisme uten målgeninhibisjon,
(ii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon og
(iii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon pluss
målgenkomplementasjon med en eksogen målnukleinsyre.
Fremgangsmåten og cellen ifølge foreliggende oppfinnelse er også egnet i en prosedyre for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser, f.eks. identifisering av nye farmakologiske agenser fra en samling av testsubstanser og/eller karakterisering av virkningsmekanismer og/eller bivirkninger av kjente farmakologiske agenser.
Derfor angår foreliggende oppfinnelse også et system for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser som virker på minst ett målprotein omfattende: (a) en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som kan uttrykke
minst ett endogent målgen som koder for nevnte målprotein,
(b) minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av
nevnte minst ene endogene målgen, og
(c) en testsubstans eller en samling av testsubstanser der farmakologiske egenskaper til nevnte testsubstans eller nevnte samling skal bli identifisert og/ellerkarakterisert.
Videre omfatter systemet beskrevet ovenfor fortrinnsvis:
(a) minst én eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, der nevnte eksogene målnukleinsyre er forskjellig fra det endogene målgenet på nukleinsyrenivået, slik at ekspresjon av den eksogene målnukleinsyren blir vesentlig mindre inhibert av det dobbelttrådede RNA-molekylet enn ekspresjon av det endogene målgenet.
Videre kan fremgangsmåten for RNA-knockoutkomplementasjon bli anvendt for å lette opprensing, f.eks. for affinitetsrensing av proteiner eller proteinkomplekser fra eukaryote celler, spesielt mammalske celler og mer spesielt humane celler. I denne utførelsesformen ifølge foreliggende oppfinnelse koder den eksogene målnukleinsyren fortrinnsvis for et målprotein som er koblet til en affinitetsmarkør.
Fremgangsmåten for å lette opprensingen kan bli anvendt for rensing av høymolekylære proteinkomplekser som fortrinnsvis har en masse på > 150 kD og mer foretrukket på > 500 kD og som eventuelt kan inneholde nukleinsyrer slik som RNA. Spesifikke eksempler er det heterotrimere proteinkomplekset bestående av 20 kD, 60 kD og 90 kD proteinene til U4/U6 snRNP-partikkelen, spleisefaktoren SF3b fra 17S U2 snRNP bestående av fem proteiner med molekylvekt på 14, 49, 120, 145 og 155 kD og 25S U4/U6/U5 tri-snRNP-partikkelen inneholdende U4, U5 og U6 snRNA-molekylene og ca. 30 proteiner med en molekylvekt på ca. 1,7 MD.
Denne fremgangsmåten er egnet for funksjonell proteomanalyse i mammalske celler, spesielt humane celler.
Videre er foreliggende oppfinnelse forklart i mer detalj i de følgende figurene og eksemplene.
Figurtekst
Figur 1: Dobbelttrådet RNA så kort som 38 bp kan mediere RNAi. (A) Grafisk presentasjon av dsRNA'er anvendt for å binde Pp-luc mRNA. Tre serier med rettendede dsRNAer som dekker et område på 29 til 504 bp ble fremstilt. Posisjonen til det første nukleotidet på senstråden til dsRNA'et er vist i forhold til startkodonet i Pp-luc mRNA (p1). (B) RNA-interferenstest (Tuschl et al., 1999). Forhold mellom mål Pp-luc og kontroll Rr-luc aktivitet ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (sort stolpe). dsRNA'er (5 nM) ble preinkubert i DrosophilaAysat i 15 min ved 25 °C før tilsetning av 7-metyl-guanosin-cap (cap er en beskyttende gruppe på 5' merket ende) Pp-luc og Rr-luc mRNA'er (~50 pM). Inkuberingen fortsatte i ytterligere en time og deretter analysert med dual luciferasetest (Promega). Resultatene er gjennomsnittet fra minst fire uavhengige eksperimenter ± standardavvik. Figur 2: Et 29 bp dsRNA blir ikke lenger prosessert til 21-23 nt fragmenter. Tidsforløp for 21-23 mer dannelse fra prosessering av internt<32>P-merkede dsRNA'er (5 nM) i DrosophilaAysatet. Lengden og kilden til dsRNAet er angitt. En RNA-størrelsesmarkør (M) har blitt tilsatt i det venstre sporet og fragmentstørrelsene er antydet. Doble bånd på tid null skyldes ufullstendig denaturert dsRNA. Figur 3: Korte dsRNA'er kutter mRNA-målmolekylet bare én gang. (A) Denaturerende gelelektroforeser av de stabile 5' kutteproduktene dannet med 1 times inkubering av 10 nM sens- eller antisens-RNA<32>P-merket cap med 10 nM dsRNA'er av p133 serien i Drosophila-\ ysat. Lengdemarkører ble generert ved delvis nuklease T1-kutting og delvis alkalisk hydrolyse (OH) av det cap-merkede mål-RNA'et. Regionene bundet av dsRNA'ene er indikert som sorte streker på begge sider. Sekvensen på 20-23 nt mellom de dominerende kuttesetene for det 111 bp lange dsRNA'et er vist. Den horisontale pilen indikerer uspesifikk kutting som ikke skyldes RNAi. (B) Posisjon av kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Sekvensene til 177 nt sens og 180 nt antisens mål-RNA'ene som har cap er vist i antiparallell retning, slik at komplementære sekvenser står ovenfor hverandre. Regionen bundet av de ulike dsRNA'ene er antydet med forskjellige fargede streker plassert mellom sens- og antisensmålsekvenser. Kutteseter er indikert med sirkler: stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting. Den<32>P-radioaktivt merkede fosfatgruppen er merket med en stjerne. Figur 4: 21 og 22 nt RNA-fragmenter genereres med en RNase lll-lignende mekanisme. (A) Sekvenser på~21 nt RNA'er etter dsRNA-prosessering.~21 nt RNA-fragmenter generert ved dsRNA-prosessering ble klonet i en bestemt retning og sekvensert. Oligoribonukleotider som kom fra senstråden til dsRNA'et er vist som blå linjer, de som kom fra antisenstråden som røde linjer. Tykke streker anvendes hvis den samme sekvensen var til stede i multiple kloner, der antallet til høyre indikerer frekvensen. Mål-RNA kuttesetene mediert av dsRNA'et er vist som oransje sirkler, stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting (se Figur 3B). Sirkler på toppen av senstråden antyder kutteseter i sensmålet, og sirkler på bunnen av dsRNA'et indikerer kuttesete i antisensmålet. Opp til fem ekstra nukleotider ble identifisert i~21 nt fragmenter avledet fra 3' endene til dsRNA'et. Disse nukleotidene er tilfeldige kombinasjoner av hovedsakelig C-, G- eller A-rester og ble mest sannsynlig tilsatt på en tilfeldig måte (uten templat) i løpet av T7-transkripsjon av trådene som utgjør dsRNA. (B) Todimensjonal TLC-analyse av nukleotidsammensetningen til -21 nt RNA'er. -21 nt RNA'ene ble generert ved inkubering av internt radioaktivt merket 504 bp Pp-luc dsRNA i Drosophila-\ ysat, gelrenset og deretter kuttet til mononukleotider med nuklease P1 (øverste rad) eller ribonuklease T2 (nederste rad). dsRNA'et ble radioaktivt merket internt ved transkripsjon i nærvær av én av de indikerte a-<32>P nukleosidtrifosfatene. Radioaktivitet ble detektert med fosforbildeanalyse. Nukleosid 5-monofosfater, nukleosid 3-monofosfater, nukleosid 5',3-difosfater og uorganisk fosfat er indikert som henholdsvis pN, Np, pNp og Pi. Sorte sirkler indikerer UV-absorberende flekker fra ikke-radioaktive bærernukleotider. 3',5-bisfosfatene (røde sirkler) ble identifisert med migrasjon sammen med radioaktivt merkede standarder fremstilt med 5-fosforylering av nukleosid 3-monofosfater med T4-polynukleotidkinase og^<32>P-ATP. Figur 5: Syntetiske 21 og 22 nt RNA'er medierer mål-RNA kutting. (A) Grafisk presentasjon av kontroll 52 bp dsRNA og syntetiske 21 og 22 nt dsRNA'er. Senstråden til 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'er (siRNAer) er vist i blått, antisenstråden i rødt. Sekvensene til siRNAene ble avledet fra de klonede fragmentene til 52 og 111 bp dsRNA'er (Figur 4A), bortsett fra 22 nt antisenstråden til dupleks 5. siRNA'ene i dupleks 6 og 7 var unike for den 111 bp dsRNA-prosesseringsreaksjonen. De to 3' overhengende nukleotidene indikert i grønt foreligger i sekvensen til den syntetiske antisenstråden til dupleks 1 og 3. Begge trådene til kontroll 52 bp dsRNA'et ble fremstilt med in wfro-transkripsjon, og en fraksjon av transkripter kan inneholde vilkårlig 3' nukleotidtilsetning. Mål-RNA kuttesetene styrt av siRNA-dupleksene er indikert som oransje sirkler (se tekst til Figur 4A) og ble bestemt som vist i Figur 5B. (B) Posisjon til kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. Kontroll 52 bp dsRNA (10 nM) eller 21 og 22 nt RNA-dupleksene 1-7 (100 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,51 ved 25 °C i Drosophila-\ ysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Kuttesetene er indikert i Figur 5A. Regionen bundet av 52 bp dsRNA'et eller sens (s) eller antisens (as) trådene er indikert med de sorte strekene ved siden av gelen. Kuttesetene er alle lokalisert i regionen som er identisk med dsRNA'ene. For nøyaktig bestemmelse av kuttesetene for antisenstråden ble en gel med lavere prosent anvendt. Figur 6: Lange 3' overheng på korte dsRNA'er inhiberer RNAi. (A) Grafisk presentasjon av 52 bp dsRNA-konstruksjoner. 3' forlengelsene av sens- og antisenstråd er indikert i henholdsvis blått og rødt. De observerte kuttesetene på mål-RNA'ene er vist som oransje sirkler analogt til Figur 4A og ble bestemt som vist i Figur 6B. (B) Posisjon av kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. dsRNA (10 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,51 ved 25 °C i DrosophilaAysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Hovedkuttesetene er indikert med en horisontal pil og er også vist i Figur 6A. Regionen bundet av 52 bp dsRNA'et er vist som sort strek på begge sider av gelen. Figur 7: Foreslått modell for RNAi. RNAi er antatt å begynne med prosessering av dsRNA (senstråd i sort, antisenstråd i rødt) til hovedsakelig 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'er (siRNA'er). Korte overhengende 3' nukleotider, hvis de foreligger på dsRNA'et, kan være fordelaktige for prosessering av korte dsRNA'er. De dsRNA-prosesserende proteinene, som trenger å blikarakterisert, er vist som grønne og blå ovaler og sammenstilt på dsRNA'et på asymmetrisk måte. I vår modell er dette vist ved binding av et hypotetisk blått protein eller proteindomene med siRNA-tråden i 3' til 5' retning, mens det hypotetisk grønne proteinet eller proteindomenet alltid er bundet til den motstående siRNA-tråden. Disse proteinene eller en undergruppe forblir assosiert med siRNA-dupleksen og bevarer dens retning som er bestemt ved retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Kun siRNA-sekvensen assosiert med det blå proteinet kan guide kutting av mål-RNA. Endonukleasekomplekset henvises til som lite, interfererende ribonukleoproteinkompleks eller siRNP. Det er antatt heri at endonukleasen som kutter dsRNA'et også kan kutte mål-RNA'et, trolig ved midlertidig fjerning av den passive siRNA-tråden som ikke er anvendt for målgjenkjennelse. Mål-RNA'et kuttes deretter i senteret av regionen gjenkjent av det sekvenskomplementære guide-siRNA'et. Figur 8: Rapportørkonstruksjoner og siRNA-duplekser. (a) Ildflue (Pp-luc) og Renilla reniformis (Rr-luc) luciferaserapportørgenregionene fra plasmidene pGL2-kontroll, pGL-3-kontroll og pRL-TK (Promega) er vist. SV40-regulatorelementer, HSV-tymidinkinasepromoteren og to introner (linjer) er indikert. Sekvensen til GL3- luciferase er 95 % identisk med GL2, men RL er fullstendig ubeslektet med begge. Luciferaseekspresjon fra pGL2 er omtrent 10 ganger lavere enn fra pGL3 i transfekterte mammalske celler. Regionen bundet av siRNA-dupleksene er indikert som sort strek under den kodende regionen til luciferasegenene. (b) Sens (øvre) og antisens (nedre) sekvenser til siRNA-dupleksene som binder GL2-, GL3- og RL-luciferase er vist. GL2 og GL3 siRNA-dupleksene er bare forskjellige i 3 enkle nukleotidsubstitusjoner (grå boks). Som uspesifikk kontroll ble en dupleks med den inverterte GL2-sekvensen, invGL2, syntetisert. 2 nt 3' overhenget til 2'-deoksytymidin er indikert som TT; uGL2 ligner på GL2 siRNA, men inneholder ribouridin 3' overheng. Figur 9: RNA-interferens med siRNA-duplekser. Forhold av målkontrolluciferase ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); grå stolper indikerer forhold av Photinus pyralis (Pp-luc) GL2- eller GL3-luciferase til Renilla reniformis (Rr-luc) RL-luciferase (venstre akse), hvite stolper indikerer RL til GL2 eller GL3 forhold (høyre akse). Panel a, c, e, g og i beskriver eksperimenter utført med kombinasjonen av pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d, f, h og j med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Cellelinjen anvendt for interferensforsøket er indikert på toppen av hvert stolpediagram. Forholdene av Pp-luc/Rr-luc for bufferkontrollen (bu) varierte mellom henholdsvis 0,5 og 10 for pGL2/pRL og mellom 0,03 og 1 for pGL3/pRL før normalisering og mellom de ulike cellelinjene som ble testet. De plottede resultatene er gjennomsnitt fra tre uavhengige eksperimenter ± SD. Figur 10: Effekter av 21 nt siRNA, 50 bp og 500 bp dsRNAer på luciferaseekspresjon i HeLa-celler. Den nøyaktige lengden av de lange dsRNA'ene er indikert under stolpene. Panel a, c og e beskriver eksperimenter utført med pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d og f med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Resultatene er gjennomsnitt fra to uavhengige eksperimenter ± SD. (a), (b) Absolutt Pp-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (c), (d) Rr-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (e), (f) Forhold av normaliserte mål i forhold til kontrolluciferase. Forhold av luciferaseaktivitet for siRNA-duplekser ble normalisert
i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); luminescensforholdene for 50 eller 500 bp dsRNA'er ble normalisert i forhold til de respektive forholdene observert for 50 og 500 bp dsRNAfra humanisert GFP (hG, sorte stolper). Det bør bli registrert at de totale forskjellene i sekvenser mellom de 49 og 484 bp dsRNA'ene som binder GL2 og GL3 ikke er tilstrekkelig for å gi spesifisitet mellom GL2- og GL3-mål (43 nt sammenhengende likhet i 49 bp segment, 239 nt lengste sammenhengende likhet i 484 bp segment).
Figur 11: Variasjon av 3' overhenget til duplekser av 21-nt siRNA'er. (A) Oversikt over den eksperimentelle strategien. Sens mål-mRNA'et som er polyadenylert og har cap er vist, og de relative posisjonene til sens- og antisens-siRNAer er vist. Åtte serier av duplekser, i henhold til de åtte ulike antisenstrådene, ble fremstilt. siRNA-sekvensene og antallet overhengende nukleotider ble forandret i 1-nt trinn. (B) Normalisert relativ luminescens av målluciferase ( Photinus pyralis, Pp-luc) i forhold til kontrolluciferase ( Renilla reniformis, Rr-luc) i D. melanogaster-embryolysat i nærvær av 5 nM rettendede dsRNA'er. Luminescensforholdene bestemt i nærvær av dsRNA ble normalisert til forholdet fremskaffet for en bufferkontroll (bu, sort stolpe). Normaliserte forhold mindre enn 1 indikerer spesifikk interferens. (C-J) Normaliserte interferensforhold for åtte serier av 21-nt siRNA-duplekser. Sekvensene til siRNA-duplekser er vist over stolpediagrammene. Hvert panel viser interferensforholdet for et sett av duplekser dannet med et gitt antisensguide-siRNA og 5 ulike sens-siRNA'er. Antall overhengende nukleotider (3' overheng, positive tall; 5' overheng, negative tall) er indikert på x-aksen. Datapunkter er gjennomsnitt fra minst 3 uavhengige eksperimenter, feilstørrelser representerer standardavvik. Figur 12: Variasjon av lengden til senstråden av siRNA-duplekser. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. Tre 21-nt antisenstråder ble paret med åtte sens-siRNA'er. siRNA'ene ble forandret i lengde på deres 3' ende. 3' overhenget til antisens-siRNA'et var 1-nt (B), 2-nt (C) eller 3-nt (D), mens sens siRNA-overhenget varierte for hver serie. Sekvensene til siRNA-dupleksene og de tilsvarende interferensforholdene er indikert. Figur 13: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. 21-nt siRNA-dupleksen er identisk i sekvens til den som er vist i Figur 11H eller 12C. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sens siRNAet (B) eller 5' siden av sens siRNA'et (C). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er antydet. Figur 14: Substitusjon av 2-hydroksylgruppene til siRNA-riboserestene. 2'-hydroksylgruppene (OH) i trådene til siRNA-duplekser ble byttet ut med 2-deoksy (d) eller2-O-metyl (Me). 2-nt og 4-nt2-deoksysubstitusjoner på 3' endene er indikert som henholdsvis 2-nt d og 4-nt d. Uridinrester ble byttet ut med 2-deoksy tymidin. Figur 15: Kartlegging av sens og antisens mål-RNA kutting med 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av 32P (stjerne) cap-merkede sens og antisens mål-RNA'er og siRNA-duplekser. Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (B) Kartlegging av mål-RNA kutteseter. Etter 21 inkubering av 10 nM mål med 100 nM siRNA-dupleks i D. me/anogasfer-embryolysat ble det 5' cap-merkede substratet og 5' kutteproduktene bestemt på sekvenseringsgeler. Lengdemarkører ble generert ved delvis RNase T1-kutting (T1) og delvis alkalisk hydrolyse (OH-) av mål-RNA'ene. De tykke strekene til venstre for bildene indikerer regionen dekket av siRNA-trådene 1 og 5 med den samme retningen som målet. Figur 16: 5' enden av et guide-siRNA definerer posisjonen for mål-RNA kutting.
(A, B) Grafisk presentasjon av den eksperimentelle strategien. Antisens-siRNA'et var den samme i alle siRNA-duplekser, men senstråden varierte mellom 18 til 25 nt ved å forandre 3' enden (A) eller 18 til 23 nt ved å forandre 5' enden (B). Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (C, D) Analyse av mål-RNA kutting ved å anvende cap-merkede sens (øverste panel) eller antisens (nederste panel) mål-RNA'er. Kun de cap-merkede 5' kutteproduktene er vist. Sekvensene til siRNA-dupleksene er indikert, og lengden til sens siRNA-trådene er angitt på toppen av panelet. Kontrollsporet merket med en tankestrek i panel (C) viser mål-
RNA inkubert i fravær av siRNA'er. Markører var som beskrevet i Figur 15. Pilene i (D), nederste panel, indikerer mål-RNA kuttesetene som er forskjellige med 1 nt. Figur 17: Sekvensvariasjon av 3' overhenget til siRNA-duplekser. 2-nt 3' overhenget (NN, i grått) ble forandret i sekvens og sammensetning som indikert (T, 2-deoksytymidin, dG, 2-deoksyguanosin; stjerne, villtype siRNA-dupleks). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Villtypesekvensen er den samme som vist i Figur 14. Figur 18: Sekvensspesifisitet av målgjenkjennelse. Sekvensene til de feilmatchede siRNA-dupleksene er vist, modifiserte sekvenssegmenter eller enkle nukleotider er farget i grått. Referansedupleksen (ref) og siRNA-dupleksene 1 til 7 inneholder 2-deoksytymidin 2-nt overheng. Inaktiveringseffektiviteten til den tymidinmodifiserte referansedupleksen var sammenlignbar med villtypesekvensen (Figur 17). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Figur 19: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sens siRNA'et (A) eller 5' siden av sens siRNA'et (B). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er indikert. For HeLa SS6-celler ble siRNA-duplekser (0,84 \ xg) som binder GL2-luciferase kotransfektert med pGL2-kontroll og pRL-TK plasmider. For sammenligning er in vitro RNAi-aktivitetene til siRNA-duplekser testet i D. melanogaster-\ ysat vist.
Eksempel 1
RNA-interferens mediert med små, syntetiske RNA'er
1.1 Eksperimentelle fremgangsmåter
1.1.1 In wfro-RNAi
In wfro-RNAi og lysatfremstillinger ble utført som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Det er avgjørende å anvende ferskt, oppløst kreatinkinase (Roche) for optimal ATP-nydannelse. RNAi-translasjonstestene
(Figur 1) ble utført med dsRNA-konsentrasjoner på 5 nM og en forlenget preinkuberingsperiode på 15 min ved 25 °C før tilsetning av in wfro-transkriberte, 5' cap-merkede og polyadenylerte Pp-luc og Rr-luc rapportør mRNA'er. Inkuberingen fortsatte i 1 time, og den relative mengden av Pp-luc og Rr-luc protein ble analysert ved å anvende dual luciferasetest (Promega) og et Monolight 301OC luminometer (PharMingen).
1.1.2 RNA-syntese
Standard fremgangsmåter ble anvendt for in wfro-transkripsjon av RNA fra PCR-templater som bærer T7- eller SP6-promotersekvenser, se for eksempel (Tuschl et al., 1998). Syntetisk RNA ble fremstilt ved å anvende Expedite RNA-fosforamiditter (Proligo). 3' adapteroligonukleotidet ble syntetisert ved å anvende dimetoksytrityl-1,4-benzendimetanol-suksinyl-aminopropyl-CPG. Oligoribonukleotidene fikk fjernet beskyttelsen i 3 ml av 32 % ammoniakk/etanol (3/1) i 4 timer ved 55 °C (Expedite RNA) eller 16 timer ved 55 °C (3' og 5' adapter DNA/RNA kimæriske oligonukleotider) og deretter desilylert og gelrenset som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1993). RNA-transkripter for dsRNA-fremstilling omfattende lange 3' overheng ble generert fra PCR-templater som inneholdt en T7-promoter i sens- og en SP6-promoter i antisensretning. Transkripsjonstemplatet for sens og antisens mål-RNA ble PCR-amplifisert med GCG TAATACGACTCACTATAGAACAATTGCTTTTACAG (understreket, T7-promoter) som 5' primer og ATTTAGGTGACACTATAGGCATAAAGAATTGAAGA (understreket, SP6-promoter) som 3' primer og det lineariserte Pp-luc plasmidet (pGEM-luc sekvens) (Tuschl et al., 1999) som templat; det T7-transkriberte sens-RNA'et var 177 nt langt med Pp-luc sekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet og etterfulgt av 17 nt av komplementet til SP6-promotersekvensen på 3' enden. Transkripter for rettendet dsRNA-dannelse ble fremstilt med transkripsjon fra to ulike PCR-produkter som bare inneholdt en enkel promoterse kvens.
dsRNA-hybridisering ble utført ved å anvende en fenol/kloroform ekstraksjon. Ekvimolar konsentrasjon av sens- og antisens-RNA (50 nM til 10^iM, avhengig av lengden og tilgjengelig mengde) i 0,3 M NaOAc (pH 6) ble inkubert i 30 s ved 90 °C og deretter ekstrahert ved romtemperatur med et like stort volum av
fenol/kloroform, etterfulgt av en kloroformekstraksjon for å fjerne residual fenol. Det resulterende dsRNA'et ble presipitert ved tilsetning av 2,5-3 volumer av etanol. Pelleten ble løst i lyseringsbuffer (100 mM KCI, 30 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 2 mM Mg (OAc>2) og kvaliteten av dsRNA'et ble verifisert med standard agarosegelelektroforeser i 1 x TAE-buffer. 52 bp dsRNA'ene med 17 nt og 20 nt 3' overhengene (Figur 6) ble hybridisert ved inkubering i 1 min ved 95 °C, deretter raskt avkjølt til 70 °C og etterfulgt av sakte avkjøling til romtemperatur over en 3 t periode (50 \ i\ hybridiseringsreaksjon, 1 \ M trådkonsentrasjon, 300 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI, pH 7,5). dsRNA'ene ble deretter fenol/kloroform ekstrahert, etanol presipitert og løst i lyseringsbuffer.
Transkripsjon av internt<32>P-radioaktivt merket RNA anvendt for dsRNA-fremstilling (Figur 2 og 4) ble utført ved å anvende 1 mM ATP, CTP, GTP, 0,1 eller 0,2 mM UTP og 0,2-0,3^M -<3>2P-UTP (3000 Ci/mmol) eller det respektive forholdet for andre radioaktivt merkede nukleosidtrifosfater enn UTP. Merking av cap til mål-RNA'ene ble utført som tidligere beskrevet. Mål-RNA'ene ble gelrenset etter cap-merking.
1.1.3 Kuttesetekartlegging
Standard RNAi-reaksjoner ble utført med preinkubering av 10 nM dsRNA i 15 min etterfulgt av tilsetning av 10 nM cap-merket mål-RNA. Reaksjonen ble stoppet etter ytterligere 21 (Figur 2A) eller 2,5 t inkubering (Figur 5B og 6B) med proteinase K-behandling (Tuschl et al., 1999). Prøvene ble deretter analysert på 8 eller 10 % sekvenseringsgeler. De 21 og 22 nt syntetiske RNA-dupleksene ble anvendt ved 100 nM endelig konsentrasjon (Figur 5B).
1.1.4 Kloning av -21 nt RNA'er
21 nt RNA'ene ble dannet med inkubering av radioaktivt merket dsRNA i DrosophilaAysat i fravær av mål-RNA (200 jxl reaksjon, 1 t inkubering, 50 nM dsP111, eller 100 nM dsP52 eller dsP39). Reaksjonsblandingen ble deretter behandlet med proteinase K (Tuschl et al., 1999) og dsRNA-prosesseringsproduktene ble separert på en denaturerende 15 % polyakrylamidgel. Et bånd, inkludert et størrelsesområde på minst 18 til 24 nt, ble skjært ut, eluert inn i 0,3 M NaCI natten over ved 4 °C og i silikonrør. RNA'et ble isolert med etanolutfelling og defosforylert (30 \ i\ reaksjon, 30 min, 50 °C, 10 U alkalisk fosfatase, Roche). Reaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA'et ble etanolpresipitert. 3' adapteroligonukleotidet (pUUUaaccgcatccttctcx: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA; p, fosfat; x, 4-hydroksymetylbenzyl) ble deretter ligert til det defosforylerte -21 nt RNAet (20 \ x\ reaksjon, 30 min, 37 °C, 5 \ iM 3' adapter, 50 mM Tris-HCI, pH 7,6, 10 mM MgCI2, 0,2 mM ATP, 0,1 mg/ml acetylert BSA, 15 % DMSO, 25 U T4 RNA-ligase, Amersham-Pharmacia) (Pan og Uhlenbeck, 1992). Ligeringsreaksjonen ble stoppet ved tilsetning av et like stort volum av 8 M urea/50 mM EDTA-stoppblanding og direkte satt på en 15 % gel. Ligeringsutbytter var større enn 50 %. Ligeringsproduktet ble isolert fra gelen og 5-fosforylert (20 (il reaksjon, 30 min, 37 °C, 2 mM ATP, 5 U T4-polynukleotidkinase, NEB). Fosforyleringsreaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA ble isolert med etanolutfelling. Deretter ble 5' adapteren (tactaatacgactcactAAA: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA) ligert til det fosforylerte ligeringsproduktet som beskrevet ovenfor. Det nye ligeringsproduktet ble gelrenset og eluert fra gelbiten i nærvær av revers transkripsjonsprimer (GACTAGCTGGAATTCAAGGATGCGGTTAAA: fet skrift, EcoRI-sete) anvendt som bærer. Revers transkripsjon (15 \ i\ reaksjon, 30 min, 42 °C, 150 U Superscript II revers transkriptase, Life Technologies) ble etterfulgt av PCR ved å anvende CAGCCAACGGAATTCATACGACTCACTAAA (fet skrift, EcoRI-sete) som 5' primer og 3' RT-primeren. PCR-produktet ble renset med fenol/kloroform ekstraksjon og etanolpresipitert. PCR-produktet ble deretter kuttet med EcoRI (NEB) og konkatamerisert ved å anvende T4 DNA-ligase (høy konsentrasjon, NEB). Konkatamerer av en størrelse på 200 til 800 bp ble separert på en agarosegel med lavt smeltepunkt, isolert fra gelen med en standard smeltings- og fenolekstraksjonsfremgangsmåte og etanolpresipitert. De uparede
endene ble fylt i ved inkubering med Taq-polymerase under standard betingelser i 15 min ved 72 °C, og DNA-produktet ble ligert direkte inn i pCR2.1-TOPO vektoren ved anvendelse av TOPO TA-kloningstestsettet (Invitrogen). Kolonier ble screenet ved anvendelse av PCR og M13-20 og M13 reverse sekvenseringsprimere. PCR-produkter ble sendt direkte til sekvensering (Sequence Laboratories Gottingen
GmbH, Tyskland). Gjennomsnittlig ble fire til fem 21 mer sekvenser fremskaffet pr. klon.
1.1.5 2D-TLC analyse
Nuklease P1-kutting av radioaktivt merkede, gelrensede siRNA'er og 2D-TLC ble utført som beskrevet (Zamore et al., 2000). Nuklease T2-kutting ble utført i 10 (il reaksjoner i 31 ved 50 °C i 10 mM ammoniumacetat (pH 4,5) ved anvendelse av 2 \ xg/\ i\ bærer tRNA og 30 U ribonuklease T2 (Life Technologies). Migrasjonen av ikke-radioaktive standarder ble bestemt med UV-lys. Identiteten av nukleosid-3',5'-disfosfater ble bekreftet med migrasjon av T2-kutteproduktene sammen med standarder fremstilt med 5'-<32>P-fosforylering av kommersielle nukleosid 3'-monofosfater ved anvendelse av y-32P-ATP og T4-polynukleotidkinase (resultater er ikke vist).
1.2 Resultater og diskusjon
1.2.1 Lengdekrav for prosessering av dsRNA til 21 og 22 nt RNA-fragmenter Lysat fremstilt fra D. melanogaster syncytiale embryoer rekapitulerer RNAi in vitro og tilveiebringer et nytt verktøy for biokjemisk analyse av mekanismen for RNAi (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). In vitro- og in v/Vo-analyse av lengdekravene til dsRNAfor RNAi har vist at korte dsRNA'er (< 150 bp) er mindre effektive enn lengre dsRNA'er i degradering av mål-mRNA (Caplen et al., 2000; Hammond et al., 2000; Ngo et al., 1998; Tuschl et al., 1999). Årsakene for reduksjon i mRNA-degraderende effektivitet er ikke kjent. Vi undersøkte derfor det nøyaktige lengdekravet til dsRNA for mål-RNA nedbrytning under optimaliserte betingelser i Drosophila-\ ysatet (Zamore et al., 2000). Flere serier av dsRNA'er ble syntetisert og rettet mot ildflueluciferase (Pp-luc) rapportør RNA. Den spesifikke suppresjonen av mål-RNA ekspresjon ble monitorert med dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999) (Figur 1A og 1B). Vi detekterte spesifikk inhibisjon av mål-RNA ekspresjon for dsRNA'er så korte som 38 bp, men dsRNA'er på 29 til 36 bp var ikke effektive i denne prosessen. Effekten var uavhengig av målposisjonen og graden av inhibisjon av Pp-luc mRNA-ekspresjon korrelert med lengden til dsRNA'et, dvs. lange dsRNA'er var mer effektive enn korte dsRNA'er.
Det har blitt antydet at 21-23 nt RNA fragmentene generert ved prosessering av dsRNA'er er mediatorene av RNA-interferens og kosuppresjon (Hamilton og Baulcombe, 1999; Hammond et al., 2000; Zamore et al., 2000). Vi analyserte derfor hastigheten til 21-23 nt fragmentdannelse for en undergruppe av dsRNA'er som varierte i størrelse mellom 501 til 29 bp. Dannelse av 21-23 nt fragmenter i DrosophilaAysat (Figur 2) var enkel å detektere for 39 til 501 bp lange dsRNA'er, men ble signifikant forsinket for 29 bp dsRNA'et. Denne observasjonen sammenfaller med en rolle for 21-23 nt fragmenter i guiding av mRNA-kutting og gir en forklaring for mangelen på RNAi med 30 bp dsRNA'er. Lengdeavhengigheten for 21-23 mer dannelse reflekterer trolig en biologisk relevant kontrollmekanisme for å hindre den uønskede aktiveringen av RNAi med korte, intramolekylære, baseparede strukturer av ordinære cellulære RNAer.
1.2.2 39 bp dsRNA medierer mål-RNA kutting på et enkelt sete Tilsetning av dsRNA og 5' cap-merket mål-RNA til Drosophila-\ ysatet resulterer i sekvensspesifikk nedbrytning av mål-RNA'et (Tuschl et al., 1999). Mål-mRNA'et kuttes bare i regionen som har likhet med dsRNA'et, og mange av målkuttesetene var separert med 21-23 nt (Zamore et al., 2000). Derfor var antallet kutteseter for et gitt dsRNA forventet omtrentlig å tilsvare lengden av dsRNA'et dividert med 21. Vi kartla målkuttesetene på et sens- og et antisens mål-RNA som var 5' cap radioaktivt merket (Zamore et al., 2000) (Figur 3A og 3B). Stabile 5' kutteprodukter ble separert på en sekvenseringsgel, og kutteposisjonen ble bestemt ved sammenligning med en delvis RNase T1 og en alkalisk hydrolysestige fra mål-RNAet.
I overensstemmelse med den tidligere observasjonen (Zamore et al., 2000) ble alle mål-RNA kutteseter lokalisert i regionen som har likhet med dsRNA'et. Sens-eller antisensmålet ble bare kuttet én gang med 39 bp dsRNA. Hvert kuttesete ble lokalisert 10 nt fra 5' enden av regionen bundet av dsRNA'et (Figur 3B). 52 bp dsRNA'et, som har samme 5' ende som 39 bp dsRNA'et, danner det samme kuttesetet på sensmålet, lokalisert 10 nt fra 5' enden til regionen som har likhet med dsRNA'et, i tillegg til to svakere kutteseter 23 og 24 nt nedstrøms for det første setet. Antisensmålet ble bare kuttet én gang, igjen 10 ntfra 5' enden til regionen bundet av dens respektive dsRNA. Kartlegging av kuttesetene for 38 til 49 bp dsRNA'ene vist i Figur 1 viste at det første og dominerende kuttesetet alltid var lokalisert 7 til 10 nt nedstrøms for regionen bundet av dsRNA'et (resultater er ikke vist). Dette antyder at punktet for mål-RNA kutting bestemmes av enden til dsRNA'et og kan antyde at prosessering til 21-23 mer starter fra endene til dupleksen.
Kutteseter på sens- og antisensmål for det lengre 111 bp dsRNA'et var mye mer frekvent enn forventet, og de fleste av dem forekommer i clustere separert med 20 til 23 nt (Figur 3A og 3B). Som for de kortere dsRNA'ene er det første kuttesetet på sensmålet 10 nt fra 5' enden til regionen dekket av dsRNAet; og det første kuttesetet på antisensmålet er lokalisert 9 nt fra 5' enden til region bundet av dsRNA'et. Det er ukjent hva som forårsaker denne uregelmessige kuttingen, men én mulighet kan være at lengre dsRNA'er ikke bare kan bli prosessert fra endene, men også internt, eller det fins noen spesifisitetsdeterminanter for dsRNA-prosessering som vi enda ikke kjenner til. Noen uregelmessigheter for mellomrommet på 21-23 nt har også blitt beskrevet tidligere (Zamore et al., 2000). For å bedre forstå det molekylære grunnlaget for dsRNA-prosessering og mål-RNA gjenkjennelse, bestemte vi oss for å analysere sekvensene til 21-23 nt fragmentene generert ved prosessering av 39, 52 og 111 bp dsRNA'er i DrosopMa-lysatet.
1.2.3 dsRNA prosesseres til 21 og 22 nt RNA'er med en RNase lll-lignende mekanisme
For å karakterisere 21-23 nt RNA-fragmentene undersøkte vi 5' og 3' terminalene til RNA-fragmentene. Periodatoksidasjon av gelrensede 21-23 nt RNA'er etterfulgt av p-eliminering antydet nærvær av en terminal 2' og 3' hydroksylgruppe. 21-23 mer var også mottakelige for alkalisk fosfatasebehandling, som indikerer nærvær av en 5' terminal fosfatgruppe. Nærværet av 5' fosfat- og 3' hydroksylterminaler antyder at dsRNA'et kan bli prosessert av en lignende enzymatisk aktivitet som E. coli RNase III (for oversiktsartikler se (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982)).
Retningsbestemt kloning av 21-23 nt RNA-fragmenter ble utført ved ligering av et 3' og 5' adapteroligonukleotid til renset 21-23 mer ved anvendelse av T4 RNA-ligase. Ligeringsproduktene ble revers transkribert, PCR-amplifisert, konkatamerisert, klonet og sekvensert. Over 220 korte RNA'er ble sekvensert fra dsRNA-prosesseringsreaksjoner av 39, 52 og 111 bp dsRNA'ene (Figur 4A). Vi fant den følgende lengdefordelingen: 1 % 18 nt, 5 % 19 nt, 12 % 20 nt, 45 % 21 nt, 28 % 22 nt, 6 % 23 nt og 2 % 24 nukleotider. Sekvensanalyse av 5' terminalnukleotidet til de prosesserte fragmentene antydet at oligonukleotider med en 5' guanosin var underrepresentert. Denne skjevheten ble mest sannsynlig innført av T4 RNA-ligase som diskriminerer mot 5' fosforylert guanosin som donoroligonukleotid; ingen signifikant sekvensskjevhet ble observert på 3' enden. Mange av -21 nt fragmentene avledet fra 3' endene til sens- eller antisenstråden av dupleksene omfatter 3' nukleotider som er avledet fra vilkårlig tilsetning av nukleotider i løpet av RNA-syntese ved anvendelse av T7 RNA-polymerase. Interessant ble et signifikant antall endogene Drosophila -21 nt RNAer også klonet, noen av dem fra LTR og ikke-LTR retrotransposoner (resultater er ikke vist). Dette sammenfaller med en mulig rolle for RNAi i transposoninaktivering. -21 nt RNA'ene forekommer i grupper (Figur 4A) som dekker hele dsRNA-sekvensene. Tilsynelatende kutter prosesseringsreaksjonen dsRNA'et ved å etterlate seg ujevne 3' ender, en annen karakteristikk for RNase III kutting. For 39 bp dsRNA'et ble to clustere av -21 nt RNA'er funnet fra hver dsRNA-tråd omfattende overhengende 3' ender, fortsatt ble bare ett kuttesete detektert på sens- og antisensmålet (Figur 3A og 3B). Hvis -21 nt fragmentene var til stede som enkelttrådede guide-RNA'er i et kompleks som medierer mRNA-nedbrytning, kunne det antas at minst to målkutteseter forekommer, men dette var ikke tilfelle. Dette antyder at -21 nt RNA'ene kan foreligge i dobbelttrådet form i endonukleasekomplekset, men at bare én av trådene kan bli anvendt for gjenkjennelse og kutting av mål-RNA. Anvendelse av bare én av -21 nt trådene for målkutting kan bli bestemt av retningen som -21 nt dupleksen er bundet til nukleasekomplekset. Denne retningen er definert av retningen som det opprinnelige dsRNA'et ble prosessert i. -21 mer clustere for 52 bp og 111 bp dsRNA'et er mindre godt definert sammenlignet med 39 bp dsRNA'et. Clusterne er spredt over regioner på 25 til 30 nt som mest sannsynlig representerer flere tydelige subpopulasjoner av -21 nt duplekser og guider derfor målkutting på flere nærliggende seter. Disse kutteregionene er fortsatt vesentlig separert med 20 til 23 nt intervaller. Reglene som bestemmer hvor ordinært dsRNA kan bli prosessert til -21 nt fragmenter er fortsatt ikke kjent, men det ble tidligere observert at avstanden mellom kutteseter på ca. 21-23 nt kan bli endret med en kjøring av uridiner (Zamore et al., 2000). Spesifisiteten til dsRNA-kutting med E. coli RNase III ser ut til å være kontrollert hovedsakelig av antideterminanter, dvs. unntatt noen spesifikke basepar i gitte posisjoner i forhold til kuttesetet (Zhang og Nicholson, 1997).
For å teste om sukker-, base- eller cap-modifisering var til stede i prosesserte -21 nt RNA-fragmenter, inkuberte vi radioaktivt merket 505 bp Pp-luc dsRNA i lysat i 1 time, isolerte~21 nt produktene og kuttet den med P1- eller T2-nuklease til mononukleotider. Nukleotidblandingen ble deretter analysert med 2D tynnsjiktskromatografi (Figur 4B). Ingen av de fire naturlige ribonukleotidene var modifisert som antydet med P1- eller T2-kutting. Vi har tidligere analysert adenosin- til inosinkonversjon i -21 nt fragmentene (etter en 2 t inkubering) og detekterte et lite omfang (< 0,7 %) av deaminering (Zamore et al., 2000); kortere inkubering i lysat (1 time) reduserte denne inosinfraksjonen til knapt detekterbare nivåer. RNase T2, som kutter 3' i forhold til fosfodiesterkoblingen, dannet nukleosid 3' fosfat og nukleosid 3',5-difosfat, og antyder dermed nærvær av et 5'-terminalt monofosfat. Alle fire nukleosid 3',5-difosfatene ble detektert og antyder at internukleotidkoblingen ble kuttet med liten eller ingen sekvensspesifisitet. Altså er -21 nt fragmentene ikke modifisert og ble generert fra dsRNA slik at 5' monofosfater og 3-hydroksyler var til stede på 5-enden.
1.2.4 Syntetiske 21 og 22 nt RNA'er medierer mål-RNA kutting Analyse av produktene ved dsRNA-prosessering antydet at -21 nt fragmentene genereres ved en reaksjon med alle karakteristikaene til en RNase III-kuttereaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982). RNase III lager kutt med overheng i dsRNAet og etterlater seg et 3' overheng på
ca. 2 nt. Vi syntetiserte kjemisk 21 og 22 nt RNA'er, som er identiske i sekvens til noen av de klonede~21 nt fragmentene, og testet dem for deres evne til å mediere mål-RNA nedbrytning (Figur 5A og 5B). 21 og 22 nt RNA-dupleksene ble inkubert ved 100 nM konsentrasjoner i lysatet, en 10 ganger høyere konsentrasjon enn 52 bp kontroll-dsRNA'et. Under disse betingelsene er mål-RNA kutting enkel å detektere. Senkning av konsentrasjonen av 21 og 22 nt dupleksene fra 100 til 10 nM forårsaker fortsatt mål-RNA kutting. Økning av duplekskonsentrasjonen fra 100 nM til 1000 nM øker imidlertid ikke videre målkutting, trolig pga. en begrensende proteinfaktor i lysatet.
I motsetning til 29 eller 30 bp dsRNA'er som ikke medierte RNAi, medierte 21 og 22 nt dsRNA'ene med overhengende 3' ender på 2 til 4 nt effektiv nedbrytning av mål-RNA (dupleksene 1, 3, 4, 6, Figur 5A og 5B). Rettendede 21 eller 22 nt dsRNA'er (dupleksene 2, 5 og 7, Figur 5A og 5B) ble redusert i deres evne til å degradere målet og indikerer at overhengende 3' ender er kritiske for rekonstitusjon av RNA-proteinnukleasekomplekset. De enkelttrådede overhengene kan være nødvendige for høyaffinitetsbinding av~21 nt dupleksen til proteinkomponentene. Et 5' terminalt fosfat, selv om det var til stede etter dsRNA-prosessering, var ikke nødvendig for å mediere mål-RNA kutting og var fraværende i de korte, syntetiske RNA'ene. De syntetiske 21 og 22 nt dupleksene guidet kutting av sens- så vel som antisensmål i regionen bundet av den korte dupleksen. Dette er et viktig resultat tatt i betraktning at et 39 bp dsRNA, som danner to par clustere av~21 nt fragmenter (Figur 2), kuttet sens- eller antisensmål bare én gang og ikke to ganger. Vi tolker dette resultatet ved å antyde at bare én av to tråder foreliggende i -21 nt dupleksen kan guide mål-RNA kutting og at retningen til~21 nt dupleksen i nukleasekomplekset blir bestemt av den opprinnelige retningen til dsRNA-prosessering. Presentasjonen av en allerede perfekt prosessert~21 nt dupleks for in wfro-systemet tillater imidlertid dannelse av det aktive sekvensspesifikke nukleasekomplekset med to mulige retninger av den symmetriske RNA-dupleksen. Dette resulterer i kutting av sens- så vel som antisensmål i regionen som har likhet med 21 nt RNA-dupleksen.
Målkuttesetet er lokalisert 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som er komplementært til 21 eller 22 nt guidesekvensen, dvs. kuttesetet er nær senter av regionen bundet av 21 eller 22 nt RNA'ene (Figur 4A og 4B). Forskyving av senstråden til en 22 nt dupleks med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 3 i
Figur 5A) forskjøv bare kuttesetet til antisensmålet med to nukleotider. Forskyving av både sens- og antisenstråd med to nukleotider flyttet begge kutteseter med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 4). Vi spår at det vil bli mulig å utforme et par av 21 eller 22 nt RNA'er for å kutte et mål-RNA på nesten enhver gitt posisjon.
Spesifisiteten til mål-RNA kutting guidet av 21 og 22 nt RNA'er synes høy ettersom ingen avvikende kutteseter er detektert (Figur 5B). Det bør imidlertid bli registrert at nukleotidene foreliggende i 3' overhenget til 21 og 22 nt RNA-dupleksen kan bidra mindre til substratgjenkjennelse enn nukleotidene nær kuttesetet. Dette er basert på observasjonen av at det 3' ytterste nukleotidet i 3' overhenget til de aktive dupleksene 1 eller 3 (Figur 5A) ikke er komplementært til målet. En detaljert analyse av spesifisiteten til RNAi kan nå bli enkelt gjennomført ved anvendelse av syntetiske 21 og 22 nt RNA'er.
Basert på beviset at syntetiske 21 og 22 nt RNA'er med overhengende 3' ender medierer RNA-interferens, foreslår vi å kalle -21 nt RNA'ene for "korte, interfererende RNA'er" eller siRNA'er og det respektive RNA-proteinkomplekset for "en liten, interfererende ribonukleoproteinpartikkel" eller siRNP.
1.2.5 3' Overheng av 20 nt på korte dsRNA'er inhiberer RNAi Vi har vist at korte, rettendede dsRNA'er blir prosessert fra endene til dsRNA'et. I løpet av vår studie av lengdeavhengigheten til dsRNA i RNAi har vi også analysert dsRNA'er med 17 til 20 nt overhengende 3' ender, og til vår overraskelse fant vi at de var mindre effektive enn rettendede dsRNA'er. Den inhibitoriske effekten av lange 3' ender var spesielt uttalt for dsRNA'er opp til 100 bp, men var mindre dramatisk for lengre dsRNA'er. Effekten skyldtes ikke ufullkommen dsRNA-dannelse basert på nativ gelanalyse (resultater er ikke vist). Vi testet om den inhibitoriske effekten av lange, overhengende 3' ender kunne bli anvendt som et verktøy til å styre dsRNA-prosessering til bare én av de to endene av en kort RNA-dupleks.
Vi syntetiserte fire kombinasjoner av 52 bp modell-dsRNA'et, rettendet, 3' forlengelse på bare senstråden, 3' forlengelse på bare antisenstråden og dobbel 3' forlengelse på begge trådene og kartla mål-RNA kuttesetene etter inkubering i lysat (Figur 6A og 6B). Det første og dominerende kuttesetet til sensmålet ble tapt når 3' enden av antisenstråden til dupleksen ble forlenget og vice versa, det sterke kuttesetet til antisensmålet ble tapt når 3' enden av senstråden til dupleksen ble forlenget. 3' forlengelser på begge trådene gjorde 52 bp dsRNA'et praktisk talt inaktivt. Én forklaring for dsRNA-inaktiveringen ved~20 nt 3' forlengelser kan være assosieringen av enkelttrådede RNA-bindende proteiner som kan interferere med assosieringen av én av de dsRNA-prosesserende faktorene på denne enden. Dette resultatet er også i samsvar med vår modell der bare én av trådene til siRNA-dupleksen i sammensatt siRNP kan guide mål-RNA kutting. Retningen på tråden som guider RNA-kutting er definert av retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Det er sannsynlig at nærvær av 3' ender med overheng kan lette monteringen av prosesseringskomplekset. En blokk på 3' enden av senstråden vil bare tillate dsRNA-prosessering fra den motstående 3' enden av antisenstråden. Dette igjen genererer siRNP-komplekser der bare antisenstråden til siRNA-dupleksen kan guide kutting av sens mål-RNA. Det samme gjelder for den resiproke situasjonen.
Den mindre uttalte inhibitoriske effekten av lange 3' forlengelser i tilfellet med lengre dsRNA'er (> 500 bp, resultater er ikke vist) indikerer at lange dsRNAer også kan inneholde interne dsRNA-prosesseringssignaler eller kan bli prosessert samtidig pga. assosieringen av multiple kuttefaktorer.
1.2.6 En modell for ds RNA-styrt mRNA-kutting
De nye biokjemiske resultatene oppdaterer modellen for hvordan dsRNA binder mRNA for nedbrytning (Figur 7). Dobbelttrådet RNA blir først prosessert til korte RNA-duplekser som hovedsakelig er 21 og 22 nt lange og har 3' ender med overheng som tilsvarer en RNase lll-lignende reaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1982). Basert på 21-23 nt lengden til de prosesserte RNA-fragmentene har det allerede blitt spekulert i at en RNase lll-lignende aktivitet kan være involvert i RNAi (Bass, 2000). Denne hypotesen støttes videre ved nærvær av 5' fosfater og 3' hydroksyler på terminalene til siRNA'ene som er observert i RNase lll-reaksjonsprodukter (Dunn, 1982; Nicholson, 1999). Bakteriell RNase III og de eukaryote homologene Rntlp i S. cerevisiae og Padp i S. pombe har blitt vist å delta i prosessering av ribosomalt RNA så vel som snRNA og snoRNA'er (se for eksempel Chanfreau et al., 2000).
Lite er kjent om biokjemien til RNase lll-homologer fra planter, dyr eller menneske. To familier av RNase lll-enzymer har blitt identifisert hovedsakelig med databaseguidet sekvensanalyse eller kloning av cDNA'er. Den første RNase III-familien er representert ved det 1327 aminosyre lange D. melanogaster- protemet drosha (Acc. AF116572). C-terminalen er sammensatt av to RNase III og ett dsRNA-bindende domene og N-terminalen har ukjent funksjon. Nære homologer er også funnet i C. elegans (Acc. AF160248) og menneske (Acc. AF189011)
(Filippov et al., 2000; Wu et al., 2000). Drosha-lignende human RNase III ble nylig klonet ogkarakterisert(Wu et al., 2000). Genet er uttrykt i alle humane vev og cellelinjer, og proteinet er lokalisert i kjernen og kjernelegemet i cellen. Basert på resultater fra antisensinhibisjonsstudier ble det antydet en rolle for dette proteinet i rRNA-prosessering. Den andre klassen er representert av C. e/egans-genet K12H4.8 (Acc. S44849) som koder for et protein som er 1822 aminosyrer langt. Dette proteinet har et N-terminalt RNA-helikasemotiv som er etterfulgt av 2 RNase lll-katalytiske domener og et dsRNA-bindende motiv, lignende drosha RNase III-familien. Det er nære homologer i S. pombe (Acc. Q09884), A. thaliana (Acc. AF187317), D. melanogaster (Acc. AE003740) og menneske (Acc. AB028449)
(Filippov et al., 2000; Jacobsen et al., 1999; Matsuda et al., 2000). Kanskje er K12H4.8 RNase lll/helikasen den sannsynlige kandidaten som er involvert i RNAi.
Genetiske screeninger i C. elegans identifiserte rde-1 og rde-4 som essensielle for aktivering av RNAi uten en effekt på transposonmobilisering eller kosuppresjon (Dernburg et al., 2000; Grishok et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Tabara et al., 1999). Dette førte til hypotesen om at disse genene er viktige for dsRNA-prosessering, men ikke er involvert i mRNA-målnedbrytning. Funksjonen til begge genene er fortsatt ukjent, rde-1 genproduktet er et medlem av en familie med proteiner som ligner på kaninproteinet elF2C (Tabara et al., 1999), og sekvensen til rde-4 har enda ikke blitt beskrevet. Fremtidig biokjemisk karakterisering av disse proteinene bør avsløre deres molekylære funksjon.
Prosessering til siRNA-dupleksene ser ut til å starte fra endene til begge rettendede dsRNAer eller dsRNA'er med korte (1-5 nt) 3' overheng, og fortsetter i bortimot 21-23 nt trinn. Lange (-20 nt) 3' overhengende ender på korte dsRNA'er undertrykker RNAi, muligens via interaksjon med enkelttrådede RNA-bindende proteiner. Undertrykkelsen av RNAi med enkelttrådede regioner som flankerer kort dsRNA og mangelen på siRNA-dannelse fra korte 30 bp dsRNA'er kan forklare hvorfor strukturerte regioner som ofte er i mRNA'er ikke fører til aktivering av RNAi.
Uten ønske om å være bundet av teori, antar vi at dsRNA-prosesseringsproteinene eller en undergruppe av disse forblir assosiert med siRNA-dupleksen etter prosesseringsreaksjonen. Retningen til siRNA-dupleksen i forhold til disse proteinene avgjør hvilken av de to komplementære trådene som guider mål-RNA nedbrytning. Kjemisk syntetiserte siRNA-duplekser guider kutting av sens- så vel som antisens mål-RNA ettersom de kan assosiere med proteinkomponentene i hver av de to mulige retningene.
Bemerkelsesverdig funn av at syntetiske 21 og 22 nt siRNA-duplekser kan bli anvendt for effektiv mRNA-nedbrytning tilveiebringer nye verktøy for sekvensspesifikk regulering av genekspresjon i funksjonell genteknologi, så vel som biomedisinske studier. siRNA'ene kan være effektive i mammalske systemer, der lange dsRNA'er ikke kan bli anvendt pga. aktiveringen av PKR-responsen (Clemens, 1997). Derfor representerer siRNA-dupleksene et nytt alternativ til antisens- eller ribozymterapeutika.
Eksempel 2
RNA-interferens i humane vevskulturer
2.1 Fremgangsmåter
2.1.1 RNA-fremstilling
21 nt RNA'er ble syntetisert kjemisk ved anvendelse av Expedite RNA-fosforamiditter og tymidinfosforamiditt (Proligo, Tyskland). Syntetiske oligonukleotiderfikk fjernet beskyttelsen og gelrenset (Eksempel 1), etterfulgt av Sep-Pak C18 kassett (Waters, Milford, MA, USA) rensing (Tuschl, 1993). siRNA-sekvensene rettet mot GL2- (Acc. X65324) og GL3-luciferase (Acc. U47296) svarte til de kodende regionene 153-173 i forhold til det første nukleotidet i startkodonet, siRNA'er rettet mot RL (Acc. AF025846) svarte til region 119-129 etter startkodonet. Lengre RNA'er ble transkribert med T7 RNA-polymerase fra PCR-produkter, etterfulgt av gel- og Sep-Pak rensing. De 49 og 484 bp GL2 eller GL3 dsRNA'ene svarte til henholdsvis posisjon 113-161 og 113-596 i forhold til translasjonsstart; de 50 og 501 bp RL dsRNA'ene svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618. PCR-templater for dsRNA-syntese rettet mot humanisert GFP (hG) ble amplifisert fra pAD3 (Kehlenbach, 1998), hvorved 50 og 501 bp hG dsRNA svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618 i forhold til startkodonet.
For hybridisering av siRNA'er ble 20 \ iM enkelttråder inkubert i hybridiseringsbuffer
(100 mM kaliumacetat, 30 mM HEPES-KOH ved pH 7,4, 2 mM magnesiumacetat)
i 1 min ved 90 °C etterfulgt av 1 time ved 37 °C. 37 °C inkuberingstrinnet ble forlenget natten over for 50 og 500 bp dsRNA'ene, og disse
hybridiseringsreaksjonene ble utført ved trådkonsentrasjoner på henholdsvis 8,4 \ M og 0,84 \ iM.
2.1.2 Cellekultur
S2-celler ble ekspandert i Schneiders £>rosop/7//a-medium (Life Technologies) supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin ved 25 °C. 293, NIH/3T3, HeLa S3, COS-7 celler ble dyrket ved 37 °C i Dulbeccos modifiserte Eagles-medium supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 (ig/ml streptomycin. Celler ble regelmessig fortynnet og dyrket videre for å opprettholde eksponentiell vekst. 24 timer før transfeksjon ved ca. 80 % sammenhengende dekke av celler ble mammalske celler trypsinert og fortynnet 1:5 med ferskt medium uten antibiotika (1-3 x 10<5>celler/ml) og overført til 24-brønners plater (500 (il/brønn). S2-celler ble ikke trypsinert før fortynning. Transfeksjon ble utført med Lipofectamin2000-reagens (Life Technologies) som beskrevet av produsenten for adherente cellelinjer. 1,0 \ ig pGL2-kontroll (Promega) eller pGL3-kontroll (Promega), 0,1 jxg pRL-TK (Promega) og 0,28^g siRNA-dupleks eller dsRNA, formulert inn i liposomer, ble tilsatt pr. brønn; det endelige volumet var 600 \ ii pr. brønn. Celler ble inkubert 201 etter transfeksjon og fremstod sunne deretter. Luciferaseekspresjon ble deretter monitorert med dual luciferasetest (Promega). Transfeksjonseffektivitet ble bestemt med fluorescensmikroskopi for mammalske cellelinjer etter kotransfeksjon av 1,1 \ xg hGFP-kodende pAD3 og 0,28 \ xg invGL2 inGL2 siRNA og var 70-90 %. Rapportørplasmider ble amplifisert i XL-1 Blue (Stratagene) og renset ved anvendelse av Qiagen EndoFree Maxi Plasmid-testsettet.
2.2 Resultater og diskusjon
For å teste om siRNA'er også kan mediere RNAi i vevskultur, syntetiserte vi 21 nt siRNA-duplekser med symmetriske 2 nt 3' overheng rettet mot rapportørgener som koder for Renilla reniformis og to sekvensvarianter av ildflue ( Photinus pyralis, GL2 og GL3) luciferaser (Figur 8a, b). siRNA-dupleksene ble kotransfektert med rapportørplasmidkombinasjonene pGL2/pRL eller pGL3/pRL inn i D. melanogaster Schneider S2-celler eller mammalske celler ved anvendelse av kationiske liposomer. Luciferaseaktiviteter ble bestemt 201 etter transfeksjon. I alle cellelinjer som ble testet observerte vi spesifikk reduksjon av ekspresjonen av rapportørgenene i nærvær av beslektede siRNA-duplekser (Figur 9a-j). De absolutte luciferaseekspresjonsnivåene var bemerkelsesverdig upåvirket av ikke-beslektede siRNAer, hvilket indikerer fravær av skadelige bivirkninger med 21 nt RNA-duplekser (f.eks. Figur 10a-d for HeLa-celler). I D. melanogaster S2-celler (Figur 9a, b) var den spesifikke inhibisjonen av luciferaser komplett. I mammalske celler, der rapportørgenene ble uttrykt 50- til 100 ganger sterkere, var den spesifikke suppresjonen mindre komplett (Figur 9c-j). GL2-ekspresjon ble redusert 3- til 12-fold, GL3-ekspresjon 9- til 25-fold og RL-ekspresjon 1- til 3-fold i respons til de beslektede siRNA'ene. For 293-celler var binding av RL-luciferase med RL-siRNA'er ineffektiv, selv om GL2- og GL3-mål responderte spesifikt (Figur 9i, j). Mangelen på reduksjon av RL-ekspresjon i 293-celler kan skyldes dens 5- til 20-fold høyere ekspresjon sammenlignet med enhver annen testet mammalsk cellelinje og/eller begrenset tilgjengelighet av målsekvensen pga. RNA-sekundær struktur eller assosierte proteiner. Ikke desto mindre indikerte spesifikk binding av GL2- og GL3-luciferase med de beslektede siRNA-dupleksene at RNAi også virker 1 293-celler. 2 nt 3' overhenget i alle siRNA-duplekser, bortsett fra uGL2, bestod av (2-deoksy) tymidin. Substitusjon av uridin med tymidin i 3' overhenget ble godt tolerert i D. melanogaster in wfro-systemet, og sekvensen til overhenget var ikke kritisk for målgjenkjennelse. Tymidinoverhenget ble valgt fordi det angivelig skal øke nukleaseresistens til siRNA'er i vevsdyrkningsmediet og i transfekterte celler. Faktisk var det tymidinmodifiserte GL2 siRNA'et litt mer effektiv enn det ikke-modifiserte uGL2 siRNA'et i alle cellelinjer som ble testet (Figur 9a, c, e, g, i). Det er tenkelig at videre modifiseringer av de 3' overhengende nukleotidene kan gi ekstra fordeler til levering og stabilitet av siRNA-duplekser.
I kotransfeksjonseksperimenter ble 25 nM siRNA-duplekser med hensyn til det endelige volumet med vevsdyrkningsmedium anvendt (Figur 9, 10). Økning av siRNA-konsentrasjonen til 100 nM økte ikke de spesifikke inaktiveringseffektene, men begynte å affisere transfeksjonseffektivitet pga. konkurranse for liposominnkapsling mellom plasmid-DNA og siRNA (resultater er ikke vist). Reduksjon av siRNA-konsentrasjonen til 1,5 nM reduserte ikke den spesifikke inaktiveringseffekten (resultater er ikke vist), selv om siRNA'ene nå bare var 2- til 20-fold mer konsentrert enn DNA-plasmidene. Dette antyder at siRNA'er er usedvanlig kraftige reagenser for mediering av geninaktivering og at siRNA'er er effektive ved konsentrasjoner som er flere størrelsesordener under konsentrasjonene anvendt i konvensjonelle antisens- eller ribozymgenrettede eksperimenter.
For å monitorere effekten av lengre dsRNA'er på mammalske celler, ble 50 og 500 bp dsRNA'er beslektet med rapportørgenene fremstilt. Som uspesifikk kontroll ble dsRNA'erfra humanisert GFP (hG) (Kehlenbach, 1998) anvendt. Når dsRNAer ble kotransfektert i identiske mengder (ikke konsentrasjoner) som siRNA-dupleksene, ble rapportørgenekspresjonen redusert sterkt og uspesifikt. Denne effekten er vist for HeLa-celler som et representativt eksempel (Figur 10a-d). De absolutte luciferaseaktivitetene ble uspesifikt redusert henholdsvis 10- til 20-fold med 50 bp dsRNA og 20- til 200-fold med 500 bp dsRNA-kotransfeksjon. Lignende uspesifikke effekter ble observert for COS-7 og NIH/3T3 celler. For 293-celler ble en 10- til 20-fold uspesifikk reduksjon bare observert for 500 bp dsRNA'er. Uspesifikk reduksjon i rapportørgenekspresjon med dsRNA > 30 bp var forventet som del av interferonresponsen.
Overraskende, til tross for den sterke, uspesifikke reduksjonen i rapportørgenekspresjon, detekterte vi reproduserbart ekstra sekvensspesifikk, dsRNA-mediert inaktivering. De spesifikke inaktiveringseffektene var imidlertid bare åpenbar når de relative rapportørgenaktivitetene ble normalisert i forhold til hG dsRNA-kontrollene (Figur 10e, f). En 2- til 10-fold spesifikk reduksjon i respons til beslektet dsRNA ble observert, også i de andre tre mammalske cellelinjene som ble testet (resultater er ikke vist). Spesifikke inaktiveringseffekter med dsRNAer (356-1662 bp) ble tidligere rapportert i CHO-K1 celler, men mengdene av dsRNA som var nødvendige for å detektere en 2- til 4-fold spesifikk reduksjon var ca. 20-fold høyere enn i våre eksperimenter (Ui-Tei, 2000). Også CHO-K1 celler ser ut til å mangle interferonresponsen. I en annen rapport ble 293, NIH/3T3 og BHK-21 celler testet for RNAi ved anvendelse av luciferase/lacZ rapportørkombinasjoner og 829 bp spesifikt lacZ- eller 717 bp uspesifikt GFP-dsRNA (Caplen, 2000). Det mislykkede forsøket på å detektere RNAi i dette tilfellet kan skyldes den mindre sensitive luciferase/lacZ-rapportørtesten og lengdeforskjellene mellom mål og kontroll-dsRNA. Samlet antyder våre resultater at RNAi er aktiv i mammalske celler, men at inaktiveringseffekten er vanskelig å detektere, hvis interferonsystemet er aktivert av dsRNA > 30 bp.
I korthet har vi for første gang demonstrert siRNA-mediert geninaktivering i mammalske celler. Anvendelsen av korte siRNA'er er lovende for inaktivering av genfunksjon i human vevskultur og utvikling av genspesifikke terapeutika.
Eksempel 3
Spesifikk inhibisjon av genekspresjon med RNA-interferens
3.1 Materialer og fremgangsmåter
3.1.1 RNA-fremstilling og RNAi-test
Kjemisk RNA-syntese, hybridisering og luciferasebaserte RNAi-tester ble utført som beskrevet i Eksempel 1 eller 2 eller i tidligere publikasjoner (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Alle siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase, og luciferase mRNA-sekvensen var avledet fra pGEM-luc (GenBank acc. X65316) som beskrevet (Tuschl et al., 1999). siRNA-dupleksene ble inkubert i D. melanogaster RNAi/translasjonsreaksjon i 15 min før tilsetning av mRNA'er. Translasjonsbaserte RNAi-tester ble minst utført i triplikater.
For kartlegging av kutting av sens mål-RNA, ble et 177-nt transkript generert, som svarer til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet, etterfulgt av 17-nt komplementet til SP6-promotersekvensen. For kartlegging av antisens mål-RNA kutting, ble et 166-nt transkript dannet fra et templat, som ble amplifisert fra plasmidsekvens med PCR ved anvendelse av 5' primer TAATACGACTCACTATAGAGCCCATATCGTTTCATA (T7-promoter understreket) og 3' primer AGAGGATGGAACCGCTGG. Målsekvensen svarer til komplementet til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 50-215 i forhold til startkodonet. Guanylyltransferasemerkning ble utført som tidligere beskrevet (Zamore et al., 2000). For kartlegging av mål-RNA kutting ble 100 nM siRNA-dupleks inkubert med 5 til 10 nM mål-RNA i D. me/anogasfer-embryolysat under standard betingelser (Zamore et al., 2000) i 2 t ved 25 °C. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 8 volumer av proteinase K-buffer (200 mM Tris-HCI pH 7,5, 25 mM EDTA, 300 mM NaCI, 2 vektprosent/volum natriumdodecylsulfat). Proteinase K (E. M. Merck, løst i vann) ble satt til en endelig konsentrasjon på 0,6 mg/ml. Reaksjonene ble deretter inkubert i 15 min ved 65 °C, ekstrahert med fenol/kloroform/isoamylalkohol (25:24:1) og presipitert med 3 volumer av etanol. Prøver ble overført til 6 % sekvenseringsgeler. Lengdestandarder ble generert ved delvis RNase T1-kutting og delvis basehydrolyse av cap-merkede sens- eller antisens mål-RNA'er.
3.2 Resultater
3.2.1 Variasjon av 3' overhenget i duplekser av 21-nt siRNA'er
Som beskrevet ovenfor var 2 eller 3 uparede nukleotider på 3' enden av siRNA-duplekser mer effektive i mål-RNA nedbrytning enn de respektive rettendede dupleksene. For å utføre en mer omfattende analyse av funksjonen til de terminale nukleotidene, syntetiserte vi fem 21-nt sens-siRNA'er, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til mål-RNA'et, og åtte 21-nt antisens-siRNA'er, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til målet (Figur 11 A). Ved å kombinere sens- og antisens-siRNA'er ble åtte serier av siRNA-duplekser med syntetisk overhengende ender generert som dekker et område på 7-nt 3' overheng til 4-nt 5' overheng. Interferensen av siRNA-duplekser ble målt ved anvendelse av dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase-mRNA, og Renilla reniformis luciferase-mRNA ble anvendt som intern kontroll. Luminescensforholdet mellom mål- og kontrolluciferaseaktivitet ble bestemt i nærvær av siRNA-dupleks og ble normalisert til forholdet observert i fravær av dsRNA. For sammenligning er interferensforholdet av lange dsRNA'er (39 til 504 pb) vist i Figur 11B. Interferensforholdene ble bestemt ved konsentrasjoner på 5 nM for lange dsRNA'er (Figur 11 A) og ved 100 nM for siRNA-duplekser (Figur 11C-J). 100 nM konsentrasjonene av siRNA'er ble valgt, fordi fullstendig prosessering av 5 nM 504 bp dsRNA ville resultere i 120 nM totale siRNA-duplekser.
Evnen 21-nt siRNA-duplekser har til å mediere RNAi er avhengig av antallet overhengende nukleotider eller basepar dannet. Duplekser med fire til seks 3' overhengende nukleotider kunne ikke mediere RNAi (Figur 11 C-F), hvilket også var tilfelle for duplekser med to eller flere 5' overhengende nukleotider (Figur 11 G-J). Dupleksene med 2-nt 3' overheng var mest effektive til å mediere RNA-interferens, skjønt effektiviteten til inaktivering også var sekvensavhengig, og forskjeller opp til 12-fold ble observert for ulike siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (sammenligne Figur 11 D-H). Duplekser med rette ender, 1-nt 5' overheng eller 1- til 3-nt 3' overheng var enkelte ganger funksjonelle. Den lille inaktiveringseffekten observert for siRNA-dupleksen med 7-nt 3' overheng (Figur 11C) kan skyldes en antisenseffekt av det lange 3' overhenget i stedet for RNAi. Sammenligning av effektiviteten til RNAi mellom lange dsRNAer (Figur 11B) og de mest effektive 21-nt siRNA-dupleksene (Figur 11E, G, H) antyder at en enkel siRNA-dupleks ved konsentrasjon på 100 nM kan være like effektiv som 5 nM 504 bp dsRNA.
3.2.2 Lengdevariasjon av sens-siRNA'et paret til et uforandret 21-nt antisens-siRNA
For å utforske effekten av siRNA-lengde på RNAi, fremstilte vi tre serier av siRNA-duplekser, ved å kombinere tre 21-nt antisenstråder med åtte, 18- til 25-nt sens tråder. 3' overhenget til antisens-siRNAet ble bestemt til 1, 2 eller 3 nt i hver siRNA-dupleksserie, mens sens-siRNA'et ble variert på dets 3' ende (Figur 12A). Uavhengig av lengden til sens-siRNAet fant vi at duplekser med 2-nt 3' overheng av antisens-siRNA (Figur 12C) var mer aktive enn de med 1- eller 3-nt 3' overheng (Figur 12B, D). I den første serien med 1-nt 3' overheng av antisens-siRNA var duplekser med et 21- og 22-nt sens-siRNA, som henholdsvis bærer et 1- og 2-nt 3' overheng av sens-siRNA, mest aktive. Duplekser med 19- til 25-nt sens-siRNA'er var også i stand til å mediere RNA, men i en mindre grad. Likeledes, i den andre serien med 2-nt overheng av antisens-siRNA, var 21-nt siRNA-dupleksen med 2-nt 3' overheng mest aktiv, og enhver annen kombinasjon med de 18- til 25-nt sens-siRNA'ene var aktiv til en signifikant grad. I den siste serien med 3-nt antisens-siRNA 3' overheng var bare dupleksen med et 20-nt sens-siRNA og 2-nt sens 3' overhenget i stand til å redusere mål-RNA ekspresjon. Samlet antyder disse resultatene at siRNA-lengden, så vel som lengden av 3' overhenget, er viktig og at duplekser av 21-nt siRNA'er med 2-nt 3' overheng er optimale for RNAi.
3.2.3 Lengdevariasjon av siRNA-duplekser med et konstant 2-nt 3' overheng Vi undersøkte deretter effekten av samtidig forandring av lengden til begge siRNA-tråder ved å opprettholde symmetriske 2-nt 3' overheng (Figur 13A). To serier av siRNA-duplekser ble fremstilt inkludert 21-nt siRNA-dupleksen i Figur 11H som referanse. Lengden på dupleksene ble variert mellom 20 til 25 bp, ved å forlenge det baseparede segmentet på 3' enden av sens-siRNA'et (Figur 13B) eller på 3' enden av antisens-siRNAet (Figur 13C). Duplekser av 20 til 23 bp forårsaket spesifikk suppresjon av målluciferaseaktivitet, men 21-nt siRNA-dupleksen var minst 8 ganger mer effektiv enn hvilken som helst av de andre dupleksene. 24- og 25-nt siRNA-duplekser resulterte ikke i noen detekterbar interferens.
Sekvensspesifikke effekter var underordnet ettersom variasjoner på begge endene av dupleksen førte til lignende effekter.
3.2.4 2'-Deoksy- og 2'-0-metyl-modifiserte siRNA-duplekser For å vurdere viktigheten av siRNA-riboserestene for RNAi, ble duplekser med 21-nt siRNA'er og 2-nt 3' overheng med 2-deoksy- eller 2'-0-metyl-modifiserte tråder undersøkt (Figur 14). Substitusjon av 2-nt 3' overhengene med 2'-deoksynukleotider hadde ingen effekt, og til og med utbyttingen av to ekstra ribonukleotider nær overhengene i den parede regionen dannet signifikant aktive siRNA'er. Således ble 8 av 42 nt i en siRNA-dupleks byttet ut med DNA-rester uten tap av aktivitet. Fullstendig substitusjon av én eller begge siRNA-trådene med 2'-deoksyrester fjernet imidlertid RNAi, hvilket også var tilfelle for substitusjon med 2'-0-metylrester.
3.2.5 Definisjon av mål-RNA kutteseter
Mål RNA-kutteposisjoner ble tidligere bestemt for 22-nt siRNA-duplekser og for en 21-nt/22-nt dupleks. Det ble funnet at posisjonen for mål-RNA kuttingen var lokalisert i senteret av regionen bundet av siRNA-dupleksen, 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som var komplementært til 21- eller 22-nt siRNA-guidesekvensen. Fem forskjellige 21 nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (Figur 15A) ble inkubert med 5' cap-merket sens eller antisens mål-RNA i D. melanogaster-\ ysat (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). 5' kutteproduktene ble bestemt på sekvenseringsgeler (Figur 15B). Mengden av kuttet sens mål-RNA korrelerer med effektiviteten til siRNA-duplekser bestemt i den translasjonsbaserte testen, og siRNA-dupleksene 1, 2 og 4 (Figur 15B og 11H, G, E) kutter mål-RNA raskere enn dupleksene 3 og 5 (Figur 15B og 11F, D). Summen av radioaktivitet til 5' kutteproduktet og det tilsatte mål-RNA'et var ikke konstant over tid, og 5' kutteproduktene akkumulerte ikke. Antakelig blir kutteproduktene, når de er frigjort fra siRNA-endonukleasekomplekset, raskt degradert fordi de mangler enten poly(A) halen eller 5'-cap.
Kuttesetene for både sens og antisens mål-RNA'er ble lokalisert i midten av regionen dekket av siRNA-dupleksene. Kuttesetene for hvert mål dannet med de 5 ulike dupleksene varierte med 1-nt i henhold til 1-nt forskyvningen av dupleksene langs målsekvensene. Målet ble kuttet nøyaktig 11 nt nedstrøms for målposisjonen komplementær til det 3' ytterste nukleotidet av det sekvenskomplementære guide-siRNA'et (Figur 15A, B).
For å avgjøre hvorvidt 5' eller 3' enden til guide-siRNAet bestemmer mål-RNA kutting, tenkte vi ut den eksperimentelle strategien beskrevet i Figur 16A og B. Et 21-nt antisens-siRNA, som ble holdt uforandret for denne studien, ble paret med sens-siRNA'er som var modifisert på enten deres 5' eller 3' ender. Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting ble bestemt som beskrevet ovenfor. Forandringer i 3' enden av sens-siRNA'et, monitorert for 1-nt 5' overheng til 6-nt 3' overheng, påvirket verken posisjonen til sens eller antisens mål-RNA kutting (Figur 16C). Forandringer i 5' enden av sens-siRNAet affiserte ikke sens mål-RNA kuttingen (Figur 16D, øverste panel), som var forventet fordi antisens-siRNAet var uforandret. Imidlertid var antisens mål-RNA kuttingen affisert og sterkt avhengig av 5' enden til sens-siRNAet (Figur 16D, nederste panel). Antisensmålet ble bare kuttet når sens-siRNA'et var 20 eller 21 nt langt og kutteposisjonen forskjellig med 1-nt, hvilket antyder at 5' enden til det målgjenkjennende siRNA'et bestemmer mål-RNA kutting. Posisjonen lokaliseres mellom nukleotid 10 og 11 når man teller i oppstrøms retning fra målnukleotidet paret til det 5' ytterste nukleotidet av guide-siRNA'et (se også Figur 15A).
3.2.6 Sekvenseffekter og 2'-deoksysubstitusjoner i 3' overhenget Et 2-nt 3' overheng er foretrukket for siRNA-funksjon. Vi ønsket å vite om sekvensen til de overhengende nukleotidene bidrar til målgjenkjennelse eller om det bare er en egenskap som er nødvendig for rekonstitusjon av endonukleasekomplekset (RISC eller siRNP). Vi syntetiserte sens- og antisens-siRNA'er med AA, CC, GG, UU og UG 3' overheng og inkluderte 2' deoksymodifiseringene TdG og TT. Villtype-siRNAene inneholdt AA i sens 3' overhenget og UG i antisens 3' overhenget (AA/UG). Alle siRNA-dupleksene var funksjonelle i interferenstesten og reduserte målekspresjon minst 5-fold (Figur 17). De mest effektive siRNA-dupleksene som reduserte målekspresjon mer enn 10-fold var av sekvenstypen NN/UG, NN/UU, NN/TdG og NN/TT (N, hvilket som helst nukleotid). siRNA-duplekser med et antisens-siRNA 3' overheng av AA, CC eller GG var en faktor 2 til 4 mindre aktiv sammenlignet med villtypesekvensen UG eller
mutanten UU. Denne reduksjonen i RNAi-effektivitet skyldes sannsynligvis bidraget av det nest siste 3' nukleotidet til sekvensspesifikk målgjenkjennelse, ettersom det 3' terminale nukleotidet ble forandret fra G til U uten effekt.
Forandringer i sekvensen til 3' overhenget av sens-siRNAet viste ikke noen sekvensavhengige effekter, som var forventet fordi sens-siRNA'et ikke må bidra til sens mål-mRNA gjenkjennelse.
3.2.7 Sekvensspesifisitet for målgjenkjennelse
For å undersøke sekvensspesifisiteten for målgjenkjennelse, innførte vi sekvensforandringer i de parede segmentene av siRNA-duplekser og bestemte effektiviteten til inaktivering. Sekvensforandringer ble innført ved å invertere korte segmenter med 3- eller 4-nt lengde eller som punktmutasjoner (Figur 18). Sekvensforandringene i én siRNA-tråd ble kompensert i den komplementære siRNA-tråden for å unngå og bringe forstyrrelse i den baseparede siRNA-dupleksstrukturen. Sekvensen til alle 2-nt 3' overhengene var TT (T, 2'-deoksytymidin) for å redusere syntesekostnader. TT/TT referanse siRNA-dupleksen var sammenlignbar i RNAi med villtype siRNA-dupleksen AA/UG (Figur 17). Evnen til å mediere rapportør mRNA-nedbrytning ble kvantifisert ved anvendelse av den translasjonsbaserte luminescenstesten. Duplekser av siRNA'er med inverterte sekvenssegmenter viste dramatisk redusert evne for binding av ildflueluciferaserapportør (Figur 18). Sekvensforandringene lokalisert mellom 3' enden og midten av antisens-siRNAet fjernet fullstendig mål-RNA gjenkjennelse, men mutasjoner nær 5' enden av antisens-siRNAet har en liten grad av inaktivering. Transversjon av A/U baseparet lokalisert direkte ovenfor det antatte mål-RNA kuttesetet, eller ett nukleotid lenger vekk fra det antatte setet, hindret mål-RNA kutting, og indikerer derfor at enkel mutasjon i senteret av en siRNA-dupleks skjelner mellom feilmatchede mål.
3.3 Diskusjon
siRNA'er er verdifulle reagenser for inaktivering av genekspresjon, ikke bare i insektceller, men også i mammalske celler, med et stor potensial for terapeutisk anvendelse. Vi har systematisk analysert de strukturelle determinantene til siRNA-duplekser som er nødvendig for å fremme effektiv mål-RNA nedbrytning i D.
me/anogasfer-embryolysat, og tilveiebringer derfor regler for utformingen av de mest effektive siRNA-dupleksene. En perfekt siRNA-dupleks kan inaktivere genekspresjon med en effektivitet som er sammenlignbar med et 500 bp dsRNA, gitt at sammenlignbare mengder av totalt RNA blir anvendt.
3.4 siRNA-brukerveiledning
Effektivt inaktiverende siRNA-duplekser er fortrinnsvis sammensatt av 21-nt antisens-siRNA'er og bør bli valgt for å danne en 19 bp dobbeltheliks med 2-nt 3' overhengende ender. 2-deoksysubstitusjoner av 2-nt 3' overhengende ribonukleotider affiserer ikke RNAi, men bidrar til å redusere kostnadene av RNA-syntese og kan øke RNAse-resistens av siRNA-duplekser. Mer omfattende 2'-deoksy- eller 2-O-metylmodifiseringer reduserer imidlertid evnen siRNA'er har til å mediere RNAi, trolig ved å interferere med proteinassosiering for siRNAP-montering.
Målgjenkjennelse er en svært sekvensspesifikk prosess mediert av siRNA'et som er komplementært til målet. Det 3' ytterste nukleotidet til guide-siRNAet bidrar ikke til spesifisitet av målgjenkjennelse, mens det nest siste nukleotidet av 3' overhenget påvirker mål-RNA kutting, og en mismatch reduserer RNAi 2- til 4-fold. 5' enden av et guide-siRNA virker også mer avgjørende for feilmatchet mål-RNA gjenkjennelse sammenlignet med 3' enden. Nukleotider i senteret av siRNA'et, lokalisert ovenfor mål-RNA kuttesetet, er viktige spesifisitetsdeterminanter, og til og med enkle nukleotidforandringer reduserer RNAi til ikke-detekterbart nivå. Dette antyder at siRNA-duplekser kan være i stand til å skjelne mutante eller polymorfe alleler i genmålrettede eksperimenter, som kan bli en viktig egenskap for fremtidige terapeutiske fremskritt.
Sens og antisens-siRNAer, når de er assosiert med proteinkomponentene i endonukleasekomplekset eller dets "commitmenf-kompleks, ble antydet å spille forskjellige roller; den relative retningen til siRNA-dupleksen i dette komplekset definerer hvilken tråd som kan bli anvendt for målgjenkjennelse. Syntetiske siRNA-duplekser har dyadisk symmetri med hensyn til den dobbeltheliske strukturen, men ikke med hensyn til sekvens. Assosieringen av siRNA-duplekser med RNAi-proteinene i D. melanogaster-\ ysatet vil føre til dannelse av to asymmetriske komplekser. I slike hypotetiske komplekser er det kirale miljøet forskjellig for sens-og antisens-siRNA og dermed deres funksjon. Forutsigelsen gjelder opplagt ikke for palindrome siRNA-sekvenser eller RNAi-proteiner som kan assosiere som homodimerer. For å begrense sekvenseffekter, som kan affisere forholdet mellom sens- og antisensbindende siRNP'er, foreslår vi å anvende siRNA-sekvenser med identiske 3' overhengende sekvenser. Vi anbefaler å justere sekvensen til overhenget av sens-siRNA'et til den antisens 3' overhenget har, fordi sens-siRNA'et ikke har et mål i typiske geninaktiveringseksperimenter. Asymmetri i rekonstitusjon av sens- og antisenskuttende siRNP'er kan være (delvis) ansvarlig for variasjonen i RNAi-effektivitet observert for ulike 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng anvendt i denne studien (Figur 14). Alternativt kan nukleotidsekvensen til målsetet og/eller tilgjengeligheten av mål-RNA strukturen være ansvarlig for variasjonen i effektivitet for disse siRNA-dupleksene.
Referanser
Bass, B. L. (2000). Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Cell 101, 235-238.
Bosher, J. M., og Labouesse, M. (2000). RNA interference: genetic wand and genetic watchdog. Nat. Cell Biol. 2, E31-36.
Caplen, N. J., Fleenor, J., Fire, A., og Morgan, R. A. (2000). dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105.
Catalanotto, C, Azzalin, G., Macino, G., og Cogoni, C. (2000). Gene silencing in worms and fungi. Nature 404, 245.
Chanfreau, G., Buckle, M., og Jacquier, A. (2000). Recognition of a conserved dass of RNA tetraloops by Saccharomyces cerevisiae Rnase III. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 97, 3142-3147.
Clemens, M. J. (1997). PKR - a protein kinase regulated by double-stranded RNA. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 945-949.
Cogoni, C, og Macino, G. (1999). Homology-dependent gene silencing in plants and fungi: a number of variations on the same theme. Curr. Opin. Microbiol. 2, 657-662.
Dalmay, T., Hamilton, A., Rudd, S., Angell, S., og Baulcombe, D. C. (2000). An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell 101, 543-553.
Dernburg, A. F., Zalevsky, J., Colaiacovo, M. P., og Villeneuve, A. M. (2000). Transgene-mediated cosuppression in the C. elegans germ line. Genes & Dev. 14, 1578-1583.
Dunn, J. J. (1982). Ribonuclease III. I The enzymes, vol 15, del B, P. D. Boyer, red. (New York: Academic Press), s. 485-499.
Filippov, V., Solovyev, V., Filippova, M., og Gill, S. S. (2000). A novel type of RNase III family proteins in eukaryotes. Gene 245, 213-221.
Fire, A. (1999). RNA-triggered gene silencing. Trends Genet. 15, 358-363.
Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., og Mello, C. C.
(1998). Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811.
Grishok, A., Tabara, H., og Mello, C. C. (2000). Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. Science 287, 2494-2497.
Hamilton, A. J., og Baulcombe, D. C. (1999). A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science 286, 950-952.
Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D., og Hannon, G. J. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296.
Jacobsen, S. E., Running, M. P., og M., M. E. (1999). Disruption of an
RNA helicase/RNase III gene in Arabidopsis causes unregulated cell division in floral meristems. Development 126, 5231-5243.
Jensen, S., Gassama, M. P., og Heidmann, T. (1999). Tårning of transposable elements by homology-dependent gene silencing. Nat. Genet. 21, 209-212.
Kehlenbach, R. H., Dickmanns, A. & Gerace, L. (1998). Nucleocytoplasmic shuttling factors including Ran and CRM1 mediate nuclear export of NFAT in vitro. J. Cell Biol. 141, 863-874.
Kennerdell, J. R., og Carthew, R. W. (1998). Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell 95, 1017-1026.
Ketting, R. F., Haverkamp, T. H., van Luenen, H. G., og Plasterk, R. H. (1999). Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNaseD. Cell 99,133-141.
Ketting, R. F., og Plasterk, R. H. (2000). A genetic link between cosuppression and RNA interference in C. elegans. Nature 404, 296-298.
Lucy, A. P., Guo, H. S., Li, W. X., og Ding, S. W. (2000). Suppression of post-transcriptional gene silencing by a plant viral protein localized in the nucleus. EMBO J. 19, 1672-1680.
Matsuda, S., Ichigotani, Y., Okuda, T., Irimura, T., Nakatsugawa, S., og Hamaguchi, M. (2000). Molecular doning and characterization of a novel human gene (HERNA) which encodes a putative RNA-helicase. Biochim. Biophys. Acta 31, 1-2.
Milligan, J. F., og Uhlenbeck, O. C. (1989). Synthesis of small RNAs using T7 RNA polymerase. Methods Enzymol. 180, 51-62.
Mourrain, P., Beclin, C, Elmayan, T., Feuerbach, F., Godon, C, Morel, J. B., Jouette, D., Lacombe, A. M., Nikic, S., Picault, N., Remoue, K., Sanial, M., Vo, T. A., og Vaucheret, H. (2000). Arabidopsis SGS2 and SGS3 genes are required for posttranscriptional gene silencing and natural virus resistance. Cell 101, 533-542.
Ngo, H., Tschudi, C, Gull, K., og Ullu, E. (1998). Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 95, 14687-14692.
Nicholson, A. W. (1999). Function, mechanism and regulation of bacterial ribonucleases. FEMS Microbiol. Rev. 23, 371-390.
Oelgeschlager, M., Larrain, J., Geissert, D., og De Robertis, E. M. (2000). The evolutionarily conserved BMP-binding protein Twisted gastrulation promotes BMP signaling. Nature 405, 757-763.
Pan, T., og Uhlenbeck, O. C. (1992). In vitro selection of RNAs that undergo autolytic cleavage with Pb<2+>. Biochemistry 31, 3887-3895.
Pelissier, T., og Wassenegger, M. (2000). A DNA target of 30 bp is sufficient for RNA-directed methylation. RNA 6, 55-65.
Plasterk, R. H., og Ketting, R. F. (2000). The silence of the genes. Curr. Opin. Genet. Dev. 10, 562-567.
Ratcliff, F. G., MacFarlane, S. A., og Baulcombe, D. C. (1999). Gene Silencing without DNA. RNA-mediated cross-protection between viruses. Plant Cell 11, 1207-1216.
Robertson, H. D. (1990). Escherichia coli ribonuclease III. Methods Enzymol. 81, 189-202.
Robertson, H. D. (1982). Escherichia coli ribonuclease III cleavage sites. Cell 30, 669-672.
Romaniuk, E., McLaughlin, L. W., Nelson, T., og Romaniuk, P. J. (1982). The effect of acceptor oligoribonucleotide sequence on the T4 RNA ligase reaction. Eur J Biochem 125, 639-643.
Sharp, P. A. (1999). RNAi and double-strand RNA. Genes & Dev. 13, 139-141.
Sijen, T., og Kooter, J. M. (2000). Post-transcriptional gene-silencing: RNAs on the attack or on the defense? Bioessays 22, 520-531.
Smardon, A., Spoerke, J., Stacey, S., Klein, M., Mackin, N., og Maine, E. (2000). EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C. elegans. Curr. Biol. 10,169-178.
Svoboda, P., Stein, P., Hayashi, H., og Schutz, R. M. (2000). Selective reduction of dormant maternal mRNAs in mouse oocytes by RNA interference. Development 127, 4147-4156.
Tabara, H., Sarkissian, M., Kelly, W. G., Fleenor, J., Grishok, A., Timmons, L, Fire, A., og Mello, C. C. (1999). The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. Cell 99, 123-132.
Tuschl, T., Ng, M. M., Pieken, W., Benseler, F., og Eckstein, F. (1993). Importance of exocyclic base functional groups of central core guanosines for hammerhead ribozyme activity. Biochemistry 32, 11658-11668.
Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (1998). Selection in vitro of novel ribozymes from a partially randomized U2 and U6 snRNA library. EMBO J. 17, 2637-2650.
Tuschl, T., Zamore, P. D., Lehmann, R., Bartel, D. P., og Sharp, P. A. (1999). Targeted mRNA degradation by double-stranded RNA in vitro. Genes & Dev. 13, 3191-3197.
Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y. & Saigo, K. (2000). Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Letters 479, 79-82.
Verma, S., og Eckstein, F. (1999). Modified oligonucleotides: Synthesis and strategy for users. Annu. Rev. Biochem. 67, 99-134.
Voinnet, O., Lederer, C, og Baulcombe, D. C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell 103, 157-167.
Wassenegger, M. (2000). RNA-directed DNA methylation. Plant Mol. Biol. 43, 203-220.
Wianny, F., og Zernicka-Goetz, M. (2000). Specific interference with gene function by double-stranded RNA in early mouse development. Nat. Cell Bio. 2, 70-75.
Wu, H., Xu, H., Miraglia, L. J., og Crooke, S. T. (2000). Human RNase III is a 160 kDa Protein Involved in Preribosomal RNA Processing. J. Biol. Chem. 17,17.
Yang, D., Lu, H. og Erickson, J. W. (2000) Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in drosophilia embryos. Curr. Biol., 10, 1191-1200.
Zamore, P. D., Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (2000). RNAi: Double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 101, 25-33.
Zhang, K., og Nicholson, A. W. (1997). Regulation of ribonuclease III processing by double-helical sequence antideterminants. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 94, 13437-13441.

Claims (17)

1. Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl, hvor hver RNA-tråd har en lengde fra 19-23 nukleotider, hvor nevnte RNA-molekyl er i stand til RNA interferens, hvor RNA molekylet omfatter minst én modifisert nukleotidanalog, for anvendelse i medisin.
2. RNA-molekyl ifølge krav 1, hvor minst én tråd har et 3' overheng med fra 1-5 nukleotider, foretrukket fra 1-3 nukleotider.
3. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-3, hvor hver tråd har en lengde fra 20-22 nukleotider.
4. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 2-3, hvor 3' overhenget er stabilisert mot nedbrytning.
5. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-4, hvor den modifiserte nukleotidanalogen velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider.
6. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-3, hvor nukleotidanalogen er et sukkermodifisert ribonukleotid, hvor 2-OH gruppen er byttet ut med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR <1> , NH2 , NHR, NR2 eller CN, hvor R er Ci -C6 alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller I.
7. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-6, hvor nukleotidanalogen er et ryggradmodifisert ribonukleotid inneholdende en fosfotioatgruppe.
8. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-7, som har en sekvens som har en likhet på minst 50 prosent, foretrukket minst 70 prosent, i forhold til et forutbestemt mRNA-målmolekyl.
9. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8, hvor RNA-trådene er kjemisk eller enzymatisk syntetisert.
10. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-9, for administrering ved bærer-mediert avlevering eller injeksjon.
11. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-10, rettet mot et gen i et pattedyr, særlig et menneske.
12. RNA-molekyl ifølge krav 11, hvor genet er assosiert med en patologisk tilstand.
13. RNA-molekyl ifølge krav 12, hvor genet er et patogenassosiert gen, for eksempel et viralt gen, eller hvor genet er et tumorassosiert gen eller hvor genet er et gen assosiert med autoimmun sykdom.
14. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-13, for anvendelse i human medisin.
15. Farmasøytisk preparat som inneholder, som aktivt middel, minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-14 og en farmasøytisk bærer.
16. Preparat ifølge krav 15 for diagnostiske anvendelser.
17. Preparat ifølge krav 15 for terapeutiske anvendelser.
NO20130246A 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin NO335426B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP00126325 2000-12-01
US27966101P 2001-03-30 2001-03-30
PCT/EP2001/013968 WO2002044321A2 (en) 2000-12-01 2001-11-29 Rna interference mediating small rna molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20130246L true NO20130246L (no) 2003-07-21
NO335426B1 NO335426B1 (no) 2014-12-15

Family

ID=40529293

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032464A NO333713B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning
NO20130246A NO335426B1 (no) 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032464A NO333713B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning

Country Status (27)

Country Link
US (25) US20040259247A1 (no)
EP (3) EP2348133B1 (no)
JP (5) JP4095895B2 (no)
KR (2) KR100909681B1 (no)
CN (1) CN100523215C (no)
AT (1) ATE373724T2 (no)
AU (3) AU2002235744B8 (no)
BR (1) BRPI0115814B8 (no)
CA (1) CA2429814C (no)
CY (1) CY1119062T1 (no)
CZ (2) CZ302719B6 (no)
DE (1) DE60130583T3 (no)
DK (2) DK2813582T3 (no)
ES (2) ES2215494T5 (no)
HU (1) HU230458B1 (no)
IL (3) IL155991A0 (no)
LT (1) LTPA2021005I1 (no)
MX (1) MXPA03004836A (no)
NO (2) NO333713B1 (no)
NZ (1) NZ525888A (no)
PL (1) PL218876B1 (no)
PT (1) PT1407044E (no)
RU (2) RU2322500C2 (no)
SI (1) SI1407044T2 (no)
TR (1) TR200401292T3 (no)
WO (1) WO2002044321A2 (no)
ZA (1) ZA200303929B (no)

Families Citing this family (1262)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0642589A4 (en) * 1992-05-11 1997-05-21 Ribozyme Pharm Inc METHOD AND REAGENT TO INHIBIT VIRAL REPLICATION.
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5639647A (en) * 1994-03-29 1997-06-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'-deoxy-2'alkylnucleotide containing nucleic acid
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US20040219569A1 (en) * 1999-07-06 2004-11-04 Fruma Yehiely Gene identification method
WO2006094406A1 (en) * 2005-03-11 2006-09-14 Sarissa Inc. Antisense oligonucleotides targeted to the coding region of thymidylate synthase and uses thereof
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
WO1999049029A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd Control of gene expression
AU3751299A (en) * 1998-04-20 1999-11-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
EP2314700A1 (en) 1999-01-28 2011-04-27 Medical College of Georgia Research Institute, Inc Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US7601494B2 (en) 1999-03-17 2009-10-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion
EP1176195B1 (en) 1999-04-09 2013-05-22 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US6656698B1 (en) * 1999-06-30 2003-12-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 12832, a novel human kinase-like molecule and uses thereof
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
US8128922B2 (en) * 1999-10-20 2012-03-06 Johns Hopkins University Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10160151A1 (de) * 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8273866B2 (en) * 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
WO2005019453A2 (en) * 2001-05-18 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING CHEMICALLY MODIFIED SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20080039414A1 (en) * 2002-02-20 2008-02-14 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
WO2002081628A2 (en) * 2001-04-05 2002-10-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth, using nucleic acid based technologies
EP1272630A2 (en) 2000-03-16 2003-01-08 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
US20030084471A1 (en) * 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
US8202846B2 (en) 2000-03-16 2012-06-19 Cold Spring Harbor Laboratory Methods and compositions for RNA interference
PT1309726E (pt) * 2000-03-30 2010-03-08 Whitehead Biomedical Inst Mediadores de interferência por rna específicos de sequência de rna
BRPI0117338B1 (pt) * 2000-03-30 2016-06-21 Massachusetts Inst Technology método para produzir células animais nocauteadas in vitro e método para produzir uma célula nocauteada
US20080242627A1 (en) * 2000-08-02 2008-10-02 University Of Southern California Novel rna interference methods using dna-rna duplex constructs
US7662791B2 (en) * 2000-08-02 2010-02-16 University Of Southern California Gene silencing using mRNA-cDNA hybrids
EP1363938B1 (en) * 2000-08-03 2013-12-11 Johns Hopkins University Molecular vaccine linking an endoplasmic reticulum chaperone polypeptide to an antigen
US20080032942A1 (en) 2000-08-30 2008-02-07 Mcswiggen James RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030190635A1 (en) * 2002-02-20 2003-10-09 Mcswiggen James A. RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA
US7691821B2 (en) * 2001-09-19 2010-04-06 University Of South Florida Inhibition of SHIP to enhance stem cell harvest and transplantation
WO2009042910A2 (en) * 2007-09-26 2009-04-02 University Of South Florida Ship inhibition to direct hematopoietic stem cells and induce extramedullary hematopoiesis
US20020165192A1 (en) * 2000-09-19 2002-11-07 Kerr William G. Control of NK cell function and survival by modulation of ship activity
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US20040259247A1 (en) * 2000-12-01 2004-12-23 Thomas Tuschl Rna interference mediating small rna molecules
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
US8546143B2 (en) 2001-01-09 2013-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
EP1229134A3 (en) * 2001-01-31 2004-01-28 Nucleonics, Inc Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
US20050239731A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050158735A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050261219A1 (en) * 2001-05-18 2005-11-24 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222066A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040219671A1 (en) * 2002-02-20 2004-11-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080161256A1 (en) * 2001-05-18 2008-07-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2005014811A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF XIAP GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050196767A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA)
US20050048529A1 (en) * 2002-02-20 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2002097114A2 (en) * 2001-05-29 2002-12-05 Sirna Therapeutics, Inc. Nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of ras, her2 and hiv
US20050159382A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196781A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050079610A1 (en) * 2001-05-18 2005-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090299045A1 (en) * 2001-05-18 2009-12-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US20050014172A1 (en) 2002-02-20 2005-01-20 Ivan Richards RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003070743A1 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF G72 AND D-AMINO ACID OXIDASE (DAAO) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050182007A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050256068A1 (en) 2001-05-18 2005-11-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050136436A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050191618A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080188430A1 (en) * 2001-05-18 2008-08-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176666A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050203040A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050137155A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159380A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233996A1 (en) * 2002-02-20 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176025A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176664A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7109165B2 (en) * 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US20060148743A1 (en) * 2001-05-18 2006-07-06 Vasant Jadhav RNA interference mediated inhibition of histone deacetylase (HDAC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050209180A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050287128A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233344A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196765A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233997A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US20050164224A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153914A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164968A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070042983A1 (en) * 2001-05-18 2007-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7517864B2 (en) 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20050124566A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159381A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159378A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050054596A1 (en) * 2001-11-30 2005-03-10 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124569A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159379A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030175950A1 (en) * 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
US20050267058A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA)
US20050176663A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060142225A1 (en) * 2001-05-18 2006-06-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin dependent kinase-2 (CDK2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060211642A1 (en) * 2001-05-18 2006-09-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050119212A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176024A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050288242A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050187174A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050143333A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050282188A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164967A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040198682A1 (en) * 2001-11-30 2004-10-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2005078097A2 (en) * 2004-02-10 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING MULTIFUNCTIONAL SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (Multifunctional siNA)
US20070093437A1 (en) * 2001-05-18 2007-04-26 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of xiap gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US20070270579A1 (en) * 2001-05-18 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8008472B2 (en) 2001-05-29 2011-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
CA2790034A1 (en) 2001-06-21 2003-01-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
US20050019915A1 (en) * 2001-06-21 2005-01-27 Bennett C. Frank Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
DE10133858A1 (de) * 2001-07-12 2003-02-06 Aventis Pharma Gmbh Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression
EP2345720A3 (en) 2001-07-12 2012-01-25 University of Massachusetts In vivo production of small interfering RNAs that mediate gene silencing
ES2386775T3 (es) 2001-07-23 2012-08-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Procedimientos y composiciones para la inhibición mediada por ARNi de la expresión génica en mamíferos
US10590418B2 (en) * 2001-07-23 2020-03-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
US20090247606A1 (en) * 2001-08-28 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Adenosine A1 Receptor (ADORA1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US20030198627A1 (en) * 2001-09-01 2003-10-23 Gert-Jan Arts siRNA knockout assay method and constructs
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
WO2003035083A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung einer fibrotischen erkrankung durch rna interferenz
CN1608133A (zh) * 2001-10-26 2005-04-20 里伯药品公司 双链核糖核酸用于治疗正(+)链rna病毒感染的用途
DE10230996A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms
WO2003035870A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms
EP1575976A4 (en) * 2001-11-02 2006-08-23 Insert Therapeutics Inc METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE THERAPEUTIC USE OF RNA INTERFERENCE
US20040063654A1 (en) * 2001-11-02 2004-04-01 Davis Mark E. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
JP2005508396A (ja) * 2001-11-02 2005-03-31 イントラディグム、コーポレイション 核酸送達ビヒクルのための治療方法
CN1612930A (zh) * 2001-11-21 2005-05-04 三菱化学株式会社 抑制基因表达的方法
US20070203333A1 (en) * 2001-11-30 2007-08-30 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050075304A1 (en) * 2001-11-30 2005-04-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040138163A1 (en) * 2002-05-29 2004-07-15 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7294504B1 (en) 2001-12-27 2007-11-13 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for DNA mediated gene silencing
AU2003237616B2 (en) * 2002-01-17 2007-07-05 The University Of British Columbia Bispecific antisense oligonucleotides that inhibit IGFBP-2 and IGFBP-5 and methods of using same
DE10202419A1 (de) 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
GB0201477D0 (en) * 2002-01-23 2002-03-13 Novartis Forschungsstiftung Methods of obtaining isoform specific expression in mammalian cells
US20030166282A1 (en) * 2002-02-01 2003-09-04 David Brown High potency siRNAS for reducing the expression of target genes
US20060009409A1 (en) * 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
EP2213737B1 (en) * 2002-02-01 2012-11-07 Life Technologies Corporation Double-stranded oligonucleotides
US20050096289A1 (en) * 2002-02-07 2005-05-05 Hans Prydz Methods and compositions for modulating tissue factor
AU2003223172A1 (en) * 2002-02-12 2003-09-04 Quark Biotech, Inc. Use of the axl receptor for diagnosis and treatment of renal disease
US20050202428A1 (en) * 2002-02-13 2005-09-15 Axordia Limited Pluripotential stem cells
DE60323340D1 (de) 2002-02-14 2008-10-16 Hope City Verfahren zur herstellung interferierender rna-moleküle in säugetierzellen und therapeutische anwendungen solcher moleküle
US20090253774A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7935812B2 (en) 2002-02-20 2011-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7700760B2 (en) 2002-02-20 2010-04-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003106476A1 (en) * 2002-02-20 2003-12-24 Sirna Therapeutics, Inc Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity
US8258288B2 (en) 2002-02-20 2012-09-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090247613A1 (en) * 2002-02-20 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF B-CELL CLL/LYMPHOMA-2 (BCL2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090093439A1 (en) * 2002-02-20 2009-04-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20090099117A1 (en) 2002-02-20 2009-04-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7691999B2 (en) 2002-02-20 2010-04-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7893248B2 (en) 2002-02-20 2011-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050096284A1 (en) * 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090233983A1 (en) * 2002-02-20 2009-09-17 Sirna Therapeutics Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Protein Tyrosine Phosphatase-1B (PTP-1B) Gene Expression Using Short Interfering RNA
AU2003219818A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7897752B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7662952B2 (en) * 2002-02-20 2010-02-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667029B2 (en) * 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090306182A1 (en) * 2002-02-20 2009-12-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MAP KINASE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7928220B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1463842A4 (en) * 2002-02-20 2006-01-25 Sirna Therapeutics Inc RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROTEIN KINASE C ALPHA (PKC-ALPHA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090192105A1 (en) 2002-02-20 2009-07-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA)
US7795422B2 (en) 2002-02-20 2010-09-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
EP1478730A4 (en) * 2002-02-20 2006-01-25 Sirna Therapeutics Inc INTERFERENCE RNA-INDUCED INHIBITION OF THE GENE EXPRESSION OF SUPERFAMILY TFN AND TFN RECEPTOR SUPERFAMILY USING SHORT INTERFERENCE NUCLEIC ACID (SINA)
US7928218B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897757B2 (en) * 2002-02-20 2011-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7683165B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928219B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US7667030B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8067575B2 (en) 2002-02-20 2011-11-29 Merck, Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
GB2397062B (en) * 2002-02-20 2005-06-15 Sirna Therapeutics Inc RNA interference mediated inhibition of hepatitis c virus (HCV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7910724B2 (en) * 2002-02-20 2011-03-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897753B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20100240730A1 (en) * 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US7683166B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8013143B2 (en) * 2002-02-20 2011-09-06 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
EP1474433A4 (en) * 2002-02-20 2005-02-23 Sirna Therapeutics Inc TARGET LOCALIZATION TARGETED BY RNA INTERFERENCE AND TARGET VALIDATION WITH SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7678897B2 (en) * 2002-02-20 2010-03-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003207708A1 (en) 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of map kinase genes
US20090137509A1 (en) * 2002-02-20 2009-05-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLIFERATION CELL NUCLEAR ANTIGEN (PCNA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090253773A1 (en) * 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
JP2005517423A (ja) * 2002-02-20 2005-06-16 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 短干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いるＴＧＦ−ベータおよびＴＧＦ−ベータレセプター遺伝子の発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害
US8232383B2 (en) * 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003219900A1 (en) * 2002-02-22 2003-09-09 James R. Eshleman Antigene locks and therapeutic uses thereof
US7332276B2 (en) * 2002-03-01 2008-02-19 Celltech R&D, Inc. Methods to increase or decrease bone density
US20040005593A1 (en) * 2002-03-06 2004-01-08 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of siRNA molecules
US7274703B2 (en) * 2002-03-11 2007-09-25 3Com Corporation Stackable network units with resiliency facility
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US7357928B2 (en) 2002-04-08 2008-04-15 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Method for the diagnosis and prognosis of malignant diseases
CA2482904A1 (en) * 2002-04-18 2003-10-23 Lynkeus Biotech Gmbh Means and methods for the specific modulation of target genes in the cns and the eye and methods for their identification
WO2003093441A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Duke University A method of regulating gene expression
US7199107B2 (en) * 2002-05-23 2007-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
US7399586B2 (en) 2002-05-23 2008-07-15 Ceptyr, Inc. Modulation of biological signal transduction by RNA interference
WO2003099298A1 (en) * 2002-05-24 2003-12-04 Max-Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
AU2003276666A1 (en) * 2002-06-12 2003-12-31 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20100075423A1 (en) * 2002-06-12 2010-03-25 Life Technologies Corporation Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20040248094A1 (en) * 2002-06-12 2004-12-09 Ford Lance P. Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression
JP2005529959A (ja) * 2002-06-14 2005-10-06 マイラス コーポレイション 細胞へのポリヌクレオチドの伝達をするための新規な方法
WO2004001044A1 (en) * 2002-06-21 2003-12-31 Sinogenomax Company Ltd. Randomised dna libraries and double-stranded rna libraries, use and method of production thereof
US7704965B2 (en) * 2002-06-26 2010-04-27 The Penn State Research Foundation Methods and materials for treating human papillomavirus infections
US7901708B2 (en) 2002-06-28 2011-03-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Liposomal apparatus and manufacturing methods
WO2004007718A2 (en) 2002-07-10 2004-01-22 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna-interference by single-stranded rna molecules
US7148342B2 (en) 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
US20040241854A1 (en) 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
US20080274989A1 (en) 2002-08-05 2008-11-06 University Of Iowa Research Foundation Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof
ES2695050T3 (es) * 2002-08-05 2018-12-28 Silence Therapeutics Gmbh Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia
AU2015264957B2 (en) * 2002-08-05 2017-10-26 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering rna molecules
ES2389024T3 (es) 2002-08-05 2012-10-22 Silence Therapeutics Aktiengesellschaft Moléculas de RNA interferentes de extremos romos
AU2012216354B2 (en) * 2002-08-05 2016-01-14 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering RNA molecules
US20050042646A1 (en) 2002-08-05 2005-02-24 Davidson Beverly L. RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
AU2003260370B2 (en) 2002-08-05 2008-05-22 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering RNA molecules
US20060293256A1 (en) * 2002-08-06 2006-12-28 Masateru Yamada Remedy or preventive for kidney disease and method of diagnosing kidney disease
CN1720257A (zh) * 2002-08-06 2006-01-11 因特拉迪格姆公司 通过导入干扰rna在体内下调靶基因表达的方法
WO2004014933A1 (en) * 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
WO2004019973A1 (en) * 2002-08-14 2004-03-11 Atugen Ag Use of protein kinase n beta
JP4717633B2 (ja) * 2002-08-21 2011-07-06 ザ・ユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア 癌関連タンパク質を標的とするＲＮＡｉプローブ
US7956176B2 (en) * 2002-09-05 2011-06-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20060287269A1 (en) * 2002-09-09 2006-12-21 The Regents Of The University Of California Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof
US20080260744A1 (en) 2002-09-09 2008-10-23 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
US20040138119A1 (en) * 2002-09-18 2004-07-15 Ingo Tamm Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis
US20060257380A1 (en) * 2002-09-19 2006-11-16 Inst.Nat. De La Sante Et De La Recherche MED Use of sirnas for gene silencing in antigen presenting cells
CA2500224C (en) 2002-09-25 2015-04-28 University Of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
US20040242518A1 (en) * 2002-09-28 2004-12-02 Massachusetts Institute Of Technology Influenza therapeutic
US20060160759A1 (en) * 2002-09-28 2006-07-20 Jianzhu Chen Influenza therapeutic
MXPA05003287A (es) * 2002-09-28 2005-07-05 Massachusetts Inst Technology Influenza terapeutica.
US20060240425A1 (en) * 2002-09-30 2006-10-26 Oncotherapy Science, Inc Genes and polypeptides relating to myeloid leukemia
US7422853B1 (en) * 2002-10-04 2008-09-09 Myriad Genetics, Inc. RNA interference using a universal target
ZA200502612B (en) 2002-10-08 2007-07-25 Rinat Neuroscience Corp Methods for treating post-surgical pain by administering a nerve crowth factor antagonist and compositions containing the same
US7255860B2 (en) 2002-10-08 2007-08-14 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating post-surgical pain by administering an anti-nerve growth factor antagonist antibody
NZ540779A (en) * 2002-11-01 2008-05-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for siRNA inhibition of HIF-1 alpha
US7892793B2 (en) 2002-11-04 2011-02-22 University Of Massachusetts Allele-specific RNA interference
CA2504694C (en) 2002-11-05 2013-10-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
WO2004043978A2 (en) * 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US9150605B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
US9150606B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
DE10322662A1 (de) * 2002-11-06 2004-10-07 Grünenthal GmbH Wirksame und stabile DNA-Enzyme
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9879266B2 (en) 2002-11-14 2018-01-30 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US8163896B1 (en) 2002-11-14 2012-04-24 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US7635770B2 (en) 2002-11-14 2009-12-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3)
US7691998B2 (en) 2002-11-14 2010-04-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62)
US20100113307A1 (en) * 2002-11-14 2010-05-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF)
US7951935B2 (en) 2002-11-14 2011-05-31 Dharmacon, Inc. siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC)
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
US7781575B2 (en) 2002-11-14 2010-08-24 Dharmacon, Inc. siRNA targeting tumor protein 53 (p53)
US20090227780A1 (en) * 2002-11-14 2009-09-10 Dharmacon, Inc. siRNA targeting connexin 43
US9839649B2 (en) 2002-11-14 2017-12-12 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US8198427B1 (en) 2002-11-14 2012-06-12 Dharmacon, Inc. SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1)
US10011836B2 (en) 2002-11-14 2018-07-03 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US10920226B2 (en) * 2002-11-14 2021-02-16 Thermo Fisher Scientific Inc. siRNA targeting LDHA
US7977471B2 (en) * 2002-11-14 2011-07-12 Dharmacon, Inc. siRNA targeting TNFα
EP2305812A3 (en) 2002-11-14 2012-06-06 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
US9719094B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting SEC61G
US7619081B2 (en) 2002-11-14 2009-11-17 Dharmacon, Inc. siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2)
US7612196B2 (en) 2002-11-14 2009-11-03 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B)
US20080268457A1 (en) * 2002-11-14 2008-10-30 Dharmacon, Inc. siRNA targeting forkhead box P3 (FOXP3)
US20090005548A1 (en) * 2002-11-14 2009-01-01 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nuclear receptor interacting protein 1 (NRIP1)
US7592442B2 (en) * 2002-11-14 2009-09-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2)
US9719092B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting CNTD2
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
WO2006006948A2 (en) 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
US9771586B2 (en) 2002-11-14 2017-09-26 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting ZNF205
US7927793B2 (en) 2002-11-18 2011-04-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Cell lines and host nucleic acid sequences related to infectious disease
US7064337B2 (en) 2002-11-19 2006-06-20 The Regents Of The University Of California Radiation detection system for portable gamma-ray spectroscopy
DE10254214A1 (de) * 2002-11-20 2004-06-09 Beiersdorf Ag Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz
JP4526228B2 (ja) * 2002-11-22 2010-08-18 隆 森田 ＲＮＡｉによる新規治療法および治療剤
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
EP1571209B1 (en) * 2002-11-22 2012-06-13 Bio-Think Tank Co., Ltd. Method of detecting target base sequence of rna interference, method of designing polynucleotide base sequence causing rna interference, method of constructing double-stranded polynucleotide, method of regulating gene expression, base sequence processing apparatus, program for running base sequence
ES2343318T3 (es) * 2002-11-26 2010-07-28 University Of Massachusetts Administracion de arnsis.
US7829694B2 (en) 2002-11-26 2010-11-09 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US7605249B2 (en) 2002-11-26 2009-10-20 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US20130130231A1 (en) 2002-11-26 2013-05-23 Isaac Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
US7790867B2 (en) 2002-12-05 2010-09-07 Rosetta Genomics Inc. Vaccinia virus-related nucleic acids and microRNA
US7618948B2 (en) 2002-11-26 2009-11-17 Medtronic, Inc. Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA
US7696334B1 (en) 2002-12-05 2010-04-13 Rosetta Genomics, Ltd. Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene
CN1301263C (zh) 2002-12-18 2007-02-21 北京昭衍新药研究中心 一组抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其应用
US9498530B2 (en) 2002-12-24 2016-11-22 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same
CN101014364B (zh) 2002-12-24 2012-01-18 里纳特神经系统学公司 抗ngf抗体及其使用方法
US7569364B2 (en) 2002-12-24 2009-08-04 Pfizer Inc. Anti-NGF antibodies and methods using same
US20070141009A1 (en) * 2003-01-03 2007-06-21 Shaharyar Khan Sirna mediated post-transriptional gene silencing of genes involved in alopecia
DE602004028587D1 (de) 2003-01-16 2010-09-23 Univ Pennsylvania ZUSAMMENSETZUNGEN UND VERFAHREN ZUR siRNA-HEMMUNG VON ICAM-1
US7629323B2 (en) * 2003-01-21 2009-12-08 Northwestern University Manipulation of neuronal ion channels
US20060178297A1 (en) * 2003-01-28 2006-08-10 Troy Carol M Systems and methods for silencing expression of a gene in a cell and uses thereof
US20040147027A1 (en) * 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
US7732591B2 (en) 2003-11-25 2010-06-08 Medtronic, Inc. Compositions, devices and methods for treatment of huntington's disease through intracranial delivery of sirna
US7994149B2 (en) 2003-02-03 2011-08-09 Medtronic, Inc. Method for treatment of Huntington's disease through intracranial delivery of sirna
EP1589931A2 (en) * 2003-02-05 2005-11-02 University of Massachusetts RNAi TARGETING OF VIRUSES
FR2850971B1 (fr) * 2003-02-10 2006-08-11 Aventis Pharma Sa Oligonucleotide antisens inhibant l'expression de la proteine ob-rgrp et procede de detection de composes modifiant l'interaction entre la famille de la proteine ob-rgrp et le recepteur de la leptine
US20070104688A1 (en) 2003-02-13 2007-05-10 City Of Hope Small interfering RNA mediated transcriptional gene silencing in mammalian cells
US20040162235A1 (en) * 2003-02-18 2004-08-19 Trubetskoy Vladimir S. Delivery of siRNA to cells using polyampholytes
EP2191846A1 (en) 2003-02-19 2010-06-02 Rinat Neuroscience Corp. Method for treating pain by administering a nerve growth factor antagonist and an NSAID and composition containing the same
US8796235B2 (en) * 2003-02-21 2014-08-05 University Of South Florida Methods for attenuating dengue virus infection
JP2006523103A (ja) * 2003-02-21 2006-10-12 ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション Ｒｎａ干渉組成物および方法
EP1597351B1 (en) * 2003-02-27 2012-04-18 Alnylam Pharmaceuticals Inc. METHODS AND CONSTRUCTS FOR EVALUATION OF RNAi TARGETS AND EFFECTOR MOLECULES
EP1605043A1 (en) * 2003-02-27 2005-12-14 National Institute of Advanced Industrial Science and Technology Induction of methylation of cpg sequence by dsrna in mammalian cell
TW200427695A (en) * 2003-03-05 2004-12-16 Senesco Technologies Inc Use of antisense oligonucleotides or sirna to suppress expression of eif-5a1
US20050164212A1 (en) * 2003-03-06 2005-07-28 Todd Hauser Modulation of gene expression using DNA-RNA hybrids
WO2004080406A2 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Alnylam Pharmaceuticals Therapeutic compositions
CA2518912A1 (en) * 2003-03-12 2004-09-23 Vasgene Therapeutics, Inc. Polypeptide compounds for inhibiting angiogenesis and tumor growth
CA2519860C (en) 2003-03-21 2018-01-16 Santaris Pharma A/S Short interfering rna (sirna) analogues
WO2004090105A2 (en) * 2003-04-02 2004-10-21 Dharmacon, Inc. Modified polynucleotides for use in rna interference
US20040198640A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-07 Dharmacon, Inc. Stabilized polynucleotides for use in RNA interference
ATE536408T1 (de) * 2003-04-02 2011-12-15 Dharmacon Inc Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz
EP1631669A2 (en) 2003-04-09 2006-03-08 Biodelivery Sciences International, Inc. Cochleate compositions directed against expression of proteins
CA2521464C (en) 2003-04-09 2013-02-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna conjugates
US20070270360A1 (en) * 2003-04-15 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. Rna Interference Mediated Inhibition of Severe Acute Respiratory Syndrome (Sars) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
DK1620544T3 (en) 2003-04-17 2019-01-14 Alnylam Pharmaceuticals Inc MODIFIED iRNA AGENTS
US8796436B2 (en) 2003-04-17 2014-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
JP4991288B2 (ja) 2003-04-17 2012-08-01 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 二本鎖ｉＲＮＡ剤、および二本鎖ｉＲＮＡ剤の対合の安定性を調節する方法。
US8017762B2 (en) 2003-04-17 2011-09-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
CA2522730A1 (en) * 2003-04-18 2004-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiopoietin 1 and 2 and their receptor tie2
WO2005032595A2 (en) * 2003-04-23 2005-04-14 Georgetown University Methods and compositions for the inhibition of stat5 in prostate cancer cells
EP1644048B1 (en) * 2003-05-05 2015-04-29 Johns Hopkins University Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein
DK1633784T3 (da) 2003-05-09 2011-10-24 Diadexus Inc OVR110 antistofsammensætninger og -anvendelsesfremgangsmåder
CA2523785A1 (en) 2003-05-09 2004-11-25 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Small interfering rna libraries and methods of synthesis and use
CN1780920B (zh) * 2003-05-12 2012-03-28 波多玛克制药有限公司 基因表达抑制剂
US20050148531A1 (en) * 2003-05-15 2005-07-07 Todd Hauser Modulation of gene expression using DNA-DNA hybrids
WO2005018534A2 (en) * 2003-05-16 2005-03-03 Rosetta Inpharmatics, Llc Methods and compositions for rna interference
EP1625853B1 (en) 2003-05-19 2015-07-08 Genecare Research Institute Co., Ltd Apoptosis inducer for cancer cell
CA2527301A1 (en) * 2003-05-30 2004-12-09 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Oligonucleic acid-bearing composite and pharmaceutical composition containing the composite
EP1640452A4 (en) 2003-05-30 2009-12-23 Nippon Shinyaku Co Ltd OLIGOBICATENARY RNA INHIBITING BCL-2 EXPRESSION AND MEDICINAL COMPOSITION CONTAINING THE SAME
DK1633767T3 (en) * 2003-06-02 2019-03-25 Univ Massachusetts METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING
ES2357116T5 (es) 2003-06-02 2021-09-03 Univ Massachusetts Métodos y composiciones para mejorar la eficacia y especificad de FNAi
US7750144B2 (en) 2003-06-02 2010-07-06 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing
BRPI0410886A (pt) * 2003-06-03 2006-07-04 Isis Pharmaceuticals Inc composto de filamento duplo, composição farmacêutica, sal farmaceuticamente aceitável, métodos de modificação do ácido nucleico que codifica a survivina humana, de inibição da expressão da suvivina em células ou tecidos, e de tratamento de uma condição associada com a expressão ou superexpressão da suvivina, e, oligonucleotìdeo de rnai de filamento único
US20050019918A1 (en) * 2003-06-03 2005-01-27 Hidetoshi Sumimoto Treatment of cancer by inhibiting BRAF expression
US7595306B2 (en) * 2003-06-09 2009-09-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Method of treating neurodegenerative disease
US8575327B2 (en) 2003-06-12 2013-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
AU2004263830B2 (en) 2003-06-13 2008-12-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
EP1486564A1 (de) * 2003-06-13 2004-12-15 Ribopharma AG SiRNA mit erhöhter Stabilität in Serum
EP1644475A4 (en) * 2003-06-20 2009-06-03 Isis Pharmaceuticals Inc DOUBLE-STRAND COMPOSITIONS WITH A 3'-ENDO-MODIFIED STRING FOR USE IN GENE MODULATION
US20060241072A1 (en) * 2003-06-20 2006-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for use in gene modulation
US7173015B2 (en) * 2003-07-03 2007-02-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibition of Syk kinase expression
WO2006001810A2 (en) * 2003-07-15 2006-01-05 California Institute Of Technology Improved inhibitor nucleic acids
US20050256071A1 (en) * 2003-07-15 2005-11-17 California Institute Of Technology Inhibitor nucleic acids
ES2559828T3 (es) * 2003-07-16 2016-02-16 Protiva Biotherapeutics Inc. ARN de interferencia encapsulado en lípidos
WO2005010188A2 (en) * 2003-07-21 2005-02-03 Whitehead Institute For Biomedical Research Rnas able to modulate chromatin silencing
US7683036B2 (en) 2003-07-31 2010-03-23 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs
US7888497B2 (en) 2003-08-13 2011-02-15 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
US20060229266A1 (en) * 2003-08-13 2006-10-12 Kumar Nalin M Silencing of tgf-beta receptor type II expression by sirna
US7825235B2 (en) 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
WO2005035759A2 (en) * 2003-08-20 2005-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1 (HIF1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050136437A1 (en) * 2003-08-25 2005-06-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nanoparticles for delivery of nucleic acids and stable double-stranded RNA
CN1845993B (zh) * 2003-08-28 2010-06-23 诺瓦提斯公司 具有平端和3＇修饰的干扰rna双链体
US8501705B2 (en) * 2003-09-11 2013-08-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and materials for treating autoimmune and/or complement mediated diseases and conditions
US8680063B2 (en) * 2003-09-12 2014-03-25 University Of Massachusetts RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders
WO2005027980A1 (en) * 2003-09-12 2005-03-31 University Of Massachusetts Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders
KR100750788B1 (ko) * 2003-09-18 2007-08-20 아이시스 파마수티컬즈 인코포레이티드 ｅＩＦ4Ｅ 발현의 조정
CA2539651A1 (en) * 2003-09-22 2005-04-07 Rosetta Inpharmatics Llc Synthetic lethal screen using rna interference
WO2005033310A1 (de) * 2003-10-01 2005-04-14 Grünenthal GmbH Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen
US20080249038A1 (en) * 2003-10-07 2008-10-09 Quark Biotech, Inc. Bone Morphogenetic Protein (Bmp) 2A and Uses Thereof
US20050120415A1 (en) 2003-10-09 2005-06-02 E.I. Du Pont De Nemours And Company Gene silencing
WO2005045032A2 (en) * 2003-10-20 2005-05-19 Sima Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
CA2543029A1 (en) * 2003-10-23 2005-05-19 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gpra and aaa1 gene expression using short nucleic acid (sina)
WO2005045035A2 (en) * 2003-10-23 2005-05-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF NOGO AND NOGO RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
CN1926551B (zh) 2003-10-27 2010-06-16 罗斯塔生化科技有限责任公司 用于基因沉默的siRNA的设计方法
US8227434B1 (en) 2003-11-04 2012-07-24 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. Materials and methods for treating oncological disorders
US20070275918A1 (en) * 2003-11-07 2007-11-29 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Induction of Cellular Senescence by Cdk4 Disruption for Tumor Suppression and Regression
EP1697515A4 (en) * 2003-11-12 2008-02-06 Austin Research Inst DNA CARRIER CONJUGATE
US7807646B1 (en) * 2003-11-20 2010-10-05 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
US7763592B1 (en) * 2003-11-20 2010-07-27 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
JP2005168485A (ja) * 2003-11-20 2005-06-30 Tsutomu Suzuki ｓｉＲＮＡの設計方法
US20050208658A1 (en) * 2003-11-21 2005-09-22 The University Of Maryland RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression
US20100145038A1 (en) * 2003-11-24 2010-06-10 Merck & Co., Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
WO2005053725A2 (en) * 2003-11-26 2005-06-16 The Queen's University Of Belfast Cancer treatment
JP5654722B2 (ja) * 2003-11-26 2015-01-14 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ 短鎖ｒｎａ機能の配列特異的阻害法
WO2005056021A1 (en) * 2003-12-04 2005-06-23 University Of South Florida Polynucleotides for reducing respiratory syncytial virus gene expression
CA2548972A1 (en) * 2003-12-12 2005-06-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Treatment of mammals by sirna delivery into mammalian nerve cells
WO2005068630A1 (ja) * 2003-12-16 2005-07-28 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology 干渉用二重鎖ｒｎａ
US20060134787A1 (en) 2004-12-22 2006-06-22 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA
EP1711172A4 (en) * 2003-12-23 2008-07-16 Univ Pennsylvania COMPOSITIONS AND METHODS FOR COMBINATION THERAPY OF ILLNESSES
WO2005067971A1 (ja) * 2004-01-16 2005-07-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited 動脈硬化の予防・治療用医薬
WO2005073378A1 (en) * 2004-01-30 2005-08-11 Santaris Pharma A/S MODIFIED SHORT INTERFERING RNA (MODIFIED siRNA)
JP4755113B2 (ja) 2004-01-30 2011-08-24 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 線維性状態およびその他の疾患の治療のための、オリゴリボヌクレオチドおよびその使用方法
EP2123759B1 (en) * 2004-02-06 2014-01-15 Thermo Fisher Scientific Biosciences Inc. Stabilized RNAS as transfection controls and silencing reagents
US20060019914A1 (en) 2004-02-11 2006-01-26 University Of Tennessee Research Foundation Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase DNAzymes
WO2005079533A2 (en) * 2004-02-17 2005-09-01 University Of Massachusetts Methods and compositions for mediating gene silencing
US20050273868A1 (en) * 2004-02-17 2005-12-08 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing RISC activity in vitro and in vivo
EP1566202A1 (en) * 2004-02-23 2005-08-24 Sahltech I Göteborg AB Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
CA2556729A1 (en) * 2004-02-23 2005-09-09 Genzyme Corporation Muc1 antagonist enhancement of death receptor ligand-induced apoptosis
JP2008506356A (ja) 2004-02-24 2008-03-06 アメリカ合衆国 Ｒａｂ９ａ、ｒａｂ１１ａ、および感染症に関するこれらのモジュレーター
US7691823B2 (en) * 2004-03-05 2010-04-06 University Of Massachusetts RIP140 regulation of glucose transport
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
AU2005222902B2 (en) 2004-03-12 2010-06-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. iRNA agents targeting VEGF
US20050202075A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-15 Pardridge William M. Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
AU2005222965B8 (en) * 2004-03-15 2010-07-01 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
US20050208090A1 (en) * 2004-03-18 2005-09-22 Medtronic, Inc. Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system
US20050272682A1 (en) * 2004-03-22 2005-12-08 Evers Bernard M SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy
WO2005092030A2 (en) * 2004-03-22 2005-10-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of use of bcl-6-derived nucleotides to induce apoptosis
WO2005095622A2 (en) * 2004-03-26 2005-10-13 Van Andel Research Institute c-met siRNA ADENOVIRUS VECTORS INHIBIT CANCER CELL GROWTH, INVASION AND TUMORIGENICITY
DK1730280T3 (en) * 2004-03-26 2019-02-04 Curis Inc RNA interference modulators for hedgehog signaling and applications thereof
JPWO2005095647A1 (ja) * 2004-03-31 2008-02-21 タカラバイオ株式会社 ｓｉＲＮＡのスクリーニング方法
JP2005312428A (ja) * 2004-03-31 2005-11-10 Keio Gijuku Ｓｋｐ−２発現抑制を利用した癌の治療
KR101147147B1 (ko) 2004-04-01 2012-05-25 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Ｒｎａ 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드
WO2005097817A2 (en) 2004-04-05 2005-10-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process and reagents for oligonucleotide synthesis and purification
JP5301152B2 (ja) 2004-04-07 2013-09-25 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 神経成長因子アンタゴニストを投与することによって骨癌の疼痛を処置するための方法
EP2520652B1 (en) 2004-04-09 2015-06-10 Genecare Research Institute Co., Ltd Cancer cell-specific apoptosis-inducing agents that target chromosome stabilization-associates genes
US20060078902A1 (en) * 2004-04-15 2006-04-13 Michaeline Bunting Method and compositions for RNA interference
US20060014289A1 (en) * 2004-04-20 2006-01-19 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded RNA or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells
AU2005238034A1 (en) 2004-04-23 2005-11-10 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Inhibition of hairless protein mRNA
AU2005325262B2 (en) 2004-04-27 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
US8029815B2 (en) 2004-04-28 2011-10-04 Elford Howard L Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders
US7674778B2 (en) 2004-04-30 2010-03-09 Alnylam Pharmaceuticals Oligonucleotides comprising a conjugate group linked through a C5-modified pyrimidine
US20060040882A1 (en) * 2004-05-04 2006-02-23 Lishan Chen Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells
US20060030003A1 (en) * 2004-05-12 2006-02-09 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
US20050260214A1 (en) * 2004-05-12 2005-11-24 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
US20110117088A1 (en) * 2004-05-12 2011-05-19 Simon Michael R Composition and method for introduction of rna interference sequences into targeted cells and tissues
US7605250B2 (en) * 2004-05-12 2009-10-20 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D
US7687616B1 (en) 2004-05-14 2010-03-30 Rosetta Genomics Ltd Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof
WO2005110464A2 (en) * 2004-05-14 2005-11-24 Oregon Health & Science University Irx5 inhibition as treatment for hyperproliferative disorders
CA2566519C (en) 2004-05-14 2020-04-21 Rosetta Genomics Ltd. Micrornas and uses thereof
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
WO2006033679A2 (en) * 2004-05-25 2006-03-30 Chimeracore, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
US7795419B2 (en) 2004-05-26 2010-09-14 Rosetta Genomics Ltd. Viral and viral associated miRNAs and uses thereof
EP2290071B1 (en) 2004-05-28 2014-12-31 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving microRNA
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
EP1602926A1 (en) 2004-06-04 2005-12-07 University of Geneva Novel means and methods for the treatment of hearing loss and phantom hearing
US7799565B2 (en) * 2004-06-07 2010-09-21 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid encapsulated interfering RNA
US7745651B2 (en) * 2004-06-07 2010-06-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
US20060008907A1 (en) * 2004-06-09 2006-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Control of gene expression via light activated RNA interference
WO2006085942A2 (en) * 2004-06-17 2006-08-17 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for regulating gene transcription
US20060051815A1 (en) * 2004-06-25 2006-03-09 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating smooth muscle cell disorders
CA2572151A1 (en) 2004-06-30 2006-08-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a non-phosphate backbone linkage
WO2006002538A1 (en) * 2004-07-02 2006-01-12 Protiva Biotherapeutics, Inc. Immunostimulatory sirna molecules and uses therefor
EP1765378B1 (en) * 2004-07-12 2014-04-16 Medical Research Fund of Tel Aviv Sourasky Medical Center Agent capable of downregulating an msf-a-dependent hif-1a and use thereof in cancer treatment
JP2008522951A (ja) * 2004-07-19 2008-07-03 ベイラー・カレツジ・オブ・メデイシン サイトカインシグナル伝達調節物質の調節および免疫療法のための応用
US20060030538A1 (en) * 2004-07-21 2006-02-09 Medtronic, Inc. Methods for reducing or preventing localized fibrosis using SiRNA
US7767652B2 (en) * 2004-07-21 2010-08-03 Medtronic, Inc. Medical devices and methods for reducing localized fibrosis
AU2005328382C1 (en) 2004-07-21 2013-01-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
US20100132058A1 (en) 2004-07-23 2010-05-27 Diatchenko Luda B Methods and materials for determining pain sensitivity and predicting and treating related disorders
CA2574603C (en) 2004-08-04 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase
EP1791567B1 (en) 2004-08-10 2015-07-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemically modified oligonucleotides
WO2006020557A2 (en) * 2004-08-10 2006-02-23 Immusol, Inc. Methods of using or identifying agents that inhibit cancer growth
WO2006110161A2 (en) * 2004-08-13 2006-10-19 University Of Delaware Method for identification and quantification of short or small rna molecules
JP4468989B2 (ja) 2004-08-16 2010-05-26 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド Ｒｔｐ８０１阻害剤の治療への使用
HRP20171010T8 (hr) * 2004-08-23 2017-11-03 Sylentis S.A.U. Liječenje poremećaja očiju koji su karakterizirani povišenim intraokularnim pritiskom pomoću sirnk
US20070021366A1 (en) * 2004-11-19 2007-01-25 Srivastava Satish K Structural-based inhibitors of the glutathione binding site in aldose reductase, methods of screening therefor and methods of use
WO2006026738A2 (en) 2004-08-31 2006-03-09 Qiagen North American Holdings, Inc. Methods and compositions for rna amplification and detection using an rna-dependent rna-polymerase
EP2287301A3 (en) * 2004-08-31 2011-11-02 Sylentis S.A.U. Methods and compositions to inhibit P2X7 receptor expression
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
JP2008512500A (ja) * 2004-09-10 2008-04-24 ソマジェニックス インコーポレーティッド ウィルス遺伝子発現を効率的に阻害する低分子干渉ｒｎａおよびその使用方法
US8569374B2 (en) * 2004-09-16 2013-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania NADPH oxidase inhibition pharmacotherapies for obstructive sleep apnea syndrome and its associated morbidities
FI20041204A0 (fi) 2004-09-16 2004-09-16 Riikka Lund Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi
US7528118B2 (en) 2004-09-24 2009-05-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of ApoB and uses thereof
AU2005288522B2 (en) 2004-09-28 2012-06-28 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases
EP1796686A4 (en) * 2004-09-30 2008-05-14 Centocor Inc EMMPRINE ANTAGONISTS AND ITS USES
CN101107362A (zh) 2004-10-21 2008-01-16 文甘扎公司 用于赋予对植物病害生物和植物病原体抗性的方法和材料
US7790878B2 (en) * 2004-10-22 2010-09-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
US20060110440A1 (en) * 2004-10-22 2006-05-25 Kiminobu Sugaya Method and system for biasing cellular development
CA2584921A1 (en) * 2004-10-22 2006-04-27 Neuregenix Limited Neuron regeneration
US7592322B2 (en) * 2004-10-22 2009-09-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
CA2585970A1 (en) 2004-10-27 2006-05-04 Vanderbilt University Mammalian genes involved in infection
WO2006047687A2 (en) * 2004-10-27 2006-05-04 Schering Corporation Compositions and methods for short interfering nucleic acid inhibition of nav1.8
AU2005302554A1 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 Idexx Laboratories, Inc. Compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
US20060094676A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Ronit Lahav Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity
US9492400B2 (en) 2004-11-04 2016-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
CA2857881A1 (en) 2004-11-12 2006-12-28 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving mirna and mirna inhibitor molecules
US20060105052A1 (en) * 2004-11-15 2006-05-18 Acar Havva Y Cationic nanoparticle having an inorganic core
US8809287B2 (en) * 2004-11-15 2014-08-19 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Compositions and methods for altering Wnt autocrine signaling
CA2587411A1 (en) * 2004-11-17 2006-05-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Sirna silencing of apolipoprotein b
WO2006055727A2 (en) * 2004-11-18 2006-05-26 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois MULTICISTRONIC siRNA CONSTRUCTS TO INHIBIT TUMORS
EP1816194A4 (en) * 2004-11-19 2009-02-18 Genecare Res Inst Co Ltd CANCER-SPECIFIC PROLIFERATION INHIBITORS
US7935811B2 (en) 2004-11-22 2011-05-03 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing compositions
US20060166234A1 (en) * 2004-11-22 2006-07-27 Barbara Robertson Apparatus and system having dry control gene silencing compositions
US7923207B2 (en) 2004-11-22 2011-04-12 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing pools
JP2008521401A (ja) * 2004-11-24 2008-06-26 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子のＲＮＡｉ調節およびその使用方法
US20060160110A1 (en) * 2004-12-02 2006-07-20 Takayuki Mizutani Methods of designing small interfering RNAs, antisense polynucleotides, and other hybridizing polynucleotides
WO2006060779A2 (en) * 2004-12-03 2006-06-08 Case Western Reserve University Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization
WO2006066158A2 (en) * 2004-12-14 2006-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of mll-af4 and uses thereof
ATE479740T1 (de) 2004-12-17 2010-09-15 Beth Israel Hospital Zusammensetzungen für bakteriell vermitteltes gen-silencing sowie verfahren zur verwendung davon
GB0427916D0 (en) * 2004-12-21 2005-01-19 Astrazeneca Ab Method
US20060142228A1 (en) * 2004-12-23 2006-06-29 Ambion, Inc. Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference
TWI386225B (zh) 2004-12-23 2013-02-21 Alcon Inc 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子（ＣＴＧＦ）ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）抑制技術
CN101287497B (zh) 2004-12-27 2013-03-06 赛伦斯治疗公司 涂层脂质复合体和它们的用途
WO2006074108A2 (en) * 2004-12-30 2006-07-13 Hauser Todd M Compositions and methods for modulating gene expression using self-protected oligonucleotides
WO2006073970A2 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 The Johns Hopkins University Rna interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by dna and transfected dendritic cell vaccines
EP1841793B1 (en) 2005-01-07 2010-03-31 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
NZ556097A (en) * 2005-01-07 2009-12-24 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai modulation of RSV and therapeutic uses thereof
US20060217324A1 (en) * 2005-01-24 2006-09-28 Juergen Soutschek RNAi modulation of the Nogo-L or Nogo-R gene and uses thereof
WO2006081323A2 (en) * 2005-01-26 2006-08-03 The Johns Hopkins University Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding mutant oncoprotein antigen and calreticulin
TW200639252A (en) * 2005-02-01 2006-11-16 Alcon Inc RNAi-mediated inhibition of ocular hypertension targets
JP2008530084A (ja) * 2005-02-14 2008-08-07 株式会社Ｈｖｃ戦略研究所 癌の転移を予防するための薬剤
EP2357254A1 (en) 2005-02-14 2011-08-17 University of Iowa Research Foundation Methods and reagents for treatment and diagnosis of age-related macular degeneration
EP1863912A2 (en) 2005-03-08 2007-12-12 Qiagen GmbH Modified short interfering rna
KR20080018858A (ko) 2005-03-11 2008-02-28 알콘, 인코퍼레이티드 녹내장 치료용 플리즐 관련 단백질―１의 ＲＮＡⅰ－중재저해
US8999943B2 (en) * 2005-03-14 2015-04-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Antigene oligomers inhibit transcription
GB0505081D0 (en) * 2005-03-14 2005-04-20 Genomica Sau Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology
JP4585342B2 (ja) * 2005-03-18 2010-11-24 株式会社資生堂 不全角化を抑制する物質のスクリーニング方法、同方法によりスクリーニングされた物質及び不全角化を抑制する方法
ATE524546T1 (de) * 2005-03-25 2011-09-15 Medtronic Inc Verwendung von anti-tnf oder anti-il1-rnai zur unterdrückung der wirkung entzündungsfördernder cytokine zur lokalen schmerzbehandlung
EP1866414B9 (en) * 2005-03-31 2012-10-03 Calando Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of ribonucleotide reductase subunit 2 and uses thereof
US20090203055A1 (en) * 2005-04-18 2009-08-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for RNA interference with sialidase expression and uses thereof
EP1885854B1 (en) 2005-05-06 2012-10-17 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
EP1891141B1 (en) * 2005-05-31 2016-11-16 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) Triblock copolymers for cytoplasmic delivery of gene-based drugs
WO2006130560A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Manipulation of pten in t cells as a strategy to modulate immune responses
DK1888749T3 (en) * 2005-06-01 2015-01-05 Polyplus Transfection Oligonucleotides for RNA interference and their biological applications
WO2006130716A2 (en) * 2005-06-01 2006-12-07 Duke University Method of inhibiting intimal hyperplasia
US20100266574A1 (en) * 2005-06-10 2010-10-21 Orna Mor Oligoribonucleotides and Methods of Use Thereof for Treatment of Fibrotic Conditions and Other Diseases
CN100445381C (zh) * 2005-06-10 2008-12-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 带有单链polyA尾巴的siRNA分子制备方法和应用
WO2006138145A1 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
US7838503B2 (en) * 2005-06-15 2010-11-23 Children's Medical Center Corporation Methods for extending the replicative lifespan of cells
FI20050640A0 (fi) * 2005-06-16 2005-06-16 Faron Pharmaceuticals Oy Yhdisteitä amiinioksidaasista riippuvien sairauksien tai häiriöiden hoitoon tai estoon
US7868159B2 (en) * 2005-06-23 2011-01-11 Baylor College Of Medicine Modulation of negative immune regulators and applications for immunotherapy
US7737265B2 (en) * 2005-06-27 2010-06-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of HIF-1 and therapeutic uses thereof
US9133517B2 (en) 2005-06-28 2015-09-15 Medtronics, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
WO2007007317A1 (en) * 2005-07-07 2007-01-18 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Nucleic acid agents for downregulating h19, and methods of using same
US8703769B2 (en) 2005-07-15 2014-04-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of EGFR inhibitors to prevent or treat obesity
WO2007012329A2 (de) * 2005-07-25 2007-02-01 Technische Universität Dresden Rna-abhängige rna-polymerase, verfahren und kits zur amplifikation und / oder markierung von rna
US20070111227A1 (en) * 2005-07-28 2007-05-17 Green Pamela J Small regulatory RNAs and methods of use
US7919583B2 (en) 2005-08-08 2011-04-05 Discovery Genomics, Inc. Integration-site directed vector systems
US20070213257A1 (en) * 2005-08-12 2007-09-13 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for complexes of nucleic acids and peptides
RU2418068C2 (ru) * 2005-08-17 2011-05-10 Сирна Терапьютикс, Инк. Молекулы химически модифицированной короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты, которые опосредуют интерференцию рнк
EP2239328A3 (en) * 2005-08-18 2011-01-05 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Methods and compositions for treating neurological disease
US20070054873A1 (en) * 2005-08-26 2007-03-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation
WO2007028065A2 (en) * 2005-08-30 2007-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
WO2007030167A1 (en) * 2005-09-02 2007-03-15 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules
US20090221673A1 (en) * 2005-09-13 2009-09-03 Rigby William F C Compositions and Methods for Regulating RNA Translation via CD154 CA-Dinucleotide Repeat
EP2980220A1 (en) 2005-09-20 2016-02-03 BASF Plant Science GmbH Improved methods controlling gene expression
FR2890859B1 (fr) 2005-09-21 2012-12-21 Oreal Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase
US8933043B2 (en) * 2005-09-30 2015-01-13 St. Jude Children's Research Hospital Methods for regulation of p53 translation and function
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
US8080534B2 (en) 2005-10-14 2011-12-20 Phigenix, Inc Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer
WO2007048046A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Sirna silencing of filovirus gene expression
GB0521351D0 (en) * 2005-10-20 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of TRPV expression levels
GB0521716D0 (en) * 2005-10-25 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases
WO2007049690A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology Singarの発現または機能の抑制による神経軸索の形成・伸長と神経再生への応用
WO2007051045A2 (en) 2005-10-28 2007-05-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of huntingtin gene
US8101741B2 (en) 2005-11-02 2012-01-24 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
EP1942948A4 (en) * 2005-11-04 2010-03-03 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING THE EXPRESSION OF THE NAV1.8 GENE
US8076308B2 (en) * 2005-11-07 2011-12-13 British Columbia Cancer Agency Inhibition of autophagy genes in cancer chemotherapy
CA2626690A1 (en) 2005-11-09 2007-05-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor v leiden mutant gene
JP5066095B2 (ja) * 2005-11-17 2012-11-07 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム 染色体ｄｎａに標的化されるオリゴマーによる遺伝子発現の調節
US8603991B2 (en) 2005-11-18 2013-12-10 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US8916530B2 (en) 2005-11-18 2014-12-23 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US20080125384A1 (en) * 2005-11-21 2008-05-29 Shuewi Yang Simultaneous silencing and restoration of gene function
WO2007061022A1 (ja) * 2005-11-24 2007-05-31 Jichi Medical University プロヒビチン2(phb2)のミトコンドリア機能
US9267937B2 (en) 2005-12-15 2016-02-23 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
ATE466081T1 (de) * 2005-12-22 2010-05-15 Opko Ophthalmics Llc Zusammensetzungen und verfahren zur regulierung eines komplementsystems
AR057252A1 (es) * 2005-12-27 2007-11-21 Alcon Mfg Ltd Inhibicion de rho quinasa mediada por arni para el tratamiento de trastornos oculares
US8288354B2 (en) 2005-12-28 2012-10-16 The Scripps Research Institute Natural antisense and non-coding RNA transcripts as drug targets
US8673873B1 (en) * 2005-12-28 2014-03-18 Alcon Research, Ltd. RNAi-mediated inhibition of phosphodiesterase type 4 for treatment of cAMP-related ocular disorders
WO2007080457A2 (en) * 2005-12-30 2007-07-19 Institut Gustave Roussy Use of inhibitors of scinderin and/or of ephrin-a1 for treating tumors
BRPI0707290A2 (pt) 2006-01-17 2011-08-16 Biolex Therapeutics Inc composições e métodos para humanização e otimização de n-glicanas em plantas
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
US7825099B2 (en) 2006-01-20 2010-11-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes
SI2671954T1 (sl) 2006-01-20 2018-11-30 Cell Signaling Technology, Inc. Translokacija in mutantna ROS kinaza v človeškem ne-drobnoceličnem karcinomu pljuč
US20120208824A1 (en) 2006-01-20 2012-08-16 Cell Signaling Technology, Inc. ROS Kinase in Lung Cancer
WO2009051846A2 (en) 2007-10-18 2009-04-23 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma
NL2000439C2 (nl) 2006-01-20 2009-03-16 Quark Biotech Therapeutische toepassingen van inhibitoren van RTP801.
WO2007087451A2 (en) * 2006-01-25 2007-08-02 University Of Massachusetts Compositions and methods for enhancing discriminatory rna interference
DK1984382T3 (da) * 2006-01-27 2012-09-03 Santaris Pharma As LNA modificerede fosforthiolerede oligonukleotider
US8229398B2 (en) * 2006-01-30 2012-07-24 Qualcomm Incorporated GSM authentication in a CDMA network
EP1989307B1 (en) * 2006-02-08 2012-08-08 Quark Pharmaceuticals, Inc. NOVEL TANDEM siRNAS
US7910566B2 (en) 2006-03-09 2011-03-22 Quark Pharmaceuticals Inc. Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA
FI20060246A0 (fi) 2006-03-16 2006-03-16 Jukka Westermarck Uusi kasvua stimuloiva proteiini ja sen käyttö
WO2007109609A2 (en) * 2006-03-17 2007-09-27 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method for inhibiting angiogenesis
WO2007107162A2 (en) 2006-03-23 2007-09-27 Santaris Pharma A/S Small internally segmented interfering rna
US7956177B2 (en) * 2006-03-24 2011-06-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. dsRNA compositions and methods for treating HPV infection
FR2898908A1 (fr) 2006-03-24 2007-09-28 Agronomique Inst Nat Rech Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence
WO2007115047A2 (en) * 2006-03-29 2007-10-11 Senesco Technologies, Inc. Inhibition of hiv replication and expression of p24 with eif-5a
US7718629B2 (en) 2006-03-31 2010-05-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 gene
ES2776100T3 (es) 2006-03-31 2020-07-29 Massachusetts Inst Technology Sistema para el suministro dirigido de agentes terapéuticos
US20090226446A1 (en) * 2006-04-06 2009-09-10 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung Des Offentilchen Rechts Method to Inhibit the Propagation of an Undesired Cell Population
EP2010226B1 (en) 2006-04-07 2014-01-15 The Research Foundation of State University of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
US9044461B2 (en) 2006-04-07 2015-06-02 The Research Foundation Of State University Of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
CA2648581A1 (en) * 2006-04-07 2008-09-12 Chimeros, Inc. Compositions and methods for treating b- cell malignancies
WO2007120883A2 (en) * 2006-04-12 2007-10-25 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to hepcidin
EP2010225A4 (en) * 2006-04-13 2010-04-21 Cornell Res Foundation Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR C-REL TARGETING
EP2450437B1 (en) 2006-04-14 2017-05-17 Cell Signaling Technology, Inc. Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors
CA2650140A1 (en) 2006-04-14 2007-10-25 Mriganka Sur Identifying and modulating molecular pathways that mediate nervous system plasticity
WO2007127919A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the jc virus
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
ES2874149T3 (es) 2006-05-11 2021-11-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para inhibir la expresión del gen PCSK9
US20090130212A1 (en) * 2006-05-15 2009-05-21 Physical Pharmaceutica, Llc Composition and improved method for preparation of small particles
US8367113B2 (en) 2006-05-15 2013-02-05 Massachusetts Institute Of Technology Polymers for functional particles
US20070269892A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-22 Nastech Pharmaceutical Company Inc. FORMULATIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY dsRNA
CA2653052A1 (en) * 2006-05-19 2007-11-29 The Scripps Research Institute Treatment of protein misfolding
EP2392583A1 (en) * 2006-05-19 2011-12-07 Alnylam Europe AG. RNAi modulation of Aha and therapeutic uses thereof
EP2584051B1 (en) * 2006-05-22 2014-07-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting expressions of IKK-B gene
US9273356B2 (en) 2006-05-24 2016-03-01 Medtronic, Inc. Methods and kits for linking polymorphic sequences to expanded repeat mutations
US20070275923A1 (en) * 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
US8598333B2 (en) * 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
GB0610542D0 (en) * 2006-05-26 2006-07-05 Medical Res Council Screening method
WO2007141796A2 (en) 2006-06-09 2007-12-13 Quark Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic uses of inhibitors of rtp801l
US7915399B2 (en) 2006-06-09 2011-03-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
PT2029746E (pt) * 2006-06-12 2012-10-15 Exegenics Inc D B A Opko Health Inc Composições e métodos para a inibição do sirna de angiogenese
US9200275B2 (en) * 2006-06-14 2015-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods and compositions for regulating cell cycle progression
WO2007150030A2 (en) 2006-06-23 2007-12-27 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
US8124752B2 (en) * 2006-07-10 2012-02-28 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the MYC gene
GB0613753D0 (en) 2006-07-11 2006-08-23 Norwegian Radium Hospital Res Method
JP5431151B2 (ja) 2006-07-13 2014-03-05 ユニバーシティー オブ アイオワ リサーチ ファンデーション 血管障害および加齢黄斑変性症の治療および診断のための方法および試薬
JP4756271B2 (ja) * 2006-07-18 2011-08-24 独立行政法人産業技術総合研究所 ガン細胞の老化、アポトーシス誘導剤
AU2007276388A1 (en) * 2006-07-21 2008-01-24 Silence Therapeutics Ag Means for inhibiting the expression of protein kinase 3
US20080039415A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Gregory Robert Stewart Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders
US20100330105A1 (en) * 2006-08-22 2010-12-30 John Hopkins University Anticancer Combination Therapies
DE102006039479A1 (de) 2006-08-23 2008-03-06 Febit Biotech Gmbh Programmierbare Oligonukleotidsynthese
US7872118B2 (en) * 2006-09-08 2011-01-18 Opko Ophthalmics, Llc siRNA and methods of manufacture
EP2076599A2 (en) * 2006-09-19 2009-07-08 Asuragen, Inc. Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
JP2010510964A (ja) * 2006-09-19 2010-04-08 アシュラジェン インコーポレイテッド 治療的介入の標的としての、ｍｉＲ−１５、ｍｉＲ−２６、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−１８８、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−２１６、ｍｉＲ−３３１、ｍｍｕ−ｍｉＲ−２９２−３ｐによって調節される遺伝子および経路
AU2007299629C1 (en) 2006-09-21 2012-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the HAMP gene
WO2008036841A2 (en) 2006-09-22 2008-03-27 Dharmacon, Inc. Tripartite oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by rna interference
JP2010505897A (ja) * 2006-10-11 2010-02-25 マックス−プランク−ゲゼルシャフト・ツア・フェルデルング・デア・ヴィッセンシャフテン・エー・ファオ インフルエンザターゲット
WO2008063760A2 (en) * 2006-10-18 2008-05-29 The University Of Texas M.D. Anderson Cancer Center Methods for treating cancer targeting transglutaminase
JP2010507387A (ja) 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
WO2008052774A2 (en) 2006-10-31 2008-05-08 Noxxon Pharma Ag Methods for detection of a single- or double-stranded nucleic acid molecule
EP2078079B1 (en) 2006-11-01 2011-05-04 The Medical Research and Infrastructure Fund of the Tel-Aviv Sourasky Medical Center Adipocyte-specific constructs and methods for inhibiting platelet-type 12 lipoxygenase expression
US8324367B2 (en) 2006-11-03 2012-12-04 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US9375440B2 (en) 2006-11-03 2016-06-28 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US8252526B2 (en) * 2006-11-09 2012-08-28 Gradalis, Inc. ShRNA molecules and methods of use thereof
US8906874B2 (en) 2006-11-09 2014-12-09 Gradalis, Inc. Bi-functional shRNA targeting Stathmin 1 and uses thereof
US8758998B2 (en) 2006-11-09 2014-06-24 Gradalis, Inc. Construction of bifunctional short hairpin RNA
US7988668B2 (en) 2006-11-21 2011-08-02 Medtronic, Inc. Microsyringe for pre-packaged delivery of pharmaceuticals
US7819842B2 (en) 2006-11-21 2010-10-26 Medtronic, Inc. Chronically implantable guide tube for repeated intermittent delivery of materials or fluids to targeted tissue sites
US8034921B2 (en) * 2006-11-21 2011-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof
WO2008062909A1 (en) * 2006-11-22 2008-05-29 The University Of Tokyo ENVIRONMENT-RESPONDING siRNA CARRIER USING DISULFIDE-BRIDGED POLYMERIC MICELLE
US8444971B2 (en) 2006-11-27 2013-05-21 Diadexus, Inc. OVR110 antibody compositions and methods of use
JP2010510772A (ja) 2006-11-27 2010-04-08 パトリス リミテッド 新生細胞における新規なグリコシル化ペプチド標的
US20080171719A1 (en) * 2006-11-28 2008-07-17 Alcon Manufacturing, Ltd. RNAi-MEDIATED INHIBITION OF AQUAPORIN 1 FOR TREATMENT OF IOP-RELATED CONDITIONS
US20080261907A1 (en) * 2006-11-30 2008-10-23 University Of Southern California Compositions and methods of sphingosine kinase inhibitors in radiation therapy of various cancers
DK2104737T3 (da) * 2006-12-08 2013-05-27 Asuragen Inc Funktioner og formål for let-7 mikro-RNAer
WO2008073920A2 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
AU2007334502B2 (en) * 2006-12-14 2011-12-15 Novartis Ag Compositions and methods to treat muscular & cardiovascular disorders
CA2671270A1 (en) * 2006-12-29 2008-07-17 Asuragen, Inc. Mir-16 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
US7754698B2 (en) * 2007-01-09 2010-07-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of FR-alpha expression
US9896511B2 (en) 2007-01-10 2018-02-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies
US20100086526A1 (en) * 2007-01-16 2010-04-08 Abraham Hochberg Nucleic acid constructs and methods for specific silencing of h19
US20080171906A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-17 Everaerts Frank J L Tissue performance via hydrolysis and cross-linking
CA2712056C (en) 2007-01-16 2016-06-21 The University Of Queensland Method of inducing an immune response
WO2008088836A2 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 The Burnham Institute For Medical Research Compositions and methods for treatment of colorectal cancer
CN102099367A (zh) * 2007-01-17 2011-06-15 蒙特利尔临床研究所 具有季碳中心的核苷和核苷酸类似物以及其使用方法
US8455188B2 (en) 2007-01-26 2013-06-04 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Modification of exosomal components for use as a vaccine
WO2008093331A1 (en) * 2007-01-29 2008-08-07 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance
US20100183696A1 (en) * 2007-01-30 2010-07-22 Allergan, Inc Treating Ocular Diseases Using Peroxisome Proliferator-Activated Receptor Delta Antagonists
US9217129B2 (en) 2007-02-09 2015-12-22 Massachusetts Institute Of Technology Oscillating cell culture bioreactor
US8507200B2 (en) 2007-02-09 2013-08-13 Northwestern University Particles for detecting intracellular targets
DE102007008596B4 (de) 2007-02-15 2010-09-02 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von PNA und siRNA, Verfahren zu deren zellspezifischen Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
WO2008103643A1 (en) 2007-02-20 2008-08-28 Monsanto Technology, Llc Invertebrate micrornas
US7872119B2 (en) 2007-02-26 2011-01-18 Quark Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of RTP801 and their use in disease treatment
US20100292301A1 (en) * 2007-02-28 2010-11-18 Elena Feinstein Novel sirna structures
US9018163B2 (en) * 2007-03-02 2015-04-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modulating PDX-1 with PCIF1, methods and uses thereof
US20080299659A1 (en) * 2007-03-02 2008-12-04 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof
CA2679339A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting wnt gene expression and uses thereof
US9085638B2 (en) 2007-03-07 2015-07-21 The Johns Hopkins University DNA vaccine enhancement with MHC class II activators
US20080260765A1 (en) * 2007-03-15 2008-10-23 Johns Hopkins University HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof
PL2129680T3 (pl) 2007-03-21 2015-10-30 Brookhaven Science Ass Llc Łączone kompozycje cząsteczek antysensownych o strukturze spinki do włosów oraz sposoby modulacji ekspresji
US7812002B2 (en) 2007-03-21 2010-10-12 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer
PE20090064A1 (es) * 2007-03-26 2009-03-02 Novartis Ag Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende
AU2008232891B2 (en) * 2007-03-29 2012-01-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the Ebola
EP2136788B1 (en) 2007-03-30 2011-10-26 Bind Biosciences, Inc. Cancer cell targeting using nanoparticles
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
WO2008124632A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Amphiphilic compound assisted nanoparticles for targeted delivery
CA2683063A1 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
WO2008122314A1 (de) 2007-04-10 2008-10-16 Qiagen Gmbh Rna-interferenz tags
CN101686939B (zh) * 2007-04-17 2013-03-27 巴克斯特国际公司 用于肺部投送的核酸微粒
CA2685127C (en) 2007-04-23 2019-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
WO2008143774A2 (en) * 2007-05-01 2008-11-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy
US20100291042A1 (en) 2007-05-03 2010-11-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
JP5296328B2 (ja) * 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
KR20100029079A (ko) * 2007-05-15 2010-03-15 헬리콘 테라퓨틱스 인코퍼레이티드 Ｇｐｒ12의 저해로 인지 질환을 치료하는 방법
JP2010527243A (ja) * 2007-05-15 2010-08-12 ヘリコン セラピューティクス，インコーポレイテッド 低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）を用いた記憶形成に関わる遺伝子の同定方法
US20090131354A1 (en) * 2007-05-22 2009-05-21 Bader Andreas G miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
BRPI0811170B8 (pt) 2007-05-22 2021-05-25 Arcturus Therapeutics Inc oligonucleotídeos de rna e complexos de rna substituídos por hidroximetila
DK2160464T3 (da) 2007-05-30 2014-08-04 Univ Northwestern Nukleinsyrefunktionaliserede nanopartikler til terapeutiske anvendelser
AU2008287542C1 (en) 2007-06-01 2015-01-22 The Trustees Of Princeton University Treatment of viral infections by modulation of host cell metabolic pathways
US9051391B2 (en) 2007-06-11 2015-06-09 Takara Bio Inc. Method for expression of specific gene
AR066984A1 (es) * 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
WO2008152636A2 (en) * 2007-06-15 2008-12-18 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting nadph oxidase expression
WO2009001359A2 (en) 2007-06-27 2008-12-31 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of pro-apoptotic genes
EP3895737A1 (en) * 2007-06-29 2021-10-20 Stelic Institute Of Regenerative Medicine, Stelic Institute & Co. Method of fixing and expressing physiologically active substance
ES2428009T3 (es) * 2007-07-05 2013-11-05 Novartis Ag ARNds para tratar infecciones virales
WO2009007934A2 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Neurim Pharmaceuticals (1991) Ltd. Cd44 splice variants in neurodegenerative diseases
US8828960B2 (en) * 2007-07-17 2014-09-09 Idexx Laboratories, Inc. Amino acid vitamin ester compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
JP2009033986A (ja) * 2007-07-31 2009-02-19 Sumitomo Chemical Co Ltd ＲＮＡ干渉による遺伝子発現抑制のためのターゲット遺伝子としてのｃａｒ遺伝子の使用
EP2030615A3 (en) 2007-08-13 2009-12-02 ELFORD, Howard L. Ribonucleotide reductase inhibitors for use in the treatment or prevention of neuroinflammatory or autoimmune diseases
US8501929B2 (en) * 2007-08-17 2013-08-06 Biochrom Pharma Inc. PTHrP, its isoforms and antagonist thereto in the diagnosis and treatment of disease
JP2010537640A (ja) * 2007-08-27 2010-12-09 ボストン バイオメディカル， インコーポレイテッド マイクロｒｎａ模倣剤または阻害剤としての非対称性ｒｎａ二重鎖の組成物
TW200932908A (en) * 2007-08-30 2009-08-01 Virexx Medical Corp Antigenic compositions and use of same in the targeted delivery of nucleic acids
US20090081789A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-26 Greenville Hospital System Activation of nuclear factor kappa B
WO2009033027A2 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Medtronic, Inc. Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain
US8361714B2 (en) 2007-09-14 2013-01-29 Asuragen, Inc. Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof
KR20100065190A (ko) * 2007-09-14 2010-06-15 닛토덴코 가부시키가이샤 약물 담체
JP5049713B2 (ja) * 2007-09-14 2012-10-17 株式会社コナミデジタルエンタテインメント ゲームシステム並びにこれを構成するゲーム装置及び課題報知装置
DK2548962T3 (en) 2007-09-19 2016-04-11 Applied Biosystems Llc Sirna sequence-independent modification formats to reduce off-target phenotype effects in RNAI and stabilized forms thereof
WO2009042625A1 (en) * 2007-09-25 2009-04-02 Idexx Laboratories, Inc. Pharmaceutical compositions for administering oligonucleotides
US20120082659A1 (en) * 2007-10-02 2012-04-05 Hartmut Land Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations
AU2008306455C1 (en) 2007-10-03 2014-04-17 Quark Pharmaceuticals, Inc. Novel siRNA structures
EP2205746A4 (en) * 2007-10-04 2010-12-22 Univ Texas MODULATION OF GENE EXPRESSION WITH AGRNA AND GAPS WITH ANTISENSE TRANSCRIPTS AS A TARGET
EP2630966B1 (en) 2007-10-12 2017-04-19 Massachusetts Institute of Technology Vaccine nanotechnology
US8097712B2 (en) * 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
US20100098664A1 (en) * 2007-11-28 2010-04-22 Mathieu Jean-Francois Desclaux Lentiviral vectors allowing RNAi mediated inhibition of GFAP and vimentin expression
US8324369B2 (en) * 2007-11-30 2012-12-04 Baylor College Of Medicine Dendritic cell vaccine compositions and uses of same
US8071562B2 (en) 2007-12-01 2011-12-06 Mirna Therapeutics, Inc. MiR-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2010070380A2 (en) 2007-12-03 2010-06-24 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health Of Human Services, National Institutes Of Health Doc1 compositions and methods for treating cancer
EP2231194B1 (en) * 2007-12-04 2017-02-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Folate-irna conjugates
WO2009082607A2 (en) 2007-12-04 2009-07-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Targeting lipids
EP2848688A1 (en) 2007-12-10 2015-03-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor VII gene
US8614311B2 (en) 2007-12-12 2013-12-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof
US20110105584A1 (en) * 2007-12-12 2011-05-05 Elena Feinstein Rtp80il sirna compounds and methods of use thereof
AU2008334948B2 (en) 2007-12-13 2014-11-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of RSV infection
WO2009079399A2 (en) * 2007-12-14 2009-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method of treating neurodegenerative disease
US7845686B2 (en) * 2007-12-17 2010-12-07 S & B Technical Products, Inc. Restrained pipe joining system for plastic pipe
KR100949791B1 (ko) * 2007-12-18 2010-03-30 이동기 오프-타겟 효과를 최소화하고 ＲＮＡｉ 기구를 포화시키지않는 신규한 ｓｉＲＮＡ 구조 및 그 용도
WO2009086156A2 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 Asuragen, Inc. Mir-10 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
WO2009090639A2 (en) * 2008-01-15 2009-07-23 Quark Pharmaceuticals, Inc. Sirna compounds and methods of use thereof
MX2010008394A (es) * 2008-01-31 2010-11-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Metodos optimizados para administracion de arndc focalizando el gen pcsk9.
US20090263803A1 (en) * 2008-02-08 2009-10-22 Sylvie Beaudenon Mirnas differentially expressed in lymph nodes from cancer patients
US8188060B2 (en) 2008-02-11 2012-05-29 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation
US10131904B2 (en) 2008-02-11 2018-11-20 Rxi Pharmaceuticals Corporation Modified RNAi polynucleotides and uses thereof
WO2009137128A2 (en) 2008-02-12 2009-11-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of cd45 gene
US7977321B2 (en) * 2008-02-12 2011-07-12 University Of Tennessee Research Foundation Small interfering RNAs targeting feline herpes virus
EP2247748A2 (en) * 2008-02-13 2010-11-10 Elan Pharma International Limited Alpha-synuclein kinase
DE102009043743B4 (de) 2009-03-13 2016-10-13 Friedrich-Schiller-Universität Jena Zellspezifisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA sowie Applikationskits zu deren Herstellung und Verwendung
WO2009103067A2 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods to treat asthma
SG188121A1 (en) 2008-03-05 2013-03-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes
EP2268832A2 (en) * 2008-03-06 2011-01-05 Asuragen, INC. Microrna markers for recurrence of colorectal cancer
CA2718520C (en) * 2008-03-17 2020-01-07 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Identification of micro-rnas involved in neuromuscular synapse maintenance and regeneration
US20110028531A1 (en) * 2008-03-20 2011-02-03 Elena Feinstein Novel sirna compounds for inhibiting rtp801
EP2271757A2 (en) * 2008-03-26 2011-01-12 Asuragen, INC. Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer
EP2105145A1 (en) * 2008-03-27 2009-09-30 ETH Zürich Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides
BRPI0910446A8 (pt) * 2008-03-31 2016-07-26 Nat Inst Of Advanced Ind Scien rna modificado por lipídeo de filamento duplo tendo alto efeito de interferência de rna
TWI348916B (en) * 2008-04-03 2011-09-21 Univ Nat Taiwan A novel treatment tool for cancer: rna interference of bcas2
WO2009126726A1 (en) * 2008-04-08 2009-10-15 Asuragen, Inc Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv)
EP2271368B1 (en) * 2008-04-11 2018-12-05 Cedars-Sinai Medical Center Poly(beta malic acid) with pendant leu-leu-leu tripeptide for effective cytoplasmic drug delivery
WO2009126933A2 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
US8278287B2 (en) * 2008-04-15 2012-10-02 Quark Pharmaceuticals Inc. siRNA compounds for inhibiting NRF2
AU2009238175C1 (en) 2008-04-15 2023-11-30 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
WO2009129465A2 (en) 2008-04-17 2009-10-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of xbp-1 gene
US20090285861A1 (en) * 2008-04-17 2009-11-19 Tzyy-Choou Wu Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods
USRE48948E1 (en) 2008-04-18 2022-03-01 Warsaw Orthopedic, Inc. Clonidine compounds in a biodegradable polymer
CA2721870C (en) 2008-04-21 2020-12-22 Tissue Regeneration Therapeutics, Inc. Genetically modified human umbilical cord perivascular cells for prophylaxis against or treatment of biological or chemical agents
US8324366B2 (en) 2008-04-29 2012-12-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins
WO2009134443A2 (en) * 2008-05-02 2009-11-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Rna-induced translational silencing and cellular apoptosis
US8258111B2 (en) 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
US20090291073A1 (en) * 2008-05-20 2009-11-26 Ward Keith W Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same
WO2009146417A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-03 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid
CA2726052A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small rna targeting of gene promoters
JP5524189B2 (ja) 2008-06-06 2014-06-18 クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド 耳障害治療のための組成物および方法
US20090305611A1 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Flow International Corporation Device and method for improving accuracy of a high-pressure fluid jet apparatus
JP2011522552A (ja) * 2008-06-13 2011-08-04 リボックス・ゲーエムベーハー 化学的に修飾されたｒｎａの酵素的合成のための方法
US8361510B2 (en) * 2008-06-16 2013-01-29 Georgia Tech Research Corporation Nanogels for cellular delivery of therapeutics
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
US20110184046A1 (en) * 2008-07-11 2011-07-28 Dinah Wen-Yee Sah Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of GSK-3 Genes
US8309791B2 (en) 2008-07-16 2012-11-13 Recombinectics, Inc. Method for producing a transgenic pig using a hyper-methylated transposon
US8815818B2 (en) 2008-07-18 2014-08-26 Rxi Pharmaceuticals Corporation Phagocytic cell delivery of RNAI
US8039658B2 (en) * 2008-07-25 2011-10-18 Air Products And Chemicals, Inc. Removal of trace arsenic impurities from triethylphosphate (TEPO)
US8212019B2 (en) * 2008-07-30 2012-07-03 University Of Massachusetts Nucleic acid silencing sequences
US9433684B2 (en) 2008-08-19 2016-09-06 Nektar Therapeutics Conjugates of small-interfering nucleic acids
NZ601660A (en) 2008-08-25 2014-05-30 Excaliard Pharmaceuticals Inc Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof
WO2011028218A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process for triphosphate oligonucleotide synthesis
EP2334794B8 (en) * 2008-09-15 2017-04-19 The Children's Medical Center Corporation Modulation of bcl11a for treatment of hemoglobinopathies
CA2746527A1 (en) 2008-09-22 2010-03-25 Rxi Pharmaceuticals Corporation Rna interference in skin indications
EP2342616A2 (en) 2008-09-23 2011-07-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
CA2739170A1 (en) 2008-09-25 2010-04-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene
EP2344638A1 (en) * 2008-10-06 2011-07-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of an rna from west nile virus
US8802646B2 (en) * 2008-10-08 2014-08-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
WO2010042292A1 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease
US9149492B2 (en) 2008-10-08 2015-10-06 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
US9388414B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
US9388413B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
CN104119242B (zh) 2008-10-09 2017-07-07 泰米拉制药公司 改善的氨基脂质和递送核酸的方法
US8591905B2 (en) 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US9458472B2 (en) * 2008-10-15 2016-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Detection and destruction of cancer cells using programmed genetic vectors
US8283460B2 (en) * 2008-10-15 2012-10-09 Somagenics, Inc. Short hairpin RNAs for inhibition of gene expression
EA036772B1 (ru) 2008-10-20 2020-12-18 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. Композиции и способы для ингибирования экспрессии транстиретина
US20100168205A1 (en) * 2008-10-23 2010-07-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and Compositions for Prevention or Treatment of RSV Infection Using Modified Duplex RNA Molecules
US20110190380A1 (en) * 2008-10-23 2011-08-04 Elena Feinstein Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof
HUE037082T2 (hu) 2008-11-10 2018-08-28 Arbutus Biopharma Corp Új lipidek és készítmények terápiás hatóanyagok szállítására
US20100179213A1 (en) * 2008-11-11 2010-07-15 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells
PL2365804T3 (pl) * 2008-11-13 2015-10-30 Modgene Llc Zmniejszanie obciążenia amyloidem-beta w tkance niemózgowej
WO2010059226A2 (en) 2008-11-19 2010-05-27 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of map4k4 through rnai
WO2010059575A2 (en) 2008-11-21 2010-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
CN106955360A (zh) 2008-11-24 2017-07-18 西北大学 多价rna纳米颗粒组合物
EP2191834A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Compositions and methods for treating retrovirus infections
SG171879A1 (en) 2008-12-03 2011-07-28 Marina Biotech Inc Usirna complexes
US20100291188A1 (en) * 2008-12-04 2010-11-18 Musc Foundation For Research Development Periostin Inhibitory Compositions for Myocardial Regeneration, Methods of Delivery, and Methods of Using Same
JP5832293B2 (ja) 2008-12-04 2015-12-16 オプコ ファーマシューティカルズ、エルエルシー 血管新生促進ｖｅｇｆイソ型を選択的に抑制する組成物および方法
AU2009333580B2 (en) 2008-12-09 2016-07-07 Genentech, Inc. Anti-PD-L1 antibodies and their use to enhance T-cell function
EP2373382B1 (en) 2008-12-10 2017-02-15 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
EP2356236B1 (en) * 2008-12-11 2015-07-29 Xiangxue Group (Hong Kong) Company Limited siRNA COMPOSITIONS AND METHODS FOR POTENTLY INHIBITING VIRAL INFECTION
WO2010067882A1 (ja) * 2008-12-12 2010-06-17 株式会社クレハ 癌及び喘息治療のための医薬組成物
EP2370175A2 (en) 2008-12-16 2011-10-05 Bristol-Myers Squibb Company Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation
WO2010080452A2 (en) 2008-12-18 2010-07-15 Quark Pharmaceuticals, Inc. siRNA COMPOUNDS AND METHODS OF USE THEREOF
CA2748520C (en) 2008-12-26 2013-12-17 Se-Ho Kim Pharmaceutical composition containing an anionic drug, and a production method therefor
US9493774B2 (en) 2009-01-05 2016-11-15 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of PCSK9 through RNAi
US20100233270A1 (en) 2009-01-08 2010-09-16 Northwestern University Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles
US8980820B2 (en) * 2009-01-19 2015-03-17 The Research Foundation For The State University Of New York Fatty acid binding proteins as drug targets for endocannabinoids
WO2010084134A1 (en) * 2009-01-20 2010-07-29 Vib Vzw Phd2 inhibition for blood vessel normalization, and uses thereof
CA2750561C (en) 2009-01-26 2017-10-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
AU2010211133A1 (en) * 2009-02-03 2011-07-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for inhibiting expression of PTP1B genes
US9745574B2 (en) 2009-02-04 2017-08-29 Rxi Pharmaceuticals Corporation RNA duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
AU2010213578B2 (en) 2009-02-12 2015-01-29 Cell Signaling Technology, Inc. Mutant ROS expression in human cancer
EP2401375B1 (en) * 2009-02-24 2017-08-23 RiboxX GmbH Improved design of small-interfering rna
EP2669290A1 (en) 2009-03-02 2013-12-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Nucleic Acid Chemical Modifications
EP2408917A2 (en) * 2009-03-19 2012-01-25 Merck Sharp&Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF BTB AND CNC HOMOLOGY 1, BASIC LEUCINE ZIPPER TRANSCRIPTION FACTOR 1 (BACH 1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) SEQUENCE LISTING
CN102378766A (zh) 2009-03-23 2012-03-14 夸克医药公司 治疗癌症和纤维化疾病的化合物组合物和方法
US20100239632A1 (en) 2009-03-23 2010-09-23 Warsaw Orthopedic, Inc. Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
EP2421972A2 (en) * 2009-04-24 2012-02-29 The Board of Regents of The University of Texas System Modulation of gene expression using oligomers that target gene regions downstream of 3' untranslated regions
US8367350B2 (en) 2009-04-29 2013-02-05 Morehouse School Of Medicine Compositions and methods for diagnosis, prognosis and management of malaria
US8933049B2 (en) * 2009-05-05 2015-01-13 Medical Diagnostic Laboratories, Llc Repressor on IFN-λ promoter and siRNA against ZEB1 and BLIMP-1 to increase IFN-λ gene activity
EP2427180B1 (en) 2009-05-05 2016-04-13 Beeologics Inc. Prevention and treatment of nosema disease in bees
WO2010129791A1 (en) * 2009-05-06 2010-11-11 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Rna targeting in alpha-synucleinopathies
AU2010247389A1 (en) * 2009-05-15 2011-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (GCR) genes
US20120114710A1 (en) * 2009-05-18 2012-05-10 Lynn Kirkpatrick Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto
US20120128673A1 (en) 2009-05-20 2012-05-24 Schering Corporation Modulation of pilr receptors to treat microbial infections
WO2010135669A1 (en) * 2009-05-22 2010-11-25 Sabiosciences Corporation Arrays and methods for reverse genetic functional analysis
ES2804764T3 (es) 2009-06-01 2021-02-09 Halo Bio Rnai Therapeutics Inc Polinucleótidos para la interferencia de ARN multivalente, composiciones y métodos de uso de los mismos
WO2010140024A1 (en) * 2009-06-03 2010-12-09 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods for diagnosing and treating a renal disease in an individual
CA2764503A1 (en) 2009-06-05 2010-12-09 University Of Florida Research Foundation, Inc. Isolation and targeted suppression of lignin biosynthetic genes from sugarcane
CN102458418B (zh) 2009-06-08 2015-09-16 夸克制药公司 一种寡核苷酸化合物的制药用途
CN107129998A (zh) 2009-06-10 2017-09-05 淡马锡生命科学研究院有限公司 用于棉花中基因功能性分析的病毒诱导的基因沉默(vigs)
MX342785B (es) 2009-06-10 2016-10-12 Alnylam Pharmaceuticals Inc Formulacion mejorada de lipido.
WO2010147992A1 (en) 2009-06-15 2010-12-23 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for increasing efficacy of lipid formulated sirna
NZ597504A (en) * 2009-06-15 2013-10-25 Alnylam Pharmaceuticals Inc Lipid formulated dsrna targeting the pcsk9 gene
US20100324124A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods relating to DNA-based particles
US20100323018A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Branched DNA/RNA monomers and uses thereof
GB0910723D0 (en) 2009-06-22 2009-08-05 Sylentis Sau Novel drugs for inhibition of gene expression
ES2613498T3 (es) 2009-07-01 2017-05-24 Protiva Biotherapeutics Inc. Nuevas formulaciones de lípidos para el suministro de agentes terapéuticos a tumores sólidos
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8871730B2 (en) 2009-07-13 2014-10-28 Somagenics Inc. Chemical modification of short small hairpin RNAs for inhibition of gene expression
SMT201700293T1 (it) 2009-07-20 2017-07-18 Bristol Myers Squibb Co Combinazione di un anticorpo anti-ctla-4 con etoposide per il trattamento sinergico di malattie proliferative
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
ES2666152T3 (es) 2009-08-13 2018-05-03 The Johns Hopkins University Métodos de modulación de la función inmunitaria con anticuerpos anti-B7-H7CR
US9029338B2 (en) 2009-08-14 2015-05-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the ebola virus
CN102481379A (zh) 2009-08-24 2012-05-30 菲吉尼克斯公司 靶向pax2用于治疗乳腺癌
WO2011031600A1 (en) 2009-09-10 2011-03-17 Schering Corporation Use of il-33 antagonists to treat fibrotic disease
WO2011032100A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of kshv vil6 and human il6
EP2295543A1 (en) 2009-09-11 2011-03-16 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Method for the preparation of an influenza virus
WO2011034798A1 (en) 2009-09-15 2011-03-24 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of eg5 and vegf genes
US8916693B2 (en) 2009-09-17 2014-12-23 Nektar Therapeutics Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids
US9187746B2 (en) 2009-09-22 2015-11-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual targeting siRNA agents
WO2011038160A2 (en) * 2009-09-23 2011-03-31 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer
US20150025122A1 (en) 2009-10-12 2015-01-22 Larry J. Smith Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
DK2494075T3 (en) 2009-10-30 2018-07-23 Univ Northwestern TABLE-MANAGED NANOCONJUGATES
US9101643B2 (en) 2009-11-03 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (TTR)
US9799416B2 (en) * 2009-11-06 2017-10-24 Terrapower, Llc Methods and systems for migrating fuel assemblies in a nuclear fission reactor
US8901097B2 (en) 2009-11-08 2014-12-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods for delivery of siRNA to the spinal cord and therapies arising therefrom
CN102770529B (zh) 2009-11-17 2018-06-05 Musc研究发展基金会 针对人核仁素的人单克隆抗体
DK2504435T3 (da) 2009-11-26 2019-12-09 Quark Pharmaceuticals Inc Sirna-forbindelser omfattende terminale substitutioner
WO2011071860A2 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions for nucleic acid delivery
EP2510098B1 (en) 2009-12-09 2015-02-11 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the cns
KR101718534B1 (ko) * 2009-12-09 2017-03-22 닛토덴코 가부시키가이샤 Ｈｓｐ４７ 발현의 조절
WO2011072240A1 (en) 2009-12-10 2011-06-16 Cedars-Sinai Medical Center Drug delivery of temozolomide for systemic based treatment of cancer
EP2336171A1 (en) 2009-12-11 2011-06-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel targets for the treatment of proliferative diseases
US8691227B2 (en) 2009-12-17 2014-04-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods of treating multiple sclerosis, rheumatoid arthritis and inflammatory bowel disease using agonists antibodies to PILR-α
CA2784568A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 The University Of British Columbia Lipid particles for delivery of nucleic acids
EP3000885B1 (en) 2009-12-18 2018-07-25 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Organic compositions to treat hsf1-related diseases
AU2010334799A1 (en) 2009-12-23 2012-07-12 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Influenza targets
CN108295087B (zh) 2009-12-23 2021-01-15 格兰达利斯有限公司 弗林蛋白酶敲减和gm-csf增强的(fang)癌症疫苗
US20130023578A1 (en) 2009-12-31 2013-01-24 Samyang Biopharmaceuticals Corporation siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same
TW201124159A (en) * 2010-01-07 2011-07-16 Univ Nat Cheng Kung Small interference RNA molecule and applications thereof
WO2011084193A1 (en) 2010-01-07 2011-07-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs
KR101854926B1 (ko) * 2010-01-11 2018-05-04 큐알엔에이, 인크. 성 호르몬 결합 글로불린 (ｓｈｂｇ)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 성 호르몬 결합 글로불린 (ｓｈｂｇ) 관련된 질환의 치료
WO2011088058A1 (en) * 2010-01-12 2011-07-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expressions of factor vii and pten genes
DE102010004957A1 (de) 2010-01-14 2011-07-21 Universitätsklinikum Jena, 07743 Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung
WO2011094580A2 (en) 2010-01-28 2011-08-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chelated copper for use in the preparation of conjugated oligonucleotides
US9198972B2 (en) 2010-01-28 2015-12-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
US8722641B2 (en) 2010-01-29 2014-05-13 St. Jude Children's Research Hospital Oligonucleotides which inhibit p53 induction in response to cellular stress
JP2013519869A (ja) 2010-02-10 2013-05-30 ノバルティス アーゲー 筋肉成長のための方法および化合物
CA2793521A1 (en) 2010-03-19 2011-09-22 University Of South Alabama Use of antisense gli1 for reducing the dosage of a therapeutic compound to treat needed to treat a cancer
US9080171B2 (en) 2010-03-24 2015-07-14 RXi Parmaceuticals Corporation Reduced size self-delivering RNAi compounds
CN106074591B (zh) 2010-03-24 2020-01-14 菲奥医药公司 眼部症候中的rna干扰
BR112012024049A2 (pt) 2010-03-24 2017-03-01 Rxi Pharmaceuticals Corp interferência de rna em indicações dérmicas e fibróticas
US8455455B1 (en) 2010-03-31 2013-06-04 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
WO2011133658A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Boston Medical Center Corporation Compositions and methods for targeting and delivering therapeutics into cells
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
WO2011133868A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
RS56011B1 (sr) 2010-04-29 2017-09-29 Ionis Pharmaceuticals Inc Modulacija ekspresije transtiretina
EP2563359A1 (en) 2010-04-30 2013-03-06 Allergan, Inc. Novel treatment for age related macular degeneration and ocular ischemic disease associated with complement activation by targeting 5-lipoxygenase
KR20130107203A (ko) 2010-05-04 2013-10-01 더 브리검 앤드 우먼즈 하스피털, 인크. 섬유증의 검출 및 치료
US8563243B2 (en) * 2010-05-12 2013-10-22 University Of South Carolina Methods for affecting homology-directed DNA double stranded break repair
AU2011258165B2 (en) 2010-05-26 2016-11-17 Selecta Biosciences, Inc. Dose selection of adjuvanted synthetic nanocarriers
EP2390327A1 (en) 2010-05-27 2011-11-30 Sylentis S.A. siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
DE102010022937A1 (de) 2010-06-04 2011-12-08 Universitätsklinikum Jena Zellspezifisch aktivierbare biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA, Verfahren zu deren Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
WO2011163121A1 (en) 2010-06-21 2011-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
KR101553753B1 (ko) 2010-06-24 2015-09-16 쿠아크 파마수티칼스 인코퍼레이티드 Ｒｈｏａ에 대한 이중 가닥 ｒｎａ 및 그의 용도
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
WO2012016184A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012016188A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
US20120101108A1 (en) 2010-08-06 2012-04-26 Cell Signaling Technology, Inc. Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer
WO2012027206A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. SINGLE-STRANDED RNAi AGENTS CONTAINING AN INTERNAL, NON-NUCLEIC ACID SPACER
US8933051B2 (en) 2010-09-30 2015-01-13 University Of Zurich Treatment of B-cell lymphoma with microRNA
US20140315973A1 (en) * 2010-10-07 2014-10-23 Agency For Science, Technology And Research Parp-1 inhibitors
WO2012051491A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary National Institutes Of Health Compositions and methods for controlling neurotropic viral pathogenesis by micro-rna targeting
DK2631291T3 (da) * 2010-10-22 2019-06-11 Olix Pharmaceuticals Inc Nukleinsyremolekyler, der inducerer rna-interferens, og anvendelser deraf
WO2012058210A1 (en) 2010-10-29 2012-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACIDS (siNA)
WO2012071436A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Genentech, Inc. Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants
AU2011338682B2 (en) 2010-12-06 2017-04-27 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded oligonucleotide compounds comprising threose modifications
WO2012102793A2 (en) 2010-12-10 2012-08-02 Zirus, Inc. Mammalian genes involved in toxicity and infection
US9617542B2 (en) * 2010-12-14 2017-04-11 The United States of America, as representd by The Secretary of Agriculture Lepidopteran moth control using double-stranded RNA constructs
US9623041B2 (en) 2010-12-30 2017-04-18 Cedars-Sinai Medical Center Polymalic acid-based nanobiopolymer compositions
AU2012205718B2 (en) 2011-01-10 2017-07-06 The Regents Of The University Of Michigan Stem cell factor inhibitor
CA2824526C (en) 2011-01-11 2020-07-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Pegylated lipids and their use for drug delivery
DE102011009470A1 (de) 2011-01-21 2012-08-09 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Nukleotid-Moleküle zur gezielten Abtötung von Zellen, Verwendung derselben sowie Applikationskit
KR101697396B1 (ko) 2011-02-02 2017-01-17 엑스칼리아드 파마슈티컬즈, 인코포레이티드 결합 조직 성장 인자（ctgf）를 표적으로 하는 안티센스 화합물을 사용하여 켈로이드 또는 비후성 흉터를 치료하는 방법
CN103459598B (zh) 2011-02-03 2016-08-10 米尔纳医疗股份有限公司 Mir-124的合成模拟物
US9796979B2 (en) 2011-03-03 2017-10-24 Quark Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
CN103562387A (zh) * 2011-03-03 2014-02-05 夸克医药公司 Toll样受体途径的寡核苷酸调剂
WO2012125554A2 (en) * 2011-03-11 2012-09-20 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for the treatment of cancer
SG193499A1 (en) 2011-03-15 2013-10-30 Univ Utah Res Found Methods of diagnosing and treating vascular associated maculopathy and symptoms thereof
WO2012135696A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 University Of South Alabama Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer
EP2686342A2 (en) 2011-04-12 2014-01-22 The Government of The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Peptide mimetic ligands of polo-like kinase 1 polo box domain and methods of use
WO2012142458A1 (en) 2011-04-13 2012-10-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of ptp1b expression
US8716257B2 (en) * 2011-04-15 2014-05-06 Sutter West Bay Hospitals CMV gene products promote cancer stem cell growth
AU2012242455A1 (en) 2011-04-15 2013-11-28 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
KR20140104344A (ko) 2011-05-20 2014-08-28 더 유나이티드 스테이츠 오브 어메리카, 애즈 리프리젠티드 바이 더 시크리터리, 디파트먼트 오브 헬쓰 앤드 휴먼 서비시스 Ｔ 세포 매개성 질병의 병증을 개선하기 위한 ｔｌ１ａ-ｄｒ３의 상호작용의 차단 및 그것의 항체
ES2572915T3 (es) 2011-06-02 2016-06-03 The University Of Louisville Research Foundation, Inc. Nanopartículas conjugadas a un agente antinucleolina
EP2723861A4 (en) 2011-06-21 2014-12-10 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING HEPCIDINE ANTIMICROBIAL PEPTIDE (HAMP) OR THE ASSOCIATED GENE EXPRESSION
CN103649103A (zh) 2011-06-21 2014-03-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 用于抑制载脂蛋白c-iii(apoc3)基因表达的组合物与方法
ES2923573T3 (es) 2011-06-21 2022-09-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc Composiciones de ARNi de proteína 3 de tipo angiopoyetina (ANGPTL3) y métodos de uso de las mismas
WO2012177949A2 (en) 2011-06-21 2012-12-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes
WO2013001372A2 (en) 2011-06-30 2013-01-03 University Of Oslo Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells
US20140227293A1 (en) 2011-06-30 2014-08-14 Trustees Of Boston University Method for controlling tumor growth, angiogenesis and metastasis using immunoglobulin containing and proline rich receptor-1 (igpr-1)
MX340536B (es) 2011-07-06 2016-07-13 Sykehuset Sorlandet Hf Terapia direccionada al receptor del factor de crecimiento epidermico (egfr).
WO2013006861A1 (en) 2011-07-07 2013-01-10 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Sorghum grain shattering gene and uses thereof in altering seed dispersal
US8853181B2 (en) * 2011-07-21 2014-10-07 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Fidgetin-like 2 as a target to enhance wound healing
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
DE102011118024A1 (de) 2011-08-01 2013-02-07 Technische Universität Dresden Inhibitor der Expression der Pro-Caspase 1
CA3065098C (en) 2011-09-06 2023-08-08 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. The mirna-212/132 family as a therapeutic target
CA2847888A1 (en) 2011-09-09 2013-03-14 Biomed Realty, L.P. Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins
WO2013040251A2 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Asurgen, Inc. Methods and compositions involving mir-135b for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease
EP2760477B1 (en) 2011-09-27 2018-08-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted pegylated lipids
US9951349B2 (en) 2011-09-27 2018-04-24 Yale University Compositions and methods for transient expression of recombinant RNA
JP6294229B2 (ja) 2011-10-18 2018-03-14 ダイセルナ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＤｉｃｅｒｎａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． アミン陽イオン性脂質およびその使用
US20140323549A1 (en) 2011-11-08 2014-10-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system
EP2725103A3 (en) 2011-11-14 2016-01-06 Silenseed Ltd Methods and compositions for treating prostate cancer
HUE048622T2 (hu) 2011-11-18 2020-08-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc RNSi szerek, készítmények és alkalmazási eljárások transztiretin (TTR) asszociált betegségek kezelésére
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
JP2015509085A (ja) 2012-01-01 2015-03-26 キュービーアイ エンタープライゼズ リミテッドＱｂｉ Ｅｎｔｅｒｐｒｉｓｅｓ Ｌｔｄ． 治療剤および診断剤の選択的送達のためのｅｎｄｏ１８０を標的とする粒子
WO2013103401A1 (en) * 2012-01-06 2013-07-11 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
CA2860676A1 (en) 2012-01-09 2013-07-18 Novartis Ag Organic compositions to treat beta-catenin-related diseases
EP2802657B1 (en) 2012-01-12 2018-05-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for treating hearing and balance disorders
US20150126438A1 (en) 2012-01-24 2015-05-07 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Novel ChREBP Isoforms and Methods Using the Same
EP2825209B1 (en) 2012-03-14 2018-08-29 University of Central Florida Research Foundation, Inc. Neurofibromatoses therapeutic agents and screening for same
US20150031750A1 (en) 2012-03-15 2015-01-29 The Scripps Research Institute Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
DK2838998T3 (en) 2012-04-18 2018-01-15 Cell Signaling Technology Inc EGFR AND ROS1 IN CANCER
WO2013165816A2 (en) 2012-05-02 2013-11-07 Merck Sharp & Dohme Corp. SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA) COMPOSITIONS
US9980942B2 (en) 2012-05-02 2018-05-29 Children's Hospital Medical Center Rejuvenation of precursor cells
CN108148838A (zh) 2012-05-22 2018-06-12 奥利克斯医药有限公司 具有细胞内穿透能力的诱导rna干扰的核酸分子及用途
EP2867368B1 (en) 2012-07-06 2022-01-12 Institut Gustave Roussy Simultaneous detection of cannibalism and senescence as prognostic marker for cancer
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
EP2890788A1 (en) 2012-08-31 2015-07-08 The General Hospital Corporation Biotin complexes for treatment and diagnosis of alzheimer's disease
GB201215857D0 (en) 2012-09-05 2012-10-24 Sylentis Sau siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
SG11201501385UA (en) 2012-09-05 2015-03-30 Sylentis Sau Sirna and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
DK2895608T3 (en) 2012-09-12 2019-01-21 Quark Pharmaceuticals Inc DOUBLE-STRENGTHED OIGONUCLEOTIDE MOLECULES FOR P53 AND PROCEDURES FOR USING IT
US9932578B2 (en) 2012-09-12 2018-04-03 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to P53 and methods of use thereof
CN104884065B (zh) 2012-09-21 2019-01-01 强烈治疗剂公司 治疗癌症的方法
EP2904119B1 (en) * 2012-10-02 2020-06-17 The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital Methods relating to dna-sensing pathway related conditions
WO2014055825A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services A formulation of mycobacterial components as an adjuvant for inducing th17 responses
WO2014068072A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 Institut Gustave-Roussy Identification, assessment and therapy of essential thrombocythemia with resistance to jak2 inhibitors
ES2686129T3 (es) 2012-11-13 2018-10-16 Codiak Biosciences, Inc. Administración de agentes terapéuticos
DE102012022596B4 (de) 2012-11-15 2017-05-04 Friedrich-Schiller-Universität Jena Neue zellspezifisch wirksame Nukleotid-Moleküle und Applikationskit zu deren Anwendung
ES2879430T3 (es) 2012-11-15 2021-11-22 Apellis Pharmaceuticals Inc Análogos de compstatina de acción prolongada y composiciones y métodos relacionados
SG11201504038XA (en) 2012-11-27 2015-06-29 Childrens Medical Center Targeting bcl11a distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction
US10125369B2 (en) 2012-12-05 2018-11-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. PCSK9 iRNA compositions and methods of use thereof
US9970002B2 (en) 2012-12-12 2018-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for functional nucleic acid delivery
EP2935333A1 (en) 2012-12-21 2015-10-28 Sykehuset Sorlandet HF Egfr targeted therapy of neurological disorders and pain
US9206423B2 (en) * 2012-12-30 2015-12-08 The Regents Of The University Of California Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork
WO2014113541A1 (en) 2013-01-16 2014-07-24 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Attenuated chlamydia vaccine
DE102013003869B4 (de) 2013-02-27 2016-11-24 Friedrich-Schiller-Universität Jena Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung
WO2014153163A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Process for formulating an anionic agent
JP2016519672A (ja) * 2013-03-15 2016-07-07 ジェネンテック， インコーポレイテッド ブロモドメイン含有タンパク質ｂｒｄ７およびｂｒｄ９の阻害によるｔｈ２媒介性疾患の治療
EP2971094B1 (en) * 2013-03-15 2021-09-15 Novartis AG Biomarkers associated with brm inhibition
WO2014152391A1 (en) 2013-03-15 2014-09-25 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof
EP2978446B1 (en) 2013-03-27 2020-03-04 The General Hospital Corporation Anti-cd33 antibody for use in treating alzheimer's disease
CA2912801A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Medimmune, Llc Receptors for b7-h4
CA2916533C (en) 2013-06-25 2022-12-20 University Of Canberra Methods and compositions for modulating cancer stem cells
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
WO2015006554A1 (en) 2013-07-10 2015-01-15 The Regents Of The University Of Michigan Therapeutic antibodies and uses thereof
EP3030663B1 (en) 2013-07-19 2019-09-04 Monsanto Technology LLC Compositions and methods for controlling leptinotarsa
US10711106B2 (en) 2013-07-25 2020-07-14 The University Of Chicago High aspect ratio nanofibril materials
EP3027223A1 (en) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds
US9889200B2 (en) 2013-07-31 2018-02-13 Qbi Enterprises Ltd. Sphingolipid-polyalkylamine-oligonucleotide compounds
KR102365486B1 (ko) 2013-08-28 2022-02-18 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 프리칼리크레인 (pkk) 발현의 조절
IL312865B2 (en) 2013-09-11 2025-06-01 Eagle Biologics Inc Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
EP3046560B1 (en) 2013-09-18 2021-01-06 EpiAxis Therapeutics Pty Ltd Stem cell modulation ii
EP3052107B1 (en) 2013-10-04 2018-05-02 Novartis AG Organic compounds to treat hepatitis b virus
JP6694811B2 (ja) 2013-10-04 2020-05-20 ノバルティス アーゲー ＲＮＡ干渉に使用するためのＲＮＡｉ剤用の３’末端キャップ
EP2865756A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene.
EP2865757A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene.
EP2865758A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene
US10004814B2 (en) 2013-11-11 2018-06-26 Sirna Therapeutics, Inc. Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (siNA) conjugated to a lipophilic moiety
EP3071590A4 (en) 2013-11-21 2017-07-19 SeNA Research, Inc. Methods for structural determination of selenium derivatized nucleic acid complexes
WO2015084897A2 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Mirimmune, Llc Immunotherapy of cancer
US10150965B2 (en) 2013-12-06 2018-12-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
CN104830906B (zh) 2014-02-12 2018-09-04 北京维通达生物技术有限公司 一种重编程获得功能性人肝脏实质细胞的方法
US10011837B2 (en) 2014-03-04 2018-07-03 Sylentis Sau SiRNAs and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
MX373460B (es) 2014-03-11 2020-04-07 Cellectis Metodo para generar celulas t compatibles para el trasplante alogenico.
US20170137808A1 (en) * 2014-03-20 2017-05-18 Oommen Varghese Improved small interfering ribonucleic acid molecules
WO2015148580A2 (en) 2014-03-25 2015-10-01 Arcturus Therapeutics, Inc. Una oligomers having reduced off-target effects in gene silencing
US9856475B2 (en) 2014-03-25 2018-01-02 Arcturus Therapeutics, Inc. Formulations for treating amyloidosis
JP6771387B2 (ja) 2014-03-25 2020-10-21 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的ｕｎａオリゴマー
WO2015153339A2 (en) 2014-04-01 2015-10-08 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
RS60707B1 (sr) 2014-04-01 2020-09-30 Biogen Ma Inc Kompozicije za modulaciju ekspresije sod-1
MX375592B (es) 2014-04-25 2025-03-06 The Children´S Medical Center Corp Composiciones y su uso para tratar hemoglobinopatias.
US11279934B2 (en) 2014-04-28 2022-03-22 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN
EP3862362A3 (en) 2014-05-01 2021-10-27 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates of modified antisense oligonucleotides and their use for modulating pkk expression
CN106456771B9 (zh) 2014-05-02 2021-07-20 国家儿童医院研究所 用于抗lyst免疫调节的组合物和方法
WO2015175545A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 The Johns Hopkins University Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers
AU2015259362B2 (en) 2014-05-12 2018-02-15 The Johns Hopkins University Engineering synthetic brain penetrating gene vectors
US10100308B2 (en) 2014-05-29 2018-10-16 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
AU2015269412B2 (en) 2014-06-04 2020-03-12 Exicure Operating Company Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
TW201620526A (zh) 2014-06-17 2016-06-16 愛羅海德研究公司 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法
CN104120127B (zh) * 2014-07-01 2016-09-21 清华大学 分离的寡核苷酸及其应用
CN106604993A (zh) 2014-07-29 2017-04-26 孟山都技术公司 用于控制昆虫害虫的组合物和方法
US20170348402A1 (en) 2014-07-30 2017-12-07 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
WO2016023974A1 (de) 2014-08-14 2016-02-18 Friedrich-Schiller-Universität Jena Peptid zur verwendung in der reduktion von nebenwirkungen in form von immunstimulatorischen reaktionen/effekten
WO2016028940A1 (en) 2014-08-19 2016-02-25 Northwestern University Protein/oligonucleotide core-shell nanoparticle therapeutics
CA2958704A1 (en) 2014-08-25 2016-03-03 University Of Canberra Compositions for modulating cancer stem cells and uses therefor
DK3185957T3 (da) 2014-08-29 2022-08-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Patisiran til anvendelse ved behandlingen af transthyretin-medieret amyloidosis
KR102506169B1 (ko) 2014-09-05 2023-03-08 피오 파마슈티칼스 코프. Tyr 또는 mmp1을 표적화하는 핵산을 사용한 노화 및 피부 장애의 치료 방법
WO2016044271A2 (en) 2014-09-15 2016-03-24 Children's Medical Center Corporation Methods and compositions to increase somatic cell nuclear transfer (scnt) efficiency by removing histone h3-lysine trimethylation
ES2927649T3 (es) 2014-09-25 2022-11-08 Cold Spring Harbor Laboratory Tratamiento del síndrome de Rett
EP3200804A4 (en) 2014-10-01 2018-04-18 Eagle Biologics, Inc. Polysaccharide and nucleic acid formulations containing viscosity-lowering agents
JP6991857B2 (ja) 2014-10-10 2022-01-13 イデラ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｔｌｒ９アゴニストをチェックポイント阻害剤と共に用いるがんの治療
US20170304459A1 (en) 2014-10-10 2017-10-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide
TWI864340B (zh) 2014-10-10 2024-12-01 美商艾爾妮蘭製藥公司 用於抑制hao1(羥酸氧化酶1(乙醇酸鹽氧化酶))基因表現的組合物及方法
WO2016060919A1 (en) 2014-10-14 2016-04-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Allele selective inhibition of mutant c9orf72 foci expression by duplex rnas targeting the expanded hexanucleotide repeat
AU2015336954A1 (en) 2014-10-22 2017-06-08 Katholieke Universiteit Leuven Ku Leuven Research & Development Modulating adipose tissue and adipogenesis
TWI710633B (zh) 2014-11-10 2020-11-21 美商阿尼拉製藥公司 Ｂ型肝炎病毒（ＨＢＶ）ｉＲＮＡ組成物及其用途方法
WO2016077624A1 (en) 2014-11-12 2016-05-19 Nmc, Inc. Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same
HK1244843A1 (zh) 2014-11-17 2018-08-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 载脂蛋白c3(apoc3)irna组合物及其使用方法
WO2016081621A1 (en) 2014-11-18 2016-05-26 Yale University Formulations for targeted release of agents under low ph conditions and methods of use thereof
KR20170078843A (ko) 2014-11-21 2017-07-07 노오쓰웨스턴 유니버시티 구형 핵산 나노입자 접합체의 서열 특이적 세포 흡수
US20190002876A1 (en) * 2014-12-09 2019-01-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for treatment of friedreich's ataxia
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
US20180002702A1 (en) * 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
CN108064288B (zh) 2015-01-22 2021-11-26 孟山都技术公司 用于控制叶甲属的组合物和方法
WO2016161299A1 (en) 2015-04-01 2016-10-06 Arcturus Therapeutics, Inc. Therapeutic una oligomers and uses thereof
EP3277811B1 (en) 2015-04-03 2020-12-23 University of Massachusetts Fully stabilized asymmetric sirna
EA201792263A1 (ru) 2015-04-13 2018-08-31 Элнилэм Фармасьютикалз, Инк. КОМПОЗИЦИИ НА ОСНОВЕ iRNA ПРОТИВ АНГИОПОЭТИН-ПОДОБНОГО БЕЛКА 3 (ANGPTL3) И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
WO2016168197A1 (en) 2015-04-15 2016-10-20 Yale University Compositions for enhancing delivery of agents across the blood brain barrier and methods of use thereof
CA3020885A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Mohammad Tariq MALIK Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles as radio-sensitizers and mri and/or x-ray contrast agents
ES2835861T5 (en) 2015-05-08 2025-02-18 Childrens Medical Ct Corp Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction
CA3026154A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The University Of Queensland Mobilizing agents and uses therefor
US20180177727A1 (en) 2015-06-10 2018-06-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Use of exosomes for the treatment of disease
JP6983066B2 (ja) * 2015-06-30 2021-12-17 忠三 岸本 新規な肺疾患治療剤および／またはそのスクリーニング方法
CN108135923B (zh) 2015-07-06 2021-03-02 菲奥医药公司 靶向超氧化物歧化酶1（sod1）的核酸分子
US10808247B2 (en) 2015-07-06 2020-10-20 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach
CA2991894A1 (en) 2015-07-10 2017-01-19 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulators of diacyglycerol acyltransferase 2 (dgat2)
WO2017015671A1 (en) 2015-07-23 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions for treating amyloidosis
CN108138182B (zh) 2015-07-31 2022-08-19 阿尔尼拉姆医药品有限公司 甲状腺素运载蛋白(TTR)iRNA组合物及其治疗或预防TTR相关疾病的使用方法
US10633653B2 (en) 2015-08-14 2020-04-28 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
JP2018525037A (ja) 2015-08-24 2018-09-06 ハロー−バイオ・アールエヌエーアイ・セラピューティックス、インコーポレイテッド 遺伝子発現の調節のためのポリヌクレオチドナノ粒子及びその使用
KR102708889B1 (ko) 2015-09-08 2024-09-25 실렌티스 에스.에이.유. siRNA, 및 NRARP 유전자의 발현을 억제하기 위한 방법 및 조성물에서의 이의 용도
GB201516685D0 (en) * 2015-09-21 2015-11-04 Varghese Oommen P And Oommen Oommen P Nucleic acid molecules with enhanced activity
US10086063B2 (en) 2015-09-23 2018-10-02 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
US10383935B2 (en) 2015-09-23 2019-08-20 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
CA2999916C (en) 2015-09-23 2021-07-20 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for modified dendrimer nanoparticle vaccine delivery
CA2997444A1 (en) 2015-09-29 2017-04-06 Amgen Inc. Asgr inhibitors for reducing cholesterol levels
JOP20160211B1 (ar) 2015-10-01 2021-08-17 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
EP3359555B1 (en) 2015-10-07 2023-12-20 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens
WO2017070151A1 (en) 2015-10-19 2017-04-27 Rxi Pharmaceuticals Corporation Reduced size self-delivering nucleic acid compounds targeting long non-coding rna
EP4454637A3 (en) 2015-11-16 2025-01-08 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of age-related macular degeneration using rna complexes that target myd88 or tlr3
WO2017095751A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Partikula Llc Compositions and methods for modulating cancer cell metabolism
EP3386544B1 (en) 2015-12-10 2020-11-25 Fibrogen, Inc. Methods for treatment of motor neuron diseases
DK3391875T3 (da) 2015-12-18 2022-01-24 Samyang Holdings Corp Fremgangsmåde til fremstilling af polymer micelle, der indeholder et anionisk lægemiddel
BR102017001164A2 (pt) 2016-01-26 2019-03-06 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária Composições de rna de fita dupla para controle de diaphorina citri e métodos de uso.
WO2017132669A1 (en) 2016-01-31 2017-08-03 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
CA3022877A1 (en) 2016-02-02 2017-08-10 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of angiogenesis-associated diseases using rna complexes that target angpt2 and pdgfb
KR102825946B1 (ko) * 2016-02-02 2025-06-27 올릭스 주식회사 IL4Rα, TRPA1, 또는 F2RL1을 표적화하는 RNA 복합체를 사용한 아토피 피부염 및 천식의 치료
MX2018010198A (es) 2016-02-25 2019-06-12 Applied Biological Laboratories Inc Composiciones y metodos para proteger contra patogenos e irritantes transportados por el aire.
US12447166B2 (en) 2016-02-25 2025-10-21 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
EP3420086A1 (en) 2016-02-26 2019-01-02 Yale University COMPOSITIONS AND METHODS OF USING piRNAS IN CANCER DIAGNOSTICS AND THERAPEUTICS
WO2017151623A1 (en) 2016-03-01 2017-09-08 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery
US11072777B2 (en) 2016-03-04 2021-07-27 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods and compositions for ex vivo expansion of very small embryonic-like stem cells (VSELs)
KR102515329B1 (ko) 2016-03-07 2023-03-29 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 치료용 화합물을 위한 표적화 리간드
CN109310885B (zh) 2016-03-15 2022-05-31 梅尔莎纳医疗公司 NaPi2b靶向抗体-药物缀合物及其使用方法
WO2017173297A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Avidity Biosciences Llc Beta-catenin nucleic acids and uses thereof
JP2019513371A (ja) 2016-04-01 2019-05-30 アビディティー バイオサイエンシーズ エルエルシー 核酸ポリペプチド組成物とその使用
WO2017173453A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications
WO2017173304A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 Avidity Biosciences Llc Kras nucleic acids and uses thereof
MA45349A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques egfr et leurs utilisations
EP3440090B1 (en) 2016-04-06 2022-09-28 Ohio State Innovation Foundation Rna ligand-displaying exosomes for specific delivery of therapeutics to cell by rna nanotechnology
WO2017178883A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of idiopathic pulmonary fibrosis using rna complexes that target connective tissue growth factor
CA3020754C (en) 2016-04-14 2023-07-25 Benitec Biopharma Limited Reagents for treatment of oculopharyngeal muscular dystrophy (opmd) and use thereof
WO2017189870A1 (en) 2016-04-27 2017-11-02 Massachusetts Institute Of Technology Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof
WO2017197128A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Yale University Poly(amine-co-ester) nanoparticles and methods of use thereof
KR101916652B1 (ko) 2016-06-29 2018-11-08 올릭스 주식회사 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도
RU2021127872A (ru) 2016-06-30 2021-11-09 Онкорус, Инк. Доставка терапевтических полипептидов посредством псевдотипированных онколитических вирусов
RU2627179C1 (ru) * 2016-07-28 2017-08-03 федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ИНТЕРФЕРОНА λ, ИНТЕРЛЕЙКИНА IL23 И ПРОТИВОВИРУСНОГО БЕЛКА MxA
US20190367930A1 (en) 2016-07-29 2019-12-05 Danmarks Tekniske Universitet Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides
AU2017306422A1 (en) 2016-08-03 2019-01-31 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. TLR9 targeted therapeutics
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
KR102350647B1 (ko) 2016-09-02 2022-01-14 다이서나 파마수이티컬, 인크. 4'-포스페이트 유사체 및 이를 포함하는 올리고뉴클레오타이드
MX2018009853A (es) 2016-09-02 2018-11-09 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Ligandos de direccion.
EP3516062A1 (en) 2016-09-21 2019-07-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Myostatin irna compositions and methods of use thereof
US11260134B2 (en) 2016-09-29 2022-03-01 National University Corporation Tokyo Medical And Dental University Double-stranded nucleic acid complex having overhang
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
EP3551641A4 (en) 2016-12-08 2021-01-13 University of Utah Research Foundation STAUFEN1 ACTIVE SUBSTANCES AND RELATED PROCEDURES
WO2018112470A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Co-delivery of nucleic acids for simultaneous suppression and expression of target genes
BR112019014282A2 (pt) 2017-01-10 2020-03-03 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Agentes de rnai de antitripsina (aat) alfa-1, composições incluindo agentes de rnai de aat, e métodos de uso
US11591600B2 (en) 2017-02-10 2023-02-28 OliX Pharmaceuticals. Inc. Long double-stranded RNA for RNA interference
DE102017103383A1 (de) 2017-02-20 2018-08-23 aReNA-Bio GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr. Heribert Bohlen, 50733 Köln) System und Verfahren zur Zelltyp-spezifischen Translation von RNA-Molekülen in Eukaryoten
US10934547B2 (en) * 2017-02-20 2021-03-02 Northwestern University Use of trinucleotide repeat RNAs to treat cancer
TW201834697A (zh) 2017-02-28 2018-10-01 美商梅爾莎納醫療公司 Her2標靶抗體－藥物結合物之組合療法
US11261441B2 (en) 2017-03-29 2022-03-01 Bluebird Bio, Inc. Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies
JP2020516607A (ja) 2017-04-07 2020-06-11 アペリス・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＡｐｅｌｌｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 投与レジメンならびに関連組成物および方法
WO2018191751A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizonia Compositions and methods for treating pulmonary fibrosis
US11324820B2 (en) 2017-04-18 2022-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection
WO2018195355A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Rxi Pharmaceuticals Corporation Topical delivery of nucleic acid compounds
WO2018209270A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas)
US11788087B2 (en) 2017-05-25 2023-10-17 The Children's Medical Center Corporation BCL11A guide delivery
EP3642243A4 (en) * 2017-06-20 2021-04-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. METHOD OF MODULATING REGULATORY T-CELLS, REGULATORY B-CELLS AND IMMUNE RESPONSIBILITIES USING MODULATORS OF APRIL-TACI INTERACTION
JP7406793B2 (ja) * 2017-06-23 2023-12-28 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ ２テイル自己デリバリー型ｓｉＲＮＡおよび関連方法
TN2019000308A1 (en) 2017-07-06 2021-05-07 Arrowhead Pharmaceuticals Inc RNAi AGENTS FOR INHIBITING EXPRESSION OF ALPHA-ENaC AND METHODS OF USE
CA3069451A1 (en) 2017-07-13 2019-01-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibition of hao1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase)) gene expression
US11104700B2 (en) 2017-07-17 2021-08-31 Oxford University Innovation Limited Oligonucleotides
US11110114B2 (en) 2017-07-17 2021-09-07 Oxford University Innovation Limited Dinucleotides
US10597657B2 (en) 2017-09-11 2020-03-24 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. RNAi agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein C-III (APOC3)
KR20250046363A (ko) 2017-09-19 2025-04-02 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증을 치료하기 위한 조성물 및 방법
WO2019068326A1 (en) 2017-10-05 2019-04-11 Université D'aix-Marseille INHIBITORS OF LSD1 FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CARDIOMYOPATHIES
SI3684377T1 (sl) 2017-10-20 2023-05-31 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Postopki zdravljenja okužbe s hepatitisom B
EP3713644B1 (en) 2017-11-20 2024-08-07 University of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for modulating hif-2a to improve muscle generation and repair
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
PT3717646T (pt) * 2017-12-01 2025-07-28 Texas A & M Univ Sys Tratamento antisense da síndrome de angelman
JP7506601B2 (ja) 2017-12-06 2024-06-26 アビディティー バイオサイエンシーズ，インク． 筋萎縮症と筋緊張性ジストロフィーを処置するための組成物および方法
AU2018386304B2 (en) 2017-12-15 2023-12-07 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Dosing regimens and related compositions and methods
EP3727463A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
CA3086485A1 (en) 2017-12-21 2019-06-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chirally-enriched double-stranded rna agents
US10960086B2 (en) 2017-12-28 2021-03-30 Augusta University Research Institute, Inc. Aptamer compositions and methods of use thereof
US11865081B2 (en) 2017-12-29 2024-01-09 Virogin Biotech Canada Ltd. Oncolytic viral delivery of therapeutic polypeptides
EP3697423A4 (en) 2018-01-05 2021-08-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. REDUCED EXPRESSION OF BETA-CATENIN AND IDO TO POTENTIALIZE IMMUNOTHERAPY
WO2019143621A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting aldh2 expression
CA3088071A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 Genentech, Inc. Oligonucleotides for modulating tmem106b expression
US12522811B2 (en) 2018-05-01 2026-01-13 The Children's Medical Center Corporation Enhanced BCL11A RNP / CRISPR delivery and editing using a 3XNLS-CAS9
US12350284B2 (en) 2018-05-02 2025-07-08 The Children's Medical Center Corporation BCL11A microRNAs for treating hemoglobinopathies
WO2019215066A1 (en) 2018-05-07 2019-11-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Quality control of lna oligonucleotide therapeutics using massively parallel sequencing
EP3791180A1 (en) 2018-05-10 2021-03-17 The University Of Manchester Methods for assessing macular degeneration
EP3801025A4 (en) 2018-05-24 2022-03-09 Sirnaomics, Inc. Composition and methods of controllable co-coupling polypeptide nanoparticle delivery system for nucleic acid therapeutics
US11946046B2 (en) * 2018-06-14 2024-04-02 University Of Utah Research Foundation Staufen1 regulating agents and associated methods
EP4512407A3 (en) 2018-07-13 2025-09-24 F. Hoffmann-La Roche AG Oligonucleotides for modulating rtel1 expression
CA3106701A1 (en) 2018-08-13 2020-02-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis b virus (hbv) dsrna agent compositions and methods of use thereof
JP7627042B2 (ja) 2018-08-23 2025-02-05 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ Ｏ－メチルリッチ完全安定化オリゴヌクレオチド
WO2020051231A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute Inc. Use of delta-tocotrienol for treating cancer
US20210317479A1 (en) 2018-09-06 2021-10-14 The Broad Institute, Inc. Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery
AU2019369340A1 (en) 2018-10-29 2021-05-20 Mersana Therapeutics, Inc. Cysteine engineered antibody-drug conjugates with peptide-containing linkers
WO2020128816A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Pfizer Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising a combination of a benzoxazole transthyretin stabilizer and an additional therapeutic agent
KR20220030203A (ko) 2018-12-27 2022-03-10 서나오믹스, 인크. 암 치료를 위한 면역 체크포인트 억제제와 조합하여 전달된 siRNA를 사용하는 TGF-베타1 및 COX2의 사일런싱
CN113614232A (zh) 2019-01-18 2021-11-05 马萨诸塞大学 动态药代动力学修饰锚
CN113692444A (zh) 2019-02-12 2021-11-23 迪克纳制药公司 用于抑制cyp27a1的表达的方法和组合物
WO2020205473A1 (en) 2019-03-29 2020-10-08 Decerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of kras associated diseases or disorders
CA3135402A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system
US11814464B2 (en) 2019-04-29 2023-11-14 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers and polyplexes with modified end groups and methods of use thereof
WO2020226960A1 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded nucleic acid inhibitor molecules with shortened sense strands
WO2020233651A1 (zh) * 2019-05-22 2020-11-26 苏州瑞博生物技术股份有限公司 核酸、药物组合物与缀合物及制备方法和用途
US20200369759A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Fibrogen, Inc. Methods of treatment of muscular dystrophies
MX2021015003A (es) 2019-06-06 2022-01-24 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Metodos para el tratamiento de la deficiencia de alfa-1 antitripsina (aatd).
US20220257790A1 (en) 2019-06-26 2022-08-18 Biorchestra Co., Ltd. Micellar nanoparticles and uses thereof
US12569438B2 (en) 2019-07-29 2026-03-10 Georgia Tech Research Corporation Nanomaterials containing constrained lipids and uses thereof
MX2022001710A (es) 2019-08-09 2022-05-10 Univ Massachusetts Oligonucleótidos modificados químicamente dirigidos a los snp.
CA3151110A1 (en) 2019-08-16 2021-02-25 Children's Hospital Medical Center Methods of treating a subject with a cdc42-specific inhibitor
AU2020336992A1 (en) 2019-08-30 2022-04-14 Yale University Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
WO2021049504A1 (ja) 2019-09-10 2021-03-18 第一三共株式会社 肝臓送達用ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび製造方法
US12365894B2 (en) 2019-09-16 2025-07-22 University Of Massachusetts Branched lipid conjugates of siRNA for specific tissue delivery
WO2021067744A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of small interfering rna with minimal fluorine content
US11017851B1 (en) 2019-11-26 2021-05-25 Cypress Semiconductor Corporation Silicon-oxide-nitride-oxide-silicon based multi level non-volatile memory device and methods of operation thereof
EP4081639A1 (en) 2019-12-24 2022-11-02 F. Hoffmann-La Roche AG Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
CN114828852A (zh) 2019-12-24 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗hbv的靶向hbv的抗病毒药剂和/或免疫调节剂的药物组合
US12435035B2 (en) 2020-01-09 2025-10-07 Guide Therapeutics, Llc Nanomaterials
CA3166420A1 (en) 2020-01-14 2021-07-22 Synthekine, Inc. Il2 orthologs and methods of use
US20210222128A1 (en) 2020-01-22 2021-07-22 Massachusetts Institute Of Technology Inducible tissue constructs and uses thereof
KR20220143106A (ko) 2020-02-18 2022-10-24 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 아포지질단백질 C3 (APOC3) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
US11642407B2 (en) 2020-02-28 2023-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
AU2021236674B2 (en) 2020-03-18 2025-03-06 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting ANGPTL3 expression
US11555190B2 (en) 2020-03-19 2023-01-17 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
AU2021241682B2 (en) 2020-03-27 2026-02-12 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle dystrophy
US12159700B2 (en) 2020-04-22 2024-12-03 Iovance Biotherapeutics, Inc. Systems and methods for coordinating manufacturing of cells for patient-specific immunotherapy
WO2021242883A1 (en) 2020-05-26 2021-12-02 University Of Massachusetts Synthetic oligonucleotides having regions of block and cluster modifications
WO2021255262A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Sylentis Sau siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES
EP4168471A1 (en) 2020-06-19 2023-04-26 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers with modified end groups and enhanced pulmonary delivery
EP4172330A1 (en) * 2020-06-30 2023-05-03 The University Court Of The University of Edinburgh Transgene expression system
IL299827B1 (en) 2020-07-15 2026-04-01 Cerebral Therapeutics Inc A medical system that includes two access ports
US20220031633A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Yale University Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery
IL300283A (en) 2020-08-04 2023-04-01 Dicerna Pharmaceuticals Inc Systemic administration of oligonucleotides
MX2023001450A (es) 2020-08-04 2023-04-14 Dicerna Pharmaceuticals Inc Composiciones y metodos para la inhibicion de la expresion de plp1.
TW202221120A (zh) 2020-08-04 2022-06-01 美商黛瑟納製藥公司 用於治療代謝症候群之組成物及方法
CA3190794A1 (en) 2020-08-05 2022-02-10 Soren Ottosen Oligonucleotide treatment of hepatitis b patients
KR102812602B1 (ko) 2020-08-05 2025-05-28 다이서나 파마수이티컬, 인크. Lpa 발현을 저해하기 위한 조성물 및 방법
CA3193424A1 (en) 2020-08-31 2022-03-03 Yale University Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
EP3964204A1 (en) 2020-09-08 2022-03-09 Université d'Aix-Marseille Lsd1 inhibitors for use in the treatment and prevention of fibrosis of tissues
WO2022058447A1 (en) 2020-09-16 2022-03-24 The University Of Manchester Complementome assay
US20230372397A1 (en) 2020-10-06 2023-11-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
KR20230107625A (ko) 2020-11-13 2023-07-17 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 응고 인자 V(F5) iRNA 조성물 및 이의 사용 방법
IL303195A (en) 2020-11-25 2023-07-01 Akagera Medicines Inc Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and related methods of use
CN117295753A (zh) 2020-12-04 2023-12-26 基那奥生物公司 用于将核酸递送到细胞的组合物和方法
EP4015634A1 (en) 2020-12-15 2022-06-22 Sylentis, S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases
IL303845A (en) 2021-01-20 2023-08-01 Beam Therapeutics Inc Nanomaterials include a degradable property
IL305442A (en) 2021-03-04 2023-10-01 Alnylam Pharmaceuticals Inc Angiopoietin-like 3 (ANGPTL3) IRNA compositions and methods of using them
AU2022246174A1 (en) 2021-03-25 2023-09-14 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
WO2022211740A1 (en) 2021-03-31 2022-10-06 Carmine Therapeutics Pte. Ltd. Extracellular vesicles loaded with at least two different nucleic acids
EP4323518A2 (en) 2021-04-12 2024-02-21 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk)
US12084662B2 (en) 2021-04-14 2024-09-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating PNPLA3 expression
WO2022223515A2 (en) 2021-04-19 2022-10-27 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for inhibiting nuclear receptor subfamily 1 group h member 3 (nr1h3) expression
PE20250074A1 (es) 2021-05-28 2025-01-13 Novo Nordisk As Composiciones y metodos para inhibir la expresion del componente 1 de reduccion de amidoxima mitocondrial (marc1)
CN117858946A (zh) 2021-05-29 2024-04-09 强新科技国际研究院 作为新型基因沉默技术的非对称短双链体dna及其应用
CN118369428A (zh) 2021-05-29 2024-07-19 强新科技国际研究院 作为新型基因沉默技术的短双链体dna及其应用
AU2022299169A1 (en) 2021-06-23 2024-02-08 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Optimized anti-flt1 oligonucleotide compounds for treatment of preeclampsia and other angiogenic disorders
CA3227852A1 (en) 2021-08-03 2023-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Transthyretin (ttr) irna compositions and methods of use thereof
WO2023021046A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Vib Vzw Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression
JP2024532019A (ja) 2021-08-25 2024-09-05 ノボ ノルディスク エー／エス アルファ－１アンチトリプシン発現を阻害するための組成物及び方法
JP2024534501A (ja) 2021-09-21 2024-09-20 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティー 細胞内送達のための小分子生物製剤のデンドリマーコンジュゲート
CA3234478A1 (en) 2021-11-11 2023-05-19 Souphalone LUANGSAY Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
KR102876945B1 (ko) 2021-11-19 2025-10-29 한국과학기술연구원 표적 세포로의 활성 제약 성분의 적혈구-매개 전달을 위한 치료 화합물
WO2023102469A2 (en) 2021-12-01 2023-06-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating apoc3 expression
WO2023118546A2 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh METHODS AND MOLECULES FOR RNA INTERFERENCE (RNAi)
US12605537B2 (en) 2022-02-15 2026-04-21 Biogen Ma Inc. Implantable medical device for use with or having recording electrode
US20250154317A1 (en) 2022-02-18 2025-05-15 Yale University Branched poly(amine-co-ester) polymers for more efficient nucleic expression
GB202203627D0 (en) 2022-03-16 2022-04-27 Univ Manchester Agents for treating complement-related disorders
WO2023192872A1 (en) 2022-03-28 2023-10-05 Massachusetts Institute Of Technology Rna scaffolded wireframe origami and methods thereof
GB202204884D0 (en) 2022-04-04 2022-05-18 Fondo Ricerca Medica S R I Sirna targeting kcna1
KR20250005108A (ko) 2022-04-15 2025-01-09 다이서나 파마수이티컬, 인크. Scap 활성을 조절하기 위한 조성물 및 방법
CA3248034A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. METHODS FOR EXPANSION OF TIL CELLS BY MEANS OF SPECIFIC CYTOKINE COMBINATIONS AND/OR AKT INHIBITOR TREATMENT
CN119173631A (zh) 2022-05-12 2024-12-20 迪克纳制药公司 用于抑制mapt表达的组合物和方法
CN119630791A (zh) 2022-05-13 2025-03-14 迪克纳制药公司 用于抑制snca表达的组合物和方法
EP4531819A2 (en) 2022-05-25 2025-04-09 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and methods of use thereof
TWI868755B (zh) 2022-06-24 2025-01-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶６（ｔｍｐｒｓｓ６）表現的組成物及方法
WO2024019936A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterials comprising triols
US20260049309A1 (en) 2022-08-15 2026-02-19 Novo Nordisk A/S Regulation of activity of rnai molecules
WO2024081736A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Yale University Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies
TW202430637A (zh) 2022-11-16 2024-08-01 美商戴瑟納製藥股份有限公司 Stat3靶向性寡核苷酸及其用途
WO2024108217A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
EP4623072A2 (en) 2022-11-21 2025-10-01 Iovance Biotherapeutics, Inc. Two-dimensional processes for the expansion of tumor infiltrating lymphocytes and therapies therefrom
GB202219829D0 (en) 2022-12-29 2023-02-15 Ivy Farm Tech Limited Genetically manipulated cells
EP4649087A2 (en) 2023-01-11 2025-11-19 Engage Biologics Inc. Non-viral expression systems and methods of use thereof
WO2024175586A2 (en) 2023-02-21 2024-08-29 Vib Vzw Inhibitors of synaptogyrin-3 expression
JP2026507051A (ja) 2023-02-21 2026-02-27 ブイアイビー ブイゼットダブリュ シナプトギリン－３発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
US20240325550A1 (en) 2023-03-28 2024-10-03 Kist (Korea Institute Of Science And Technology) Therapeutic Compounds for Inhibiting and Reducing the Expression of Cell Surface Proteins
WO2024263649A1 (en) 2023-06-19 2024-12-26 Yale University Methods and compositions for enrichment and sequencing of expansion-specific rna transcripts
AU2024296743A1 (en) 2023-07-13 2026-02-26 Comanche Biopharma Corp. Formulations of nucleic acid compounds and uses thereof
TW202509209A (zh) 2023-07-13 2025-03-01 新加坡商蜂鳥生物科技私人有限公司 生產抗體的方法
TW202517141A (zh) 2023-07-13 2025-05-01 新加坡商蜂鳥生物科技私人有限公司 生產抗體的方法
IL326017A (en) 2023-07-28 2026-03-01 Novo Nordisk As Compositions and methods for expressing programmed death ligand receptor (PD-L1)
WO2025054459A1 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Rnai oligonucleotide conjugates
WO2025101580A1 (en) 2023-11-06 2025-05-15 Yale University Half-antibodies and other antibody fragments for attachment to degradable polymer nanoparticles
EP4560019A1 (en) 2023-11-22 2025-05-28 Sylentis S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of ocular retinal conditions
EP4560020A1 (en) 2023-11-22 2025-05-28 Sylentis S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of ocular retinal conditions
WO2025215354A1 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Ivy Farm Technologies Limited Method of culturing an animal cell
EP4640682A3 (en) 2024-04-25 2025-12-31 The University Of Hong Kong AGPAT4 INHIBITOR COMPOSITIONS AND THEIR METHODS OF USE FOR TREATING CANCER
WO2025224715A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 King Abdullah Univeristy Of Science And Technology Methods for improving precise genome modification and reducing unwanted mutations by crispr-cas editing
WO2026006832A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 University Of Connecticut Gene modulation for treating cancer
US20260055414A1 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for inhibiting xdh expression

Family Cites Families (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003006A (en) * 1933-04-11 1935-05-28 Michelson Barnett Samuel Water tank cover
US4469863A (en) * 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5208149A (en) * 1983-10-20 1993-05-04 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures
GB8704365D0 (en) * 1987-02-25 1987-04-01 Exxon Chemical Patents Inc Zeolite l preparation
US5712257A (en) * 1987-08-12 1998-01-27 Hem Research, Inc. Topically active compositions of mismatched dsRNAs
IE66830B1 (en) 1987-08-12 1996-02-07 Hem Res Inc Topically active compositions of double-stranded RNAs
US5703055A (en) * 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
ATE269870T1 (de) * 1989-10-24 2004-07-15 Isis Pharmaceuticals Inc 2'-modifizierte oligonukleotide
US5457189A (en) * 1989-12-04 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus
US5670633A (en) * 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
AU651569B2 (en) 1990-01-11 1994-07-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for detecting and modulating RNA activity and gene expression
US5514577A (en) * 1990-02-26 1996-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses
JP3257675B2 (ja) * 1990-10-12 2002-02-18 マックス−プランク−ゲゼルシャフト ツール フェルデルング デル ビッセンシャフテン エー．ファウ． 修飾リボザイム
FR2675803B1 (fr) 1991-04-25 1996-09-06 Genset Sa Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications.
WO1994008003A1 (en) * 1991-06-14 1994-04-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE
FR2685346B1 (fr) * 1991-12-18 1994-02-11 Cis Bio International Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications.
WO1993018052A1 (en) 1992-03-05 1993-09-16 Isis Pharmaceuticals, Inc. Covalently cross-linked oligonucleotides
US5792751A (en) * 1992-04-13 1998-08-11 Baylor College Of Medicine Tranformation of cells associated with fluid spaces
US20030068301A1 (en) * 1992-05-14 2003-04-10 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B virus replication
US20040054156A1 (en) * 1992-05-14 2004-03-18 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication
US20030171311A1 (en) * 1998-04-27 2003-09-11 Lawrence Blatt Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection
US5693535A (en) * 1992-05-14 1997-12-02 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. HIV targeted ribozymes
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2002081494A1 (en) * 2001-03-26 2002-10-17 Sirna Therapeutics, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
NZ255028A (en) 1992-07-02 1997-03-24 Hybridon Inc Antisense oligonucleotides resistant to nucleolytic degradation
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
WO1994015645A1 (en) 1992-12-31 1994-07-21 Texas Biotechnology Corporation Antisense molecules directed against genes of the raf oncogene family
US6056704A (en) 1993-03-03 2000-05-02 Ide; Masatake Foot-pressure massage stand
EP0616026A1 (en) 1993-03-19 1994-09-21 The Procter & Gamble Company Concentrated cleaning compositions
HUT74597A (en) * 1993-06-23 1997-01-28 Genesys Pharma Inc Antisense oligonucleotides and therapeutic use thereof in human immunodeficiency virus infection
FR2710074B1 (fr) 1993-09-15 1995-12-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Gène GRB3-3, ses variants et leurs utilisations.
US5624803A (en) * 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
IL111660A (en) 1993-11-16 2005-05-17 Genta Inc Oligonucleoside compounds for effecting rnaseh-mediated cleavage of a target ribonucleic acid sequence and a pharmaceutical composition containing them
US5578716A (en) * 1993-12-01 1996-11-26 Mcgill University DNA methyltransferase antisense oligonucleotides
US5908779A (en) * 1993-12-01 1999-06-01 University Of Connecticut Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA
JPH10503364A (ja) * 1994-05-10 1998-03-31 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション Ｃ型肝炎ウイルスのアンチセンス阻害
US6057153A (en) * 1995-01-13 2000-05-02 Yale University Stabilized external guide sequences
US5674683A (en) 1995-03-21 1997-10-07 Research Corporation Technologies, Inc. Stem-loop and circular oligonucleotides and method of using
US5624808A (en) * 1995-03-28 1997-04-29 Becton Dickinson And Company Method for identifying cells committed to apoptosis by determining cellular phosphotyrosine content
ATE285477T1 (de) 1995-06-07 2005-01-15 Inex Pharmaceutical Corp Herstellung von lipid-nukleinsäure partikeln duch ein hydrophobische lipid-nukleinsäuree komplexe zwischenprodukt und zur verwendung in der gentransfer
EP0851919A1 (en) * 1995-09-20 1998-07-08 University of Massachusetts Worcester Antisense oligonucleotide chemotherapy for benign hyperplasia or cancer of the prostate
US5998203A (en) * 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
ATE267207T1 (de) 1996-02-14 2004-06-15 Isis Pharmaceuticals Inc Kohlenhydratmodifizierte luckenhafte oligonukleotide
EP0910634A2 (en) 1996-04-17 1999-04-28 Hoechst Marion Roussel Deutschland GmbH ANTISENSE INHIBITORS OF VASCULAR ENDOTHELIAL GROWTH FACTOR (VEgF/VPF) EXPRESSION
DE19618797C2 (de) 1996-05-10 2000-03-23 Bertling Wolf Vehikel zum Transport molekularer Substanz
US20040266706A1 (en) 2002-11-05 2004-12-30 Muthiah Manoharan Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
DE19631919C2 (de) 1996-08-07 1998-07-16 Deutsches Krebsforsch Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur
US6225290B1 (en) * 1996-09-19 2001-05-01 The Regents Of The University Of California Systemic gene therapy by intestinal cell transformation
ATE329015T1 (de) * 1996-10-04 2006-06-15 Derek Nigel John Hart Enzyme mit s-adenosyl-l-homocystein-hydrolase- ähnlicher aktivität.
US5814500A (en) * 1996-10-31 1998-09-29 The Johns Hopkins University School Of Medicine Delivery construct for antisense nucleic acids and methods of use
AU727611B2 (en) 1996-12-12 2000-12-14 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Synthetic antisense oligodeoxynucleotides and pharmaceutical compositions containing them
US20030064945A1 (en) * 1997-01-31 2003-04-03 Saghir Akhtar Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors
GB9703146D0 (en) * 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
US6218142B1 (en) * 1997-03-05 2001-04-17 Michael Wassenegger Nucleic acid molecules encoding polypeptides having the enzymatic activity of an RNA-directed RNA polymerase (RDRP)
GB9710475D0 (en) 1997-05-21 1997-07-16 Zeneca Ltd Gene silencing
AU9063398A (en) 1997-09-12 1999-04-05 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
US20030083272A1 (en) 1997-09-19 2003-05-01 Lahive & Cockfield, Llp Sense mrna therapy
GB9720148D0 (en) 1997-09-22 1997-11-26 Innes John Centre Innov Ltd Gene silencing materials and methods
US6506559B1 (en) * 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US6475726B1 (en) * 1998-01-09 2002-11-05 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Method for identifying validated target and assay combinations for drug development
WO1999049029A1 (en) 1998-03-20 1999-09-30 Benitec Australia Ltd Control of gene expression
AUPP249298A0 (en) * 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
NZ507093A (en) 1998-04-08 2003-08-29 Commw Scient Ind Res Org Methods and means for reducing the phenotypic expression of a nucleic acid of interest in a plant
US20040214330A1 (en) * 1999-04-07 2004-10-28 Waterhouse Peter Michael Methods and means for obtaining modified phenotypes
AU3751299A (en) 1998-04-20 1999-11-08 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
GB9827152D0 (en) 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
EP1050583A4 (en) 1998-11-24 2005-02-02 Hisamitsu Pharmaceutical Co INHIBITORS OF HIV INFECTIONS
WO2000032619A1 (en) 1998-11-30 2000-06-08 Ribogene, Inc. Methods and compositions for identification of inhibitors of ribosome assembly
US6939712B1 (en) 1998-12-29 2005-09-06 Impedagen, Llc Muting gene activity using a transgenic nucleic acid
EP2314700A1 (en) 1999-01-28 2011-04-27 Medical College of Georgia Research Institute, Inc Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded RNA
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
WO2000063364A2 (en) 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
US20040002153A1 (en) * 1999-07-21 2004-01-01 Monia Brett P. Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10160151A1 (de) 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
RU2164944C1 (ru) * 1999-12-09 2001-04-10 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН Способ изменения генетических свойств организма
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
AU2001260114A1 (en) 2000-03-14 2001-09-24 Syngenta Participations Ag Protoporphyrinogen oxidase ("protox") genes
EP1272630A2 (en) * 2000-03-16 2003-01-08 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
US20030084471A1 (en) 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
PT1309726E (pt) 2000-03-30 2010-03-08 Whitehead Biomedical Inst Mediadores de interferência por rna específicos de sequência de rna
BRPI0117338B1 (pt) 2000-03-30 2016-06-21 Massachusetts Inst Technology método para produzir células animais nocauteadas in vitro e método para produzir uma célula nocauteada
ATE513910T1 (de) 2000-05-30 2011-07-15 Johnson & Johnson Res Pty Ltd Methoden zur gensuppression mithilfe von rnai verstärkenden faktoren
US20040259247A1 (en) 2000-12-01 2004-12-23 Thomas Tuschl Rna interference mediating small rna molecules
WO2002061034A2 (en) 2000-12-08 2002-08-08 Invitrogen Corporation Compositions and methods for rapidly generating recombinant nucleic acid molecules
JP2004532616A (ja) 2000-12-28 2004-10-28 ジョンソン・アンド・ジョンソン・リサーチ・ピー・ティー・ワイ・リミテッド 二本鎖ｒｎａ仲介遺伝子抑制
US7423142B2 (en) * 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
WO2003035869A1 (de) 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens
EP1229134A3 (en) * 2001-01-31 2004-01-28 Nucleonics, Inc Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US20040006035A1 (en) * 2001-05-29 2004-01-08 Dennis Macejak Nucleic acid mediated disruption of HIV fusogenic peptide interactions
WO2002097114A2 (en) * 2001-05-29 2002-12-05 Sirna Therapeutics, Inc. Nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of ras, her2 and hiv
ATE262768T1 (de) 2001-06-01 2004-04-15 Mobilkom Austria Ag & Co Kg Verfahren zur bestimmung des standortes einer mobilstation in einem mobilfunksystem
US20030140362A1 (en) * 2001-06-08 2003-07-24 Dennis Macejak In vivo models for screening inhibitors of hepatitis B virus
EP2390331B1 (en) * 2001-09-28 2018-04-25 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. MicroRNA molecules
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
DE10230997A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels
CN1608133A (zh) * 2001-10-26 2005-04-20 里伯药品公司 双链核糖核酸用于治疗正(+)链rna病毒感染的用途
US20040121348A1 (en) * 2001-10-26 2004-06-24 Ribopharma Ag Compositions and methods for treating pancreatic cancer
DE10154113A1 (de) 2001-11-03 2003-05-15 Opel Adam Ag Frontstruktur eines Kraftfahrzeuges
DE10202419A1 (de) * 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
US20030166282A1 (en) 2002-02-01 2003-09-04 David Brown High potency siRNAS for reducing the expression of target genes
DE60323340D1 (de) * 2002-02-14 2008-10-16 Hope City Verfahren zur herstellung interferierender rna-moleküle in säugetierzellen und therapeutische anwendungen solcher moleküle
US20040005593A1 (en) * 2002-03-06 2004-01-08 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of siRNA molecules
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US20030180756A1 (en) * 2002-03-21 2003-09-25 Yang Shi Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression
US20040053876A1 (en) * 2002-03-26 2004-03-18 The Regents Of The University Of Michigan siRNAs and uses therof
WO2003099298A1 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Max-Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
AU2003273995A1 (en) 2002-06-05 2003-12-22 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
AU2003276666A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
WO2004007718A2 (en) 2002-07-10 2004-01-22 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna-interference by single-stranded rna molecules
US20040241854A1 (en) * 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
AU2003260370B2 (en) 2002-08-05 2008-05-22 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering RNA molecules
WO2004014933A1 (en) 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
AU2003273336A1 (en) 2002-09-18 2004-04-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Efficient reduction of target rna's by single- and double-stranded oligomeric compounds
CA2500224C (en) 2002-09-25 2015-04-28 University Of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
US8604183B2 (en) 2002-11-05 2013-12-10 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
EP2305812A3 (en) 2002-11-14 2012-06-06 Dharmacon, Inc. Fuctional and hyperfunctional sirna
US20040214198A1 (en) 2002-11-15 2004-10-28 University Of Massachusetts Allele-targeted RNA interference
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
US20040224328A1 (en) * 2003-01-15 2004-11-11 Hans Prydz siRNA screening method
WO2004063375A1 (en) 2003-01-15 2004-07-29 Hans Prydz OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE
ES2356910T3 (es) 2003-01-17 2011-04-14 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Construcciones para la expresión inducible de arn de interferencia pequeño (arns) para el silenciamiento génico seleccionado.
WO2004065600A2 (en) 2003-01-17 2004-08-05 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference by palindromic or modified rna molecules
JP2006519008A (ja) 2003-02-10 2006-08-24 独立行政法人産業技術総合研究所 哺乳動物細胞の調節
EP1599089B1 (en) * 2003-02-19 2011-10-12 Commonwealth Scientific and Industrial Research Organisation Efficient gene silencing in plants using short dsRNA sequences
DK1633767T3 (en) 2003-06-02 2019-03-25 Univ Massachusetts METHODS AND COMPOSITIONS FOR MANAGING THE EFFECT OF RNA SILENCING
US6998203B2 (en) * 2003-08-01 2006-02-14 Intel Corporation Proximity correcting lithography mask blanks
NZ556097A (en) 2005-01-07 2009-12-24 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai modulation of RSV and therapeutic uses thereof
US8833829B2 (en) 2011-07-08 2014-09-16 Inteva Products Llc Method for stitching vehicle interior components and components formed from the method

Also Published As

Publication number Publication date
ES2215494T5 (es) 2017-12-28
EP2348133B1 (en) 2014-07-16
AU2002235744B2 (en) 2007-04-19
CZ2011452A3 (no) 2003-10-15
US20100316703A1 (en) 2010-12-16
US20110065109A1 (en) 2011-03-17
US20050026278A1 (en) 2005-02-03
JP2004526422A (ja) 2004-09-02
US8853384B2 (en) 2014-10-07
DE60130583T2 (de) 2008-06-12
CA2429814C (en) 2014-02-18
EP1407044B2 (en) 2017-11-15
US20070093445A1 (en) 2007-04-26
JP4494392B2 (ja) 2010-06-30
US20080269147A1 (en) 2008-10-30
SI1407044T2 (en) 2018-03-30
US20050234006A1 (en) 2005-10-20
US8372968B2 (en) 2013-02-12
TR200401292T3 (tr) 2004-07-21
PL365784A1 (pl) 2005-01-10
US20110306651A1 (en) 2011-12-15
JP5749892B2 (ja) 2015-07-15
EP1873259B1 (en) 2012-01-25
ZA200303929B (en) 2004-07-19
AU2007203385B2 (en) 2010-05-20
AU2010212438A2 (en) 2010-09-23
AU2010212438B2 (en) 2013-05-09
NZ525888A (en) 2006-04-28
US8329463B2 (en) 2012-12-11
DE60130583D1 (de) 2007-10-31
RU2007131270A (ru) 2009-02-27
US20110020234A1 (en) 2011-01-27
US8933044B2 (en) 2015-01-13
IL155991A0 (en) 2003-12-23
KR100909681B1 (ko) 2009-07-29
US20110112283A1 (en) 2011-05-12
HUP0302557A2 (hu) 2003-10-28
SI1407044T1 (sl) 2008-04-30
WO2002044321A2 (en) 2002-06-06
NO20032464L (no) 2003-07-21
RU2322500C2 (ru) 2008-04-20
JP2010131031A (ja) 2010-06-17
US7056704B2 (en) 2006-06-06
US8778902B2 (en) 2014-07-15
WO2002044321A3 (en) 2003-10-23
CZ308053B6 (cs) 2019-11-27
ES2728168T3 (es) 2019-10-22
HK1110631A1 (en) 2008-07-18
EP1873259A1 (en) 2008-01-02
EP2348133A1 (en) 2011-07-27
US20110027883A1 (en) 2011-02-03
DK1407044T4 (en) 2017-12-04
AU2007203385A1 (en) 2007-08-09
HU230458B1 (hu) 2016-07-28
US20110065773A1 (en) 2011-03-17
JP6189576B2 (ja) 2017-08-30
BRPI0115814B1 (pt) 2019-10-15
US20100292456A1 (en) 2010-11-18
US8362231B2 (en) 2013-01-29
US7078196B2 (en) 2006-07-18
PL218876B1 (pl) 2015-02-27
US20170327822A1 (en) 2017-11-16
US20200299693A1 (en) 2020-09-24
KR20040012686A (ko) 2004-02-11
HK1139181A1 (en) 2010-09-10
RU2470073C2 (ru) 2012-12-20
US20050234007A1 (en) 2005-10-20
JP2009284915A (ja) 2009-12-10
DK1407044T3 (da) 2008-01-28
NO20032464D0 (no) 2003-05-30
AU2002235744B8 (en) 2007-06-28
ES2215494T1 (es) 2004-10-16
CY1119062T1 (el) 2018-01-10
ES2215494T3 (es) 2008-04-01
US8765930B2 (en) 2014-07-01
MXPA03004836A (es) 2005-09-08
US20110054159A1 (en) 2011-03-03
KR20080069602A (ko) 2008-07-28
US20090155174A1 (en) 2009-06-18
CA2429814A1 (en) 2002-06-06
US20040259248A1 (en) 2004-12-23
HK1139433A1 (en) 2010-09-17
US20040259247A1 (en) 2004-12-23
CN100523215C (zh) 2009-08-05
DE60130583T3 (de) 2018-03-22
US9567582B2 (en) 2017-02-14
ATE373724T2 (de) 2007-10-15
JP2007111053A (ja) 2007-05-10
HUP0302557A3 (en) 2005-12-28
US20110014123A1 (en) 2011-01-20
AU3574402A (en) 2002-06-11
BRPI0115814B8 (pt) 2021-05-25
JP6325974B2 (ja) 2018-05-16
JP4095895B2 (ja) 2008-06-04
US8895718B2 (en) 2014-11-25
AU2010212438A1 (en) 2010-09-09
LTPA2021005I1 (no) 2021-06-10
IL207727A (en) 2014-04-30
JP2015061534A (ja) 2015-04-02
EP1407044A2 (en) 2004-04-14
US10633656B2 (en) 2020-04-28
PT1407044E (pt) 2008-01-02
HK1204798A1 (en) 2015-12-04
US8796016B2 (en) 2014-08-05
KR100872437B1 (ko) 2008-12-05
US8445237B2 (en) 2013-05-21
US20040229266A1 (en) 2004-11-18
US20150141492A1 (en) 2015-05-21
US20100010207A1 (en) 2010-01-14
IL155991A (en) 2013-06-27
CZ20031839A3 (cs) 2003-10-15
CN1568373A (zh) 2005-01-19
US20110070162A1 (en) 2011-03-24
DK2813582T3 (en) 2017-07-31
US8993745B2 (en) 2015-03-31
BR0115814A (pt) 2004-03-23
US8895721B2 (en) 2014-11-25
CZ302719B6 (cs) 2011-09-21
NO335426B1 (no) 2014-12-15
EP1407044B1 (en) 2007-09-19
NO333713B1 (no) 2013-09-02
US20130125259A1 (en) 2013-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200299693A1 (en) Rna interference mediating small rna molecules
EP2351852B1 (en) RNA interference mediating small RNA molecules
AU2013201799B2 (en) Rna interference mediating small rna molecules
Class et al. Patent application title: RNA INTERFERENCE MEDIATING SMALL RNA MOLECULES Inventors: Thomas Tuschl (New York, NY, US) Sayda Mahgoub Elbashir (Cambridge, MA, US) Winfried Lendeckel (Hohengandern, DE) Assignees: Max-Planck-Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired