NO20130246L - RNA interferens medierende små RNA molekyler - Google Patents

RNA interferens medierende små RNA molekyler

Info

Publication number
NO20130246L
NO20130246L NO20130246A NO20130246A NO20130246L NO 20130246 L NO20130246 L NO 20130246L NO 20130246 A NO20130246 A NO 20130246A NO 20130246 A NO20130246 A NO 20130246A NO 20130246 L NO20130246 L NO 20130246L
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
rna
target
dsrna
sirna
gene
Prior art date
Application number
NO20130246A
Other languages
English (en)
Other versions
NO335426B1 (no
Inventor
Winfried Lendeckel
Matthias Wilm
Thomas Tuschl
Sayda Mahgoub Elbashir
Reinhard Luehrmann
Original Assignee
Max Planck Gesellschaft
Europ Lab Molekularbiolog
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=40529293&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=NO20130246(L) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Publication of NO20130246L publication Critical patent/NO20130246L/no
Application filed by Max Planck Gesellschaft, Europ Lab Molekularbiolog filed Critical Max Planck Gesellschaft
Publication of NO335426B1 publication Critical patent/NO335426B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
    • C12N15/1079—Screening libraries by altering the phenotype or phenotypic trait of the host
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/111—General methods applicable to biologically active non-coding nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2217/00—Genetically modified animals
    • A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
    • A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/10—Type of nucleic acid
    • C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering nucleic acids [NA]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/30—Chemical structure
    • C12N2310/32—Chemical structure of the sugar
    • C12N2310/321—2'-O-R Modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
    • C12N2310/50—Physical structure
    • C12N2310/53—Physical structure partially self-complementary or closed
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2330/00—Production
    • C12N2330/30—Production chemically synthesised

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Beskrivelse
Foreliggende oppfinnelse angår sekvens- og strukturelle egenskaper til dobbelttrådede (ds) RNA-molekyler som er nødvendige for å mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer slik som RNA-interferens og/eller DNA-metylering.
Betegnelsen "RNA-interferens" (RNAi) oppstod etter oppdagelsen av at injeksjon av dsRNA inn i nematoden C. elegans fører til spesifikk inaktivering av gener som har høy sekvenshomologi med det leverte dsRNA'et (Fire et al., 1998). RNAi ble deretter også observert i insekter, frosker (Oelgeschlager et al., 2000) og andre dyr inkludert mus (Svoboda et al., 2000; Wianny og Zernicka-Goetz, 2000) og forekommer også trolig i menneske. RNAi er nært koblet til den posttranskripsjonelle geninaktiverings (PTGS) -mekanismen for kosuppresjon i planter og undertrykking i sopp (Catalanotto et al., 2000; Cogoni og Macino, 1999; Dalmay et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Mourrain et al., 2000; Smardon et al., 2000) og noen komponenter i RNAi-maskineriet er også nødvendige for posttranskripsjonell inaktivering ved kosuppresjon (Catalanotto et al., 2000; Dernburg et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000). Temaet har også blitt beskrevet nylig (Bass, 2000; Bosherog Labouesse, 2000; Fire, 1999; Plasterk og Ketting, 2000; Sharp, 1999; Sijen og Kooter, 2000), se også hele nummeret av Plant Molecular Biology, vol. 43, utgave 2/3, (2000).
I planter kan innførte transgener, i tillegg til PTGS, også føre til transkripsjonen geninaktivering via RNA-styrt DNA-metylering av cytosiner (se referanser i Wassenegger, 2000). Genomiske mål som er så korte som 30 bp metyleres i planter på en RNA-styrt måte (Pelissier, 2000). DNA-metylering foreligger også i pattedyr.
Den naturlige funksjonen av RNAi og kosuppresjon ser ut til å være beskyttelse av genomet mot invasjon av mobile genetiske elementer slik som retrotransposoner og virus som produserer avvikende RNA eller dsRNA i vertscellen når de blir aktive (Jensen et al., 1999; Ketting et al., 1999; Ratcliff et al., 1999; Tabara et al., 1999). Spesifikk mRNA-nedbrytning hindrer transposon og virusreplikasjon, selv om noen virus kan overvinne eller hindre denne prosessen ved ekspresjon av proteiner som undertrykker PTGS (Lucy et al., 2000; Voinnet et al., 2000).
dsRNA utløser den spesifikke nedbrytningen av homologe RNA'er bare i regionen som har likhet med dsRNA'et (Zamore et al., 2000). dsRNA'et prosesseres til 21-23 nt RNA-fragmenter og mål-RNA kuttesetene er atskilt 21-23 nt fra hverandre. Det har derfor blitt indikert at 21-23 nt fragmentene er guide-RNA'ene for målgjenkjennelse (Zamore et al., 2000). Disse korte RNA'ene ble også detektert i ekstrakter fremstilt fra D. me/anogasfer Schneider 2-celler som ble transfektert med dsRNA før cellelysering (Hammond et al., 2000), fraksjonene som hadde sekvensspesifikk nukleaseaktivitet inneholdt imidlertid også en stor fraksjon av residualt dsRNA. Rollen 21-23 nt fragmentene har i å guide mRNA-kutting er videre støttet av observasjonen av at 21-23 nt fragmenter isolert fra prosessert dsRNA i en viss grad kan mediere spesifikk mRNA-nedbrytning (Zamore et al., 2000). RNA-molekyler med lignende størrelse akkumulerer også i plantevev som har PTGS (Hamilton og Baulcombe, 1999).
Her anvender vi det etablerte Drosophila in wfro-systemet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000) for å videre undersøke mekanismen til RNAi. Vi demonstrerer at korte 21 og 22 nt RNA'er, når de er baseparet med 3' overhengende ender, virker som guide-RNA'ene for sekvensspesifikk mRNA-nedbrytning. Korte 30 bp dsRNA'er kan ikke mediere RNAi i dette systemet, fordi de ikke lenger prosesseres til 21 og 22 nt RNA'er. Videre definerte vi mål-RNA kuttesetene i forhold til de 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'ene (siRNA'er) og gir bevis for at retningen av dsRNA-prosessering avgjør hvorvidt et sens eller et antisens mål-RNA kan bli kuttet av det dannede siRNP-endonukleasekomplekset. Videre kan siRNA'ene også være viktige verktøy for transkripsjonen modulering, f.eks. inaktivering, av mammalske gener ved å guide DNA-metylering.
Videre eksperimenter i humane in wVo-cellekultursystemer (HeLa-celler) viser at dobbelttrådede RNA-molekyler med en lengde på fortrinnsvis fra 19-25 nukleotider har RNAi-aktivitet. Derfor, til forskjell fra resultatene med Drosophila, er også 24 og 25 nt lange dobbelttrådede RNA-molekyler effektive for RNAi.
Målet med foreliggende oppfinnelse er å tilveiebringe nye agenser som kan mediere målspesifikk RNA-interferens eller andre målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, slik som DNA-metylering, der nevnte agenser har en forbedret effektivitet og sikkerhet sammenlignet med tidligere agenser på området.
Løsningen på dette problemet er gitt med et isolert dobbelttrådet RNA-molekyl, der hver RNA-tråd har en lengde fra 19-25, spesielt fra 19-23 nukleotider, der nevnte RNA-molekyl kan mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering. Fortrinnsvis har minst én tråd et 3' overheng fra 1-5 nukleotider, mer foretrukket fra 1-3 nukleotider og mest foretrukket 2 nukleotider. Den andre tråden kan være rettendet eller har opp til 6 nukleotider 3' overheng. Hvis begge trådene til dsRNA'et er eksakt 21 eller 22 nt, er det dessuten mulig å observere noe RNA-interferens når begge endene er rette (0 nt overheng). RNA-molekylet er fortrinnsvis et syntetisk RNA-molekyl som er vesentlig fri for kontaminanter forekommende i celleekstrakter, f.eks. fra DrosopMa-embryoer. Videre er RNA-molekylet fortrinnsvis vesentlig fri for enhver ikke-mål-spesifikk kontaminant, spesielt ikke-mål-spesifikke RNA-molekyler f.eks. fra kontaminanter forekommende i celleekstrakter.
Videre angår foreliggende oppfinnelse anvendelse av isolerte dobbelttrådede RNA-molekyler, der hver RNA-tråd har en lengde fra 19-25 nukleotider, for mediering av målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNAi, i mammalske celler, spesielt i humane celler.
Overraskende ble det funnet at syntetisk korte, dobbelttrådede RNA-molekyler spesielt med overhengende 3' ender er sekvensspesifikke mediatorer av RNAi og medierer effektiv mål-RNA kutting, der kuttesetet er lokalisert nær senteret til regionen dekket av det guidende, korte RNA'et.
Fortrinnsvis har hver tråd av RNA-molekylet en lengde fra 20-22 nukleotider (eller 20-25 nukleotider i mammalske celler), der lengden av hver tråd kan være lik eller forskjellig. Fortrinnsvis er lengden av 3' overhenget fra 1-3 nukleotider, der lengden av overhenget kan være lik eller forskjellig for hver tråd. RNA-trådene har fortrinnsvis 3' hydroksylgrupper. 5-terminalen omfatter fortrinnsvis en fosfat-, difosfat-, trifosfat- eller hydroksylgruppe. De mest effektive dsRNA'ene er sammensatt av to 21 nt tråder som er paret slik at 1-3, spesielt 2 nt 3' overheng er til stede på begge endene av dsRNA'et.
Mål-RNA kuttereaksjonen guidet av siRNAer er svært sekvensspesifikk. Ikke alle posisjonene til et siRNA bidrar imidlertid like mye til målgjenkjennelse. Feilmatch i senteret av siRNA-dupleksen er mest kritisk og praktisk talt opphever mål-RNA kutting. Derimot bidrar ikke 3' nukleotidet til siRNA-tråden (f.eks. posisjon 21) som er komplementært til det enkelttrådede mål-RNA'et til spesifisitet av målgjenkjennelsen. Videre er ikke sekvensen til det uparede 2-nt 3' overhenget til siRNA-tråden med den samme polariteten som mål-RNA'et kritisk for mål-RNA kutting, ettersom bare antisens siRNA-tråden guider målgjenkjennelse. Fra de enkelttrådede overhengende nukleotidene trenger derfor bare den nest siste posisjonen i antisens-siRNA'et (f.eks. posisjon 20) å matche det bundne sens mål-mRNA'et.
Overraskende har de dobbelttrådede RNA-molekylene ifølge foreliggende oppfinnelse en høy in wVo-stabilitet i serum eller i vekstmedium for cellekulturer. For å videre øke stabiliteten kan 3' overhengene bli stabilisert mot nedbrytning, f.eks. kan de bli valgt slik at de består av purinnukleotider, spesielt adenosin- eller guanosinnukleotider. Alternativt tolereres substitusjon av pyrimidinnukleotider med modifiserte analoger, f.eks. substitusjon av uridin 2 nt 3' overheng med 2'-deoksytymidin, og affiserer ikke effektiviteten til RNA-interferens. Fraværet av en 2' hydroksyl øker nukleaseresistensen til overhenget i vevsdyrkningsmedium signifikant.
I en spesielt foretrukket utførelsesform ifølge foreliggende oppfinnelse kan RNA-molekylet inneholde minst én modifisert nukleotidanalog. Nukleotidanalogene kan bli plassert i posisjoner hvor den målspesifikke aktiviteten, f.eks. den RNAi-medierende aktiviteten, ikke blir vesentlig påvirket, f.eks. i en region på 5-enden og/eller 3' enden av det dobbelttrådede RNA-molekylet. Spesielt kan overhengene bli stabilisert ved å inkorporere modifiserte nukleotidanaloger.
Foretrukne nukleotidanaloger velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider. Det bør imidlertid bli registrert at også nukleobasemodifiserte ribonukleotider, dvs. ribonukleotider, inneholdende en ikke-naturlig forekommende nukleobase i stedet for en naturlig forekommende nukleobase slik som uridiner eller cytidiner modifisert på 5-posisjonen, f.eks. 5-(2-amino)propyluridin, 5-bromuridin; adenosiner og guanosiner modifisert på 8-posisjonen, f.eks. 8-bromguanosin; deazanukleotider, f.eks. 7-deaza-adenosin; O- og N-alkylerte nukleotider, f.eks. N6-metyladenosin, er egnet. I foretrukne sukkermodifiserte ribonukleotider byttes 2' OH-gruppen med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR, NH2, NHR, NR2eller CN, der R er CrC6 alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller I. I foretrukne ryggradmodifiserte ribonukleotider byttes fosfoestergruppen koblet til tilgrensende ribonukleotider ut med en modifisert gruppe, f.eks. av fosfotioatgruppe. Det bør bli registrert at modifiseringene ovenfor kan bli kombinert.
Sekvensen til det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse må ha en tilstrekkelig likhet med et nukleinsyremålmolekyl for å mediere målspesifikk RNAi og/eller DNA-metylering. Fortrinnsvis har sekvensen en likhet på minst 50 %, spesielt på minst 70 %, med det ønskede målmolekylet i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Mer foretrukket er likheten minst 85 % og mest foretrukket 100 % i den dobbelttrådede delen av RNA-molekylet. Likheten av et dobbelttrådet RNA-molekyl med et forhåndsbestemt nukleinsyremålmolekyl, f.eks. et mRNA-målmolekyl, kan bli bestemt som følger:
I = _n_x 100
L
der I er likheten i prosent, n er antallet identiske nukleotider i den dobbelttrådede delen av dsRNA'et og målet, og L er lengden av sekvensoverlappingen mellom den dobbelttrådede delen av dsRNA'et og målet.
Alternativt kan likheten av det dobbelttrådede RNA-molekylet i forhold til målsekvensen også bli definert inkludert 3' overhenget, spesielt et overheng med en lengde fra 1-3 nukleotider. I dette tilfellet er sekvenslikheten fortrinnsvis minst 50 %, mer foretrukket minst 70 % og mest foretrukket minst 85 % i forhold til målsekvensen. For eksempel kan nukleotidene fra 3' overhenget og opp til 2 nukleotider fra 5' og/eller 3' terminalen av dobbelttråden bli modifisert uten signifikant tap av aktivitet.
Det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli fremstilt med en fremgangsmåte som omfatter trinnene: (a) syntetisere to RNA-tråder som hver har en lengde fra 19-25, f.eks. fra 19-23 nukleotider, der nevnte RNA-tråder kan danne et dobbelttrådet RNA-molekyl, der fortrinnsvis minst én tråd har et 3' overheng fra 1-5 nukleotider, (b) kombinere de syntetiserte RNA-trådene under betingelser der et dobbelttrådet RNA-molekyl dannes som kan mediere målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering.
Fremgangsmåter for syntetisering av RNA-molekyler er kjent på området. I denne konteksten henvises det spesielt til kjemiske syntesefremgangsmåter som er beskrevet i Verma og Eckstein (1998).
De enkelttrådede RNA'ene kan også bli fremstilt med enzymatisk transkripsjon fra syntetiske DNA-templater eller fra DNA-plasmider isolert fra rekombinante bakterier. Typisk anvendes fag RNA-polymeraser slik som T7, T3 eller SP6 RNA-polymerase (Milligan og Uhlenbeck (1989)).
Et videre aspekt ved foreliggende oppfinnelse angår en fremgangsmåte for mediering av målspesifikke nukleinsyremodifiseringer, spesielt RNA-interferens og/eller DNA-metylering, i en celle eller en organisme omfattende trinnene: (a) la cellen eller organismen komme i kontakt med det dobbelttrådede RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse under betingelser der målspesifikke nukleinsyremodifiseringer kan forekomme, og (b) mediere en målspesifikk nukleinsyremodifisering effektuert av det dobbelttrådede RNA'et mot en målnukleinsyre som har en sekvensdel som korresponderer vesentlig til det dobbelttrådede RNA'et.
Fortrinnsvis omfatter kontakttrinnet (a) innføring av det dobbelttrådede RNA-molekylet i en målcelle, f.eks. en isolert målcelle, f.eks. i cellekultur, en encellet mikroorganisme eller en målcelle eller et flertall av målceller i en flercellet organisme. Mer foretrukket omfatter innføringstrinnet en bærermediert levering, f.eks. med liposomale bærere eller med injeksjon.
Fremgangsmåten ifølge foreliggende oppfinnelse kan bli anvendt for å bestemme funksjonen til et gen i en celle eller en organisme, eller til og med for modulering av funksjonen til et gen i en celle eller en organisme, som kan mediere RNA-interferens. Cellen er fortrinnsvis en eukaryot celle eller en cellelinje, f.eks. en plantecelle eller en dyrecelle, slik som en mammalsk celle, f.eks. en embryonal celle, en pluripotent stamcelle, en tumorcelle, f.eks. en teratokarsinomcelle, eller en virusinfisert celle. Organismen er fortrinnsvis en eukaryot organisme, f.eks. en plante eller et dyr, slik som et pattedyr, spesielt et menneske.
Målgenet som RNA-molekylet ifølge foreliggende oppfinnelse er rettet mot kan være assosiert med en patologisk tilstand. For eksempel kan genet være et patogenassosiert gen, f.eks. et viralt gen, et tumorassosiert gen eller et gen assosiert med autoimmun sykdom. Målgenet kan også være et heterologt gen uttrykt i en rekombinant celle eller en genetisk modifisert organisme. Ved å bestemme eller modulere, spesielt inhibere, funksjonen til et slikt gen, kan verdifull informasjon og terapeutiske fordeler i landbruket eller i medisin eller veterinærmedisin bli fremskaffet.
dsRNA'et administreres vanligvis som en farmasøytisk sammensetning. Administreringen kan bli utført med kjente fremgangsmåter, der en nukleinsyre innføres i en ønsket målcelle in vitro eller in vivo. Mye anvendte genoverføringsteknikker omfatter kalsiumfosfat, DEAE-dekstran, elektroporering og mikroinjeksjon og virale metoder (Graham, F. L. og van der Eb, A. J. (1973) Virol. 52, 456; McCutchan, J. H. og Pagano, J. S. (1968), J. Nati. Cancer Inst. 41, 351; Chu, G. et al. (1987), Nucl. Acids Res. 15, 1311; Fraley, R. et al. (1980), J. Biol. Chem. 255,10431; Capecchi, M. R. (1980), Cell 22, 479). Et nytt tillegg til dette arsenalet av teknikker for innføring av DNA i celler er anvendelse av kationiske liposomer (Felgner, P. L. et al. (1987), Proe. Nati. Acad. Sei USA 84,
7413). Kommersielt tilgjengelige kationiske lipidformuleringer er f.eks. Tfx 50 (Promega) eller Lipofectamin2000 (Life Technologies).
Derfor angår oppfinnelsen også en farmasøytisk sammensetning inneholdende minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som beskrevet ovenfor som et aktivt stoff og en farmasøytisk bærer. Sammensetningen kan bli anvendt for diagnostiske og terapeutiske applikasjoner i human medisin eller i veterinærmedisin.
For diagnostiske eller terapeutiske applikasjoner kan sammensetningen være i form av en løsning, f.eks. en injiserbar løsning, en krem, salve, tablett, suspensjon eller lignende. Sammensetningen kan bli administrert på enhver egnet måte, f.eks. med injeksjon, med oral-, topisk-, nasal- og rektal applikasjon osv. Bæreren kan være enhver egnet farmasøytisk bærer. Fortrinnsvis anvendes en bærer som kan øke RNA-molekylenes evne til å gå inn i målcellene. Egnede eksempler på slike bærere er liposomer, spesielt kationiske liposomer. En videre foretrukket administreringsmåte er injeksjon.
En videre foretrukket applikasjon av RNAi-fremgangsmåten er en funksjonell analyse av eukaryote celler eller eukaryote ikke-humane organismer, fortrinnsvis mammalske celler eller organismer og mest foretrukket humane celler, f.eks. cellelinjer slik som HeLa eller 293, eller gnagere, f.eks. rotter og mus. Ved transfeksjon med egnede dobbelttrådede RNA-molekyler som er homologe med et forutbestemt målgen eller DNA-molekyler som koder for et egnet dobbelttrådet RNA-molekyl, kan en spesifikk knockout-fenotype bli oppnådd i en målcelle, f.eks.
i cellekultur eller i en målorganisme. Overraskende ble det funnet at nærvær av korte, dobbelttrådede RNA-molekyler ikke resulterer i en interferonrespons fra vertscellen eller vertsorganismen.
Derfor er ytterligere et aspekt ved foreliggende oppfinnelse en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som har en målgenspesifikk knockout-fenotype omfattende en minst delvis defekt ekspresjon av minst ett endogent målgen, der nevnte celle eller organisme er transfektert med minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen eller med et DNA som koder for minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av minst ett endogent målgen. Det bør bli registrert at foreliggende oppfinnelse tillater en målspesifikk knockout av flere ulike endogene gener pga. spesifisiteten til RNAi.
Genspesifikke knockout-fenotyper av celler eller ikke-humane organismer, spesielt av humane celler eller ikke-humane pattedyr, kan bli anvendt i analytiske prosedyrer, f.eks. i den funksjonelle og/eller fenotypiske analysen av komplekse fysiologiske prosesser, slik som analyse av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. For eksempel kan man fremstille knockout-fenotypene av humane gener i dyrkede celler som er antatt å være regulatorer av alternative spleisingsprosesser. Blant disse genene er spesielt medlemmene av SR-spleisingsfaktorfamilien, f.eks. ASF/SF2, SC35, SRp20, SRp40 eller SRp55. Videre kan effekten av SR-proteiner på mRNA-profilene av forutbestemte alternativt spleisede gener slik som CD44 bli analysert. Fortrinnsvis utføres analysen med høykapasitetsfremgangsmåter ved å anvende oligonukleotidbaserte brikker.
Ved anvendelse av RNAi-baserte knockout-teknologier, kan ekspresjonen av et endogent målgen bli inhibert i en målcelle eller en målorganisme. Det endogene genet kan bli komplementert med en eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, f.eks. et gen eller et cDNA, som eventuelt kan bli koblet til ytterligere en nukleinsyresekvens som koder for et detekterbart peptid eller polypeptid, f.eks. en affinitetsmarkør, spesielt en multippel affinitetsmarkør. Varianter eller muterte former av målgenet er forskjellige fra det endogene målgenet ved at de koder for et genprodukt som er forskjellig fra det endogene genproduktet på aminosyrenivået med substitusjoner, insersjoner og/eller delesjoner av enkle eller multiple aminosyrer. Variantene eller de muterte formene kan ha den samme biologiske aktiviteten som det endogene målgenet. På den annen side kan varianten eller det muterte målgenet også ha en biologisk aktivitet som er forskjellig fra den biologiske aktiviteten til det endogene målgenet, f.eks. en delvis deletert aktivitet, en fullstendig deletert aktivitet, en økt aktivitet osv.
Komplementasjonen kan bli utført med koekspresjon av polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. et fusjonsprotein omfattende målproteinet og affinitetsmarkøren og det dobbelttrådede RNA-molekylet for delesjon av det endogene genet i målcellen. Denne koekspresjonen kan bli utført ved å anvende en egnet ekspresjonsvektor som uttrykker både polypeptidet kodet av den eksogene nukleinsyren, f.eks. det markørmodifiserte målproteinet og det dobbelttrådede RNA-molekylet eller alternativt ved å anvende en kombinasjon av ekspresjonsvektorer. Proteiner og proteinkomplekser som syntetiseres de novo i målcellen vil inneholde det eksogene genproduktet, f.eks. det modifiserte fusjonsproteinet. For å unngå suppresjon av den eksogene genproduktekspresjonen med RNAi-dupleksmolekylet, kan nukleotidsekvensen som koder for den eksogene nukleinsyren bli endret på DNA-nivået (med eller uten å forårsake mutasjoner på aminosyrenivået) i delen av sekvensen som er homolog med det dobbelttrådede RNA-molekylet. Alternativt kan det endogene målgenet bli komplementert med tilsvarende nukleotidsekvenser fra andre arter, f.eks. fra mus.
Foretrukne applikasjoner for cellen eller organismen ifølge foreliggende oppfinnelse er analysen av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer. I en spesielt foretrukket utførelsesform utføres en analyse av en variant eller mutant form av ett eller flere målproteiner, der nevnte variant eller mutante former reinnføres i cellen eller organismen med en eksogen målnukleinsyre som beskrevet ovenfor. Kombinasjonen av delesjon av et endogent gen og opprettholdelse ("rescue") ved å anvende mutert mål, f.eks. delvis deletert eksogent mål, har fordeler sammenlignet med anvendelse av en knockout-celle. Videre er denne fremgangsmåten spesielt egnet for identifisering av funksjonelle domener til målproteinet. I ytterligere en foretrukket utførelsesform utføres en sammenligning f.eks. av genekspresjonsprofiler og/eller proteomer og/eller fenotypiske karakteristika til minst to celler eller organismer. Disse organismene velges fra:
(i) en kontrollcelle eller kontrollorganisme uten målgeninhibisjon,
(ii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon og
(iii) en celle eller organisme med målgeninhibisjon pluss
målgenkomplementasjon med en eksogen målnukleinsyre.
Fremgangsmåten og cellen ifølge foreliggende oppfinnelse er også egnet i en prosedyre for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser, f.eks. identifisering av nye farmakologiske agenser fra en samling av testsubstanser og/eller karakterisering av virkningsmekanismer og/eller bivirkninger av kjente farmakologiske agenser.
Derfor angår foreliggende oppfinnelse også et system for identifisering og/eller karakterisering av farmakologiske agenser som virker på minst ett målprotein omfattende: (a) en eukaryot celle eller en eukaryot ikke-human organisme som kan uttrykke
minst ett endogent målgen som koder for nevnte målprotein,
(b) minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl som kan inhibere ekspresjon av
nevnte minst ene endogene målgen, og
(c) en testsubstans eller en samling av testsubstanser der farmakologiske egenskaper til nevnte testsubstans eller nevnte samling skal bli identifisert og/ellerkarakterisert.
Videre omfatter systemet beskrevet ovenfor fortrinnsvis:
(a) minst én eksogen målnukleinsyre som koder for målproteinet eller en variant eller mutert form av målproteinet, der nevnte eksogene målnukleinsyre er forskjellig fra det endogene målgenet på nukleinsyrenivået, slik at ekspresjon av den eksogene målnukleinsyren blir vesentlig mindre inhibert av det dobbelttrådede RNA-molekylet enn ekspresjon av det endogene målgenet.
Videre kan fremgangsmåten for RNA-knockoutkomplementasjon bli anvendt for å lette opprensing, f.eks. for affinitetsrensing av proteiner eller proteinkomplekser fra eukaryote celler, spesielt mammalske celler og mer spesielt humane celler. I denne utførelsesformen ifølge foreliggende oppfinnelse koder den eksogene målnukleinsyren fortrinnsvis for et målprotein som er koblet til en affinitetsmarkør.
Fremgangsmåten for å lette opprensingen kan bli anvendt for rensing av høymolekylære proteinkomplekser som fortrinnsvis har en masse på > 150 kD og mer foretrukket på > 500 kD og som eventuelt kan inneholde nukleinsyrer slik som RNA. Spesifikke eksempler er det heterotrimere proteinkomplekset bestående av 20 kD, 60 kD og 90 kD proteinene til U4/U6 snRNP-partikkelen, spleisefaktoren SF3b fra 17S U2 snRNP bestående av fem proteiner med molekylvekt på 14, 49, 120, 145 og 155 kD og 25S U4/U6/U5 tri-snRNP-partikkelen inneholdende U4, U5 og U6 snRNA-molekylene og ca. 30 proteiner med en molekylvekt på ca. 1,7 MD.
Denne fremgangsmåten er egnet for funksjonell proteomanalyse i mammalske celler, spesielt humane celler.
Videre er foreliggende oppfinnelse forklart i mer detalj i de følgende figurene og eksemplene.
Figurtekst
Figur 1: Dobbelttrådet RNA så kort som 38 bp kan mediere RNAi. (A) Grafisk presentasjon av dsRNA'er anvendt for å binde Pp-luc mRNA. Tre serier med rettendede dsRNAer som dekker et område på 29 til 504 bp ble fremstilt. Posisjonen til det første nukleotidet på senstråden til dsRNA'et er vist i forhold til startkodonet i Pp-luc mRNA (p1). (B) RNA-interferenstest (Tuschl et al., 1999). Forhold mellom mål Pp-luc og kontroll Rr-luc aktivitet ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (sort stolpe). dsRNA'er (5 nM) ble preinkubert i DrosophilaAysat i 15 min ved 25 °C før tilsetning av 7-metyl-guanosin-cap (cap er en beskyttende gruppe på 5' merket ende) Pp-luc og Rr-luc mRNA'er (~50 pM). Inkuberingen fortsatte i ytterligere en time og deretter analysert med dual luciferasetest (Promega). Resultatene er gjennomsnittet fra minst fire uavhengige eksperimenter ± standardavvik. Figur 2: Et 29 bp dsRNA blir ikke lenger prosessert til 21-23 nt fragmenter. Tidsforløp for 21-23 mer dannelse fra prosessering av internt<32>P-merkede dsRNA'er (5 nM) i DrosophilaAysatet. Lengden og kilden til dsRNAet er angitt. En RNA-størrelsesmarkør (M) har blitt tilsatt i det venstre sporet og fragmentstørrelsene er antydet. Doble bånd på tid null skyldes ufullstendig denaturert dsRNA. Figur 3: Korte dsRNA'er kutter mRNA-målmolekylet bare én gang. (A) Denaturerende gelelektroforeser av de stabile 5' kutteproduktene dannet med 1 times inkubering av 10 nM sens- eller antisens-RNA<32>P-merket cap med 10 nM dsRNA'er av p133 serien i Drosophila-\ ysat. Lengdemarkører ble generert ved delvis nuklease T1-kutting og delvis alkalisk hydrolyse (OH) av det cap-merkede mål-RNA'et. Regionene bundet av dsRNA'ene er indikert som sorte streker på begge sider. Sekvensen på 20-23 nt mellom de dominerende kuttesetene for det 111 bp lange dsRNA'et er vist. Den horisontale pilen indikerer uspesifikk kutting som ikke skyldes RNAi. (B) Posisjon av kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Sekvensene til 177 nt sens og 180 nt antisens mål-RNA'ene som har cap er vist i antiparallell retning, slik at komplementære sekvenser står ovenfor hverandre. Regionen bundet av de ulike dsRNA'ene er antydet med forskjellige fargede streker plassert mellom sens- og antisensmålsekvenser. Kutteseter er indikert med sirkler: stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting. Den<32>P-radioaktivt merkede fosfatgruppen er merket med en stjerne. Figur 4: 21 og 22 nt RNA-fragmenter genereres med en RNase lll-lignende mekanisme. (A) Sekvenser på~21 nt RNA'er etter dsRNA-prosessering.~21 nt RNA-fragmenter generert ved dsRNA-prosessering ble klonet i en bestemt retning og sekvensert. Oligoribonukleotider som kom fra senstråden til dsRNA'et er vist som blå linjer, de som kom fra antisenstråden som røde linjer. Tykke streker anvendes hvis den samme sekvensen var til stede i multiple kloner, der antallet til høyre indikerer frekvensen. Mål-RNA kuttesetene mediert av dsRNA'et er vist som oransje sirkler, stor sirkel for sterk kutting, liten sirkel for svak kutting (se Figur 3B). Sirkler på toppen av senstråden antyder kutteseter i sensmålet, og sirkler på bunnen av dsRNA'et indikerer kuttesete i antisensmålet. Opp til fem ekstra nukleotider ble identifisert i~21 nt fragmenter avledet fra 3' endene til dsRNA'et. Disse nukleotidene er tilfeldige kombinasjoner av hovedsakelig C-, G- eller A-rester og ble mest sannsynlig tilsatt på en tilfeldig måte (uten templat) i løpet av T7-transkripsjon av trådene som utgjør dsRNA. (B) Todimensjonal TLC-analyse av nukleotidsammensetningen til -21 nt RNA'er. -21 nt RNA'ene ble generert ved inkubering av internt radioaktivt merket 504 bp Pp-luc dsRNA i Drosophila-\ ysat, gelrenset og deretter kuttet til mononukleotider med nuklease P1 (øverste rad) eller ribonuklease T2 (nederste rad). dsRNA'et ble radioaktivt merket internt ved transkripsjon i nærvær av én av de indikerte a-<32>P nukleosidtrifosfatene. Radioaktivitet ble detektert med fosforbildeanalyse. Nukleosid 5-monofosfater, nukleosid 3-monofosfater, nukleosid 5',3-difosfater og uorganisk fosfat er indikert som henholdsvis pN, Np, pNp og Pi. Sorte sirkler indikerer UV-absorberende flekker fra ikke-radioaktive bærernukleotider. 3',5-bisfosfatene (røde sirkler) ble identifisert med migrasjon sammen med radioaktivt merkede standarder fremstilt med 5-fosforylering av nukleosid 3-monofosfater med T4-polynukleotidkinase og^<32>P-ATP. Figur 5: Syntetiske 21 og 22 nt RNA'er medierer mål-RNA kutting. (A) Grafisk presentasjon av kontroll 52 bp dsRNA og syntetiske 21 og 22 nt dsRNA'er. Senstråden til 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'er (siRNAer) er vist i blått, antisenstråden i rødt. Sekvensene til siRNAene ble avledet fra de klonede fragmentene til 52 og 111 bp dsRNA'er (Figur 4A), bortsett fra 22 nt antisenstråden til dupleks 5. siRNA'ene i dupleks 6 og 7 var unike for den 111 bp dsRNA-prosesseringsreaksjonen. De to 3' overhengende nukleotidene indikert i grønt foreligger i sekvensen til den syntetiske antisenstråden til dupleks 1 og 3. Begge trådene til kontroll 52 bp dsRNA'et ble fremstilt med in wfro-transkripsjon, og en fraksjon av transkripter kan inneholde vilkårlig 3' nukleotidtilsetning. Mål-RNA kuttesetene styrt av siRNA-dupleksene er indikert som oransje sirkler (se tekst til Figur 4A) og ble bestemt som vist i Figur 5B. (B) Posisjon til kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. Kontroll 52 bp dsRNA (10 nM) eller 21 og 22 nt RNA-dupleksene 1-7 (100 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,51 ved 25 °C i Drosophila-\ ysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Kuttesetene er indikert i Figur 5A. Regionen bundet av 52 bp dsRNA'et eller sens (s) eller antisens (as) trådene er indikert med de sorte strekene ved siden av gelen. Kuttesetene er alle lokalisert i regionen som er identisk med dsRNA'ene. For nøyaktig bestemmelse av kuttesetene for antisenstråden ble en gel med lavere prosent anvendt. Figur 6: Lange 3' overheng på korte dsRNA'er inhiberer RNAi. (A) Grafisk presentasjon av 52 bp dsRNA-konstruksjoner. 3' forlengelsene av sens- og antisenstråd er indikert i henholdsvis blått og rødt. De observerte kuttesetene på mål-RNA'ene er vist som oransje sirkler analogt til Figur 4A og ble bestemt som vist i Figur 6B. (B) Posisjon av kuttesetene på sens og antisens mål-RNA'er. Mål-RNA sekvensene er som beskrevet i Figur 3B. dsRNA (10 nM) ble inkubert med mål-RNA i 2,51 ved 25 °C i DrosophilaAysat. De stabile 5' kutteproduktene ble bestemt på gelen. Hovedkuttesetene er indikert med en horisontal pil og er også vist i Figur 6A. Regionen bundet av 52 bp dsRNA'et er vist som sort strek på begge sider av gelen. Figur 7: Foreslått modell for RNAi. RNAi er antatt å begynne med prosessering av dsRNA (senstråd i sort, antisenstråd i rødt) til hovedsakelig 21 og 22 nt korte, interfererende RNA'er (siRNA'er). Korte overhengende 3' nukleotider, hvis de foreligger på dsRNA'et, kan være fordelaktige for prosessering av korte dsRNA'er. De dsRNA-prosesserende proteinene, som trenger å blikarakterisert, er vist som grønne og blå ovaler og sammenstilt på dsRNA'et på asymmetrisk måte. I vår modell er dette vist ved binding av et hypotetisk blått protein eller proteindomene med siRNA-tråden i 3' til 5' retning, mens det hypotetisk grønne proteinet eller proteindomenet alltid er bundet til den motstående siRNA-tråden. Disse proteinene eller en undergruppe forblir assosiert med siRNA-dupleksen og bevarer dens retning som er bestemt ved retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Kun siRNA-sekvensen assosiert med det blå proteinet kan guide kutting av mål-RNA. Endonukleasekomplekset henvises til som lite, interfererende ribonukleoproteinkompleks eller siRNP. Det er antatt heri at endonukleasen som kutter dsRNA'et også kan kutte mål-RNA'et, trolig ved midlertidig fjerning av den passive siRNA-tråden som ikke er anvendt for målgjenkjennelse. Mål-RNA'et kuttes deretter i senteret av regionen gjenkjent av det sekvenskomplementære guide-siRNA'et. Figur 8: Rapportørkonstruksjoner og siRNA-duplekser. (a) Ildflue (Pp-luc) og Renilla reniformis (Rr-luc) luciferaserapportørgenregionene fra plasmidene pGL2-kontroll, pGL-3-kontroll og pRL-TK (Promega) er vist. SV40-regulatorelementer, HSV-tymidinkinasepromoteren og to introner (linjer) er indikert. Sekvensen til GL3- luciferase er 95 % identisk med GL2, men RL er fullstendig ubeslektet med begge. Luciferaseekspresjon fra pGL2 er omtrent 10 ganger lavere enn fra pGL3 i transfekterte mammalske celler. Regionen bundet av siRNA-dupleksene er indikert som sort strek under den kodende regionen til luciferasegenene. (b) Sens (øvre) og antisens (nedre) sekvenser til siRNA-dupleksene som binder GL2-, GL3- og RL-luciferase er vist. GL2 og GL3 siRNA-dupleksene er bare forskjellige i 3 enkle nukleotidsubstitusjoner (grå boks). Som uspesifikk kontroll ble en dupleks med den inverterte GL2-sekvensen, invGL2, syntetisert. 2 nt 3' overhenget til 2'-deoksytymidin er indikert som TT; uGL2 ligner på GL2 siRNA, men inneholder ribouridin 3' overheng. Figur 9: RNA-interferens med siRNA-duplekser. Forhold av målkontrolluciferase ble normalisert i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); grå stolper indikerer forhold av Photinus pyralis (Pp-luc) GL2- eller GL3-luciferase til Renilla reniformis (Rr-luc) RL-luciferase (venstre akse), hvite stolper indikerer RL til GL2 eller GL3 forhold (høyre akse). Panel a, c, e, g og i beskriver eksperimenter utført med kombinasjonen av pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d, f, h og j med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Cellelinjen anvendt for interferensforsøket er indikert på toppen av hvert stolpediagram. Forholdene av Pp-luc/Rr-luc for bufferkontrollen (bu) varierte mellom henholdsvis 0,5 og 10 for pGL2/pRL og mellom 0,03 og 1 for pGL3/pRL før normalisering og mellom de ulike cellelinjene som ble testet. De plottede resultatene er gjennomsnitt fra tre uavhengige eksperimenter ± SD. Figur 10: Effekter av 21 nt siRNA, 50 bp og 500 bp dsRNAer på luciferaseekspresjon i HeLa-celler. Den nøyaktige lengden av de lange dsRNA'ene er indikert under stolpene. Panel a, c og e beskriver eksperimenter utført med pGL2-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider, panel b, d og f med pGL3-kontroll og pRL-TK rapportørplasmider. Resultatene er gjennomsnitt fra to uavhengige eksperimenter ± SD. (a), (b) Absolutt Pp-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (c), (d) Rr-luc ekspresjon, plottet i arbitrære luminescensenheter. (e), (f) Forhold av normaliserte mål i forhold til kontrolluciferase. Forhold av luciferaseaktivitet for siRNA-duplekser ble normalisert
i forhold til en bufferkontroll (bu, sorte stolper); luminescensforholdene for 50 eller 500 bp dsRNA'er ble normalisert i forhold til de respektive forholdene observert for 50 og 500 bp dsRNAfra humanisert GFP (hG, sorte stolper). Det bør bli registrert at de totale forskjellene i sekvenser mellom de 49 og 484 bp dsRNA'ene som binder GL2 og GL3 ikke er tilstrekkelig for å gi spesifisitet mellom GL2- og GL3-mål (43 nt sammenhengende likhet i 49 bp segment, 239 nt lengste sammenhengende likhet i 484 bp segment).
Figur 11: Variasjon av 3' overhenget til duplekser av 21-nt siRNA'er. (A) Oversikt over den eksperimentelle strategien. Sens mål-mRNA'et som er polyadenylert og har cap er vist, og de relative posisjonene til sens- og antisens-siRNAer er vist. Åtte serier av duplekser, i henhold til de åtte ulike antisenstrådene, ble fremstilt. siRNA-sekvensene og antallet overhengende nukleotider ble forandret i 1-nt trinn. (B) Normalisert relativ luminescens av målluciferase ( Photinus pyralis, Pp-luc) i forhold til kontrolluciferase ( Renilla reniformis, Rr-luc) i D. melanogaster-embryolysat i nærvær av 5 nM rettendede dsRNA'er. Luminescensforholdene bestemt i nærvær av dsRNA ble normalisert til forholdet fremskaffet for en bufferkontroll (bu, sort stolpe). Normaliserte forhold mindre enn 1 indikerer spesifikk interferens. (C-J) Normaliserte interferensforhold for åtte serier av 21-nt siRNA-duplekser. Sekvensene til siRNA-duplekser er vist over stolpediagrammene. Hvert panel viser interferensforholdet for et sett av duplekser dannet med et gitt antisensguide-siRNA og 5 ulike sens-siRNA'er. Antall overhengende nukleotider (3' overheng, positive tall; 5' overheng, negative tall) er indikert på x-aksen. Datapunkter er gjennomsnitt fra minst 3 uavhengige eksperimenter, feilstørrelser representerer standardavvik. Figur 12: Variasjon av lengden til senstråden av siRNA-duplekser. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. Tre 21-nt antisenstråder ble paret med åtte sens-siRNA'er. siRNA'ene ble forandret i lengde på deres 3' ende. 3' overhenget til antisens-siRNA'et var 1-nt (B), 2-nt (C) eller 3-nt (D), mens sens siRNA-overhenget varierte for hver serie. Sekvensene til siRNA-dupleksene og de tilsvarende interferensforholdene er indikert. Figur 13: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av forsøket. 21-nt siRNA-dupleksen er identisk i sekvens til den som er vist i Figur 11H eller 12C. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sens siRNAet (B) eller 5' siden av sens siRNA'et (C). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er antydet. Figur 14: Substitusjon av 2-hydroksylgruppene til siRNA-riboserestene. 2'-hydroksylgruppene (OH) i trådene til siRNA-duplekser ble byttet ut med 2-deoksy (d) eller2-O-metyl (Me). 2-nt og 4-nt2-deoksysubstitusjoner på 3' endene er indikert som henholdsvis 2-nt d og 4-nt d. Uridinrester ble byttet ut med 2-deoksy tymidin. Figur 15: Kartlegging av sens og antisens mål-RNA kutting med 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng. (A) Grafisk presentasjon av 32P (stjerne) cap-merkede sens og antisens mål-RNA'er og siRNA-duplekser. Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (B) Kartlegging av mål-RNA kutteseter. Etter 21 inkubering av 10 nM mål med 100 nM siRNA-dupleks i D. me/anogasfer-embryolysat ble det 5' cap-merkede substratet og 5' kutteproduktene bestemt på sekvenseringsgeler. Lengdemarkører ble generert ved delvis RNase T1-kutting (T1) og delvis alkalisk hydrolyse (OH-) av mål-RNA'ene. De tykke strekene til venstre for bildene indikerer regionen dekket av siRNA-trådene 1 og 5 med den samme retningen som målet. Figur 16: 5' enden av et guide-siRNA definerer posisjonen for mål-RNA kutting.
(A, B) Grafisk presentasjon av den eksperimentelle strategien. Antisens-siRNA'et var den samme i alle siRNA-duplekser, men senstråden varierte mellom 18 til 25 nt ved å forandre 3' enden (A) eller 18 til 23 nt ved å forandre 5' enden (B). Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting er indikert med trekanter henholdsvis over og under siRNA-dupleksene. (C, D) Analyse av mål-RNA kutting ved å anvende cap-merkede sens (øverste panel) eller antisens (nederste panel) mål-RNA'er. Kun de cap-merkede 5' kutteproduktene er vist. Sekvensene til siRNA-dupleksene er indikert, og lengden til sens siRNA-trådene er angitt på toppen av panelet. Kontrollsporet merket med en tankestrek i panel (C) viser mål-
RNA inkubert i fravær av siRNA'er. Markører var som beskrevet i Figur 15. Pilene i (D), nederste panel, indikerer mål-RNA kuttesetene som er forskjellige med 1 nt. Figur 17: Sekvensvariasjon av 3' overhenget til siRNA-duplekser. 2-nt 3' overhenget (NN, i grått) ble forandret i sekvens og sammensetning som indikert (T, 2-deoksytymidin, dG, 2-deoksyguanosin; stjerne, villtype siRNA-dupleks). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Villtypesekvensen er den samme som vist i Figur 14. Figur 18: Sekvensspesifisitet av målgjenkjennelse. Sekvensene til de feilmatchede siRNA-dupleksene er vist, modifiserte sekvenssegmenter eller enkle nukleotider er farget i grått. Referansedupleksen (ref) og siRNA-dupleksene 1 til 7 inneholder 2-deoksytymidin 2-nt overheng. Inaktiveringseffektiviteten til den tymidinmodifiserte referansedupleksen var sammenlignbar med villtypesekvensen (Figur 17). Normaliserte interferensforhold ble bestemt som beskrevet i Figur 11. Figur 19: Variasjon av lengden til siRNA-duplekser med preserverte 2-nt 3' overheng. siRNA-dupleksene ble forlenget til 3' siden av sens siRNA'et (A) eller 5' siden av sens siRNA'et (B). siRNA-duplekssekvensene og de respektive interferensforholdene er indikert. For HeLa SS6-celler ble siRNA-duplekser (0,84 \ xg) som binder GL2-luciferase kotransfektert med pGL2-kontroll og pRL-TK plasmider. For sammenligning er in vitro RNAi-aktivitetene til siRNA-duplekser testet i D. melanogaster-\ ysat vist.
Eksempel 1
RNA-interferens mediert med små, syntetiske RNA'er
1.1 Eksperimentelle fremgangsmåter
1.1.1 In wfro-RNAi
In wfro-RNAi og lysatfremstillinger ble utført som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Det er avgjørende å anvende ferskt, oppløst kreatinkinase (Roche) for optimal ATP-nydannelse. RNAi-translasjonstestene
(Figur 1) ble utført med dsRNA-konsentrasjoner på 5 nM og en forlenget preinkuberingsperiode på 15 min ved 25 °C før tilsetning av in wfro-transkriberte, 5' cap-merkede og polyadenylerte Pp-luc og Rr-luc rapportør mRNA'er. Inkuberingen fortsatte i 1 time, og den relative mengden av Pp-luc og Rr-luc protein ble analysert ved å anvende dual luciferasetest (Promega) og et Monolight 301OC luminometer (PharMingen).
1.1.2 RNA-syntese
Standard fremgangsmåter ble anvendt for in wfro-transkripsjon av RNA fra PCR-templater som bærer T7- eller SP6-promotersekvenser, se for eksempel (Tuschl et al., 1998). Syntetisk RNA ble fremstilt ved å anvende Expedite RNA-fosforamiditter (Proligo). 3' adapteroligonukleotidet ble syntetisert ved å anvende dimetoksytrityl-1,4-benzendimetanol-suksinyl-aminopropyl-CPG. Oligoribonukleotidene fikk fjernet beskyttelsen i 3 ml av 32 % ammoniakk/etanol (3/1) i 4 timer ved 55 °C (Expedite RNA) eller 16 timer ved 55 °C (3' og 5' adapter DNA/RNA kimæriske oligonukleotider) og deretter desilylert og gelrenset som tidligere beskrevet (Tuschl et al., 1993). RNA-transkripter for dsRNA-fremstilling omfattende lange 3' overheng ble generert fra PCR-templater som inneholdt en T7-promoter i sens- og en SP6-promoter i antisensretning. Transkripsjonstemplatet for sens og antisens mål-RNA ble PCR-amplifisert med GCG TAATACGACTCACTATAGAACAATTGCTTTTACAG (understreket, T7-promoter) som 5' primer og ATTTAGGTGACACTATAGGCATAAAGAATTGAAGA (understreket, SP6-promoter) som 3' primer og det lineariserte Pp-luc plasmidet (pGEM-luc sekvens) (Tuschl et al., 1999) som templat; det T7-transkriberte sens-RNA'et var 177 nt langt med Pp-luc sekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet og etterfulgt av 17 nt av komplementet til SP6-promotersekvensen på 3' enden. Transkripter for rettendet dsRNA-dannelse ble fremstilt med transkripsjon fra to ulike PCR-produkter som bare inneholdt en enkel promoterse kvens.
dsRNA-hybridisering ble utført ved å anvende en fenol/kloroform ekstraksjon. Ekvimolar konsentrasjon av sens- og antisens-RNA (50 nM til 10^iM, avhengig av lengden og tilgjengelig mengde) i 0,3 M NaOAc (pH 6) ble inkubert i 30 s ved 90 °C og deretter ekstrahert ved romtemperatur med et like stort volum av
fenol/kloroform, etterfulgt av en kloroformekstraksjon for å fjerne residual fenol. Det resulterende dsRNA'et ble presipitert ved tilsetning av 2,5-3 volumer av etanol. Pelleten ble løst i lyseringsbuffer (100 mM KCI, 30 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 2 mM Mg (OAc>2) og kvaliteten av dsRNA'et ble verifisert med standard agarosegelelektroforeser i 1 x TAE-buffer. 52 bp dsRNA'ene med 17 nt og 20 nt 3' overhengene (Figur 6) ble hybridisert ved inkubering i 1 min ved 95 °C, deretter raskt avkjølt til 70 °C og etterfulgt av sakte avkjøling til romtemperatur over en 3 t periode (50 \ i\ hybridiseringsreaksjon, 1 \ M trådkonsentrasjon, 300 mM NaCI, 10 mM Tris-HCI, pH 7,5). dsRNA'ene ble deretter fenol/kloroform ekstrahert, etanol presipitert og løst i lyseringsbuffer.
Transkripsjon av internt<32>P-radioaktivt merket RNA anvendt for dsRNA-fremstilling (Figur 2 og 4) ble utført ved å anvende 1 mM ATP, CTP, GTP, 0,1 eller 0,2 mM UTP og 0,2-0,3^M -<3>2P-UTP (3000 Ci/mmol) eller det respektive forholdet for andre radioaktivt merkede nukleosidtrifosfater enn UTP. Merking av cap til mål-RNA'ene ble utført som tidligere beskrevet. Mål-RNA'ene ble gelrenset etter cap-merking.
1.1.3 Kuttesetekartlegging
Standard RNAi-reaksjoner ble utført med preinkubering av 10 nM dsRNA i 15 min etterfulgt av tilsetning av 10 nM cap-merket mål-RNA. Reaksjonen ble stoppet etter ytterligere 21 (Figur 2A) eller 2,5 t inkubering (Figur 5B og 6B) med proteinase K-behandling (Tuschl et al., 1999). Prøvene ble deretter analysert på 8 eller 10 % sekvenseringsgeler. De 21 og 22 nt syntetiske RNA-dupleksene ble anvendt ved 100 nM endelig konsentrasjon (Figur 5B).
1.1.4 Kloning av -21 nt RNA'er
21 nt RNA'ene ble dannet med inkubering av radioaktivt merket dsRNA i DrosophilaAysat i fravær av mål-RNA (200 jxl reaksjon, 1 t inkubering, 50 nM dsP111, eller 100 nM dsP52 eller dsP39). Reaksjonsblandingen ble deretter behandlet med proteinase K (Tuschl et al., 1999) og dsRNA-prosesseringsproduktene ble separert på en denaturerende 15 % polyakrylamidgel. Et bånd, inkludert et størrelsesområde på minst 18 til 24 nt, ble skjært ut, eluert inn i 0,3 M NaCI natten over ved 4 °C og i silikonrør. RNA'et ble isolert med etanolutfelling og defosforylert (30 \ i\ reaksjon, 30 min, 50 °C, 10 U alkalisk fosfatase, Roche). Reaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA'et ble etanolpresipitert. 3' adapteroligonukleotidet (pUUUaaccgcatccttctcx: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA; p, fosfat; x, 4-hydroksymetylbenzyl) ble deretter ligert til det defosforylerte -21 nt RNAet (20 \ x\ reaksjon, 30 min, 37 °C, 5 \ iM 3' adapter, 50 mM Tris-HCI, pH 7,6, 10 mM MgCI2, 0,2 mM ATP, 0,1 mg/ml acetylert BSA, 15 % DMSO, 25 U T4 RNA-ligase, Amersham-Pharmacia) (Pan og Uhlenbeck, 1992). Ligeringsreaksjonen ble stoppet ved tilsetning av et like stort volum av 8 M urea/50 mM EDTA-stoppblanding og direkte satt på en 15 % gel. Ligeringsutbytter var større enn 50 %. Ligeringsproduktet ble isolert fra gelen og 5-fosforylert (20 (il reaksjon, 30 min, 37 °C, 2 mM ATP, 5 U T4-polynukleotidkinase, NEB). Fosforyleringsreaksjonen ble stoppet med fenol/kloroform ekstraksjon, og RNA ble isolert med etanolutfelling. Deretter ble 5' adapteren (tactaatacgactcactAAA: stor bokstav, RNA; liten bokstav, DNA) ligert til det fosforylerte ligeringsproduktet som beskrevet ovenfor. Det nye ligeringsproduktet ble gelrenset og eluert fra gelbiten i nærvær av revers transkripsjonsprimer (GACTAGCTGGAATTCAAGGATGCGGTTAAA: fet skrift, EcoRI-sete) anvendt som bærer. Revers transkripsjon (15 \ i\ reaksjon, 30 min, 42 °C, 150 U Superscript II revers transkriptase, Life Technologies) ble etterfulgt av PCR ved å anvende CAGCCAACGGAATTCATACGACTCACTAAA (fet skrift, EcoRI-sete) som 5' primer og 3' RT-primeren. PCR-produktet ble renset med fenol/kloroform ekstraksjon og etanolpresipitert. PCR-produktet ble deretter kuttet med EcoRI (NEB) og konkatamerisert ved å anvende T4 DNA-ligase (høy konsentrasjon, NEB). Konkatamerer av en størrelse på 200 til 800 bp ble separert på en agarosegel med lavt smeltepunkt, isolert fra gelen med en standard smeltings- og fenolekstraksjonsfremgangsmåte og etanolpresipitert. De uparede
endene ble fylt i ved inkubering med Taq-polymerase under standard betingelser i 15 min ved 72 °C, og DNA-produktet ble ligert direkte inn i pCR2.1-TOPO vektoren ved anvendelse av TOPO TA-kloningstestsettet (Invitrogen). Kolonier ble screenet ved anvendelse av PCR og M13-20 og M13 reverse sekvenseringsprimere. PCR-produkter ble sendt direkte til sekvensering (Sequence Laboratories Gottingen
GmbH, Tyskland). Gjennomsnittlig ble fire til fem 21 mer sekvenser fremskaffet pr. klon.
1.1.5 2D-TLC analyse
Nuklease P1-kutting av radioaktivt merkede, gelrensede siRNA'er og 2D-TLC ble utført som beskrevet (Zamore et al., 2000). Nuklease T2-kutting ble utført i 10 (il reaksjoner i 31 ved 50 °C i 10 mM ammoniumacetat (pH 4,5) ved anvendelse av 2 \ xg/\ i\ bærer tRNA og 30 U ribonuklease T2 (Life Technologies). Migrasjonen av ikke-radioaktive standarder ble bestemt med UV-lys. Identiteten av nukleosid-3',5'-disfosfater ble bekreftet med migrasjon av T2-kutteproduktene sammen med standarder fremstilt med 5'-<32>P-fosforylering av kommersielle nukleosid 3'-monofosfater ved anvendelse av y-32P-ATP og T4-polynukleotidkinase (resultater er ikke vist).
1.2 Resultater og diskusjon
1.2.1 Lengdekrav for prosessering av dsRNA til 21 og 22 nt RNA-fragmenter Lysat fremstilt fra D. melanogaster syncytiale embryoer rekapitulerer RNAi in vitro og tilveiebringer et nytt verktøy for biokjemisk analyse av mekanismen for RNAi (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). In vitro- og in v/Vo-analyse av lengdekravene til dsRNAfor RNAi har vist at korte dsRNA'er (< 150 bp) er mindre effektive enn lengre dsRNA'er i degradering av mål-mRNA (Caplen et al., 2000; Hammond et al., 2000; Ngo et al., 1998; Tuschl et al., 1999). Årsakene for reduksjon i mRNA-degraderende effektivitet er ikke kjent. Vi undersøkte derfor det nøyaktige lengdekravet til dsRNA for mål-RNA nedbrytning under optimaliserte betingelser i Drosophila-\ ysatet (Zamore et al., 2000). Flere serier av dsRNA'er ble syntetisert og rettet mot ildflueluciferase (Pp-luc) rapportør RNA. Den spesifikke suppresjonen av mål-RNA ekspresjon ble monitorert med dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999) (Figur 1A og 1B). Vi detekterte spesifikk inhibisjon av mål-RNA ekspresjon for dsRNA'er så korte som 38 bp, men dsRNA'er på 29 til 36 bp var ikke effektive i denne prosessen. Effekten var uavhengig av målposisjonen og graden av inhibisjon av Pp-luc mRNA-ekspresjon korrelert med lengden til dsRNA'et, dvs. lange dsRNA'er var mer effektive enn korte dsRNA'er.
Det har blitt antydet at 21-23 nt RNA fragmentene generert ved prosessering av dsRNA'er er mediatorene av RNA-interferens og kosuppresjon (Hamilton og Baulcombe, 1999; Hammond et al., 2000; Zamore et al., 2000). Vi analyserte derfor hastigheten til 21-23 nt fragmentdannelse for en undergruppe av dsRNA'er som varierte i størrelse mellom 501 til 29 bp. Dannelse av 21-23 nt fragmenter i DrosophilaAysat (Figur 2) var enkel å detektere for 39 til 501 bp lange dsRNA'er, men ble signifikant forsinket for 29 bp dsRNA'et. Denne observasjonen sammenfaller med en rolle for 21-23 nt fragmenter i guiding av mRNA-kutting og gir en forklaring for mangelen på RNAi med 30 bp dsRNA'er. Lengdeavhengigheten for 21-23 mer dannelse reflekterer trolig en biologisk relevant kontrollmekanisme for å hindre den uønskede aktiveringen av RNAi med korte, intramolekylære, baseparede strukturer av ordinære cellulære RNAer.
1.2.2 39 bp dsRNA medierer mål-RNA kutting på et enkelt sete Tilsetning av dsRNA og 5' cap-merket mål-RNA til Drosophila-\ ysatet resulterer i sekvensspesifikk nedbrytning av mål-RNA'et (Tuschl et al., 1999). Mål-mRNA'et kuttes bare i regionen som har likhet med dsRNA'et, og mange av målkuttesetene var separert med 21-23 nt (Zamore et al., 2000). Derfor var antallet kutteseter for et gitt dsRNA forventet omtrentlig å tilsvare lengden av dsRNA'et dividert med 21. Vi kartla målkuttesetene på et sens- og et antisens mål-RNA som var 5' cap radioaktivt merket (Zamore et al., 2000) (Figur 3A og 3B). Stabile 5' kutteprodukter ble separert på en sekvenseringsgel, og kutteposisjonen ble bestemt ved sammenligning med en delvis RNase T1 og en alkalisk hydrolysestige fra mål-RNAet.
I overensstemmelse med den tidligere observasjonen (Zamore et al., 2000) ble alle mål-RNA kutteseter lokalisert i regionen som har likhet med dsRNA'et. Sens-eller antisensmålet ble bare kuttet én gang med 39 bp dsRNA. Hvert kuttesete ble lokalisert 10 nt fra 5' enden av regionen bundet av dsRNA'et (Figur 3B). 52 bp dsRNA'et, som har samme 5' ende som 39 bp dsRNA'et, danner det samme kuttesetet på sensmålet, lokalisert 10 nt fra 5' enden til regionen som har likhet med dsRNA'et, i tillegg til to svakere kutteseter 23 og 24 nt nedstrøms for det første setet. Antisensmålet ble bare kuttet én gang, igjen 10 ntfra 5' enden til regionen bundet av dens respektive dsRNA. Kartlegging av kuttesetene for 38 til 49 bp dsRNA'ene vist i Figur 1 viste at det første og dominerende kuttesetet alltid var lokalisert 7 til 10 nt nedstrøms for regionen bundet av dsRNA'et (resultater er ikke vist). Dette antyder at punktet for mål-RNA kutting bestemmes av enden til dsRNA'et og kan antyde at prosessering til 21-23 mer starter fra endene til dupleksen.
Kutteseter på sens- og antisensmål for det lengre 111 bp dsRNA'et var mye mer frekvent enn forventet, og de fleste av dem forekommer i clustere separert med 20 til 23 nt (Figur 3A og 3B). Som for de kortere dsRNA'ene er det første kuttesetet på sensmålet 10 nt fra 5' enden til regionen dekket av dsRNAet; og det første kuttesetet på antisensmålet er lokalisert 9 nt fra 5' enden til region bundet av dsRNA'et. Det er ukjent hva som forårsaker denne uregelmessige kuttingen, men én mulighet kan være at lengre dsRNA'er ikke bare kan bli prosessert fra endene, men også internt, eller det fins noen spesifisitetsdeterminanter for dsRNA-prosessering som vi enda ikke kjenner til. Noen uregelmessigheter for mellomrommet på 21-23 nt har også blitt beskrevet tidligere (Zamore et al., 2000). For å bedre forstå det molekylære grunnlaget for dsRNA-prosessering og mål-RNA gjenkjennelse, bestemte vi oss for å analysere sekvensene til 21-23 nt fragmentene generert ved prosessering av 39, 52 og 111 bp dsRNA'er i DrosopMa-lysatet.
1.2.3 dsRNA prosesseres til 21 og 22 nt RNA'er med en RNase lll-lignende mekanisme
For å karakterisere 21-23 nt RNA-fragmentene undersøkte vi 5' og 3' terminalene til RNA-fragmentene. Periodatoksidasjon av gelrensede 21-23 nt RNA'er etterfulgt av p-eliminering antydet nærvær av en terminal 2' og 3' hydroksylgruppe. 21-23 mer var også mottakelige for alkalisk fosfatasebehandling, som indikerer nærvær av en 5' terminal fosfatgruppe. Nærværet av 5' fosfat- og 3' hydroksylterminaler antyder at dsRNA'et kan bli prosessert av en lignende enzymatisk aktivitet som E. coli RNase III (for oversiktsartikler se (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982)).
Retningsbestemt kloning av 21-23 nt RNA-fragmenter ble utført ved ligering av et 3' og 5' adapteroligonukleotid til renset 21-23 mer ved anvendelse av T4 RNA-ligase. Ligeringsproduktene ble revers transkribert, PCR-amplifisert, konkatamerisert, klonet og sekvensert. Over 220 korte RNA'er ble sekvensert fra dsRNA-prosesseringsreaksjoner av 39, 52 og 111 bp dsRNA'ene (Figur 4A). Vi fant den følgende lengdefordelingen: 1 % 18 nt, 5 % 19 nt, 12 % 20 nt, 45 % 21 nt, 28 % 22 nt, 6 % 23 nt og 2 % 24 nukleotider. Sekvensanalyse av 5' terminalnukleotidet til de prosesserte fragmentene antydet at oligonukleotider med en 5' guanosin var underrepresentert. Denne skjevheten ble mest sannsynlig innført av T4 RNA-ligase som diskriminerer mot 5' fosforylert guanosin som donoroligonukleotid; ingen signifikant sekvensskjevhet ble observert på 3' enden. Mange av -21 nt fragmentene avledet fra 3' endene til sens- eller antisenstråden av dupleksene omfatter 3' nukleotider som er avledet fra vilkårlig tilsetning av nukleotider i løpet av RNA-syntese ved anvendelse av T7 RNA-polymerase. Interessant ble et signifikant antall endogene Drosophila -21 nt RNAer også klonet, noen av dem fra LTR og ikke-LTR retrotransposoner (resultater er ikke vist). Dette sammenfaller med en mulig rolle for RNAi i transposoninaktivering. -21 nt RNA'ene forekommer i grupper (Figur 4A) som dekker hele dsRNA-sekvensene. Tilsynelatende kutter prosesseringsreaksjonen dsRNA'et ved å etterlate seg ujevne 3' ender, en annen karakteristikk for RNase III kutting. For 39 bp dsRNA'et ble to clustere av -21 nt RNA'er funnet fra hver dsRNA-tråd omfattende overhengende 3' ender, fortsatt ble bare ett kuttesete detektert på sens- og antisensmålet (Figur 3A og 3B). Hvis -21 nt fragmentene var til stede som enkelttrådede guide-RNA'er i et kompleks som medierer mRNA-nedbrytning, kunne det antas at minst to målkutteseter forekommer, men dette var ikke tilfelle. Dette antyder at -21 nt RNA'ene kan foreligge i dobbelttrådet form i endonukleasekomplekset, men at bare én av trådene kan bli anvendt for gjenkjennelse og kutting av mål-RNA. Anvendelse av bare én av -21 nt trådene for målkutting kan bli bestemt av retningen som -21 nt dupleksen er bundet til nukleasekomplekset. Denne retningen er definert av retningen som det opprinnelige dsRNA'et ble prosessert i. -21 mer clustere for 52 bp og 111 bp dsRNA'et er mindre godt definert sammenlignet med 39 bp dsRNA'et. Clusterne er spredt over regioner på 25 til 30 nt som mest sannsynlig representerer flere tydelige subpopulasjoner av -21 nt duplekser og guider derfor målkutting på flere nærliggende seter. Disse kutteregionene er fortsatt vesentlig separert med 20 til 23 nt intervaller. Reglene som bestemmer hvor ordinært dsRNA kan bli prosessert til -21 nt fragmenter er fortsatt ikke kjent, men det ble tidligere observert at avstanden mellom kutteseter på ca. 21-23 nt kan bli endret med en kjøring av uridiner (Zamore et al., 2000). Spesifisiteten til dsRNA-kutting med E. coli RNase III ser ut til å være kontrollert hovedsakelig av antideterminanter, dvs. unntatt noen spesifikke basepar i gitte posisjoner i forhold til kuttesetet (Zhang og Nicholson, 1997).
For å teste om sukker-, base- eller cap-modifisering var til stede i prosesserte -21 nt RNA-fragmenter, inkuberte vi radioaktivt merket 505 bp Pp-luc dsRNA i lysat i 1 time, isolerte~21 nt produktene og kuttet den med P1- eller T2-nuklease til mononukleotider. Nukleotidblandingen ble deretter analysert med 2D tynnsjiktskromatografi (Figur 4B). Ingen av de fire naturlige ribonukleotidene var modifisert som antydet med P1- eller T2-kutting. Vi har tidligere analysert adenosin- til inosinkonversjon i -21 nt fragmentene (etter en 2 t inkubering) og detekterte et lite omfang (< 0,7 %) av deaminering (Zamore et al., 2000); kortere inkubering i lysat (1 time) reduserte denne inosinfraksjonen til knapt detekterbare nivåer. RNase T2, som kutter 3' i forhold til fosfodiesterkoblingen, dannet nukleosid 3' fosfat og nukleosid 3',5-difosfat, og antyder dermed nærvær av et 5'-terminalt monofosfat. Alle fire nukleosid 3',5-difosfatene ble detektert og antyder at internukleotidkoblingen ble kuttet med liten eller ingen sekvensspesifisitet. Altså er -21 nt fragmentene ikke modifisert og ble generert fra dsRNA slik at 5' monofosfater og 3-hydroksyler var til stede på 5-enden.
1.2.4 Syntetiske 21 og 22 nt RNA'er medierer mål-RNA kutting Analyse av produktene ved dsRNA-prosessering antydet at -21 nt fragmentene genereres ved en reaksjon med alle karakteristikaene til en RNase III-kuttereaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1990; Robertson, 1982). RNase III lager kutt med overheng i dsRNAet og etterlater seg et 3' overheng på
ca. 2 nt. Vi syntetiserte kjemisk 21 og 22 nt RNA'er, som er identiske i sekvens til noen av de klonede~21 nt fragmentene, og testet dem for deres evne til å mediere mål-RNA nedbrytning (Figur 5A og 5B). 21 og 22 nt RNA-dupleksene ble inkubert ved 100 nM konsentrasjoner i lysatet, en 10 ganger høyere konsentrasjon enn 52 bp kontroll-dsRNA'et. Under disse betingelsene er mål-RNA kutting enkel å detektere. Senkning av konsentrasjonen av 21 og 22 nt dupleksene fra 100 til 10 nM forårsaker fortsatt mål-RNA kutting. Økning av duplekskonsentrasjonen fra 100 nM til 1000 nM øker imidlertid ikke videre målkutting, trolig pga. en begrensende proteinfaktor i lysatet.
I motsetning til 29 eller 30 bp dsRNA'er som ikke medierte RNAi, medierte 21 og 22 nt dsRNA'ene med overhengende 3' ender på 2 til 4 nt effektiv nedbrytning av mål-RNA (dupleksene 1, 3, 4, 6, Figur 5A og 5B). Rettendede 21 eller 22 nt dsRNA'er (dupleksene 2, 5 og 7, Figur 5A og 5B) ble redusert i deres evne til å degradere målet og indikerer at overhengende 3' ender er kritiske for rekonstitusjon av RNA-proteinnukleasekomplekset. De enkelttrådede overhengene kan være nødvendige for høyaffinitetsbinding av~21 nt dupleksen til proteinkomponentene. Et 5' terminalt fosfat, selv om det var til stede etter dsRNA-prosessering, var ikke nødvendig for å mediere mål-RNA kutting og var fraværende i de korte, syntetiske RNA'ene. De syntetiske 21 og 22 nt dupleksene guidet kutting av sens- så vel som antisensmål i regionen bundet av den korte dupleksen. Dette er et viktig resultat tatt i betraktning at et 39 bp dsRNA, som danner to par clustere av~21 nt fragmenter (Figur 2), kuttet sens- eller antisensmål bare én gang og ikke to ganger. Vi tolker dette resultatet ved å antyde at bare én av to tråder foreliggende i -21 nt dupleksen kan guide mål-RNA kutting og at retningen til~21 nt dupleksen i nukleasekomplekset blir bestemt av den opprinnelige retningen til dsRNA-prosessering. Presentasjonen av en allerede perfekt prosessert~21 nt dupleks for in wfro-systemet tillater imidlertid dannelse av det aktive sekvensspesifikke nukleasekomplekset med to mulige retninger av den symmetriske RNA-dupleksen. Dette resulterer i kutting av sens- så vel som antisensmål i regionen som har likhet med 21 nt RNA-dupleksen.
Målkuttesetet er lokalisert 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som er komplementært til 21 eller 22 nt guidesekvensen, dvs. kuttesetet er nær senter av regionen bundet av 21 eller 22 nt RNA'ene (Figur 4A og 4B). Forskyving av senstråden til en 22 nt dupleks med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 3 i
Figur 5A) forskjøv bare kuttesetet til antisensmålet med to nukleotider. Forskyving av både sens- og antisenstråd med to nukleotider flyttet begge kutteseter med to nukleotider (sammenligne dupleks 1 og 4). Vi spår at det vil bli mulig å utforme et par av 21 eller 22 nt RNA'er for å kutte et mål-RNA på nesten enhver gitt posisjon.
Spesifisiteten til mål-RNA kutting guidet av 21 og 22 nt RNA'er synes høy ettersom ingen avvikende kutteseter er detektert (Figur 5B). Det bør imidlertid bli registrert at nukleotidene foreliggende i 3' overhenget til 21 og 22 nt RNA-dupleksen kan bidra mindre til substratgjenkjennelse enn nukleotidene nær kuttesetet. Dette er basert på observasjonen av at det 3' ytterste nukleotidet i 3' overhenget til de aktive dupleksene 1 eller 3 (Figur 5A) ikke er komplementært til målet. En detaljert analyse av spesifisiteten til RNAi kan nå bli enkelt gjennomført ved anvendelse av syntetiske 21 og 22 nt RNA'er.
Basert på beviset at syntetiske 21 og 22 nt RNA'er med overhengende 3' ender medierer RNA-interferens, foreslår vi å kalle -21 nt RNA'ene for "korte, interfererende RNA'er" eller siRNA'er og det respektive RNA-proteinkomplekset for "en liten, interfererende ribonukleoproteinpartikkel" eller siRNP.
1.2.5 3' Overheng av 20 nt på korte dsRNA'er inhiberer RNAi Vi har vist at korte, rettendede dsRNA'er blir prosessert fra endene til dsRNA'et. I løpet av vår studie av lengdeavhengigheten til dsRNA i RNAi har vi også analysert dsRNA'er med 17 til 20 nt overhengende 3' ender, og til vår overraskelse fant vi at de var mindre effektive enn rettendede dsRNA'er. Den inhibitoriske effekten av lange 3' ender var spesielt uttalt for dsRNA'er opp til 100 bp, men var mindre dramatisk for lengre dsRNA'er. Effekten skyldtes ikke ufullkommen dsRNA-dannelse basert på nativ gelanalyse (resultater er ikke vist). Vi testet om den inhibitoriske effekten av lange, overhengende 3' ender kunne bli anvendt som et verktøy til å styre dsRNA-prosessering til bare én av de to endene av en kort RNA-dupleks.
Vi syntetiserte fire kombinasjoner av 52 bp modell-dsRNA'et, rettendet, 3' forlengelse på bare senstråden, 3' forlengelse på bare antisenstråden og dobbel 3' forlengelse på begge trådene og kartla mål-RNA kuttesetene etter inkubering i lysat (Figur 6A og 6B). Det første og dominerende kuttesetet til sensmålet ble tapt når 3' enden av antisenstråden til dupleksen ble forlenget og vice versa, det sterke kuttesetet til antisensmålet ble tapt når 3' enden av senstråden til dupleksen ble forlenget. 3' forlengelser på begge trådene gjorde 52 bp dsRNA'et praktisk talt inaktivt. Én forklaring for dsRNA-inaktiveringen ved~20 nt 3' forlengelser kan være assosieringen av enkelttrådede RNA-bindende proteiner som kan interferere med assosieringen av én av de dsRNA-prosesserende faktorene på denne enden. Dette resultatet er også i samsvar med vår modell der bare én av trådene til siRNA-dupleksen i sammensatt siRNP kan guide mål-RNA kutting. Retningen på tråden som guider RNA-kutting er definert av retningen til dsRNA-prosesseringsreaksjonen. Det er sannsynlig at nærvær av 3' ender med overheng kan lette monteringen av prosesseringskomplekset. En blokk på 3' enden av senstråden vil bare tillate dsRNA-prosessering fra den motstående 3' enden av antisenstråden. Dette igjen genererer siRNP-komplekser der bare antisenstråden til siRNA-dupleksen kan guide kutting av sens mål-RNA. Det samme gjelder for den resiproke situasjonen.
Den mindre uttalte inhibitoriske effekten av lange 3' forlengelser i tilfellet med lengre dsRNA'er (> 500 bp, resultater er ikke vist) indikerer at lange dsRNAer også kan inneholde interne dsRNA-prosesseringssignaler eller kan bli prosessert samtidig pga. assosieringen av multiple kuttefaktorer.
1.2.6 En modell for ds RNA-styrt mRNA-kutting
De nye biokjemiske resultatene oppdaterer modellen for hvordan dsRNA binder mRNA for nedbrytning (Figur 7). Dobbelttrådet RNA blir først prosessert til korte RNA-duplekser som hovedsakelig er 21 og 22 nt lange og har 3' ender med overheng som tilsvarer en RNase lll-lignende reaksjon (Dunn, 1982; Nicholson, 1999; Robertson, 1982). Basert på 21-23 nt lengden til de prosesserte RNA-fragmentene har det allerede blitt spekulert i at en RNase lll-lignende aktivitet kan være involvert i RNAi (Bass, 2000). Denne hypotesen støttes videre ved nærvær av 5' fosfater og 3' hydroksyler på terminalene til siRNA'ene som er observert i RNase lll-reaksjonsprodukter (Dunn, 1982; Nicholson, 1999). Bakteriell RNase III og de eukaryote homologene Rntlp i S. cerevisiae og Padp i S. pombe har blitt vist å delta i prosessering av ribosomalt RNA så vel som snRNA og snoRNA'er (se for eksempel Chanfreau et al., 2000).
Lite er kjent om biokjemien til RNase lll-homologer fra planter, dyr eller menneske. To familier av RNase lll-enzymer har blitt identifisert hovedsakelig med databaseguidet sekvensanalyse eller kloning av cDNA'er. Den første RNase III-familien er representert ved det 1327 aminosyre lange D. melanogaster- protemet drosha (Acc. AF116572). C-terminalen er sammensatt av to RNase III og ett dsRNA-bindende domene og N-terminalen har ukjent funksjon. Nære homologer er også funnet i C. elegans (Acc. AF160248) og menneske (Acc. AF189011)
(Filippov et al., 2000; Wu et al., 2000). Drosha-lignende human RNase III ble nylig klonet ogkarakterisert(Wu et al., 2000). Genet er uttrykt i alle humane vev og cellelinjer, og proteinet er lokalisert i kjernen og kjernelegemet i cellen. Basert på resultater fra antisensinhibisjonsstudier ble det antydet en rolle for dette proteinet i rRNA-prosessering. Den andre klassen er representert av C. e/egans-genet K12H4.8 (Acc. S44849) som koder for et protein som er 1822 aminosyrer langt. Dette proteinet har et N-terminalt RNA-helikasemotiv som er etterfulgt av 2 RNase lll-katalytiske domener og et dsRNA-bindende motiv, lignende drosha RNase III-familien. Det er nære homologer i S. pombe (Acc. Q09884), A. thaliana (Acc. AF187317), D. melanogaster (Acc. AE003740) og menneske (Acc. AB028449)
(Filippov et al., 2000; Jacobsen et al., 1999; Matsuda et al., 2000). Kanskje er K12H4.8 RNase lll/helikasen den sannsynlige kandidaten som er involvert i RNAi.
Genetiske screeninger i C. elegans identifiserte rde-1 og rde-4 som essensielle for aktivering av RNAi uten en effekt på transposonmobilisering eller kosuppresjon (Dernburg et al., 2000; Grishok et al., 2000; Ketting og Plasterk, 2000; Tabara et al., 1999). Dette førte til hypotesen om at disse genene er viktige for dsRNA-prosessering, men ikke er involvert i mRNA-målnedbrytning. Funksjonen til begge genene er fortsatt ukjent, rde-1 genproduktet er et medlem av en familie med proteiner som ligner på kaninproteinet elF2C (Tabara et al., 1999), og sekvensen til rde-4 har enda ikke blitt beskrevet. Fremtidig biokjemisk karakterisering av disse proteinene bør avsløre deres molekylære funksjon.
Prosessering til siRNA-dupleksene ser ut til å starte fra endene til begge rettendede dsRNAer eller dsRNA'er med korte (1-5 nt) 3' overheng, og fortsetter i bortimot 21-23 nt trinn. Lange (-20 nt) 3' overhengende ender på korte dsRNA'er undertrykker RNAi, muligens via interaksjon med enkelttrådede RNA-bindende proteiner. Undertrykkelsen av RNAi med enkelttrådede regioner som flankerer kort dsRNA og mangelen på siRNA-dannelse fra korte 30 bp dsRNA'er kan forklare hvorfor strukturerte regioner som ofte er i mRNA'er ikke fører til aktivering av RNAi.
Uten ønske om å være bundet av teori, antar vi at dsRNA-prosesseringsproteinene eller en undergruppe av disse forblir assosiert med siRNA-dupleksen etter prosesseringsreaksjonen. Retningen til siRNA-dupleksen i forhold til disse proteinene avgjør hvilken av de to komplementære trådene som guider mål-RNA nedbrytning. Kjemisk syntetiserte siRNA-duplekser guider kutting av sens- så vel som antisens mål-RNA ettersom de kan assosiere med proteinkomponentene i hver av de to mulige retningene.
Bemerkelsesverdig funn av at syntetiske 21 og 22 nt siRNA-duplekser kan bli anvendt for effektiv mRNA-nedbrytning tilveiebringer nye verktøy for sekvensspesifikk regulering av genekspresjon i funksjonell genteknologi, så vel som biomedisinske studier. siRNA'ene kan være effektive i mammalske systemer, der lange dsRNA'er ikke kan bli anvendt pga. aktiveringen av PKR-responsen (Clemens, 1997). Derfor representerer siRNA-dupleksene et nytt alternativ til antisens- eller ribozymterapeutika.
Eksempel 2
RNA-interferens i humane vevskulturer
2.1 Fremgangsmåter
2.1.1 RNA-fremstilling
21 nt RNA'er ble syntetisert kjemisk ved anvendelse av Expedite RNA-fosforamiditter og tymidinfosforamiditt (Proligo, Tyskland). Syntetiske oligonukleotiderfikk fjernet beskyttelsen og gelrenset (Eksempel 1), etterfulgt av Sep-Pak C18 kassett (Waters, Milford, MA, USA) rensing (Tuschl, 1993). siRNA-sekvensene rettet mot GL2- (Acc. X65324) og GL3-luciferase (Acc. U47296) svarte til de kodende regionene 153-173 i forhold til det første nukleotidet i startkodonet, siRNA'er rettet mot RL (Acc. AF025846) svarte til region 119-129 etter startkodonet. Lengre RNA'er ble transkribert med T7 RNA-polymerase fra PCR-produkter, etterfulgt av gel- og Sep-Pak rensing. De 49 og 484 bp GL2 eller GL3 dsRNA'ene svarte til henholdsvis posisjon 113-161 og 113-596 i forhold til translasjonsstart; de 50 og 501 bp RL dsRNA'ene svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618. PCR-templater for dsRNA-syntese rettet mot humanisert GFP (hG) ble amplifisert fra pAD3 (Kehlenbach, 1998), hvorved 50 og 501 bp hG dsRNA svarte til henholdsvis posisjon 118-167 og 118-618 i forhold til startkodonet.
For hybridisering av siRNA'er ble 20 \ iM enkelttråder inkubert i hybridiseringsbuffer
(100 mM kaliumacetat, 30 mM HEPES-KOH ved pH 7,4, 2 mM magnesiumacetat)
i 1 min ved 90 °C etterfulgt av 1 time ved 37 °C. 37 °C inkuberingstrinnet ble forlenget natten over for 50 og 500 bp dsRNA'ene, og disse
hybridiseringsreaksjonene ble utført ved trådkonsentrasjoner på henholdsvis 8,4 \ M og 0,84 \ iM.
2.1.2 Cellekultur
S2-celler ble ekspandert i Schneiders £>rosop/7//a-medium (Life Technologies) supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 ug/ml streptomycin ved 25 °C. 293, NIH/3T3, HeLa S3, COS-7 celler ble dyrket ved 37 °C i Dulbeccos modifiserte Eagles-medium supplert med 10 % FBS, 100 enheter/ml penicillin og 100 (ig/ml streptomycin. Celler ble regelmessig fortynnet og dyrket videre for å opprettholde eksponentiell vekst. 24 timer før transfeksjon ved ca. 80 % sammenhengende dekke av celler ble mammalske celler trypsinert og fortynnet 1:5 med ferskt medium uten antibiotika (1-3 x 10<5>celler/ml) og overført til 24-brønners plater (500 (il/brønn). S2-celler ble ikke trypsinert før fortynning. Transfeksjon ble utført med Lipofectamin2000-reagens (Life Technologies) som beskrevet av produsenten for adherente cellelinjer. 1,0 \ ig pGL2-kontroll (Promega) eller pGL3-kontroll (Promega), 0,1 jxg pRL-TK (Promega) og 0,28^g siRNA-dupleks eller dsRNA, formulert inn i liposomer, ble tilsatt pr. brønn; det endelige volumet var 600 \ ii pr. brønn. Celler ble inkubert 201 etter transfeksjon og fremstod sunne deretter. Luciferaseekspresjon ble deretter monitorert med dual luciferasetest (Promega). Transfeksjonseffektivitet ble bestemt med fluorescensmikroskopi for mammalske cellelinjer etter kotransfeksjon av 1,1 \ xg hGFP-kodende pAD3 og 0,28 \ xg invGL2 inGL2 siRNA og var 70-90 %. Rapportørplasmider ble amplifisert i XL-1 Blue (Stratagene) og renset ved anvendelse av Qiagen EndoFree Maxi Plasmid-testsettet.
2.2 Resultater og diskusjon
For å teste om siRNA'er også kan mediere RNAi i vevskultur, syntetiserte vi 21 nt siRNA-duplekser med symmetriske 2 nt 3' overheng rettet mot rapportørgener som koder for Renilla reniformis og to sekvensvarianter av ildflue ( Photinus pyralis, GL2 og GL3) luciferaser (Figur 8a, b). siRNA-dupleksene ble kotransfektert med rapportørplasmidkombinasjonene pGL2/pRL eller pGL3/pRL inn i D. melanogaster Schneider S2-celler eller mammalske celler ved anvendelse av kationiske liposomer. Luciferaseaktiviteter ble bestemt 201 etter transfeksjon. I alle cellelinjer som ble testet observerte vi spesifikk reduksjon av ekspresjonen av rapportørgenene i nærvær av beslektede siRNA-duplekser (Figur 9a-j). De absolutte luciferaseekspresjonsnivåene var bemerkelsesverdig upåvirket av ikke-beslektede siRNAer, hvilket indikerer fravær av skadelige bivirkninger med 21 nt RNA-duplekser (f.eks. Figur 10a-d for HeLa-celler). I D. melanogaster S2-celler (Figur 9a, b) var den spesifikke inhibisjonen av luciferaser komplett. I mammalske celler, der rapportørgenene ble uttrykt 50- til 100 ganger sterkere, var den spesifikke suppresjonen mindre komplett (Figur 9c-j). GL2-ekspresjon ble redusert 3- til 12-fold, GL3-ekspresjon 9- til 25-fold og RL-ekspresjon 1- til 3-fold i respons til de beslektede siRNA'ene. For 293-celler var binding av RL-luciferase med RL-siRNA'er ineffektiv, selv om GL2- og GL3-mål responderte spesifikt (Figur 9i, j). Mangelen på reduksjon av RL-ekspresjon i 293-celler kan skyldes dens 5- til 20-fold høyere ekspresjon sammenlignet med enhver annen testet mammalsk cellelinje og/eller begrenset tilgjengelighet av målsekvensen pga. RNA-sekundær struktur eller assosierte proteiner. Ikke desto mindre indikerte spesifikk binding av GL2- og GL3-luciferase med de beslektede siRNA-dupleksene at RNAi også virker 1 293-celler. 2 nt 3' overhenget i alle siRNA-duplekser, bortsett fra uGL2, bestod av (2-deoksy) tymidin. Substitusjon av uridin med tymidin i 3' overhenget ble godt tolerert i D. melanogaster in wfro-systemet, og sekvensen til overhenget var ikke kritisk for målgjenkjennelse. Tymidinoverhenget ble valgt fordi det angivelig skal øke nukleaseresistens til siRNA'er i vevsdyrkningsmediet og i transfekterte celler. Faktisk var det tymidinmodifiserte GL2 siRNA'et litt mer effektiv enn det ikke-modifiserte uGL2 siRNA'et i alle cellelinjer som ble testet (Figur 9a, c, e, g, i). Det er tenkelig at videre modifiseringer av de 3' overhengende nukleotidene kan gi ekstra fordeler til levering og stabilitet av siRNA-duplekser.
I kotransfeksjonseksperimenter ble 25 nM siRNA-duplekser med hensyn til det endelige volumet med vevsdyrkningsmedium anvendt (Figur 9, 10). Økning av siRNA-konsentrasjonen til 100 nM økte ikke de spesifikke inaktiveringseffektene, men begynte å affisere transfeksjonseffektivitet pga. konkurranse for liposominnkapsling mellom plasmid-DNA og siRNA (resultater er ikke vist). Reduksjon av siRNA-konsentrasjonen til 1,5 nM reduserte ikke den spesifikke inaktiveringseffekten (resultater er ikke vist), selv om siRNA'ene nå bare var 2- til 20-fold mer konsentrert enn DNA-plasmidene. Dette antyder at siRNA'er er usedvanlig kraftige reagenser for mediering av geninaktivering og at siRNA'er er effektive ved konsentrasjoner som er flere størrelsesordener under konsentrasjonene anvendt i konvensjonelle antisens- eller ribozymgenrettede eksperimenter.
For å monitorere effekten av lengre dsRNA'er på mammalske celler, ble 50 og 500 bp dsRNA'er beslektet med rapportørgenene fremstilt. Som uspesifikk kontroll ble dsRNA'erfra humanisert GFP (hG) (Kehlenbach, 1998) anvendt. Når dsRNAer ble kotransfektert i identiske mengder (ikke konsentrasjoner) som siRNA-dupleksene, ble rapportørgenekspresjonen redusert sterkt og uspesifikt. Denne effekten er vist for HeLa-celler som et representativt eksempel (Figur 10a-d). De absolutte luciferaseaktivitetene ble uspesifikt redusert henholdsvis 10- til 20-fold med 50 bp dsRNA og 20- til 200-fold med 500 bp dsRNA-kotransfeksjon. Lignende uspesifikke effekter ble observert for COS-7 og NIH/3T3 celler. For 293-celler ble en 10- til 20-fold uspesifikk reduksjon bare observert for 500 bp dsRNA'er. Uspesifikk reduksjon i rapportørgenekspresjon med dsRNA > 30 bp var forventet som del av interferonresponsen.
Overraskende, til tross for den sterke, uspesifikke reduksjonen i rapportørgenekspresjon, detekterte vi reproduserbart ekstra sekvensspesifikk, dsRNA-mediert inaktivering. De spesifikke inaktiveringseffektene var imidlertid bare åpenbar når de relative rapportørgenaktivitetene ble normalisert i forhold til hG dsRNA-kontrollene (Figur 10e, f). En 2- til 10-fold spesifikk reduksjon i respons til beslektet dsRNA ble observert, også i de andre tre mammalske cellelinjene som ble testet (resultater er ikke vist). Spesifikke inaktiveringseffekter med dsRNAer (356-1662 bp) ble tidligere rapportert i CHO-K1 celler, men mengdene av dsRNA som var nødvendige for å detektere en 2- til 4-fold spesifikk reduksjon var ca. 20-fold høyere enn i våre eksperimenter (Ui-Tei, 2000). Også CHO-K1 celler ser ut til å mangle interferonresponsen. I en annen rapport ble 293, NIH/3T3 og BHK-21 celler testet for RNAi ved anvendelse av luciferase/lacZ rapportørkombinasjoner og 829 bp spesifikt lacZ- eller 717 bp uspesifikt GFP-dsRNA (Caplen, 2000). Det mislykkede forsøket på å detektere RNAi i dette tilfellet kan skyldes den mindre sensitive luciferase/lacZ-rapportørtesten og lengdeforskjellene mellom mål og kontroll-dsRNA. Samlet antyder våre resultater at RNAi er aktiv i mammalske celler, men at inaktiveringseffekten er vanskelig å detektere, hvis interferonsystemet er aktivert av dsRNA > 30 bp.
I korthet har vi for første gang demonstrert siRNA-mediert geninaktivering i mammalske celler. Anvendelsen av korte siRNA'er er lovende for inaktivering av genfunksjon i human vevskultur og utvikling av genspesifikke terapeutika.
Eksempel 3
Spesifikk inhibisjon av genekspresjon med RNA-interferens
3.1 Materialer og fremgangsmåter
3.1.1 RNA-fremstilling og RNAi-test
Kjemisk RNA-syntese, hybridisering og luciferasebaserte RNAi-tester ble utført som beskrevet i Eksempel 1 eller 2 eller i tidligere publikasjoner (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). Alle siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase, og luciferase mRNA-sekvensen var avledet fra pGEM-luc (GenBank acc. X65316) som beskrevet (Tuschl et al., 1999). siRNA-dupleksene ble inkubert i D. melanogaster RNAi/translasjonsreaksjon i 15 min før tilsetning av mRNA'er. Translasjonsbaserte RNAi-tester ble minst utført i triplikater.
For kartlegging av kutting av sens mål-RNA, ble et 177-nt transkript generert, som svarer til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 113-273 i forhold til startkodonet, etterfulgt av 17-nt komplementet til SP6-promotersekvensen. For kartlegging av antisens mål-RNA kutting, ble et 166-nt transkript dannet fra et templat, som ble amplifisert fra plasmidsekvens med PCR ved anvendelse av 5' primer TAATACGACTCACTATAGAGCCCATATCGTTTCATA (T7-promoter understreket) og 3' primer AGAGGATGGAACCGCTGG. Målsekvensen svarer til komplementet til ildflueluciferasesekvensen mellom posisjon 50-215 i forhold til startkodonet. Guanylyltransferasemerkning ble utført som tidligere beskrevet (Zamore et al., 2000). For kartlegging av mål-RNA kutting ble 100 nM siRNA-dupleks inkubert med 5 til 10 nM mål-RNA i D. me/anogasfer-embryolysat under standard betingelser (Zamore et al., 2000) i 2 t ved 25 °C. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 8 volumer av proteinase K-buffer (200 mM Tris-HCI pH 7,5, 25 mM EDTA, 300 mM NaCI, 2 vektprosent/volum natriumdodecylsulfat). Proteinase K (E. M. Merck, løst i vann) ble satt til en endelig konsentrasjon på 0,6 mg/ml. Reaksjonene ble deretter inkubert i 15 min ved 65 °C, ekstrahert med fenol/kloroform/isoamylalkohol (25:24:1) og presipitert med 3 volumer av etanol. Prøver ble overført til 6 % sekvenseringsgeler. Lengdestandarder ble generert ved delvis RNase T1-kutting og delvis basehydrolyse av cap-merkede sens- eller antisens mål-RNA'er.
3.2 Resultater
3.2.1 Variasjon av 3' overhenget i duplekser av 21-nt siRNA'er
Som beskrevet ovenfor var 2 eller 3 uparede nukleotider på 3' enden av siRNA-duplekser mer effektive i mål-RNA nedbrytning enn de respektive rettendede dupleksene. For å utføre en mer omfattende analyse av funksjonen til de terminale nukleotidene, syntetiserte vi fem 21-nt sens-siRNA'er, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til mål-RNA'et, og åtte 21-nt antisens-siRNA'er, hver forskjøvet med ett nukleotid i forhold til målet (Figur 11 A). Ved å kombinere sens- og antisens-siRNA'er ble åtte serier av siRNA-duplekser med syntetisk overhengende ender generert som dekker et område på 7-nt 3' overheng til 4-nt 5' overheng. Interferensen av siRNA-duplekser ble målt ved anvendelse av dual luciferasetest (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). siRNA-duplekser var rettet mot ildflueluciferase-mRNA, og Renilla reniformis luciferase-mRNA ble anvendt som intern kontroll. Luminescensforholdet mellom mål- og kontrolluciferaseaktivitet ble bestemt i nærvær av siRNA-dupleks og ble normalisert til forholdet observert i fravær av dsRNA. For sammenligning er interferensforholdet av lange dsRNA'er (39 til 504 pb) vist i Figur 11B. Interferensforholdene ble bestemt ved konsentrasjoner på 5 nM for lange dsRNA'er (Figur 11 A) og ved 100 nM for siRNA-duplekser (Figur 11C-J). 100 nM konsentrasjonene av siRNA'er ble valgt, fordi fullstendig prosessering av 5 nM 504 bp dsRNA ville resultere i 120 nM totale siRNA-duplekser.
Evnen 21-nt siRNA-duplekser har til å mediere RNAi er avhengig av antallet overhengende nukleotider eller basepar dannet. Duplekser med fire til seks 3' overhengende nukleotider kunne ikke mediere RNAi (Figur 11 C-F), hvilket også var tilfelle for duplekser med to eller flere 5' overhengende nukleotider (Figur 11 G-J). Dupleksene med 2-nt 3' overheng var mest effektive til å mediere RNA-interferens, skjønt effektiviteten til inaktivering også var sekvensavhengig, og forskjeller opp til 12-fold ble observert for ulike siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (sammenligne Figur 11 D-H). Duplekser med rette ender, 1-nt 5' overheng eller 1- til 3-nt 3' overheng var enkelte ganger funksjonelle. Den lille inaktiveringseffekten observert for siRNA-dupleksen med 7-nt 3' overheng (Figur 11C) kan skyldes en antisenseffekt av det lange 3' overhenget i stedet for RNAi. Sammenligning av effektiviteten til RNAi mellom lange dsRNAer (Figur 11B) og de mest effektive 21-nt siRNA-dupleksene (Figur 11E, G, H) antyder at en enkel siRNA-dupleks ved konsentrasjon på 100 nM kan være like effektiv som 5 nM 504 bp dsRNA.
3.2.2 Lengdevariasjon av sens-siRNA'et paret til et uforandret 21-nt antisens-siRNA
For å utforske effekten av siRNA-lengde på RNAi, fremstilte vi tre serier av siRNA-duplekser, ved å kombinere tre 21-nt antisenstråder med åtte, 18- til 25-nt sens tråder. 3' overhenget til antisens-siRNAet ble bestemt til 1, 2 eller 3 nt i hver siRNA-dupleksserie, mens sens-siRNA'et ble variert på dets 3' ende (Figur 12A). Uavhengig av lengden til sens-siRNAet fant vi at duplekser med 2-nt 3' overheng av antisens-siRNA (Figur 12C) var mer aktive enn de med 1- eller 3-nt 3' overheng (Figur 12B, D). I den første serien med 1-nt 3' overheng av antisens-siRNA var duplekser med et 21- og 22-nt sens-siRNA, som henholdsvis bærer et 1- og 2-nt 3' overheng av sens-siRNA, mest aktive. Duplekser med 19- til 25-nt sens-siRNA'er var også i stand til å mediere RNA, men i en mindre grad. Likeledes, i den andre serien med 2-nt overheng av antisens-siRNA, var 21-nt siRNA-dupleksen med 2-nt 3' overheng mest aktiv, og enhver annen kombinasjon med de 18- til 25-nt sens-siRNA'ene var aktiv til en signifikant grad. I den siste serien med 3-nt antisens-siRNA 3' overheng var bare dupleksen med et 20-nt sens-siRNA og 2-nt sens 3' overhenget i stand til å redusere mål-RNA ekspresjon. Samlet antyder disse resultatene at siRNA-lengden, så vel som lengden av 3' overhenget, er viktig og at duplekser av 21-nt siRNA'er med 2-nt 3' overheng er optimale for RNAi.
3.2.3 Lengdevariasjon av siRNA-duplekser med et konstant 2-nt 3' overheng Vi undersøkte deretter effekten av samtidig forandring av lengden til begge siRNA-tråder ved å opprettholde symmetriske 2-nt 3' overheng (Figur 13A). To serier av siRNA-duplekser ble fremstilt inkludert 21-nt siRNA-dupleksen i Figur 11H som referanse. Lengden på dupleksene ble variert mellom 20 til 25 bp, ved å forlenge det baseparede segmentet på 3' enden av sens-siRNA'et (Figur 13B) eller på 3' enden av antisens-siRNAet (Figur 13C). Duplekser av 20 til 23 bp forårsaket spesifikk suppresjon av målluciferaseaktivitet, men 21-nt siRNA-dupleksen var minst 8 ganger mer effektiv enn hvilken som helst av de andre dupleksene. 24- og 25-nt siRNA-duplekser resulterte ikke i noen detekterbar interferens.
Sekvensspesifikke effekter var underordnet ettersom variasjoner på begge endene av dupleksen førte til lignende effekter.
3.2.4 2'-Deoksy- og 2'-0-metyl-modifiserte siRNA-duplekser For å vurdere viktigheten av siRNA-riboserestene for RNAi, ble duplekser med 21-nt siRNA'er og 2-nt 3' overheng med 2-deoksy- eller 2'-0-metyl-modifiserte tråder undersøkt (Figur 14). Substitusjon av 2-nt 3' overhengene med 2'-deoksynukleotider hadde ingen effekt, og til og med utbyttingen av to ekstra ribonukleotider nær overhengene i den parede regionen dannet signifikant aktive siRNA'er. Således ble 8 av 42 nt i en siRNA-dupleks byttet ut med DNA-rester uten tap av aktivitet. Fullstendig substitusjon av én eller begge siRNA-trådene med 2'-deoksyrester fjernet imidlertid RNAi, hvilket også var tilfelle for substitusjon med 2'-0-metylrester.
3.2.5 Definisjon av mål-RNA kutteseter
Mål RNA-kutteposisjoner ble tidligere bestemt for 22-nt siRNA-duplekser og for en 21-nt/22-nt dupleks. Det ble funnet at posisjonen for mål-RNA kuttingen var lokalisert i senteret av regionen bundet av siRNA-dupleksen, 11 eller 12 nt nedstrøms for det første nukleotidet som var komplementært til 21- eller 22-nt siRNA-guidesekvensen. Fem forskjellige 21 nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng (Figur 15A) ble inkubert med 5' cap-merket sens eller antisens mål-RNA i D. melanogaster-\ ysat (Tuschl et al., 1999; Zamore et al., 2000). 5' kutteproduktene ble bestemt på sekvenseringsgeler (Figur 15B). Mengden av kuttet sens mål-RNA korrelerer med effektiviteten til siRNA-duplekser bestemt i den translasjonsbaserte testen, og siRNA-dupleksene 1, 2 og 4 (Figur 15B og 11H, G, E) kutter mål-RNA raskere enn dupleksene 3 og 5 (Figur 15B og 11F, D). Summen av radioaktivitet til 5' kutteproduktet og det tilsatte mål-RNA'et var ikke konstant over tid, og 5' kutteproduktene akkumulerte ikke. Antakelig blir kutteproduktene, når de er frigjort fra siRNA-endonukleasekomplekset, raskt degradert fordi de mangler enten poly(A) halen eller 5'-cap.
Kuttesetene for både sens og antisens mål-RNA'er ble lokalisert i midten av regionen dekket av siRNA-dupleksene. Kuttesetene for hvert mål dannet med de 5 ulike dupleksene varierte med 1-nt i henhold til 1-nt forskyvningen av dupleksene langs målsekvensene. Målet ble kuttet nøyaktig 11 nt nedstrøms for målposisjonen komplementær til det 3' ytterste nukleotidet av det sekvenskomplementære guide-siRNA'et (Figur 15A, B).
For å avgjøre hvorvidt 5' eller 3' enden til guide-siRNAet bestemmer mål-RNA kutting, tenkte vi ut den eksperimentelle strategien beskrevet i Figur 16A og B. Et 21-nt antisens-siRNA, som ble holdt uforandret for denne studien, ble paret med sens-siRNA'er som var modifisert på enten deres 5' eller 3' ender. Posisjonen til sens og antisens mål-RNA kutting ble bestemt som beskrevet ovenfor. Forandringer i 3' enden av sens-siRNA'et, monitorert for 1-nt 5' overheng til 6-nt 3' overheng, påvirket verken posisjonen til sens eller antisens mål-RNA kutting (Figur 16C). Forandringer i 5' enden av sens-siRNAet affiserte ikke sens mål-RNA kuttingen (Figur 16D, øverste panel), som var forventet fordi antisens-siRNAet var uforandret. Imidlertid var antisens mål-RNA kuttingen affisert og sterkt avhengig av 5' enden til sens-siRNAet (Figur 16D, nederste panel). Antisensmålet ble bare kuttet når sens-siRNA'et var 20 eller 21 nt langt og kutteposisjonen forskjellig med 1-nt, hvilket antyder at 5' enden til det målgjenkjennende siRNA'et bestemmer mål-RNA kutting. Posisjonen lokaliseres mellom nukleotid 10 og 11 når man teller i oppstrøms retning fra målnukleotidet paret til det 5' ytterste nukleotidet av guide-siRNA'et (se også Figur 15A).
3.2.6 Sekvenseffekter og 2'-deoksysubstitusjoner i 3' overhenget Et 2-nt 3' overheng er foretrukket for siRNA-funksjon. Vi ønsket å vite om sekvensen til de overhengende nukleotidene bidrar til målgjenkjennelse eller om det bare er en egenskap som er nødvendig for rekonstitusjon av endonukleasekomplekset (RISC eller siRNP). Vi syntetiserte sens- og antisens-siRNA'er med AA, CC, GG, UU og UG 3' overheng og inkluderte 2' deoksymodifiseringene TdG og TT. Villtype-siRNAene inneholdt AA i sens 3' overhenget og UG i antisens 3' overhenget (AA/UG). Alle siRNA-dupleksene var funksjonelle i interferenstesten og reduserte målekspresjon minst 5-fold (Figur 17). De mest effektive siRNA-dupleksene som reduserte målekspresjon mer enn 10-fold var av sekvenstypen NN/UG, NN/UU, NN/TdG og NN/TT (N, hvilket som helst nukleotid). siRNA-duplekser med et antisens-siRNA 3' overheng av AA, CC eller GG var en faktor 2 til 4 mindre aktiv sammenlignet med villtypesekvensen UG eller
mutanten UU. Denne reduksjonen i RNAi-effektivitet skyldes sannsynligvis bidraget av det nest siste 3' nukleotidet til sekvensspesifikk målgjenkjennelse, ettersom det 3' terminale nukleotidet ble forandret fra G til U uten effekt.
Forandringer i sekvensen til 3' overhenget av sens-siRNAet viste ikke noen sekvensavhengige effekter, som var forventet fordi sens-siRNA'et ikke må bidra til sens mål-mRNA gjenkjennelse.
3.2.7 Sekvensspesifisitet for målgjenkjennelse
For å undersøke sekvensspesifisiteten for målgjenkjennelse, innførte vi sekvensforandringer i de parede segmentene av siRNA-duplekser og bestemte effektiviteten til inaktivering. Sekvensforandringer ble innført ved å invertere korte segmenter med 3- eller 4-nt lengde eller som punktmutasjoner (Figur 18). Sekvensforandringene i én siRNA-tråd ble kompensert i den komplementære siRNA-tråden for å unngå og bringe forstyrrelse i den baseparede siRNA-dupleksstrukturen. Sekvensen til alle 2-nt 3' overhengene var TT (T, 2'-deoksytymidin) for å redusere syntesekostnader. TT/TT referanse siRNA-dupleksen var sammenlignbar i RNAi med villtype siRNA-dupleksen AA/UG (Figur 17). Evnen til å mediere rapportør mRNA-nedbrytning ble kvantifisert ved anvendelse av den translasjonsbaserte luminescenstesten. Duplekser av siRNA'er med inverterte sekvenssegmenter viste dramatisk redusert evne for binding av ildflueluciferaserapportør (Figur 18). Sekvensforandringene lokalisert mellom 3' enden og midten av antisens-siRNAet fjernet fullstendig mål-RNA gjenkjennelse, men mutasjoner nær 5' enden av antisens-siRNAet har en liten grad av inaktivering. Transversjon av A/U baseparet lokalisert direkte ovenfor det antatte mål-RNA kuttesetet, eller ett nukleotid lenger vekk fra det antatte setet, hindret mål-RNA kutting, og indikerer derfor at enkel mutasjon i senteret av en siRNA-dupleks skjelner mellom feilmatchede mål.
3.3 Diskusjon
siRNA'er er verdifulle reagenser for inaktivering av genekspresjon, ikke bare i insektceller, men også i mammalske celler, med et stor potensial for terapeutisk anvendelse. Vi har systematisk analysert de strukturelle determinantene til siRNA-duplekser som er nødvendig for å fremme effektiv mål-RNA nedbrytning i D.
me/anogasfer-embryolysat, og tilveiebringer derfor regler for utformingen av de mest effektive siRNA-dupleksene. En perfekt siRNA-dupleks kan inaktivere genekspresjon med en effektivitet som er sammenlignbar med et 500 bp dsRNA, gitt at sammenlignbare mengder av totalt RNA blir anvendt.
3.4 siRNA-brukerveiledning
Effektivt inaktiverende siRNA-duplekser er fortrinnsvis sammensatt av 21-nt antisens-siRNA'er og bør bli valgt for å danne en 19 bp dobbeltheliks med 2-nt 3' overhengende ender. 2-deoksysubstitusjoner av 2-nt 3' overhengende ribonukleotider affiserer ikke RNAi, men bidrar til å redusere kostnadene av RNA-syntese og kan øke RNAse-resistens av siRNA-duplekser. Mer omfattende 2'-deoksy- eller 2-O-metylmodifiseringer reduserer imidlertid evnen siRNA'er har til å mediere RNAi, trolig ved å interferere med proteinassosiering for siRNAP-montering.
Målgjenkjennelse er en svært sekvensspesifikk prosess mediert av siRNA'et som er komplementært til målet. Det 3' ytterste nukleotidet til guide-siRNAet bidrar ikke til spesifisitet av målgjenkjennelse, mens det nest siste nukleotidet av 3' overhenget påvirker mål-RNA kutting, og en mismatch reduserer RNAi 2- til 4-fold. 5' enden av et guide-siRNA virker også mer avgjørende for feilmatchet mål-RNA gjenkjennelse sammenlignet med 3' enden. Nukleotider i senteret av siRNA'et, lokalisert ovenfor mål-RNA kuttesetet, er viktige spesifisitetsdeterminanter, og til og med enkle nukleotidforandringer reduserer RNAi til ikke-detekterbart nivå. Dette antyder at siRNA-duplekser kan være i stand til å skjelne mutante eller polymorfe alleler i genmålrettede eksperimenter, som kan bli en viktig egenskap for fremtidige terapeutiske fremskritt.
Sens og antisens-siRNAer, når de er assosiert med proteinkomponentene i endonukleasekomplekset eller dets "commitmenf-kompleks, ble antydet å spille forskjellige roller; den relative retningen til siRNA-dupleksen i dette komplekset definerer hvilken tråd som kan bli anvendt for målgjenkjennelse. Syntetiske siRNA-duplekser har dyadisk symmetri med hensyn til den dobbeltheliske strukturen, men ikke med hensyn til sekvens. Assosieringen av siRNA-duplekser med RNAi-proteinene i D. melanogaster-\ ysatet vil føre til dannelse av to asymmetriske komplekser. I slike hypotetiske komplekser er det kirale miljøet forskjellig for sens-og antisens-siRNA og dermed deres funksjon. Forutsigelsen gjelder opplagt ikke for palindrome siRNA-sekvenser eller RNAi-proteiner som kan assosiere som homodimerer. For å begrense sekvenseffekter, som kan affisere forholdet mellom sens- og antisensbindende siRNP'er, foreslår vi å anvende siRNA-sekvenser med identiske 3' overhengende sekvenser. Vi anbefaler å justere sekvensen til overhenget av sens-siRNA'et til den antisens 3' overhenget har, fordi sens-siRNA'et ikke har et mål i typiske geninaktiveringseksperimenter. Asymmetri i rekonstitusjon av sens- og antisenskuttende siRNP'er kan være (delvis) ansvarlig for variasjonen i RNAi-effektivitet observert for ulike 21-nt siRNA-duplekser med 2-nt 3' overheng anvendt i denne studien (Figur 14). Alternativt kan nukleotidsekvensen til målsetet og/eller tilgjengeligheten av mål-RNA strukturen være ansvarlig for variasjonen i effektivitet for disse siRNA-dupleksene.
Referanser
Bass, B. L. (2000). Double-stranded RNA as a template for gene silencing. Cell 101, 235-238.
Bosher, J. M., og Labouesse, M. (2000). RNA interference: genetic wand and genetic watchdog. Nat. Cell Biol. 2, E31-36.
Caplen, N. J., Fleenor, J., Fire, A., og Morgan, R. A. (2000). dsRNA-mediated gene silencing in cultured Drosophila cells: a tissue culture model for the analysis of RNA interference. Gene 252, 95-105.
Catalanotto, C, Azzalin, G., Macino, G., og Cogoni, C. (2000). Gene silencing in worms and fungi. Nature 404, 245.
Chanfreau, G., Buckle, M., og Jacquier, A. (2000). Recognition of a conserved dass of RNA tetraloops by Saccharomyces cerevisiae Rnase III. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 97, 3142-3147.
Clemens, M. J. (1997). PKR - a protein kinase regulated by double-stranded RNA. Int. J. Biochem. Cell Biol. 29, 945-949.
Cogoni, C, og Macino, G. (1999). Homology-dependent gene silencing in plants and fungi: a number of variations on the same theme. Curr. Opin. Microbiol. 2, 657-662.
Dalmay, T., Hamilton, A., Rudd, S., Angell, S., og Baulcombe, D. C. (2000). An RNA-dependent RNA polymerase gene in Arabidopsis is required for posttranscriptional gene silencing mediated by a transgene but not by a virus. Cell 101, 543-553.
Dernburg, A. F., Zalevsky, J., Colaiacovo, M. P., og Villeneuve, A. M. (2000). Transgene-mediated cosuppression in the C. elegans germ line. Genes & Dev. 14, 1578-1583.
Dunn, J. J. (1982). Ribonuclease III. I The enzymes, vol 15, del B, P. D. Boyer, red. (New York: Academic Press), s. 485-499.
Filippov, V., Solovyev, V., Filippova, M., og Gill, S. S. (2000). A novel type of RNase III family proteins in eukaryotes. Gene 245, 213-221.
Fire, A. (1999). RNA-triggered gene silencing. Trends Genet. 15, 358-363.
Fire, A., Xu, S., Montgomery, M. K., Kostas, S. A., Driver, S. E., og Mello, C. C.
(1998). Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature 391, 806-811.
Grishok, A., Tabara, H., og Mello, C. C. (2000). Genetic requirements for inheritance of RNAi in C. elegans. Science 287, 2494-2497.
Hamilton, A. J., og Baulcombe, D. C. (1999). A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants. Science 286, 950-952.
Hammond, S. M., Bernstein, E., Beach, D., og Hannon, G. J. (2000). An RNA-directed nuclease mediates post-transcriptional gene silencing in Drosophila cells. Nature 404, 293-296.
Jacobsen, S. E., Running, M. P., og M., M. E. (1999). Disruption of an
RNA helicase/RNase III gene in Arabidopsis causes unregulated cell division in floral meristems. Development 126, 5231-5243.
Jensen, S., Gassama, M. P., og Heidmann, T. (1999). Tårning of transposable elements by homology-dependent gene silencing. Nat. Genet. 21, 209-212.
Kehlenbach, R. H., Dickmanns, A. & Gerace, L. (1998). Nucleocytoplasmic shuttling factors including Ran and CRM1 mediate nuclear export of NFAT in vitro. J. Cell Biol. 141, 863-874.
Kennerdell, J. R., og Carthew, R. W. (1998). Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell 95, 1017-1026.
Ketting, R. F., Haverkamp, T. H., van Luenen, H. G., og Plasterk, R. H. (1999). Mut-7 of C. elegans, required for transposon silencing and RNA interference, is a homolog of Werner syndrome helicase and RNaseD. Cell 99,133-141.
Ketting, R. F., og Plasterk, R. H. (2000). A genetic link between cosuppression and RNA interference in C. elegans. Nature 404, 296-298.
Lucy, A. P., Guo, H. S., Li, W. X., og Ding, S. W. (2000). Suppression of post-transcriptional gene silencing by a plant viral protein localized in the nucleus. EMBO J. 19, 1672-1680.
Matsuda, S., Ichigotani, Y., Okuda, T., Irimura, T., Nakatsugawa, S., og Hamaguchi, M. (2000). Molecular doning and characterization of a novel human gene (HERNA) which encodes a putative RNA-helicase. Biochim. Biophys. Acta 31, 1-2.
Milligan, J. F., og Uhlenbeck, O. C. (1989). Synthesis of small RNAs using T7 RNA polymerase. Methods Enzymol. 180, 51-62.
Mourrain, P., Beclin, C, Elmayan, T., Feuerbach, F., Godon, C, Morel, J. B., Jouette, D., Lacombe, A. M., Nikic, S., Picault, N., Remoue, K., Sanial, M., Vo, T. A., og Vaucheret, H. (2000). Arabidopsis SGS2 and SGS3 genes are required for posttranscriptional gene silencing and natural virus resistance. Cell 101, 533-542.
Ngo, H., Tschudi, C, Gull, K., og Ullu, E. (1998). Double-stranded RNA induces mRNA degradation in Trypanosoma brucei. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 95, 14687-14692.
Nicholson, A. W. (1999). Function, mechanism and regulation of bacterial ribonucleases. FEMS Microbiol. Rev. 23, 371-390.
Oelgeschlager, M., Larrain, J., Geissert, D., og De Robertis, E. M. (2000). The evolutionarily conserved BMP-binding protein Twisted gastrulation promotes BMP signaling. Nature 405, 757-763.
Pan, T., og Uhlenbeck, O. C. (1992). In vitro selection of RNAs that undergo autolytic cleavage with Pb<2+>. Biochemistry 31, 3887-3895.
Pelissier, T., og Wassenegger, M. (2000). A DNA target of 30 bp is sufficient for RNA-directed methylation. RNA 6, 55-65.
Plasterk, R. H., og Ketting, R. F. (2000). The silence of the genes. Curr. Opin. Genet. Dev. 10, 562-567.
Ratcliff, F. G., MacFarlane, S. A., og Baulcombe, D. C. (1999). Gene Silencing without DNA. RNA-mediated cross-protection between viruses. Plant Cell 11, 1207-1216.
Robertson, H. D. (1990). Escherichia coli ribonuclease III. Methods Enzymol. 81, 189-202.
Robertson, H. D. (1982). Escherichia coli ribonuclease III cleavage sites. Cell 30, 669-672.
Romaniuk, E., McLaughlin, L. W., Nelson, T., og Romaniuk, P. J. (1982). The effect of acceptor oligoribonucleotide sequence on the T4 RNA ligase reaction. Eur J Biochem 125, 639-643.
Sharp, P. A. (1999). RNAi and double-strand RNA. Genes & Dev. 13, 139-141.
Sijen, T., og Kooter, J. M. (2000). Post-transcriptional gene-silencing: RNAs on the attack or on the defense? Bioessays 22, 520-531.
Smardon, A., Spoerke, J., Stacey, S., Klein, M., Mackin, N., og Maine, E. (2000). EGO-1 is related to RNA-directed RNA polymerase and functions in germ-line development and RNA interference in C. elegans. Curr. Biol. 10,169-178.
Svoboda, P., Stein, P., Hayashi, H., og Schutz, R. M. (2000). Selective reduction of dormant maternal mRNAs in mouse oocytes by RNA interference. Development 127, 4147-4156.
Tabara, H., Sarkissian, M., Kelly, W. G., Fleenor, J., Grishok, A., Timmons, L, Fire, A., og Mello, C. C. (1999). The rde-1 gene, RNA interference, and transposon silencing in C. elegans. Cell 99, 123-132.
Tuschl, T., Ng, M. M., Pieken, W., Benseler, F., og Eckstein, F. (1993). Importance of exocyclic base functional groups of central core guanosines for hammerhead ribozyme activity. Biochemistry 32, 11658-11668.
Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (1998). Selection in vitro of novel ribozymes from a partially randomized U2 and U6 snRNA library. EMBO J. 17, 2637-2650.
Tuschl, T., Zamore, P. D., Lehmann, R., Bartel, D. P., og Sharp, P. A. (1999). Targeted mRNA degradation by double-stranded RNA in vitro. Genes & Dev. 13, 3191-3197.
Ui-Tei, K., Zenno, S., Miyata, Y. & Saigo, K. (2000). Sensitive assay of RNA interference in Drosophila and Chinese hamster cultured cells using firefly luciferase gene as target. FEBS Letters 479, 79-82.
Verma, S., og Eckstein, F. (1999). Modified oligonucleotides: Synthesis and strategy for users. Annu. Rev. Biochem. 67, 99-134.
Voinnet, O., Lederer, C, og Baulcombe, D. C. (2000). A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana. Cell 103, 157-167.
Wassenegger, M. (2000). RNA-directed DNA methylation. Plant Mol. Biol. 43, 203-220.
Wianny, F., og Zernicka-Goetz, M. (2000). Specific interference with gene function by double-stranded RNA in early mouse development. Nat. Cell Bio. 2, 70-75.
Wu, H., Xu, H., Miraglia, L. J., og Crooke, S. T. (2000). Human RNase III is a 160 kDa Protein Involved in Preribosomal RNA Processing. J. Biol. Chem. 17,17.
Yang, D., Lu, H. og Erickson, J. W. (2000) Evidence that processed small dsRNAs may mediate sequence-specific mRNA degradation during RNAi in drosophilia embryos. Curr. Biol., 10, 1191-1200.
Zamore, P. D., Tuschl, T., Sharp, P. A., og Bartel, D. P. (2000). RNAi: Double-stranded RNA directs the ATP-dependent cleavage of mRNA at 21 to 23 nucleotide intervals. Cell 101, 25-33.
Zhang, K., og Nicholson, A. W. (1997). Regulation of ribonuclease III processing by double-helical sequence antideterminants. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 94, 13437-13441.

Claims (17)

1. Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl, hvor hver RNA-tråd har en lengde fra 19-23 nukleotider, hvor nevnte RNA-molekyl er i stand til RNA interferens, hvor RNA molekylet omfatter minst én modifisert nukleotidanalog, for anvendelse i medisin.
2. RNA-molekyl ifølge krav 1, hvor minst én tråd har et 3' overheng med fra 1-5 nukleotider, foretrukket fra 1-3 nukleotider.
3. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-3, hvor hver tråd har en lengde fra 20-22 nukleotider.
4. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 2-3, hvor 3' overhenget er stabilisert mot nedbrytning.
5. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-4, hvor den modifiserte nukleotidanalogen velges fra sukker- eller ryggradmodifiserte ribonukleotider.
6. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-3, hvor nukleotidanalogen er et sukkermodifisert ribonukleotid, hvor 2-OH gruppen er byttet ut med en gruppe valgt fra H, OR, R, halo, SH, SR <1> , NH2 , NHR, NR2 eller CN, hvor R er Ci -C6 alkyl, alkenyl eller alkynyl og halo er F, Cl, Br eller I.
7. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-6, hvor nukleotidanalogen er et ryggradmodifisert ribonukleotid inneholdende en fosfotioatgruppe.
8. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-7, som har en sekvens som har en likhet på minst 50 prosent, foretrukket minst 70 prosent, i forhold til et forutbestemt mRNA-målmolekyl.
9. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-8, hvor RNA-trådene er kjemisk eller enzymatisk syntetisert.
10. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-9, for administrering ved bærer-mediert avlevering eller injeksjon.
11. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-10, rettet mot et gen i et pattedyr, særlig et menneske.
12. RNA-molekyl ifølge krav 11, hvor genet er assosiert med en patologisk tilstand.
13. RNA-molekyl ifølge krav 12, hvor genet er et patogenassosiert gen, for eksempel et viralt gen, eller hvor genet er et tumorassosiert gen eller hvor genet er et gen assosiert med autoimmun sykdom.
14. RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-13, for anvendelse i human medisin.
15. Farmasøytisk preparat som inneholder, som aktivt middel, minst ett dobbelttrådet RNA-molekyl ifølge ethvert av kravene 1-14 og en farmasøytisk bærer.
16. Preparat ifølge krav 15 for diagnostiske anvendelser.
17. Preparat ifølge krav 15 for terapeutiske anvendelser.
NO20130246A 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin NO335426B1 (no)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP00126325 2000-12-01
US27966101P 2001-03-30 2001-03-30
PCT/EP2001/013968 WO2002044321A2 (en) 2000-12-01 2001-11-29 Rna interference mediating small rna molecules

Publications (2)

Publication Number Publication Date
NO20130246L true NO20130246L (no) 2003-07-21
NO335426B1 NO335426B1 (no) 2014-12-15

Family

ID=40529293

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032464A NO333713B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning
NO20130246A NO335426B1 (no) 2000-12-01 2013-02-14 Isolert dobbelttrådet RNA-molekyl for anvendelse i medisin

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20032464A NO333713B1 (no) 2000-12-01 2003-05-30 Isolert, dobbelttradet RNA-molekyl og dets anvendelse, fremgangsmate for dets fremstilling, in vitro fremgangsmatefor mediering av malspesifikke RNA interferenser og densanvendelse, samt farmasoytisk sammensetning

Country Status (27)

Country Link
US (25) US20040259247A1 (no)
EP (3) EP1873259B1 (no)
JP (5) JP4095895B2 (no)
KR (2) KR100872437B1 (no)
CN (1) CN100523215C (no)
AT (1) ATE373724T2 (no)
AU (3) AU2002235744B8 (no)
BR (1) BRPI0115814B8 (no)
CA (1) CA2429814C (no)
CY (1) CY1119062T1 (no)
CZ (2) CZ308053B6 (no)
DE (1) DE60130583T3 (no)
DK (2) DK2813582T3 (no)
ES (2) ES2215494T5 (no)
HU (1) HU230458B1 (no)
IL (3) IL155991A0 (no)
LT (1) LTPA2021005I1 (no)
MX (1) MXPA03004836A (no)
NO (2) NO333713B1 (no)
NZ (1) NZ525888A (no)
PL (1) PL218876B1 (no)
PT (1) PT1407044E (no)
RU (2) RU2322500C2 (no)
SI (1) SI1407044T2 (no)
TR (1) TR200401292T3 (no)
WO (1) WO2002044321A2 (no)
ZA (1) ZA200303929B (no)

Families Citing this family (1262)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1993023569A1 (en) * 1992-05-11 1993-11-25 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method and reagent for inhibiting viral replication
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US5639647A (en) * 1994-03-29 1997-06-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. 2'-deoxy-2'alkylnucleotide containing nucleic acid
US5898031A (en) 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US7812149B2 (en) 1996-06-06 2010-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2′-Fluoro substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US9096636B2 (en) 1996-06-06 2015-08-04 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds and their use in gene modulation
US20040219569A1 (en) * 1999-07-06 2004-11-04 Fruma Yehiely Gene identification method
WO2006094406A1 (en) * 2005-03-11 2006-09-14 Sarissa Inc. Antisense oligonucleotides targeted to the coding region of thymidylate synthase and uses thereof
US6506559B1 (en) 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
AUPP249298A0 (en) 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
BRPI9908967B1 (pt) 1998-03-20 2017-05-30 Benitec Australia Ltd processos para reprimir, retardar ou de outro modo reduzir a expressão de um gene alvo em uma célula de planta
WO1999054459A2 (en) * 1998-04-20 1999-10-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
WO2000044914A1 (en) 1999-01-28 2000-08-03 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
US7601494B2 (en) 1999-03-17 2009-10-13 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of screening candidate compounds for susceptibility to biliary excretion
PT1176195E (pt) 1999-04-09 2013-07-18 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para controlar a actividade de uma molécula funcional sob o ponto de vista imunológico
US6656698B1 (en) * 1999-06-30 2003-12-02 Millennium Pharmaceuticals, Inc. 12832, a novel human kinase-like molecule and uses thereof
US6423885B1 (en) 1999-08-13 2002-07-23 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organization (Csiro) Methods for obtaining modified phenotypes in plant cells
US8128922B2 (en) 1999-10-20 2012-03-06 Johns Hopkins University Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
DE10160151A1 (de) * 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US7179796B2 (en) 2000-01-18 2007-02-20 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of PTP1B expression
US20050032733A1 (en) * 2001-05-18 2005-02-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SiNA)
US8273866B2 (en) * 2002-02-20 2012-09-25 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (SINA)
US20080039414A1 (en) * 2002-02-20 2008-02-14 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20070026394A1 (en) * 2000-02-11 2007-02-01 Lawrence Blatt Modulation of gene expression associated with inflammation proliferation and neurite outgrowth using nucleic acid based technologies
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
US20030084471A1 (en) * 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
WO2001068836A2 (en) 2000-03-16 2001-09-20 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
US8202846B2 (en) 2000-03-16 2012-06-19 Cold Spring Harbor Laboratory Methods and compositions for RNA interference
BRPI0117338B1 (pt) * 2000-03-30 2016-06-21 Massachusetts Inst Technology método para produzir células animais nocauteadas in vitro e método para produzir uma célula nocauteada
ATE450621T2 (de) * 2000-03-30 2009-12-15 Whitehead Biomedical Inst Mediatoren von rns-interferenz, die rns- sequenzspezifisch sind
US20080242627A1 (en) * 2000-08-02 2008-10-02 University Of Southern California Novel rna interference methods using dna-rna duplex constructs
US7662791B2 (en) * 2000-08-02 2010-02-16 University Of Southern California Gene silencing using mRNA-cDNA hybrids
EP1363938B1 (en) * 2000-08-03 2013-12-11 Johns Hopkins University Molecular vaccine linking an endoplasmic reticulum chaperone polypeptide to an antigen
US20030190635A1 (en) * 2002-02-20 2003-10-09 Mcswiggen James A. RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering RNA
US20080032942A1 (en) 2000-08-30 2008-02-07 Mcswiggen James RNA interference mediated treatment of Alzheimer's disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US7691821B2 (en) 2001-09-19 2010-04-06 University Of South Florida Inhibition of SHIP to enhance stem cell harvest and transplantation
US20020165192A1 (en) * 2000-09-19 2002-11-07 Kerr William G. Control of NK cell function and survival by modulation of ship activity
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
KR100872437B1 (ko) * 2000-12-01 2008-12-05 막스-플랑크-게젤샤프트 츄어 푀르더룽 데어 비쎈샤프텐 에.파우. Ｒｎａ 간섭을 매개하는 작은 ｒｎａ 분자
US8546143B2 (en) 2001-01-09 2013-10-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
US7767802B2 (en) 2001-01-09 2010-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
CA2369944A1 (en) 2001-01-31 2002-07-31 Nucleonics Inc. Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
US20050079610A1 (en) * 2001-05-18 2005-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050282188A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124569A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050153914A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MDR P-glycoprotein gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050222066A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050119212A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-02 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of FAS and FASL gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050014172A1 (en) 2002-02-20 2005-01-20 Ivan Richards RNA interference mediated inhibition of muscarinic cholinergic receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060142225A1 (en) * 2001-05-18 2006-06-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin dependent kinase-2 (CDK2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050148530A1 (en) 2002-02-20 2005-07-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20060148743A1 (en) * 2001-05-18 2006-07-06 Vasant Jadhav RNA interference mediated inhibition of histone deacetylase (HDAC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050256068A1 (en) 2001-05-18 2005-11-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of stearoyl-CoA desaturase (SCD) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090299045A1 (en) * 2001-05-18 2009-12-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition Of Interleukin and Interleukin Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US7517864B2 (en) 2001-05-18 2009-04-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176025A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of B-cell CLL/Lymphoma-2 (BCL-2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159379A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc RNA interference mediated inhibition of gastric inhibitory polypeptide (GIP) and gastric inhibitory polypeptide receptor (GIPR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176664A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cholinergic muscarinic receptor (CHRM3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2005014811A2 (en) * 2003-08-08 2005-02-17 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF XIAP GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050209180A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
CA2526831C (en) * 2001-05-18 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (sina)
US20050164967A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9994853B2 (en) 2001-05-18 2018-06-12 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
US20050159382A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196781A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of STAT3 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233997A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003070197A2 (en) * 2002-02-20 2003-08-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TGF-BETA AND TGF-BETA RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050164224A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159381A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of chromosome translocation gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030175950A1 (en) * 2001-05-29 2003-09-18 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of HIV gene expression using short interfering RNA
US20050239731A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-27 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of MAP kinase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040198682A1 (en) * 2001-11-30 2004-10-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070093437A1 (en) * 2001-05-18 2007-04-26 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of xiap gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
US20050191618A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176663A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sima Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase type IVA (PRL3) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050267058A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (sINA)
US20030124513A1 (en) * 2001-05-29 2003-07-03 Mcswiggen James Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV
US20050159380A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of angiopoietin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050164968A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of ADAM33 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050143333A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20050176024A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of epidermal growth factor receptor (EGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050137155A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of Parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233344A1 (en) * 2001-05-18 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet derived growth factor (PDGF) and platelet derived growth factor receptor (PDGFR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050158735A1 (en) * 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050187174A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-25 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050048529A1 (en) * 2002-02-20 2005-03-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of intercellular adhesion molecule (ICAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040219671A1 (en) * 2002-02-20 2004-11-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of parkinson disease using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050124566A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of myostatin gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050288242A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of RAS gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050261219A1 (en) * 2001-05-18 2005-11-24 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7109165B2 (en) * 2001-05-18 2006-09-19 Sirna Therapeutics, Inc. Conjugates and compositions for cellular delivery
US20050054596A1 (en) * 2001-11-30 2005-03-10 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196767A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acis (siNA)
US20050136436A1 (en) * 2001-05-18 2005-06-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050159378A1 (en) 2001-05-18 2005-07-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20080161256A1 (en) * 2001-05-18 2008-07-03 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050176666A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-11 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GPRA and AAA1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050196765A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint Kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050203040A1 (en) * 2001-05-18 2005-09-15 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070270579A1 (en) * 2001-05-18 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050287128A1 (en) * 2001-05-18 2005-12-29 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of TGF-beta and TGF-beta receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050182007A1 (en) * 2001-05-18 2005-08-18 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
US20060211642A1 (en) * 2001-05-18 2006-09-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA inteference mediated inhibition of hepatitis C virus (HVC) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070042983A1 (en) * 2001-05-18 2007-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
US20080188430A1 (en) * 2001-05-18 2008-08-07 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050233996A1 (en) * 2002-02-20 2005-10-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hairless (HR) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8008472B2 (en) 2001-05-29 2011-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of human immunodeficiency virus (HIV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2002315393A1 (en) 2001-06-21 2003-01-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
US20050019915A1 (en) * 2001-06-21 2005-01-27 Bennett C. Frank Antisense modulation of superoxide dismutase 1, soluble expression
DE10133858A1 (de) * 2001-07-12 2003-02-06 Aventis Pharma Gmbh Synthetische doppelsträngige Oligonucleotide zur gezielten Hemmung der Genexpression
ES2609014T3 (es) 2001-07-12 2017-04-18 University Of Massachusetts Producción in vivo de ARN de interferencia pequeños que median el silenciamiento génico
US10590418B2 (en) * 2001-07-23 2020-03-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and compositions for RNAi mediated inhibition of gene expression in mammals
ES2386775T3 (es) * 2001-07-23 2012-08-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Procedimientos y composiciones para la inhibición mediada por ARNi de la expresión génica en mamíferos
US20090247606A1 (en) * 2001-08-28 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Adenosine A1 Receptor (ADORA1) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US20030198627A1 (en) * 2001-09-01 2003-10-23 Gert-Jan Arts siRNA knockout assay method and constructs
US7745418B2 (en) 2001-10-12 2010-06-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting viral replication
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
DE10230996A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Behandlung eines Pankreaskarzinoms
US20040248835A1 (en) * 2001-10-26 2004-12-09 Anja Krebs Use of a double-stranded ribonucleic acid for treating an infection with a positivestrand rna-virus
WO2003035870A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung eines pankreaskarzinoms
WO2003035083A1 (de) * 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Medikament zur behandlung einer fibrotischen erkrankung durch rna interferenz
AU2002368202B2 (en) * 2001-11-02 2008-06-05 Insert Therapeutics, Inc Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
US20030138407A1 (en) * 2001-11-02 2003-07-24 Patrick Lu Therapeutic methods for nucleic acid delivery vehicles
US20040063654A1 (en) * 2001-11-02 2004-04-01 Davis Mark E. Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference
ES2401326T3 (es) * 2001-11-21 2013-04-18 Astellas Pharma Inc. Procedimiento para inhibir la expresión génica
US20040138163A1 (en) * 2002-05-29 2004-07-15 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular edothelial growth factor and vascular edothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20070203333A1 (en) * 2001-11-30 2007-08-30 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20050075304A1 (en) * 2001-11-30 2005-04-07 Mcswiggen James RNA interference mediated inhibition of vascular endothelial growth factor and vascular endothelial growth factor receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7294504B1 (en) 2001-12-27 2007-11-13 Allele Biotechnology & Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for DNA mediated gene silencing
EP1465995B1 (en) * 2002-01-17 2008-07-30 The University of British Columbia Bispecific antisense olignucleotides that inhibit igfbp-2 and igfbp-5 and methods of using same
DE10202419A1 (de) 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
GB0201477D0 (en) * 2002-01-23 2002-03-13 Novartis Forschungsstiftung Methods of obtaining isoform specific expression in mammalian cells
WO2003064621A2 (en) * 2002-02-01 2003-08-07 Ambion, Inc. HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES
US20060009409A1 (en) 2002-02-01 2006-01-12 Woolf Tod M Double-stranded oligonucleotides
EP3415625A1 (en) * 2002-02-01 2018-12-19 Life Technologies Corporation Double-stranded oligonucleotides
US20050096289A1 (en) * 2002-02-07 2005-05-05 Hans Prydz Methods and compositions for modulating tissue factor
EP1483400A4 (en) * 2002-02-12 2007-07-11 Quark Biotech Inc USE OF THE AXL RECEPTOR FOR THE DIAGNOSIS AND TREATMENT OF A KIDNEY DISEASE
WO2003068961A2 (en) * 2002-02-13 2003-08-21 Axordia Limited Method to modify differentiation of pluripotential stem cells
WO2003068797A1 (en) 2002-02-14 2003-08-21 City Of Hope Methods for producing interfering rna molecules in mammalian cells and therapeutic uses for such molecules
US20090253774A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR (PDGF) AND PLATELET DERIVED GROWTH FACTOR RECEPTOR (PDGFR) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
EP1495041A4 (en) * 2002-02-20 2006-02-01 Sirna Therapeutics Inc RNA interferon-mediated inhibition of gene expression of G72 and D-amino acid oxidase (DAAO) using short-term interfering nucleic acid (siNA)
US8258288B2 (en) 2002-02-20 2012-09-04 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of respiratory syncytial virus (RSV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9657294B2 (en) 2002-02-20 2017-05-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7928220B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of stromal cell-derived factor-1 (SDF-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7683165B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
WO2003106476A1 (en) * 2002-02-20 2003-12-24 Sirna Therapeutics, Inc Nucleic acid mediated inhibition of enterococcus infection and cytolysin toxin activity
US7691999B2 (en) 2002-02-20 2010-04-06 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of NOGO and NOGO receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090093439A1 (en) * 2002-02-20 2009-04-09 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF CHROMOSOME TRANSLOCATION GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7678897B2 (en) 2002-02-20 2010-03-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of platelet-derived endothelial cell growth factor (ECGF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8067575B2 (en) 2002-02-20 2011-11-29 Merck, Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of cyclin D1 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7795422B2 (en) 2002-02-20 2010-09-14 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of hypoxia inducible factor 1 (HIF1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8232383B2 (en) * 2002-02-20 2012-07-31 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US7910724B2 (en) 2002-02-20 2011-03-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Fos gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090233983A1 (en) * 2002-02-20 2009-09-17 Sirna Therapeutics Inc. RNA Interference Mediated Inhibition of Protein Tyrosine Phosphatase-1B (PTP-1B) Gene Expression Using Short Interfering RNA
US7897752B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of telomerase gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7935812B2 (en) 2002-02-20 2011-05-03 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of hepatitis C virus (HCV) expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7897757B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of protein tyrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7683166B2 (en) 2002-02-20 2010-03-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of interleukin and interleukin receptor gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667030B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of matrix metalloproteinase 13 (MMP13) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7662952B2 (en) 2002-02-20 2010-02-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of GRB2 associated binding protein (GAB2) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7928218B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of polycomb group protein EZH2 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
JP2005517433A (ja) * 2002-02-20 2005-06-16 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 短干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いるＴＮＦおよびＴＮＦレセプタースーパーファミリー遺伝子発現のＲＮＡ干渉媒介性阻害
US7700760B2 (en) 2002-02-20 2010-04-20 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of vascular cell adhesion molecule (VCAM) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US8013143B2 (en) 2002-02-20 2011-09-06 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of CXCR4 gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090306182A1 (en) * 2002-02-20 2009-12-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MAP KINASE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7897753B2 (en) 2002-02-20 2011-03-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of XIAP gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003207708A1 (en) 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of map kinase genes
GB2397062B (en) * 2002-02-20 2005-06-15 Sirna Therapeutics Inc RNA interference mediated inhibition of hepatitis c virus (HCV) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US7667029B2 (en) 2002-02-20 2010-02-23 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of checkpoint kinase-1 (CHK-1) gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US20090247613A1 (en) * 2002-02-20 2009-10-01 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF B-CELL CLL/LYMPHOMA-2 (BCL2) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US7893248B2 (en) 2002-02-20 2011-02-22 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of Myc and/or Myb gene expression using short interfering nucleic acid (siNA)
US9181551B2 (en) 2002-02-20 2015-11-10 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20090253773A1 (en) 2002-02-20 2009-10-08 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF TNF AND TNF RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
AU2003219818A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Ribozyme Pharmaceuticals, Incorporated RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EPIDERMAL GROWTH FACTOR RECEPTOR GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20100240730A1 (en) * 2002-02-20 2010-09-23 Merck Sharp And Dohme Corp. RNA Interference Mediated Inhibition of Gene Expression Using Chemically Modified Short Interfering Nucleic Acid (siNA)
US20050096284A1 (en) * 2002-02-20 2005-05-05 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated treatment of polyglutamine (polyQ) repeat expansion diseases using short interfering nucleic acid (siNA)
AU2003213005A1 (en) * 2002-02-20 2003-09-09 Sirna Therapeutics, Inc RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROTEIN KINASE C ALPHA (PKC-ALPHA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090137509A1 (en) * 2002-02-20 2009-05-28 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF PROLIFERATION CELL NUCLEAR ANTIGEN (PCNA) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090099117A1 (en) 2002-02-20 2009-04-16 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF MYOSTATIN GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20090192105A1 (en) 2002-02-20 2009-07-30 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF INTERCELLULAR ADHESION MOLECULE (ICAM) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCELIC ACID (siNA)
US7928219B2 (en) 2002-02-20 2011-04-19 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA interference mediated inhibition of placental growth factor gene expression using short interfering nucleic acid (SINA)
JP2005517450A (ja) * 2002-02-20 2005-06-16 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 短干渉核酸（ｓｉＮＡ）を用いるＲＮＡ干渉媒介性標的発見および標的評価
US20060111312A1 (en) * 2002-02-22 2006-05-25 The John Hopkins University Antigene locks and therapeutic uses thereof
US7332276B2 (en) * 2002-03-01 2008-02-19 Celltech R&D, Inc. Methods to increase or decrease bone density
US20040005593A1 (en) * 2002-03-06 2004-01-08 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of siRNA molecules
US7274703B2 (en) * 2002-03-11 2007-09-25 3Com Corporation Stackable network units with resiliency facility
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US7357928B2 (en) 2002-04-08 2008-04-15 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Method for the diagnosis and prognosis of malignant diseases
JP5578388B2 (ja) 2002-04-18 2014-08-27 オプコ ファーマシューティカルズ、エルエルシー 中枢神経システム及び／若しくは眼の細胞及び組織中の遺伝子の特異的阻害のための手段と方法
EP1504126B1 (en) 2002-05-03 2014-02-26 Duke University A method of regulating gene expression
AU2003239897A1 (en) 2002-05-23 2003-12-12 Ceptyr, Inc. Modulation of ptp1b signal transduction by rna interference
US7199107B2 (en) * 2002-05-23 2007-04-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense modulation of kinesin-like 1 expression
WO2003099298A1 (en) * 2002-05-24 2003-12-04 Max-Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
AU2003276666A1 (en) * 2002-06-12 2003-12-31 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20100075423A1 (en) * 2002-06-12 2010-03-25 Life Technologies Corporation Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US20040248094A1 (en) * 2002-06-12 2004-12-09 Ford Lance P. Methods and compositions relating to labeled RNA molecules that reduce gene expression
EP1513538A4 (en) * 2002-06-14 2007-08-22 Mirus Bio Corp Novel methods for introducing polynucleotides into cells
WO2004001044A1 (en) * 2002-06-21 2003-12-31 Sinogenomax Company Ltd. Randomised dna libraries and double-stranded rna libraries, use and method of production thereof
US7704965B2 (en) * 2002-06-26 2010-04-27 The Penn State Research Foundation Methods and materials for treating human papillomavirus infections
EP1519714B1 (en) 2002-06-28 2010-10-20 Protiva Biotherapeutics Inc. Method and apparatus for producing liposomes
US8101348B2 (en) 2002-07-10 2012-01-24 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. RNA-interference by single-stranded RNA molecules
US7148342B2 (en) 2002-07-24 2006-12-12 The Trustees Of The University Of Pennyslvania Compositions and methods for sirna inhibition of angiogenesis
AU2015264957B2 (en) * 2002-08-05 2017-10-26 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering rna molecules
HUE039866T2 (hu) * 2002-08-05 2019-02-28 Silence Therapeutics Gmbh Az interferáló RNS molekulák további új formái
DK1389637T3 (da) 2002-08-05 2012-09-03 Silence Therapeutics Ag Interfererende RNA-molekyler med stumpe ender
US20050042646A1 (en) 2002-08-05 2005-02-24 Davidson Beverly L. RNA interference suppresion of neurodegenerative diseases and methods of use thereof
US20080274989A1 (en) 2002-08-05 2008-11-06 University Of Iowa Research Foundation Rna Interference Suppression of Neurodegenerative Diseases and Methods of Use Thereof
AU2012216354B2 (en) * 2002-08-05 2016-01-14 Silence Therapeutics Gmbh Further novel forms of interfering RNA molecules
US20040241854A1 (en) 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
ES2280826T5 (es) * 2002-08-05 2017-08-03 Silence Therapeutics Gmbh Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia
JP4483581B2 (ja) * 2002-08-06 2010-06-16 東レ株式会社 腎疾患治療又は予防剤及び腎疾患の診断方法
AU2003258100A1 (en) * 2002-08-06 2004-02-23 Intradigm Corporation Methods of down regulating target gene expression in vivo by introduction of interfering rna
WO2004014933A1 (en) * 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
US20040029275A1 (en) * 2002-08-10 2004-02-12 David Brown Methods and compositions for reducing target gene expression using cocktails of siRNAs or constructs expressing siRNAs
WO2004019973A1 (en) * 2002-08-14 2004-03-11 Atugen Ag Use of protein kinase n beta
KR101117673B1 (ko) 2002-08-21 2012-03-07 더 유니버시티 오브 브리티쉬 콜롬비아 암-관련 단백질을 표적으로 하는 알엔에이아이 프로브
US7923547B2 (en) * 2002-09-05 2011-04-12 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid (siNA)
US20060287269A1 (en) * 2002-09-09 2006-12-21 The Regents Of The University Of California Short interfering nucleic acid hybrids and methods thereof
US20080260744A1 (en) 2002-09-09 2008-10-23 Omeros Corporation G protein coupled receptors and uses thereof
US20040138119A1 (en) * 2002-09-18 2004-07-15 Ingo Tamm Use of hepatitis B X-interacting protein (HBXIP) in modulation of apoptosis
US20060257380A1 (en) * 2002-09-19 2006-11-16 Inst.Nat. De La Sante Et De La Recherche MED Use of sirnas for gene silencing in antigen presenting cells
EP1556402B1 (en) * 2002-09-25 2011-06-22 University of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
JP2006512906A (ja) * 2002-09-28 2006-04-20 マサチューセッツ インスティチュート オブ テクノロジー インフルエンザ治療剤
US20060160759A1 (en) * 2002-09-28 2006-07-20 Jianzhu Chen Influenza therapeutic
US20040242518A1 (en) * 2002-09-28 2004-12-02 Massachusetts Institute Of Technology Influenza therapeutic
US20060240425A1 (en) * 2002-09-30 2006-10-26 Oncotherapy Science, Inc Genes and polypeptides relating to myeloid leukemia
US7422853B1 (en) * 2002-10-04 2008-09-09 Myriad Genetics, Inc. RNA interference using a universal target
US7255860B2 (en) 2002-10-08 2007-08-14 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating post-surgical pain by administering an anti-nerve growth factor antagonist antibody
EP1556083B1 (en) 2002-10-08 2011-02-02 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating post-surgical pain by admisnistering an antibody against nerve growth factor and compositions containing the same
EP1562970A4 (en) * 2002-11-01 2006-04-12 Univ Pennsylvania COMPOSITIONS AND METHODS FOR SIRNAIL INHIBITION OF HIF-1 ALPHA
US7892793B2 (en) 2002-11-04 2011-02-22 University Of Massachusetts Allele-specific RNA interference
AU2003291682A1 (en) * 2002-11-05 2004-06-03 Isis Pharmaceuticals, Inc. 2'-methoxy substituted oligomeric compounds and compositions for use in gene modulations
US9150606B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2'-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004043979A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
US9150605B2 (en) 2002-11-05 2015-10-06 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising alternating 2′-modified nucleosides for use in gene modulation
WO2004041889A2 (en) 2002-11-05 2004-05-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Polycyclic sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
DE10322662A1 (de) * 2002-11-06 2004-10-07 Grünenthal GmbH Wirksame und stabile DNA-Enzyme
WO2006006948A2 (en) * 2002-11-14 2006-01-19 Dharmacon, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR SELECTING siRNA OF IMPROVED FUNCTIONALITY
US7691998B2 (en) * 2002-11-14 2010-04-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nucleoporin 62kDa (Nup62)
US20090005548A1 (en) * 2002-11-14 2009-01-01 Dharmacon, Inc. siRNA targeting nuclear receptor interacting protein 1 (NRIP1)
US9839649B2 (en) 2002-11-14 2017-12-12 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US7612196B2 (en) * 2002-11-14 2009-11-03 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cyclin-dependent kinase inhibitor 1B (p27, Kip1) (CDKN1B)
US7635770B2 (en) * 2002-11-14 2009-12-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting protein kinase N-3 (PKN-3)
US8163896B1 (en) 2002-11-14 2012-04-24 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US7951935B2 (en) 2002-11-14 2011-05-31 Dharmacon, Inc. siRNA targeting v-myc myelocytomatosis viral oncogene homolog (MYC)
JP2006507841A (ja) * 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
US7250496B2 (en) 2002-11-14 2007-07-31 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory genes and uses thereof
US7655785B1 (en) 2002-11-14 2010-02-02 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
US7619081B2 (en) 2002-11-14 2009-11-17 Dharmacon, Inc. siRNA targeting coatomer protein complex, subunit beta 2 (COPB2)
US7781575B2 (en) 2002-11-14 2010-08-24 Dharmacon, Inc. siRNA targeting tumor protein 53 (p53)
US10011836B2 (en) 2002-11-14 2018-07-03 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US7592442B2 (en) * 2002-11-14 2009-09-22 Dharmacon, Inc. siRNA targeting ribonucleotide reductase M2 polypeptide (RRM2 or RNR-R2)
US9228186B2 (en) 2002-11-14 2016-01-05 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
US9771586B2 (en) 2002-11-14 2017-09-26 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting ZNF205
US10920226B2 (en) * 2002-11-14 2021-02-16 Thermo Fisher Scientific Inc. siRNA targeting LDHA
US9719094B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting SEC61G
US20090227780A1 (en) * 2002-11-14 2009-09-10 Dharmacon, Inc. siRNA targeting connexin 43
US20100113307A1 (en) * 2002-11-14 2010-05-06 Dharmacon, Inc. siRNA targeting vascular endothelial growth factor (VEGF)
US8198427B1 (en) 2002-11-14 2012-06-12 Dharmacon, Inc. SiRNA targeting catenin, beta-1 (CTNNB1)
US7977471B2 (en) * 2002-11-14 2011-07-12 Dharmacon, Inc. siRNA targeting TNFα
US9719092B2 (en) 2002-11-14 2017-08-01 Thermo Fisher Scientific Inc. RNAi targeting CNTD2
US20080268457A1 (en) * 2002-11-14 2008-10-30 Dharmacon, Inc. siRNA targeting forkhead box P3 (FOXP3)
US9879266B2 (en) 2002-11-14 2018-01-30 Thermo Fisher Scientific Inc. Methods and compositions for selecting siRNA of improved functionality
EP1613724A4 (en) 2002-11-18 2010-09-01 Us Gov Health & Human Serv CELL LINES AND NUCLEAR ACIDIC ACIDS IN CONNECTION WITH INFECTION DISEASES
US7064337B2 (en) 2002-11-19 2006-06-20 The Regents Of The University Of California Radiation detection system for portable gamma-ray spectroscopy
DE10254214A1 (de) * 2002-11-20 2004-06-09 Beiersdorf Ag Oligoribonukleotide zur Behandlung von degenerativen Hauterscheinungen durch RNA-Interferenz
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
JP4526228B2 (ja) * 2002-11-22 2010-08-18 隆 森田 ＲＮＡｉによる新規治療法および治療剤
CN101914532A (zh) * 2002-11-22 2010-12-15 生物智囊团株式会社 Rna干扰的目标碱基序列的搜索方法
US7696334B1 (en) 2002-12-05 2010-04-13 Rosetta Genomics, Ltd. Bioinformatically detectable human herpesvirus 5 regulatory gene
ATE465255T1 (de) * 2002-11-26 2010-05-15 Univ Massachusetts Verabreichung von sirnas
US7605249B2 (en) 2002-11-26 2009-10-20 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US20130130231A1 (en) 2002-11-26 2013-05-23 Isaac Bentwich Bioinformatically detectable group of novel viral regulatory genes and uses thereof
US7790867B2 (en) 2002-12-05 2010-09-07 Rosetta Genomics Inc. Vaccinia virus-related nucleic acids and microRNA
US7829694B2 (en) 2002-11-26 2010-11-09 Medtronic, Inc. Treatment of neurodegenerative disease through intracranial delivery of siRNA
US7618948B2 (en) * 2002-11-26 2009-11-17 Medtronic, Inc. Devices, systems and methods for improving and/or cognitive function through brain delivery of siRNA
CN1301263C (zh) 2002-12-18 2007-02-21 北京昭衍新药研究中心 一组抗hiv感染及防治艾滋病的核苷酸序列及其应用
US7569364B2 (en) 2002-12-24 2009-08-04 Pfizer Inc. Anti-NGF antibodies and methods using same
US9498530B2 (en) 2002-12-24 2016-11-22 Rinat Neuroscience Corp. Methods for treating osteoarthritis pain by administering a nerve growth factor antagonist and compositions containing the same
EP2270048B1 (en) 2002-12-24 2015-11-11 Rinat Neuroscience Corp. Anti-NGF antibodies and methods using same
CA2512337A1 (en) * 2003-01-03 2004-07-29 Gencia Corporation Sirna mediated post-transcriptional gene silencing of genes involved in alopecia
ATE477337T1 (de) * 2003-01-16 2010-08-15 Univ Pennsylvania Zusammensetzungen und verfahren zur sirna-hemmung von icam-1
US7629323B2 (en) * 2003-01-21 2009-12-08 Northwestern University Manipulation of neuronal ion channels
US20040147027A1 (en) * 2003-01-28 2004-07-29 Troy Carol M. Complex for facilitating delivery of dsRNA into a cell and uses thereof
US20060178297A1 (en) * 2003-01-28 2006-08-10 Troy Carol M Systems and methods for silencing expression of a gene in a cell and uses thereof
US7994149B2 (en) 2003-02-03 2011-08-09 Medtronic, Inc. Method for treatment of Huntington's disease through intracranial delivery of sirna
US7732591B2 (en) 2003-11-25 2010-06-08 Medtronic, Inc. Compositions, devices and methods for treatment of huntington's disease through intracranial delivery of sirna
CA2514912A1 (en) * 2003-02-05 2004-08-26 University Of Massachusetts Rnai targeting of viruses
FR2850971B1 (fr) * 2003-02-10 2006-08-11 Aventis Pharma Sa Oligonucleotide antisens inhibant l'expression de la proteine ob-rgrp et procede de detection de composes modifiant l'interaction entre la famille de la proteine ob-rgrp et le recepteur de la leptine
US20070104688A1 (en) 2003-02-13 2007-05-10 City Of Hope Small interfering RNA mediated transcriptional gene silencing in mammalian cells
US20040162235A1 (en) * 2003-02-18 2004-08-19 Trubetskoy Vladimir S. Delivery of siRNA to cells using polyampholytes
KR20050111598A (ko) 2003-02-19 2005-11-25 리나트 뉴로사이언스 코퍼레이션 신경 성장 인자 길항제 및 ｎｓａｉｄ를 투여함으로써통증을 치료하는 방법 및 그것을 함유하는 조성물
JP2006523103A (ja) * 2003-02-21 2006-10-12 ザ ペン ステイト リサーチ ファウンデーション Ｒｎａ干渉組成物および方法
WO2004076664A2 (en) * 2003-02-21 2004-09-10 University Of South Florida Vectors for regulating gene expression
EP1597351B1 (en) * 2003-02-27 2012-04-18 Alnylam Pharmaceuticals Inc. METHODS AND CONSTRUCTS FOR EVALUATION OF RNAi TARGETS AND EFFECTOR MOLECULES
KR20050103305A (ko) * 2003-02-27 2005-10-28 내셔날 인스티튜트 오브 어드밴스드 인더스트리얼 사이언스 앤드 테크놀로지 포유 동물 세포에 있어서의 ｄｓＲＮＡ에 의한 ＣｐＧ서열로의 메틸화 유도
WO2004078940A2 (en) * 2003-03-05 2004-09-16 Senesco Technologies, Inc. USE OF ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDES OR siRNA TO SUPPRESS EXPRESSION OF eIF-5A1
EP1604022A2 (en) * 2003-03-06 2005-12-14 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-rna hybrids
WO2004080406A2 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Alnylam Pharmaceuticals Therapeutic compositions
EP1606305A4 (en) * 2003-03-12 2009-06-24 Vasgene Therapeutics Inc NUCLEIC ACID COMPOUNDS FOR THE INHIBITION OF ANGIOGENESIS AND TUMOR GROWTH
US8653252B2 (en) 2003-03-21 2014-02-18 Santaris Pharma A/S Short interfering RNA (siRNA) analogues
WO2004090105A2 (en) * 2003-04-02 2004-10-21 Dharmacon, Inc. Modified polynucleotides for use in rna interference
ATE536408T1 (de) * 2003-04-02 2011-12-15 Dharmacon Inc Modifizierte polynukleotide zur verwendung bei rna-interferenz
US20040198640A1 (en) * 2003-04-02 2004-10-07 Dharmacon, Inc. Stabilized polynucleotides for use in RNA interference
CA2521464C (en) 2003-04-09 2013-02-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Irna conjugates
WO2004094345A2 (en) 2003-04-17 2004-11-04 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Protected monomers
JP4789208B2 (ja) 2003-04-09 2011-10-12 バイオデリバリー サイエンシーズ インターナショナル インコーポレイティッド タンパク質発現に向けられた渦巻型組成物
US20070270360A1 (en) * 2003-04-15 2007-11-22 Sirna Therapeutics, Inc. Rna Interference Mediated Inhibition of Severe Acute Respiratory Syndrome (Sars) Gene Expression Using Short Interfering Nucleic Acid
US7851615B2 (en) 2003-04-17 2010-12-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipophilic conjugated iRNA agents
US7723509B2 (en) 2003-04-17 2010-05-25 Alnylam Pharmaceuticals IRNA agents with biocleavable tethers
US8017762B2 (en) 2003-04-17 2011-09-13 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
US8796436B2 (en) 2003-04-17 2014-08-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Modified iRNA agents
JP4597976B2 (ja) 2003-04-17 2010-12-15 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 修飾ｉＲＮＡ剤
EP1615943A4 (en) * 2003-04-18 2006-08-16 Univ Pennsylvania COMPOSITION AND METHOD FOR SIRNA INHIBITION OF ANGIOPOIETIN 1 AND 2 AND THEIR RECIPIENTS TIE2
WO2005032595A2 (en) * 2003-04-23 2005-04-14 Georgetown University Methods and compositions for the inhibition of stat5 in prostate cancer cells
WO2004098526A2 (en) * 2003-05-05 2004-11-18 Johns Hopkins University Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein
WO2004101756A2 (en) 2003-05-09 2004-11-25 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
CA2523785A1 (en) 2003-05-09 2004-11-25 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Small interfering rna libraries and methods of synthesis and use
CN1780920B (zh) * 2003-05-12 2012-03-28 波多玛克制药有限公司 基因表达抑制剂
WO2004104199A2 (en) * 2003-05-15 2004-12-02 Oligo Engine, Inc. Modulation of gene expression using dna-dna hybrids
EP1628993A4 (en) * 2003-05-16 2010-04-07 Rosetta Inpharmatics Llc METHOD AND COMPOSITIONS FOR RNA INTERFERENCE
EP1625853B1 (en) 2003-05-19 2015-07-08 Genecare Research Institute Co., Ltd Apoptosis inducer for cancer cell
EP2251039A3 (en) 2003-05-30 2010-12-08 Nippon Shinyaku Co., Ltd. Oligo double-stranded rna inhibiting the expression of bcl-2 and pharmaceutical composition containing the same
US20070042979A1 (en) * 2003-05-30 2007-02-22 Junichi Yano Oligonucleic acid-bearing composite and pharmaceutical composition containing the composite
AU2004252442B2 (en) 2003-06-02 2010-04-08 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of FNAi
ES2712695T3 (es) 2003-06-02 2019-05-14 Univ Massachusetts Métodos y composiciones para controlar la eficacia de la silenciación del ARN
US7750144B2 (en) 2003-06-02 2010-07-06 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of RNA silencing
CN1984921B (zh) * 2003-06-03 2010-06-16 Isis药物公司 存活蛋白表达的调节
US20050019918A1 (en) * 2003-06-03 2005-01-27 Hidetoshi Sumimoto Treatment of cancer by inhibiting BRAF expression
US7595306B2 (en) * 2003-06-09 2009-09-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Method of treating neurodegenerative disease
US8575327B2 (en) 2003-06-12 2013-11-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Conserved HBV and HCV sequences useful for gene silencing
EP1486564A1 (de) * 2003-06-13 2004-12-15 Ribopharma AG SiRNA mit erhöhter Stabilität in Serum
WO2005014782A2 (en) * 2003-06-13 2005-02-17 Alnylam Europe Ag., Double-stranded ribonucleic acid with increased effectiveness in an organism
WO2004113496A2 (en) * 2003-06-20 2004-12-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded compositions comprising a 3’-endo modified strand for use in gene modulation
US20060241072A1 (en) * 2003-06-20 2006-10-26 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds for use in gene modulation
CA2531069A1 (en) * 2003-07-03 2005-01-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Inhibition of syk kinase expression
US20050256071A1 (en) * 2003-07-15 2005-11-17 California Institute Of Technology Inhibitor nucleic acids
US20050136430A1 (en) * 2003-07-15 2005-06-23 California Institute Of Technology Inhibitor nucleic acids
SG190613A1 (en) * 2003-07-16 2013-06-28 Protiva Biotherapeutics Inc Lipid encapsulated interfering rna
US20050079614A1 (en) * 2003-07-21 2005-04-14 Reinhart Brenda J. RNAs able to modulate chromatin silencing
EP2530157B1 (en) 2003-07-31 2016-09-28 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of miRNAs
US7888497B2 (en) 2003-08-13 2011-02-15 Rosetta Genomics Ltd. Bioinformatically detectable group of novel regulatory oligonucleotides and uses thereof
WO2005019422A2 (en) * 2003-08-13 2005-03-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Silencing of tgf-beta receptor type ii expression by sirna
US7825235B2 (en) * 2003-08-18 2010-11-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of diacylglycerol acyltransferase 2 expression
WO2005035759A2 (en) * 2003-08-20 2005-04-21 Sirna Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF HYPOXIA INDUCIBLE FACTOR 1 (HIF1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
US20050136437A1 (en) * 2003-08-25 2005-06-23 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Nanoparticles for delivery of nucleic acids and stable double-stranded RNA
CA2536333C (en) * 2003-08-28 2013-01-08 Jan Weiler Interfering rna duplex having blunt-ends and 3'-modifications
US8501705B2 (en) * 2003-09-11 2013-08-06 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods and materials for treating autoimmune and/or complement mediated diseases and conditions
US8680063B2 (en) 2003-09-12 2014-03-25 University Of Massachusetts RNA interference for the treatment of gain-of-function disorders
WO2005027980A1 (en) * 2003-09-12 2005-03-31 University Of Massachusetts Rna interference for the treatment of gain-of-function disorders
SG146682A1 (en) 2003-09-18 2008-10-30 Isis Pharmaceuticals Inc Modulation of eif4e expression
WO2005031002A2 (en) * 2003-09-22 2005-04-07 Rosetta Inpharmatics Llc Synthetic lethal screen using rna interference
WO2005033310A1 (de) * 2003-10-01 2005-04-14 Grünenthal GmbH Pim-1-spezifische dsrna-verbindungen
US20080249038A1 (en) * 2003-10-07 2008-10-09 Quark Biotech, Inc. Bone Morphogenetic Protein (Bmp) 2A and Uses Thereof
AU2004280634A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 E. I. Du Pont De Nemours And Company Gene silencing by using micro-RNA molecules
WO2005045032A2 (en) * 2003-10-20 2005-05-19 Sima Therapeutics, Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF EARLY GROWTH RESPONSE GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
CA2543029A1 (en) * 2003-10-23 2005-05-19 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gpra and aaa1 gene expression using short nucleic acid (sina)
WO2005044981A2 (en) * 2003-10-23 2005-05-19 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
CN1926551B (zh) 2003-10-27 2010-06-16 罗斯塔生化科技有限责任公司 用于基因沉默的siRNA的设计方法
US8227434B1 (en) 2003-11-04 2012-07-24 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute, Inc. Materials and methods for treating oncological disorders
US20070275918A1 (en) * 2003-11-07 2007-11-29 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Induction of Cellular Senescence by Cdk4 Disruption for Tumor Suppression and Regression
WO2005047507A1 (en) * 2003-11-12 2005-05-26 The Austin Research Institute Dna-carrier conjugate
JP2005168485A (ja) * 2003-11-20 2005-06-30 Tsutomu Suzuki ｓｉＲＮＡの設計方法
US7807646B1 (en) * 2003-11-20 2010-10-05 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
US7763592B1 (en) * 2003-11-20 2010-07-27 University Of South Florida SHIP-deficiency to increase megakaryocyte progenitor production
US20050208658A1 (en) * 2003-11-21 2005-09-22 The University Of Maryland RNA interference mediated inhibition of 11beta hydroxysteriod dehydrogenase-1 (11beta HSD-1) gene expression
US20100145038A1 (en) * 2003-11-24 2010-06-10 Merck & Co., Inc. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
JP2007513611A (ja) * 2003-11-26 2007-05-31 ザ クイーンズ ユニヴァーシティ オブ ベルファスト 癌治療
EP1793674B1 (en) * 2003-11-26 2018-05-30 University of Massachusetts Sequence-specific inhibtion of small rna function
WO2005056021A1 (en) * 2003-12-04 2005-06-23 University Of South Florida Polynucleotides for reducing respiratory syncytial virus gene expression
US20050234000A1 (en) * 2003-12-12 2005-10-20 Mitchell Gordon S SiRNA delivery into mammalian nerve cells
JPWO2005068630A1 (ja) * 2003-12-16 2007-07-26 独立行政法人産業技術総合研究所 干渉用二重鎖ｒｎａ
US20060134787A1 (en) 2004-12-22 2006-06-22 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing the efficacy and specificity of single and double blunt-ended siRNA
US7807814B2 (en) * 2003-12-23 2010-10-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for combined therapy of disease
EP1726313A4 (en) * 2004-01-16 2008-04-09 Takeda Pharmaceutical MEDICAMENT FOR THE PREVENTION AND TREATMENT OF ARTERIOSCLEROSIS
US20080249039A1 (en) * 2004-01-30 2008-10-09 Santaris Pharma A/S Modified Short Interfering Rna (Modified Sirna)
EP2330111A3 (en) 2004-01-30 2011-08-17 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of fibrotic conditions and other diseases
EP2123759B1 (en) * 2004-02-06 2014-01-15 Thermo Fisher Scientific Biosciences Inc. Stabilized RNAS as transfection controls and silencing reagents
JP2007523649A (ja) 2004-02-10 2007-08-23 サーナ・セラピューティクス・インコーポレイテッド 多機能短鎖干渉核酸（多機能ｓｉＮＡ）を用い、ＲＮＡ干渉を介した遺伝子発現の阻害
US20060019914A1 (en) 2004-02-11 2006-01-26 University Of Tennessee Research Foundation Inhibition of tumor growth and invasion by anti-matrix metalloproteinase DNAzymes
US20060069050A1 (en) * 2004-02-17 2006-03-30 University Of Massachusetts Methods and compositions for mediating gene silencing
US20050273868A1 (en) * 2004-02-17 2005-12-08 University Of Massachusetts Methods and compositions for enhancing RISC activity in vitro and in vivo
EP1566202A1 (en) * 2004-02-23 2005-08-24 Sahltech I Göteborg AB Use of resistin antagonists in the treatment of rheumatoid arthritis
US20070202134A1 (en) * 2004-02-23 2007-08-30 Kufe Donald W Muc1 Antagonist Enhancement of Death Receptor Ligand-Induced Apoptosis
WO2005092924A2 (en) 2004-02-24 2005-10-06 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services, Centers For Disease Control And Prevention Rab9a, rab11a, and modulators thereof related to infectious disease
US7691823B2 (en) * 2004-03-05 2010-04-06 University Of Massachusetts RIP140 regulation of glucose transport
US8569474B2 (en) 2004-03-09 2013-10-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. Double stranded constructs comprising one or more short strands hybridized to a longer strand
ES2423060T3 (es) 2004-03-12 2013-09-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Agentes iRNA que tienen como diana al VEGF
US20050202075A1 (en) * 2004-03-12 2005-09-15 Pardridge William M. Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers
US20070265220A1 (en) 2004-03-15 2007-11-15 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
US8084599B2 (en) 2004-03-15 2011-12-27 City Of Hope Methods and compositions for the specific inhibition of gene expression by double-stranded RNA
US20050208090A1 (en) * 2004-03-18 2005-09-22 Medtronic, Inc. Methods and systems for treatment of neurological diseases of the central nervous system
US20050272682A1 (en) * 2004-03-22 2005-12-08 Evers Bernard M SiRNA targeting PI3K signal transduction pathway and siRNA-based therapy
US7851452B2 (en) * 2004-03-22 2010-12-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods of use of bcl-6-derived nucleotides to induce apoptosis
WO2005095622A2 (en) * 2004-03-26 2005-10-13 Van Andel Research Institute c-met siRNA ADENOVIRUS VECTORS INHIBIT CANCER CELL GROWTH, INVASION AND TUMORIGENICITY
AU2005231692B2 (en) * 2004-03-26 2011-01-27 Curis, Inc. RNA interference modulators of Hedgehog signaling and uses thereof
WO2005095647A1 (ja) * 2004-03-31 2005-10-13 Takara Bio Inc. ｓｉＲＮＡのスクリーニング方法
JP2005312428A (ja) * 2004-03-31 2005-11-10 Keio Gijuku Ｓｋｐ−２発現抑制を利用した癌の治療
KR101147147B1 (ko) 2004-04-01 2012-05-25 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 Ｒｎａ 간섭의 오프 타겟 효과 감소를 위한 변형된폴리뉴클레오타이드
JP2007531794A (ja) * 2004-04-05 2007-11-08 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド オリゴヌクレオチドの合成および精製に使用する方法および反応試薬
AU2005243247B2 (en) 2004-04-07 2012-03-01 Regents Of The University Of Minnesota Methods for treating bone cancer pain by administering a nerve growth factor antagonist
JP4761389B2 (ja) 2004-04-09 2011-08-31 株式会社ジーンケア研究所 染色体安定化に関する遺伝子を標的とする癌細胞特異的アポトーシス誘導剤
US20060078902A1 (en) * 2004-04-15 2006-04-13 Michaeline Bunting Method and compositions for RNA interference
CA2564616C (en) * 2004-04-20 2016-08-30 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Methods and compositions for enhancing delivery of double-stranded rna or a double-stranded hybrid nucleic acid to regulate gene expression in mammalian cells
WO2005105157A2 (en) 2004-04-23 2005-11-10 The Trustees Of Columbia University In The City Ofnew York INHIBITION OF HAIRLESS PROTEIN mRNA
WO2006078278A2 (en) 2004-04-27 2006-07-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Single-stranded and double-stranded oligonucleotides comprising a 2-arylpropyl moiety
AU2005247319B2 (en) 2004-04-28 2011-12-01 Molecules For Health, Inc. Methods for treating or preventing restenosis and other vascular proliferative disorders
CA2562151C (en) 2004-04-30 2016-09-06 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a c5-modified pyrimidine
US20060040882A1 (en) * 2004-05-04 2006-02-23 Lishan Chen Compostions and methods for enhancing delivery of nucleic acids into cells and for modifying expression of target genes in cells
US7605250B2 (en) 2004-05-12 2009-10-20 Dharmacon, Inc. siRNA targeting cAMP-specific phosphodiesterase 4D
US20110117088A1 (en) * 2004-05-12 2011-05-19 Simon Michael R Composition and method for introduction of rna interference sequences into targeted cells and tissues
US20050260214A1 (en) * 2004-05-12 2005-11-24 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
US20060030003A1 (en) * 2004-05-12 2006-02-09 Simon Michael R Composition and method for introduction of RNA interference sequences into targeted cells and tissues
WO2005111211A2 (en) 2004-05-14 2005-11-24 Rosetta Genomics Ltd. Micronas and uses thereof
US7687616B1 (en) 2004-05-14 2010-03-30 Rosetta Genomics Ltd Small molecules modulating activity of micro RNA oligonucleotides and micro RNA targets and uses thereof
WO2005110464A2 (en) * 2004-05-14 2005-11-24 Oregon Health & Science University Irx5 inhibition as treatment for hyperproliferative disorders
US10508277B2 (en) 2004-05-24 2019-12-17 Sirna Therapeutics, Inc. Chemically modified multifunctional short interfering nucleic acid molecules that mediate RNA interference
EP1773303A2 (en) * 2004-05-25 2007-04-18 Chimeracore, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
US7795419B2 (en) 2004-05-26 2010-09-14 Rosetta Genomics Ltd. Viral and viral associated miRNAs and uses thereof
EP2290073A3 (en) 2004-05-28 2011-08-31 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving microRNA
US8394947B2 (en) 2004-06-03 2013-03-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Positionally modified siRNA constructs
EP1602926A1 (en) 2004-06-04 2005-12-07 University of Geneva Novel means and methods for the treatment of hearing loss and phantom hearing
WO2005120152A2 (en) * 2004-06-07 2005-12-22 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods of use
ATE536418T1 (de) * 2004-06-07 2011-12-15 Protiva Biotherapeutics Inc Lipidverkapselte interferenz-rna
US20060008907A1 (en) * 2004-06-09 2006-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Control of gene expression via light activated RNA interference
US20090215860A1 (en) * 2004-06-17 2009-08-27 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for regulating gene transcription
US20060051815A1 (en) * 2004-06-25 2006-03-09 The J. David Gladstone Institutes Methods of treating smooth muscle cell disorders
JP2008504840A (ja) 2004-06-30 2008-02-21 アルニラム ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド 非リン酸骨格結合を含むオリゴヌクレオチド
EP1773857A4 (en) * 2004-07-02 2009-05-13 Protiva Biotherapeutics Inc THE IMMUNE SYSTEM STIMULATING SIRNA MOLECULES AND APPLICATIONS THEREOF
US8143228B2 (en) * 2004-07-12 2012-03-27 Medical Research Fund Of Tel Aviv Sourasky Medical Center Agents capable of downregulating an MSF-A dependent HIF-1α and use thereof in cancer treatment
WO2006112869A2 (en) * 2004-07-19 2006-10-26 Baylor College Of Medicine Modulation of cytokine signaling regulators and applications for immunotherapy
WO2006093526A2 (en) 2004-07-21 2006-09-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
CA2574086A1 (en) * 2004-07-21 2006-02-23 Medtronic, Inc. Medical devices and methods for reducing localized fibrosis
US20060030538A1 (en) * 2004-07-21 2006-02-09 Medtronic, Inc. Methods for reducing or preventing localized fibrosis using SiRNA
EP2484780A1 (en) 2004-07-23 2012-08-08 The University of North Carolina At Chapel Hill Methods and materials for determining pain sensibility and predicting and treating related disorders
CA2574603C (en) 2004-08-04 2014-11-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase
JP5192234B2 (ja) 2004-08-10 2013-05-08 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 化学修飾オリゴヌクレオチド
WO2006020557A2 (en) * 2004-08-10 2006-02-23 Immusol, Inc. Methods of using or identifying agents that inhibit cancer growth
US20060063181A1 (en) * 2004-08-13 2006-03-23 Green Pamela J Method for identification and quantification of short or small RNA molecules
JP4468989B2 (ja) 2004-08-16 2010-05-26 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド Ｒｔｐ８０１阻害剤の治療への使用
HUE033977T2 (en) 2004-08-23 2018-02-28 Sylentis Sau Treatment of eye disorders with siRNAs characterized by increased intraocular pressure
US20070021366A1 (en) * 2004-11-19 2007-01-25 Srivastava Satish K Structural-based inhibitors of the glutathione binding site in aldose reductase, methods of screening therefor and methods of use
RU2410430C2 (ru) * 2004-08-31 2011-01-27 Силентис С.А.У. Способы и композиции для ингибирования экспрессии рецептора p2х7
WO2006026738A2 (en) 2004-08-31 2006-03-09 Qiagen North American Holdings, Inc. Methods and compositions for rna amplification and detection using an rna-dependent rna-polymerase
US7884086B2 (en) 2004-09-08 2011-02-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Conjugates for use in hepatocyte free uptake assays
US20090170794A1 (en) * 2004-09-10 2009-07-02 Somagenics Inc. Small interfering rnas that efficiently inhibit viral expression and methods of use thereof
WO2006033965A2 (en) * 2004-09-16 2006-03-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Nadph oxidase inhibition pharmacotherapies for obstructive sleep apnea syndrome and its associated morbidities
FI20041204A0 (fi) 2004-09-16 2004-09-16 Riikka Lund Menetelmät immuunivälitteisiin sairauksiin liittyvien uusien kohdegeenien hyödyntämiseksi
NZ572403A (en) 2004-09-24 2010-03-26 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai modulation of apob and uses thereof
AU2005288522B2 (en) 2004-09-28 2012-06-28 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides and methods of use thereof for treatment of alopecia, acute renal failure and other diseases
US20090028862A1 (en) * 2004-09-30 2009-01-29 Arndt Gregory M Emmprin antagonists and uses thereof
EP1807522B1 (en) * 2004-10-21 2013-11-20 Venganza Inc. Methods and materials for conferring resistance to pests and pathogens of plants
US20060089324A1 (en) * 2004-10-22 2006-04-27 Sailen Barik RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
JP4704435B2 (ja) * 2004-10-22 2011-06-15 ニューレジェニクス リミテッド ニューロン再生
US7790878B2 (en) * 2004-10-22 2010-09-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi modulation of RSV, PIV and other respiratory viruses and uses thereof
US20060110440A1 (en) * 2004-10-22 2006-05-25 Kiminobu Sugaya Method and system for biasing cellular development
CN101103112B (zh) * 2004-10-27 2011-11-16 先灵公司 抑制Nav1.8的短干扰核酸组合物和方法
JP2008520191A (ja) 2004-10-27 2008-06-19 バンダービルト・ユニバーシティ 感染に関与する哺乳動物遺伝子
WO2006050002A2 (en) * 2004-10-28 2006-05-11 Idexx Laboratories, Inc. Compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
US20060094676A1 (en) * 2004-10-29 2006-05-04 Ronit Lahav Compositions and methods for treating cancer using compositions comprising an inhibitor of endothelin receptor activity
US9492400B2 (en) 2004-11-04 2016-11-15 Massachusetts Institute Of Technology Coated controlled release polymer particles as efficient oral delivery vehicles for biopharmaceuticals
CA2857878A1 (en) 2004-11-12 2006-12-28 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving mirna and mirna inhibitor molecules
JP2008520583A (ja) * 2004-11-15 2008-06-19 マウント シナイ スクール オブ メディスン オブ ニューヨーク ユニバーシティー Ｗｎｔ自己分泌シグナル伝達を改変するための組成物および方法
US20060105052A1 (en) * 2004-11-15 2006-05-18 Acar Havva Y Cationic nanoparticle having an inorganic core
US20060134189A1 (en) * 2004-11-17 2006-06-22 Protiva Biotherapeutics, Inc siRNA silencing of apolipoprotein B
EP2189469B1 (en) * 2004-11-18 2015-09-16 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Multicistronic siRNA constructs to inhibit tumors
KR101330229B1 (ko) * 2004-11-19 2013-11-15 가부시키가이샤 진케어켄큐쇼 암세포 특이적 세포증식 억제제
US7935811B2 (en) 2004-11-22 2011-05-03 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing compositions
US7923207B2 (en) 2004-11-22 2011-04-12 Dharmacon, Inc. Apparatus and system having dry gene silencing pools
US20060166234A1 (en) * 2004-11-22 2006-07-27 Barbara Robertson Apparatus and system having dry control gene silencing compositions
EP1814597A4 (en) * 2004-11-24 2009-04-22 Alnylam Pharmaceuticals Inc RNAI MODULATION OF BCR-ABL FUSION GENE AND APPLICATIONS THEREOF
WO2006060454A2 (en) * 2004-12-02 2006-06-08 B-Bridge International, Inc. Methods of designing small interfering rnas, antisense polynucleotides, and other hybridizing polynucleotides
US20060165667A1 (en) * 2004-12-03 2006-07-27 Case Western Reserve University Novel methods, compositions and devices for inducing neovascularization
WO2006066158A2 (en) * 2004-12-14 2006-06-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of mll-af4 and uses thereof
DE602005023345D1 (de) 2004-12-17 2010-10-14 Beth Israel Hospital Zusammensetzungen für bakteriell vermitteltes gen-silencing sowie verfahren zur verwendung davon
GB0427916D0 (en) * 2004-12-21 2005-01-19 Astrazeneca Ab Method
US20060142228A1 (en) 2004-12-23 2006-06-29 Ambion, Inc. Methods and compositions concerning siRNA's as mediators of RNA interference
TWI386225B (zh) 2004-12-23 2013-02-21 Alcon Inc 用於治療眼睛病症的結締組織生長因子（ＣＴＧＦ）ＲＮＡ干擾（ＲＮＡｉ）抑制技術
EP2992902A1 (en) 2004-12-27 2016-03-09 Silence Therapeutics GmbH Lipid complexes coated with peg and their uses
MX2007008065A (es) * 2004-12-30 2008-03-04 Todd M Hauser Composiciones y metodos para modular la expresion genica usando oligonucleotidos autoprotegidos.
WO2006073970A2 (en) * 2005-01-06 2006-07-13 The Johns Hopkins University Rna interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by dna and transfected dendritic cell vaccines
CN101119734B (zh) * 2005-01-07 2012-05-09 阿尔尼拉姆医药品有限公司 RSV的RNAi调节及其治疗应用
ES2343746T3 (es) 2005-01-07 2010-08-09 Diadexus, Inc. Composiciones de anticuerpo ovr110 y metodos de uso.
WO2006081192A2 (en) * 2005-01-24 2006-08-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of the nogo-l or nogo-r gene and uses thereof
WO2006081323A2 (en) * 2005-01-26 2006-08-03 The Johns Hopkins University Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding mutant oncoprotein antigen and calreticulin
TW200639253A (en) * 2005-02-01 2006-11-16 Alcon Inc RNAi-mediated inhibition of ocular targets
US20080070857A1 (en) * 2005-02-14 2008-03-20 Jun Nishihira Pharmaceutical Agents for Preventing Metastasis of Cancer
US8088579B2 (en) 2005-02-14 2012-01-03 University Of Iowa Research Foundation Complement factor H for diagnosis of age-related macular degeneration
US8859749B2 (en) 2005-03-08 2014-10-14 Qiagen Gmbh Modified short interfering RNA
JP2008533050A (ja) 2005-03-11 2008-08-21 アルコン，インコーポレイテッド 緑内障を処置するためのフリッツルド関連蛋白質―１のｒｎａｉ媒介性阻害
GB0505081D0 (en) * 2005-03-14 2005-04-20 Genomica Sau Downregulation of interleukin-12 expression by means of rnai technology
US8999943B2 (en) * 2005-03-14 2015-04-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Antigene oligomers inhibit transcription
JP4585342B2 (ja) * 2005-03-18 2010-11-24 株式会社資生堂 不全角化を抑制する物質のスクリーニング方法、同方法によりスクリーニングされた物質及び不全角化を抑制する方法
ATE524546T1 (de) * 2005-03-25 2011-09-15 Medtronic Inc Verwendung von anti-tnf oder anti-il1-rnai zur unterdrückung der wirkung entzündungsfördernder cytokine zur lokalen schmerzbehandlung
ATE541928T1 (de) * 2005-03-31 2012-02-15 Calando Pharmaceuticals Inc Inhibitoren der untereinheit 2 der ribonukleotidreduktase und ihre verwendungen
US20090203055A1 (en) * 2005-04-18 2009-08-13 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for RNA interference with sialidase expression and uses thereof
US7902352B2 (en) 2005-05-06 2011-03-08 Medtronic, Inc. Isolated nucleic acid duplex for reducing huntington gene expression
EP1885854B1 (en) 2005-05-06 2012-10-17 Medtronic, Inc. Methods and sequences to suppress primate huntington gene expression
WO2006130560A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Manipulation of pten in t cells as a strategy to modulate immune responses
JP5329949B2 (ja) * 2005-05-31 2013-10-30 エコーレ ポリテクニーク フェデラーレ デ ローザンヌ 遺伝子に基づいた薬物の細胞質送達のためのトリブロックコポリマー
US20100286228A1 (en) * 2005-06-01 2010-11-11 Duke University Method of inhibiting intimal hyperplasia
CN101213300B (zh) * 2005-06-01 2013-01-23 聚加转染股份有限公司 用于rna干扰的寡核苷酸及其生物学应用
CN100445381C (zh) * 2005-06-10 2008-12-24 中国人民解放军军事医学科学院基础医学研究所 带有单链polyA尾巴的siRNA分子制备方法和应用
US20100266574A1 (en) * 2005-06-10 2010-10-21 Orna Mor Oligoribonucleotides and Methods of Use Thereof for Treatment of Fibrotic Conditions and Other Diseases
WO2006138145A1 (en) 2005-06-14 2006-12-28 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
US7838503B2 (en) * 2005-06-15 2010-11-23 Children's Medical Center Corporation Methods for extending the replicative lifespan of cells
FI20050640A0 (fi) * 2005-06-16 2005-06-16 Faron Pharmaceuticals Oy Yhdisteitä amiinioksidaasista riippuvien sairauksien tai häiriöiden hoitoon tai estoon
US7868159B2 (en) * 2005-06-23 2011-01-11 Baylor College Of Medicine Modulation of negative immune regulators and applications for immunotherapy
EP1896084A4 (en) * 2005-06-27 2010-10-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc RNAI MODULATION OF HIF-1 AND THERAPEUTIC APPLICATIONS THEREOF
US9133517B2 (en) 2005-06-28 2015-09-15 Medtronics, Inc. Methods and sequences to preferentially suppress expression of mutated huntingtin
WO2007007317A1 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Nucleic acid agents for downregulating h19, and methods of using same
US8703769B2 (en) 2005-07-15 2014-04-22 The University Of North Carolina At Chapel Hill Use of EGFR inhibitors to prevent or treat obesity
ATE478946T1 (de) * 2005-07-25 2010-09-15 Riboxx Gmbh Verfahren und kit zur amplifikation von heteropolymerer oder poly(c)- rna
WO2007014370A2 (en) * 2005-07-28 2007-02-01 University Of Delaware Small regulatory rnas and methods of use
US7919583B2 (en) 2005-08-08 2011-04-05 Discovery Genomics, Inc. Integration-site directed vector systems
US20070213257A1 (en) * 2005-08-12 2007-09-13 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Compositions and methods for complexes of nucleic acids and peptides
RU2418068C2 (ru) * 2005-08-17 2011-05-10 Сирна Терапьютикс, Инк. Молекулы химически модифицированной короткой интерферирующей нуклеиновой кислоты, которые опосредуют интерференцию рнк
JP2009504782A (ja) 2005-08-18 2009-02-05 アルナイラム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 神経疾患を治療するための方法および組成物
US20070054873A1 (en) * 2005-08-26 2007-03-08 Protiva Biotherapeutics, Inc. Glucocorticoid modulation of nucleic acid-mediated immune stimulation
WO2007028065A2 (en) * 2005-08-30 2007-03-08 Isis Pharmaceuticals, Inc. Chimeric oligomeric compounds for modulation of splicing
US20090018097A1 (en) * 2005-09-02 2009-01-15 Mdrna, Inc Modification of double-stranded ribonucleic acid molecules
US20090221673A1 (en) * 2005-09-13 2009-09-03 Rigby William F C Compositions and Methods for Regulating RNA Translation via CD154 CA-Dinucleotide Repeat
US9708619B2 (en) 2005-09-20 2017-07-18 Basf Plant Science Gmbh Methods for controlling gene expression using ta-siRNA
FR2890859B1 (fr) 2005-09-21 2012-12-21 Oreal Oligonucleotide d'arn double brin inhibant l'expression de la tyrosinase
US8933043B2 (en) * 2005-09-30 2015-01-13 St. Jude Children's Research Hospital Methods for regulation of p53 translation and function
US8168584B2 (en) 2005-10-08 2012-05-01 Potentia Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating age-related macular degeneration by compstatin and analogs thereof
US8080534B2 (en) 2005-10-14 2011-12-20 Phigenix, Inc Targeting PAX2 for the treatment of breast cancer
WO2007048046A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 Protiva Biotherapeutics, Inc. Sirna silencing of filovirus gene expression
GB0521351D0 (en) * 2005-10-20 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of TRPV expression levels
GB0521716D0 (en) * 2005-10-25 2005-11-30 Genomica Sau Modulation of 11beta-hydroxysteriod dehydrogenase 1 expression for the treatment of ocular diseases
WO2007049690A1 (ja) * 2005-10-27 2007-05-03 National University Corporation NARA Institute of Science and Technology Singarの発現または機能の抑制による神経軸索の形成・伸長と神経再生への応用
AU2006305886C1 (en) 2005-10-28 2011-03-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of huntingtin gene
WO2007051303A1 (en) 2005-11-02 2007-05-10 Protiva Biotherapeutics, Inc. MODIFIED siRNA MOLECULES AND USES THEREOF
WO2007056326A2 (en) * 2005-11-04 2007-05-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of nav1.8 gene
EP1951318B1 (en) * 2005-11-07 2012-10-17 British Columbia Cancer Agency Inhibition of autophagy genes in cancer chemotherapy
WO2007056331A2 (en) * 2005-11-09 2007-05-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor v leiden mutant gene
EP2641970B1 (en) 2005-11-17 2014-12-24 Board of Regents, The University of Texas System Modulation of gene expression by oligomers targeted to chromosomal DNA
US8916530B2 (en) * 2005-11-18 2014-12-23 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US8603991B2 (en) 2005-11-18 2013-12-10 Gradalis, Inc. Individualized cancer therapy
US20080125384A1 (en) * 2005-11-21 2008-05-29 Shuewi Yang Simultaneous silencing and restoration of gene function
WO2007061022A1 (ja) * 2005-11-24 2007-05-31 Jichi Medical University プロヒビチン2(phb2)のミトコンドリア機能
WO2007070682A2 (en) 2005-12-15 2007-06-21 Massachusetts Institute Of Technology System for screening particles
US20070178068A1 (en) * 2005-12-22 2007-08-02 Reich Samuel J Compositions and methods for regulating complement system
AR057252A1 (es) * 2005-12-27 2007-11-21 Alcon Mfg Ltd Inhibicion de rho quinasa mediada por arni para el tratamiento de trastornos oculares
US8673873B1 (en) * 2005-12-28 2014-03-18 Alcon Research, Ltd. RNAi-mediated inhibition of phosphodiesterase type 4 for treatment of cAMP-related ocular disorders
JP5713377B2 (ja) 2005-12-28 2015-05-07 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート 薬物標的としての天然アンチセンスおよび非コードｒｎａ転写物
US8058252B2 (en) * 2005-12-30 2011-11-15 Institut Gustave Roussy Use of inhibitors of scinderin and/or ephrin-A1 for treating tumors
US20090060921A1 (en) * 2006-01-17 2009-03-05 Biolex Therapeutics, Inc. Glycan-optimized anti-cd20 antibodies
ES2395842T3 (es) * 2006-01-17 2013-02-15 Synthon Biopharmaceuticals B.V. Composiciones y métodos para la humanización y optimización de N-glicanos en plantas
EP2671954B1 (en) 2006-01-20 2018-05-16 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant ROS kinase in human non-small cell lung carcinoma
UY30097A1 (es) 2006-01-20 2007-08-31 Atugen Ag Usos terapeuticos de inhibidores de rtp801
US7825099B2 (en) 2006-01-20 2010-11-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Treatment or prevention of oto-pathologies by inhibition of pro-apoptotic genes
US20120208824A1 (en) 2006-01-20 2012-08-16 Cell Signaling Technology, Inc. ROS Kinase in Lung Cancer
WO2007087451A2 (en) * 2006-01-25 2007-08-02 University Of Massachusetts Compositions and methods for enhancing discriminatory rna interference
DK1984382T3 (da) * 2006-01-27 2012-09-03 Santaris Pharma As LNA modificerede fosforthiolerede oligonukleotider
US8229398B2 (en) * 2006-01-30 2012-07-24 Qualcomm Incorporated GSM authentication in a CDMA network
WO2007091269A2 (en) * 2006-02-08 2007-08-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. NOVEL TANDEM siRNAS
US7910566B2 (en) 2006-03-09 2011-03-22 Quark Pharmaceuticals Inc. Prevention and treatment of acute renal failure and other kidney diseases by inhibition of p53 by siRNA
FI20060246A0 (fi) * 2006-03-16 2006-03-16 Jukka Westermarck Uusi kasvua stimuloiva proteiini ja sen käyttö
US20100056441A1 (en) * 2006-03-17 2010-03-04 Costa Robert H Method for Inhibiting Angiogenesis
AU2007229161B2 (en) 2006-03-23 2012-07-12 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Small internally segmented interfering RNA
AU2007230995B2 (en) * 2006-03-24 2011-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. dsRNA compositions and methods for treating HPV infection
FR2898908A1 (fr) 2006-03-24 2007-09-28 Agronomique Inst Nat Rech Procede de preparation de cellules aviaires differenciees et genes impliques dans le maintien de la pluripotence
WO2007115047A2 (en) * 2006-03-29 2007-10-11 Senesco Technologies, Inc. Inhibition of hiv replication and expression of p24 with eif-5a
CA2647728C (en) 2006-03-31 2014-12-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of eg5 gene
CA2648099C (en) 2006-03-31 2012-05-29 The Brigham And Women's Hospital, Inc System for targeted delivery of therapeutic agents
WO2007113331A2 (en) * 2006-04-06 2007-10-11 Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum Method to inhibit the propagation of an undesired cell population
ATE460922T1 (de) * 2006-04-07 2010-04-15 Chimeros Inc Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von b-zellen-malignomen
CA2648718A1 (en) 2006-04-07 2007-10-18 The Research Foundation Of State University Of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
US9044461B2 (en) 2006-04-07 2015-06-02 The Research Foundation Of State University Of New York Transcobalamin receptor polypeptides, nucleic acids, and modulators thereof, and related methods of use in modulating cell growth and treating cancer and cobalamin deficiency
US8076306B2 (en) * 2006-04-12 2011-12-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions and their uses directed to hepcidin
US20100055116A1 (en) * 2006-04-13 2010-03-04 Liou Hsiou-Chi Methods and Compositions for Targeting c-Rel
EP2447359B1 (en) 2006-04-14 2015-11-04 Cell Signaling Technology, Inc. Gene defects and mutant ALK kinase in human solid tumors
US8969295B2 (en) * 2006-04-14 2015-03-03 Massachusetts Institute Of Technology Identifying and modulating molecular pathways that mediate nervous system plasticity
WO2007127919A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a gene from the jc virus
GB0608838D0 (en) 2006-05-04 2006-06-14 Novartis Ag Organic compounds
CN101484588B (zh) 2006-05-11 2013-11-06 阿尔尼拉姆医药品有限公司 抑制pcsk9基因表达的组合物和方法
US20090130212A1 (en) * 2006-05-15 2009-05-21 Physical Pharmaceutica, Llc Composition and improved method for preparation of small particles
EP2019691B1 (en) 2006-05-15 2020-08-12 Massachusetts Institute of Technology Polymers for functional particles
US20070269892A1 (en) * 2006-05-18 2007-11-22 Nastech Pharmaceutical Company Inc. FORMULATIONS FOR INTRACELLULAR DELIVERY dsRNA
CA2652770A1 (en) * 2006-05-19 2007-11-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Rnai modulation of aha and therapeutic uses thereof
BRPI0711950A2 (pt) * 2006-05-19 2011-12-13 Scripps Research Inst tratamento para o dobramento inadequado da proteìna
CA2653451C (en) * 2006-05-22 2015-12-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of ikk-b gene
US9273356B2 (en) 2006-05-24 2016-03-01 Medtronic, Inc. Methods and kits for linking polymorphic sequences to expanded repeat mutations
US20070275923A1 (en) * 2006-05-25 2007-11-29 Nastech Pharmaceutical Company Inc. CATIONIC PEPTIDES FOR siRNA INTRACELLULAR DELIVERY
US8598333B2 (en) * 2006-05-26 2013-12-03 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. SiRNA silencing of genes expressed in cancer
GB0610542D0 (en) * 2006-05-26 2006-07-05 Medical Res Council Screening method
WO2007141796A2 (en) 2006-06-09 2007-12-13 Quark Pharmaceuticals, Inc. Therapeutic uses of inhibitors of rtp801l
US7915399B2 (en) 2006-06-09 2011-03-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Modified siRNA molecules and uses thereof
JP2009540011A (ja) * 2006-06-12 2009-11-19 エクセジェニックス、インク．ディー／ビー／エー オプコ ヘルス、インク． 血管新生のｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法
US9200275B2 (en) * 2006-06-14 2015-12-01 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods and compositions for regulating cell cycle progression
US9381477B2 (en) 2006-06-23 2016-07-05 Massachusetts Institute Of Technology Microfluidic synthesis of organic nanoparticles
WO2008008719A2 (en) * 2006-07-10 2008-01-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the myc gene
GB0613753D0 (en) 2006-07-11 2006-08-23 Norwegian Radium Hospital Res Method
WO2008008986A2 (en) 2006-07-13 2008-01-17 University Of Iowa Research Foundation Methods and reagents for treatment and diagnosis of vascular disorders and age-related macular degeneration
JP4756271B2 (ja) * 2006-07-18 2011-08-24 独立行政法人産業技術総合研究所 ガン細胞の老化、アポトーシス誘導剤
RU2553561C2 (ru) 2006-07-21 2015-06-20 Сайленс Терапьютикс Аг Средства ингибирования экспрессии протеинкиназы 3
US20080039415A1 (en) * 2006-08-11 2008-02-14 Gregory Robert Stewart Retrograde transport of sirna and therapeutic uses to treat neurologic disorders
US20100330105A1 (en) * 2006-08-22 2010-12-30 John Hopkins University Anticancer Combination Therapies
DE102006039479A1 (de) 2006-08-23 2008-03-06 Febit Biotech Gmbh Programmierbare Oligonukleotidsynthese
US7872118B2 (en) * 2006-09-08 2011-01-18 Opko Ophthalmics, Llc siRNA and methods of manufacture
CA2663878A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-27 Asuragen, Inc. Mir-200 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
JP2010510964A (ja) * 2006-09-19 2010-04-08 アシュラジェン インコーポレイテッド 治療的介入の標的としての、ｍｉＲ−１５、ｍｉＲ−２６、ｍｉＲ−３１、ｍｉＲ−１４５、ｍｉＲ−１４７、ｍｉＲ−１８８、ｍｉＲ−２１５、ｍｉＲ−２１６、ｍｉＲ−３３１、ｍｍｕ−ｍｉＲ−２９２−３ｐによって調節される遺伝子および経路
WO2008036933A2 (en) 2006-09-21 2008-03-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of the hamp gene
US8809514B2 (en) 2006-09-22 2014-08-19 Ge Healthcare Dharmacon, Inc. Tripartite oligonucleotide complexes and methods for gene silencing by RNA interference
EP2087110A2 (en) * 2006-10-11 2009-08-12 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Influenza targets
WO2008063760A2 (en) * 2006-10-18 2008-05-29 The University Of Texas M.D. Anderson Cancer Center Methods for treating cancer targeting transglutaminase
JP2010507387A (ja) * 2006-10-25 2010-03-11 クアーク・ファーマスーティカルス、インコーポレイテッド 新規のｓｉＲＮＡおよびその使用方法
EP2061901A2 (en) 2006-10-31 2009-05-27 Noxxon Pharma AG Methods for detection of a single- or double-stranded nucleic acid molecule
CA2667971C (en) 2006-11-01 2017-04-18 Gary Weisinger Adipocyte-specific constructs and methods for inhibiting platelet-type 12 lipoxygenase expression
US8324367B2 (en) 2006-11-03 2012-12-04 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US9375440B2 (en) 2006-11-03 2016-06-28 Medtronic, Inc. Compositions and methods for making therapies delivered by viral vectors reversible for safety and allele-specificity
US8906874B2 (en) 2006-11-09 2014-12-09 Gradalis, Inc. Bi-functional shRNA targeting Stathmin 1 and uses thereof
US8758998B2 (en) 2006-11-09 2014-06-24 Gradalis, Inc. Construction of bifunctional short hairpin RNA
US8252526B2 (en) 2006-11-09 2012-08-28 Gradalis, Inc. ShRNA molecules and methods of use thereof
US8034921B2 (en) * 2006-11-21 2011-10-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. IRNA agents targeting CCR5 expressing cells and uses thereof
US7819842B2 (en) 2006-11-21 2010-10-26 Medtronic, Inc. Chronically implantable guide tube for repeated intermittent delivery of materials or fluids to targeted tissue sites
US7988668B2 (en) 2006-11-21 2011-08-02 Medtronic, Inc. Microsyringe for pre-packaged delivery of pharmaceuticals
US8153110B2 (en) * 2006-11-22 2012-04-10 The University Of Tokyo Environment-responding siRNA carrier using disulfide-cross-linked polymeric micelle
WO2008152446A2 (en) 2006-11-27 2008-12-18 Patrys Limited Novel glycosylated peptide target in neoplastic cells
JP5391073B2 (ja) 2006-11-27 2014-01-15 ディアデクサス インコーポレーテッド Ｏｖｒ１１０抗体組成物および使用方法
US20080171719A1 (en) * 2006-11-28 2008-07-17 Alcon Manufacturing, Ltd. RNAi-MEDIATED INHIBITION OF AQUAPORIN 1 FOR TREATMENT OF IOP-RELATED CONDITIONS
US20090048195A1 (en) * 2006-11-30 2009-02-19 University Of Southern California Compositions and methods of sphingosine kinase inhibitors for use thereof in cancer therapy
WO2008073920A2 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Mir-21 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CA2671299A1 (en) * 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. Functions and targets of let-7 micro rnas
WO2008076324A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-26 Novartis Ag Compositions and methods to treat muscular & cardiovascular disorders
US20090175827A1 (en) * 2006-12-29 2009-07-09 Byrom Mike W miR-16 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
US7754698B2 (en) * 2007-01-09 2010-07-13 Isis Pharmaceuticals, Inc. Modulation of FR-alpha expression
US9896511B2 (en) 2007-01-10 2018-02-20 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Antibodies that bind to TL1A and methods of treating inflammatory or autoimmune disease comprising administering such antibodies
US20090074785A1 (en) * 2007-01-16 2009-03-19 Smith Jeffrey W Compositions and methods for treatment of colorectal cancer
US20080171906A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-17 Everaerts Frank J L Tissue performance via hydrolysis and cross-linking
AU2007344641B2 (en) 2007-01-16 2014-05-22 The University Of Queensland Method of inducing an immune response
CA2675967A1 (en) * 2007-01-16 2008-07-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusale M Nucleic acid constructs and methods for specific silencing of h19
CN102099367A (zh) * 2007-01-17 2011-06-15 蒙特利尔临床研究所 具有季碳中心的核苷和核苷酸类似物以及其使用方法
WO2008092153A2 (en) 2007-01-26 2008-07-31 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Modification of exosomal components for use as a vaccine
WO2008093331A1 (en) * 2007-01-29 2008-08-07 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Antibody conjugates for circumventing multi-drug resistance
WO2008094860A2 (en) * 2007-01-30 2008-08-07 Allergan, Inc. Treating ocular diseases using peroxisome proliferator-activated receptor delta antagonists
EP2134830A2 (en) 2007-02-09 2009-12-23 Massachusetts Institute of Technology Oscillating cell culture bioreactor
AU2008212820B2 (en) 2007-02-09 2014-01-30 Northwestern University Particles for detecting intracellular targets
DE102007008596B4 (de) * 2007-02-15 2010-09-02 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von PNA und siRNA, Verfahren zu deren zellspezifischen Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
CN101646769A (zh) * 2007-02-20 2010-02-10 孟山都技术公司 无脊椎动物微rna
EP2137205A2 (en) 2007-02-26 2009-12-30 Quark Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of rtp801 and their use in disease treatment
WO2008104978A2 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Quark Pharmaceuticals, Inc. Novel sirna structures
WO2008109518A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting wnt gene expression and uses thereof
US9018163B2 (en) * 2007-03-02 2015-04-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Modulating PDX-1 with PCIF1, methods and uses thereof
WO2008109357A1 (en) * 2007-03-02 2008-09-12 Mdrna, Inc. Nucleic acid compounds for inhibiting apob gene expression and uses thereof
US9085638B2 (en) 2007-03-07 2015-07-21 The Johns Hopkins University DNA vaccine enhancement with MHC class II activators
US20080260765A1 (en) * 2007-03-15 2008-10-23 Johns Hopkins University HPV DNA Vaccines and Methods of Use Thereof
DK2129680T3 (en) 2007-03-21 2015-08-10 Brookhaven Science Ass Llc COMBINED hairpin ANTISENSE COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING EXPRESSION OF
US7812002B2 (en) 2007-03-21 2010-10-12 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotide inhibitors of NRF2 and methods of use thereof for treatment of cancer
PE20090064A1 (es) * 2007-03-26 2009-03-02 Novartis Ag Acido ribonucleico de doble cadena para inhibir la expresion del gen e6ap humano y composicion farmaceutica que lo comprende
JP5350360B2 (ja) * 2007-03-29 2013-11-27 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド エボラ由来の遺伝子の発現を阻害するための組成物および方法
WO2008124632A1 (en) * 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Amphiphilic compound assisted nanoparticles for targeted delivery
WO2008124634A1 (en) 2007-04-04 2008-10-16 Massachusetts Institute Of Technology Polymer-encapsulated reverse micelles
CA2683063A1 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 Chimeros, Inc. Self-assembling nanoparticle drug delivery system
JP5258874B2 (ja) 2007-04-10 2013-08-07 キアゲン ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｒｎａ干渉タグ
CA2682135A1 (en) * 2007-04-17 2008-10-30 Baxter International Inc. Nucleic acid microparticles for pulmonary delivery
CA2685127C (en) 2007-04-23 2019-01-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Glycoconjugates of rna interference agents
WO2008143774A2 (en) * 2007-05-01 2008-11-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for locating snp heterozygosity for allele specific diagnosis and therapy
US20100291042A1 (en) 2007-05-03 2010-11-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Multipotent stem cells and uses thereof
JP5296328B2 (ja) * 2007-05-09 2013-09-25 独立行政法人理化学研究所 １本鎖環状ｒｎａおよびその製造方法
MX2009012315A (es) * 2007-05-15 2009-12-03 Helicon Therapeutics Inc Metodos de identificacion de genes involucrados en la formacion de memoria utilizando arn pequeño de interferencia (arnip).
WO2008144453A1 (en) * 2007-05-15 2008-11-27 Helicon Therapeutics, Inc. Methods of treating cognitive disorders by inhibition of gpr12
BRPI0811170B8 (pt) 2007-05-22 2021-05-25 Arcturus Therapeutics Inc oligonucleotídeos de rna e complexos de rna substituídos por hidroximetila
US20090131354A1 (en) * 2007-05-22 2009-05-21 Bader Andreas G miR-126 REGULATED GENES AND PATHWAYS AS TARGETS FOR THERAPEUTIC INTERVENTION
AU2008259907B2 (en) 2007-05-30 2014-12-04 Northwestern University Nucleic acid functionalized nanoparticles for therapeutic applications
KR20100031528A (ko) 2007-06-01 2010-03-22 더 트러스티즈 오브 프린스턴 유니버시티 숙주세포 대사경로의 조절을 통한 바이러스 감염 치료
EP2172547B1 (en) * 2007-06-11 2016-01-06 Takara Bio Inc. Method for expression of specific gene
US20100273854A1 (en) * 2007-06-15 2010-10-28 Hagar Kalinski Compositions and methods for inhibiting nadph oxidase expression
AR066984A1 (es) 2007-06-15 2009-09-23 Novartis Ag Inhibicion de la expresion de la subunidad alfa del canal epitelial de sodio (enac) por medio de arni (arn de interferencia)
HRP20140522T1 (hr) 2007-06-27 2014-08-15 Quark Pharmaceuticals, Inc. Pripravci i metode za inhibiranje izražaja proapoptotiäśkih gena
US20100329993A1 (en) 2007-06-29 2010-12-30 Hiroyuki Yoneyama Method of fixing and expressing physiologically active substance
CN103215269B (zh) * 2007-07-05 2015-01-21 诺瓦提斯公司 用于治疗病毒感染的dsRNA
CA2692861A1 (en) 2007-07-10 2009-01-15 Neurim Pharmaceuticals (1991) Ltd. Cd44 splice variants in neurodegenerative diseases
US8828960B2 (en) * 2007-07-17 2014-09-09 Idexx Laboratories, Inc. Amino acid vitamin ester compositions for controlled delivery of pharmaceutically active compounds
JP2009033986A (ja) * 2007-07-31 2009-02-19 Sumitomo Chemical Co Ltd ＲＮＡ干渉による遺伝子発現抑制のためのターゲット遺伝子としてのｃａｒ遺伝子の使用
EP2030615A3 (en) 2007-08-13 2009-12-02 ELFORD, Howard L. Ribonucleotide reductase inhibitors for use in the treatment or prevention of neuroinflammatory or autoimmune diseases
US8501929B2 (en) * 2007-08-17 2013-08-06 Biochrom Pharma Inc. PTHrP, its isoforms and antagonist thereto in the diagnosis and treatment of disease
EP2193140B1 (en) * 2007-08-27 2016-11-02 1Globe Health Institute LLC Compositions of asymmetric interfering rna and uses thereof
CN101842490B (zh) * 2007-08-30 2014-12-10 帕拉丁实验室公司 抗原组合物及其在核酸的靶向递送中的应用
US20090081789A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-26 Greenville Hospital System Activation of nuclear factor kappa B
WO2009033027A2 (en) 2007-09-05 2009-03-12 Medtronic, Inc. Suppression of scn9a gene expression and/or function for the treatment of pain
EP2198050A1 (en) 2007-09-14 2010-06-23 Asuragen, INC. Micrornas differentially expressed in cervical cancer and uses thereof
KR20100065190A (ko) * 2007-09-14 2010-06-15 닛토덴코 가부시키가이샤 약물 담체
JP5049713B2 (ja) * 2007-09-14 2012-10-17 株式会社コナミデジタルエンタテインメント ゲームシステム並びにこれを構成するゲーム装置及び課題報知装置
CN101849008A (zh) 2007-09-19 2010-09-29 应用生物系统有限公司 用于减少RNAi中的脱靶表型效应的siRNA的不依赖于序列的修饰形式和其稳定形式
EP2197454A4 (en) * 2007-09-25 2012-07-04 Idexx Lab Inc PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS FOR THE ADMINISTRATION OF OLIGONUCLEOTIDES
US20100136026A1 (en) * 2007-09-26 2010-06-03 Kerr William G Ship Inhibition to Direct Hematopoietic Stem Cells and Induce Extramedullary Hematopoiesis
SI2644192T1 (sl) 2007-09-28 2017-08-31 Pfizer Inc. Ciljanje rakavih celic z uporabo nanodelcev
US20120082659A1 (en) * 2007-10-02 2012-04-05 Hartmut Land Methods And Compositions Related To Synergistic Responses To Oncogenic Mutations
CN103898110A (zh) * 2007-10-03 2014-07-02 夸克制药公司 新siRNA结构
WO2009046397A2 (en) * 2007-10-04 2009-04-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Modulating gene expression with agrna and gapmers targeting antisense transcripts
CA2917512C (en) 2007-10-12 2025-08-05 President And Fellows Of Harvard College VACCINE NANOTECHNOLOGY
EP3741851A1 (en) 2007-10-18 2020-11-25 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant ros kinase in human non-small cell lung carcinoma
US8097712B2 (en) 2007-11-07 2012-01-17 Beelogics Inc. Compositions for conferring tolerance to viral disease in social insects, and the use thereof
US20100098664A1 (en) * 2007-11-28 2010-04-22 Mathieu Jean-Francois Desclaux Lentiviral vectors allowing RNAi mediated inhibition of GFAP and vimentin expression
US8324369B2 (en) * 2007-11-30 2012-12-04 Baylor College Of Medicine Dendritic cell vaccine compositions and uses of same
WO2009070805A2 (en) * 2007-12-01 2009-06-04 Asuragen, Inc. Mir-124 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
CA2706317C (en) 2007-12-03 2017-06-13 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Doc1 compositions and methods for treating cancer
CN102006890A (zh) 2007-12-04 2011-04-06 阿尔尼拉姆医药品有限公司 靶向脂质
CA2708171C (en) * 2007-12-04 2018-02-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Folate conjugates
EP2848688A1 (en) 2007-12-10 2015-03-18 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of factor VII gene
US8614311B2 (en) 2007-12-12 2013-12-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. RTP801L siRNA compounds and methods of use thereof
US20110105584A1 (en) * 2007-12-12 2011-05-05 Elena Feinstein Rtp80il sirna compounds and methods of use thereof
EP2229459B1 (en) 2007-12-13 2014-08-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of RSV infection
WO2009079399A2 (en) * 2007-12-14 2009-06-25 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Method of treating neurodegenerative disease
US7845686B2 (en) * 2007-12-17 2010-12-07 S & B Technical Products, Inc. Restrained pipe joining system for plastic pipe
KR100949791B1 (ko) * 2007-12-18 2010-03-30 이동기 오프-타겟 효과를 최소화하고 ＲＮＡｉ 기구를 포화시키지않는 신규한 ｓｉＲＮＡ 구조 및 그 용도
WO2009086156A2 (en) * 2007-12-21 2009-07-09 Asuragen, Inc. Mir-10 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP2242854A4 (en) * 2008-01-15 2012-08-15 Quark Pharmaceuticals Inc COMPOUNDS AND USES THEREOF
BRPI0907008A2 (pt) * 2008-01-31 2015-07-07 Alnylam Pharmaceuticals Inc Métodos otimizados para liberação de dsrna alvejando o gene pcsk9
WO2009100430A2 (en) * 2008-02-08 2009-08-13 Asuragen, Inc miRNAs DIFFERENTIALLY EXPRESSED IN LYMPH NODES FROM CANCER PATIENTS
US8188060B2 (en) 2008-02-11 2012-05-29 Dharmacon, Inc. Duplex oligonucleotides with enhanced functionality in gene regulation
EP2247729B1 (en) 2008-02-11 2019-05-01 Phio Pharmaceuticals Corp. Modified rnai polynucleotides and uses thereof
US7977321B2 (en) * 2008-02-12 2011-07-12 University Of Tennessee Research Foundation Small interfering RNAs targeting feline herpes virus
WO2009137128A2 (en) 2008-02-12 2009-11-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of cd45 gene
CA2713753A1 (en) * 2008-02-13 2009-08-20 Elan Pharma International Limited Alpha-synuclein kinase
DE102009043743B4 (de) 2009-03-13 2016-10-13 Friedrich-Schiller-Universität Jena Zellspezifisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA sowie Applikationskits zu deren Herstellung und Verwendung
WO2009103067A2 (en) * 2008-02-14 2009-08-20 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods to treat asthma
AU2009221775B2 (en) * 2008-03-05 2015-05-07 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of Eg5 and VEGF genes
US20090233297A1 (en) * 2008-03-06 2009-09-17 Elizabeth Mambo Microrna markers for recurrence of colorectal cancer
JP5653899B2 (ja) * 2008-03-17 2015-01-14 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム 神経筋シナプスの維持および再生に関与するマイクロｒｎａの同定
CA2718765A1 (en) * 2008-03-20 2009-09-24 Quark Pharmaceuticals, Inc. Novel sirna compounds for inhibiting rtp801
WO2009154835A2 (en) * 2008-03-26 2009-12-23 Asuragen, Inc. Compositions and methods related to mir-16 and therapy of prostate cancer
EP2105145A1 (en) * 2008-03-27 2009-09-30 ETH Zürich Method for muscle-specific delivery lipid-conjugated oligonucleotides
RU2501859C2 (ru) * 2008-03-31 2013-12-20 Нэшнл Инститьют Оф Эдванст Индастриал Сайенс Энд Текнолоджи Модифицированная липидами двухцепочечная рнк, обладающая мощным эффектом рнк-интерференции
TWI348916B (en) * 2008-04-03 2011-09-21 Univ Nat Taiwan A novel treatment tool for cancer: rna interference of bcas2
WO2009126726A1 (en) * 2008-04-08 2009-10-15 Asuragen, Inc Methods and compositions for diagnosing and modulating human papillomavirus (hpv)
EP3604533A1 (en) 2008-04-11 2020-02-05 Arbutus Biopharma Corporation Site-specific delivery of nucleic acids by combining targeting ligands with endosomolytic components
US8309614B2 (en) * 2008-04-11 2012-11-13 Cedars-Sinai Medical Center Poly(beta malic acid) with pendant leu-leu-leu tripeptide for effective cytoplasmic drug delivery
NZ588583A (en) 2008-04-15 2012-08-31 Protiva Biotherapeutics Inc Novel lipid formulations for nucleic acid delivery
US8278287B2 (en) * 2008-04-15 2012-10-02 Quark Pharmaceuticals Inc. siRNA compounds for inhibiting NRF2
US20090285861A1 (en) * 2008-04-17 2009-11-19 Tzyy-Choou Wu Tumor cell-based cancer immunotherapeutic compositions and methods
US7875711B2 (en) 2008-04-17 2011-01-25 Alnylam Pharamaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of XBP-1 gene
USRE48948E1 (en) 2008-04-18 2022-03-01 Warsaw Orthopedic, Inc. Clonidine compounds in a biodegradable polymer
KR20170005148A (ko) 2008-04-21 2017-01-11 티슈 리제너레이션 쎄라퓨틱스, 인코포레이티드 생물학적 또는 화학적 물질에 대한 예방 또는 치료를 위한 유전적으로 변형된 인간 탯줄 혈관주위 세포
US8324366B2 (en) 2008-04-29 2012-12-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for delivering RNAI using lipoproteins
WO2009134443A2 (en) * 2008-05-02 2009-11-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Rna-induced translational silencing and cellular apoptosis
US8258111B2 (en) 2008-05-08 2012-09-04 The Johns Hopkins University Compositions and methods related to miRNA modulation of neovascularization or angiogenesis
US20090291073A1 (en) * 2008-05-20 2009-11-26 Ward Keith W Compositions Comprising PKC-theta and Methods for Treating or Controlling Ophthalmic Disorders Using Same
WO2009146417A1 (en) * 2008-05-30 2009-12-03 Sigma-Aldrich Co. Compositions and methods for specifically silencing a target nucleic acid
US8222221B2 (en) 2008-06-04 2012-07-17 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression through endogenous small RNA targeting of gene promoters
WO2009147684A2 (en) 2008-06-06 2009-12-10 Quark Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treatment of ear disorders
US20090305611A1 (en) * 2008-06-06 2009-12-10 Flow International Corporation Device and method for improving accuracy of a high-pressure fluid jet apparatus
WO2009150156A1 (en) * 2008-06-13 2009-12-17 Riboxx Gmbh Method for enzymatic synthesis of chemically modified rna
WO2010005741A1 (en) * 2008-06-16 2010-01-14 Georgia Tech Research Corporation Nanogels for cellular delivery of therapeutics
TWI455944B (zh) 2008-07-01 2014-10-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 雙股多核苷酸
US20110184046A1 (en) 2008-07-11 2011-07-28 Dinah Wen-Yee Sah Compositions And Methods For Inhibiting Expression Of GSK-3 Genes
US8309791B2 (en) 2008-07-16 2012-11-13 Recombinectics, Inc. Method for producing a transgenic pig using a hyper-methylated transposon
WO2010008582A2 (en) 2008-07-18 2010-01-21 Rxi Pharmaceuticals Corporation Phagocytic cell drug delivery system
US8039658B2 (en) * 2008-07-25 2011-10-18 Air Products And Chemicals, Inc. Removal of trace arsenic impurities from triethylphosphate (TEPO)
US8212019B2 (en) * 2008-07-30 2012-07-03 University Of Massachusetts Nucleic acid silencing sequences
US9089610B2 (en) 2008-08-19 2015-07-28 Nektar Therapeutics Complexes of small-interfering nucleic acids
SG196769A1 (en) * 2008-08-25 2014-02-13 Excaliard Pharmaceuticals Inc Antisense oligonucleotides directed against connective tissue growth factor and uses thereof
WO2011028218A1 (en) 2009-09-02 2011-03-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Process for triphosphate oligonucleotide synthesis
MX345116B (es) * 2008-09-15 2017-01-17 Children's Medical Center Corp Modulacion de bcl11a para tratamiento de hemoglobinopatias.
EP2340309A2 (en) 2008-09-22 2011-07-06 Rxi Pharmaceuticals Corporation Neutral nanotransporters
EP2342616A2 (en) 2008-09-23 2011-07-13 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chemical modifications of monomers and oligonucleotides with cycloaddition
WO2010036962A1 (en) 2008-09-25 2010-04-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of serum amyloid a gene
US8592570B2 (en) 2008-10-06 2013-11-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of an RNA from West Nile virus
US9388413B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
US9388414B2 (en) 2008-10-08 2016-07-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
WO2010042292A1 (en) * 2008-10-08 2010-04-15 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of acat1 in the treatment of alzheimer's disease
US8802646B2 (en) * 2008-10-08 2014-08-12 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting the activity of ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
US9149492B2 (en) 2008-10-08 2015-10-06 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of alzheimer's disease
JP5777519B2 (ja) 2008-10-09 2015-09-09 テクミラ ファーマシューティカルズ コーポレイション 改良されたアミノ脂質および核酸の送達方法
US8343498B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8277812B2 (en) 2008-10-12 2012-10-02 Massachusetts Institute Of Technology Immunonanotherapeutics that provide IgG humoral response without T-cell antigen
US8591905B2 (en) 2008-10-12 2013-11-26 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Nicotine immunonanotherapeutics
US8343497B2 (en) 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
US9458472B2 (en) * 2008-10-15 2016-10-04 Massachusetts Institute Of Technology Detection and destruction of cancer cells using programmed genetic vectors
EP2352744B1 (en) 2008-10-15 2016-09-21 Somagenics, Inc. Short hairpin rnas for inhibition of gene expression
AU2009307677C1 (en) * 2008-10-20 2022-09-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin
WO2010048590A1 (en) * 2008-10-23 2010-04-29 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for prevention or treatment of rsv infection using modified duplex rna molecules
WO2010046889A1 (en) * 2008-10-23 2010-04-29 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods for delivery of sirna to bone marrow cells and uses thereof
EP4241767B1 (en) 2008-11-10 2024-10-23 Arbutus Biopharma Corporation Novel lipids and compositions for the delivery of therapeutics
US20100179213A1 (en) * 2008-11-11 2010-07-15 Mirna Therapeutics, Inc. Methods and Compositions Involving miRNAs In Cancer Stem Cells
HUE027027T2 (en) * 2008-11-13 2016-08-29 Modgene Llc Reduction of amyloid beta load in non-brain tissue
US9074211B2 (en) 2008-11-19 2015-07-07 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of MAP4K4 through RNAI
EP2373308A2 (en) 2008-11-21 2011-10-12 Isis Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
DK2365803T3 (en) 2008-11-24 2018-01-22 Univ Northwestern POLYVALENT RNA NANOPARTICLE COMPOSITIONS
EP2191834A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Compositions and methods for treating retrovirus infections
JP5816556B2 (ja) 2008-12-03 2015-11-18 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 治療剤のためのｕｎａオリゴマー構造
US20100291188A1 (en) * 2008-12-04 2010-11-18 Musc Foundation For Research Development Periostin Inhibitory Compositions for Myocardial Regeneration, Methods of Delivery, and Methods of Using Same
US8470792B2 (en) 2008-12-04 2013-06-25 Opko Pharmaceuticals, Llc. Compositions and methods for selective inhibition of VEGF
EP4209510B1 (en) 2008-12-09 2024-01-31 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
CA2746514C (en) * 2008-12-10 2018-11-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Gnaq targeted dsrna compositions and methods for inhibiting expression
US8664188B2 (en) * 2008-12-11 2014-03-04 Xiangxue Group (Hong Kong) Company Limited siRNA compositions and methods for potently inhibiting viral infection
EP2377934A4 (en) * 2008-12-12 2012-09-26 Kureha Corp PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF TUMOR AND ASTHMA
US20100233172A1 (en) * 2008-12-16 2010-09-16 Bristol-Myers Squibb Company Methods of inhibiting quiescent tumor proliferation
US20110288155A1 (en) 2008-12-18 2011-11-24 Elena Feinstein Sirna compounds and methods of use thereof
CA2748520C (en) 2008-12-26 2013-12-17 Se-Ho Kim Pharmaceutical composition containing an anionic drug, and a production method therefor
US9493774B2 (en) 2009-01-05 2016-11-15 Rxi Pharmaceuticals Corporation Inhibition of PCSK9 through RNAi
US20100233270A1 (en) 2009-01-08 2010-09-16 Northwestern University Delivery of Oligonucleotide-Functionalized Nanoparticles
WO2010083532A1 (en) * 2009-01-19 2010-07-22 The Research Foundaton Of State University Of New York Fatty acid binding proteins as drug targets for modulation of endocannabinoids
EP2389196A1 (en) * 2009-01-20 2011-11-30 Vib Vzw Phd2 inhibition for blood vessel normalization, and uses thereof
WO2010083615A1 (en) 2009-01-26 2010-07-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing apolipoprotein c-iii expression
BRPI1008109A2 (pt) * 2009-02-03 2015-08-25 Hoffmann La Roche "composições e métodos para a inibição de expressão de genes de ptp1b".
WO2010090762A1 (en) 2009-02-04 2010-08-12 Rxi Pharmaceuticals Corporation Rna duplexes with single stranded phosphorothioate nucleotide regions for additional functionality
JP5979877B2 (ja) 2009-02-12 2016-08-31 セル・シグナリング・テクノロジー・インコーポレイテツド ヒト癌における変異ｒｏｓ発現
CN102333869A (zh) * 2009-02-24 2012-01-25 里博克斯艾克斯有限公司 小干扰rna的改进设计
EP3424939A1 (en) 2009-03-02 2019-01-09 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Nucleic acid chemical modifications
CA2755773A1 (en) * 2009-03-19 2010-09-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Rna interference mediated inhibition of btb and cnc homology 1, basic leucine zipper transcription factor 1 (bach 1) gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
CA2753388C (en) 2009-03-23 2016-11-29 Quark Pharmaceuticals, Inc. Endo180 antibody to treat cancer and fibrotic disease
US20100239632A1 (en) 2009-03-23 2010-09-23 Warsaw Orthopedic, Inc. Drug depots for treatment of pain and inflammation in sinus and nasal cavities or cardiac tissue
WO2010120874A2 (en) 2009-04-14 2010-10-21 Chimeros, Inc. Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same
US8815586B2 (en) * 2009-04-24 2014-08-26 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Modulation of gene expression using oligomers that target gene regions downstream of 3′ untranslated regions
US8367350B2 (en) 2009-04-29 2013-02-05 Morehouse School Of Medicine Compositions and methods for diagnosis, prognosis and management of malaria
US8933049B2 (en) * 2009-05-05 2015-01-13 Medical Diagnostic Laboratories, Llc Repressor on IFN-λ promoter and siRNA against ZEB1 and BLIMP-1 to increase IFN-λ gene activity
MX352992B (es) 2009-05-05 2017-12-15 Beeologics Inc Prevencion y tratamiento de la enfermedad de nosema en abejas.
US9255266B2 (en) 2009-05-06 2016-02-09 Rutgers, The State University Of New Jersey RNA targeting in alpha-synucleinopathies
AU2010247389A1 (en) * 2009-05-15 2011-10-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Compositions and methods for inhibiting expression of glucocorticoid receptor (GCR) genes
WO2011005363A2 (en) * 2009-05-18 2011-01-13 Ensysce Biosciences, Inc. Carbon nanotubes complexed with multiple bioactive agents and methods related thereto
US20120128673A1 (en) 2009-05-20 2012-05-24 Schering Corporation Modulation of pilr receptors to treat microbial infections
US20100304995A1 (en) * 2009-05-22 2010-12-02 Li Shen Arrays and Methods for Reverse Genetic Functional Analysis
CA2764158A1 (en) 2009-06-01 2010-12-09 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotides for multivalent rna interference, compositions and methods of use thereof
WO2010140024A1 (en) * 2009-06-03 2010-12-09 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods for diagnosing and treating a renal disease in an individual
EP2437592A4 (en) 2009-06-05 2013-02-27 Univ Florida ISOLATION AND TARGETED SUPPRESSION OF BIOSYNTHETIC LIGNIN GENES FROM SUGAR TUBE
EP2440214A4 (en) 2009-06-08 2013-07-31 Quark Pharmaceuticals Inc METHOD FOR THE TREATMENT OF CHRONIC KIDNEY DISEASES
TR201811076T4 (tr) 2009-06-10 2018-08-27 Arbutus Biopharma Corp Geliştirilmiş lipit formulasyonu.
EP2440666B1 (en) 2009-06-10 2017-03-01 Temasek Life Sciences Laboratory Limited Virus induced gene silencing (vigs) for functional analysis of genes in cotton
AU2010260148A1 (en) * 2009-06-15 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated dsRNA targeting the PCSK9 gene
US9051567B2 (en) 2009-06-15 2015-06-09 Tekmira Pharmaceuticals Corporation Methods for increasing efficacy of lipid formulated siRNA
US20100324124A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods relating to DNA-based particles
US20100323018A1 (en) * 2009-06-17 2010-12-23 Massachusetts Institute Of Technology Branched DNA/RNA monomers and uses thereof
GB0910723D0 (en) 2009-06-22 2009-08-05 Sylentis Sau Novel drugs for inhibition of gene expression
US8283333B2 (en) 2009-07-01 2012-10-09 Protiva Biotherapeutics, Inc. Lipid formulations for nucleic acid delivery
US8569256B2 (en) 2009-07-01 2013-10-29 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US9018187B2 (en) 2009-07-01 2015-04-28 Protiva Biotherapeutics, Inc. Cationic lipids and methods for the delivery of therapeutic agents
US8871730B2 (en) 2009-07-13 2014-10-28 Somagenics Inc. Chemical modification of short small hairpin RNAs for inhibition of gene expression
WO2011011447A1 (en) 2009-07-20 2011-01-27 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing ebola virus gene expression
LT2769737T (lt) 2009-07-20 2017-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ctla4 antikūno derinys su etopozidu, skirtas sinerginiam proliferacinių ligų gydymui
AU2010282340B2 (en) 2009-08-13 2016-12-22 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
EP2464336A4 (en) 2009-08-14 2013-11-20 Alnylam Pharmaceuticals Inc COMPOSITIONS FORMULATED IN LIPIDS AND METHODS OF INHIBITING THE EXPRESSION OF EBOLA VIRUS GENE
EP2470217B1 (en) 2009-08-24 2020-10-07 Phigenix, Inc. Targeting pax2 for the treatment of breast cancer
EP2475388B1 (en) 2009-09-10 2017-11-08 Merck Sharp & Dohme Corp. Use of il-33 antagonists to treat fibrotic disease
EP2295543A1 (en) 2009-09-11 2011-03-16 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Method for the preparation of an influenza virus
WO2011032100A1 (en) 2009-09-11 2011-03-17 Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitors of kshv vil6 and human il6
CN102639115A (zh) 2009-09-15 2012-08-15 阿尔尼拉姆医药品有限公司 脂质配制的组合物及抑制eg5和vegf基因的表达的方法
US8916693B2 (en) 2009-09-17 2014-12-23 Nektar Therapeutics Monoconjugated chitosans as delivery agents for small interfering nucleic acids
US9187746B2 (en) 2009-09-22 2015-11-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Dual targeting siRNA agents
CA2775092A1 (en) * 2009-09-23 2011-03-31 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes expressed in cancer
US20150025122A1 (en) 2009-10-12 2015-01-22 Larry J. Smith Methods and Compositions for Modulating Gene Expression Using Oligonucleotide Based Drugs Administered in vivo or in vitro
US8962584B2 (en) 2009-10-14 2015-02-24 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem, Ltd. Compositions for controlling Varroa mites in bees
JP5866119B2 (ja) 2009-10-30 2016-02-17 ノースウェスタン ユニバーシティ 鋳型ナノ複合体
US9101643B2 (en) 2009-11-03 2015-08-11 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Lipid formulated compositions and methods for inhibiting expression of transthyretin (TTR)
US9799416B2 (en) * 2009-11-06 2017-10-24 Terrapower, Llc Methods and systems for migrating fuel assemblies in a nuclear fission reactor
US8901097B2 (en) 2009-11-08 2014-12-02 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods for delivery of siRNA to the spinal cord and therapies arising therefrom
WO2011062997A2 (en) 2009-11-17 2011-05-26 Musc Foundation For Research Development Human monoclonal antibodies to human nucleolin
DK2504435T3 (da) 2009-11-26 2019-12-09 Quark Pharmaceuticals Inc Sirna-forbindelser omfattende terminale substitutioner
WO2011071860A2 (en) 2009-12-07 2011-06-16 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions for nucleic acid delivery
EP2510098B1 (en) 2009-12-09 2015-02-11 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the cns
JP5685267B2 (ja) * 2009-12-09 2015-03-18 日東電工株式会社 Ｈｓｐ４７発現の調節
EP2509421B1 (en) 2009-12-10 2020-02-05 Cedars-Sinai Medical Center Drug delivery of temozolomide for systemic based treatment of cancer
EP2336171A1 (en) 2009-12-11 2011-06-22 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Novel targets for the treatment of proliferative diseases
WO2011084357A1 (en) 2009-12-17 2011-07-14 Schering Corporation Modulation of pilr to treat immune disorders
KR101605932B1 (ko) 2009-12-18 2016-03-24 노파르티스 아게 Ｈｓｆ1-관련 질환을 치료하기 위한 유기 조성물
EP3494963A1 (en) 2009-12-18 2019-06-12 The University of British Columbia Methods and compositions for delivery of nucleic acids
AU2010334799A1 (en) 2009-12-23 2012-07-12 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Influenza targets
EP2515916B1 (en) 2009-12-23 2016-03-09 Gradalis, Inc. Furin-knockdown and gm-csf-augmented (fang) cancer vaccine
US20130023578A1 (en) 2009-12-31 2013-01-24 Samyang Biopharmaceuticals Corporation siRNA for inhibition of c-Met expression and anticancer composition containing the same
TW201124159A (en) * 2010-01-07 2011-07-16 Univ Nat Cheng Kung Small interference RNA molecule and applications thereof
WO2011084193A1 (en) 2010-01-07 2011-07-14 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide compounds comprising non-nucleotide overhangs
US9200277B2 (en) * 2010-01-11 2015-12-01 Curna, Inc. Treatment of sex hormone binding globulin (SHBG) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to SHBG
WO2011088058A1 (en) * 2010-01-12 2011-07-21 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expressions of factor vii and pten genes
DE102010004957A1 (de) 2010-01-14 2011-07-21 Universitätsklinikum Jena, 07743 Biologisch wirksame Moleküle zur Beeinflussung von Virus-, Bakterien-, Parasiten-infizierten Zellen und/oder Tumorzellen und Verfahren zu deren Anwendung
WO2011094580A2 (en) 2010-01-28 2011-08-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chelated copper for use in the preparation of conjugated oligonucleotides
WO2011100131A2 (en) 2010-01-28 2011-08-18 Alnylam Pharmacuticals, Inc. Monomers and oligonucleotides comprising cycloaddition adduct(s)
US8722641B2 (en) 2010-01-29 2014-05-13 St. Jude Children's Research Hospital Oligonucleotides which inhibit p53 induction in response to cellular stress
AU2011214465A1 (en) 2010-02-10 2012-08-30 Novartis Ag Methods and compounds for muscle growth
WO2011116351A2 (en) 2010-03-19 2011-09-22 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
CN106074591B (zh) 2010-03-24 2020-01-14 菲奥医药公司 眼部症候中的rna干扰
BR112012024049A2 (pt) 2010-03-24 2017-03-01 Rxi Pharmaceuticals Corp interferência de rna em indicações dérmicas e fibróticas
EP2550000A4 (en) 2010-03-24 2014-03-26 Advirna Inc RNAI COMPOUNDS OF REDUCED SIZE ADMINISTERING
US8455455B1 (en) 2010-03-31 2013-06-04 Protiva Biotherapeutics, Inc. Compositions and methods for silencing genes involved in hemorrhagic fever
WO2011123621A2 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Alnylam Pharmaceuticals Inc. 2' and 5' modified monomers and oligonucleotides
US20130260460A1 (en) 2010-04-22 2013-10-03 Isis Pharmaceuticals Inc Conformationally restricted dinucleotide monomers and oligonucleotides
US10913767B2 (en) 2010-04-22 2021-02-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising acyclic and abasic nucleosides and analogs
WO2011133871A2 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. 5'-end derivatives
WO2011133658A1 (en) 2010-04-22 2011-10-27 Boston Medical Center Corporation Compositions and methods for targeting and delivering therapeutics into cells
HRP20170737T1 (hr) 2010-04-29 2017-07-28 Ionis Pharmaceuticals, Inc. Modulacija ekspresije transtiretina
WO2011137363A1 (en) 2010-04-30 2011-11-03 Allergan, Inc. Novel treatment for age related macular degeneration and ocular ischemic disease associated with complement activation by targeting 5-lipoxygenase
AU2011248184B2 (en) 2010-05-04 2015-12-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Detection and treatment of fibrosis
US8563243B2 (en) * 2010-05-12 2013-10-22 University Of South Carolina Methods for affecting homology-directed DNA double stranded break repair
CN102905728B (zh) 2010-05-26 2015-11-25 西莱克塔生物科技公司 具有不偶合的佐剂的纳米载体组合物
EP2390327A1 (en) 2010-05-27 2011-11-30 Sylentis S.A. siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
DE102010022937A1 (de) 2010-06-04 2011-12-08 Universitätsklinikum Jena Zellspezifisch aktivierbare biologisch wirksame Moleküle auf Grundlage von siRNA, Verfahren zu deren Aktivierung sowie Applikationskit zur Verabreichung
US20130236968A1 (en) 2010-06-21 2013-09-12 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional copolymers for nucleic acid delivery
RU2012153703A (ru) 2010-06-24 2014-07-27 Кварк Фармасьютикалс, Инк. Соединения двухцепочечных рнк к rhoa и их применение
WO2012000104A1 (en) 2010-06-30 2012-01-05 Protiva Biotherapeutics, Inc. Non-liposomal systems for nucleic acid delivery
US20130323269A1 (en) 2010-07-30 2013-12-05 Muthiah Manoharan Methods and compositions for delivery of active agents
WO2012016188A2 (en) 2010-07-30 2012-02-02 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for delivery of active agents
US20120101108A1 (en) 2010-08-06 2012-04-26 Cell Signaling Technology, Inc. Anaplastic Lymphoma Kinase In Kidney Cancer
WO2012027206A1 (en) 2010-08-24 2012-03-01 Merck Sharp & Dohme Corp. SINGLE-STRANDED RNAi AGENTS CONTAINING AN INTERNAL, NON-NUCLEIC ACID SPACER
US8933051B2 (en) 2010-09-30 2015-01-13 University Of Zurich Treatment of B-cell lymphoma with microRNA
WO2013052006A1 (en) * 2010-10-07 2013-04-11 Agency For Science, Technology And Research (A*Star) Parp-1 inhibitors
WO2012051491A1 (en) 2010-10-14 2012-04-19 The United States Of America, As Represented By The Secretary National Institutes Of Health Compositions and methods for controlling neurotropic viral pathogenesis by micro-rna targeting
EP2631291B1 (en) * 2010-10-22 2019-05-15 OliX Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules inducing rna interference, and uses thereof
EP3766975A1 (en) 2010-10-29 2021-01-20 Sirna Therapeutics, Inc. Rna interference mediated inhibition of gene expression using short interfering nucleic acid (sina)
WO2012071436A1 (en) 2010-11-24 2012-05-31 Genentech, Inc. Method of treating autoimmune inflammatory disorders using il-23r loss-of-function mutants
US20130324591A1 (en) 2010-12-06 2013-12-05 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double stranded oligonucleotide compounds comprising positional modifications
WO2012102793A2 (en) 2010-12-10 2012-08-02 Zirus, Inc. Mammalian genes involved in toxicity and infection
US8575328B2 (en) * 2010-12-14 2013-11-05 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Formicidae (ant) control using double-stranded RNA constructs
US9623041B2 (en) 2010-12-30 2017-04-18 Cedars-Sinai Medical Center Polymalic acid-based nanobiopolymer compositions
US20150018408A1 (en) 2013-07-10 2015-01-15 The Regents Of The University Of Michigan Therapeutic antibodies and uses thereof
WO2012096960A2 (en) 2011-01-10 2012-07-19 The Regents Of The University Of Michigan Stem cell factor inhibitor
JP5902197B2 (ja) 2011-01-11 2016-04-13 アルニラム・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド Ｐｅｇ化脂質および薬剤送達のためのそれらの使用
DE102011009470A1 (de) 2011-01-21 2012-08-09 Friedrich-Schiller-Universität Jena Biologisch wirksame Nukleotid-Moleküle zur gezielten Abtötung von Zellen, Verwendung derselben sowie Applikationskit
SI2670411T1 (sl) 2011-02-02 2019-06-28 Excaliard Pharmaceuticals, Inc. Protismiselne spojine, ki so usmerjene na rastni faktor veznega tkiva (CTGF), za uporabo v postopku zdravljenja keloidov ali hipertrofnih brazgotin
JP2014506789A (ja) 2011-02-03 2014-03-20 マーナ セラピューティクス インコーポレイテッド ｍｉＲ−１２４の合成模倣体
WO2012118911A1 (en) 2011-03-03 2012-09-07 Quark Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
US9796979B2 (en) 2011-03-03 2017-10-24 Quark Pharmaceuticals Inc. Oligonucleotide modulators of the toll-like receptor pathway
WO2012125554A2 (en) * 2011-03-11 2012-09-20 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Compositions and methods for the treatment of cancer
KR20140026410A (ko) 2011-03-15 2014-03-05 유니버시티 오브 유타 리서치 파운데이션 혈관 관련 황반병증 및 이의 증상을 진단 및 치료하는 방법
WO2012135696A2 (en) * 2011-04-01 2012-10-04 University Of South Alabama Methods and compositions for the diagnosis, classification, and treatment of cancer
US10266565B2 (en) 2011-04-12 2019-04-23 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Peptide mimetic ligands of polo-like kinase 1 polo box domain and methods of use
CN105886506A (zh) 2011-04-13 2016-08-24 Isis制药公司 Ptp1b 表达的反义调节
AU2012242455A1 (en) * 2011-04-15 2013-11-28 Molecular Transfer, Inc. Agents for improved delivery of nucleic acids to eukaryotic cells
US8716257B2 (en) * 2011-04-15 2014-05-06 Sutter West Bay Hospitals CMV gene products promote cancer stem cell growth
AU2012259312A1 (en) 2011-05-20 2013-12-12 Government Of The United States, As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services Blockade of tl1a-dr3 interactions to ameliorate t cell mediated disease pathology and antibodies thereof
ES2572915T3 (es) 2011-06-02 2016-06-03 The University Of Louisville Research Foundation, Inc. Nanopartículas conjugadas a un agente antinucleolina
US9228188B2 (en) 2011-06-21 2016-01-05 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and method for inhibiting hepcidin antimicrobial peptide (HAMP) or HAMP-related gene expression
EP3444348A1 (en) 2011-06-21 2019-02-20 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
EP3388068A1 (en) 2011-06-21 2018-10-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Composition and methods for inhibition of expression of protein c (proc) genes
KR20230084331A (ko) 2011-06-21 2023-06-12 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 아포리포단백질 c-iii(apoc3) 유전자의 발현 억제를 위한 조성물 및 방법
WO2013003697A1 (en) 2011-06-30 2013-01-03 Trustees Of Boston University Method for controlling tumor growth, angiogenesis and metastasis using immunoglobulin containing and proline rich receptor-1 (igpr-1)
WO2013001372A2 (en) 2011-06-30 2013-01-03 University Of Oslo Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells
JP2014520792A (ja) 2011-07-06 2014-08-25 スィーケフス ソールラン ホーエフ Ｅｇｆｒ標的治療
WO2013006861A1 (en) 2011-07-07 2013-01-10 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Sorghum grain shattering gene and uses thereof in altering seed dispersal
US8853181B2 (en) 2011-07-21 2014-10-07 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Fidgetin-like 2 as a target to enhance wound healing
US9120858B2 (en) 2011-07-22 2015-09-01 The Research Foundation Of State University Of New York Antibodies to the B12-transcobalamin receptor
DE102011118024A1 (de) 2011-08-01 2013-02-07 Technische Universität Dresden Inhibitor der Expression der Pro-Caspase 1
EP4008786A3 (en) 2011-09-06 2022-08-03 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. The mirna-212/132 family as a therapeutic target
JP2014527072A (ja) 2011-09-09 2014-10-09 バイオメド リアルティー， エル．ピー． ウイルスタンパク質の集合を制御するための方法および組成物
WO2013040251A2 (en) 2011-09-13 2013-03-21 Asurgen, Inc. Methods and compositions involving mir-135b for distinguishing pancreatic cancer from benign pancreatic disease
WO2013049389A1 (en) 2011-09-27 2013-04-04 Yale University Compositions and methods for transient expression of recombinant rna
EP2760477B1 (en) 2011-09-27 2018-08-08 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Di-aliphatic substituted pegylated lipids
ES2745373T3 (es) 2011-10-18 2020-03-02 Dicerna Pharmaceuticals Inc Lípidos catiónicos de amina y uso de los mismos
WO2013070821A1 (en) 2011-11-08 2013-05-16 Quark Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for treating diseases, disorders or injury of the nervous system
EP2592146A3 (en) * 2011-11-14 2013-07-24 Silenseed Ltd Methods and compositions for treating prostate cancer
MY167390A (en) 2011-11-18 2018-08-16 Alnylam Pharmaceuticals Inc Rnai agents, compositions and methods of use thereof for treating transthyretin (ttr) associated diseases
WO2013082529A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Yale University Enzymatic synthesis of poly(amine-co-esters) and methods of use thereof for gene delivery
CN104080480A (zh) 2012-01-01 2014-10-01 奇比艾企业有限公司 用于选择性递送治疗剂和诊断剂的endo180靶向微粒
US9464291B2 (en) * 2012-01-06 2016-10-11 University Of South Alabama Methods and compositions for the treatment of cancer
EP2802658A2 (en) 2012-01-09 2014-11-19 Novartis AG Rnai agents to treat beta-catenin related diseases
JP2016528161A (ja) 2012-01-12 2016-09-15 クォーク ファーマシューティカルズ インコーポレーティッドＱｕａｒｋ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． 聴覚およびバランス障害を治療するための併用療法
US20150126438A1 (en) 2012-01-24 2015-05-07 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Novel ChREBP Isoforms and Methods Using the Same
WO2013138456A1 (en) 2012-03-14 2013-09-19 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Lim kinasemodulating agents for neurofibromatoses therapy and methods for screening for same
EP2825648B1 (en) 2012-03-15 2018-09-05 CuRNA, Inc. Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf
ES2655842T3 (es) 2012-04-18 2018-02-21 Cell Signaling Technology, Inc. EGFR y ROS1 en el cáncer
EP3358013B1 (en) 2012-05-02 2020-06-24 Sirna Therapeutics, Inc. Short interfering nucleic acid (sina) compositions
US9980942B2 (en) 2012-05-02 2018-05-29 Children's Hospital Medical Center Rejuvenation of precursor cells
DK2853597T3 (en) 2012-05-22 2019-04-08 Olix Pharmaceuticals Inc RNA INTERFERENCE-INducing NUCLEIC ACID MOLECULES WITH CELL PENETENING EQUIPMENT AND USE THEREOF
DK2867368T3 (da) 2012-07-06 2022-01-31 Roussy Inst Gustave Samtidig detektering af kannibalisme og senescens som prognostisk markør for cancer
WO2014018375A1 (en) 2012-07-23 2014-01-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Cyp8b1 and uses thereof in therapeutic and diagnostic methods
CA2883130A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 The General Hospital Corporation Biotin complexes for treatment and diagnosis of alzheimer's disease
GB201215857D0 (en) 2012-09-05 2012-10-24 Sylentis Sau siRNA and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
ES2750125T3 (es) 2012-09-05 2020-03-25 Sylentis Sau ARNip y su uso en métodos y composiciones para el tratamiento y/o la prevención de afecciones oculares
DK2895607T3 (da) 2012-09-12 2021-05-25 Quark Pharmaceuticals Inc Dobbeltstrengede oligonukleotidmolekyler til ddit4 og fremgangsmåder til anvendelse deraf
AU2013315524B2 (en) 2012-09-12 2019-01-31 Quark Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded oligonucleotide molecules to p53 and methods of use thereof
PT2897620T (pt) 2012-09-21 2020-09-03 Intensity Therapeutics Inc Método de tratamento de cancro
EP2904119B1 (en) * 2012-10-02 2020-06-17 The General Hospital Corporation d/b/a Massachusetts General Hospital Methods relating to dna-sensing pathway related conditions
WO2014055825A1 (en) 2012-10-04 2014-04-10 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services A formulation of mycobacterial components as an adjuvant for inducing th17 responses
WO2014068072A1 (en) 2012-10-31 2014-05-08 Institut Gustave-Roussy Identification, assessment and therapy of essential thrombocythemia with resistance to jak2 inhibitors
CA2930339A1 (en) 2012-11-13 2014-05-22 Jan Lotvall Delivery of therapeutic agent
EP3929206A1 (en) 2012-11-15 2021-12-29 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Long-acting compstatin analogs and related compositions and methods
DE102012022596B4 (de) 2012-11-15 2017-05-04 Friedrich-Schiller-Universität Jena Neue zellspezifisch wirksame Nukleotid-Moleküle und Applikationskit zu deren Anwendung
AU2013352156B2 (en) 2012-11-27 2018-12-06 Children's Medical Center Corporation Targeting BCL11A distal regulatory elements for fetal hemoglobin reinduction
KR102096014B1 (ko) 2012-12-05 2020-04-03 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 PCSK9 iRNA 조성물 및 그 사용 방법
US9970002B2 (en) 2012-12-12 2018-05-15 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for functional nucleic acid delivery
AU2013362134B2 (en) 2012-12-21 2018-07-05 Sykehuset Sorlandet Hf EGFR targeted therapy of neurological disorders and pain
US9206423B2 (en) * 2012-12-30 2015-12-08 The Regents Of The University Of California Methods of modulating compliance of the trabecular meshwork
US10258682B2 (en) 2013-01-16 2019-04-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health & Human Services Attenuated chlamydia vaccine
DE102013003869B4 (de) 2013-02-27 2016-11-24 Friedrich-Schiller-Universität Jena Verfahren zur gezielten Abtötung von Zellen durch zur mRNA-Anbindung ausgerichtete Nukleotid-Moleküle sowie Nukleotid-Moleküle und Applikationskit für solche Verwendung
EP2968149B1 (en) 2013-03-14 2024-05-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Process for formulating an anionic agent
CN105050595A (zh) * 2013-03-15 2015-11-11 基因泰克公司 通过抑制含布罗莫结构域蛋白brd7和brd9治疗th2介导的疾病
ES2900301T3 (es) * 2013-03-15 2022-03-16 Novartis Ag Biomarcadores asociados con la inhibición de BRM
US10308687B2 (en) 2013-03-15 2019-06-04 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Cell-penetrating compstatin analogs and uses thereof
US9937231B2 (en) 2013-03-27 2018-04-10 The General Hospital Corporation Methods and agents for treating Alzheimer's disease
CA2912801A1 (en) 2013-05-17 2014-11-20 Medimmune, Llc Receptors for b7-h4
AU2014302038B2 (en) 2013-06-25 2019-11-14 Epiaxis Therapeutics Pty Ltd Methods and compositions for modulating cancer stem cells
TW201534578A (zh) 2013-07-08 2015-09-16 Daiichi Sankyo Co Ltd 新穎脂質
JP6668236B2 (ja) 2013-07-19 2020-03-18 モンサント テクノロジー エルエルシー Ｌｅｐｔｉｎｏｔａｒｓａ防除用組成物及びその方法
US10711106B2 (en) 2013-07-25 2020-07-14 The University Of Chicago High aspect ratio nanofibril materials
EP3027223A1 (en) 2013-07-31 2016-06-08 QBI Enterprises Ltd. Methods of use of sphingolipid polyalkylamine oligonucleotide compounds
US9889200B2 (en) 2013-07-31 2018-02-13 Qbi Enterprises Ltd. Sphingolipid-polyalkylamine-oligonucleotide compounds
KR102365486B1 (ko) 2013-08-28 2022-02-18 아이오니스 파마수티컬즈, 인코포레이티드 프리칼리크레인 (pkk) 발현의 조절
IL312865B2 (en) 2013-09-11 2025-06-01 Eagle Biologics Inc Liquid protein formulations containing viscosity-lowering agents
JP6998657B2 (ja) 2013-09-18 2022-02-04 エピアクシス セラピューティクス プロプライエタリー リミテッド 幹細胞調節ｉｉ
JP6546161B2 (ja) 2013-10-04 2019-07-17 ノバルティス アーゲー Ｂ型肝炎ウイルスを治療するための有機化合物
KR102298475B1 (ko) 2013-10-04 2021-09-06 노파르티스 아게 ＲＮＡ 간섭에 사용하기 위한 ＲＮＡｉ 작용제를 위한 3' 말단 캡
EP2865758A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the ORAI1 gene
EP2865756A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the FLAP gene.
EP2865757A1 (en) 2013-10-22 2015-04-29 Sylentis, S.A.U. siRNA and their use in methods and compositions for inhibiting the expression of the PDK1 gene.
CA2929574A1 (en) 2013-11-11 2015-05-14 Sirna Therapeutics, Inc. Systemic delivery of myostatin short interfering nucleic acids (sina) conjugated to a lipophilic moiety
US10441637B2 (en) 2013-11-21 2019-10-15 Sena Research, Inc. Methods for structural determination of selenium derivatized nucleic acid complexes
CN106061488B (zh) 2013-12-02 2021-04-09 菲奥医药公司 癌症的免疫治疗
US10150965B2 (en) 2013-12-06 2018-12-11 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for the specific inhibition of transthyretin (TTR) by double-stranded RNA
CN104830906B (zh) 2014-02-12 2018-09-04 北京维通达生物技术有限公司 一种重编程获得功能性人肝脏实质细胞的方法
US10011837B2 (en) 2014-03-04 2018-07-03 Sylentis Sau SiRNAs and their use in methods and compositions for the treatment and/or prevention of eye conditions
MX373460B (es) 2014-03-11 2020-04-07 Cellectis Metodo para generar celulas t compatibles para el trasplante alogenico.
DK3119887T3 (da) * 2014-03-20 2019-05-20 Oommen Varghese Forbedrede korte interfererende ribonukleinsyremolekyler
JP6771387B2 (ja) 2014-03-25 2020-10-21 アークトゥラス・セラピューティクス・インコーポレイテッドＡｒｃｔｕｒｕｓ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ． 遺伝子サイレンシング用トランスサイレチン対立遺伝子選択的ｕｎａオリゴマー
US9856475B2 (en) 2014-03-25 2018-01-02 Arcturus Therapeutics, Inc. Formulations for treating amyloidosis
AU2015236215B2 (en) 2014-03-25 2020-03-19 Arcturus Therapeutics, Inc. UNA oligomers having reduced off-target effects in gene silencing
BR112016022711A2 (pt) 2014-04-01 2017-10-31 Monsanto Technology Llc composições e métodos para controle de pragas de inseto
MY192634A (en) 2014-04-01 2022-08-29 Biogen Ma Inc Compositions for modulating sod-1 expression
ES2744186T3 (es) 2014-04-25 2020-02-24 Childrens Medical Center Composiciones y métodos para tratar las hemoglobinopatías
US11279934B2 (en) 2014-04-28 2022-03-22 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating cancer using nucleic acids targeting MDM2 or MYCN
JP6665111B2 (ja) 2014-05-01 2020-03-13 アイオーニス ファーマシューティカルズ， インコーポレーテッドＩｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ． Ｐｋｋ発現を調節するための組成物及び方法
WO2015168674A1 (en) 2014-05-02 2015-11-05 Research Institute At Nationwide Children's Hospital Compositions and methods for anti-lyst immunomodulation
WO2015175545A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 The Johns Hopkins University Highly stable biodegradable gene vector platforms for overcoming biological barriers
WO2015175539A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 The Johns Hopkins University Engineering synthetic brain penetrating gene vectors
US10100308B2 (en) 2014-05-29 2018-10-16 Trustees Of Dartmouth College Method for selectively inhibiting ACAT1 in the treatment of neurodegenerative diseases
EP3164113B1 (en) 2014-06-04 2019-03-27 Exicure, Inc. Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
TW201620526A (zh) 2014-06-17 2016-06-16 愛羅海德研究公司 用於抑制α－１抗胰蛋白酶基因表現之組合物及方法
CN104120127B (zh) * 2014-07-01 2016-09-21 清华大学 分离的寡核苷酸及其应用
AU2015296700B2 (en) 2014-07-29 2021-10-21 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling insect pests
US20170348402A1 (en) 2014-07-30 2017-12-07 The Research Foundation For The State University Of New York System and method for delivering genetic material or protein to cells
WO2016023974A1 (de) 2014-08-14 2016-02-18 Friedrich-Schiller-Universität Jena Peptid zur verwendung in der reduktion von nebenwirkungen in form von immunstimulatorischen reaktionen/effekten
WO2016028940A1 (en) 2014-08-19 2016-02-25 Northwestern University Protein/oligonucleotide core-shell nanoparticle therapeutics
AU2015309686B2 (en) 2014-08-25 2020-05-14 Epiaxis Therapeutics Pty Ltd Compositions for modulating cancer stem cells and uses therefor
EP4137138A1 (en) 2014-08-29 2023-02-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating transthyretin (ttr) mediated amyloidosis
KR102506169B1 (ko) 2014-09-05 2023-03-08 피오 파마슈티칼스 코프. Tyr 또는 mmp1을 표적화하는 핵산을 사용한 노화 및 피부 장애의 치료 방법
KR102473092B1 (ko) 2014-09-15 2022-12-01 칠드런'즈 메디컬 센터 코포레이션 히스톤 h3-리신 트리메틸화를 제거함으로써 체세포 핵 이식(scnt) 효율을 증가시키는 방법 및 조성물
US20170296561A1 (en) 2014-09-25 2017-10-19 Cold Spring Harbor Laboratory Treatment of rett syndrome
SG11201702614SA (en) 2014-10-01 2017-04-27 Eagle Biolog Inc Polysaccharide and nucleic acid formulations containing viscosity-lowering agents
TWI864340B (zh) 2014-10-10 2024-12-01 美商艾爾妮蘭製藥公司 用於抑制hao1(羥酸氧化酶1(乙醇酸鹽氧化酶))基因表現的組合物及方法
WO2016057693A1 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhalation delivery of conjugated oligonucleotide
WO2016057898A1 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Idera Pharmaceuticals, Inc. Treatment of cancer using tlr9 agonist with checkpoint inhibitors
US10538762B2 (en) * 2014-10-14 2020-01-21 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Allele selective inhibition of mutant C9orf72 foci expression by duplex RNAS targeting the expanded hexanucleotide repeat
EP3209794A1 (en) 2014-10-22 2017-08-30 Katholieke Universiteit Leuven KU Leuven Research & Development Modulating adipose tissue and adipogenesis
SG11201703638XA (en) 2014-11-10 2017-06-29 Alnylam Pharmaceuticals Inc Hepatitis b virus (hbv) irna compositions and methods of use thereof
EP3218497A1 (en) 2014-11-12 2017-09-20 NMC Inc. Transgenic plants with engineered redox sensitive modulation of photosynthetic antenna complex pigments and methods for making the same
CA2968114A1 (en) 2014-11-17 2016-05-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof
WO2016081621A1 (en) 2014-11-18 2016-05-26 Yale University Formulations for targeted release of agents under low ph conditions and methods of use thereof
US11213593B2 (en) 2014-11-21 2022-01-04 Northwestern University Sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
US20190002876A1 (en) * 2014-12-09 2019-01-03 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for treatment of friedreich's ataxia
US20180002702A1 (en) 2014-12-26 2018-01-04 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10264976B2 (en) 2014-12-26 2019-04-23 The University Of Akron Biocompatible flavonoid compounds for organelle and cell imaging
US10792299B2 (en) 2014-12-26 2020-10-06 Nitto Denko Corporation Methods and compositions for treating malignant tumors associated with kras mutation
US10968449B2 (en) 2015-01-22 2021-04-06 Monsanto Technology Llc Compositions and methods for controlling Leptinotarsa
EP3277289A4 (en) 2015-04-01 2018-12-05 Arcturus Therapeutics, Inc. Therapeutic una oligomers and uses thereof
WO2016161388A1 (en) 2015-04-03 2016-10-06 University Of Massachusetts Fully stabilized asymmetric sirna
KR20250005546A (ko) 2015-04-13 2025-01-09 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 안지오포이에틴-유사 3(angptl3) irna 조성물 및 이의 이용 방법
US20180126014A1 (en) 2015-04-15 2018-05-10 Yale University Compositions for enhancing delivery of agents across the blood brain barrier and methods of use thereof
WO2016179394A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Malik Mohammad Tariq Anti-nucleolin agent-conjugated nanoparticles as radio-sensitizers and mri and/or x-ray contrast agents
ES2835861T5 (en) 2015-05-08 2025-02-18 Childrens Medical Ct Corp Targeting bcl11a enhancer functional regions for fetal hemoglobin reinduction
CA3026154A1 (en) 2015-06-03 2016-12-08 The University Of Queensland Mobilizing agents and uses therefor
IL256175B2 (en) 2015-06-10 2024-10-01 Univ Texas Using exosomes to treat the disease
WO2017002928A1 (ja) * 2015-06-30 2017-01-05 岸本　忠三 新規な肺疾患治療剤および／またはそのスクリーニング方法
US11001845B2 (en) 2015-07-06 2021-05-11 Phio Pharmaceuticals Corp. Nucleic acid molecules targeting superoxide dismutase 1 (SOD1)
US10808247B2 (en) 2015-07-06 2020-10-20 Phio Pharmaceuticals Corp. Methods for treating neurological disorders using a synergistic small molecule and nucleic acids therapeutic approach
PE20180800A1 (es) 2015-07-10 2018-05-09 Ionis Pharmaceuticals Inc Moduladores de diaciglicerol aciltransferasa 2 (dgat2)
WO2017015671A1 (en) 2015-07-23 2017-01-26 Arcturus Therapeutics, Inc. Compositions for treating amyloidosis
JP6896703B2 (ja) 2015-07-31 2021-06-30 アルナイラム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッドＡｌｎｙｌａｍ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． ＴＴＲ関連疾患を治療または予防するためのトランスサイレチン（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物およびその使用方法
WO2017030973A1 (en) 2015-08-14 2017-02-23 University Of Massachusetts Bioactive conjugates for oligonucleotide delivery
WO2017035278A1 (en) 2015-08-24 2017-03-02 Halo-Bio Rnai Therapeutics, Inc. Polynucleotide nanoparticles for the modulation of gene expression and uses thereof
MA44908A (fr) 2015-09-08 2018-07-18 Sylentis Sau Molécules d'arnsi et leur utilisation dans des procédés et des compositions pour inhiber l'expression du gène nrarp
GB201516685D0 (en) * 2015-09-21 2015-11-04 Varghese Oommen P And Oommen Oommen P Nucleic acid molecules with enhanced activity
EP3352785A1 (en) 2015-09-23 2018-08-01 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for modified dendrimer nanoparticle vaccine delivery
US10383935B2 (en) 2015-09-23 2019-08-20 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
US10086063B2 (en) 2015-09-23 2018-10-02 Regents Of The University Of Minnesota Methods of making and using live attenuated viruses
JP7628764B2 (ja) 2015-09-29 2025-02-12 アムジエン・インコーポレーテツド Ａｓｇｒ阻害剤
JOP20160211B1 (ar) * 2015-10-01 2021-08-17 Arrowhead Pharmaceuticals Inc تراكيب وأساليب لتثبيط تعبير جيني للـ lpa
CA3287719A1 (en) 2015-10-07 2026-03-02 Apellis Pharmaceuticals, Inc. Use of long-acting compstatin analog for treating a complement-mediated disorder
CN109563509B (zh) 2015-10-19 2022-08-09 菲奥医药公司 靶向长非编码rna的减小尺寸的自递送核酸化合物
EP3377630A4 (en) 2015-11-16 2020-01-01 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of age-related macular degeneration using rna complexes that target myd88 or tlr3
WO2017095751A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Partikula Llc Compositions and methods for modulating cancer cell metabolism
EP3386544B1 (en) 2015-12-10 2020-11-25 Fibrogen, Inc. Methods for treatment of motor neuron diseases
DK3391875T3 (da) 2015-12-18 2022-01-24 Samyang Holdings Corp Fremgangsmåde til fremstilling af polymer micelle, der indeholder et anionisk lægemiddel
BR102017001164A2 (pt) 2016-01-26 2019-03-06 Embrapa - Empresa Brasileira De Pesquisa Agropecuária Composições de rna de fita dupla para controle de diaphorina citri e métodos de uso.
US10478503B2 (en) 2016-01-31 2019-11-19 University Of Massachusetts Branched oligonucleotides
EP3411481A4 (en) 2016-02-02 2020-02-26 Olix Pharmaceuticals, Inc. TREATMENT OF DISEASES ASSOCIATED WITH ANGIOGENESIS USING ANGPT2 AND PDGFB TARGETED RNA COMPLEXES
JP6944942B2 (ja) 2016-02-02 2021-10-06 オリックス ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド ＩＬ４Ｒα、ＴＲＰＡ１、またはＦ２ＲＬ１を標的とするＲＮＡ複合体を用いたアトピー性皮膚炎および喘息の治療
US12447166B2 (en) 2016-02-25 2025-10-21 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
CA3014764A1 (en) 2016-02-25 2017-08-31 Applied Biological Laboratories, Inc. Compositions and methods for protecting against airborne pathogens and irritants
US10767178B2 (en) 2016-02-26 2020-09-08 Yale University Compositions and methods of using piRNAS in cancer diagnostics and therapeutics
EP3423106B1 (en) 2016-03-01 2022-07-27 Alexion Pharmaceuticals, Inc. Biodegradable activated polymers for therapeutic delivery
WO2017152073A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Methods and compositions for ex vivo expansion of very small embryonic-like stem cells (vsels)
US10246709B2 (en) 2016-03-07 2019-04-02 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. Targeting ligands for therapeutic compounds
BR112018068461A2 (pt) 2016-03-15 2019-01-22 Mersana Therapeutics Inc conjugado, composição farmacêutica, métodos para preparação de um conjugado e para alívio de um sintoma de um câncer.
US10858656B2 (en) 2016-04-01 2020-12-08 Avidity Biosciences, Inc. KRAS nucleic acids and uses thereof
MA45469A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques de bêta-caténine et leurs utilisations
WO2017173453A1 (en) 2016-04-01 2017-10-05 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Stimuli-responsive nanoparticles for biomedical applications
KR102775461B1 (ko) 2016-04-01 2025-02-28 어비디티 바이오사이언시스 인크. 핵산-폴리펩타이드 조성물 및 이의 용도
MA45349A (fr) 2016-04-01 2019-02-06 Avidity Biosciences Llc Acides nucléiques egfr et leurs utilisations
EP3440090B1 (en) 2016-04-06 2022-09-28 Ohio State Innovation Foundation Rna ligand-displaying exosomes for specific delivery of therapeutics to cell by rna nanotechnology
WO2017178883A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Olix Pharmaceuticals, Inc. Treatment of idiopathic pulmonary fibrosis using rna complexes that target connective tissue growth factor
CN109219659B (zh) 2016-04-14 2022-09-09 贝尼泰克生物制药有限公司 用于治疗眼咽型肌营养不良(opmd)的试剂及其用途
US11410746B2 (en) 2016-04-27 2022-08-09 Massachusetts Institute Of Technology Stable nanoscale nucleic acid assemblies and methods thereof
WO2017197128A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Yale University Poly(amine-co-ester) nanoparticles and methods of use thereof
KR101916652B1 (ko) 2016-06-29 2018-11-08 올릭스 주식회사 작은 간섭 rna의 rna 간섭효과 증진용 화합물 및 이의 용도
CN109983121A (zh) 2016-06-30 2019-07-05 昂克诺斯公司 治疗性多肽的假型化溶瘤病毒递送
RU2627179C1 (ru) * 2016-07-28 2017-08-03 федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный научно-исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РНК ИНТЕРФЕРОНА λ, ИНТЕРЛЕЙКИНА IL23 И ПРОТИВОВИРУСНОГО БЕЛКА MxA
WO2018020012A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 Danmarks Tekniske Universitet Methods for decoupling cell growth from production of biochemicals and recombinant polypeptides
AU2017306422A1 (en) 2016-08-03 2019-01-31 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. TLR9 targeted therapeutics
US11364304B2 (en) 2016-08-25 2022-06-21 Northwestern University Crosslinked micellar spherical nucleic acids
JP6989521B2 (ja) 2016-09-02 2022-01-05 アローヘッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 標的化リガンド
WO2018045317A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. 4'-phosphate analogs and oligonucleotides comprising the same
EP3516062A1 (en) 2016-09-21 2019-07-31 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Myostatin irna compositions and methods of use thereof
JP7129702B2 (ja) 2016-09-29 2022-09-02 国立大学法人 東京医科歯科大学 オーバーハングを有する二本鎖核酸複合体
WO2018098352A2 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Jun Oishi Targeting kras induced immune checkpoint expression
US11135307B2 (en) 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
EP3551641A4 (en) 2016-12-08 2021-01-13 University of Utah Research Foundation STAUFEN1 ACTIVE SUBSTANCES AND RELATED PROCEDURES
WO2018112470A1 (en) 2016-12-16 2018-06-21 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Co-delivery of nucleic acids for simultaneous suppression and expression of target genes
UY37565A (es) 2017-01-10 2018-07-31 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Agentes de iarn alfa-1 antitripsina (aat), composiciones que incluyen agentes de iarn aat y métodos de uso
EP3580339A4 (en) * 2017-02-10 2020-12-23 Research & Business Foundation Sungkyunkwan University LONG DOUBLE STRAND RNA FOR RNA INTERFERENCE
WO2018152524A1 (en) * 2017-02-20 2018-08-23 Northwestern University Toxic rnai active seed sequences for killing cancer cells
DE102017103383A1 (de) 2017-02-20 2018-08-23 aReNA-Bio GbR (vertretungsberechtigter Gesellschafter: Dr. Heribert Bohlen, 50733 Köln) System und Verfahren zur Zelltyp-spezifischen Translation von RNA-Molekülen in Eukaryoten
WO2018160538A1 (en) 2017-02-28 2018-09-07 Mersana Therapeutics, Inc. Combination therapies of her2-targeted antibody-drug conjugates
US11261441B2 (en) 2017-03-29 2022-03-01 Bluebird Bio, Inc. Vectors and compositions for treating hemoglobinopathies
CN116059313A (zh) 2017-04-07 2023-05-05 阿佩利斯制药有限公司 给药方案以及相关组合物和方法
ES2957464T3 (es) 2017-04-14 2024-01-19 Univ Arizona Composiciones y métodos para tratar fibrosis pulmonar
US11324820B2 (en) 2017-04-18 2022-05-10 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of subjects having a hepatitis b virus (HBV) infection
JP7167059B2 (ja) 2017-04-19 2022-11-08 フィオ ファーマシューティカルズ コーポレーション 核酸化合物の局所送達
WO2018209270A1 (en) 2017-05-11 2018-11-15 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (snas)
US11788087B2 (en) 2017-05-25 2023-10-17 The Children's Medical Center Corporation BCL11A guide delivery
CN110945030A (zh) * 2017-06-20 2020-03-31 丹娜法伯癌症研究院 使用april-taci相互作用的调节剂调节调控性t细胞、调控性b细胞和免疫响应的方法
CA3064590A1 (en) * 2017-06-23 2018-12-27 University Of Massachusetts Two-tailed self-delivering sirna and related methods
KR20200024793A (ko) 2017-07-06 2020-03-09 애로우헤드 파마슈티컬스 인코포레이티드 알파-ENaC의 발현을 억제하기 위한 RNAi 작용제 및 사용 방법
AU2018301829B2 (en) 2017-07-13 2024-08-01 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Methods for inhibition of HAO1 (hydroxyacid oxidase 1 (glycolate oxidase) gene expression
US11110114B2 (en) 2017-07-17 2021-09-07 Oxford University Innovation Limited Dinucleotides
US11104700B2 (en) 2017-07-17 2021-08-31 Oxford University Innovation Limited Oligonucleotides
TN2020000039A1 (en) 2017-09-11 2021-10-04 Arrowhead Pharmaceuticals Inc Rnai agents and compositions for inhibiting expression of apolipoprotein c-iii (apoc3)
KR20200089656A (ko) 2017-09-19 2020-07-27 알닐람 파마슈티칼스 인코포레이티드 트랜스타이레틴(ttr) 매개 아밀로이드증을 치료하기 위한 조성물 및 방법
WO2019068326A1 (en) 2017-10-05 2019-04-11 Université D'aix-Marseille INHIBITORS OF LSD1 FOR THE TREATMENT AND PREVENTION OF CARDIOMYOPATHIES
HRP20230023T1 (hr) 2017-10-20 2023-03-17 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Postupci liječenja infekcije hepatitisom b
WO2019100053A1 (en) 2017-11-20 2019-05-23 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions and methods for modulating hif-2α to improve muscle generation and repair
EP3717021A1 (en) 2017-11-27 2020-10-07 Mersana Therapeutics, Inc. Pyrrolobenzodiazepine antibody conjugates
WO2019109001A1 (en) * 2017-12-01 2019-06-06 The Texas A&M University System Angelman syndrome antisense treatment
CN118638788A (zh) * 2017-12-06 2024-09-13 艾维迪提生物科学公司 治疗肌萎缩和强直性肌营养不良的组合物和方法
KR20240167712A (ko) 2017-12-15 2024-11-27 아펠리스 파마슈티컬스 인코포레이티드 투여 요법 및 관련 조성물 및 방법
JP2021506883A (ja) 2017-12-21 2021-02-22 メルサナ セラピューティクス インコーポレイテッド ピロロベンゾジアゼピン抗体結合体
EP3728281A1 (en) 2017-12-21 2020-10-28 Alnylam Pharmaceuticals Inc. Chirally-enriched double-stranded rna agents
US10960086B2 (en) 2017-12-28 2021-03-30 Augusta University Research Institute, Inc. Aptamer compositions and methods of use thereof
EP3731850A4 (en) 2017-12-29 2021-12-01 Oncorus, Inc. ONCOLYTIC VIRUS DELIVERY OF THERAPEUTIC POLYPEPTIDES
JP2021509669A (ja) 2018-01-05 2021-04-01 ディセルナ ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 免疫療法を強化するためのベータ−カテニン及びｉｄｏの発現の低減
WO2019143621A1 (en) 2018-01-16 2019-07-25 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting aldh2 expression
RU2020125769A (ru) 2018-02-09 2022-03-10 Дженентек, Инк. Олигонуклеотиды для модуляции экспрессии tmem106b
US12522811B2 (en) 2018-05-01 2026-01-13 The Children's Medical Center Corporation Enhanced BCL11A RNP / CRISPR delivery and editing using a 3XNLS-CAS9
WO2019213013A1 (en) 2018-05-02 2019-11-07 The Children's Medical Center Corporation Improved bcl11a micrornas for treating hemoglobinopathies
JP2021522816A (ja) 2018-05-07 2021-09-02 ロシュ イノベーション センター コペンハーゲン エーエス オリゴヌクレオチド治療のための超並列的探索方法
CN112470003A (zh) 2018-05-10 2021-03-09 曼彻斯特大学 评估黄斑变性的方法
CN112703196A (zh) 2018-05-24 2021-04-23 圣诺制药公司 用于核酸治疗的可控偶联多肽纳米颗粒导入系统的组合物及方法
EP3807291A4 (en) * 2018-06-14 2022-02-23 University of Utah Research Foundation STAUFEN1 REGULATORY AGENTS AND ASSOCIATED PROCEDURES
JP7616987B2 (ja) 2018-07-13 2025-01-17 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｒｔｅｌ１発現の調節用のオリゴヌクレオチド
MA70658B1 (fr) 2018-08-13 2026-04-30 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions d'agent d'arndb du virus de l'hépatite b (vhb) et leurs méthodes d'utilisation
JP7627042B2 (ja) 2018-08-23 2025-02-05 ユニバーシティー オブ マサチューセッツ Ｏ－メチルリッチ完全安定化オリゴヌクレオチド
WO2020051231A1 (en) 2018-09-04 2020-03-12 H. Lee Moffitt Cancer Center & Research Institute Inc. Use of delta-tocotrienol for treating cancer
US20210317479A1 (en) 2018-09-06 2021-10-14 The Broad Institute, Inc. Nucleic acid assemblies for use in targeted delivery
MX2021004906A (es) 2018-10-29 2021-09-10 Mersana Therapeutics Inc Conjugados de anticuerpo modificado con cisteína-fármaco con enlazadores que contienen péptidos.
WO2020128816A2 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Pfizer Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising a combination of a benzoxazole transthyretin stabilizer and an additional therapeutic agent
CA3125285A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Sirnaomics, Inc. Silencing tgf-beta 1 and cox2 using sirnas delivered in combination with immune checkpoint inhibitors to treat cancer
WO2020150636A1 (en) 2019-01-18 2020-07-23 University Of Massachusetts Dynamic pharmacokinetic-modifying anchors
EP3908661A1 (en) 2019-02-12 2021-11-17 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for inhibiting expression of cyp27a1
SG11202110174PA (en) 2019-03-29 2021-10-28 Dicerna Pharmaceuticals Inc Compositions and methods for the treatment of kras associated diseases or disorders
WO2020206350A1 (en) 2019-04-04 2020-10-08 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting gene expression in the central nervous system
US11814464B2 (en) 2019-04-29 2023-11-14 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers and polyplexes with modified end groups and methods of use thereof
AU2020268798A1 (en) 2019-05-03 2021-11-04 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Double-stranded nucleic acid inhibitor molecules with shortened sense strands
TWI863999B (zh) * 2019-05-22 2024-12-01 大陸商蘇州瑞博生物技術股份有限公司 ｓｉＲＮＡ綴合物、其用途及使用其之方法
US20200369759A1 (en) 2019-05-23 2020-11-26 Fibrogen, Inc. Methods of treatment of muscular dystrophies
EP3980540A4 (en) 2019-06-06 2023-11-01 Arrowhead Pharmaceuticals, Inc. METHOD FOR TREATING ALPHA-1 ANTITRYPSIN DEFICIENCY (AATD)
DK3990028T3 (da) 2019-06-26 2025-07-21 Biorchestra Co Ltd Micellære nanopartikler og anvendelse deraf
JP7600208B2 (ja) 2019-07-29 2024-12-16 ジョージア テック リサーチ コーポレイション 拘束された脂質を含むナノ材料およびその使用
CA3149835A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 University Of Massachusetts Chemically modified oligonucleotides targeting snps
EP4013402B1 (en) 2019-08-16 2024-11-06 Children's Hospital Medical Center Cdc-42 inhibitors for use in the treatment of age-related depression, sarcopenia or frailty
US12485180B2 (en) 2019-08-30 2025-12-02 Yale University Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
WO2021049504A1 (ja) 2019-09-10 2021-03-18 第一三共株式会社 肝臓送達用ＧａｌＮＡｃ－オリゴヌクレオチドコンジュゲートおよび製造方法
US12365894B2 (en) 2019-09-16 2025-07-22 University Of Massachusetts Branched lipid conjugates of siRNA for specific tissue delivery
AU2020358016A1 (en) 2019-10-02 2022-04-21 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Chemical modifications of small interfering RNA with minimal fluorine content
US11355185B2 (en) 2019-11-26 2022-06-07 Cypress Semiconductor Corporation Silicon-oxide-nitride-oxide-silicon multi-level non-volatile memory device and methods of fabrication thereof
AU2020410993A1 (en) 2019-12-24 2022-06-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Pharmaceutical combination of a therapeutic oligonucleotide targeting hbv and a tlr7 agonist for treatment of hbv
CN114828852A (zh) 2019-12-24 2022-07-29 豪夫迈·罗氏有限公司 用于治疗hbv的靶向hbv的抗病毒药剂和/或免疫调节剂的药物组合
WO2021141969A1 (en) 2020-01-09 2021-07-15 Guide Therapeutics, Inc. Nanomaterials
JP2023511274A (ja) 2020-01-14 2023-03-17 シンセカイン インコーポレイテッド Ｉｌ２オルソログおよび使用法
US20210222128A1 (en) 2020-01-22 2021-07-22 Massachusetts Institute Of Technology Inducible tissue constructs and uses thereof
WO2021167841A1 (en) 2020-02-18 2021-08-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Apolipoprotein c3 (apoc3) irna compositions and methods of use thereof
WO2021173965A1 (en) 2020-02-28 2021-09-02 Massachusetts Institute Of Technology Identification of variable influenza residues and uses thereof
US20230287425A1 (en) 2020-03-18 2023-09-14 Dicerna Pharmacuticals Inc. Compositions and methods for inhibiting angptl3 expression
WO2021188390A1 (en) 2020-03-19 2021-09-23 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
WO2021195469A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 Avidity Biosciences, Inc. Compositions and methods of treating muscle dystrophy
JP2023524639A (ja) 2020-04-22 2023-06-13 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 患者特異的免疫療法用細胞の製造調整システム及び調整方法
EP4157289A4 (en) 2020-05-26 2024-06-26 University Of Massachusetts Synthetic oligonucleotides having regions of block and cluster modifications
WO2021255262A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Sylentis Sau siRNA AND COMPOSITIONS FOR PROPHYLACTIC AND THERAPEUTIC TREATMENT OF VIRUS DISEASES
WO2021257262A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Yale University Poly(amine-co-ester) polymers with modified end groups and enhanced pulmonary delivery
JP2023532864A (ja) * 2020-06-30 2023-08-01 ザ ユニバーシティー コート オブ ザ ユニバーシティー オブ エジンバラ 導入遺伝子発現系
AU2021309966A1 (en) 2020-07-15 2023-02-09 Biogen Ma Inc. Medical system including two access ports
US20220031633A1 (en) 2020-07-28 2022-02-03 Yale University Poly(amine-co-ester) polymeric particles for selective pulmonary delivery
TW202221120A (zh) 2020-08-04 2022-06-01 美商黛瑟納製藥公司 用於治療代謝症候群之組成物及方法
AU2021321430A1 (en) 2020-08-04 2023-03-02 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting PLP1 expression
CA3187220A1 (en) 2020-08-04 2022-02-10 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Systemic delivery of oligonucleotides
TW202535432A (zh) 2020-08-05 2025-09-16 美商戴瑟納製藥股份有限公司 抑制lpa表現之組合物及方法
AU2021322891A1 (en) 2020-08-05 2023-03-09 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide treatment of hepatitis B patients
IL301014A (en) 2020-08-31 2023-05-01 Univ Yale Compositions and methods for delivery of nucleic acids to cells
EP3964204A1 (en) 2020-09-08 2022-03-09 Université d'Aix-Marseille Lsd1 inhibitors for use in the treatment and prevention of fibrosis of tissues
WO2022058447A1 (en) 2020-09-16 2022-03-24 The University Of Manchester Complementome assay
EP4225330A1 (en) 2020-10-06 2023-08-16 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
WO2022103999A1 (en) 2020-11-13 2022-05-19 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. COAGULATION FACTOR V (F5) iRNA COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF
CA3200234A1 (en) 2020-11-25 2022-06-02 Daryl C. Drummond Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids, and related methods of use
CN117295753A (zh) 2020-12-04 2023-12-26 基那奥生物公司 用于将核酸递送到细胞的组合物和方法
EP4015634A1 (en) 2020-12-15 2022-06-22 Sylentis, S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of virus diseases
MX2023008328A (es) 2021-01-20 2023-08-15 Beam Therapeutics Inc Nanomateriales que comprenden una caracteristica biodegradable.
AU2022231003A1 (en) 2021-03-04 2023-09-14 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Angiopoietin-like 3 (angptl3) irna compositions and methods of use thereof
WO2022204564A2 (en) 2021-03-25 2022-09-29 Iovance Biotherapeutics, Inc. Methods and compositions for t-cell coculture potency assays and use with cell therapy products
EP4312997A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Carmine Therapeutics Pte. Ltd. Extracellular vesicles loaded with at least two different nucleic acids
CA3214439A1 (en) 2021-04-12 2022-10-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compositions and methods for inhibiting ketohexokinase (khk)
WO2022221430A1 (en) 2021-04-14 2022-10-20 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating pnpla3 expression
MX2023012086A (es) 2021-04-19 2023-10-25 Novo Nordisk As Composiciones y metodos para inhibir la expresion del miembro 3 del grupo h de la subfamilia 1 de receptores nucleares (nr1h3).
MX2023013504A (es) 2021-05-28 2024-02-23 Novo Nordisk As Composiciones y métodos para inhibir la expresión del componente 1 de reducción de amidoxima mitocondrial (marc1).
CA3221935A1 (en) 2021-05-29 2022-12-08 1Globe Health Institute Llc Asymmetric short duplex dna as a novel gene silencing technology and use thereof
KR20240014533A (ko) 2021-05-29 2024-02-01 1글로브 헬스 인스티튜트 엘엘씨 신규한 유전자 침묵 기술로서의 짧은 듀플렉스 dna 및 이의 용도
AR126207A1 (es) 2021-06-23 2023-09-27 Univ Massachusetts Compuestos de oligonucleotidos anti-flt1 optimizados para el tratamiento de la preeclampsia y otros desordenes angiogénicos
TW202328445A (zh) 2021-08-03 2023-07-16 美商艾拉倫製藥股份有限公司 甲狀腺素運載蛋白（ＴＴＲ）ｉＲＮＡ組成物及其使用方法
WO2023021046A1 (en) 2021-08-16 2023-02-23 Vib Vzw Oligonucleotides for modulating synaptogyrin-3 expression
TW202308660A (zh) 2021-08-25 2023-03-01 美商戴瑟納製藥股份有限公司 用於抑制α－１抗胰蛋白酶表現之組合物及方法
AU2022349065A1 (en) 2021-09-21 2024-04-04 The Johns Hopkins University Dendrimer conjugates of small molecule biologics for intracellular delivery
IL312635A (en) 2021-11-11 2024-07-01 Hoffmann La Roche Pharmaceutical combinations for treatment of hbv
EP4340893A1 (en) 2021-11-19 2024-03-27 KIST (Korea Institute of Science and Technology) Therapeutic compounds for red blood cell-mediated delivery of an active pharmaceutical ingredient to a target cell
EP4441218A2 (en) 2021-12-01 2024-10-09 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for modulating apoc3 expression
US20250051759A1 (en) 2021-12-23 2025-02-13 Boehringer Ingelheim International Gmbh METHODS AND MOLECULES FOR RNA INTERFERENCE (RNAi)
US12605537B2 (en) 2022-02-15 2026-04-21 Biogen Ma Inc. Implantable medical device for use with or having recording electrode
WO2023159189A1 (en) 2022-02-18 2023-08-24 Yale University Branched poly(amine-co-ester) polymers for more efficient nucleic expression
GB202203627D0 (en) 2022-03-16 2022-04-27 Univ Manchester Agents for treating complement-related disorders
US20230302423A1 (en) 2022-03-28 2023-09-28 Massachusetts Institute Of Technology Rna scaffolded wireframe origami and methods thereof
GB202204884D0 (en) 2022-04-04 2022-05-18 Fondo Ricerca Medica S R I Sirna targeting kcna1
CA3245064A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS OF MODULATING THE ACTIVITY OF STRUCTURAL AND CYTOSKELETON-ASSOCIATED PROTEINS
WO2023201369A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. Til expansion processes using specific cytokine combinations and/or akti treatment
EP4522747A1 (en) 2022-05-12 2025-03-19 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting mapt expression
US20230416743A1 (en) 2022-05-13 2023-12-28 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting snca expression
EP4531819A2 (en) 2022-05-25 2025-04-09 Akagera Medicines, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and methods of use thereof
TWI868755B (zh) 2022-06-24 2025-01-01 丹麥商諾佛 儂迪克股份有限公司 抑制跨膜絲胺酸蛋白酶６（ｔｍｐｒｓｓ６）表現的組成物及方法
AU2023311822A1 (en) 2022-07-20 2025-01-09 Beam Therapeutics Inc. Nanomaterials comprising triols
WO2024040041A1 (en) 2022-08-15 2024-02-22 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Regulation of activity of rnai molecules
JP2025536260A (ja) 2022-10-11 2025-11-05 イェール ユニバーシティー 細胞透過性抗体の組成物および使用方法
TW202430637A (zh) 2022-11-16 2024-08-01 美商戴瑟納製藥股份有限公司 Stat3靶向性寡核苷酸及其用途
EP4619524A1 (en) 2022-11-18 2025-09-24 Genkardia Inc. Methods and compositions for preventing, treating, or reversing cardiac diastolic dysfunction
KR20250122544A (ko) 2022-11-21 2025-08-13 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 종양 침윤 림프구의 확장을 위한 2차원 공정 및 이를 통한 요법
GB202219829D0 (en) 2022-12-29 2023-02-15 Ivy Farm Tech Limited Genetically manipulated cells
EP4649087A2 (en) 2023-01-11 2025-11-19 Engage Biologics Inc. Non-viral expression systems and methods of use thereof
WO2024175586A2 (en) 2023-02-21 2024-08-29 Vib Vzw Inhibitors of synaptogyrin-3 expression
JP2026507051A (ja) 2023-02-21 2026-02-27 ブイアイビー ブイゼットダブリュ シナプトギリン－３発現を調節するためのオリゴヌクレオチド
EP4687988A2 (en) 2023-03-28 2026-02-11 KIST (Korea Institute of Science and Technology) Therapeutic compounds for inhibiting and reducing the expression of cell surface proteins
WO2024263649A1 (en) 2023-06-19 2024-12-26 Yale University Methods and compositions for enrichment and sequencing of expansion-specific rna transcripts
WO2025015189A1 (en) 2023-07-13 2025-01-16 Comanche Biopharma Corp. Formulations of nucleic acid compounds and uses thereof
TW202509209A (zh) 2023-07-13 2025-03-01 新加坡商蜂鳥生物科技私人有限公司 生產抗體的方法
EP4742890A1 (en) 2023-07-13 2026-05-20 Hummingbird Bioscience Pte Ltd ANTIBODY PRODUCTION PROCESSES
AR133386A1 (es) 2023-07-28 2025-09-24 Dicerna Pharmaceuticals Inc Composiciones y métodos para la expresión del receptor del ligando de muerte programada (pd-l1)
WO2025054459A1 (en) 2023-09-08 2025-03-13 Dicerna Pharmaceuticals, Inc. Rnai oligonucleotide conjugates
WO2025101580A1 (en) 2023-11-06 2025-05-15 Yale University Half-antibodies and other antibody fragments for attachment to degradable polymer nanoparticles
EP4560019A1 (en) 2023-11-22 2025-05-28 Sylentis S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of ocular retinal conditions
EP4560020A1 (en) 2023-11-22 2025-05-28 Sylentis S.A.U. Sirna and compositions for prophylactic and therapeutic treatment of ocular retinal conditions
WO2025215354A1 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Ivy Farm Technologies Limited Method of culturing an animal cell
CN120842213A (zh) 2024-04-25 2025-10-28 香港大学 Agpat4抑制剂的组合物及其用于治疗癌症的方法
WO2025224715A1 (en) 2024-04-26 2025-10-30 King Abdullah Univeristy Of Science And Technology Methods for improving precise genome modification and reducing unwanted mutations by crispr-cas editing
WO2026006832A1 (en) 2024-06-28 2026-01-02 University Of Connecticut Gene modulation for treating cancer
WO2026041910A2 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Novo Nordisk A/S Compositions and methods for inhibiting xdh expression

Family Cites Families (136)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2003006A (en) * 1933-04-11 1935-05-28 Michelson Barnett Samuel Water tank cover
US4469863A (en) * 1980-11-12 1984-09-04 Ts O Paul O P Nonionic nucleic acid alkyl and aryl phosphonates and processes for manufacture and use thereof
US5208149A (en) * 1983-10-20 1993-05-04 The Research Foundation Of State University Of New York Nucleic acid constructs containing stable stem and loop structures
GB8704365D0 (en) * 1987-02-25 1987-04-01 Exxon Chemical Patents Inc Zeolite l preparation
US5712257A (en) * 1987-08-12 1998-01-27 Hem Research, Inc. Topically active compositions of mismatched dsRNAs
IE66830B1 (en) 1987-08-12 1996-02-07 Hem Res Inc Topically active compositions of double-stranded RNAs
US5703055A (en) * 1989-03-21 1997-12-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery
DK0942000T3 (da) * 1989-10-24 2004-11-01 Isis Pharmaceuticals Inc 2'-modificerede oligonukleotider
US5457189A (en) * 1989-12-04 1995-10-10 Isis Pharmaceuticals Antisense oligonucleotide inhibition of papillomavirus
HUT63170A (en) 1990-01-11 1993-07-28 Isis Pharmaceuticals Inc Process and composition for detecting and modifying rna activity and gene expression
US5670633A (en) * 1990-01-11 1997-09-23 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar modified oligonucleotides that detect and modulate gene expression
US5514577A (en) * 1990-02-26 1996-05-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotide therapies for modulating the effects of herpes viruses
WO1992007065A1 (en) * 1990-10-12 1992-04-30 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Modified ribozymes
FR2675803B1 (fr) 1991-04-25 1996-09-06 Genset Sa Oligonucleotides fermes, antisens et sens et leurs applications.
WO1994008003A1 (en) * 1991-06-14 1994-04-14 Isis Pharmaceuticals, Inc. ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE INHIBITION OF THE ras GENE
FR2685346B1 (fr) * 1991-12-18 1994-02-11 Cis Bio International Procede de preparation d'arn double-brin, et ses applications.
IL104965A (en) 1992-03-05 1999-11-30 Isis Pharmaceuticals Inc Coupled oligonucleotides cross-linked
US5792751A (en) * 1992-04-13 1998-08-11 Baylor College Of Medicine Tranformation of cells associated with fluid spaces
US20030068301A1 (en) * 1992-05-14 2003-04-10 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B virus replication
US20030206887A1 (en) * 1992-05-14 2003-11-06 David Morrissey RNA interference mediated inhibition of hepatitis B virus (HBV) using short interfering nucleic acid (siNA)
US20030171311A1 (en) * 1998-04-27 2003-09-11 Lawrence Blatt Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to hepatitis C virus infection
US20040054156A1 (en) * 1992-05-14 2004-03-18 Kenneth Draper Method and reagent for inhibiting hepatitis B viral replication
US5693535A (en) * 1992-05-14 1997-12-02 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. HIV targeted ribozymes
FI946201A0 (fi) 1992-07-02 1994-12-30 Hybridon Inc Itsestabiloidut oligonukleotidit terapeuttisina aineina
US5652355A (en) 1992-07-23 1997-07-29 Worcester Foundation For Experimental Biology Hybrid oligonucleotide phosphorothioates
WO1994015645A1 (en) 1992-12-31 1994-07-21 Texas Biotechnology Corporation Antisense molecules directed against genes of the raf oncogene family
US6056704A (en) 1993-03-03 2000-05-02 Ide; Masatake Foot-pressure massage stand
EP0616026A1 (en) 1993-03-19 1994-09-21 The Procter & Gamble Company Concentrated cleaning compositions
AU697234B2 (en) * 1993-06-23 1998-10-01 Viventia Biotech Inc. Antisense oligonucleotides and therapeutic use thereof in human immunodeficiency virus infection
FR2710074B1 (fr) 1993-09-15 1995-12-08 Rhone Poulenc Rorer Sa Gène GRB3-3, ses variants et leurs utilisations.
US5624803A (en) * 1993-10-14 1997-04-29 The Regents Of The University Of California In vivo oligonucleotide generator, and methods of testing the binding affinity of triplex forming oligonucleotides derived therefrom
US5801154A (en) * 1993-10-18 1998-09-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Antisense oligonucleotide modulation of multidrug resistance-associated protein
IL111660A (en) 1993-11-16 2005-05-17 Genta Inc Oligonucleoside compounds for effecting rnaseh-mediated cleavage of a target ribonucleic acid sequence and a pharmaceutical composition containing them
US5578716A (en) 1993-12-01 1996-11-26 Mcgill University DNA methyltransferase antisense oligonucleotides
US5908779A (en) * 1993-12-01 1999-06-01 University Of Connecticut Targeted RNA degradation using nuclear antisense RNA
JPH10503364A (ja) * 1994-05-10 1998-03-31 ザ ジェネラル ホスピタル コーポレーション Ｃ型肝炎ウイルスのアンチセンス阻害
US6057153A (en) * 1995-01-13 2000-05-02 Yale University Stabilized external guide sequences
US5674683A (en) 1995-03-21 1997-10-07 Research Corporation Technologies, Inc. Stem-loop and circular oligonucleotides and method of using
US5624808A (en) * 1995-03-28 1997-04-29 Becton Dickinson And Company Method for identifying cells committed to apoptosis by determining cellular phosphotyrosine content
CA2222328C (en) 1995-06-07 2012-01-10 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
CA2239976A1 (en) * 1995-09-20 1997-03-27 Paul A. Zamecnik Antisense oligonucleotide chemotherapy for benign hyperplasia or cancer of the prostate
US5998203A (en) * 1996-04-16 1999-12-07 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Enzymatic nucleic acids containing 5'-and/or 3'-cap structures
KR19990082476A (ko) 1996-02-14 1999-11-25 하우스 한스 루돌프, 긴터 베아트리체 당-변형되어 갭이 형성된 올리고뉴클레오티드
AU2733697A (en) 1996-04-17 1997-11-07 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Antisense inhibitors of vascular endothelial growth factor (vegf/vpf) expression
DE19618797C2 (de) 1996-05-10 2000-03-23 Bertling Wolf Vehikel zum Transport molekularer Substanz
US5898031A (en) * 1996-06-06 1999-04-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligoribonucleotides for cleaving RNA
US20040266706A1 (en) 2002-11-05 2004-12-30 Muthiah Manoharan Cross-linked oligomeric compounds and their use in gene modulation
DE19631919C2 (de) 1996-08-07 1998-07-16 Deutsches Krebsforsch Anti-Sinn-RNA mit Sekundärstruktur
US6225290B1 (en) * 1996-09-19 2001-05-01 The Regents Of The University Of California Systemic gene therapy by intestinal cell transformation
ATE329015T1 (de) * 1996-10-04 2006-06-15 Derek Nigel John Hart Enzyme mit s-adenosyl-l-homocystein-hydrolase- ähnlicher aktivität.
US5814500A (en) * 1996-10-31 1998-09-29 The Johns Hopkins University School Of Medicine Delivery construct for antisense nucleic acids and methods of use
DE69737296T2 (de) 1996-12-12 2007-11-08 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Synthetische antisense oligodeoxynukleotide und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen
US20030064945A1 (en) * 1997-01-31 2003-04-03 Saghir Akhtar Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of epidermal growth factor receptors
GB9703146D0 (en) * 1997-02-14 1997-04-02 Innes John Centre Innov Ltd Methods and means for gene silencing in transgenic plants
US6218142B1 (en) * 1997-03-05 2001-04-17 Michael Wassenegger Nucleic acid molecules encoding polypeptides having the enzymatic activity of an RNA-directed RNA polymerase (RDRP)
GB9710475D0 (en) 1997-05-21 1997-07-16 Zeneca Ltd Gene silencing
CA2303299C (en) 1997-09-12 2016-02-23 Exiqon A/S Oligonucleotide analogues
WO1999014346A2 (en) 1997-09-19 1999-03-25 Sequitur, Inc. SENSE mRNA THERAPY
GB9720148D0 (en) * 1997-09-22 1997-11-26 Innes John Centre Innov Ltd Gene silencing materials and methods
US6506559B1 (en) * 1997-12-23 2003-01-14 Carnegie Institute Of Washington Genetic inhibition by double-stranded RNA
US6475726B1 (en) * 1998-01-09 2002-11-05 Cubist Pharmaceuticals, Inc. Method for identifying validated target and assay combinations for drug development
AUPP249298A0 (en) * 1998-03-20 1998-04-23 Ag-Gene Australia Limited Synthetic genes and genetic constructs comprising same I
BRPI9908967B1 (pt) 1998-03-20 2017-05-30 Benitec Australia Ltd processos para reprimir, retardar ou de outro modo reduzir a expressão de um gene alvo em uma célula de planta
US20040214330A1 (en) * 1999-04-07 2004-10-28 Waterhouse Peter Michael Methods and means for obtaining modified phenotypes
AU760041B2 (en) 1998-04-08 2003-05-08 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Methods and means for obtaining modified phenotypes
WO1999054459A2 (en) 1998-04-20 1999-10-28 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid molecules with novel chemical compositions capable of modulating gene expression
AR020078A1 (es) 1998-05-26 2002-04-10 Syngenta Participations Ag Metodo para alterar la expresion de un gen objetivo en una celula de planta
GB9827152D0 (en) 1998-07-03 1999-02-03 Devgen Nv Characterisation of gene function using double stranded rna inhibition
AU1408300A (en) 1998-11-24 2000-06-13 Hisamitsu Pharmaceutical Co. Inc. Hiv infection inhibitors
WO2000032619A1 (en) 1998-11-30 2000-06-08 Ribogene, Inc. Methods and compositions for identification of inhibitors of ribosome assembly
US6939712B1 (en) 1998-12-29 2005-09-06 Impedagen, Llc Muting gene activity using a transgenic nucleic acid
WO2000044914A1 (en) * 1999-01-28 2000-08-03 Medical College Of Georgia Research Institute, Inc. Composition and method for in vivo and in vitro attenuation of gene expression using double stranded rna
DE19956568A1 (de) 1999-01-30 2000-08-17 Roland Kreutzer Verfahren und Medikament zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Gens
CA2370628A1 (en) 1999-04-21 2000-10-26 American Home Products Corporation Methods and compositions for inhibiting the function of polynucleotide sequences
US20040002153A1 (en) * 1999-07-21 2004-01-01 Monia Brett P. Modulation of PTEN expression via oligomeric compounds
GB9925459D0 (en) * 1999-10-27 1999-12-29 Plant Bioscience Ltd Gene silencing
GB9927444D0 (en) 1999-11-19 2000-01-19 Cancer Res Campaign Tech Inhibiting gene expression
DE10100586C1 (de) 2001-01-09 2002-04-11 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines Ziegens
US7829693B2 (en) * 1999-11-24 2010-11-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of a target gene
DE10160151A1 (de) 2001-01-09 2003-06-26 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines vorgegebenen Zielgens
RU2164944C1 (ru) * 1999-12-09 2001-04-10 Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН Способ изменения генетических свойств организма
US8202979B2 (en) * 2002-02-20 2012-06-19 Sirna Therapeutics, Inc. RNA interference mediated inhibition of gene expression using chemically modified short interfering nucleic acid
WO2001068826A2 (en) 2000-03-14 2001-09-20 Syngenta Participations Ag Protoporphyrinogen oxidase ('protox') genes
US20030084471A1 (en) 2000-03-16 2003-05-01 David Beach Methods and compositions for RNA interference
WO2001068836A2 (en) 2000-03-16 2001-09-20 Genetica, Inc. Methods and compositions for rna interference
ATE450621T2 (de) * 2000-03-30 2009-12-15 Whitehead Biomedical Inst Mediatoren von rns-interferenz, die rns- sequenzspezifisch sind
BRPI0117338B1 (pt) 2000-03-30 2016-06-21 Massachusetts Inst Technology método para produzir células animais nocauteadas in vitro e método para produzir uma célula nocauteada
JP4901051B2 (ja) 2000-05-30 2012-03-21 ジョンソン アンド ジョンソン リサーチ プロプライアトリー リミテッド ＲＮＡｉを増強する因子を使用することによって遺伝子抑制を媒介する方法
WO2003103600A2 (en) 2002-06-05 2003-12-18 Invitrogen Corporation Methods and compositions for synthesis of nucleic acid molecules using multiple recognition sites
KR100872437B1 (ko) 2000-12-01 2008-12-05 막스-플랑크-게젤샤프트 츄어 푀르더룽 데어 비쎈샤프텐 에.파우. Ｒｎａ 간섭을 매개하는 작은 ｒｎａ 분자
JP2004520047A (ja) 2000-12-08 2004-07-08 インヴィトロジェン コーポレーション 組換え型核酸分子を迅速に作製するための組成物と方法
WO2002059300A2 (en) 2000-12-28 2002-08-01 J & J Research Pty Ltd Double-stranded rna-mediated gene suppression
US7423142B2 (en) * 2001-01-09 2008-09-09 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting expression of anti-apoptotic genes
WO2003035869A1 (de) 2001-10-26 2003-05-01 Ribopharma Ag Verwendung einer doppelsträngigen ribonukleinsäure zur gezielten hemmung der expression eines vorgegebenen zielgens
CA2369944A1 (en) * 2001-01-31 2002-07-31 Nucleonics Inc. Use of post-transcriptional gene silencing for identifying nucleic acid sequences that modulate the function of a cell
EP1383782A1 (en) * 2001-03-26 2004-01-28 Sirna Therpeutics, Inc. Oligonucleotide mediated inhibition of hepatitis b virus and hepatitis c virus replication
US20030124513A1 (en) * 2001-05-29 2003-07-03 Mcswiggen James Enzymatic nucleic acid treatment of diseases or conditions related to levels of HIV
US20040006035A1 (en) * 2001-05-29 2004-01-08 Dennis Macejak Nucleic acid mediated disruption of HIV fusogenic peptide interactions
US20040019001A1 (en) * 2002-02-20 2004-01-29 Mcswiggen James A. RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA
DE50101770D1 (de) 2001-06-01 2004-04-29 Mobilkom Austria Ag & Co Kg Wi Verfahren zur Bestimmung des Standortes einer Mobilstation in einem Mobilfunksystem
US20030140362A1 (en) * 2001-06-08 2003-07-24 Dennis Macejak In vivo models for screening inhibitors of hepatitis B virus
CA2462144C (en) 2001-09-28 2016-09-20 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Micro-rna molecules
DE10163098B4 (de) 2001-10-12 2005-06-02 Alnylam Europe Ag Verfahren zur Hemmung der Replikation von Viren
DE10230997A1 (de) * 2001-10-26 2003-07-17 Ribopharma Ag Medikament zur Erhöhung der Wirksamkeit eines Rezeptor-vermittelt Apoptose in Tumorzellen auslösenden Arzneimittels
US20040121348A1 (en) * 2001-10-26 2004-06-24 Ribopharma Ag Compositions and methods for treating pancreatic cancer
US20040248835A1 (en) * 2001-10-26 2004-12-09 Anja Krebs Use of a double-stranded ribonucleic acid for treating an infection with a positivestrand rna-virus
DE10154113A1 (de) 2001-11-03 2003-05-15 Opel Adam Ag Frontstruktur eines Kraftfahrzeuges
DE10202419A1 (de) * 2002-01-22 2003-08-07 Ribopharma Ag Verfahren zur Hemmung der Expression eines durch eine Chromosomen-Aberration entstandenen Zielgens
WO2003064621A2 (en) 2002-02-01 2003-08-07 Ambion, Inc. HIGH POTENCY siRNAS FOR REDUCING THE EXPRESSION OF TARGET GENES
WO2003068797A1 (en) * 2002-02-14 2003-08-21 City Of Hope Methods for producing interfering rna molecules in mammalian cells and therapeutic uses for such molecules
US20040005593A1 (en) * 2002-03-06 2004-01-08 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Novel method for delivery and intracellular synthesis of siRNA molecules
JP2005521393A (ja) * 2002-03-20 2005-07-21 マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー Ｈｉｖ治療
US20030180756A1 (en) * 2002-03-21 2003-09-25 Yang Shi Compositions and methods for suppressing eukaryotic gene expression
US20040053876A1 (en) * 2002-03-26 2004-03-18 The Regents Of The University Of Michigan siRNAs and uses therof
WO2003099298A1 (en) 2002-05-24 2003-12-04 Max-Planck Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference mediating small rna molecules
AU2003276666A1 (en) 2002-06-12 2003-12-31 Ambion, Inc. Methods and compositions relating to polypeptides with rnase iii domains that mediate rna interference
US8101348B2 (en) 2002-07-10 2012-01-24 Max-Planck-Gesellschaft Zur Foerderung Der Wissenschaften E.V. RNA-interference by single-stranded RNA molecules
US20040241854A1 (en) * 2002-08-05 2004-12-02 Davidson Beverly L. siRNA-mediated gene silencing
ES2280826T5 (es) 2002-08-05 2017-08-03 Silence Therapeutics Gmbh Nuevas formas adicionales de moléculas de ARN de interferencia
WO2004014933A1 (en) 2002-08-07 2004-02-19 University Of Massachusetts Compositions for rna interference and methods of use thereof
WO2004027030A2 (en) 2002-09-18 2004-04-01 Isis Pharmaceuticals, Inc. Efficient reduction of target rna’s by single- and double-stranded oligomeric compounds
EP1556402B1 (en) 2002-09-25 2011-06-22 University of Massachusetts In vivo gene silencing by chemically modified and stable sirna
WO2004043979A2 (en) 2002-11-05 2004-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Sugar surrogate-containing oligomeric compounds and compositions for use in gene modulation
JP2006507841A (ja) 2002-11-14 2006-03-09 ダーマコン， インコーポレイテッド 機能的ｓｉＲＮＡおよび超機能的ｓｉＲＮＡ
WO2004046324A2 (en) 2002-11-15 2004-06-03 University Of Massachusetts Allele-targeted rna interference
AU2003298718A1 (en) * 2002-11-22 2004-06-18 University Of Massachusetts Modulation of hiv replication by rna interference
US20040224328A1 (en) * 2003-01-15 2004-11-11 Hans Prydz siRNA screening method
WO2004063375A1 (en) 2003-01-15 2004-07-29 Hans Prydz OPTIMIZING siRNA BY RNAi ANTISENSE
ES2356910T3 (es) 2003-01-17 2011-04-14 Max-Planck-Gesellschaft Zur Forderung Der Wissenschaften E.V. Construcciones para la expresión inducible de arn de interferencia pequeño (arns) para el silenciamiento génico seleccionado.
WO2004065600A2 (en) 2003-01-17 2004-08-05 MAX-PLANCK-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Rna interference by palindromic or modified rna molecules
CN1768139A (zh) 2003-02-10 2006-05-03 独立行政法人产业技术总合研究所 通过dna干扰调控基因的表达
WO2004073390A1 (en) * 2003-02-19 2004-09-02 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Efficient gene silencing in plants using short dsrna sequences
ES2712695T3 (es) 2003-06-02 2019-05-14 Univ Massachusetts Métodos y composiciones para controlar la eficacia de la silenciación del ARN
US6998203B2 (en) * 2003-08-01 2006-02-14 Intel Corporation Proximity correcting lithography mask blanks
CN101119734B (zh) 2005-01-07 2012-05-09 阿尔尼拉姆医药品有限公司 RSV的RNAi调节及其治疗应用
JP6348063B2 (ja) 2011-07-08 2018-06-27 インテヴァ プロダクツ, エルエルシーInteva Products, Llc 車両内装部材にステッチを施す方法

Also Published As

Publication number Publication date
EP1407044B1 (en) 2007-09-19
US8853384B2 (en) 2014-10-07
EP1407044A2 (en) 2004-04-14
WO2002044321A2 (en) 2002-06-06
US20110027883A1 (en) 2011-02-03
US8445237B2 (en) 2013-05-21
CZ302719B6 (cs) 2011-09-21
US8329463B2 (en) 2012-12-11
US7056704B2 (en) 2006-06-06
DK1407044T4 (en) 2017-12-04
ES2215494T3 (es) 2008-04-01
JP5749892B2 (ja) 2015-07-15
DE60130583D1 (de) 2007-10-31
EP2348133B1 (en) 2014-07-16
RU2322500C2 (ru) 2008-04-20
US8778902B2 (en) 2014-07-15
US8362231B2 (en) 2013-01-29
SI1407044T1 (sl) 2008-04-30
MXPA03004836A (es) 2005-09-08
US20110054159A1 (en) 2011-03-03
US20110020234A1 (en) 2011-01-27
US8933044B2 (en) 2015-01-13
US9567582B2 (en) 2017-02-14
ES2215494T5 (es) 2017-12-28
US20050026278A1 (en) 2005-02-03
US20070093445A1 (en) 2007-04-26
DK2813582T3 (en) 2017-07-31
US20040259247A1 (en) 2004-12-23
ATE373724T2 (de) 2007-10-15
US8895721B2 (en) 2014-11-25
AU2007203385A1 (en) 2007-08-09
AU2002235744B2 (en) 2007-04-19
DE60130583T2 (de) 2008-06-12
US10633656B2 (en) 2020-04-28
JP6189576B2 (ja) 2017-08-30
US20110065109A1 (en) 2011-03-17
EP2348133A1 (en) 2011-07-27
PT1407044E (pt) 2008-01-02
ES2728168T3 (es) 2019-10-22
NO333713B1 (no) 2013-09-02
US20150141492A1 (en) 2015-05-21
AU3574402A (en) 2002-06-11
CN1568373A (zh) 2005-01-19
CA2429814C (en) 2014-02-18
LTPA2021005I1 (no) 2021-06-10
JP2015061534A (ja) 2015-04-02
HK1139181A1 (en) 2010-09-10
ZA200303929B (en) 2004-07-19
CZ20031839A3 (cs) 2003-10-15
KR20080069602A (ko) 2008-07-28
RU2470073C2 (ru) 2012-12-20
NO20032464D0 (no) 2003-05-30
EP1407044B2 (en) 2017-11-15
KR100909681B1 (ko) 2009-07-29
EP1873259A1 (en) 2008-01-02
PL218876B1 (pl) 2015-02-27
US20050234007A1 (en) 2005-10-20
JP2010131031A (ja) 2010-06-17
DK1407044T3 (da) 2008-01-28
US20040259248A1 (en) 2004-12-23
AU2002235744B8 (en) 2007-06-28
JP2004526422A (ja) 2004-09-02
AU2010212438B2 (en) 2013-05-09
BRPI0115814B8 (pt) 2021-05-25
US8993745B2 (en) 2015-03-31
JP4494392B2 (ja) 2010-06-30
WO2002044321A3 (en) 2003-10-23
US8765930B2 (en) 2014-07-01
BR0115814A (pt) 2004-03-23
US20110065773A1 (en) 2011-03-17
US20090155174A1 (en) 2009-06-18
HK1139433A1 (en) 2010-09-17
CN100523215C (zh) 2009-08-05
NZ525888A (en) 2006-04-28
US7078196B2 (en) 2006-07-18
US8796016B2 (en) 2014-08-05
IL207727A (en) 2014-04-30
HUP0302557A3 (en) 2005-12-28
AU2007203385B2 (en) 2010-05-20
AU2010212438A2 (en) 2010-09-23
US20100010207A1 (en) 2010-01-14
KR100872437B1 (ko) 2008-12-05
JP2007111053A (ja) 2007-05-10
JP2009284915A (ja) 2009-12-10
ES2215494T1 (es) 2004-10-16
US20170327822A1 (en) 2017-11-16
US20200299693A1 (en) 2020-09-24
US8372968B2 (en) 2013-02-12
EP1873259B1 (en) 2012-01-25
KR20040012686A (ko) 2004-02-11
RU2007131270A (ru) 2009-02-27
BRPI0115814B1 (pt) 2019-10-15
US20080269147A1 (en) 2008-10-30
SI1407044T2 (en) 2018-03-30
US20050234006A1 (en) 2005-10-20
IL155991A0 (en) 2003-12-23
US20130125259A1 (en) 2013-05-16
NO335426B1 (no) 2014-12-15
CY1119062T1 (el) 2018-01-10
CZ2011452A3 (no) 2003-10-15
HU230458B1 (hu) 2016-07-28
JP4095895B2 (ja) 2008-06-04
US8895718B2 (en) 2014-11-25
PL365784A1 (pl) 2005-01-10
US20110306651A1 (en) 2011-12-15
HK1110631A1 (en) 2008-07-18
US20110070162A1 (en) 2011-03-24
TR200401292T3 (tr) 2004-07-21
HUP0302557A2 (hu) 2003-10-28
CZ308053B6 (cs) 2019-11-27
US20100292456A1 (en) 2010-11-18
US20040229266A1 (en) 2004-11-18
US20110014123A1 (en) 2011-01-20
CA2429814A1 (en) 2002-06-06
US20100316703A1 (en) 2010-12-16
AU2010212438A1 (en) 2010-09-09
JP6325974B2 (ja) 2018-05-16
US20110112283A1 (en) 2011-05-12
IL155991A (en) 2013-06-27
HK1204798A1 (en) 2015-12-04
DE60130583T3 (de) 2018-03-22
NO20032464L (no) 2003-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20200299693A1 (en) Rna interference mediating small rna molecules
EP2351852B1 (en) RNA interference mediating small RNA molecules
AU2013201799B2 (en) Rna interference mediating small rna molecules
Class et al. Patent application title: RNA INTERFERENCE MEDIATING SMALL RNA MOLECULES Inventors: Thomas Tuschl (New York, NY, US) Sayda Mahgoub Elbashir (Cambridge, MA, US) Winfried Lendeckel (Hohengandern, DE) Assignees: Max-Planck-Gesellschaft zur Foerderung der Wissenschaften eV

Legal Events

Date Code Title Description
MK1K Patent expired