NO314221B1 - Farmasöytiske lantionin-inneholdende bakteriocinsammensetninger og anvendelse derav - Google Patents

Description

Den antimikrobielle aktiviteten til lantionin inneholdende bakteriocin nisin er begrenset til visse gram positive organismer og er optimal ved pH 5,0. Den antimikrobielle aktiviteten til nisin er forsterket når den blir anvendt i kombinasjon med en chelator så som EDTA. Aktiviteten til nisin-chelator sammensetninger er blitt funnet å være signifikant høyere eller optimal ved en pH som er større enn 5,0. Det er for eksempel blitt bestemt at den antimikrobielle aktiviteten overfor Staphylococcus aureus til en nisin og EDTA sammensetning er betraktelig høyere ved pH 8,0 enn aktiviteten til den sammensetningen over for S. aureus ved pH 5,0. Kombinasjonen av en chelator med nisin ble også funnet å resultere i aktivitet overfor gram negative bakterier og denne aktiviteten fører normalt ikke til nisin.

Foreliggende oppfinnelse vedrører lantionin-inneholdende bakteriocin-sammensetninger som er aktive ved sur pH under 5,0 og utviser betraktelig aktivitet mot gram negative bakterier. Disse lav-pH-aktive sammensetningene kan være nyttige for eksempel i metoder for behandling eller forebygging av infeksjoner eller vekst av mikroorganismer i mage-tarm kanalen til mennesker og dyr. Disse sammensetningene vil når de blir ført inn i mage-tarm kanalen virke som bakteriecider selv miljøet med lav pH som eksisterer i magen. Denne antibakterielle aktiviteten kan være nyttig i oppnåelse av veksten til infeksjoner forårsaket av mage-tarm patogener så som artene Helicobacter, Escherichia, Salmonella, Bacillus, Clostridia, Bacteroider, Campylobacter og Yersinia. Slike lav-pH aktive bakteriocin sammensetninger vil derfor være nyttig for behandling av forskjellige sykdommer eller symptomer som er forårsaket av tilstedeværelse av slike patogene bakterier.

Forskjellige mage-tarm sykdommer eller symptomer inkludert diaré, gastritt, peptisk og duodenale sår, og magecarcinomer er forårsaket av tilstedeværelse av patogene mikroorganismer i mage-tarm kanalen. Escherichia og Salmonella, spesielt, men også visse arter av Clostridia, Bacillus, Bacteroider, Campylobakter og Yersinia kan være ansvarlig for diaré spesielt i neonatale gårdsdyr. (R.E. Holland, 1990, Clin. Microbiol. Rev. 3:345, "Some infectious causes of diarrhea in young farm animals"). Helicobacter pylon er implisert i gastritis, duodenal og peptisk sårsykdommer. (Peterson, W.L., 1991, New Eng. J. Med. 324:1043, "Helicobacter pylori and peptic ulcer disease") er også assosiert med mage carcinoma. (Henderson, B.E., Ross, R.K., og Pike, M.C., 1991, Science 254:1131, "Toward the primary prevention of cancer", Nomura, A. Stemmermann, G.A., Chyou, P.H., Kato, I., Perez-Perez, G. og Blaser, M.J. (1991) New Eng. J. Med. 325:1132 "Helicobacter pylori infection and gastric carcinoma among Japanese Americans in Hawaii".; Parsonnet, J., Friedman, G.D., Vandersteen, D.P., Chang, Y.s Vogelman, J.H., Orentreich, N, og Sibley, R.K. (1991) New Eng. J. Med. 325:1127; Forman, D., Sitas, F., Newell, D.G., Stacey, A.R., Boreham, J., Peto, R., Campbell, T.C., Li, J. og Chen, J. (1990) Int. J. Cancer 46:608 "Geographic association of Helicobacter pylori antibody prevalence and gastric cancer mortality in rual China").

Mange mage-tarm patogener er gram negative bakterier og er organismer som nisin er ventet å være inaktive overfor, (hirst, A., 1981, "Nisin," Adv. in App. Micr. V. 27, s. 85-121). For eksempel Helicobacter pylori (som også er blitt identifisert tidligere som Campylobacter pylori) er en gram negativ mikroaerofil bacillus som koloniserer mage-slimhinnen. Siden 1983 når den først ble rapportert i sammenheng med histologisk gastritt, ble et forhold mellom suppresjon av H. pylori infeksjon og forbedring av mageforstyrrelser oppdaget. Til tross for at mange antibiotikaer er blitt forsøkt mot H. pylori infeksjon har ingen vist seg å være akseptable og det er ikke noe middel eller regime som er blitt godkjent for anvendelse mot denne organisme. Langtidsutrydning av organismen er sjelden blitt oppnådd og antibiotikaene kan selv produsere uakseptable bivirkninger. (Peterson, W.L., 1991, New Engl. J. Med. 324.1043 "Helicobacter pylori and peptic ulcer disease; Waren, J.R., 1983, Lancet 1:1273, "Unidentified curved bacilli on gastric epithelium in active chronic gastritis"; Morgan et al., 1988, Gastroenterology 95:1178, "Nitrofurans in the treatment of gastritis associated with Campylobacter pylori"; Glupczynski, Y. et al., 1988, Am. J. Gastroenterol. 83:365 "Campylobacter pylori-associated gastritis: a double-blind placebo controlled trial with amoxycillin"; Rauws, E.A., et al., 1988, Gastroenterology 94:33, "Campylobacter pylori-associated chronic anteral active gastritis"; Glupczynski, Y. 1990 in Helicobacter pylori, gastritis, and peptic ulcer"; Malfertheiner, P., Ditschuneit, H., Eds. Springer-Verlag, Berlin, Germany pp 49-58; Rauws, E.A. og Tytgat, G.N. 1990 Lancet 335:1233 "Cure of duodental ulcer associated with eradication of Helicobacter pylori. 0'Riordan, T. et al., 1990, Gut 31:999 "Adjuvant antibiotic therapy in duodenal ulcers treated with colloidal bismuth subcitrate"; Weil, J. et al., 1990, Aliment, Pharmacol. Ther., 4:651 "Helicobacter pylori infection treatet with a tripotassium dicitrato bismuthate and metrinidazole combination"; Coghlan, J.G., Gilligan, D:, Humphries, H., et al., 1987, Lancet 2:1109 "Campylobacter pylori and recurrence of duodenal ulcer -1 12 month follow-up study"; Marshall, B.J. Goodwin, C.S., Warren, J.R. et al., 1988, Lancet 2:1437, "Prospective double-blind trial of duodenal ulcer relapse after eradication of Campylobacter pylori").

Foreliggende oppfinnelse vedrører en farmasøytisk sammensetning for behandling eller forebygging av forstyrrelser i mage-tarm-kanalen forårsaket av patogene mikroorganismer, kjennetegnet ved at den omfatter et lantionin-inneholdende bakteriocin med effektiv virkning ved pH på minst 2,0, men under 5,0, og en farmasøytisk askeptabel bærer og eventuelt en chelator.

I nevnte sammensetning kan chelatoren være citrat, EDTA eller citrat og EDTA. Nevnte bacteriocin kan være nisin eller at bacteriocinet er nisin og chelatoren er citrat eller

EDTA.

Oppfinnelsen omfatter også anvendelse av en sammensetning som tidligere nevnt for fremstilling av et preparat til forebygging eller behandling av mage-tarm-forstyrrelser forårsaket av patogene mikroorganismer i mage-tarm-kanalen.

Disse sammensetningene er stabile og aktive ved sur pH og er nyttige for deres antibakterielle aktivitet mot gram negative bakterier i lav-pH miljø som oppstår i mage-tarm kanalen. Farmasøytiske nisin sammensetninger ifølge oppfinnelsen virker hurtig slik at når de blir tilført magen og mage-tarm kanalen skulle deres aktivitet ikke være begrenset av hvorved mageinnholdet fjernes. Til forskjell fra antibiotika kan nisin sammensetninger trygt inntas. De farmasøytiske sammensetningene kan bli anvendt alene i behandlingsregimer eller i kombinasjon med andre farmasøytiske midler eller medikamenter.

Effektiviteten til foreliggende oppfinnelse er blitt demonstrert på E. coli bakterier som finnes i pattedyrtarmen og som ofte er ansvarlig for mage-tarm forstyrrelser. Over-levelsen av E. coli er upåvirket av eksponering overfor EDTA eller citrat i seg selv eller for eksponering for nisin. Suspensjoner av E. coli eksponert for syre overlever i et surt miljø helt til pH faller under pH 2,5. Som angitt nedenfor, når nisin blir kombinert med EDTA i et område med sure pH verdier fremkom signifikant reduksjon i levedyktigheten til bakteriene etter bare 1 min. eksponering for nisin sammensetningene. Ved pH 3,5 kan en reduksjon med mer enn 6 logaritmer i antall levedyktige bakterier etter bare 1 min. eksponering for nisin-chelator sammensetningen tilskrives nisin. Under pH 3,5 er en viss reduksjon av innflytelsen til nisin sammensetningene tydelig, men en omtrent 1000-ganger forsterkning av nisin-akriviteten er igjen, selv ved pH 2,5 (tabell 1).

EDTA-aktivert nisin er bakteriedrepende overfor E. coli i nærvær av forskjellige syrebærere inkludert acetat, citrat, Iactat og succinat, som vist i tabellene 2-5. Som illustrert i resultatene oppnådd ved pH 3,5 kan den hurtige bakteriedrepende aktiviteten til nisin sammensetningene bli influert av valget av sur bærer. I alle de illustrerte tilfellene er det slik at når konsentrasjonen av hvert syreanion økes ble den bakterielle aktiviteten til nisin sammensetningene observert å bli redusert. Hver av disse syrebærerene er til tross for dette egnet for ekspresjon av chelator-forsterket nisin-aktivitet. Eksponering av bakteriene for disse nisin sammensetningene i en lengre periode enn 1 minutt er effektivt for å redusere antall bakterier selv når formuleringene inneholder mindre effektive konsentrasjoner av de sure bærerene.

Vurdering av bakteriedre<p>ende aktivitet til chelator- forsterket nisin i sure bærere overfor gram negative bakterier.

De hurtige aktivitetene til forskjellige chelator-forsterkede nisin formuleringer ble vurdert i sure bærere i en bakteriedrepende suspensjonsanalyse.

E. coli celler fra en over natt Trypticase soya nærings agar (TSA) ble resuspendert til en tetthet målt som en absorbanse på 1,0 ved 600 nm i sterilt ddH20. Reaksjonen av cellene med hver av de bakteriedrepende testformuleringene analysert ble begynt ved tilsetning av 30 ul celler til 970 ul av testformuleringen. Reaksjonsblandingen ble inkubert ved 37°C i minst 1 minutt og deretter sentrifugert i en mikrofuge i l min. Selve pelleten ble vasket ved resuspensjon i 1 ml nøytraliseringsbuffer.

(Nøytraliseringsbuffer: 50 mM Tris-HCl. pH 7,0,5 mM MgSC>4, 20 mM CaCtø, 0,1 M NaCl og 0,1% gelatin ble dannet ved først å danne tris buffer og justering av pH. Saltene og gelatin ble deretter tilsatt og oppløsningen omrørt med varme helt til oppløsningen var klar. Oppløsningen ble deretter autoklavert i 20 min. Nøytrali-seringsbufferen ble anvendt uten fortynning. Cellene ble sentrifugert i en mikrofuge i 1 minutt og resuspendert i 1 ml nøytraliseirngsbuffer. Tallet på levedyktige ble bestemt ved å spre 100 ul bakteriell suspensjon og seriefortynninger derav i nøytraliseirngsbuffer på nærings agar og registrering av overlevende kolonier etter 24 timer ved 37°C. Prosent overlevelser relativt til ubehandlede kontroller ble beregnet fra de registrerte verdiene.

EDTA-forsterket aktivitet til nisin blir uttrykt ved lav pH. Under pH 3,5 blir graden av forsterkning redusert sannsynligvis når karboksylgruppene til chelatoren blir titrert. En omtrent 1000-ganger forsterkning av nisin med EDTA ble observert selv ved pH 2,5. Se resultatene presentert i tabell 1.1 tabell 1 og påfølgende tabeller 2,4 og 8-13 representerer verdier etterfulgt av "<" representerer prosent overlevelse basert på den opprinnelige konsentrasjonen av levedyktige bakterier (uttrykt som kolonidannende enheter (cfu)/ml) i den analyserte bakterielle suspensjonen og alikvotvolumet til nevnte suspensjon tatt for analysen tilsvarende deteksjon av ingen overlevende kolonier.

Ved pH 3,5 ble EDTA-forsterket nisin aktivitet observert i nærvær av alle sure anioner som ble testet (se tabellene 2-5). Ved pH 3,5 var lactat ved 0,3% noe inhibitorisk overfor EDTA-forsterket nisin aktivitet. Aktiviteten er fortsatt forsterket med en 1000-ganger over 0,3% lactat alene og 0,1% lactat er ikke inhibitorisk overfor EDTA-forsterket nisin.

Ved pH 3,5 ser det ut til at opp til 0,3% acetat og 0,3% citrat er kompatible med chelator-forsterket nisin bakteriedrepende aktivitet overfor E; coli suspensjoner. Disse anionene ser ut til å være mest lovende som sure bærere for formulering med EDTA-forsterket nisin. Citrat er en mest egnet sur bærer for EDTA-forsterkede nisin sammensetninger. Citrat er en naturlig forekommende matvareforbindelse og intermediær metabolit og en effektiv forsterker av nisin baktericida! aktivitet i seg selv (tabell 3). Nisin-citrat sammensetningene kan ventes å være trygge og effektive for å inneholde eller eliminere veksten av uønskede mikroorganismer i mage-tarm kanalen til mennesker og dyr.

Citrat er en metabolitt og inhiberer ikke veksten av bakterier og bakterier. Bakterier vokser bra på næringsagar supplert med citrat. Nisin i nærvær av citrat er derimot aktiv overfor gram negative bakterier. Det er dermed mulig å demonstrere aktiviteten til nisin overfor gram negative bakterier ved å utføre vekst inhibisjonsanalyser på næringsagar supplert med forskjellige konsentrasjoner av en citrat. Denne nisin-citrat agar analysen har mye mer generell anvendbarhet. Analysen tilveiebringer en metode for å screene potensielle midler som er forskjellige fra citrat i kombinasjon med nisin for deres potensielle egenskaper som forsterkere av nisinets iboende bakteriedrepende aktivitet. Eksempler på andre organiske syrer i kombinasjon med nisin innbefatter acetat, propionat, lactat, succinat, fumarat, malonat, adipat, sorbat, fosfat og ascorbat.

Andre midler som potensierer nisin aktiviteten innbefatter ikke-ioniske og amfoteriske overflate midler og emulgeringsmidler, kvarternære forbindelser, monoglycerider og fettsyrer.

Nisin-citrat agaranalysen blir utført som følger. E. coli blir resuspendert til en optisk tetthet på 1,0 ved Agøø. En 100 ul prøve av den bakterielle suspensjonen blir jevnt spredt på Trypticase soya næringsagar (TSA) supplert med forskjellige konsentrasjoner av citrat (for eksempel 0,1%, 0,3%, 1,0%, 3,0%) og inkubert i 1 time ved 37°C. En nisin stamoppløsning og seriefortynninger derav i 0,1% bovint serumalbumin (BSA) blir dannet og S ul blir tatt fra hver og deponert på det voksende bakterielle teppet. TSA platene blir deretter inkubert i 24 timer ved 37°C. Etter 24 timer ved 37°C danner E. coli dyrket på TSA supplert med citrat et sammenhengende teppe. Aktiviteten til nisin overfor bakterier dyrket i nærvær av citrat blir demonstrert av klare soner i det bakterielle teppet hvor de seriefortynnede nisinprøvene var deponert. Effektiviteten til nisin overfor gram negative bakterier kan bli vurdert ut fra bestemmelse av den minimale mengden nisin nødvendig for å produsere en klar sone med vekstinhibisj on. Når konsentrasjonen av citrat i næringsagaren økes er mindre nisin nødvendig for å inhibere veksten av E. coli som illustrert av dataene vist i tabell 6.

Aktiviteten til nisin forsterket med EDTA, citrat eller andre chelatorer er også blitt demonstrert mot flere stammer av Helicobacter pylori samt beslektede arter, spesielt Campylobacter jejuni, ifølge bakteriedrepende suspensjonsanalyse. Eksempler er vist i tabellene 7-13. Friskt dyrkede H. pylori celler dyrket på en næringsagarskål (Trypticase Soy Agar, BBL 11043, supplert med 5% defibrinert saueblod), ble høstet og deretter dyrket ved 37°C i 72-96 timer i et BBL Gaspak system beholder med BBL Camp Pak mikroaerofUisk system beholdere og anvendelse av en Campylobacter mikroaerofilisk gassgenerator (BBL71034). Cellene ble deretter resuspendert i sterilt, deionisert destil-lert vann til en celletetthet på 1,0 A5Q0 for å tilveiebringe en egnet stamoppløsning. Analysen ble påbegynt ved tilsetning av 50 ul bakteriell suspensjon til 950 ul av test-oppløsningen, inkubert ved 37°C i 5 minutter og deretter sentrifugert i 1 min. i en mikrofuge. Cellepelleten ble vasket ved resuspensjon i 1 ml steril nøytraliseirngsbuffer tidligere beskrevet og sentrifugert i 1 min. i en mikrofuge. Cellene ble deretter resuspendert i Brucella-Albimi næringsmedium (BBL) og fortynnet i serier i dette før utsåing på næringsagar. Tallet på levedyktige ble bestemt ved utsåing av 100 ul bakteriell suspensjon og fortynninger derav på næringsagaren beskrevet ovenfor og registrering av overlevende kolonier etter 72-95 timers inkubasjon ved 37°C i den modifiserte atmosfæren beskrevet ovenfor. Prosent overlevelse relativt til ubehandlede kontroller ble beregnet ut fra de registrerte verdiene.

Konsentrasjonsavhengigheten til aktiviteten til nisin overfor Helicobacter pylori i nærvær og fravær av 0,1% citrat ved pH 5,0 er illustrert i dataene presentert i tabell 7. Til tross for at H. pylori er en gram negativ bakterie betraktes nisin å bare være aktiv overfor gram positive bakterier og utviser overraskende en viss bakteriedrepende aktivitet overfor denne organismen. Aktiviteten til nisin overfor H. pylori blir betraktelig forsterket av tilstedeværelse av citrat.

Konsentrasjonsavhengigheten til aktiviteten til nisin overfor H. pylori ved citrat ved pH 5,0 og pH 7,0 er illustrert ut fra dataene presentert i tabell 8. Citrat i seg selv har liten virkning på levedyktigheten til denne bakterielle arten ved pH 5,0 til tross for at ved pH 7,0 er levedyktigheten til organismen noe redusert ved høyere konsentrasjoner av citrat. Virkningene av citrat alene er overraskende på grunn av at citrat er en metabolit. Den forsterkede aktiviteten til nisin i nærvær av citrat er tilstrekkelig for å fullstendig drepe en 10^ cfu/ml suspensjon H. pylori i løpet av 5 minutter ved 37°C.

Data presentert i tabell 9 illustrerer at aktiviteten til nisin overfor H. pylori ved pH 5,0 og pH 7,0 er også betraktelig forsterket i nærvær av chelator EDTA. Selve chelatoren har liten virkning på levedyktigheten til disse organismene unntatt ved høyere konsentrasjoner. Den EDTA-forsterkede aktiviteten til nisin er tilstrekkelig for fullstendig å drepe en 10^ cfu/ml suspensjon H. pylori i løpet av 5 minutter ved 37°C.

Den bakterielle aktiviteten til nisin overfor H. pylori i nærvær eller fråvær av citrat eller EDTA over et område av pH verdier er illustrert av dataene presentert i tabell 10 og tabell 11. Til tross for det faktumet at H. pylori er isolert fra magen hvor hulrommet er surt er levedyktigheten til denne organismen overraskende dårlig etter eksponering for betingelser med lav pH. H. pylori koloniserer mågens mucosale epitel som er et mindre surt mikromiljø enn i mågens hulrom. Til tross for den begrensede levedyktigheten til H. pylori ved lav pH i disse eksperimentene så indikerer dataene at nisin med citrat eller EDTA kan ventes å være bakteriedrepende overfor H. pylori under betingelser som lig-ner de som er til stede i magen og i slimhinneepiteler hvor H. pylori kan trives.

Campylobacter jejuni er en gram negativ bakterie som koloniserer tarmen til fugler og pattedyr og er blitt assosiert med matforgifming. Den bakteriedrepende aktiviteten til nisin i nærvær og fravær av citrat eller EDTA, overfor C. jejuni er illustrert av dataene presentert i tabell 12 og tabell 13. Nisin i seg selv er ektremt effektiv overfor denne gram negative bakterien. Ved pH 5,0 viste høyere konsentrasjoner av citrat også være toksisk overfor denne bakterien. Kombinasjoner av nisin med citrat eller EDTA kan derfor ventes å være effektiv overfor C. jejuni som illustrert av dataene i tabellene 12 og 13.

Aktiviteten til nisin forsterket med EDTA, citrat eller andre chelatorer kan også bli demonstrert overfor Salmonella arter ved bakteriedrepende suspensjonsanalyser. Nydyrkede S. typhimurium celler blir tatt ut fra en næringsagar skål (Trypticase soya agar, BBL11043), dyrket ved 37°C i 24 timer. Cellene blir resuspendert til en celletetthet på 1,0 A500 f°r å tilveiebringe en egnet stamsuspensjon. Analysen blir påbegynt ved tilsetning av 30 ul bakteriell suspensjon til 970 ul av testoppløsningen og inkubert i minst 1 min. og deretter sentrifugert i 1 min. i en mikrofuge. Cellepelleten blir vasket ved resuspensjon av 1 ml steril nøytraliseringsbuffer, resuspendert på nytt og deretter fortynnet i serie i nøytraliseringsbuffer. Antall levedyktige blir bestemt ved utsåing av 100 ul bakteriell suspensjon og fortynninger derav på næringsagar og registrering av overlevende kolonier etter 24 timers inkubasjon ved 37°C. Prosent overlevelse relativt til ubehandlede kontroller blir beregnet ut fra registrerte verdier.

Lav-pH-aktive bakteriocin sammensetninger ifølge oppfinnelsen blir fortrinnsvis administrert oralt i form av et farmasøytisk preparat som inneholder en effektiv mengde lantionin-inneholdende bakteriocin og en farmasøytisk akseptabel bærer. Bæreren kan også innbefatte en effektiv mengde av en chelator og/eller en sur bærer og/eller et overflate-aktivt middel eller emulgeringsmiddel, monoglycerid eller fettsyre. Lantionin-inneholdende bakteriocin kan bli valgt fra gruppen bestående av nisin, subtilin, epidermin, Pep 5, ancovenin, gallidermin, duromycin eller cinnamycin. Egnede chelateringsmidler innbefatter, men er ikke begrenset til, EDTA, CaEDTA, CaNa2EDTA og andre alkyldi-amintetraacetater samt citrat. I visse tilfeller kan chelatoren og den sure bæreren være de samme, så som når den sure bæreren og chelatoren begge er citrat. Egnede sure bærere for anvendelse i sammensetningene ifølge denne oppfinnelsen er acetat, propionat, citrat, lactat, succinat, fumarat, malonat, adipat, sorbat, fosfat og ascorbat. Sammensetningene ifølge oppfinnelsen er også effektive ved svakt sure pH nivåer (for eksempel pH 5,0) og selv ved høyere pH nivåer (for eksempel pH 8,0), hvorfor patogene bakterier som kan være til stede i mage-tarm-kanalen, så som E. coli og S. typhimurium som beskrevet i utstedt US-PS 5.135.910. Beskrivelsen ifølge US-PS 5.135.910 er herved inkorporert som referanse i sin helhet.

De farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan dermed også bli formulert som antacid sammensetninger eller administrert i kombinasjon med et antacid hvor administreringen kan resultere blant annet i et høyere mage pH miljø enn det som eksisterer før administreringen. Nisin chelator sammensetningene vil fortsatt være effektive overfor patogene bakterier under slike betingelser.

Farmasøytiske akseptable bærere kan være i form av et fast, halv-fast eller flytende for-tynningsmiddel eller en kapsel. I visse utførelsesformer ifølge oppfinnelsen kan den sure bæreren og den farmasøytiske bæreren være de samme. Andre farmasøytiske akseptable bærere kan være cellulosederivater, gelatin, laktose, stivelse, osv. Farmasøytiske sammensetninger kan være i form av oppløsninger, koloider eller emul-sjoner, pulvere, tabletter, kapsler eller geler.

De tørre formene av sammensetningene som er aktive ved lav pH kan bli presset til tabletter som kan bli belagt med en konsentrert oppløsning av sukker og som kan inneholde andre farmasøytiske akseptable substituenter så som gummi arabicum, gelatin, talk eller titandioksid kan også bli belagt med forskjellige farvestoffer. Harde gelatin-kapsler kan også bli dannet inneholdende granuler av bakteriocin, sur bærer og chelate-ringsmiddel i kombinasjon med en fast bærer så som laktose, potetstivelse, maisstivelse, cellulosederivater eller gelatin. Flytende preparater for oral administrering kan bli dannet i form av siruper eller suspensjoner omfattende peptidet bakteriocin, chelaterings-middelet, den sure bæreren og sukker, vann og glycerol eller propylenglykol. Om øns-kelig kan slike flytende preparater inneholde farvemidler, smaksmidler, søtningsmidler så som saccharin og fortykningsmidler så som cellulosederivater.

Levering av en dosering kan bli oppnådd ved modifikasjoner av de vanlige vandige formuleringene ved innbefatning av fortykningsmidler, emulgeringsmidler eller par-tikulater for å oppnå en colloidal suspensjon. Alternativt kan osmotiske balanserte opp-løsninger inneholdende en egnet dosering bli administrert i volumer som er så små som 10 ml eller så store som 4 liter. Osmotiske balanserte oppløsninger så som de som blir anvendt som mage-tarm utskyllingsoppløsninger kan være egnede (Di palma, J.A. og Brady, C.E., 1989, Am. J. Gastroenterol. 84:1008, "Colon Cleansing for Diagnostic and Surgical Procedures: Polyethylene glycol Lavage Solution"; Di Palma, J.A. og Marshal, J.B., 1990, Gastrointestinal Endoscopy 1990, 36:285, "Comparison of a new Sulfate-free Polyethylene glycol Electrolyte Lavage Solution versus a Standard Solution for Colonoscopy Cleansing"; Fordtran, J.S., et al., 1990, Gastroenterol. 98:11, "A low-Sodium Solution for Gastrointestinal Lavage"). Yteevnen til mage-tarm utskyllings-oppløsningene anvendt for å skylle mage-tarm kanalen er ventet å bli forbedret ved innlemming av de bakteriedrepende sammensetningene beskrevet heri.

Den typiske daglige dosen ifølge sammensetningene ifølge oppfinnelsen kan variere

ifølge den patogene mikroorganismeinfeksjonen som blir behandlet, infeksjonssetet og symptomene til sykdommen som blir behandlet. Det er generelt ventet at orale doserin-ger vil variere fra 0,1 mg pr dose til 300 mg pr dose av lantionin-inneholdende bakterio-cid forbindelse og 0,1 g pr dose til 30 g pr dose chelator. På grunn av at volumet til mageinnholdet varierer som en funksjon av tiden som går etter siste måltid kan enkle vandige formuleringer egnede for anvendelse for mage-tarm bli dannet som følger:

for at en sluttkonsentrasjon skal bli oppnådd i magen ved 0,1% citrat + 0,001% nisin (10 Hg/ml) levert i 10 ml og oppnåelse av omtrent 100 ml i magen:

For at en sluttkonsentrasjon skal bli oppnådd i magen ved 3.0% citrat + 0,03% nisin (300 ug/ml) levert i 10 ml og antagelse av 100 ml i magen:

Dosering 2: 30 mg nisin og 3.0 g

For at en sluttkonsentrasjon blir oppnådd i magen ved 0,1% citrat + 0,001% nisin (10 Hg/ml) levert i 10 ml og oppnåelse av 1000 ml i magen:

Dosering 3:10 mg nisin og 1.0 g

For at en sluttkonsentrasjon blir oppnådd i magen ved 3,0% citrat + 0,03% nisin (300 ug/ml) levert i 100 ml og oppnåelse av 1000 ml i magen:

Dosering 4: 300 mg nisin og 30 g

For at en sluttkonsentrasjon blir oppnådd i magen ved 3,0% citrat + 0,03% nisin (300 fig/ml) levert i 100 ml og oppnåelse av 100 ml i magen:

Dosering S: 60 mg nisin og 6.0 g

Avhengig av type patogen mikroorganisme og sykdom som blir behandlet kan behand-lingsregimet omfatte andre medikamenter og farmasøytiske midler enten som del av den farmasøytiske sammensetningen som blir administrert eller i behandlingsregimer som kombinerer både lav-pH-aktiv bakteriocin sammensetning og annet medikament effektivt for behandling av mage-tarm kanalen. For behandling av diaré som kan være forårsaket av infeksjoner av en patogen mikroorganisme som fra arten Salmonella kan bakteriocin sammensetning som er aktiv ved lav pH bli bli administrert i et farmasøytisk preparat som også inneholder kaolin, pektin eller annet bindingsmiddel. Slike symptomer kan også bli behandlet ved samtidig administrering av bakteriocin sammensetningen som er aktiv ved lav pH og bindingsmiddelet. I tillegg kan antacid formuleringer bli anvendt i slike behandlingsregimer og det er ikke ventet at antacider vil påvirke aktiviteten til nisin-chelator sammensetningen.

Ved behandling av infeksjoner fra den patogene mikroorganismen Helicobacter pylori kan lav-pH-aktive bakteriocin sammensetninger bli administrert i sammenheng med en annen farmasøytisk aktiv forbindelse mot H. pylori så som et bismuth salt, for eksempel bismuth subcitrat eller bismuth subsalicylat. Sammensetningene ifølge oppfinnelsen kari bli administrert i sammenheng med andre midler så som cimetidin, ranitidin, omeprazol, antacider, urease inhibitorer eller kombinasjoner derav for å behandle noen av sykdom-mene og symptomene assosiert med tilstedeværelse av H. pylori i mage-tarm kanalen. Det blir vurdert at i disse tempiene kan de aktive farmasøytiske midlene bli administrert samtidig eller periodisk med de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen med de farmasøytiske sammensetningene ifølge oppfinnelsen og administreringsmåten kan bli variert i løpet av behandlingen etter behov.

H. pylori er blitt isolert fra tann plaque som kan utgjøre et reservoar for tilbakevendende infeksjon i magen (Desa; H.G., Gill, H.H., Shankaran. K., Metha, P.R., og Prabha, S.R.

(1991) Dental Plaque: a permanent reservoir of helicobacter pylori? Scand. J. Gastroenterol. 26:1205 og Shames, B., Krajden, S., Fukasa, M., Babida, C. og Penner, J.L. (1989) Evidence for the Occurence of the Same Strain of Campylobacter pylori in the Stomach and Dental Plaque. J. Clin. Microbiol. 27:2849).

Det blir derfor antatt at bakteriocin sammensetninger egnede for anvendelse mot H. pylori i dentale plaque kan bli anvendt sammen med bakteriocin sammensetninger aktive ved lav pH mot H. pylori i mage-tarm kanalen.

Claims (9)

1. Farmasøytisk sammensetning for behandling eller forebygging av forstyrrelser i mage-tarmkanalen forårsaket av patogene mikroorganismer, karakterisert ved at den omfatter et lantionin-inneholdende bakteriocin med effektiv virkning ved pH på minst 2,0 men under 5,0, og en farmasøytisk akseptabel bærer og eventuelt en chelator.

2. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at chelatoren er citrat, EDTA eller citrat og EDTA.

3. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at bakteriocinet er nisin, eller bakteriocinet er nisin og chelatoren er citrat eller EDTA.

4. Sammensetningen ifølge krav 1, karakterisert ved at den omfatter en sur bærer.

5. Sammensetningen ifølge krav 4, karakterisert ved at den sure bæreren velges fra gruppen bestående av acetat, propionat, citrat, laktat, succinat, fumarat, malonat, adipat, sorbat, fosfat eller ascorbat.

6. Anvendelse av en sammensetning ifølge et hvilket som helst av kravene 1 -5, for fremstilling av et preparat til forebygging eller behandling av mage-tarm forstyrrelser forårsaket av patogene mikroorganismer i mage-tarm kanalen.

7. Anvendelsen ifølge krav 6, hvor forstyrrelsene skyldes gram negative bakterier.

8. Anvendelsen ifølge krav 6, hvor mikroorganismen er en art av Helicobacter, Salmonella, Escherichia, Clostridia, Bacillus, Bacteroider, Campylobacter eller Yersinia eller hvor rnikroorganismen er Helicobacter pylori eller Campylobacter jejuni.

9. Anvendelse av en sammensetning ifølge krav 3, for fremstilling av et preparat for å forhindre eller behandle mage-tarm bakterieinfeksjon som er et resultat av Helicobacter pylori eller Campylobacter jejuni.