PL163922B1

PL163922B1 - Sposób wytwarzania duzej pigulki o przedluzonym uwalnianiu PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number: PL163922B1
Application number: PL90284064A
Authority: PL
Inventors: Irwin B Wood; Richard B Toothill; Joseph Ch Dietz
Original assignee: American Cyanamid Co
Priority date: 1989-02-28
Filing date: 1990-02-28
Publication date: 1994-05-31
Also published as: IL93226A0; DK0385106T3; EP0385106A1; RU2014832C1; KR0160976B1; JP3033965B2; DE69007515T2; IE900699L; UA37173C2; JP2563139B2; CA2010934A1; HU901185D0; ES2062118T3; NZ232607A; PL284064A1; CS9000904A2; CN1035986C; HU206180B; ATE103173T1; JPH02268115A

Abstract

1. Sposób wytwarzania duzej pigulki o przedluzo- n ym uwalnianiu do podawania doustnego zwierzetom przezuwajacym, skutecznej przez okres do szesciu mie- siecy przed zakazeniem postaciami doroslymi lub lar- wami robaków pasozytujacych w jelicie, owadów-pasozy- tów wewnetrznych, owadów pasozytów zewnetrznych i roztoczy, znamienny tym, ze miesza sie 0,3% do 10% wagowych LL-F28 24a , 23-(0-metylooksym )-LL- F28 249a lub ich pochodnych, 10% do 20% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0% do 10,0% wagowych wosku karnauba i 70% do 85% wagowych siarczanu barowego lub mialkiego barytu, w temperaturze ponizej temperatury topnienia wosku karnauba, w wyniku czego tworzy sie mieszanina, która ewentualnie poddaje sie tabletkowaniu i nastepnie poddaje sie mieszanine for- mowaniu wtryskowemu z zastosowaniem cyklu formo- wania wtryskowego obejmujacego. (1) faze zasilania, w której utrzymuje sie temperature ponizej temperatury mieknienia mieszaniny, (1 1) goraca faze przejsciowa, z temperatura powyzej temperatury mieknienia, (1 1 1) faze wtryskiwania, w której mieszanine wtryskuje sie do formy w temperaturze ponizej temperatury mieknienia oraz (iv) faze chlodzenia, w celu zestalenia sie duzej pigulki, przy czym etapy (i) do (iv) zostaja sfinalizowane w ciagu okolo 40 do 50 sekund, a temperatura nie prze- kracza 140°C W ZÓR 1 WZÓR 2 PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania dużej pigułki zawierającej w profilaktycznie skutecznej ilości związek LL-F28 249α, 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α lub ich pochodną. Te duże pigułki podaje się zwierzętom przeżuwającym w celu zapobieżenia zakażeniom lub zwalczania zakażeń nicieniami, owadami-pasozytami wewnętrznymi, owadami-pasożytami zewnętrznymi lub roztoczami u tych zwierząt przez czas dłuższy.

Związki określane symbolami LL-F28 249α - λ są (wspólnie) izolowane z brzeczki fermentacyjnej zawierającej mikroorganizmy streptomyces cyaneogriseus podgatunek noncyanogenus zdeponowane w NRRL pod nr 15 773. Sposób wytwarzania związków LL-F28 249 ujawniony jest w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5 106994.

23-okso(keto) i 23-imino pochodne LL-F28 249α - λ stosowane w sposobie według wynalazku ujawnione są w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 916 154.

Szczególnie korzystny składnik aktywny kompozycji uzyskiwanej sposobem według wynalazku - LL-F28 249α określony jest wzorem 1, a 23-(0-metylooksym)-LL-F28 249α określony jest wzorem 2.

Określenie antybiotyku symbolem LL-F28 249 jest określeniem ogólnie stosowanym i jednoznacznym dla specjalisty. Dlatego też w całym opisie zastosowano to oznaczenie w miejsce powoływania wzorów (Dictionary of Antibiotics and Related Substances 91, 1988).

W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr4 166 107 opisano efekty zastosowania dużej pigułki o powolnym działaniu zawierającej regulator wziostu insektów z miesza163 922 niną wosku, tłuszczu i siarczanu baru, użytecznej przy zapobieganiu zakażeniom stawonogów z nawozu i uzyskanej przez formowanie w warunkach atmosferycznych lub formowanie ciśnieniowe.

W opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr4994227 ujawniono dużą pigułkę o powolnym uwalnianiu zawierającą pewne regulatory wzrostu insektów, antybiotyki i środki przeciwrobacze, które wytwarza się przez formowanie wtryskowe. Nigdzie nie ujawniono jednak sposobu wytwarzania dużych pigułek o przedłużonym działaniu zawierających endektocydy LLF28 249a i 23-(0-metylooksym)LL-F28 249« i ich pochodne, zdolnych do dostarczenia aktywnych endektocydów przez okres do 6 miesięcy.

Wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania nowych dużych pigułek o przedłużonym uwalnianiu zawierających 0,3 do 10,0% wagowych LL-F28 249α, 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α lub ich pochodnej, 10,0 do 20,0% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0 do 10,0% wagowych wosku karnauba i 70,0 do 85,0% wagowych siarczanu barowego. Zapobiegają one u zwierząt przeżuwających przez czas dłuższy zakażeniu nicieniami, owadami-pasożytami wewnętrznymi i zewnętrznymi oraz skażeniu pastwisk przez eliminowanie tych pasożytów w stadium zakaźnym. W wyniku podawania doustnego zwierzętom przeżuwającym opisanej wyżej dużej pigułki, w sposób ciągły uwalnia się do żwacza zwierząt, przez czas dłuższy, LL-F28 249α, 23-(0-metylooksym)LLF28 249a lub ich pochodne w leczniczo lub profilaktycznie skutecznej ilości.

Niespodziewanie stwierdzono również, że zwalczenie lub zapobieżenie zakażeniom nicieniami u zwierząt przeżuwających można osiągnąć przy skrajnie niskim poziomie LL-F28 249« lub 23-(O-metylooksym)LL-F28 249« podawanego w dużej pigułce wytworzonej sposobem według wynalazku, zawierającej około 0,3% do mniej niż 1% wagowych LL-F28 249α 23-(0-metylooksym)LL-F28 249« lub ich pochodnej, około 14 do 16% wagowych monostearynianu gliceryny, około 3 do 5% wagowych wosku karnauba i około 78,01 do 82,7% wagowych barytu.

Ponadto stwierdzono, że duże pigułki wytworzone sposobem według wynalazku są skuteczne w zapobiegawczym zwalczaniu pasożytów, które atakują inwentarz żywy oraz że to zwalczanie w sposób oczywisty ma swoje źródło w ciągłej obecności LL-F28 249« lub 23-(O-metylooksym)LLF28249« na niezmiernie niskim poziomie. Zaobserwowano także, że profilaktyczne działanie na zwierzęta nie tylko uwalnia je od porażenia nicieniami, owadami-pasożytami wewnętrznymi, owadami-pasożytami zewnętrznymi i roztoczami, ale dodatkowo zapewnia znacznie polepszony przyrost ciężaru w stosunku do zwierząt, na które nie działano tym środkiem albo zwierząt, na które działano innymi czynnikami przeciwrobaczymi, przeciwbakteryjnymi i roztoczobójczymi.

Korzystne środki w postaci dużej pigułki skuteczne w zwalczaniu i/lub zapobieganiu zakażeniom przez owady, nicienie i roztocze u zwierząt przeżuwających, takich jak bydło, owce, kozy, bawoły, zwierzyna płowa itp., zawierają 1,0 do 8,5% wagowych LL-F28 249« lub 23-(0metylooksym)LL-F28 249a, 14,0 do 15,0% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0 do 5,0% wagowych wosku karnauba i 70,0 do 80,0% barytu.

Sposób wytwarzania dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu do podawania doustnego zwierzętom przeżuwającym, skutecznej w ochronie tych zwierząt przez okres do sześciu miesięcy przed zakażeniem postaciami dorosłymi lub larwami robaków pasożytujących w jelicie, owadówpasożytów wewnętrznych, owadów-pasożytów zewnętrznych i roztoczy, polega na tym, że:

(1) miesza się 0,3% do 10% wagowych LL-F28 249α, 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α lub ich pochodnych, 10% do 20% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0% do 10,0% wagowych wosku karnauba i 70% do 85% wagowych siarczanu barowego lub miałkiego barytu, w temperaturze poniżej temperatury topnienia wosku karnauba, w wyniku czego tworzy się mieszanina, którą (2) ewentualnie poddaje się tabletkowaniu i następnie (3) poddaje się mieszaninę formowaniu wtryskowemu z zastosowaniem cyklu formowania wtryskowego obejmującego: (i) fazę zasilania, w której utrzymuje się temperaturę poniżej temperatury mięknienia mieszaniny, (ii) gorącą fazę przejściową, z temperaturą powyżej temperatury mięknienia, (iii) fazę wtryskiwania, w której mieszaninę wtryskuje się do formy w temperaturze poniżej temperatury mięknienia oraz (iv) fazę chłodzenia, w celu zestalenia się dużej pigułki, przy czym etapy (i) do (iv) zostają sfinalizowane w ciągu około 40 do 50 sekund, a temperatura nie przekracza 140°C, przy czym w etapie formowania wtryskowego czas wtrysku wynosi 20 sekund,

163 922 ciśnienie wtrysku wynosi 7,721 MPa, a temperatura mieszaniny poddawanej wtryskiwaniu wynosi 89 do 90°C.

Tak więc w sposobie według wynalazku miesza się (biorąc za podstawę wielkości wagowe) w temperaturze poniżej temperatury topnienia wosku lub mieszaniny, około 0,3 do \0%o składnika czynnego, około 3,0 do 10%o wosku karnauba, około 10 do 20% monostearynianu gliceryny i około 70 do 85% farmakologicznie i farmaceutycznie dozwolonego wypełniacza o dużej gęstości wybranego spośród siarczanu barowego i barytu. Mieszaniny można użyć w stadium formowania wtryskowego jako takiej, lub też można ją przeprowadzić w postać tabletek lub płatków z zastosowaniem wytłaczarki lub płatkownicy, po czym utworzonych tabletek lub płatków można użyć do formowania wtryskowego.

Po mieszaniu, mieszaninę wyładowuje się i albo przenosi do tabletkującej wytłaczarki, albo załadowuje bezpośrednio do wtryskarki. Jeżeli pożądane jest tabletkowanie w celu polepszenia homogeniczności, mieszaninę można stabletkować z zastosowaniem trzystopniowego profilu temperatury obejmującego sekcję zasilania, utrzymywaną w temperaturze poniżej temperatury topnienia wosku, strefę przejściową na gorąco utrzymywaną w temperaturze powyżej temperatury topnienia wosku i stearynianu i sekcję dozowania, utrzymywaną w temperaturze poniżej temperatury topnienia zastosowanego wosku i stearynianu przy użyciu dyszy przepustowej wyposażonej w płytkę przerywającą, przy czym zespół dyszy wyposażonej w płytkę przerywającą utrzymuje się w temperaturze w zakresie podobnym do zakresu sekcji dozowania.

Utworzony wytłoczony materiał chłodzi się powietrzem i tnie na tabletki o pożądanej wielkości. Polepszoną homogeniczność można również uzyskać za pomocą spłatkowania mieszaniny składnika czynnego, wosku i napełniacza stanowiącego siarczan barowy lub baryt, a następnie zbrylenia lub zgranulowania woskowego przy użyciu handlowo dostępnego wyposażenia.

Wytworzone tabletki i/lub suchą mieszaninę materiału przenosi się do instalacji kształtowania wtryskowego pracującego w trzystopniowym profilu temperatury podobnym do profilu stosowanego w przypadku tabletkowania, a więc z fazą zasilania w temperaturze poniżej temperatury mięknienia mieszaniny, fazą przejściową powyżej temperatury mięknienia i fazą wtryskiwania, w której mieszaninę wtryskuje się do formy w temperaturze poniżej temperatury mięknienia mieszaniny. Formę chłodzi się w celu zestalenia się dużej pigułki. Następnie wytworzone tak duże pigułki usuwa się z formy i pakuje.

Aczkolwiek proces powyższy można prowadzić z użyciem siarczanu barowego lub innych napełniaczy lub obciążaczy, korzystne są miałkie byryty. Użycie miałkiego barytu w tym sposobie daje kilka korzyści w porównaniu z zastosowaniem oczyszczonego siarczanu barowego o stopniu czystości USP. I tak np., użycie barytu zwiększa twardość dużej pigułki i zmniejsza szybkość erozji dużej pigułki. To też, duża pigułka zapewnia w wyższym stopniu regulowaną szybkość erozji i bardziej przedłużoną szybkość uwalniania LL-F28 249a lub 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α.

Także podczas przetwarzania mieszanin zawierających wosk, monostearynian gliceryny i składnik czynny stwierdzono, że użycie miałkiego barytu zamiast siarczanu barowego o stopniu czystości USP prowadzi do wytworzenia mniej klejących się i łatwiejszych w manipulowaniu mieszanin stałych.

Wytwarzanie dużych pigułek sposobem według wynalazku na drodze formowania wtryskowego pozwala uniknąć kriogenicznego rozdrabniania stałej mieszaniny lub użycia dodatkowych środków poślizgowych często wymaganych w innych metodach, takich jak prasowanie tabletek z ciał stałych. Inną korzyścią jest to, że unika się tu zawracania do przerobu cząstek zatrzymywanych na sitach lOOmesh. Prasowanie tabletek wymaga użycia do prasowania materiału na lOOmesh, ponieważ zastosowanie materiału powyżej lOOmesh powoduje szybsze uwalnianie składników czynnych z dużej pigułki.

W korzystnym sposobie otrzymywania dużych pigułek z LL-F28 249α 123-(0-metylooksym)LLF28 249α wytwarzanych sposobem według wynalazku na drodze formowania wtryskowego czas cyklu ulega skróceniu do około 40 - 50 sekund. Pełnej mocy można oczekiwać gdy warunki pracy utrzymuje się poniżej temperatury 140°C. Konkretne warunki pracy, które, jak się okazuje, są pożądane w wysokim stopniu, obejmują: a) podwyższenie profilu temperatury, to jest temperaturą bębna jest temperatura otoczenia, a końcówki wylotowej jest temperatura 90°C, b) czas

163 922 wtryskiwania 20 sekund, c) ciśnienie przy wtryskiwaniu 7,721 MPa, oraz d) czas chłodzenia 20 sekund. Warunki te doprowadzają do temperatury topnienia w zakresie 89 do 90°C, znacznie poniżej krytycznej temperatury rozkładu. Badania zależności cza&/temperatura wykazały, że możliwe jest zawracanie do obiegu w sposób ciągły nadlewów wtryskowych i materiałów z kanałów doprowadzających w wyniku ich doskonałej stabilności. Duże pigułki wytworzone na drodze formowania wtryskowego mają większą gęstość, są twardsze i okazuje się, że ulegają erozji z mniejszą szybkością (jak to oznaczono na podstawie rozpadu pod wpływem metanolu) aniżeli duże pigułki lane. Także dane reologiczne wskazują na to, że lepsza „zwilżalność barytu może chronić składnik czynny przed rozkładem termicznym.

Aczkolwiek formowanie wtryskowe jest korzystną metodą otrzymywania dużych pigułek wytwarzanych sposobem według wynalazku, należy przyznać, że wspomniane duże pigułki otrzymywać można technikami formowania ręcznego. Należy także przyznać, że rozmiary dużych pigułek można zmieniać w znacznym zakresie, by zapewnić ich rozmiary odpowiednie dla wszystkich gatunków (i rozmiarów) zwierząt przeżuwających. Przy zastosowaniu techniki formowania ręcznego, monostearynian i wosk karnauba miesza się, topi i ogrzewa do temperatury 105±5°C. Do tego stopu dodaje się składnik czynny i całość miesza się do otrzymania jednolitej zawiesiny. Dodaje się do niej baryt przy ciągłym mieszaniu, które kontynuuje się aż do otrzymania jednolitej mieszaniny o wyglądzie śmietany. Powstały materiał wlewa się do formy, pozwala się mu ochłodzić do temperatury pokojowej i wyjmuje z formy. Rozmiary i ciężar otrzymywanych dużych pigułek są oczywiście determinowane przez rozmiary użytych form.

Wynalazek objaśniają dalej następujące przykłady.

Przykład I. Otrzymywanie inokulum. Typowe podłoże używane do prowadzenia hodowli inokulum w rozmaitych stadiach otrzymuje się zgodnie z następującym przepisem:

Glukoza 1,0%

Dekstryna 2,0%

Ekstrakt drozdżowy 0,5%

Amina NZ 0,5%

Węglan wapniowy 0,1%

Woda q.s. do 100%

Podłoże to poddaje się wyjałowieniu. 100 ml porcję tego jałowego podłoża poddaje się w kolbie inokulacji grzybnią zdrapaną ze skosu agarowego Streptomyces cyaneogriseus noncyanogenus NRRL 15 773. Następnie podłoże poddaje się energicznemu wstrząśnięciu na wstrząsarce obrotowej w ciągu 48 - 72 godzin w temperaturze 28°C, w wyniku czego otrzymuje się inokulum pierwotne. Używa się go następnie do inkulowania 1 litra powyższego jałowego podłoża, które następnie poddaje się hodowli w warunkach tlenowych w temperaturze 28°C w ciągu 48 godzin, w wyniku czego otrzymuje się inokulum wtórne.

Przykład II. Fermentacja. Otrzymuje się podłoże fermentacyjne o następującym składzie:

Dekstryna	1,0%
Białko sojowe	1,0%
Melasa	2,0%
Węglan wapniowy	0,1%
Woda	q.s. do 100%

Podłoże to poddaje się wyjałowieniu, a następnie 30 litrową porcję inokuluje litrem inokulum wtórnego, otrzymanego sposobem opisanym w powyższym przykładzie i. Fermentację prowadzi się w temperaturze 30°C z przepływem jałowego powietrza 30 litrów na minutę, przeciwciśnieniem

55,2 kPa i mieszaniem z zastosowaniem mieszadła pracującego z szybkością 500obr/min, wciągu 91 godzin, po czym zbiera się brzeczkę.

Przykład III. Wyodrębnianie LL-F28249α. Całość 26 litrów zebranej pełnej brzeczki otrzymanej jak opisano w powyższym przykładzie II, miesza się z 1500g ziemi okrzemkowej i sączy. Placek grzybni przemywa się 5 litrami wody, sączy i odrzuca się przesącz i przemywki. Placek grzybni miesza się z 10 litrami metanolu w ciągu godziny, po czym sączy i przemywa 5 litrami metanolu. Ekstrakt metanolowy i przemywki metanolowe łączy się i odparowuje do otrzymania

163 922 pozostałości wodnej około 1-2 litrów. Tę wodną pozostałość miesza się z dwukrotną objętością chlorku metylenu i miesza w ciągu 1/2 godziny. Fazę chlorku metylenu oddziela się, a następnie zatęża do konsystencji syropu, w wyniku czego otrzymuje się 2U g surowego materiału. Ten surowy materiał w ilości 2Ug rozpuszcza się w mieszaninie chlorku metylenu i metanolu, sączy przez bawełnę i bezwodny siarczan sodowy, w wyniku czego otrzymuje się U g oleju.

1U0 g porcję żelu krzemionkowego przeprowadza się w papkę w 12,5% octanie etylu w chlorku metylenu i wlewa z utworzeniem kolumny 2,5 X 58 cm. Olej rozpuszcza się w 12,5% octanie etylu w chlorku metylenu i nanosi na kolumnę, którą rozwija się tą samą mieszaniną rozpuszczalników. Fazę ruchomą przeprowadza się początkowo z prędkością przepływu 1,3 ml/minutę i zbiera 15-mieutowe frakcje. Prędkość przepływu zwalnia się do około 0,5 ml/minutę po 10 frakcjach, tak że frakcje 1 - 10 odpowiadają 20 ml zmniejszając się jednostajnie do około 10 ml i frakcje 11-98 odpowiadają około U ml. Przy frakcji 99 prędkość przepływu zwiększa się, dając 25 ml frakcje w ciągu 10 minut. W całości zbiera się 105 frakcji. Frakcje ta bada się za pomocą chromatografii cienkowarstwowej w octanie etylu: chlorku metylenu (1:1).

Frakcje 55 - 62 łączy się i odparowuje, w wyniku czego otrzymuje się 150 mg ciała stałego zawierającego LL-F28 2499 i β.

150 mg ciała stałego zawierającego LL-F28 2499 i β poddaje się chromatografii metodą preparatywnej HPLC stosując kolumnę z odwróconymi fazami (Whatman C8, 2X2 X 50cm) rozwijaną 80% (obj/obj) metanolem w wodzie. Prędkość przepływu wynosi około 10 ml/minutę i zbiera się 2-minutowe frakcje.

Frakcje 58 - 69 łączy się, metanol odparowuje, dodaje tert-butanol i mieszaninę liofilizuje, w wyniku czego otrzymuje się 60 mg czystego LL-F28 249α. Związek ten można przedstawić wzorem 1.

Przykład IV. 5-O-tert-Butylkdimetylksililo-LL-F28249a.

W 500 ml CH2CI2 miesza się U0 g LL-F28 249a z 82,4 g ^^azolu w temperaturze 20°C, w atmosferze azotu. Następnie, w ciągu 5 minut, dodaje się 43 g chlorku tert-butylo-dimetylosililu w 400 ml CH2CI2. Po upływie godziny bada się czy reakcja zaszła do końca za pomocą chromatografii cieczowej wysokosprawnej (HPLC) stosując 50% CHaCN/50% H2O sposobem zakrzywionego gradientu w ciągu 10 minut na kolumnie do szybkiej analizy Whatman Partisil CCS/Ca przy prędkości przepływu 1 ml/min. Dodaje się jeszcze 3 g chlorku tert-butyloOimetylksililu i po upływie 3 godzin mieszanina zawiera 92,3% produktu, 0,3% LL-F28 249a i 1,16% materiału stanowiącego pochodną 0isililową. Otrzymaną mieszaninę rozcieńcza się CH2CI2 i wlewa do 2 litrów wody. Warstwę z chlorkiem metylenu oddziela się, a część wodną poddaje ekstrakcji 2 litrami CH2CI2, po czym połączone warstwy organiczne osusza się Na2SO4. CH2CI2 odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymuje się 166 g związku tytułowego, który identyfikuje się z wykorzystaniem spektroskopii mas i spektroskopii rezonansu magnetycznego jądrowego (NMR).

Przykład V. 5-O-tert-Butylkdie^etylosililo-23-okso-LL·F28 2499. 116g 5-O-tert-ButyloOimetylksililk-LL-F28 249a miezaa si ę w 5 Utacc h scche^ CH2CI2, w ammosferze zootu, o o zzmm w temperaturze 22°C dodaje się 540 g NaC2H3O2, a następnie 172,5 g yhlorochromiaew pirydyniowego (PCC). Po upływie godziny dodaje się jeszcze 15 g PCC, ponieważ badanie metodą HPLC wykazało, że reakcja nie zaszła do końca. Po upływie 2 godzin dodaje się jeszcze 10 g PCC i otrzymaną mieszaninę reakcyjną miesza się, ogółem w ciągu 5 godzin. Mieszaninę reakcyjną wlewa się do 6 litrów mieszaniny wody z lodem 1 oddziela się CH2CI2. Warstwę wodną poddaje się ekstrakcji CH2CI2 1 połączone warstwy CH2CI2 przemywa się wodą i osusza Na2SC>4. CH2CI2 odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymuje się 19U,8 g produktu surowego, który rozpuszcza się w 2 litrach eteru 0ietzlkwego, po czym sączy. Roztwór eterowy przemywa się 2 razy po 1000 ml wody, osusza Na2SO4 i odparowuje do sucha, w wyniku czego otrzymuje się 60 g związku tytułowego, który identyfikuje się z wykorzystaniem spektroskopii mas i spektroskopii rezonansu magnetycznego jądrowego NMR.

Związek tytułowy otrzymuje się również w przypadku zastąpienia w powyższym sposobie postępowania yClkrkyhrkmiaeu pirz0zeikwegk 0icCrkenaeem pirydynowym.

Przykład VI. 23-Okso-LL-F28 2499. W 1,5 litra CH3OH rozpuszcza się, przy ogrzewaniu, 60 g 5-O-tert-ButyIkdimetyIosililk-23-oksk-LL-F28 249σ i w temperaturze 0°C dodaje się

163 922 g kwasu p-toluenosulfonowego w 300 ml CH3OH. Otrzymaną mieszaninę miesza się w ciągu 3 godzin, po czym wlewa do 6 litrów nasyconego roztworu NaHCOe w 6 litrach H2O. Po zakończeniu mieszania, otrzymaną mieszaninę poddaje się ekstrakcji 4 litrami CH3COOC2H5. Po rozdzieleniu warstw, warstwę wodną nasyca się NaCl i poddaje ekstrakcji 2 razy po 6 litrów CH3COOC2H5. Pierwszą warstwę octanową przemywa się nasyconym roztworem NaCl, łączy się z innymi ekstraktami octanowymi i osusza Na₂SO4. Następnie odparowuje się CH3COOC2H5 pod zmniejszonym ciśnieniem, w wyniku czego otrzymuje się 148,1 g ciemno zabarwionej pozostałości. Następnie ten surowy materiał poddaje się chromatografii metodą HPLC na 1200 g S1O2 przy użyciu do elucji 1% izopropanolu w CH2CI2 i bada z użyciem detektora UV z filtrem 254 nm. Frakcje 39 - 42 łączy się i odparowuje do sucha, w wyniku czego otrzymuje się 12,65 g związku tytułowego o następującym składzie:

Analiza elementarna dla C36H20O8:

Obliczono: C 70,79; H 8,25

Znaleziono: C 70,33; H 8,31

Związek tytułowy identyfikuje się w dalszym ciągu z wykorzystaniem spektroskopii mas i spektroskopii NMR.

Przykład VII. 23-(O-Metylooksym)LL-F28249a. Do 930ml suchego dioksanu dodaje się w temperaturze pokojowej 70 g 32-okso-LL-F28 249a, 11,8 g NaC₂H302, 11, g CH3ONH2 · HC1 i

2,1 ml CH3COOH. Otrzymaną mieszaninę miesza się w atmosferze azotu w ciągu 3 dni i gdy metodą HPLC nie wykrywa się obecności związku wyjściowego, odparowuje się pod zmniejszonym ciśnieniem 620 ml dioksanu. Pozostałość wlewa się do 2 litrów H2O i produkt poddaje się ekstrakcji 4 razy po 2 litry CH2CI2. Połączone ekstrakty przemywa się H₂O, osusza Na₂SO4 i odparowuje do sucha. Pozostałość rozpuszcza się w 1200 ml eteru dietylowego i otrzymany roztwór przemywa H2O, osusza Na₂S0>4 i odparowuje do sucha. W wyniku tego otrzymuje się 11,84 g związku tytułowego, który identyfikuje się z wykorzystaniem spektroskopii mas i spektroskopii NMR. Ma on skład następujący:

Analiza elementarna dla C37H23O8N · 1,2 H2O:

Obliczono: C 66,64; H 8,46 N 2!,10

Znaleziono: C 66,82; H 8,13 N 2,32

Związek ten można przedstawić wzorem 2.

Przykład VIII. Otrzymywanie dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu. Duże pigułki wytwarza się zgodnie z następującym przepisem:

Składnik %

23-(0-Metylooksym)LL-F28 249σ (praktycznie 89%) 0,34

Monostearynian gliceryny 15,95

Wosk karnauba 3,96

Baryt 79,75

Monostearynian i wosk karnauba miesza się, topi i ogrzewa do temperatury 102±2°C. Do tego stopu dodaje się składnik czynny 1 miesza aż do otrzymania jednolitej zawiesiny. Dodaje się do niej, przy ciągłym mieszaniu, baryt. Mieszanie kontynuuje się aż do otrzymania jednolitej mieszaniny o wyglądzie śmietany. Utworzony materiał wlewa się do formy, pozwala się mu ochłodzić do temperatury pokojowej i wyjmuje z formy. Ciężar otrzymywanych dużych pigułek wynosi 21 do 23 gramów. Każda duża pigułka jest zaokrąglona na obydwóch końcach i ma grubość 19,02 mm przy szerokości 22,2 mm i długości 76,2 mm.

Warunki techniczne dla monostcarynianu gliceryny wskazują, ze materia! ten powinien mieć postać proszku o barwie białej lub kuleczek i zasadniczo nie zawierać substancji obcych. Wielkość cząstki nie powinna przekraczać 2% na U. S. Standard Sieve No. 20, liczba kwasowa powinna wynosić 2 - 3,0, a zawartość wilgoci nie więcej niż 1,2%. Całkowita zawartość monoglicerydów nie powinna przekraczać 40%, ale zawartość wolnego kwasu nie powinna przekraczać 1,2%.

Wosk karnauba powinien mieć postać proszku o barwie żółtej i zasadniczo nie zawierać substancji obcych. 100% wosku powinno przechodzić przez U. S. Standard Sieve No. 80. Liczba

163 922 kwasowa wosku powinna wynosić 2,6 - 6,0, a zawartość substancji żywicowatych rozpuszczalnych w acetonie w temperaturze 15°C nie powinna przekraczać 5,0%.

Baryt powinien mieć postać proszku o barwie szarej i zasadniczo nie zawierać substancji obcych oraz wykazywać gęstość nasypową około 2402,7 kg/m³. Wielkość cząstki powinna być taka, aby nie więcej niż 4% materiału było zatrzymywane na No. 200 U. S. Standard Sieve, a nie mniej niż 80% przechodziło przez No. 325 U. S. Standard Sieve. Analiza chemiczna nadającego się do przyjęcia produktu wykazuje 90 - 94% BaSO₄, 7 - 8% SiO₂ i 0,1 - 0,2% Fe₂O3. Gęstość dużych pigułek wytwarzanych sposobem według wynalazku powinna wynosić od około 2,35 do 2,6±0,6.

Inne środki stanowiące duże pigułki otrzymuje się w ten sam sposób i są one przedstawione w tabeli 1.

Tabela 1

Środki stanowiące duże pigułki o powolnym uwalnianiu

Składnik	A	B	C	D	E	F	G	H
23-(0-melylooksym)LL-F28 249
(praktycznie 89%)	0,34	1,69	8,44	1,70
23-(0-melylooksym)LL-F28 249
(praktycznie 90%)					1,63	3,26	4,90	6,50
Monostcarynian gliceryny	15,95	15,73	14,65	15,70	14,40	14,40	14,40	14,40
Wosk karnauba	3,96	3,93	3,66	3,90	3,60	3,60	3,60	3,60
Baryt	79,75	78,65	73,25	78,70	80,37	78,74	77,10	75,50
	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0	100,0

Przykład IX. Oznaczanie szybkości erozji dużych pigułek wytwarzanych sposobem według wynalazku. Szybkość uwalniania leku z dużych pigułek oznaczonych A, B i C w tabeli 1 oznacza się najpierw za pomocą badania tych dużych pigułek pod względem związku 23-(0-Metylooksym)LL28 249α, który ma być podawany cielętom wyselekcjonowanym do testu. Badania te wykazują, że duże pigułki, które mają być ocenione, zawierają 0,713,1035 lub 1260 mg 23-(O-Metylooksym)LL28 249α. 50 - 53 g duże pigułki przełamuje się w połowie, waży i ręcznie podaje połowę dużej pigułki każdemu cielęciu. Cielęta poddane działaniu wpędza się następnie do zagrody, karmi i poi zgodnie ze zwykłymi czy standardowymi sposobami postępowania stosowanymi przy chowie bydła. Dietą dla wszystkich zwierząt jest standardowa racja bydlęca.

W przedziałach czasowych 70, 119 i 167 dni po podaniu, cztery zwierzęta z każdej z grup, na które działano uśmierca się, a duże pigułki odzyskuje się i ocenia w celu określenia, czy powierzchnia jest chropowata czy gładka, a następnie waży. Następnie rejestruje się i ocenia wyniki. Ten sposób postępowania powtarza się po upływie 119 dni od podziałania wobec drugiej grupy zwierząt z każdej z grup, na które działano i znowu po upływie 167 dni wobec trzeciej grupy zwierząt z każdej z grup, na które działano.

Dla wygody, wyniki otrzymane dla każdej z grup, na które działano (4 cielęta na grupę) obliczono jako średnie i podano w tabeli 2.

Tabela 2

Szvbkosc erozji dużych pigułek A, B i C z tabeli 1

Średni wynik badania dużej	Średni	Dzień	Średnie (mg/głowę/	Średni	Szybkość uwalniania (mg/kg/dzien)	Szybkość uwalniania (mg/kg/dzien)
pigułki pod względem	wyjściowy	w którym	/dzień)	ciężar	23-{O-metylooksym)23-{O-metylooksym)
23-(O-metylooksym)	ciężar	odzyskano	uwalnianie	zwierząt	LL-F-28249a	LL-F-28249O
LL-F28249a	dużej	dużą	^Τ-28249α	w danym	w okresie	w okresie
(mg)	pigułki (mg)	pigułkę	(mg)	okresie (kg)	od dnia 1 do odzyskania dużej pigułki	od dnia 70 do 119 i 119 do 167
1	2	3	4	5	6	7
713	26.7	70	6,07	113.4	0.054
713	26.7	119	4,9J	119.6	0.041	0,028
713	27.1	167	3.45	122.4	0,028	0,0014

163 922

1	2	3	4	5	6	7
1033	26.2	70	8.59	121.8	0,071	_
103$	26,7	119	6.1»	111,0	0,056	0,025
1035	26.1	167	5.31	129,7	0,041	0.0
1269	25,8	70	10,41	129.0	0,081	—
1260	25.6	119	6,67	113,3	0,059	0,012
1260	25.8	167	7.09	129,2	0,055	0,06

Przykład X. Otrzymywanie środka w postaci dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu i jego ocena pod względem zwalczania robaków pasożytujących w układzie żołądkowo-jelitowym oraz kleszczy Boophilus microplus na bydle. Środki w postaci dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu składające się zasadniczo z 23-(O-Metylooksym)LL-F28 249α, monostearynianu gliceryny, wosku karnauba i barytu wytwarza się za pomocą zmieszania odpowiednich ilości każdego ze składników w mieszarce do ciał sypkich utrzymawanej w temperaturze około 80°C, w ciągu 10 minut.

Po zmieszaniu, mieszaninę wyładowuje się i przenosi do tabletkującej wytłaczarki i/lub bezpośrednio załadowuje do wtryskarki.

W przypadku, gdy prowadzi się tabletkowanie, mieszaninę tę tabletkuje się następnie z zastosowaniem dzwonowo ukształtowanego profilu temperatury, obejmującego chłodzoną sekcję zasilania (50 - 60°C), sekcję przejściową na gorąco (100 - 110°C) i chłodzoną sekcję dozowania (5 -60°C) z dyszą przepustową 3,17 mm wyposażoną w sitową (20 mesh) płytkę przerywającą. Temperaturę dyszy utrzymuje się na poziomie 55 - 60°C. Utworzony wytłoczony pręt chłodzi się powietrzem (strumień powietrza wydmuchiwany przy otworze dyszy) i tnie w tabletki o długości 6,35 mm przy użyciu krajarki z gorącą tarczą.

W przypadku bezpośredniego zasilania suchą mieszaniną, można użyć układu zasilania, takiego jak Vibra-Sceen w celu przeniesienia materiału do układu formowania wtryskowego z zastosowaniem układu doprowadzającego na gorąco i odcinającej końcówki wylotowej. Warunki pracy wtryskarki powinny być zgodne z dzwonowo ukształtowanym profilem opisanym powyżej w przypadku operacji tabletkowania, np. czas napełniania (10 - 20 sekund), czas wtryskiwania (10 - 20 sekund), ciśnienie przy wtryskiwaniu (7,721 MPa) i czas utrzymywania (5 -10 sekund), w wyniku czego otrzymuje się duże pigułki o ciężarze około 51 gramów każda i o gęstości około 2,5 g/cm3 •oraz twardości, mierzonej przy użyciu Delamar Press, wynoszącej około 77 do 80 kg.

Duże pigułki wytworzone tym sposobem przedstawiono poniżej.

Środki w postaci dużej pigułki wytworzone na drodze formowania wtryskowego % wag.

Składnik ^Duza pⁱg^ułka

I J K L

23-(O-metalooksam)-LL-F28249α	0,0	3,24	4,84	6,46
Monostcarynian gliceryny	14,10	14,40	14,40	14,40
Wosk karnauba	3,60	3,60	3,60	3,60
Baryt	82,00	78,76	77,16	75,54

ciężar w gramach

23-(0-metalooksam)-LL-F28249α	0	28,49	42,15	26,49
Monostearynian gliceryny	125,28	125,28	125,28	59,04
Wosk karnauba	31,32	31,32	31,32	14,76
Barył	713,60	685,21	671,29	309,71

W celu oceny powyższych zidentyfikowanych środków pod względem zwalczania robaków pasożytujących w przewodzie żołądkowo-jelitowym oraz porażenia kleszczami, w lub na bydle, przeprowadza się następujące testy.

Do oceny wyżej opisanych dużych pigułek oznaczonych I, J, K i L wybiera się 52 cielęta rasy szkockiej (poniżej roku życia), na pastwisku.

Duże pigułki zawierają, odpowiednio, 0,713, 1035 lub 1260 mg 23-(O-Metalooksym)LLF28 249α na 1/2 dużej pigułki, przy czym każda z nich waży około 25 gramów.

163 922

Podczas tygodnia przed podziałaniem dokonuje się dla cieląt dwóch oddzielnych obliczeń różnicujących jaj nicieni i ocenia się ciężkość porażenia kleszczami. Zwierzęta kolczykuje się w ucho, waży i wyznacza do jednej z grup, na które się działa, po 12 cieląt w grupie. Piątą grupę z 4 zwierzętami także kolczykuje się w ucho i waży. Grupa ta służy do badania możliwości przeprowadzania ponownego wprowadzenia innym zwierzętom dużych pigułek odzyskanych po sekcji.

Zróżnicowane obliczenia jaj nicieni przeprowadza się po tygodniu, dwóch tygodniach, miesiącu i co najmniej co miesiąc w ciągu 5 miesięcy albo do czasu, gdy zwalczanie nie trwa już dłużej.

Otrzymane dane przedstawione są w poniższych tabelach 3 i 4, gdzie można stwierdzić, że zwierzęta kontrolne, nie poddane działaniu w ciągu pierwszych 67 dni badania, pozostają ciężko porażone w trakcie tej części okresu badań. Na zwierzęta te działa się następnie levamisolem i porażenie nicieniami zostaje bardzo znacznie zredukowane. Zwierzęta otrzymujące duże pigułki wytworzone sposobem według wynalazku zawierające od 713 do 1260 mg 23-(O-Metylooksym)LLF28 249α pozostają zasadniczo wolne od porażenia w okresie od 28 dni od podziałania w ciągu 167 dni po działaniu.

Kleszcze zostają wyeliminowane w ciągu tygodnia działania dużymi pigułkami zawierającymi 1035 mg lub 1260 mg 23-(0-Metylooksym)LL-F28 249α. Zwierzęta otrzymujące duże pigułki o zawartości 713 mg składnika czannego potrzebują 2 tygodni do oczyszczenia się z kleszczy. Zwierzęta kontrolne musiały być kąpane w roztworze środka kleszczobójczego aby zapobiec śmiertelności. Zwierzęta poddane działaniu pozostają wolne od kleszczy w ciągu 97 dni aż do chłodnej pogody, przy której następuje eliminacja porażenia kleszczami u zwierząt kontrolnych.

Tabela 3

Ocena dużych pigułek zawierających 23-(0-^metylooksym)LL-F28 249α pod względem długotrwałego zwalczania porażenia nicieniami u bydła

Duża pigułka zawierająca 0mg Duża pigułka zawierająca 713mg Duża pigułka zawierająca 1035mgDuza pigułka zawierająca 12ft)mg

Dni po działaniu	Zwierzęta wb/τί	Średnio EPG	Zwierzęta WB/T1	Średnio EPG	Zwierzęta WB/T1	Średnio EPG	Zwierzęta WB/T1	Śrwlnio EFEP
0	12/12	519	12/12	873	12/12	552	12/12	581
28	11/11	1041	12/12	0	12/12	0	12/12	0
44	11/11	1465	11/12	0	12/12	0	10/10	0
65	Κ^/Ί0\|)-	2043	12/12	0	12/12	0	10/10	0
97	7/7	108	8/8	0	8/8	0	6/6	0
116	7/7	308	7/8	25	8/8	0	6/6	0
140	3/3	317	4/4	25	5/5	0	3/3	0
167	2/3	717	4/4	0	3/5	0	1/3	100

W tabeli 3 użyto następujących oznaczeń

WB/T1 = z dużą pigułką/wszystkie zwierzęta ^•Zwierzęta kontrolne poddane działaniu levamisolu w ilości 3,75 mg/kg 67 dnia badań

EPG = jaja nicieni na gram odchodów

Tabela 4

Ocena dużych pigułek zawierających 23((0-metylooksym)LL-F28 249α pod względem długotrwałego zwalczania populacji nicieni u bydła

Sekcja Dni po działaniu	Duza pigułka zawierająca •mg	Ilość zwierząt z duzą pigułką wszystkie zwierzęta	%rednkcji
Haemonchus placei	Osiertagia ostertagi	i Coopena Dojrzałe	punctata Larwy	Oesophagostomum dictyoc
Dojrzałe	Larwy	Dojrzałe	Larwy	Dojrzałe	Larwy
1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
70	1260	4/4	100	100	100		100	-	100	100
	1035	4/4	100	100	100		99,9	-	100	100
	713	4/4	100	100	100		100		100	100
	o··	4/4	4617	542	200		35783	0	665	67
			(4000-6167)	(333-667)	(66-533)		(19600-51033)		(310-1072)	(5-11)
119	1260	3/3	100	100	100	100	100	100	100	100
	1035	3/3	100	100	100	100	100	100	100	100
	713	3/4	100	100	100	100	98.8	97.2	100	100
	• *	3/3	1752	674	441	74	23959	1322	228	120
			(500-2400)	(67-1155)	(66-756)	(0-133)	(18778-32500) (433-2533)	(60-400)	(0-31)

163 922

i	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11
167	1260	1/3*	98,5	97,3	92,8		73,4	100	100	100
	1035	3/5	99,3	100	100		99,4	100	100	100
	713	4/4	100	100	100		99.5	100	100	100
	o/*	2/3	2067	617	10130		29567	400	413	2
			(1467-2533)	(533-188)	(3200-22898)		(14033-59667)	(33-933)	(88-880)	(0-5)

W tabeli 4 użyto następujących oznaczeń * Na głowę [ w połowie dużej pigułki (25 g)} ** łlośc nicieni ilości w nawiasach odpowiadają zakresowi * Zwierzęta z dużą pigułką, które nie miały nicieni

Przykład XI. Ocena dużych pigułek o przedłużonym uwalnianiu pod względem profilaktycznego zwalczania roztocza świerzbowcowego na bydle. Duże pigułki zawierające 375 mg na połowę dużej pigułki otrzymuje się techniką formowania wtryskowego opisaną w przykładzie X. Otrzymane duże pigułki mają następujący skład.

Skład

23-(O-metylooksym)-LL-F28 249α Monostearynian gliceryny Wosk karnauba Baryt % wag. Ilość w g 1,53 1,61

15,73 16,52

3,93 4,12

78,81 82,75

100,00 105,00

Bydłu otrzymującemu duże pigułki podaje się połowę 50 g dużej pigułki zawierającej 750 mg 23-(O-metylooksym)LL-F28 249σ.

Do badania wybiera się mieszane jałówki. Zwierzęta umieszcza się na suchej parceli i rozpoczyna się program zdrowotny w celu ochrony przed problemami związanymi z pospolitymi chorobami. Zostają one kolczykowane w ucho i umieszczone w uwięzi dla zwierząt na stanowiskach w celu zapobieżenia zlizaniu porażających je roztoczy.

Następnie na każde zwierzę przenosi się żywe roztocze. Przeniesienia dokonuje się za pomocą pobrania zeskrobin od ciężko porażonych zwierząt dawców i przeniesienia ich na zwierzęta kandydujące.

Ze zwierząt, które nie zostały umieszczone w oborze wybiera się losowo cztery zwierzęta, nie porażone. Te cztery zwierzęta zostają poddane leczeniu dużą pigułką i zakażeniu o tydzień później. Na każdym z tych zwierząt umieszcza się roztocze, sześciokrotnie podczas następnych 2 tygodni.

Uważa się, aby zapobiec krzyżowym zakażeniom między zwietrzętami. Zdrapywania dokonuje się w tygodniowych odstępach i ocenia tego samego dnia.

Roztocze liczy się na stoliku mikroskopu, stosując 20 - 30 x mikroskop dysekcyjny. 375 mg duża pigułka zapobiega osiedlaniu się roztocza świerzbowcowego na bydle poddanym sześciokrotnej ciężkiej prowokacji roztoczami.

Otrzymane dane przedstawione są w tabeli 5.

Tabela 5

Średnia ilość żywych roztoczy (Psoroptes ovis) na zwierzę

Dni po działaniu

Działanie W dniu przed——...................—--------działaniem 8 16 22 29 34 43 47 56

Duża pigułka zawierająca 375 g

23-^O-metylooksym)LL-F28 249α

Kontrola nie poddana działaniu

XX

274

123

130

149 . 0

421 757

403

20

9

0 0

285 464 nieżywe

218 nieżywe

27 14

5 9

XX = Grupa z dużą pigułką nie została poddana zakażeniu aż do upływu tygodnia po rozpoczęciu testu, a następnie stwierdzono, że kolonie roztoczy nie mogły osiedlić się na zwierzętach, na które działano dużą pigułką Obliczenia oparte na 2 zdrapaniach (zwierzę) okres próby — = Kolonia roztoczy nie mogła się osiedlić

Przykład XII. Ocena dużych pigułek zawierających 23-(O-Met.ylooksym)LL-F28 249α pod względem wszy i much na pysku bydła. Duże pigułki używane w tych ocenach otrzymuje się techniką formowania wtryskowego jak opisano w przykładzie X. Wytworzone tak duże pigułki mają następujący skład.

163 922

Duża pigułka Składnik	I	II	III
% wag.	ilość w g	% wag.	ilość w g	% wag.	ilość w g
23-(O-metylooksym)-LL-F28249a	1,62	6,64	3,24	28,49	4,84	42,15
Monostearynian gliceryny	14,40	59,04	14,40	125,28	14,40	125,28
Wosk karnauba	3,60	14,76	3,60	31,32	3,60	31,32
Baryt	80,38	329,56	78,76	685,21	77,16	671,29

Do oceny duże pigułki zostają przełamane na połowy.

Duża pigułka 1 zawiera 375 mg składnika czynnego/połowę dużej pigułki.

Duża pigułka II zawiera 750 mg składnika czynnego/połowę dużej pigułki.

Duża pigułka III zawiera 1125 mg składnika czynnego/połowę dużej pigułki.

Przed działaniem wszystkie zwierzęta waży się, kolczykuje się w ucho i przegląd pod względem obecności wszy. Ilość wszy określa się na podstawie wizualnego przeglądu 2 - 3 cm owłosionych części dla każdego z następujących miejsc: ucho, oczy, nozdrza, żuchwa, mostek, zwisające podgardle, barki, linia grzbietu, rzep ogona i biodra. Zwierzęta losowo wyznacza się do grup, obejmujących 3 grupy badane i jedną kontrolną, każda po 5 zwierząt. Grupy I, II i III otrzymują duże pigułki zawierające związek badany podczas gdy grupa 1 nie zostaje poddana działaniu. Wszystkie zwierzęta ogranicza się do parceli o powierzchni 0,808 ha i zapewnia się wolny dostęp do siana z lucerny i mineralnego uzupełnienia. Wszy na zwierzętach oszacowuje się w dniu U, 14, 21 i co dwa miesiące w czasie trwania testu.

Obliczenia wszy dokonuje się gdy zwierzęta są zatrzymywane w głównej bramie pod sztucznym światłem.

Próbki kału (około 10 g) pobiera się do analizy nicieni dnia U, 28 i następnie co miesiąc. Próbki przechowuje się w temperaturze -10°C.

Wszystkie grupy zwierząt, na które działa się podając dużą pigułkę (3U5 mg, U50 mg i 1125 mg) wykazują znacznie obniżony poziom Solenoptes capillatus (ang. blue cattle louse) po upływie tygodnia od badania.

Całkowite zwalczanie wszy (Solinoptes capillatus) na wszystkich sztukach bydła, na które działa się podając dużą pigułkę, osiąga się w 100 dniach.

Przykład XIII. Ocena dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu pod względem zwalczania Hypoderma spp. u bydła w dłuższym okresie czasu. Duże pigułki używane do tej oceny wytwarza się techniką formowania wtryskowego sposobem opisanym w powyższym przykładzie X. Oceniane duże pigułki mają następujący skład:

Składnik	% wag.	Ilość w g
23-(O-metylooksym)LL-F28249a	1,6	3,52
Monostearynian gliceryny	14,,4	28,8
Wosk karnauba	3,(5	7,2
Baryt	80,4	166,8
	100,0	100,0

W testach tych bydło mieszańców w naturalny sposób porażone Rypoderma spp. w pierwszym okiesie między wylinkami dzieli się losowo na grupy poddawane działaniu, liczące po 4 cielęta każde. Jedna z grup służy jako poddana działaniu kontrola, a inne grupy otrzymują połowę 50 - 54g dużej pigułki, zawierającą 3U5 mg 23-(O-Metzlkkkszm)LL-F28 2499. Połowy dużych pigułek podaje się cielętom przy użyciu przyrządu do wprowadzania leków w postaci stałej do pyska zwierzęcia.

Po podaniu, określa się skuteczność na podstawie obecności guzów spowodowanych przez larwy guzów za pomocą oceny wzrokowej i palpację grzbietu cielęcia, co tydzień. Działanie dużymi pigułkami zawierającymi 23-(O-Metylkkkszm)LL-F28 2499 jest całkowicie skuteczne wobec Rypoderma spp. Na grzbiecie cieląt otrzymujących 3U5 mg duże piguilki zawierające wyżej wspomniany związek nie pojawiają się larwy w ciągu U2-deikwego badania, tym niemniej jednak u zwierząt kontrolnych nie poddanych działaniu jest średnio 12 (w zakresie 4 - 19) larw/głowę ze szczytową liczbą w 58 dniu oraz 8,8 w U2 dniu.

163 922

Przykład XIV. Ocena dużych pigułek zawierających od 75 do 1875 mg LL-F28 249α pod względem długotrwałego zwalczania nicieni i kleszczy na bydle. Duże pigułki do oceny otrzymuje się jak następuje.

Monostearynian i wosk karnauba miesza się, stapia i ogrzewa do temperatury 1O5±5°C. Do otrzymanego stopu dodaje się składnik czynny, miesza do otrzymania jednolitej zawiesiny, do której dodaje się baryt przy ciągłym mieszaniu. Mieszanie kontynuuje się aż do otrzymania jednolitej mieszaniny o wyglądzie śmietany. Utworzony materiał wlewa się do formy, pozwala ochłodzić do temperatury pokojowej, po czym wyjmuje się z formy. Ciężar wytworzonych dużych pigułek wynosi 51 do 53 gramów. Każda duża pigułka jest zaokrąglona na obydwóch końcach i ma grubość 19,05 mm przy szerokości 22,2 mm i długości 76,2 mm.

Połowę dużej pigułki (ciężar 25,5 do 27,0 g) podaje się bydłu na pastwisku. Skuteczność kontroluje się w ciągu 120 dni za pomocą oznaczenia ilości pasożytów wewnętrznych i zewnętrznych.

Składnik	% wag.	Ilość w g	% wag.	Ilość w g	% wag.	Ilość w g
LL-F28249cr	0,34	5,1	1,69	25,35	8,44	1 126,60
Monostearynian gliceryny	15,95	239,25	15,73	235,95	14,65	219,75
Wosk karnauba	3,96	59,40	3,93	58,95	3,66	54,90
Baryt	79,75	1196,25	78,65	1178,75	73,25	1098,75

Duża pigułka I zawiera 75 mg LL-F28 249α na połowę dużej pigułki, duża pigułka II zawiera 375 mg LL-F28 249α na połowę dużej pigułki i duża pigułka III zawiera 1875 mg LL-F28 249α na połowę dużej pigułki.

W teście tym pasione zwierzęta dzieli się losowo na grupy po 5 zwierząt na grupę i kolczykuje w ucho. Odchody wszystkich zwierząt ocenia się przed testami w celu określenia średniej ilości jaj nicieni na gram odchodów badanych zwierząt. Okazuje się, że wszystkie cielęta mają 2700 - 3000 jaj na gram odchodów. Test zaczyna się wraz z otrzymaniem przez wszystkie zwierzęta połowy dużej pigułki o ciężarze 25 do 27 gramów. Zwierzęta kontrolne otrzymują levamisole w ilości 3,75 mg/kg wagi ciała na początku testu i 62 dnia, a inne grupy, na które się działa, otrzymują połowę dużej pigułki I, II lub III jak wyżej opisano, zawierającą, odpowiednio, 75, 375 i 1875 mg LL-F28 249α. Następnie zwierzęta umieszcza się w indywidualnych okólnikach i ocenia w pewnych przedziałach czasowych w trakcie okresu utrzymywania, do 120 dni. W dniu 7, 16, 32, 62, 91 i 106 po działaniu zbiera się odchody od każdego zwierzęcia i określa się średnią ilość jaj nicieni na gram odchodów. Otrzymane dane pokazują, że 75 mg duża pigułka redukuje ilość jaj nicieni i obciążenie nicieniami do poziomu niższego od wynikającego z dwukrotnego działania levamisolem. 375 mg i 1875 mg pigułka wywołuje 99,9% redukcji jaj nicieni w ciągu 1 tygodnia i 99,9% zwalczania nicieni. Osiąganie wyższego ciężaru przez zwierzęta otrzymujące 375 i 1875 mg duże pigułki było w wysokim stopniu znaczące statystycznie. Ciężar zwierząt otrzymujących 75 mg dużą pigułkę był równoważny wobec kontroli, na którą działano levamisolem.

Tabela 6

Ocena dużych pigułek zawierających 75, 375 i 1875 mg LL-F28 249α pod względem zwalczania nicieni u bydła

Działanie _	Średnia ilość jaj nicieni na gram odchodów
Ilość cieląt	Dzień 0	7 62	119
(Dawka zalecana)			(Levamisole)
Levamisole	10	(2850)	5 (99,9%) 755	146
Dzień 0 oraz dzień 62
Duza pigułka I (75 mg)	10	(2850)	940 (67%) 205	5
Duża pigułka 11 (375 mg)	10	(2850)	0(100%) 0	5*
Duża pigułka III (1875 mg)	10	(2850)	o (100%) 0	5**

* 1 zwierzę miato 25 jaj na gram.

*x 6 zwierząt z dużą pigułką miało zerową ilość jaj' na gram, 4 zwierzęta bez dużej pigułki miały dodatnią ilość jaj na gram

163 922

Tabela 7

Skuteczność dużej pigułki zawierającej 11-F28249 wobec nicieni bydła

Działanie			Zwalczanie nicieni (%)
	Ilość cieląt	Haemonchus	Ostertagia	Cooperia	Oesophlogostonum
72 mg duża pigułka	10	92	100	0	22
372 mg duża pigułka	10	100	100	97	99 +
1872 mg duża pigułka	10	100	100	99 +	100
Levamisolc (kontrola)	10	2322	729	2937	117
średnia ilość robaków
(odiobaczenie
27 dni wcześniej)

Tabela 8

Przyrost ciężaru bydła otrzymującego levamisole w dawce 3,72 mg/kg dnia 0 i dnia 62 i w obecności dużych pigułek zawierających LL-F28 249a i dostarczających LL-F28 249a w dawce 0,37 mg/głowę/dzień, 1,96mg/głowę/dzień lub 3,76mg/głowę/dzień

Działanie	Średni przyrost ciężaru (kg) od dnia 0
Dni 7	62	110
Levamisole (3,72 mg/kg dnia 0 i dnia 62)	7	0	21
72 mg duża pigułka I (0,0031 mg/kg/dzień/	2	7	24
372 mg duża pigułka II (0,016 mg/kg/dzień/	6	11	37
1872 mg duża pigułka III (0,031 mgAg/dzień/	8	12	40

WZ0R 1

WZ0R 2

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 90 egz. Cena 10 000 zł

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Sposób wytwarzania dużej pigułki o przedłużonym uwalnianiu do podawania doustnego zwierzętom przeżuwającym, skutecznej przez okres do sześciu miesięcy przed zakażeniem postaciami dorosłymi lub larwami robaków pasożytujących w jelicie, owadów-pasożytów wewnętrznych, owadów-pasożytów zewnętrznych i roztoczy, znamienny tym, że: miesza się 0,3% do 10% wagowych LL-F28 249cr, 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α lub ich pochodnych, 10% do 20% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0% do 10,0% wagowych wosku karnauba i 70% do 85% wagowych siarczanu barowego lub miałkiego barytu, w temperaturze poniżej temperatury topnienia wosku karnauba, w wyniku czego tworzy się mieszanina, którą ewentualnie poddaje się tabletkowaniu i następnie poddaje się mieszaninę formowaniu wtryskowemu z zastosowaniem cyklu formowania wtryskowego obejmującego: (i) fazę zasilania, w której utrzymuje się temperaturę poniżej temperatury mięknienia mieszaniny, (ii) gorącą fazę przejściową, z temperaturą powyżej temperatury mięknienia, (iii) fazę wtryskiwania, w której mieszaninę wtryskuje się do formy w temperaturze poniżej temperatury mięknienia oraz (iv) fazę chłodzenia, w celu zestalenia się dużej pigułki, przy czym etapy (i) do (iv) zostają sfinalizowane w ciągu około 40 do 50 sekund, a temperatura nie przekracza I40°C.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie formowania wtryskowego czas wtrysku wynosi 20 sekund, ciśnienie wtrysku wynosi 7,721 MPa, a temperatura mieszaniny poddawanej wtryskiwaniu wynosi 89 do 90°C.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuje się mieszaninę zawierającą 1,0% do 8,5% wagowych LL-F28 249cr lub 23-(O-metylooksym)LL-F28 249α, 14% do 15% wagowych monostearynianu gliceryny, 3,0% do 5,0% wagowych wosku karnauba i 70% do 80% wagowych miałkiego barytu.