PL178150B1 - Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce i zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce - Google Patents
Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce i zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbceInfo
- Publication number
- PL178150B1 PL178150B1 PL95309211A PL30921195A PL178150B1 PL 178150 B1 PL178150 B1 PL 178150B1 PL 95309211 A PL95309211 A PL 95309211A PL 30921195 A PL30921195 A PL 30921195A PL 178150 B1 PL178150 B1 PL 178150B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- reagent
- specific binding
- solid phase
- surfactant
- binding partner
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 62
- 238000012360 testing method Methods 0.000 title claims description 100
- 239000000126 substance Substances 0.000 title claims description 81
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 title description 23
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 title description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims abstract description 122
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 119
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims abstract description 101
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 81
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 claims abstract description 71
- 238000009739 binding Methods 0.000 claims abstract description 32
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 186
- -1 thyroxin Proteins 0.000 claims description 93
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 73
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 54
- 229920000233 poly(alkylene oxides) Polymers 0.000 claims description 44
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 claims description 37
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 claims description 37
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 37
- RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N phenyl 10-methylacridin-10-ium-9-carboxylate Chemical compound C12=CC=CC=C2[N+](C)=C2C=CC=CC2=C1C(=O)OC1=CC=CC=C1 RXNXLAHQOVLMIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 claims description 31
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 27
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 21
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 21
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 20
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 claims description 20
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 claims description 20
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 19
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 19
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 19
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 19
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 claims description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 17
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 150000005215 alkyl ethers Chemical class 0.000 claims description 14
- 239000000376 reactant Substances 0.000 claims description 13
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 11
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims description 11
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 claims description 10
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 10
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 10
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 10
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 claims description 10
- YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O phosphocholine Chemical compound C[N+](C)(C)CCOP(O)(O)=O YHHSONZFOIEMCP-UHFFFAOYSA-O 0.000 claims description 10
- 229950004354 phosphorylcholine Drugs 0.000 claims description 10
- 229920000259 polyoxyethylene lauryl ether Polymers 0.000 claims description 10
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 10
- 102100028709 Thyroxine-binding globulin Human genes 0.000 claims description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 9
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 claims description 9
- 239000011147 inorganic material Substances 0.000 claims description 9
- 229910044991 metal oxide Inorganic materials 0.000 claims description 9
- 150000004706 metal oxides Chemical class 0.000 claims description 9
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 9
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 claims description 9
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 9
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 claims description 9
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 claims description 9
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 claims description 9
- 101000837639 Homo sapiens Thyroxine-binding globulin Proteins 0.000 claims description 8
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 claims description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 8
- 230000009471 action Effects 0.000 claims description 8
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 claims description 8
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 claims description 8
- 229940011871 estrogen Drugs 0.000 claims description 8
- 239000000262 estrogen Substances 0.000 claims description 8
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 claims description 8
- 150000003833 nucleoside derivatives Chemical class 0.000 claims description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 8
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 claims description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 8
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 claims description 7
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 claims description 7
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000002523 lectin Substances 0.000 claims description 7
- 229940029329 intrinsic factor Drugs 0.000 claims description 6
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 108010000259 Thyroxine-Binding Globulin Proteins 0.000 claims 1
- XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N thyroxine-binding globulin Natural products IC1=CC(CC([NH3+])C([O-])=O)=CC(I)=C1OC1=CC(I)=C(O)C(I)=C1 XUIIKFGFIJCVMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 18
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 32
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 32
- WPMWEFXCIYCJSA-UHFFFAOYSA-N Tetraethylene glycol monododecyl ether Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCOCCOCCOCCO WPMWEFXCIYCJSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 12
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 12
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 12
- 229920002359 Tetronic® Polymers 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 8
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 8
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 8
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 7
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 6
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 6
- 229960003624 creatine Drugs 0.000 description 6
- 239000006046 creatine Substances 0.000 description 6
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 6
- 239000006226 wash reagent Substances 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 5
- 102000011923 Thyrotropin Human genes 0.000 description 5
- 108010061174 Thyrotropin Proteins 0.000 description 5
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 5
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 5
- 229920001281 polyalkylene Polymers 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 5
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 4
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 3
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical compound IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 230000003208 anti-thyroid effect Effects 0.000 description 3
- 229940043671 antithyroid preparations Drugs 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 3
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 3
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 3
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N iron oxide Inorganic materials [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 3
- 229940035722 triiodothyronine Drugs 0.000 description 3
- CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 1-dodecoxydodecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCOCCCCCCCCCCCC CMCBDXRRFKYBDG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 2,4-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O UFBJCMHMOXMLKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N Nitric acid Chemical compound O[N+]([O-])=O GRYLNZFGIOXLOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000002947 alkylene group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 2
- 239000012482 calibration solution Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N creatine Chemical compound NC(=[NH2+])N(C)CC([O-])=O CVSVTCORWBXHQV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 235000013980 iron oxide Nutrition 0.000 description 2
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 2
- 229910017604 nitric acid Inorganic materials 0.000 description 2
- ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N octoxybenzene Chemical compound CCCCCCCCOC1=CC=CC=C1 ZPIRTVJRHUMMOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920001515 polyalkylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 2
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 2
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical group CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108010065556 Drug Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000013138 Drug Receptors Human genes 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical group C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 229910018540 Si C Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N cobalt(ii) oxide Chemical class [Co]=O IVMYJDGYRUAWML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052878 cordierite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- JSKIRARMQDRGJZ-UHFFFAOYSA-N dimagnesium dioxido-bis[(1-oxido-3-oxo-2,4,6,8,9-pentaoxa-1,3-disila-5,7-dialuminabicyclo[3.3.1]nonan-7-yl)oxy]silane Chemical compound [Mg++].[Mg++].[O-][Si]([O-])(O[Al]1O[Al]2O[Si](=O)O[Si]([O-])(O1)O2)O[Al]1O[Al]2O[Si](=O)O[Si]([O-])(O1)O2 JSKIRARMQDRGJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol Natural products OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N iron(2+);oxygen(2-) Chemical class [O-2].[Fe+2] VBMVTYDPPZVILR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 1
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000480 nickel oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N oxonickel Chemical class [Ni]=O GNRSAWUEBMWBQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 229920000098 polyolefin Polymers 0.000 description 1
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 235000011962 puddings Nutrition 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 229910052710 silicon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010703 silicon Substances 0.000 description 1
- 229910010271 silicon carbide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002764 solid phase assay Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 239000010456 wollastonite Substances 0.000 description 1
- 229910052882 wollastonite Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000859 α-Fe Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25125—Digestion or removing interfering materials
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
1 1 . H eterogenny test wiazania specyficznego sluzacy do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce, znamienny tym, ze (1) kontaktuje sie próbke z (a) reagentem znacznikowym bedacym znakowanym analogiem substancji analizowanej lub znakowana substancja analizowana, przy czym korzystnie substancja analizowana jest bialko, peptyd, po- liam inokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd, a znakowana substancja analizowana lub znakowanym analo- giem tej substancji sa substancja analizowana lub jej analog korzystnie sprzezone z substancja znacznikowa, która korzystnie jest ester akrydyniowy i (b) reagentem fazy stalej stanowiacym faze stala z przylaczonym do n iej specyficznym p artnerem wiazacym substancji analizowanej lub analogiem substancji analizowanej, przy czym faze stala stanowi m aterial organiczny lub nieorganiczny lub polaczenie tych m aterialów, które zachowuja swa spójnosc strukturalna pod dzialaniem wody i plynów biologicznych, korzystnie krzem ionka, tlenki m etali, a szczególnie korzystnie czastki o wlasnosciach param agnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, a specyficznym partnerem wiazacym jest korzystnie przeciwcialo, antygen, aw idyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiazaca tyroksyne, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnetrzny witam iny B12, lektyna, bialko, receptor i peptyd, kwas nu- kleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, (2) oddziela sie od reagenta znacznikowego te faze stala z unieruchom ionym na n iej kom pleksem , stanowiacym znakowany analog substancji analizowanej lub znakowana substancje analizowana sparow ane z unieruchom ionym specyficznym partnerem wiazacym, przez przem ywanie z uzyciem reagenta przemywajacego, którym jest ciekly roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierajacy srodki powierzchniowo czynne i substancje buforujace, (3) bez- posrednio lu b posrednio wykrywa sie substancje znacznikowa w tym unieruchom ionym kompleksie i (4) koreluje sie te wy- kryta substancje znacznikowa z obecnoscia substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub wiekszej liczbie reagentów wybranych z grupy obejm ujacej reagent przem ywajacy, reagent znacznikowy i reagent fazy stalej stosuje sie sro- dek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejm ujacej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alki- lenu blokowy kopolim er polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolim er polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilosci zm niejszajacej co najm niej kilkakrotnie wiazanie niespecyficzne w tym te- scie, korzystnie w ilosci od 0,001% wagowo-objetosciowych do 3% wagowo-objetosciowych w danym reagencie. PL PL
Description
Przedmiotem wynalazku jest heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce i zestaw testowy do hzterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce.
Test wiązania biochemicznego stosuje się powszechnie do oznaczania obecności i określenia stężenia analizowanych substancji w próbkach biologicznych.
Testy, w których jeden z reaktywnych partnerów wiążących jest wiązany do fazy stałej, są określane jako testy heterogenne. Do heterogennych testów należą np. metoda sandwiczowa, metoda pośrednia i metoda konkurencyjna.
Stwierdzono, że obecność stosunkowo małych ilości środków powierzchniowo czynnych w jednym lub większej liczbie reagentów stosowanych w teście zmniejsza wiązanie niespecyficzne występujące w testach realizowanych techniką wiązania do fazy stałej. Stwierdzono też, że wynalazek można stosować do zmniejszania wiązania niespecyficznego różnych typów białek i oligonukleotyaów do fazy stałej, z minimalnymi zakłóceniami pożądanego współoddziaływania specyficznego, i że można go stosować w testach prowadzonych metodą sandwiczową, pośrednią, bezpośrednią lub konkurencyjną. Można go stosować w metodzie konkurencyjnej gdy substancja analizowana lub analog substancji analizowanej są znakowane lub gdy znakowany jest specyficzny partner wiążący.
Zgodnie z wynalazkiem heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce polega na tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym analogiem substancji analizowanej lub znakowaną substancją analizowaną, przy czym korzystnie substancjąanalizowanąjest białko, peptyd, pallaminokwαs, ollgonukleotya, RNA, DNA lub polisacharyd, a znakowaną substancją analizowaną lub znakowanym analogiem tej substancji są substancja analizowana lub jej analog korzystnie sprzężone z substancją znacznikową którą korzystnie jest ester akrydyniowy oraz z (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączonym do niej specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej lub analogu substancji analizowanej, przy czym fazę stalą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swąspójność strukturalnąpod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, a specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, ollgonuklzoSyd, pollnuklzoSya, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwaaorofo6forαnów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny. Następnie, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę sta^ą z unieruchomionym na niej kompleksem, stanowiącym znakowany analog substancji analizowanej lub znakowaną substancję analizowaną sparowane z unieruchomionym specyficznym partnerem
178 150
Ί wiążącym, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którymjest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące i (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową w tym unieruchomionym kompleksie. Kolejno, (4) koreluje się tę wykrytąsubstancję znacznikowąz obecnościąsubstancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie w ilości od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie, a szczególnie korzystnie w ilości 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
Alternatywnie, zgodnie z wynalazkiem, heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej, polega na tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, a znakowanym specyficznym partnerem wiążącym jest specyficzny partner wiążący sprzężony z substancją znacznikową, korzystnie z estrem akrydyniowym oraz z (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączoną do niej substancją analizowaną lub z przyłączonym do niej analogiem substancji analizowanej, przy czym fazę stałą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalną pod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, a substancjąanalizowanąjest korzystnie białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd. Następnie, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę stałą z unieruchomionym na niej kompleksem, stanowiącym znakowany, specyficzny partner wiążący sparowany z unieruchomionym analogiem substancji analizowanej lub specyficzny partner wiążący sparowany z unieruchomioną substancją analizowaną, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którym jest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące i (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową na tym unieruchomionym kompleksie. Kolejno, (4) koreluje się tę wykrytąsubstancję znacznikowąz obecnościąsubstancji analizowanej w próbce, przy czym wjednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie w ilości od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie, a szczególnie korzystnie w ilości 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
Korzystnie wyżej opisane środki powierzchniowo czynne stosuje się w układach testowych wykorzystujących fazę stałą, lecz w których nie prowadzi się etapu oddzielania. Sąto testy pseudohomogenne. W testach tych sposób zmniejszania wiązania niespecyficznego polega na stosowaniu jednego lub większej liczby wyżej opisanych środków powierzchniowo czynnych i ich mieszaniny, w ilości skutecznie zmniejszającej wiązanie niespecyficzne w tym teście co najmniej około kilkakrotnie, wynoszącej od około 0,001% wagowo-objętościowych do około 3% wagowo-objętościowych. Korzystnie te środki powierzchniowo czynne są obecne wjakimś roztworze stosowanym w takich testach, np. w roztworze, do którego wprowadza się próbkę,
178 150 względnie w reagencie znacznikowym (jeśli się go stosuje) i/lub w reagencie fazy stałej (jeśli stosuje się go jako oddzielny reagent).
Zgodnie z wynalazkiem środek powierzchniowo czynny stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny wprowadza się do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny zarówno stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, jak i wprowadza się go do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej.
Zgodnie z jedną z korzystnych postaci wynalazku test prowadzi się z użyciem polidimetylosiloksanu modyfikowanego politlenkiem alkilenu w reagencie znacznikowym oraz eteru laurylowego polioksyetylenu lub eteru laurylowego polioksyetylenu i polimetylosiloksanu modyfikowanego politlenkiem alkilenu w reagencie przemywającym.
W sposobie według wynalazku korzystnie kontaktuje się (1) próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, znakowanym specyficznym partnerem wiążącym jest specyficzny partner wiążący sprzężony z substancją znacznikową, korzystnie z estrem akrydyniowym, a substancją analizowanąjest korzystnie białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd oraz z (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałćąz przyłączonym do niej nieznakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym fazą stałą jest materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalną pod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne. Następnie, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę stałąz unieruchomionym-na niej kompleksem stanowiącym znakowany specyficzny partner wiążący sparowany z substancją analizowaną, która jest sparowana z unieruchomionym nieznakowanym specyficznym partnerem wiążącym, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którymjest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące i (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikowąna tym unieruchomionym kompleksie. Kolejno (4), koreluje się ten sygnał z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie w ilości 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie a szczególnie korzystnie w ilości 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
Zakres wynalazku obejmuje również zestaw do wykonywania testu.
Zgodnie z wynalazkiem, zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce zawiera (a) reagent fazy stałej, stanowiący fazę stałą z przyłączoną do niej substancją analizowaną lub z przyłączonym analogiem substancji analizowanej, lub z przyłączonym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej lub analogu substancji analizowanej, przy czym fazę stałą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalnąpod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka,
178 150 tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, (b) reagent znacznikowy będący znakowanym analogiem substancji analizowanej lub znakowaną substancją analizowaną, lub znakowanym partnerem wiążącym, przy czym korzystnie substancją analizowaną, jest białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd, specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta ammoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, a znakowaną substancją analizowaną, znakowanym analogiem tej substancji lub znakowanym partnerem wiążącym są korzystnie substancja analizowana lub jej analog lub specyficzny partner wiążący sprzężone z substancją znacznikową, którą korzystnie jest ester akrydyniowy i (c) reagent przemywający, którym jest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące przy czym co najmniej jeden z tych reagentów zawiera od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych środka powierzchniowo czynnego wybranego z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny.
Korzystnie zestaw testowy zawiera dodatkowo roztwór kalibrujący ze znaną ilością substancji analizowanej.
W reakcji wiązania specyficznego co najmniej jeden z partnerów wiążących jest unieruchomiony na fazie stałej. Fazę stałą można wytworzyć z materiałów nieorganicznych i/lub organicznych zachowujących swą spójność strukturalną po ich wystawieniu na działanie wody lub płynów biologicznych, przy czym takie materiały są powszechnie dostępne w handlu. Do odpowiednich do wytwarzania fazy stałej materiałów organicznych należą, lecz nie wyłącznie, materiały krzemionkowe, krzemionka, bentonit, wolastonit, kordieryt i niekrzemionkowe tlenki metali (w tym substancje magnetyczne, takie jak tlenki żelaza, ferryt, tlenki niklu, tlenki kobaltu, itp.). Do odpowiednich nadających się do użycia materiałów organicznych należą, lecz nie wyłącznie, syntetyczne polimery (takie jak np. polistyren i jego pochodne, polimery akrylowe, polimetakrylany, poliolefiny, polimery zawierające chlorowce, poliestry, poliuretany i poliamidy), polimery naturalne (takie jak np. polisacharydy, celuloza, dekstran, agaroza, polipeptydy i białka) lub papier, itp. Do wytwarzania fazy stałej można także stosować połączenia opisanych powyżej materiałów organicznych i nieorganicznych. Przykładowo można stosować cząstki magnetyczne z polimerycznymi otoczkami wokół rdzeni z tlenków metali (np. opisane w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4554088. Faza stała może mieć postać proszku (od bardzo drobnoziarnistego proszku, takiegojak magnetyt, do materiału w postaci gruboziarnistego granulatu) lub wyrobu ukształtowanego (takiego jak perełki, probówka, płytka do mikromiareczkowania, kuweta, membrana, folia, bibuła filtracyjna, krążek, itd.). Jakkolwiek można stosować dowolne z powyższych materiałów to jednak korzystniej fazą stałąjest wyrób lub proszek z materiału polimerycznego (najkorzystniej z polistyrenu, polipropylenu lub ich mieszanin), który to materiał znajduje się co najmniej na powierzchni tego wyrobu lub proszku, przy czym bierze się tu pod uwagę zarówno fazy stałe wytworzone wyłącznie z materiału polimerycznego, jak i powlekane polimerem (korzystnie polistyrenem) cząstki magnetyczne (korzystnie tlenki metali).
Partnerem wiążącym unieruchomionym na fazie stałej może być nieznakowany specyficzny partner wiążący badanej substancji analizowanej, nieznakowany analog badanej substancji analizowanej lub ta badana substancja analizowana. Według definicji specyficznego partnera wiążącego jest to substancja zdolna do sparowania się z docelową substancją analizowaną lub analogiem substancji analizowanej w reakcji wiązania specyficznego. Analog substancji analizowanej definiuje się jako substancję zdolną do sparowania się ze specyficznym partnerem wiążącym docelowej substancji analizowanej w reakcji wiązania specyficznego.
1738150
Kompleks stanowiący produkt reakcji wiązania specyficznego definiuje się albo jako kompleks docelowej substancji analizowanej - specyficzny partner wiążący, albojako kompleks analogu substancji analizowanej - specyficzny partner wiążący, albo jako kompleks „sandwiczowy” pierwszy partner wiążący - substancja analizowana - drugi partner wiążący (przy czym pierwszy partner wiążący może być taki samjak drugi partner wiążący lub inny). Sparowanie specyficznego partnera wiążącego i docelowej substancji analizowanej (i analogu substancji analizowanej, jeśli się go stosuje) może zachodzić drogądowolnej liczby reakcji, w tym reakcji immunologicznych, reakcji chemicznych i wiązania komplementarnego. Partner wiążący unieruchomiony na fazie stałej jest tu zwany „reagentem fazy stałej”. Specyficznymi partnerami wiążącymi stosowanymi zgodnie z wynalazkiem mogąbyć np. przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszty aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyny, białka wiążące i różne inne białka, receptory i peptydy, kwasy nukleinowe, nukleozydy oraz ich mieszaniny.
Wynalazek można wykorzystać do wykrywania i/lub oznaczania pewnej liczby substancji analizowanych, w tym białek, peptydów, poliaminokwasów, oligonukleotydów, RNA, DNA, polisacharydów, itd., w testach wiązania, testach immunologicznych i testach hybrydyzacji kwasów nukleinowych (np. w testach z użyciem sondy genetycznej). Ten sposób jest szczególnie użyteczny przy zmniejszaniu wiązania niespecyficznego partnerów wiążących w testach, w których oznacza się lub wykrywa substancje analizowane opisane powyżej.
W celu bezpośredniego lub pośredniego wykrycia w teście unieruchomionego kompleksu powstałego w wyniku wiązania specyficznego można stosować dowolną liczbę znanych środków. Korzystnie test prowadzi się z użyciem „reagenta znacznikowego”, które to reagenty powszechnie stosuje się w testach immunologicznych i testach z użyciem sondy genetycznej. Według stosowanej tu definicji „reagent' znacznikowy” to znakowana substancja analizowana, znakowany analog substancji analizowanej lub znakowany specyficzny partner wiążący. Znacznikiem przyłączonym do substancji analizowanej, analogu substancji analizowanej lub specyficznej partnera wiążącego jest substancja zdolna do wytworzenia wykrywalnego sygnału. Jako znaczniki można stosować dowolną liczbę substancji, w tym np. radioizotopy, materiały luminescencyjne, fluorescencyjne lub chemiluminescencyjne, enzymy, liposomy, a także materiały metaliczne i niemetaliczne. Znacznik można przyłączyć do specyficznego partnera wiążącego, substancji analizowanej lub analogu substancji analizowanej bezpośrednio (np. poprzez wiązania kowalencyjne) lub pośrednio (np. biotyna/awidyna, DNP/anty-DNP), z użyciem znanych technik. Unieruchomiony kompleks można wykryć bezpośrednio (np. drogą oznaczania substancji znacznikowej w kompleksie) lub pośrednio (np. drogą oznaczania znacznika nieprzereagowanego), dowolnymi metodami, w zależności od tego, jaką substancję zastosowano jako znacznik. Korzystnie znacznikiem jest znacznik chemiluminescencyjny (najkorzystniej ester akrydyniowy) lub znacznik enzymatyczny. Szczególnie korzystnymi znacznikami chemiluminescencyjnymi sąestry akrydyniowe (AE), takie jak opisane w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4918192 i zgłoszeniu patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki o numerze seryjnym 08/035130 (złożonym 19marca 1993 r. przez Law'a i innych), w przypadku których mierzalnym sygnałemjest emisja światła chemiluminescencyjnego, zazwyczaj aktywowana reagentem kwasowym (np. H2O2 w HNO3), a następnie reagentem zasadowym (np. NaOH).
Heterogenne testy wymagają zazwyczaj oddzielenia unieruchomionego na fazie stałej kompleksu powstałego w reakcji wiązania specyficznego od nieprzereagowanego reagenta znacznikowego. Można stosować dowolne sposoby rozdzielania, przy czym w wielu z nich wykorzystuje się ciekły roztwór, lub w połączeniu z innymi technikami (takimi jak np. rozdzielanie magnetyczne). Gdy stosuje się ciekły roztwór, nazywa się go tu „reagentem przemywającym” i jest to zazwyczaj wodny roztwór, który może zawierać inne składniki omówione bardziej szczegółowo w dalszej części opisu.
178 150
Pierwszą z trzech ogólnych grup środków powierzchniowo czynnych stosowanych zgodnie z wynalazkiem stanowią niejonowe środki powierzchniowo czynne, etery alkilowe polioksyetylenu, korzystnie o następującym ogólnym wzorze:
CH3-(CH2)„-(OCH2CH2)mOH w którym n oznacza liczbę całko witą od około 1 do około 18, a m oznacza liczbę całkowitą od około 2 do około 100. Te związki są ogólnie dostępne, w handlu. Szczególnie korzystny jest eter laurylowy polioksyetylenu (4) (środek powierzchniowo czynny BRIJ® 30, ICI Americas, Delaware).
Drugą i trzecią grupę środków powierzchniowo czynnych, które można stosować zgodnie z wynalazkiem tworzą modyfikowane politlenkiem alkilenu blokowe niejonowe kopolimery polialkilosiloksanowe (powszechnie zwane także kopolimerami glikolu silikonowego)o dwóch typach budowy, zwane tu związkami A i związkami B. Typ strukturalny A to liniowe polidimetylosiloksany zaszczepione polieterami drogą reakcji hydrosilanowania. W wyniku tego procesu otrzymuje się kopolimer z alkilowymi grupami bocznymi, w którym ugrupowania politlenku alkilowego sąprzyłączone wzdłuż szkieletu siloksanowego serią odpornych na hydrolizę wiązań Si-C. Te produkty mają następujący ogólny wzór:'
Me3SiO(Me2SiO)x[MeSi(-Pe)O]ySiMe3 A w którym PE oznacza -CH2CH2CH20(E0)o(P0)pZ, Si oznacza atom krzemu, Me oznacza metyl, EO oznacza grupę etylenooksylową, PO oznacza grupę 1,2- propylenooksylową, Z oznacza atom wodoru lub niższy C1-C4-alkil, o oznacza liczbę całkowitą od około 4 do 600,p oznacza liczbę całkowitą od około 4 do 100, ax i y oznaczaj ąliczby całkowite od około 1 do około 10. Modyfikowane politlenkiem alkilenu kopolimery polidimetylosiloksanowe należące do związków typu B są rozgałęzionymi polidimetylosiloksanami, do · których polietery dołączono drogą chemicznej reakcji kondensacji. W wyniku tego procesu otrzymuje się kopolimer o alkoksy-zablokowanych grupach końcowych, w którym ugrupowania politlenku alkilu sąprzyłączone na końcach silikonowego szkieletu poprzez wiązania Si-O-C. Te produkty przedstawia następujący wzór ogólny:
(MeSi)r.2[(OSiMe2)g/rO-PE]r w którym PE oznacza -(EO)/PO),R, R oznacza niższy CrC4-alkil, r i q oznaczają liczby całkowite od około 3 do około 50, s oznacza liczbę całkowitą od około 5 do 100, t oznacza liczbę całkowitą od około 5 do około 100, a Me, Si, EO i PO mają wyżej podane znaczenie. Blokowe kopolimery z obu tych grup nie występują zazwyczaj jako pojedyncze związki chemiczne, lecz jako mieszanina kilku poszczególnych związków, z których każdy ma innąmasę '· cząsteczkową i inny stosunek molowy ugrupowań politlenku etylenu (EO) do .ugrupowań politlenku propylenu (PO), a zatem wartości o i p oraz 5 i t są wartościami średnimi, które .można dla mieszaniny określić na podstawie masy cząsteczkowej i stosunku molowego EO/PO. Ponadto wartości x iy oraz r i q sątakże wartościami średnimi, które można określić na podstawie masy cząsteczkowej kopolimerów. Obie grupy kopolimerów blokowych są ogólnie dostępne w handlu, jak np. produkowana przez OSi Specialties seria środków powierzchniowo czynnych SIE-WET® L, wśród których najkorzystniejsze są środek powierzchniowo czynny SILWET® L-7604 (polidimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu) i środek powierzchniowo czynny SILWET® L-7607 (polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu).
Mieszaniny reagentów (to jest reagent znacznikowy, reagent fazy stałej i reagent przemywający) mogązawierać zwykłe składniki będące substancjami buforującymi, takiejak bufor fosforanowy, bufor cytrynianowy, bufor boranowy i/lub albumina surowicy bydlęcej, i/lub środki
1758150 konserwujące, itp. W reagentach znacznikowych i reagentach przemywających szczególnie korzystnie stosuje się bufor fosforanowy i albuminę surowicy bydlęcej.
Omówione środki powierzchniowo czynne można stosować w różnych (lub wszystkich) zdefiniowanych tu mieszaninach reagentów (tojest w reagentach fazy stałej, reagentach znacznikowych i/lub reagentach przemywających) dla zmniejszenia wiązania niespecyficznego właściwego heterogennym testom. W praktyce można używać dowolnych połączeń. Gdy środek powierzchniowo czynny stosuje się w reagencie fazy stałej, może on znajdować się w roztworze używanym do wstępnej obróbki fazy stałej przed przyłączeniem partnera wiążącego do tej fazy stałej i/lub w reagencie fazy stałej po przyłączeniu partnera wiążącego do tej fazy stałej.
Stwierdzono, iż wybrane środki powierzchniowo czynne zmniejszająwiązanie niespecyficzne z minimalnym zakłóceniem reakcji wiązania specyficznego i minimalnym oddziaływaniem na kompleks utworzony na fazie stałej w wyniku wiązania specyficznego, lub w ogóle bez tych zakłóceń lub oddziaływań, nawet wtedy, gdy środek powierzchniowo czynny jest obecny w reagencie przemywającym. „Skuteczną ilość” środka powierzchniowo czynnego (środków powierzchniowo czynnych) definiuje się jako ilość około 0,001 - 3% wagowo-objętościowych, przy czym te procentowe udziały wagowo-objętościowe sąpodane w przeliczeniu na całkowitą objętość mieszaniny danego reagenta zawierającego wybrane środki powierzchniowo czynne. Niniejszy wynalazek niejest ograniczony do stosowania wyżej podanej ilości środka powierzchniowo czynnego (środków powierzchniowo czynnych). Można stosować większą ilość środka powierzchniowo czynnego, j ednakjedna z zalet wynalazku polega na tym, że te wybrane środki powierzchniowo czynne okazały się skuteczne w zmniejszaniu wiązania niespecyficznego gdy są one obecne w stosunkowo małych ilościach. Korzystnie stosuje się środek powierzchniowo czynny w ilości od 0,005% wagowo-objętościowych (najkorzystniej od 0,01% wagowo-objętościowych) do 1,5% wagowo-objętościowych (najkorzystniej do 1% wagowo-objętościowych). Obecność skutecznej ilości środków powierzchniowo czynnych w jednym lub większej liczbie reagentów fazy stałej, znacznikowych i/lub przemywających może zmniejszyć współoddziaływanie typu wiązania niespecyficznego partnerów wiążących i fazy stałej co najmniej około kilkakrotnie (w niektórych przypadkach do 10000-krotnie lub więcej) w porównaniu z niespecyficznym wiązaniem występującym w testach bez użycia wspomnianych środków powierzchniowo czynnych. W szczególnie korzystnych testach co najmniej około tysiąc-krotne zmniejszenie wiązania niespecyficznego można osiągnąć przez wprowadzenie co najmniej jednego ze zdefiniowanych środków powierzchniowo czynnych do jednego lub więcej niż jednego reagenta wybranego z grupy obejmującej reagent znacznikowy, reagent fazy stałej i reagent przemywający.
Zakresem wynalazku są objęte także zestawy testowe do testów immunologicznych i testów z użyciem sondy genetycznej obejmujące (a) reagent fazy stałej, (b) reagent znacznikowy i (c) reagent przemywający, przy czym co najmniej jeden z tych reagentów zawiera środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, obecny w ilości od około 0,001% wagowo-objętościowych do około 3% wagowo-objętościowych. Jak wiadomo, zestawy testowe mogą ewentualnie obejmować roztwory kalibrujące zawierające znaną ilość substancji analizowanej. Gdy środek powierzchniowo czynny stosuje się w reagencie fazy stałej, ten środek powierzchniowo czynny można stosować do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem partnera wiążącego do tej fazy stałej i/lub można go wprowadzać do mieszaniny reagenta po przyłączeniu partnera wiążącego do fazy stałej.
Wynalazek można realizować w praktyce w testach prowadzonych według różnych metod, w tym, lecz nie wyłącznie, w testach opisanych poniżej.
A. Znakowanasubsaancja anajazowanalubanakowany analogsubstancji anclizowanej, metoda konkurencyjna: Heterogenny test wiązonio niespecyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce, polega na tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znokowonym onalogiem substancji onalizowanei lub znoko1718150 waną substancją analizowaną! (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączonym do niej specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej lub analogiem substancji analizowanej, z wytworzeniem jako produktu reakcji wiązania specyficznego unieruchomionego kompleksu, w którym ten znakowany analog substancji analizowanej lub ta znakowana substancji analizowana są sparowane z tym unieruchomionym specyficzny partnerem wiążącym, (2) oddziela się tę fazę stałąz unieruchomionym na niej kompleksem od reagenta znacznikowego metodą z użyciem reagenta przemywającego, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową w tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się tę wykrytą substancję znacznikową z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polialmetylo6lloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimeSylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości skutecznie zmniejszającej co najmniej około kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście.
B. Znakowany specyficzny partner wiążący, metoda konkurencyjna: Heterogenny test wiązania niespecyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej, polega na tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej i (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałąz przyłączoną do niej substancją analizowaną lub z przyłączonym do niej analogiem substancji analizowanej, z wytworzeniem jako produktu reakcji wiązania .specyficznego unieruchomionego kompleksu, w którym ten znakowany specyficzny partner wiążący jest sparowany z tą unieruchomioną substancją analizowaną lub z tym unieruchomionym analogiem substancji analizowanej, (2) oddziela się tę fazę stalą z unieruchomionym na niej kompleksem od reagenta znacznikowego metodą z użyciem reagenta przemywającego, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikowąna tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się tę wykrytą substancję znacznikową z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym wjednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy poliok6yeSylenu, modyfikowany polislenkiem alkilenu blokowy kopolimer poliaimeSylosilok6anowy, modyfikowany politlznkizm alkilenu blokowy kopolimer polimeSylosilok6tnowy i ich mieszaniny, w ilości skutecznie zmniejszającej co najmniej około kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście.
C. Test sandwickowy, metoda niekonkurencyjna: Sandwiczowy test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej, polega na tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej i (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączonym do niej nieznakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, w którym ten znakowany specyficzny partner wiążącyjest sparowany z Są6ubsSancją analizowaną sparowaną z tym unieruchomionym nieznakowanym specyficznymi partnerem wiążącym, (2) oddziela się tę fazę stałąz unieruchomionym na niej kompleksem od reagenta znacznikowego metodą z użyciem reagenta przemywającego, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową na tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się ten sygnał z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer pollalmzSylosilok6αnowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer pallmetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości skutecznie zmniejszaj ącej co najmniej około kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście.
Zgodnie z korzystną postaciąwynalazku test prowadzi się z użyciem polimeSylosilok6αnu modyfikowanego pol^lenkiem alkilenu w reagencie znacznikowym oraz eteru laurylowego po14 lioksyetylenu lub polimetylosiloksanu modyfikowanego politlenkiem alkilenu w reagencie przemywającym.
Alternatywnie wyżej opisane środki powierzchniowo czynne można stosować w układach testowych wykorzystujących fazę stałą, lecz w których nie prowadzi się etapu oddzielania (zwanych tu testami pseudohomogennymi). W testach pseudohomogennych sposób zmniejszania wiązania niespecyficznego polega na stosowaniu jednego lub większej liczby wyżej opisanych środków powierzchniowo czynnych w ilości skutecznie zmniejszającej wiązanie niespecyficzne w tym teście co najmniej około kilkakrotnie. Korzystnie te środki powierzchniowo czynne są obecne w roztworze stosowanym w takich testach, np. w roztworze, do którego wprowadza się próbkę, względnie w reagencie znacznikowym (jeśli się go stosuje) i/lub w reagencie fazy stałej (jeśli stosuje się go jako oddzielny reagent).
Przykłady
Do materiałów stosowanych w przykładach należały środek powierzchniowo czynny BRIJ® 30 (eter laurylowy polioksyetylenu (4)), środek powierzchniowo czynny TWEEN® 20 (monolaurynian polioksyetylenosorbitanu), politlenek etylenu (PEO, nr katalogowy P 6667, średnia masa cząsteczkowa 10000) i PAW (polialkohol winylowy, nr katalogowy P 8136, średnia masa cząsteczkowa 30000 - 70000), γ-globulina bydlęca (BgG) i hemoglobulina (HB), wszystkie zakupione w Sigma Chemical Co. (St. Louis, mO). S1LWET® L-7604 (polidimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu) i S1LWET® L-7607 (polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu) otrzymano z OSi Specialties, 1nc. Środki powierzchniowo czynne TRITON® Χ-100 i TRITON® Χ-705 (etery oktylofenylowe glikoli polialkilenowych) otrzymano z Union Carbide Corp. Środki powierzchniowo czynne typu kopolimerów polioksyetylenopolioksypropylenowych o nazwie PLURONIC® i środki powierzchniowo czynne typu alkoksylowanych diamin o nazwie TETRONIC® otrzymano z BASF Corp. (Parsippany, Nj). Probówki polistyrenowe, 12x75 mm, zakupiono w Sarstedt Inc. (nr katalogowy 55.476, Pennsauken, NJ). Kuwety polipropylenowe, 12 x 75 mm, otrzymano z Becton Dickinson Corp. (Falcon 2002. Lincoln Park, NJ). Kuwety polipropylenowe zostały wyprodukowane dla Ciba-Coming Diagnostics Corp. (Medfield, MA). Polistyrenowe kapsułki zawierające cząstki magnetyczne zakupiono w Bangs Laboratories, 1nc. (seria nr M0009400, Carmel, IN). Monoklonalne przeciwciała przeciw trijodotyroninie, kinazie kreatynowej, dinitrofenolowi i hormonowi stymulującemu tarczycę były przeciwciałami mysimi, otrzymanymi znanymi technikami. Stanowiący substancję znacznikową ester akrydyniowy (AE) sprzężono z różnymi specyficznymi partnerami wiążącymi (wytwarzając w ten sposób znacznik) sposobem opisanym w pracy 1. Weeks i innych „Acridinium Esters as High-Specific Activity Labels in Immunoassay”, Clin. Chem.. 29, 1447 - 1479 (1983). Wszystkie procentowe udziały wagowo-objętościowe środków powierzchniowo czynnych podano w przeliczeniu na całkowitą objętość mieszaniny danego reagenta zawierającego ten środek powierzchniowo czynny. Znakowanym AE oligonukleotydem był 5-NH2-mecA-495 o sekwencji 5' GAA GAT GGT ATG TGG AAG TTA GAT AAT, gdzie A = adenina, G = guanina, a T = tymina.
W etapie rozdzielania zastosowano statyw do rozdzielania magnetycznego (produkcji Ciba-Coming Diagnostic Corp., Medfield, Mass.). Chemiluminescencyjne znaczniki aktywowano przez kontaktowanie fazy stałej z 0,3 ml Flash Reagent 1 (0, N HNO3 w 0,5% wodnym roztworze H2O2), a następnie kontaktowanie fazy stałej z 0,3 ml Flash Reagent 2 (0,02 N NaOH w 0,5% wodnym roztworze ARQUAR® 16-50, chlorku N-alkilotrimetyloamoniowego o aktywności 50%, zakupionego w AKZO Chemical 1nc., Chicago, IL).
Przykład I.
Wpływ BRIJ 30 i SILWET L-7607 w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne γ-globuliny bydlęcej (BgG) do probówki polistyrenowej
W pierwszym etapie do probówki polistyrenowej 12 x 75 mm dodano następujących reagentów: (a) 0,1 ml buforu PBS/BSA [0,05 M monozasadowy fosforan sodowy, 0,15 M chlorek sodowy, 1 mM kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA), 0,02% wagowo-objętościowych azydku sodowego, 0,1% wagowo-objętościowych albuminy surowicy bydlęcej (BSA), pH 7,4], (b)
0,1 ml γ-globuliny bydlęcej (BgG) znakowanej estrem akrydyniowym (AE) o około 1x 108 RLU (względnychjednostkach świetlnych) w buforze PBS/BSA i (c) 0,5 ml PBS/BSA. Po każdym dodaniu probówkę poddawano wirowaniu.
W drugim etapie, po jednogodzinnym inkubowaniu w temperaturze pokojowej, zawartość każdej probówki dekantowano w ciągu 3 minut osuszano chłonnąbibułką. Następnie sporządzono roztwór przemywający (1 ml buforu PSA/BSA) bez środka powierzchniowo czynnego (roztwór kontrolny) oraz liczne reagenty przemywające zawierające 1 ml buforu BPS/BSA i 0,1% wagowo-objętościowych różnych środków powierzchniowo czynnych przedstawionych w tabeli 1. Każdy reagent dodawano do oddzielnej probówki, wirowano, dekantowano i osuszano w ciągu 3 minut bibułką. Ten etap przemywania powtórzono ogółem czterokrotnie. Do każdej probówki dodawano następnie 5 ml odjonizowanej wody, po czym całość dekantowano i osuszono w ciągu 3 minut bibułką. Wreszcie do każdej z probówek dodawano 0,1 ml odjonizowanej wody i wiązanie niespecyficzne BgG do probówki polistyrenowej mierzono po zaktywowaniu znacznika AE przez dodanie 0,3 ml Flash Reagent 1, a potem 0,3 ml Flash Reagent 2. Uzyskaną emisję światła mierzono z użyciem Magie® Lite Analyzer II (Ciba Corning Diagnostic Corp., Medfield, MA). Dane pomiarowe dla każdej probówki zestawiono w tabeli 1. Te dane przedstawiono jako ułamkowe wiązanie niespecyficzne zdefiniowane jako iloraz liczby względnychjednostek świetlnych (RLU) pozostałych w danej probówce i liczby wprowadzonych RLU, to jest 1x 108. W tabeli 1 i następnych tabelach skrót „% wag./obj.” oznacza procenty wagowo-objętościowe.
Tabela 1
Niespecyficzne wiązanie γ -globuliny bydlęcej (BgG) znakowanej estrem akrydyniowym (AE) do probówki polistyrenowej
| Środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym PSA/BSA | Ilość środka powierzchniowo czynnego | Ułamkowe wiązanie niespecyficzne |
| Brak (próba kontrolna) | 0 | 4 x 10-* |
| BRIJ® 301' (według wynalazku) | 0,1% wag./obj. | 3 x 10*8 |
| SILWET® L-76072 (według wynalazku) | 0,1% wag./obj. | 3 x 10-8 |
| TWEEN® 203' (próba porównawcza) | 0,1% wag./obj. | 2 x 10·6 |
| TRITON®X-1004 (próba porównawcza) | 0,1% wag./obj. | 2 x 10-7 |
1. eter laurylowy polioksyetylenu (4)
2. polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu
3. monolaurynian polioksyetylenosorbitanu
4. eter oktylofenylowy glikolu polialkilenowego
Z rezultatów przedstawionych w tabeli 1 wynika, iż dodanie 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30 lub 0,1 % wagowo-objętościowych SILWET L-7607 do reagenta przemywającego PBS/BSA zmniejsza ułamkowe wiązanie niespecyficzne AE-BgG do probówek polistyrenowych ponad 10000-krotnie. Z kolei dodanie 0,1 % wagowo-objętościowych TWEEN 20 lub TRITON Χ-100 do roztworu przemywającego zmniejsza wiązanie niespecyficzne odpowiednio 200-krotnie i 2000-krotnie.
Przykład II.
Wpływ BRIJ 30 i SILWET L-7607 w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne przeciwciała przeciw hormonowi stymulującemu tarczycę (TSH) do polistyrenu.
Wiązanie niespecyficzne monoklonalnego mysiego przeciwciała przeciw hormonowi stymulującemu tarczycę (TSH) do probówki polistyrenowej zmierzono sposobem opisanym w przykładzie I, z tym wyjątkiem, że BgG zastąpiono przeciw-TSH, a w pierwszym etapie stosowano roztwór bSa zawierający 0,1 ml roztworu BSA o stężeniu 5% wagowo-objętościowych (0,05 M monozasadowy fosforan potasowy, 0,02% wagowo-objętościowych azydku sodowego, 5% wagowo-objętościowych BSA, pH 7,4) zamiast buforu PSA/BSA.
178 150
Tabela 2
Niespecyficzne wiązanie monoklonalnego przeciwciała (przeciw-TSH) znakowanego estrem akrydyniowym (AE) do probówki polistyrenowej
| Środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym PSA/BSA | Ilość środka powierzchniowo czynnego | Ułamkowe wiązanie niespecyficzne |
| Brak (próba kontrolna) | 0 | 5,5 x 10’ |
| BRIJ® 30 (według wynalazku) | 0,1% wag./obj. | 1 x 10'8 |
| SILWET® L-7607 (według wynalazku) | 0,1% wag./obj. | 1 x 10-8 |
| TRITON® Χ-705 (próba porównawcza) | 0,1% wag./obj. | 1,2 x 10’5 |
Z rezultatów przedstawionych w tabeli 2 wynika, iż dodanie 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30 lub SILWET L-7607 do reagenta przemywającego zmniejsza ułamkowe wiązanie niespecyficzne przeciw-THS do polistyrenu ponad 50000-krotnie. Z kolei dodanie 0,1% wagowo-objętościowych TRITON Χ-705 do roztworu przemywającego (zgodnie z metodą użytą według opisu patentowego Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 4 668 639) zmniejsza ułamkowe wiązanie niespecyficzne mniej niż 50-krotnie.
Przykład III.
Wpływ stężenia BRIJ 30 i SILWET L-7607 w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne różnych reagentów znacznikowych.
Znakowane AE białka BgG i hemoglobina (HB), jak również monoklonalne przeciwciała przeciw trijodotyroninie, kinazie kreatynowej (CK-MB), dinitrofenolowi i hormonowi stymulującemu tarczycę (TSH) były reagentami znacznikowymi, których wiązanie niespecyficzne do polistyrenu oceniano z użyciem dwu różnych stężeń środków powierzchniowo czynnych w buforze PBS/BSA, według procedury podanej w przykładzie Π, z tym wyjątkiem, że w drugim etapie probówki przemywano trzykrotnie, a nie czterokrotnie. Stężenie i typy zastosowanych środków powierzchniowo czynnych przedstawiono w tabelach 3 i 4, w których zastosowano skróty o następujących znaczeniach: AE=ester akrydyniowyjak znacznik, BgB=-globulina bydlęca, HB = hemoglobina, Przeciw-TY 1-3 = trzy różne linie przeciwciał przeciw trijodotyroninie, Przeciw-CK = przeciwciało przeciw kinazie kreatynowej, Przeciw-DNP = przeciwciało przeciw dinitrofenolowi, Przeciw-TSH = przeciwciało przeciw hormonowi stymulującemu tarczycę, E = czas 10x (to jest 7,7E-8 = 7,7 x 10’8), wyn. = według wynalazku, porówn. = próba porównawcza, SILWET - polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu (SILWET L-7607).
Tabela 3
Wpływ BRIJ 30 i TRITON Χ-100 na ułamkowe wiązanie niespecyficzne
| Znacznik znakowany AE | Reagent przemywający PBS/BSA | ||||
| próba kontrolna | BRIJ 30 0,01% wag./obj. (wynal.) | TRITON Χ-100 0,01% wag./obj. (porówn.) | BRIJ 30 0,1% wag./obj. (wynal.) | TRITON Χ-100 0,1% wag./obj. (porówn.) | |
| BgG | 5,4E-5 | l,2E-6 | 5,7E-6 | 7,7E-8 | 8,4E-7 |
| HB | 6,9E-4 | 3,1E-6 | 6,3 E-5 | 1,4E-6 | l,lE-6 |
| Przeciw-TY 1 | 6,5E-6 | 7,7E-8 | 2,8E-7 | <5E-8 | 1,1E-7 |
| Przeciw-TY2 | 2,1E-5 | 1,5E-7 | 3,lE-6 | <5E-8 | 3,lE-7 |
| Przeciw-TY3 | 4,2E-5 | 2.4E-7 | 2,7E-6 | l,lE-7 | 5,5E-7 |
| Przeciw-CK | 1,4E-5 | 2,3E-7 | 3.1E-6 | 1,9E-7 | 5,0E-7 |
| Przeciw-DNP | 7,9E-6 | 3,3E-7 | 8,3E-7 | <5E-8 | <5E-8 |
| Przeciw-TSH | 5,5E-4 | 1,7E-6 | 1,1E-5 | 3,4E-7 | 1,2E-6 |
178 150
Tabela 4
Wpływ S1LWET L-7607 i TWEEN 20 na ułamkowe wiązanie niespecyficzne
| Znacznik znakowany AE | Reagent przemywający PBS/BS | ||||
| Próba kontrolna | S1LWET 0,01% wag./obj. (wynal.) | TWEEN 0,01% wag./obj. (porówn.) | S1LWET 0,1% wag./obj. (wynal.) | TWEEN 20 0,1% wag./obj. (porówn.) | |
| BgG | 4,3E-5 | 2,2E-6 | 1,8E-6 | 3,1E-7 | 7,2E-7 |
| HB | 6,2E-4 | 3,2E-5 | 2.1E-4 | 8,2E-7 | 9,8E-6 |
| Przeciw-TY1 | 6,1E-6 | 2,6E-7 | 3,1E-7 | 1,1E-7 | 4,8E-8 |
| Przeciw-TY2 | 2,1E-5 | 1,8E-6 | 2,3E-6 | <5E-8 | l,lE-6 |
| Przeciw-TY3 | 3,5E-5 | 2,6E-6 | 4,7E-6 | 3,8E-7 | l,5E-6 |
| Przeciw-CK | l,3E-5 | 3,8E-6 | 1,9E-6 | 3,3E-7 | 7,7E-7 |
| Przeciw-DNP | 7,3E-6 | l,8E-7 | 4,3E-7 , | <5E-8 | 1,4E-6 |
| Przeciw-TSH | 5,4E-4 | 7,9E-6 | l,lE-5 | 5,8E-7 | 3,8E-6 |
Jak wynika z rezultatów zestawionych w tabelach 3 i 4, średnie zmniejszenie wiązania niespecyficznego tych ośmiu znaczników -było przy stężeniu 0,01% wagowo-objętościowych około 150-krotne w przypadku BR1J 30, a około 40-krotne w przypadku S1LWET L-7607, podczas gdy przy użyciu TWEEN 20 i TR1TON Χ-100 uzyskano zmniejszanie odpowiednio 20- i 15-krotne. Przy stężeniu 0,1% wagowo-objętościowych średnie zmniejszenie wiązania niespecyficznego w przypadku S1LWET L-7606 było 602-krotne, podczas gdy dla porównawczych środków powierzchniowo czynnych, TR1TON Χ-100 i TWEEN 20, było ono mniejsze odpowiednio 273- i 63-krotnie.
Przykład 1V.
Wpływ środków powierzchniowo czynnych w reagencie znacznikowym na wiązanie niespecyficzne przeciwciała przeciw kinazie kreatynowej do polistyrenu.
Wiązanie niespecyficzne znakowanego AE monoklonalnego przeciwciała przeciw kinazie kreatynowej do probówki polistyrenowej oznaczono według procedury opisanej w przykładzie 11, lecz z kilkoma modyfikacjami. Znakowane AE przeciwciało przeciw kinazie kreatynowej badano pod kątem wiązania niespecyficznego, a badane środki powierzchniowo czynne (zidentyfikowane w tabeli 5) dodawano do reagenta znacznikowego w drugim etapie. Ponadto stosowano wyższe stężenie środków powierzchniowo czynnych, wynoszące 1% wagowo-objętościowych. Wyniki zestawiono w tabeli 5.
Tabela 5
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne AE-przeciwciała przeciw kinazie kreatynowej do probówki polistyrenowej
| Środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym PSA/BSA | 1lość środka powierzchniowo czynnego | Ułamkowe wiązanie niespecyficzne |
| Próba kontrolna | 0 | 3,1 x 10-5 |
| S1LWET® L-76041 (według wynalazku) | 1% wag./obj. | 1,4 x 10 |
| Tetronic® 9042 (próba porównawcza) | 1% wag./obj. | 2,2 x 10-6 |
| TR1TON® Χ-7053 (próba porównawcza) | 1% wag./obj. | 8,6 x 10-5 |
1. modyfikowany politlenkiem alkilenu polidimetylosiloksan
2. alkoksylowana etylenodiamina
3. eter oktylofenylowy glikolu polietylenowego
1758150
Jok wynika z donych przedstawionych w tobeli 5, dodonie 1 % wagowo-objętościowych SILWET L-7604 zmniejsza wiązanie niespecyficzne przeciwciała przeciw kinazie kreatynowej do polistyrenu 200-krotnie. Dodonie 1% wogowo-objętościowych TETRON1C 904 do PBS/BSA spowodowało 10-krotne zmniejszenie. Dodonie 1% wagowo-objętościowych TRITON® Χ-705 zmniejszyło wiązanie niespecyficzne czterokrotnie.
Przykład V.
Wpływ środków powierzchniowo czynnych w reagencie znacznikowym na wiązanie niespecyficzne BgG do polistyrenu.
Wiązanie niespecyficzne znakowanej AE BgG do probówki polistyrenowej' oznaczono według procedury opisanej w przykładzie lV, lecz z modyfikacją polegającą na tym, że do reogento znacznikowego wprowadzono AE-BgG. Wyniki zestawiono w tabeli 6.
Tabela 6
Wiązanie niespecyficzne estru budyniowego (AE)-BgG do probówki polistyrenowej
| Środek powierzchniowo czynny w reagencie znacznikowym PSA/BSA | Ilość środka powierzchniowo czynnego | Ułamkowe wiązanie niespecyficzne |
| Próbo kontrolno | 0 | 3,5 x 10·4 |
| SILWET® L-76071 (według wynalazku) | 0,1% wog./obj. | 4,6 x 10-6 |
| Tetronic® 9042 (próbo porównawczo) | 0,1% wog./obj. | 2,7 x 10-6 |
| PLUR.ONIC® P843 (próbo porównawczo) | 0,1% wbg./obj. | 5,3 x 10-6 |
1. modyfikowany politlenkiem alkilenu polidimetyloailokabn
2. olkoksylowono etylenodiamino
3. kopolimer pollokaoetylenopoliokaopropolenowo
Przykład VI.
Wpływ środków powierzchniowo czynnych w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne BgG do polipropylenu.
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne AE-BgG do kuwet polipropylenowych badano następująco: 0,1 ml roztworu BSA o stężeniu 5% wogowo-objętościowych, opisanego w przykładzie Ii, dodono do każdej z kuwet. Następnie kolejno dodono 0,1 ml AE-BgG o 1x 108 RLu i 0,5 ml buforu PBS/BSA. Po jednogodzinnej inkubacji w temperaturze pokojowej kuwety przemyto trzykrotnie wodą („próba kontrolna”) lub reagentem przemywającym zawierającym bufor PBS (0,05 M monozasodowy fosforan sodowy, 0,15 M chlorek sodowy, 1 mM EDTA i 0,02% wagowo-objętościowych azydku sodowego), 1% wogowo-objętościowych polialkoholu winylowego (PAW) i 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30 („PBS/PAW/BRIJ 30”), zoktywowano substancję znocznikowąz użyciem Flosh Reagent 1 i Flash Reagent 2 i przeprowadzono pomiary. RLU pozostałe w każdej z kuwet określono za pomocą aparatu ACS :180® (w pełni zautomatyzowany układ do chemlluminescencojnoch testów immunologicznych z dostępem swobodnym, produkcji Ciba Corning Diagnostics Corp.). Zmierzone w kożdej kuwecie pozostałe RLU odpowiadały ułamkowemu wiązaniu niespecyficznemu, przy czym zaobserwowano, że to ułamkowe wiązanie niespecyficzne BgG do kuwet polipropylenowych uległo zmniejszeniu z 1,6 x 10- do
7,8 x 10'7 gdy wodę zastąpiono reagentem przemywającym PBS/PAW/BRIJ 30.
Przykład VII.
Wpływ BRD 30 w reagencie przemywającym no wiązanie specyficzne i niespecyficzne w teście z kinazą kreotynową (CK-MB).
Zbadano wpływ składu reagenta przemywającego no wiązanie specyficzne i niespecyficzne w teście z Magie® Lite CK-MB (kinozo kreotynowo). W kożdej z probówek polistyrenowych umieszczono po 1,0 ml standardowej CK-MB zawierającej albo zero, albo 51,6 ng/ml CK-MB, a potem dodano po 0,1 ml przeciwciała przeciw-CK-MB znakowanego AE (1,6 x 107 rlu). Następnie dodano 0,5 ml przeciwciało przeciw-CK-BB unieruchomionego no cząstkach paramagnetycznego tlenku żelazo. Po jednogodzinnej inkubacji każdą probówkę przemyto
1718150 dwukrotnie wodą, PBS/BSA lub PBS/BSA zawierającym 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30, po czym substancję znacznikową- zaktywowano i dokonano pomiarów w sposób opisany w przykładzie I. Wyniki zestawiono w tabeli 7 poniżej. Jak widać, dodanie BRIJ 30 do reagenta przemywającego poprawiło stosunek sygnał:zakłócenia w teście z 263 do 417.
Tabela 7
Test wiązania specyficznego i niespecyficznego kinazy kreatynowej
| Stężenie kinazy kreatynowej (ng/ml) | |||
| Reagent przemywający | 0 | 51,6 | Sygnał/zakłócenia |
| Woda (próba kontrolna) | 1933 | 302240 | 156 |
| PBS/BSA (próba kontrolna) | 860 | 226235 | 263 |
| PBS/BSA/BRU 30 (według wynalazku) | 557 | 232125 | 417 |
Przykład VIII.
Wpływ środka powierzchniowo czynnego w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne oligonu-kleotydu do polistyrenu.
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne znakowanego AE oligonukleotydu 5'-NH2-mecA-495 do probówek polistyrenowych uległo znaczącemu zmniejszeniu po dodaniu 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30 do reagenta przemywającego. Zastosowano procedurę z przykładu II, z trzema przemyciami z użyciem wody lub PBS/PAW/BRIJ 30. Wiązanie niespecyficzne znacznika oligonukleotydowego do polistyrenu zmniejszyło się z 1,4 x 104 do <5 x 10'8 gdy standardowy roztwór przemywający, wodę, zastąpiono . PBS/PAW/BRIJ 30.
Przykład IX.
Wpływ środka powierzchniowo czynnego w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne oligonukleotydu do polipropylenu.
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne znakowanego AE oligonukleotydu 5'-NH2-mecA-495 do probówek polipropylenowych uległo zmniejszeniu z 5,9 x 104 do 1,9x 10- gdy wodny roztwór przemywający zastąpiono PBS/PAW/BRIJ 30. Zastosowano procedurę z przykładu II z modyfikacją podaną w przykładzie VI.
Przykład X.
Wpływ środka powierzchniowo czynnego w reagencie przemywającym na wiązanie niespecyficzne oligonu-kleotydu do polipropylenu
Wiązanie niespecyficzne znakowanego AE znacznika oligonukleotydowego 5'-NH2-mecA-495 do kuwet polipropylenowych oceniono z użyciem TETRONIC 904 jako środka powierzchniowo czynnego. Procedura testowa była następująca. Najpierw do każdej kuwety dodano 0,1 ml BSA o stężeniu 5% wagowo-objętościowych, a potem 0,1 ml 5'-NH2-mecA-495 w PBS/BSA, z 0,1% wagowo-objętościowych TETRONIC 904 lub bez. Następnie do każdej kuwety wprowadzono 0,45 ml PBS/BSA z 0,1% wagowo-objętościowych tEtRONIC 904 lub bez. Po 7,5 minuty inkubacji w 37°C kuwety przemyto trzykrotnie PBS zawierającym 0,1% wagowo-objętościowych BRIJ 30. Wiązanie niespecyficzne oligonukleotydu do kuwet polipropylenowych zmniejszyło się z 1,4 x 10- do 5,2 x 10'6 gdy do roztworów buforowych dodano 0,1% wagowo-objętościowych TETRONIC 904, przy czym aktywację substancji znacznikowej i pomiary przeprowadzono sposobem opisanym w przykładzie VI.
Przykład XI.
Wpływ środków powierzchniowo czynnych w reagencie przemywającym lub reagencie fazy stałej na wiązanie niespecyficzne BgG do cząstek magnetycznych powlekanych polistyrenem.
W tym doświadczeniu badano wpływ BRIJ 30 i TETRONIC 908 na wiązanie niespecyficzne AE-BgG do kapsułek polistyrenowych zawierających cząstki magnetyczne. Najpierw 0,1 ml PBS/BSA lub PBS zawierającego 1% wagowo-objętościowych TETRONIC 908 dodawano do
178 150 probówki polistyrenowej. Następnie kolejno dodawano 0,5 ml cząstek magnetycznych (0,1 mg/ml w PBS/BSA) i 0,1 ml AE-BgG o 108 RLU. Próbki wirowano po każdym dodaniu. Po jednogodzinnej inkubacji w temperaturze pokojowej próbki przemyto trzykrotnie PBS/BSA lub PBS/PAW/BRIJ 30, a następnie znacznik zaktywowano i dokonano pomiarów tak jak w przykładzie I. Wyniki zestawiono w tabeli 8.
Tabela 8
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne BgB znakowanej AE do polistyrenowych mikrakulyk magnetycznych
| Ułamkowe wiązanie niespecyficzne | ||
| Reagent fazy stałej | ||
| Reagent przemywający | PBS/BSA | PBS/1% TETRONIC 908 |
| PBS/BSA (próba kontrolna) | 3 x 10’ | 1x1 O- |
| PBS/PAW/BRIJ 30 (według wynalazku) | 7x 10'5 | 3 x 10'5 |
Przykład XII.
Wpływ różnych środków powierzchniowo czynnych dodawanych do reagenta fazy stałej na wiązanie niespecyficzne BgG do cząstek magnetycznych powlekanych polistyrenem.
Badania przeprowadzono według procedury opisanej w przykładzie XI. Roztworem przemywającym dla wszystkich próbek w tych badaniach był PBS/PAW/BRIJ 30. Wyniki zestawiono w tabeli 9.
Tabela 9
Ułamkowe wiązanie niespecyficzne BgG znakowanej AE do polistyrenowych mikrakulyk magnetycznych
| Środek pawiyrkchniawa czynny w reagencie przemywającym PBS/PAW | Środek pawiyrkchniawa czynny/polimer w buforowanym PBS reagencie fazy stałej | Ułamkowe wiązanie niespecyficzne |
| 0,1% wag/obj. BRIJ 30 | brak | 9,6 x 10'- |
| 0,1% wag/obj. BRIJ 30 | 1% wag./obj. TWEEN 20 | 1,9 x 104 |
| 0,1% wag/obj. BRIJ 30 | 1% wag./obj. TRITON Χ-100 | 3,3 X 10-4 |
| 0,1% wag./obj. BRIJ 30 | 1% wag./obj. PLURONIC F108 | 4,0 x 10'5 |
| 0,1% wag/obj. BRIJ 30 | 1% wag./obj. TETRONIC 908 | 3,5 x 10'5 |
| 0,1% wag./obj. BRIJ 30 | 1% wag./obj. PEO | 8,8 x 10'5 |
| 0,1% wag/obj. BRIJ 30 | 1% wag/obj. PVA | 4,7 x 10'5 |
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz.
Cena 4,00 zł.
Claims (37)
- Zastrzeżenia patentowe1. Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce, znamienny tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym analogiem substancji analizowanej lub znakowaną substancją analizowaną, przy czym korzystnie substancją analizowaną jest białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd, a znakowaną substancją analizowaną lub znakowanym analogiem tej substancji są substancja analizowana lub jej analog korzystnie sprzężone z substancją znacznikową, którą korzystnie jest ester akrydyniowy i (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączonym do niej specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej lub analogiem substancji analizowanej, przy czym fazę stałą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalną pod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, a specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę stałąz unieruchomionym na niej kompleksem, stanowiącym znakowany analog substancji analizowanej lub znakowaną substancj ę analizowaną sparowane z unieruchomionym specyficznym partnerem wiążącym, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którym jest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znaczni ko wąw tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się tę wykrytą substancję znacznikowąz obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym wjednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywaj ący, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuj e się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie . w ilości od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie.
- 2. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaninę stosuje się w teście pseudohomogennym.
- 3. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny wprowadza się do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny zarówno stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej,jak i wprowadza się go do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej.178 150
- 4. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuj e się w mieszaninie reagenta znacznikowego.
- 5. Test według zastrz. 4, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w mieszaninie reagenta przemywającego.
- 6. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w reagencie przemywającym, reagencie znacznikowym i reagencie fazy stałej.
- 7. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w ilości od około 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
- 8. Test według zastrz. 7, znamienny tym, że w reagencie przemywającym stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter laurylowy polioksyetylenu i polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu, a w reagencie znacznikowym jako środek powierzchniowo czynny stosuje się polidimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu.
- 9. Test według zastrz. 8, znamienny tym, że jako środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym stosuje się eter laurylowy polioksyetylenu.
- 10. Test według zastrz. 9, znamienny tym, że środki powierzchniowo czynne stosuje się w ilości od 0,01 % wagowo-objętościowych do 1 % wagowo-objętościowych w danym reagencie, a do reagenta znacznikowego dodaje się ponadto buforu fosforanowego i albuminy surowicy bydlęcej.
- 11. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że stosuj e się środek powierzchniowo czynny w ilości zmniejszającej wiązanie niespecyficzne co najmniej tysiąckrotnie.
- 12. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że jako specyficznego partnera wiążącego stosuje się przeciwciało.
- 13. Test według zastrz. 1, znamienny tym, że jako specyficznego partnera wiążącego stosuje się oligonukleotyd.
- 14. Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce, znamienny tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, a znakowanym specyficznym partnerem wiążącymjest specyficzny partner wiążący sprzężony z substancją znacznikową, korzystnie z estrem akrydyniowym i (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę stałą z przyłączoną do niej substancją analizowaną lub z przyłączonym do niej analogiem substancji analizowanej, przy czym fazę stałą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalną pod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, a substancją analizowaną jest korzystnie białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę stałą z unieruchomionym na niej kompleksem, stanowiącym znakowany, specyficzny partner wiążący sparowany z unieruchomionym analogiem substancji analizowanej lub specyficzny partner wiążący sparowany z unieruchomioną substancją analizowaną, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którym jest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową na tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się tę wykrytą substancję znacznikową z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer1718150 polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie w ilości od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie.
- 15. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny wprowadza się do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny zarówno stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, jak i wprowadza się go do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej.
- 16. Test według zastrz. 15, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w mieszaninie reagenta znacznikowego.
- 17. Test według zastrz. 16, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w mieszaninie reagenta przemywającego.
- 18. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w reagencie przemywającym, reagencie znacznikowym i reagencie fazy stałej.
- 19. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w ilości od około 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
- 20. Test według zastrz. 19, znamienny tym, że w reagencie przemywającym stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter laurylowy polioksyetylenu i polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu, a w reagencie znacznikowym jako środek powierzchniowo czynny stosuje się polidimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu.
- 21. Test według zastrz. 20, znamienny tym, żejako środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym stosuje się eter laurylowy polioksyetylenu.
- 22. Test według zastrz. 21, znamienny tym, że środki powierzchniowo czynne stosuje się w ilości od 0,01% wagowo-objętościowych do 1% wagowo-objętościowych, a do reagenta znacznikowego dodaje się ponadto buforu fosforanowego i albuminy surowicy bydlęcej.
- 23. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że stosuje się środek powierzchniowo czynny w ilości zmniejszającej wiązanie niespecyficzne co najmniej tysiąckrotnie.
- 24. Test według zastrz. 14, znamienny tym, żejako specyficznego partnera wiążącego stosuje się przeciwciało.
- 25. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że jako specyficznego partnera wiążącego stosuje się oligonukleotyd.
- 26. Test według zastrz. 14, znamienny tym, że (1) kontaktuje się próbkę z (a) reagentem znacznikowym będącym znakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik wewnętrzny witaminy Bl2, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, znakowanym specyficznym partnerem wiążącym jest specyficzny partner wiążący sprzężony z substancją znacznikową, korzystnie z estrem akrydyniowym, a substancją analizowanąjest korzystnie białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd i (b) reagentem fazy stałej stanowiącym fazę sta-łą z przyłączonym do niej nieznakowanym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej, przy czym fazą stałą jest materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalną pod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, (2) oddziela się od reagenta znacznikowego tę fazę stałą z unieruchomionym na niej kompleksem stanowiącym znakowany specyficzny partner wiążący sparowany z substancją analizowaną, która jest sparowana z unieruchomionym nieznakowanym specyficznym partnerem wiążącym, przez przemywanie z użyciem reagenta przemywającego, którymjest ciekły roz178 150 twór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące, (3) bezpośrednio lub pośrednio wykrywa się substancję znacznikową na tym unieruchomionym kompleksie i (4) koreluje się ten sygnał z obecnością substancji analizowanej w próbce, przy czym w jednym lub większej liczbie reagentów wybranych z grupy obejmującej reagent przemywający, reagent znacznikowy i reagent fazy stałej stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny, w ilości zmniejszającej co najmniej kilkakrotnie wiązanie niespecyficzne w tym teście, korzystnie w ilości 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych w danym reagencie.
- 27. Test według zastrz. 26, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny wprowadza się do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, względnie ten środek powierzchniowo czynny zarówno stosuje się do obróbki wstępnej fazy stałej przed przyłączeniem specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej, jak i wprowadza się go do reagenta fazy stałej po przyłączeniu specyficznego partnera wiążącego do tej fazy stałej.
- 28. Test według zastrz. 26, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w mieszaninie reagenta znacznikowego.
- 29. Test według zastrz. 28, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w mieszaninie reagenta przemywającego.
- 30. Test według zastrz. 26, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w reagencie przemywającym, reagencie znacznikowym i reagencie fazy stałej.
- 31. Test według zastrz. 26, znamienny tym, że środek powierzchniowo czynny stosuje się w ilości od około 0,005% wagowo-objętościowych do 1,5% wagowo-objętościowych.
- 32. Test według zastrz. 31, znamienny tym, że w reagencie przemywającym stosuje się środek powierzchniowo czynny wybrany z grupy obejmującej eter laurylowy polioksyetylenu i polimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu, a w reagencie znacznikowym jako środek powierzchniowo czynny stosuje się polidimetylosiloksan modyfikowany politlenkiem alkilenu.
- 33. Test według zastrz. 32, znamienny tym, że jako środek powierzchniowo czynny w reagencie przemywającym stosuje się eter laurylowy polioksyetylenu.
- 34. Test według zastrz. 33, znamienny tym, że środki powierzchniowo czynne stosuje się ilości od 0,01 % wagowo-objętościowych do 1 % wagowo-objętościowych w danym reagencie, a do reagenta znacznikowego dodaje się ponadto buforu fosforanowego i albuminy surowicy bydlęcej.
- 35. Test według zastrz. 26, znamienny tym, że stosuje się środek powierzchniowo czynny w ilości zmniejszającej wiązanie niespecyficzne co najmniej tysiąckrotnie.
- 36. Zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce, znamienny tym, że zawiera (a) reagent fazy stałej, stanowiący fazę stałą z przyłączoną do niej substancją analizowaną lub z przyłączonym analogiem substancji analizowanej, lub z przyłączonym specyficznym partnerem wiążącym substancji analizowanej lub analogu substancji analizowanej, przy czym fazę stałą stanowi materiał organiczny lub nieorganiczny lub połączenie tych materiałów, które zachowują swą spójność strukturalnąpod działaniem wody i płynów biologicznych, korzystnie krzemionka, tlenki metali, a szczególnie korzystnie cząstki o własnościach paramagnetycznych oraz polimery sztuczne lub naturalne, (b) reagent znacznikowy będący znakowanym analogiem substancji analizowanej lub znakowaną substancją analizowaną, lub znakowanym partnerem wiążącym, przy czym korzystnie substancją analizowaną jest białko, peptyd, poliaminokwas, oligonukleotyd, RNA, DNA lub polisacharyd, specyficznym partnerem wiążącym jest korzystnie przeciwciało, antygen, awidyna, biotyna, tyroksyna, globulina wiążąca tyroksynę, polisacharyd, oligonukleotyd, polinukleotyd, fosforylocholina, reszta aminoetylodiwodorofosforanów, estrogen, czynnik178 150 wewnętrzny witaminy B12, lektyna, białko, receptor i peptyd, kwas nukleinowy, nukleozyd i ich mieszaniny, a znakowaną substancją analizowaną, znakowanym analogiem tej substancji lub znakowanym partnerem wiążącym są korzystnie substancja analizowana lub jej analog lub specyficzny partner wiążący sprzężone z substancją znacznikową, którą korzystnie jest ester akrydyniowy i (c) reagent przemywający, którym jest ciekły roztwór, korzystnie roztwór wodny zawierający środki powierzchniowo czynne i substancje buforujące przy czym co najmniej jeden z tych reagentów zawiera od 0,001% wagowo-objętościowych do 3% wagowo-objętościowych środka powierzchniowo czynnego wybranego z grupy obejmującej eter alkilowy polioksyetylenu, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polidimetylosiloksanowy, modyfikowany politlenkiem alkilenu blokowy kopolimer polimetylosiloksanowy i ich mieszaniny.
- 37. Zestaw testowywedhigzasbg; . 36,zn3mienny iym, że dodżtkowo zawiera wirtwórkalibrujący ze znaną ilością substancji analizowanej.* * *
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/339,870 US5639626A (en) | 1994-11-15 | 1994-11-15 | Reagents for specific binding assays |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL309211A1 PL309211A1 (en) | 1996-05-27 |
| PL178150B1 true PL178150B1 (pl) | 2000-03-31 |
Family
ID=23330986
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL95309211A PL178150B1 (pl) | 1994-11-15 | 1995-06-21 | Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce i zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5639626A (pl) |
| EP (2) | EP1085322A1 (pl) |
| JP (1) | JPH08240590A (pl) |
| KR (1) | KR960018584A (pl) |
| AT (1) | ATE201771T1 (pl) |
| AU (1) | AU713482B2 (pl) |
| CA (1) | CA2151197A1 (pl) |
| DE (1) | DE69521104T2 (pl) |
| PL (1) | PL178150B1 (pl) |
Families Citing this family (33)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050069923A1 (en) * | 1996-07-08 | 2005-03-31 | Mullis Kary Banks | Dual bead assays using cleavable spacers and/or ligation to improve specificity and sensitivity including related methods and apparatus |
| US5895765A (en) * | 1997-06-30 | 1999-04-20 | Bayer Corporation | Method for the detection of an analyte by immunochromatography |
| DE19748489A1 (de) * | 1997-11-03 | 1999-05-06 | Roche Diagnostics Gmbh | Polyethylenglykol-derivatisierte Biomoleküle und deren Verwendung in heterogenen Nachweisverfahren |
| JPH11287802A (ja) * | 1998-04-03 | 1999-10-19 | Nippon Kayaku Co Ltd | 表面保護剤 |
| US6379909B1 (en) * | 1998-06-24 | 2002-04-30 | Alk-Abello A/S | Method of detecting an antibody in a liquid sample |
| US6194224B1 (en) | 1998-07-27 | 2001-02-27 | Avitar, Inc. | Diagnostic membrane containing fatty acid sarcosinate surfactant for testing oral fluid |
| US6461874B1 (en) * | 1999-01-27 | 2002-10-08 | Bayer Corporation | Stabilization of particles and reduction of sample discordance in immunoassays using casein coating of particles |
| CA2377946A1 (en) * | 1999-06-25 | 2001-01-04 | Shigeru Matsumori | Carrier for immunoassay and solid phase for immunoassay containing the same |
| US6743585B2 (en) | 1999-09-16 | 2004-06-01 | Agilent Technologies, Inc. | Methods for preparing conjugates |
| CA2422856C (en) * | 2000-09-25 | 2012-02-07 | Abbott Laboratories | Methods and kits for decreasing interferences of assay samples containing plasma or serum in specific binding assays by using a large polycation |
| US20040248093A1 (en) * | 2000-11-27 | 2004-12-09 | Coombs James Howard | Magneto-optical bio-discs and systems including related methods |
| US20030003464A1 (en) * | 2000-11-27 | 2003-01-02 | Phan Brigitte C. | Dual bead assays including optical biodiscs and methods relating thereto |
| US20020172980A1 (en) * | 2000-11-27 | 2002-11-21 | Phan Brigitte Chau | Methods for decreasing non-specific binding of beads in dual bead assays including related optical biodiscs and disc drive systems |
| US6844028B2 (en) * | 2001-06-26 | 2005-01-18 | Accelr8 Technology Corporation | Functional surface coating |
| US7501157B2 (en) * | 2001-06-26 | 2009-03-10 | Accelr8 Technology Corporation | Hydroxyl functional surface coating |
| DE10211818B4 (de) * | 2002-03-16 | 2006-07-06 | peS Gesellschaft für medizinische Diagnose-Systeme mbH | Verfahren zur quantitativen Bestimmung mehrerer Analyten |
| US20050233473A1 (en) * | 2002-08-16 | 2005-10-20 | Zyomyx, Inc. | Methods and reagents for surface functionalization |
| EP1681568A1 (en) * | 2003-10-29 | 2006-07-19 | Hidechika Okada | Artificial antibody comprising complementary peptide |
| EP1735619A4 (en) * | 2004-04-01 | 2007-09-26 | Rules Based Medicine Inc | UNIVERSAL FLICK TESTING |
| US7618777B2 (en) * | 2005-03-16 | 2009-11-17 | Agilent Technologies, Inc. | Composition and method for array hybridization |
| JP4697944B2 (ja) * | 2005-06-10 | 2011-06-08 | キヤノン株式会社 | 非特異吸着を低減するプローブ固定担体の製造方法 |
| FR2888937B1 (fr) | 2005-07-21 | 2012-10-26 | Biomerieux Sa | Procede de detection des fcpa utilisant un agent d'agregation des fcpa et un agent de capture des agregats formes |
| US20080108147A1 (en) * | 2006-11-03 | 2008-05-08 | Tie Wei | Reduction of non-specific binding in immunoassays |
| US20080207960A1 (en) * | 2007-02-28 | 2008-08-28 | Eric Lin | Methods, compositions, and kits for post-hybridization processing of arrays |
| US8617820B2 (en) * | 2007-08-28 | 2013-12-31 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Use of glycosaminoglycans to reduce non-specific binding in immunoassays |
| WO2009137713A2 (en) * | 2008-05-07 | 2009-11-12 | The Regents Of The University Of California | Particle-based electrostatic sensing and detection |
| CN103038641B (zh) * | 2010-03-31 | 2017-05-10 | 积水医疗株式会社 | 减少来自测量系统外部的成分的干扰的方法 |
| WO2016191603A1 (en) * | 2015-05-26 | 2016-12-01 | OncoGenesis Inc. | System, method and kit for detection of analytes by production of electrochemical species |
| WO2018138264A2 (en) | 2017-01-27 | 2018-08-02 | Roche Diagnostics Gmbh | Methods for modulating signal intensity in interaction assays |
| WO2018221544A1 (ja) * | 2017-05-31 | 2018-12-06 | 協和メデックス株式会社 | 線維芽細胞増殖因子－２３の測定方法、測定試薬及び測定キット |
| CN114076823B (zh) * | 2020-08-13 | 2024-05-17 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 固相组分的制备方法及所制备的固相组分 |
| CN112129946A (zh) * | 2020-08-16 | 2020-12-25 | 陆修委 | 无糖链型惰性蛋白封闭剂的制备方法及应用 |
| CN116027019B (zh) * | 2022-12-23 | 2023-10-03 | 宁波瑞源生物科技有限公司 | 一种用于化学发光免疫分析的添加剂及其用途 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4281061A (en) * | 1979-07-27 | 1981-07-28 | Syva Company | Double antibody for enhanced sensitivity in immunoassay |
| GB8317855D0 (en) * | 1983-06-30 | 1983-08-03 | Iq Bio Ltd | Biochemical detection method |
| DE3327642A1 (de) * | 1983-07-30 | 1985-02-14 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur bestimmung eines partners einer immunreaktion sowie reagens zur durchfuehrung dieses verfahrens |
| US4689309A (en) * | 1985-09-30 | 1987-08-25 | Miles Laboratories, Inc. | Test device, method of manufacturing same and method of determining a component in a sample |
| US4810630A (en) * | 1987-03-30 | 1989-03-07 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Use of polyoxyethylene ethers to improve the performance of immunoassays employing peroxidase conjugates |
| US4971904A (en) * | 1987-06-26 | 1990-11-20 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Heterogeneous immunoassay |
| US4927769A (en) * | 1987-07-08 | 1990-05-22 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Method for enhancement of chemiluminescence |
| US5124245A (en) * | 1989-02-09 | 1992-06-23 | Eastman Kodak Company | Wash composition, test kit and their use to determine a herpes simplex viral antigen |
| DE4023671A1 (de) * | 1990-07-25 | 1992-01-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Nichtionische blockcopolymere aus propylenoxid und ethylenoxid |
| JP3076640B2 (ja) * | 1991-07-26 | 2000-08-14 | 富士薬品工業株式会社 | ヒト９２ｋＤａゼラチナーゼの免疫学的定量法 |
-
1994
- 1994-11-15 US US08/339,870 patent/US5639626A/en not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-06-02 AU AU20447/95A patent/AU713482B2/en not_active Ceased
- 1995-06-07 CA CA002151197A patent/CA2151197A1/en not_active Abandoned
- 1995-06-21 PL PL95309211A patent/PL178150B1/pl unknown
- 1995-10-19 JP JP7271031A patent/JPH08240590A/ja not_active Withdrawn
- 1995-11-13 EP EP00204023A patent/EP1085322A1/en not_active Withdrawn
- 1995-11-13 DE DE69521104T patent/DE69521104T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-11-13 EP EP95308090A patent/EP0713095B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-11-13 AT AT95308090T patent/ATE201771T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-11-15 KR KR1019950042158A patent/KR960018584A/ko not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-03-19 US US08/821,664 patent/US5710006A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US5639626A (en) | 1997-06-17 |
| KR960018584A (ko) | 1996-06-17 |
| PL309211A1 (en) | 1996-05-27 |
| EP0713095A3 (en) | 1996-07-31 |
| AU2044795A (en) | 1996-05-23 |
| AU713482B2 (en) | 1999-12-02 |
| DE69521104D1 (de) | 2001-07-05 |
| CA2151197A1 (en) | 1996-05-16 |
| ATE201771T1 (de) | 2001-06-15 |
| JPH08240590A (ja) | 1996-09-17 |
| US5710006A (en) | 1998-01-20 |
| EP0713095A2 (en) | 1996-05-22 |
| DE69521104T2 (de) | 2001-09-13 |
| EP1085322A1 (en) | 2001-03-21 |
| EP0713095B1 (en) | 2001-05-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL178150B1 (pl) | Heterogenny test wiązania specyficznego służący do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce i zestaw testowy do heterogennego testu wiązania specyficznego służącego do wykrywania lub oznaczania substancji analizowanej w próbce | |
| TW297094B (pl) | ||
| JP3197277B2 (ja) | 一種類以上の免疫学的配位子の分析方法，その分析試薬およびそのキット | |
| EP2027468B1 (en) | Detection of target molecules in a sample by using a magnetic field | |
| JPH03502244A (ja) | 試験方法およびそのための試薬キツト | |
| US20070148640A1 (en) | Methods and kits for decreasing interferences in plasma or serum containing assay samples of specific binding assays | |
| PL196464B1 (pl) | Analityczne urządzenie chromatograficzne oraz sposób wykrywania obecności przedmiotu analizy w próbce krwi | |
| NL7907939A (nl) | Gecombineerde heterogene specifieke bindingsproeven. | |
| JPS6488155A (en) | Immunological inspection for detecting antibody against antigen | |
| JPS6071957A (ja) | 超音波処理により免疫反応を促進する方法 | |
| WO2000051814A1 (en) | Simultaneous analysis of an analyte and an interfering substance using flow cytometry | |
| PL173033B1 (pl) | Sposób wykrywania swoistej immunoglobuliny w próbce | |
| CN106415271B (zh) | 用于执行多重分析方法的对照 | |
| WO1987004794A1 (en) | Latex agglutination using avidin/biotin system | |
| JPS61265571A (ja) | 異なる比重をもつ相補的粒子を用いる遠心の場におけるイムノアツセイ法 | |
| EP0835451B1 (en) | Non-separation specific binding chemiluminescent assay | |
| JPS6271861A (ja) | 免疫反応成分測定法及び該方法を実施するための試薬 | |
| EP0228225A2 (en) | Immunoassay kit and method employing modified solid surface | |
| EP0323909A1 (en) | Immunological assay method | |
| JP2547149B2 (ja) | 免疫測定法及び免疫測定用試薬キット | |
| JP3444649B2 (ja) | 免疫測定用試薬およびその製造方法 | |
| JP2003232793A (ja) | 高濃度磁性ビーズ固相迅速測定法 | |
| JPH06148188A (ja) | 免疫学的再検査方法 | |
| JP2000292424A (ja) | 免疫測定方法 | |
| HK1234144A1 (en) | Control means for implementing multiplex analysis methods |