PL181280B1 - oraz zawierajaca je kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL PL PL PL PL - Google Patents

oraz zawierajaca je kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL PL PL PL PL

Info

Publication number
PL181280B1
PL181280B1 PL94315113A PL31511394A PL181280B1 PL 181280 B1 PL181280 B1 PL 181280B1 PL 94315113 A PL94315113 A PL 94315113A PL 31511394 A PL31511394 A PL 31511394A PL 181280 B1 PL181280 B1 PL 181280B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
phe
2nal
lys
group
ala
Prior art date
Application number
PL94315113A
Other languages
English (en)
Other versions
PL315113A1 (en
Inventor
Nils L Johansen
Jesper Lau
Kjeld Madsen
Behrend F Lundt
Henning Thogersen
Birgit S Hansen
Bernd Peschke
Original Assignee
Novo Nordisk As
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DK143993A external-priority patent/DK143993D0/da
Application filed by Novo Nordisk As filed Critical Novo Nordisk As
Publication of PL315113A1 publication Critical patent/PL315113A1/xx
Publication of PL181280B1 publication Critical patent/PL181280B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1024—Tetrapeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/02—Drugs for disorders of the endocrine system of the hypothalamic hormones, e.g. TRH, GnRH, CRH, GRH, somatostatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/06—Drugs for disorders of the endocrine system of the anterior pituitary hormones, e.g. TSH, ACTH, FSH, LH, PRL, GH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/10—Drugs for disorders of the endocrine system of the posterior pituitary hormones, e.g. oxytocin, ADH
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/60—Growth hormone-releasing factor [GH-RF], i.e. somatoliberin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

w którym; A oznacza wodór, B oznacza grupe (G )t-H , w której t oznacza liczbe 0 lub 1, G i H sa resztami am inokw asów wybranym i z grupy obejm ujacej naturalne L -am inokw asy lub ich odpow iednie D -izom ery A la, H is lub Phe, lub syntetyczne am inokwasy: kwas am inoizom aslo w y, kwas 3-am ino- -3-m etylobenzoesow y, C oznacza D -am inokw as o wzorze - N H - C H ( C H 2 - R 4)w -C O -, w którym w oznacza liczbe 1, a R 4 oznacza grupe o w zorze D oznacza D -am inokw as o w zorze - N H - C H ( ( C H 2 ) k - R 5) - C O - , gdzie k oznacza liczbe 1; R 5 oznacza grupe o w zorze; E oznacza -N H -C H (R 10)-(C H 2)v-R9, gdzie v oznacza liczbe 4 lub 8; R oznacza wodór, lub grupeN (R 11)-R 12, gdzie kazdy z podstaw ni- ków R 11 i R 12 oznacza w odór, R 10 je st wybrany z grupy skladajacej sie z -H, C H 2-O H , -C O -R 13, gdzie R 13 oznacza grupe -OH lub -N (R 14)-R 15, gdzie kazdy z podstaw- ników R 14 i R15 oznacza w odór; oraz je g o dopuszczalne farm aceutycznie sole 9. K om pozycja farm aceutyczna do stym ulowania uw alniania hormonu wzrostu z przysadki, zawierajaca substancje czynna razem z dopuszczalnym farm aceutycznie nosnikiem lub rozcienczalnikiem , znam ienn a tym , ze zaw iera jako skladnik czynny zw iazek o wzorze ogólnym I A -B -C -D -E (I) w którym; A oznacza wodór, B oznacza grupe (G )t-H , w której t oznacza liczbe 0 lub 1, G i H sa resztami am inokw asów wybranym i z grupy obejm ujacej naturalne L-am inokwasy lub ich odp ow ied nie D-izom ery A la, H is lub Phe, lub syntetyczne am inokwasy kwas am in oizom aslow y, kwas 3-am ino- -3-m etylobenzoesow y, C oznacza D -am inokwas o wzorze -N H-CH((CH 2)w-R4)-CO-, w którym w oznacza liczbe 1, a R4 oznacza grupe o w z o rz e . . . . . PL PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe pochodne peptydowe, zawierające je kompozycje oraz ich zastosowanie do leczenia chorób będących skutkiem niedoboru hormonu wzrostu.
Hormon wzrostu jest hormonem stymulującym wzrost wszystkich tkanek zdolnych do wzrostu. Ponadto wiadomo jest, że hormon wzrostu wywiera wiele działań na procesy metaboliczne, na przykład stymuluje syntezę białek i mobilizuje wolne kwasy tłuszczowe oraz powoduje przestawienie metabolizmu energetycznego z węglowodanów na kwasy tłuszczowe. Niedobór hormonu wzrostu może powodować wiele ciężkich schorzeń, na przykład karłowatość.
Hormon wzrostu jest uwalniany przez przesadkę. Uwalnianie to jest pod ścisłą kontrolą bezpośrednią lub pośrednią wielu hormonów i neurotransmiterów. Uwalnianie hormonu wzrostu może być stymulowane przez hormon uwalniający hormon wzrostu (GHRH) i hamowane przez somatostatynę. W obu przypadkach hormony są uwalniane z podwzgórza, ale ich działanie jest wywierane za pośrednictwem specyficznych receptorów, umiejscowionych w przysadce. Opisano także inne związki, stymulujące uwalnianie hormonu wzrostu z przysadki. Na przykład arginina, L-3,4-dihydroksyfenyloalanina (L-dopa), glukagon, wazopresyna, PACAP (przysadkowy peptyd aktywujący cyklazę adenyłanową), agoniści receptorów muskarynowych i syntetyczny heksapeptyd, GHRP (peptyd uwalniający hormon wzrostu) uwalniający endogenny hormon wzrostu albo przez bezpośrednie oddziaływanie na przysadkę albo poprzez oddziaływanie na uwalnianie GHRH i/lub somatostatyny z podwzgórza.
Białkowa natura hormonu wzrostu sprawia, że w schorzeniach lub stanach, w których pożądane jest zwiększenie poziomów hormonu wzrostu jedyną możliwą drogą podawania jest droga pozajelitowa. Ponadto inne bezpośrednio działające środki pobudzające wydzielanie, na
181 280 przykład GHRH i PACAP, są dłuższymi polipeptydarni, i z tego powodu ich doustne podawanie nie jest możliwe.
Uprzednio proponowano także stosowanie krótszych peptydów do zwiększania poziomów hormonu wzrostu u ssaków (na przykład publikacje EP 18072, EP 83864, WO 89/07110, WO 89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711 i WO 93/04081.
Skład peptydów lub pochodnych peptydów uwalniających hormon wzrostu jest ważny ze względu na ich siłę działania uwalniającego hormon wzrostu, jak również ze względu na ich biodostępność. Celem wynalazku jest zatem dostarczenie peptydów posiadających właściwość uwalniania hormonu wzrostu, mających właściwości ulepszone w stosunku do znanych peptydów tego typu.
Przedmiotem wynalazku jest związek o wzorze ogólnym I
A-B-C-D-E (I) w którym;
A oznacza wodór,
B oznacza grupę (G)t-H, w której t oznacza liczbę 0 lub 1, G i H są resztami aminokwasów wybranymi z grupy obejmującej naturalne L-aminokwasy lub ich odpowiednie D-izomery Ala, Aib, His lub Phe, lub syntetyczne aminokwasy: kwas aminoizomasłowy, kwas 3-amino-3-metylobenzoesowy,
C oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH(CH2-R4)-CO-, w którym w oznacza liczbę 1, a R4 oznacza grupę o wzorze
D oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH((CH2)k-R5)-CO-, gdzie k oznacza liczbę 1;
R5 oznacza grupę o wzorze;
E oznacza -NH-CH(R10)-(CH2)v-R9, gdzie v oznacza liczbę 4 lub 8; R9 oznacza wodór, lub grupę N(Rn)-R12, gdzie każdy z podstawników R11 i R12 oznacza wodór,
R10 jest wybrany z grupy składającej się z -H, CH2-OH, -CO-R13, gdzie R13 oznacza grupę -OH lub -N(R14)-R15, gdzie każdy z podstawników R14 i R15 oznacza wodór;
oraz jego dopuszczalne farmaceutycznie sole.
Pochodne peptydowe, według wynalazku określone wzorem I, wykazująulepszonąodpomość na degradację proteolitycznąprzez enzymy, co w połączeniu z ich zmniejszoną wielkością zwiększa ich biodostępność w porównaniu z peptydami znanymi ze stanu techniki.
W związku o wzorze I, C, korzystnie oznacza D-2-naftyloalaninę (D-2Nal), D-l-naftyloalaninę (D-lNal), D korzystnie oznacza D-Phe, lub Phe-NH2.
E w związku o wzorze I, korzystnie oznacza Lys-NH2, NH-(2-amino-etyl), Lys-OH, NH-(l-hydroksy-6-amino-2S-heksyl).
Przykładami szczególnych związków są:
5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentyloamina,
H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2,
H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2.
(2S)-((3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-heksanol,
H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2,
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2,
H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2.
181 280
Skróty
D-2Nal: D-2-naftyloalanina
5apent = kwas 5-aminopentanowy
3pyal = 3-pirydyloalanina
Aib = kwas H-aminoizomasłowy
Tial = tienyloalanina hPhe = homofenyloalanina
N-Bzl-Gly = N-benzyloglicyna
4-F = 4-fluoro
4-Ome = 4-metoksy
Om = omityna
Dab = kwas 2,4-diaminomasłowy
Hyp = hydroksyprolina
Tic = kwas 1,2,3,4-tetrahydroizochinolino-3-karboksylowy
Związki o wzorze I mogą być otrzymane zwykłymi metodami syntezy peptydów w roztworze lub w fazie stałej. Na przykład synteza w fazie stałej może być prowadzona w sposób opisany przez Stewarta i Young'a w Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd Ed., Rockford, Illinois, USA, 1976. Synteza peptydu w fazie stałej może być prowadzona w sposób opisany przez Bodansk/ego i in. w Peptide Synthesis, 2nd, Ed., New York, New York, USA, 1976.
Grupa aminometylenowa jako podstawienie wiązania amidowego może być wprowadzona sposobem opisanym przez Y. Sasaki i D.H. Coy w Peptides 8(1), 1987, strony 119-121. Pochodne peptydowe zawierające mono- lub di-heksapiranozo-derywatyzowaną grupę aminową mogą być otrzymane na drodze przegrupowania A-madoriego, sposobem opisanym przez R. Albert i in. w Life Sciences 53,1993, strony 517-525. Przykładami odpowiednich mono- lub di-heksapiranoz są glukoza, maltoza, laktoza lub celobioza. Pochodne stosowane jako materiały wyjściowe w syntezie są dostępne w handlu i mogą w razie potrzeby być uzyskane z wprowadzonymi odpowiednimi grupami zabezpieczającymi.
Do dopuszczalnych farmaceutycznie kwasowych soli addycyjnych związków o wzorze I należą związki otrzymane przez reakcję peptydu z kwasami nieorganicznymi lub organicznymi, takimi jak kwas chlorowodorowy, bromowodorowy, siarkowy, octowy, fosforowy, mlekowy, maleinowy, ftalowy, cytiynowy, glutarowy, glukonowy, metanosulfonowy, salicylowy, bursztynowy, winowy, toluenosulfonowy, trifluorooctowy, sulfaminowy i fumarowy.
W następnym aspekcie przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna, zawierającajako składnik czynny związek o wzorze ogólnym I lub jego dopuszczalnąfarmaceutycznie sól oraz dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik.
Kompozycje farmaceutyczne zawierające związek według wynalazku mogą być otrzymane zwykłymi technikami, na przykład technikami opisanymi w Remington's Pharmaceutical Sciences, 1985. Kompozycje mogą mieć typowe postacie, takie jak na przykład kapsułki, tabletki, aerozole, roztwory, zawiesiny lub formy do stosowania miejscowego.
Nośnikiem lub rozcieńczalnikiem faramaceutycznym może być typowy nośnik stały lub ciekły. Do przykładów nośników stałych należą laktoza, terra albo (siarczan wapnia), sacharoza, cyklodekstryna, talk, żelatyna, agar, pektyna, guma akacjowa, stearynian magnezu, kwas stearynowy lub niższe etery alkilowe celulozy. Do przykładów nośników ciekłych należą syrop, olej z orzeszków ziemnych, oliwa z oliwek, fosfolipidy, kwasy tłuszczowe, aminy tłuszczowe, polioksyetylen i woda.
Podobnie nośnik lub rozcieńczalnik mogązawierać dowolny znany ze stanu techniki materiał o przedłużonym uwalnianiu, taki jak monostearynian glicerylu lub distearynianu glicerylu, sam lub zmieszany z woskiem.
Jeśli nośnik stały jest stosowany do podawania doustnego, to preparat może być tabletkowany, umieszczony w twardej kapsułce w formie proszku lub peletek lub może mieć formę pastylki. Ilość nośnika stałego może się zmieniać w szerokim zakresie, ale zwykle będzie wynosić od około 25 mg do około 1 g.
181 280
Typowa tabletka, która może być wykonana za pomocą typowych technik tabletkowania może zawierać:
Rdzeń
Związek czynny (jako wolny związek lub jego sól) 100 mg
Koloidalny ditlenek krzemu (Aerosil) 1,5 mg
Celuloza mikrokrystaliczna (Avicel) 70 mg
Modyfikowana guma celulozowa (Ac-Di-Sol) 7,5 mg
Stearynian magnezu
Powłoka
HPMC około 9 mg
♦Mywacett 9-40 T około 0,9 mg
♦Acylowany monogliceryd, stosowany jako plastyfikator do powłok błonowych
Jeśli stosuje się nośnik ciekły, to preparat może mieć formę syropu, emulsji, miękkiej kapsułki żelatynowej lub jałowej cieczy do iniekcji, takiej jak wodna lub niewodna ciekła zawiesina lub roztwór.
Do podawania donosowego preparat może zawierać związek o wzorze I rozpuszczony lub zawieszony w ciekłym nośniku, w szczególności w nośniku wodnym, do podawania w formie aerozolu. Nośnik może zawierać dodatki takie jak środki solubilizujące, na przykład glikol propylenowy, środki powierzchniowo czynne, takie jak sole kwasów żółciowych lub etery polioksy etylenowe wyższych alkoholi, środki zwiększające absorpcję, takie jak lecytyna (fosfatydylocholina) lub cyklodekstryna, lub środki konserwujące, takie jak parabeny.
Generalnie związki według wynalazku wydaj e się w formie jednostki dawkowania, zawierającej na dawkę 0,0001 -100 mg składnika czynnego oraz dopuszczalny farmaceutycznie nośnik.
Odpowiednia dawka związków według wynalazku przy podawaniu pacjentom, na przykład ludziom, jako leku wynosi 1-500 mg/dzień, na przykład 100 mg na dawkę.
Wykazano, że związki o wzorze ogólnym I posiadają zdolność uwalniania endogennego hormonu wzrostu in vivo. Związki mogą być zatem stosowane w leczeniu stanów, które wymagaj ązwiększonych poziomów hormonu wzrostu w osoczu, takich jak niedobór hormonu wzrostu u ludzi, pacjentów starszych lub zwierząt domowych.
Tak więc w szczególnym aspekcie wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej do stymulowania uwalniania hormonu wzrostu z przysadki, zawierającej jako składnik czynny związek o wzorze ogólnym I lub jego dopuszczalną farmaceutycznie sól, oraz dopuszczalny farmaceutycznie nośnik lub rozcieńczalnik.
Związki według wynalazku określone wzorem ogólnym I lub ich dopuszczalne farmaceutycznie sole przydatne są do stymulowania uwalniania hormonu wzrostu z przysadki.
Specjalistom jest dobrze wiadomo, że obecne i potencjalne zastosowania hormonu wzrostu u ludzki są różnorakie i liczne. Związki o wzorze I mogą być podawane w celu stymulowania uwalniania hormonu wzrostu z przysadki i będą miały wtedy podobny skutek jak zastosowanie hormonu wzrostu. Zastosowania hormonu wzrostu mogą być podsumowane jak następuje: stymulowanie uwalniania hormonu wzrostu u osób starszych; zapobieganie katabolicznym efektom ubocznym glukokortykoidów, leczenie osteoporozy, stymulowanie układu immunologicznego, przyspieszanie gojenia ran, przyspieszanie naprawy złamanych kości, leczenie opóźnień wzrostu, leczenie niewydolności nerek spowodowanej opóźnieniem wzrostu, leczenie fizjologicznego niskiego wzrostu, włączając dzieci z niedoborem hormonu wzrostu i niski wzrost spowodowany przewlekłą chorobą leczenie otyłości i opóźnienia wzrostu związanego z otyłością leczenie opóźnień wzrostu związanych z zespołem Prader-Willi'ego i zespołem Turnera; przyspieszanie zdrowienia i skracanie hospitalizacji pacjentów poparzonych, leczenie wewnątrzmacicznych
181 280 opóźnień wzrostu, dysplazji szkieletowej, leczenie nadmiernego wydzielania hormonów kory nadnercza i zespołu Cushinga, indukowanie pulsacyjnego uwalniania hormonu wzrostu, zastępowanie hormonu wzrostu u pacjentów ze stresem, leczenie osteochondrodysplazji, zespołu Noonana, schizofrenii, depresji, choroby Alzheimera, opóźnień gojenia ran i deprywacji psychosocjalnej, leczenie dysfunkcji płuc i zależności wentylacyjnej, tłumienie katabolicznych odpowiedzi białkowych po poważnych operacjach chirurgicznych, zmniejszanie wyniszczenia i utraty białka po przewlekłej chorobie, takiej jak rak lub AIDS, leczenie hiperinsulinemii, w tym przerostu wysp trzustki, leczenie towarzyszące w indukowaniu owulacji, stymulowanie rozwoju grasicy i zapobieganie związanego z wiekiem zaniku funkcji grasicy, leczenie pacjentów z obniżoną odpornością immunologiczną, poprawa siły mięśni, ruchliwości, utrzymanie grubości skóry, homeostazy metabolicznej, homeostazy nerkowej u pacjentów starszych, stymulowanie osteoblastów, remodelowanie kości i wzrostu chrząstki, stymulowanie układu immunologicznego u zwierząt do towarzystwa i leczenie zaburzeń starzenia u zwierząt do towarzystwa, promowanie wzrostu u zwierząt domowych i stymulowanie wzrostu wełny u owiec.
Dla powyższych wskazań dawka będzie zależeć od zastosowanego związku o wzorze I, sposobu podawania i potrzebnej terapii. Jednakże generalnie pacjentom i zwierzętom w celu uzyskania efektywnego uwalniania endogennego hormonu wzrostu podawane będą dawki między 0,0001 a 100 mg/kg. Zwykle formy dawkowania odpowiednie do podawania doustnego lub donosowego zawierają od około 0,0001 mg do około 100 mg, korzystnie od około 0,001 mg do około 50 mg związku o wzorze I, zmieszanego z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub rozcieńczalnikiem.
Związki o wzorze I mogąbyć podawane w postaci dopuszczalnej farmaceutycznie kwasowej soli addycyjnej lub soli z metalem alkalicznym, metalem ziem alkalicznych lub niższej soli alkiloamoniowej. Uważa się, że takie formy soli charakteryzuje taki sam poziom czynności jak formy wolnych zasad.
Kompozycja farmaceutyczna według wynalazku może zawierać związek o wzorze I, dodatkowo połączony z jednym lub większą ilością związków wykazujących różnorodną czynność, na przykład antybiotyków lub innego czynnego farmakologicznie materiału. Może to być inny środek pobudzający wydzielanie, taki jak GHRP (1 lub 6) lub GHRH lub jego analogi, hormon wzrostu lub jego analogi lub somatomedyny, takie jak IGF-1 lub IGF-2.
Droga podawania może być dowolną drogą, która efektywnie transportuj e związek czynny do odpowiedniego lub żądanego miejsca działania, takąjak droga doustna, donosowa lub pozajelitowa, przy czym preferowaną drogą jest droga doustna.
Związki o wzorze I poza zastosowaniem farmaceutycznym mogą mieć zastosowanie jako narzędzia do badań in vitro nad regulacją uwalniania hormonu wzrostu.
Związki o wzorze I mogąbyć także użyteczne jako narzędzia do badań in vivo na zdolnością przysadki do uwalniania hormonu wzrostu. Na przykład można badać poziom hormonu wzrostu w próbkach osocza krwi pobranych przed i po podaniu tych związków ludziom. Porównanie poziomu hormonu wzrostu w każdej z próbek osocza pozwoliłoby na bezpośrednie oznaczenie zdolności przysadki pacjenta do uwalniania hormonu wzrostu.
Związki o wzorze I mogą być podawane ważnym gospodarczo zwierzętom w celu zwiększenia szybkości i wielkości ich wzrostu oraz w celu zwiększenia produkcji mleka.
Metody farmakologiczne
Związki o wzorze I mogą być badane in vitro pod względem ich skuteczności i siły działania uwalniania hormonu wzrostu w pierwotnych somatotropach szczurzych.
Pierwotne somatotropy szczurze mogą być otrzymane w sposób opisany uprzednio (Chen i in., Endocrinology 1991, 129, 3337-3342 i Chen i in., Endocrinology 1989, 124, 2791-2798). W skrócie metodyka doświadczenia jest następująca. Szczury zabija się przez dekapitację. Szybko usuwa się przysadkę. Przysadki trawi się 0,2% kolagenaząi 0,2% hialuronidazą w zbilansowanym roztworze soli Hanksa. Komórki zawiesza się w pożywce Eagle'a zmodyfikowanej przez Dulbecco, zawierającej 0,37% NaHCO3, 10% surowicy końskiej, 2,5% cielęcej surowicy płodowej, 1 % nietypowych aminokwasów, 1% glutaminy i l%penicyli
181 280 ny/streptomycyny i ustawia się stężenie 1,5 χ 105 komórek/ml. Jeden ml tej zawiesiny umieszcza się każdym dołku 24-dołkowych tac i pozostawia na 2-3 dni przed przeprowadzeniem eksperymentów z uwalnianiem.
Pierwszego dnia eksperymentu komórki przemywa się dwukrotnie powyższąpożywkązawierającą25 mM HEPES, pH 7,4. Uwalnianie hormonu wzrostu inicjuje się przez dodanie pożywki, zawierającej 25 mM HEPES i związek badany. Inkubację prowadzi się przez 15 minut w 37°C. Po inkubacji hormon wzrostu uwolniony do pożywki mierzy się za pomocą standardowego testu RIA.
Działanie związków o wzorze I in vivo na uwalnianie hormonu wzrostu u szczurów uśpionych pentobarbitalem może być badane w sposób opisany uprzednio (Bercu i in., Endocrinology 1991,129,2592-2598). W skrócie metodyka doświadczeń jest następująca. Dorosłe szczury płci męskiej usypia się pentobarbitalem w dawce 50 mg/kg ip. Po uzyskaniu pełnego znieczulenia szczurom implantuje się kaniulę dotchawiczną oraz katetery do tętnicy szyjnej i żyły jarzmowej. Po 15 minutach od wyjścia z narkozy pobiera się próbkę krwi w czasie 0. Dożylnie podaje się substancje pobudzające uwalnianie, próbki krwi tętniczej umieszcza się w lodzie na 15 minut, po czym wiruje przez 2 minuty przy 12000 x g. Osocze dekantuje się i oznacza ilość hormonu wzrostu, stosując standardowy test RIA.
Poniższe przykłady przedstawiaj ąpochodne peptydowe według wynalazku oraz inne o podobnej budowie.
W całym opisie stosowane są następujące skróty:
Skróty dla reszt nietypowych aminokwasów:
Phe(4OMe)
Phe(4-NH2) Phe(4-F)
181 280
Skróty stosowane dla podstawników wiązania peptydowego:
T(CH2NH)
T(CH2NMe) CH2 / XN
I ch3
Skróty stosowane dla grup zabezpieczających:
181 280
Związki otrzymane w poniższych przykładach wyizolowano w postaci soli z kwasem trifluorooctowym (TFA).
Przykład 1
H-Ala-His-D-2N al-D-Trp-Ly s-NH2
Tytułowy peptyd zsyntetyzowano zgodnie ze strategią Fmoc na syntetyzerze peptydów Applied Biosystems 431A w skali 0,21 mmoli, stosując dostarczane przez producenta protokoły FastMoc UV, w których stosuje się sprzęganie za pośrednictwem HBTU (heksafluorofosforan 2-(lH-benzotriazol-l-ilo)-l,l,3,3-tetrametylouroniowy) wNMP (N-metylopirolidonie) i monitorowanie odbezpieczania grup zabezpieczających Fmoc za pomocą UV. Wyjściową żywicą użytą do syntezy było 559 mg żywicy 4-(2',4'-dimetoksyfenylo-Fmoc-aminometylo)-fenoksylowej (Novabiochem, Bad Soden, Niemcy, nr katalogowy 01-64-0013), mającej stopień podstawienia 0,39 mmole/g. Użytymi zabezpieczonymi pochodnymi aminokwasów były Fmoc-Lys-(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp-OH, Fmoc-His(Trt) i Fmoc-Ala-OH.
Peptyd odszczepiono od 434 mg peptydo-żywicy mieszając przez 180 minut w temperaturze pokojowej z mieszaniną4 ml TFA (kwas trifluorooctowy), 300 mg fenolu, 100 pl etanoditiolu, 200 μΐ tioanizolu i 200 μΐ H2O. Mieszaninę odszczepiającąodsączono i zatężono przesącz do 1 ml w strumieniu azotu. Surowy peptyd wytrącono z tego oleju za pomocą 45 ml eteru dietylowego i przemyto 3 razy 50 ml eteru dietylowego.
Surowy peptyd wysuszono i oczyszczono za pomocą półpreparatywnej HPLC na kolumnie 25 mm x 250 mm załadowanej krzemionką C-18 7 pm. Kolumnę równowagowano 15% CH3CN w0,05M (NH4)2SO4, który ustawiono napH 2,5 zapomocą4MH2SO4. Surowy peptyd rozpuszczono w 2 ml 70% CH3CN/0,l% TFA w H2O i rozcieńczono do 100 ml H2O. Roztwór ten podzielono na dwie równe części i obie z nich oddzielnie wstrzyknięto na kolumnę. Kolumnę eluowano gradientem 15%-25% CH3CN w 0,05M (NH4)2SO4, pH 2,5 przy prędkości przepływu 10 ml/minprzez 47 minut w40°C. Frakcje zawierające peptyd zebrano, rozcieńczono 3 objętościami H2O i naniesiono na wkład Sep-Pak® Cl 8 (Waters nr 51910), równo wagowany 0,1% TFA. Peptyd eluowano z Sep-Pak® 70% CH3CN zawierającym 0,1% TFA i wyizolowano oczyszczony peptyd przez liofilizację po rozcieńczeniu eluatu wodą. Wydajność produktu wyniosła 19,0 mg.
Otrzymany końcowy produkt scharakteryzowano poprzez analitycznąRP-HPLC (czas retencji) i przez spektrometrię masową metodą desorpcji plazmą (masa cząsteczkowa). Spektrometria masowa zgadzała się z oczekiwaną strukturą w granicach błędu eksperymentalnego metody (spektrometria masowa ± 0,9 amu).
Analizę RP-HPLC przeprowadzono stosując detekcję UV przy 214 nm i kolumnę Vydac 218TP54 4,6 mm x 250 mm wypełnioną krzemionką C-l 8 5 pm (The Separations Group, Hesperia, USA), którąeluowano z prędkością 1 ml/minutę w42°C. Zastosowano dwa różne warunki elucji.
Al: Równowagowanie kolumny 5% CH3CN w buforze składającym się z 0,lM (NH4)2SO4, ustawionym na pH 2,5 za pomocą4M H2SO4, i elucja gradientem 5% do 60% CH3CN w tym samym buforze podczas 50 minut.
181 280
BI: Równo wago wanie kolumny 5% CH3CN/0,l% TFA/H2O i elucja gradientem 5% CH3CN/0,l% TFA/H2O do 60% CH3CN/0,l% TFA/H2O przez 50 minut.
Czas retencji w warunkach Al i BI wyniósł odpowiednio 17,88 minut i 20,15 minut.
Przykład 2
H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH
Tytułowy peptyd zsyntetyzowano stosując procedurę podobną jak w przykładzie 1, poza tym, że jako żywicy wyjściowej użyto 450 mg żywicy Fmoc-Lys(Boc)Wang (Novabiochem, Bad Soden, Niemcy, nr kat. 04-12-2014) o zdolności podstawienia 0,49 mmoli/g. Po odszczepieniu 560 mg peptydo-żywicy i oczyszczeniu 1/2 uzyskanego surowego produktu w sposób opisany w przykładzie 1 uzyskano wydajność 25,9 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czas retencji w warunkach Al i BI wyniósł odpowiednio 18,30 minut i 20,15 minut.
Przykład 3
5-(H-ALa-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentyloamina
Peptydo-żywicę H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin zsyntetyzowano stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1, poza tym, że użyto 262 mg żywicy Sasrin (2-metoksy-4-alkoksybenzyloalkoholowej) (Bachem, Bubendorf, Szwajcaria, nr kat. D-1295) o zdolności podstawienia 0,96 mmoli/g, a do sprzęgania pierwszej reszty aminokwasu do żywicy zastosowano protokół, polegający na katalizowanym 4-dimetyloaminopirydyną sprzęganiu uprzednio utworzonego symetrycznego bezwodnika, a następnie blokowaniu resztkowych grup OH na żywicy bezwodnikiem benzoesowym.
Częściowo zabezpieczony peptyd 5-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH) pentyloamina odszczepiono od 56 mg żywicy 5-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin przez mieszanie przez 20 godzin w temperaturze pokojowej z 0,5 ml 1,5-diaminopentanu. Pozostałą żywicę odsączono i ekstrahowano 1 ml DMF. Połączone przesącz i ekstrakt dodano mieszając do mieszaniny 2,5 ml CH3CN i 10 ml IM kwasu chlorowodorowego, rozcieńczono do 50 ml 25% CH3CN i pozostawiono w 4°C na 100 godzin (w celu odszczepienia zabezpieczenia tritylowego na histydynie). Następnie mieszaninę rozcieńczono do 200 ml H2O i odsączono.
Surowy peptyd oczyszczono przez półpreparatywnąHPLC, wstrzykując bezpośrednio na kolumnę 1/2 tego przesączu, przy użyciu procedury podobnej do procedury opisanej w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 4,5 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czas retencji w warunkach Al i BI wyniósł odpowiednio 18,43 minuty i 20,75 minuty.
Przykład 4 (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminoheksanol
Peptydo-żywicę H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin zsyntetyzowano stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 3 z żywicy Sasrin o zdolności podstawienia 0,96 mmoli/g.
Częściowo zabezpieczony peptyd (2S)-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminoheksanol odszczepiono od 200 mg żywicy (H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin przez mieszanie peptydo-żywicy przez 20 godzin w temperaturze pokojowej z mieszaniną 1,2 ml THF (tetrahydrofuran), 0,2 ml etanolu, 23 mg LiBr i 10 mg NaBH4. Następnie dodano 200 μΐ H20,200 μΐ kwasu octowego i 4 ml etanolu. Perełki żywicy odsączono, aprzesącz rozcieńczono 50 ml H,0 i liofilizowano. Uzyskany proszek poddano rozszczepieniu TFA i oczyszczaniu w sposób opisany w przykładzie 1. Oczyszczanie musiało być powtórzone w celu uzyskania produktu o wystarczającej czystości. Uzyskano wydajność 5,8 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czas retencji w warunkach Al i BI wyniósł odpowiednio 17,82 minuty i 20,02 minuty.
Przykład 5
H-ALa-HisT (CH2NH) D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 1, wychodząc z 556 mg żywicy 4-((2',4'-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-ami12 no)metylo)fenoksy-żywica (Novabiochem AG, Szwajcaria, nr kat.. 01-64-0013) o zdolności podstawienia 0,34 mmoli/g. Użyto następujących zabezpieczonych pochodnych aminokwasów:
Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-OH i Fmoc-2Nal-OH.
Izoster wiązania peptydowego -CH2NH- wprowadzono według Sasaki Y. i Coy D.H., Peptides 8(1), 119-121 (1987). ’
Fmoc-His(Trt)-aldehyd otrzymano z 820 mg odpowiadającego N,O-dimetylohydroksamianu według Fehrentz J.-A. i Castro B., Synthesis 676-678, 1983. Surowy aldehyd rozpuszczono w 8 ml DMF i podzielono na dwie porcje. Porcję pierwszą dodano do mieszanej zawiesiny 610 mg H-D-2Nal-D-Phe-Lys-żywica w 10 ml 1 % kwasu octowego w DMF w temperaturze pokojowej. Następnie dodano 57 mgNaCNBH3 (czystość 85%) rozpuszczonego w 1 ml DMF i kontynuowano mieszanie przez 60 minut. Następnie żywicę wyizolowano przez odsączenie i przemyto 1 % kwasem octowym w DMF. Peptydo-żywicę ponownie zawieszono w 10 ml 1 % kwasu octowego w DMF i dodano drugąporcję Fmoc-His(Trt)-aldehydu. Ponownie dodano w temperaturze pokojowej 57 mg NaCNBH3 (czystość 85%) rozpuszczone w 1 ml DMF i mieszano mieszaninę przez 18 godzin.
Po tym etapie redukcyjnego alkilowania żywicę peptydową wyizolowano i przemyto 1% kwasem octowym w DMF i zakończono wydłużanie łańcucha przy użyciu syntetyzera peptydów zgodnie z wyżej opisanymi procedurami, stosując zabezpieczoną pochodną aminokwasu Fmoc-Ala-OH.
Peptyd odszczepiono od 550 mg peptydo-żywicy i surowy produkt oczyszczono przez półpreparatywną HPLC, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Uzyskano wydajność 11,3 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czasy retencji w warunkach Al i BI wyniosły odpowiednio 13,35 minuty i 17,38 minuty.
Przykład 6 (n-propylo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 i (n-propylo)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 1, wychodząc z żywicy 4-((2',4'-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-amino)metylo)fenoksy-ży wica (Novabiochem AG, Szwajcaria, nr kat. 01 -64-0013) o zdolności podstawienia 0,34 mmoli/g. Użyto następujących zabezpieczonych pochodnych aminokwasów:
Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-2Nal-OH i Fmoc-His(Trt)-OH.
Domieszanej zawiesiny 150mgH-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-żywicaw3,3 ml ^kwasu octowego w DMF w temperaturze pokojowej dodano 13 μΐ n-propanalu. Następnie dodano 16,8 mg NaCNBH3 (czystość 85%) rozpuszczonego w 0,5 ml DMF i kontynuowano mieszanie przez 6 godzin. Po tym etapie redukcyjnego alkilowania żywicę peptydowąwyizolowano i przemyto na lejku DMF i CH2C12 i wysuszono pod próżnią.
Dwie uzyskane peptydo-żywice zmieszano i mieszaninę niealkilowanego, monoalkilowanego i dialkilowanego peptydu odszczepiono od uzyskanych 300 mg peptydo-żywicy. Peptydy rozdzielono i oczyszczono przez półpreparatywną HPLC, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Uzyskano wydajność 6,54 mg (n-propylo)-His-D-2Nal-D-PheLys-NH2 i 5,59 mg (n-propylo)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Dla (n-propylo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 w warunkach Al i BI czasy retencji wynosiły odpowiednio 16,45 minuty i 19,92 minuty.
Przykład 7
H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Wychodząc z 620 mg żywicy 4-metyloBHA (BissendorfBiochemicals, Hanower, Niemcy, nr kat. RMIS50) mającej zdolność podstawienia 0,72 mmoli/g zsyntetyzowano peptyd zgodnie ze strategią Boc na syntetyzerze Applied Biosystems 430A, stosując dostarczane przez producenta protokoły pojedynczego sprzęgania w skali 0,5 mmola, polegające na pojedynczych sprzęganiach z uprzednio utworzonymi symetrycznymi bezwodnikami w DMF. Protokoły ustawiano na czasy sprzęgania 60 minut. Dla N-końcowej Ala zastosowano podwójne sprzęganie z czasem
181 280 sprzęgania 2 χ 60 minut. Do reakcji użyto zabezpieczonych pochodnych aminokwasów BocLys(2-chloro-Z)-OH, Boc-D-Phe-OH, Boc-D-2Nal-OH, Boc-Tic-OH i Boc-Ala-OH.
Peptyd odszczepiono od 486 mg peptydo-żywicy przez mieszanie przez 75 minut w 0°C z mieszaniną 4,5 ml HF i 500 μΐ m-krezolu. HF odparowano w 0°C w strumieniu azotu. Peptyd wytrącono z pozostałego oleju razem z pozostałą żywicą z 50 ml eteru dietylowego i przemyto 2 razy z 50 ml eteru dietylowego. Po wysuszeniu peptydu ekstrahowano precypitat 10 ml H2O zawierającymi 4 krople kwasu octowego. Ekstrakt rozcieńczono do 100 ml H2O. ' .
Surowy peptyd oczyszczono z 2 x 18 ml oczyszczonego ekstraktu przez dwukrotną półpreparatywną HPLC, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 17,3 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 27,37 minuty i 29,50 minuty.
Przykład 8 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-fenylopropyloamina
Grupę Fmoc usunięto przez działanie 20% piperydyną w NMP przez 20 minut z 580 mg żywicy 4-((2',4'-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-amino)metylo)fenoksy-żywica (Novabiochem AG, Szwajcaria, nr kat. 01 -64-0013), mającej zdolność podstawienia 0,43 mmoli/g). Żywicę przemyto DMF i NH2C12 i alkilowano Fmoc-D-Phe-aldehydem, stosując procedurę alkilowania redukcyjnego opisaną w przykładzie 5.
Następnie peptydo-żywicę odsączono i przemyto 1% kwasem octowym w DMF na lejku i dokończono wydłużanie łańcucha, stosując syntetyzer peptydów opisany w przykładzie 1 i stosując zabezpieczone pochodne aminokwasów Fmoc-D-2Nal-OH, Fmoc-His(Trt)-OH i Fmoc-Ala-OH.
Peptyd odszczepiono z 301 mg peptydo-żywicy i surowy peptyd oczyszczono przez półpreparatywną HPLC, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 23,92 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czasy retencji w warunkach elucji Al i BI wynosiły odpowiednio 19,33 minuty i 21,77 minuty.
Przykłady 9-54
Przykład Peptyd Otrzymany przy użyciu procedury jak w przyk. nr Czas retencji RP-HPLC
warunki Al (przy. 1) warunki B1 (patrz. 1)
1 2 3 4 5
9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 1 12,53 15,43
10 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 28,13 29,62
11 H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,02 20,15
12 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 1 28,48 29,48
13 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 1 26,65 27,75
14 H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys-NH2 1 21,85 23,12
15 (3-(4-imidazolilo)propionylo)-D-2Na- -1-D-Phe-Lys-NH2 1 20,7
16 (propionylo)-His-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 1 22,2 23,77
17 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 1 21,7 23,08
18 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)heksan 3 34,11 35,78
19 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 1 14,52 16,7
181 280 dalszy ciąg przykładów
1 2 3 4 5
20 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 21,97 23,23
21 ((propionylo)-His-D-2Nal-D-P- -he-NH)heksan 3 37,17 39,47
22 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)heksyloamina 3 19,3 21,57
23 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 15,88 18,25
24 (5-aminopentanoilo)-His-D-2Nal-D- -Phe-Lys-NBĘ 1 17,8 19,98
25 H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,07 19,62
26 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tic-Lys-NH2 1 19,12 20,78
27 H-D-Lys-Phe-2Nal-D-His-D-Ala-NH2 1 18,15 20,48
28 (5-aminopentanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, 1 20,67 22,45
29 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,57 21,53
30 (propionylo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 26,7 27,92
31 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,83 20,3
32 H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,15 20,18
33 (n-butylo)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 6 19,55 -
34 (n-oktylo)-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 6 27,88 24,52
35 H-Ala-His-D-2Nal-D-P- -he^(CH2NH)-Lys-NH2 5 17,97 20,83
36 (3-ammometylobenzoilo)-D-2Nal-D-P- -he-Lys-NH2 1 22,42 24,13
37 (3-aminofenyloacetylo)-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 1 23,62 23,97
38 ((4-imidazolilo)acetylo)-D-2Nal-D-P- -he-Lys-NH2 1 20,42 22,22
39 (3-(4-imidazolilo)akryloilo)-D-2Na- -1-D-Phe-Lys-NH2 1 21,25 23,32
40 (4-aminofenyloacetylo)-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 1 22,45 -
41 (trans-4-aminometylocykloheksanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,07 23,67
42 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etyloamina 3 18,6 20,25
43 (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etylo-benzen 3 30,18 32,18
44 4-((H-Ala-His-D-2NaI-D-Phe-NH)metylo)benzyloamina 3 19,63 21,55
45 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-fenylo)propyloamina 3 21,55 23,57
46 2-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)etyloamina 3 25,52 -
181 280 dalszy ciąg przykładów
1 2 3 4 5
47 H-D-Phe-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 27,82 29,43
48 H-Ala-D-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 25,62 27,22
49 H-Ala-(2-ammobenzoilo)-D-2Nal-D-P-he-Lys-NH2 7 26,42 24,93
50 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,42 20,13
51 H-Ala-His-D- lNal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,55 19,8
52 H-Tyr-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,9 21,22
53 (pipery dyno-4-karbonylo)-D-2Nal-D-P- -he-Lys-NH2 1 20,4 22,32
54 H-Ala-Phe(4-NH2)- D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 1 19,20 -
Przykład 55 ((Propionylo)-D-2Nal-D-Phe-NH)heksan
Peptydo-żywicę (propionylo)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 3, z żywicy Sasrin o zdolności podstawienia 0,96 mmoli/g.
105 mg uzyskanej peptydo-żywicy poddano amonolizie.
Peptyd (propionylo)-D-2Nal-D-Phe-NH)heksan odszczepiono od 105 mg propionylo-D-2Nal-D-Phe-Sasrin-żywicy przez mieszanie przez 20 godzin w temperaturze pokojowej z 1 ml n-heksyloaminy. Pozostałą żywicę odsączono i ekstrahowano 1 ml DMF. Połączone przesącz i ekstrakt dodano powoli, mieszając, do 8 ml IM kwasu chlorowodorowego. Uzyskany osad rozpuszczono ponownie przez dodanie około 70 ml CH3CN i ponownie wytrącono przez dodanie 20 ml H2O. Osad odsączono, przemyto H2O i wysuszono. Wydajność wyniosła 12 mg.
Produkt scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1, poza tym, że przeprowadzono tylko analizę HPLC w warunkach podobnych do BI, ale z gradientem 0,1% TFA/H2O do 90% TFA/H2O w ciągu 50 minut. Czas retencji wyniósł 35,73 minut.
Przykład 56 (3-Metyloaminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę (3-metyloaminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 7, z żywicy MBHA o zdolności podstawienia 0,72 mmoli/g.
Uzyskany peptyd metylowano według Kaljuste, K. i Unden, A., Int. J. Peptide Protein Res., 42, 118-124, 1993. 300 mg żywicy mieszano przez2 godziny z mieszaniną 8 ml DCM, 150 pl DIEA (dietyloizopropyloamina) i 39 mg chlorku 4,4'-dimetoksyditylu (DOD-C1), po czym odsączono i przemyto DCM i DMF. Peptydo-żywicę zabezpieczonąDOD mieszano następnie z 18 ml 3,7% roztworu formaldehydu w DMF, 0,18 ml kwasu octowego i dodano 180 mg NaCNBH3, po czym kontynuowano mieszanie przez 18 godzin. Żywicę odsączono i przemyto DMF i DCM. Usunięto zabezpieczenie DOD działając 2 x 3 ml DCM/TFA 1:1 odpowiednio przez 5 minut i 30 minut, przemyto peptydo-żywicę DCM i wysuszono pod próżnią.
Uzyskany N-metylowany peptyd odszczepiono od 370 mg uzyskanej żywicy, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 7 oraz oczyszczono i scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1.Wydajność wyniosła 17,3 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 22,83 minuty i 24,60 minuty.
181 280
Przykład 57 (3-Dimetyloaminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA-żywicazsyntetyzowano stosując procedurę podobną jak w przykładzie 7, z żywicy MB HA o zdolności podstawienia 0,72 mmoli/g.
650 mg uzyskanej peptydo-żywicy mieszano następnie z 20 ml kwasu octowego w DMF i 45 pl 3,7% roztworu formaldehydu w DMF. Następnie dodano 5 mg NaCNBH3 (85%), po czym kontynuowano mieszanie przez 18 godzin. Żywicę odsączono i przemyto DMF, DCM/MeOH 6:4 i DCM.
Uzyskaną mieszaninę Ν,Ν-dimetylowanych peptydów odszczepiono od 631 mg uzyskanej żywicy, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 7, oraz oczyszczono i scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 8,58 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 31,58 minut i 33,00 minut.
Przykład 58 (3-Amino-3-metylobutanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)-Rink-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 1, z 2 g żywicy 4-((2',4'-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-amino)metylo)fenoksy-żywica (Novabiochem AG, Szwajcaria, nr kat. 01-64-0013) o zdolności podstawienia 0,39 mmoli/g.
500 mg uzyskanej peptydo-żywicy zawieszono następnie z 4 ml DCM/MeOH 1:1. Dodano 42 pl Metyloaminy (0,3 mmoli), ochłodzono do 0°C i dodano mieszając 31 mg (0,158 mmoli) chlorku 2,2-dimetylo-4-okso-azetydyno-l-sulfonylu. Kontynuowano mieszanie przez 20 minut w 0°C i 90 minut w temperaturze pokojowej. Żywicę przemyto DCM/MeOH 6:4 i wysuszono pod próżnią, po czym surowy peptyd odszczepiono od uzyskanej żywicy i oczyszczono, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 41,81 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 21,35 minut i 22,95 minut.
Przykład 59 (2S)-((3-Aminometylobenzoilo)W(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminoheksanol
Peptydo-żywicę H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)-Sasrin-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 3, z 980 mg żywicy Sasrin o zdolności podstawienia 0,87 mmoli/g.
1,4 g tej żywicy reduktywnie alkilowano Boc-3-amino-metylobenzaldehydem, po czym odszczepiono peptyd od 1,0 g uzyskanej żywicy, a połowę surowego produktu oczyszczono, stosując procedury podobne do procedur opisanych w przykładzie 5. Wydajność wyniosła 18,46 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 14,78 minut i 17,40 minut.
Przykład 60 (2-Aminometyłobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)-Rink-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 1, z 2 g żywicy 4-((2',4/-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-amino)metylo)fenoksy-żywica (Novabiochem AG, Szwajcaria, nr kat. 01-64-0013) o zdolności podstawienia 0,39 mmoli/g.
300 mg uzyskanej peptydo-żywicy (0,096 mmoli) mieszano następnie 18 godzin z 54 mg kwasu ftaloilo-2-aminometylobenzoesowego (0,192 mmole), 182 mg FIBTU (0,480 mmoli) i 164plDIEA (0,96 mmoli).
Przemyto żywicę DMF, DCM/MeOH 6:4 i DCM oraz wysuszono pod próżnią. (Ftaloilo-2-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 odszczepiono od 290 mg peptydo-żywicy przez mieszanie przez 180 minut w temperaturze pokojowej z mieszaniną3 ml TFA, 225 mg fenolu, 75 pl etanoditiołu, 150 pl tioanizolu i 150 pl H2O. Mieszaninę odszczepiającąodsączono,
181 280 pozostałą żywicę przemyto 1 ml TFA, a przesącz zatężono do około 1 ml w strumieniu azotu. Surowy peptyd strącono z tego oleju 50 ml eteru dietylowego i przemyto 3 razy 50 ml eteru dietylowego. Precypitat rozpuszczono następnie w 50 ml H2O i liofilizowano. Uzyskany proszek mieszano następnie z 0,5 ml wodzianu hydrazyny w 5 ml etanolu przez 6 godzin w 70 C, rozcieńczono w 50 ml H2O i liofilizowano.
Liofilizowany produkt rozpuszczono przez dodanie 2 ml kwasu octowego, 2 ml etanolu i 100 ml H2O oraz oczyszczono, stosując procedury podobne do procedur opisanych w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 9,43 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 23,2 minuty i 25,05 minuty.
Przykład 61
H-Aib-HisT(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-OH
Peptyd zsyntetyzowano stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 5, poza tym, że użyto 1050 mg żywicy Sasrin (2-metoksy-4-alkoksybenzyloalkohol)żywica) (Bachem, Bubendorf, Szwajcaria, nr kat. D-1295) o zdolność podstawienia 0,87 mmoli/g, a do sprzęgania pierwszej reszty aminokwasu do żywicy zastosowano protokół, polegający na katalizowanym 4-dimetyloaminopirydyną sprzęganiu uprzednio utworzonego symetrycznego bezwodnika, a następnie blokowaniu resztkowych grup OH na żywicy bezwodnikiem benzoesowym. Po odszczepieniu 752 mg peptydo-żywicy i oczyszczeniu 7/10 uzyskanego surowego produktu w sposób opisany w przykładzie 1 uzyskano wydajność 36,76 mg.
Produkt końcowy scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 1. Czasy retencji w warunkach Al i BI wyniosły odpowiednio 13,90 minut i 17,42 minut.
Przykład 62
H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 56, z żywicy MBHA o zdolności podstawienia 0,72 mmoli/g.
458 mg tej żywicy użyto następnie do syntezy H-Aib-His(Bom)N-Me-D-2Nal-D-PheLys(Cl-Z)-MBHA przez sprzęganie z Boc-His(Bom)-OH i Boc-Aib-OH. N-metylowany peptyd odszczepiono następnie z 469 mg uzyskanej żywicy i 1/2 surowego peptydu oczyszczono i scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 7. Wydajność wyniosła 23,5 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 17,62 minut i 19,95 minut.
Przykład 63 (Furfńrylo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę H-Aib-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)-Rink-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobnąjak w przykładzie 1, z żywicy 4-((2',4'-dimetoksyfenylo)-(Fmoc-amino)metylo)fenoksy-żywica (Novabiochem, Bad Soden, Niemcy, nr kat. 01-64-0013) o zdolności podstawienia 0,43 mmoli/g.
300 mg uzyskanej peptydo-żywicy mieszono następnie z 5 ml 1% kwasu octowego i 410 μΐ furano-2-aldehydu. Po 15 minutach i po 180 minutach dodano 231 mg NaCNBH3 (85%). Kontynuowano mieszanie przez 18 godzin. Żywicę odsączono i przemyto DMF, DCM/MeOH 6:4 i DCM.
N-alkilowany peptyd odszczepiono od 319 mg uzyskanej żywicy, oczyszczono i scharakteryzowano, stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 1. Wydajność wyniosła 44,8 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 19,45 minuty i 22,23 minuty.
Przykład 64
N,N-di(2R-hydroksypropylo)-3-aminometylobenzoilo)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
Peptydo-żywicę (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA-żywica zsyntetyzowano stosując procedurę podobną do procedury opisanej w przykładzie 7 z żywicy
181 280
4-metylo-benzhydryloaminowej (MBHA) (Bissendorf Biochemicals, Hanower, Niemcy, nr kat. RMIS50), mającej zdolność podstawienia 0,72 mmoli/g.
500 mg uzyskanej peptydo-żywicy mieszano następnie z 12,5 ml 1% kwasu octowego w DMF i 410 μΐ 2(R)-(tetrahydropiran-2(R,S)-yloksy)propanalu. Po 5 minutach dodano 213 mg NaCNBH3 (85%). Kontynowano mieszanie przez 18 godzin. Żywicę odsączono i przemyto DMF, DCM/MeOH 6:4 i DCM.
N,N-dialkilowany peptyd odszczepiono od 490 mg uzyskanej żywicy, oczyszczono i scharakteryzowano w sposób opisany w przykładzie 7. Wydajność wyniosła 20,72 mg.
Analiza RP-HPLC w warunkach Al i BI dała czasy retencji odpowiednio 23,40 minuty i 25,33 minuty.
Przykłady 65-110
Przykłady Peptyd Otrzymany przy użyciu procedury jak w przyk. nr Czas retencji RP-HPLC
warunki Al (przy. 1) warunki B1 (patrz. 1)
1 2 3 4 5
65 H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 24,47 26,27
66 (4-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 22,22 23,5
67 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 19,90 21,45
68 (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-1,6-diaminoheksan 8 17,05 19,07
69 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-butyloamina 3 18,65 20,08
70 3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-propyloamina 3 18,42 19,80
71 (3-aminometylobenzoilo)-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 7 20,33 21,95
72 (3-aminometylobenzoiIoFT(CH2NH)-D-2Na- -1-D-Phe-Lys-NH2 5 14,17 17,23
73 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-hPhe- -Lys-NH2 7 25,30 26,58
74 (3-amino-3-metylobutanoilo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH? 58 18,12 20,20
75 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-N-Bzl-Gly-Lys-NH, 7 25,33 26,70
76 (2S)-((3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-P- -he-NH)-6-aminoheksanol 4 22,95 24,32
77 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-TiaI-Lys-NH2 7 22,13 23,23
78 (2S)-H-Aib-HisT(CH2NH)-D-2Nal-D-P- -łie-NH)-6-aminoheksanol 59 12,83 17,27
79 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-3Pyal- -Lys-NH2 1 15,10 16,87
80 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-P- -he-(4-F)-Lys-NH2 7 23,40 24,63
81 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-(4-O- -Me)-Lys-NH2 7 22,50 23,90
82 2-(HTAib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etan 3 18,30 20,47
83 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 29,25 30,55
181 280 dalszy ciąg przykładów
1 2 3 4 5
84 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH-( 1 -metylo-2-pirolidynylo)etan 3 18,70 20,80
85 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH-(2-pirydylo)etan 3 19,20 20,83
86 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe- -Lys-NH2 1 26,78 27,88
87 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 1 20,48 22,23
88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 1 21,65 23,38
89 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH2 1 18,43 20,05
90 (5-aminometylotienylo-2-karbonylo)-D-2Nal-D-P-he-Lys-NH2 1 22,32 23,65
91 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 1 18,50 20,00
92 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 1 17,75 19,48
93 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-T(CH2NH)-Lys-NH2 5 18,57 20,62
94 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 62 18,03 20,60
95 (3-am inomety lotienylo-2-karbonylo)-D-2Nal-D-P- -he-NH2 1 23,23 24,78
96 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 1 21,78 23,53
97 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(Me)2 3 18,70 21,07
98 (3-am inomety Iobenzoilo)-D-1 Nal-D-Phe-Ly s-NH2 1 22,67 24,23
99 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 1 18,17 20,40
100 (2-pirydylometylo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 63 19,07 21,73
101 H-Aib-(3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 7 23,95 25,38
102 H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,53 20,38
103 (3R)-piperydynokarbonylo)-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 1 21,52 22,97
104 (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)-etylo)benzen 3 25,55 27,85
105 (2R-hydroksypropylo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 64 18,15 20,28
106 (3-am inomety lobenzo ilo)-D-2Nal-D-P- -he-T(CH2NH)-Lys-NH2 5 22,00 23,95
107 (3-aminometylobenzoilo)-N-Me-D-2Nal-D-Phe- -Lys-NH2 62 23,27 24,72
108 (3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-N-Me- -Lys-NH2 67 22,60 23,98
109 H-D-Thr-His-D-2N al-D-Phe-Ly s-NH2 7 17,75 19,83
110 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 17,58 19,37
181 280
Poniżej przedstawiono struktury reprezentatywnych peptydów według wynalazku.
N, N-di- (2R-hydroksypropylo) - (3-aminometylobenzoilo) -D-2Nal-DPhe-Lys-NH2
3- ( 4-imidazolilo) propionylo) -D-2Nal-D-Ph.e-Lys-NH2
H-Ala-3Pyal-D-2nal-D-Phe-Lys-NH2
(trans-4-aminometylocykloheksanoilo)-D-2nal-D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3R)-piperydynokarbonylo-D-2Nal~D-Phe-Lys-NH2
H-Ala-N-Me- (2-aniinobenzoilo) -D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(2S) - (Η-Αίό-ΗίδΨ(CH2NH) D-2Nal-D-Phe-NH) -6-aminoheksanol
2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)(l-metylo-2-pirolidynylo)etan
181 280 (5-aminometylotienylo-2-karbonylo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3-aminometylotienylo-2-karbonylo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
(3-aminom.etyLobenzoilo) -D-2Nal-N- (fenetylo) -Gly-Lys-NH2
181 280
Przykład 111
Zaplanowano test in vitro przy użyciu szczurzych komórek przysadki w celu zbadania działania różnych substancji pobudzających wydzielanie hormonu wzrostu. Z tylnej części przysadki szczurów samców wyizolowano mieszaną hodowlę komórek przysadki i narrmażano ją przez 3 dni. Komórki przemyto, po czym stymulowano je przez 15 minut i mierzono ilość wydzielonego hormonu wzrostu w supematancie hodowli.
Sposób izolacji komórek przysadki szczura był modyfikacjąmetody opisanej przez Sartor O. i in. w Endocrinology 116, 1985, strony 952-957. Przysadki pobrano od szczurów samców Sprague-Dawley o wadze 250 g po dekapitacji. Usunięto płaty pośrednie, a pozostałość umieszczono w pożywce Ge/a suplementowanej 0,25% glukozą, 2 x nietypowe aminokwasy i 1 % BSA (bufor do izolacji). Gruczoły pocięto na małe kawałki i przeniesiono do kolby zawierającej 3 ml buforu do izolacji plus 11,5 mg trypsyny i 1000 pg DNazy oraz inkubowano przez 35 minut w 37°C, w atmosferze 95% O2 i przy 70 obrotach na minutę. Fragmenty przemyto 3 razy przez sedymentację w buforze do izolacji i aspirowano do pojedynczych komórek przy pomocy pipety Pasteura. Po zdyspergowaniu komórki przesączono przez filtr nylonowy (160 pm) w celu usunięcia niestrawionej tkanki. Komórki przemyto 3 razy buforem do izolacji suplementowanym inhibitorem trypsyny (0,75 mg/ml) i ponownie zawieszono w pożywce do hodowli (DMEM suplementowana 25 mM HEPES, 4 mM glutaminy, 0,75% wodorowęglanu sodu, 2,5% FCS, 3% surowicy końskiej, 10% surowicy szczurzej, 1 nM T3 i 40 pg/1 deksametazonu) do gęstości 2 x ΙΟ3 komórek/ml. Komórki posiano na płytki do mikromiareczkowań, 200 pl/dołek, i namnażano przez 3 dni w 37°C i w atmosferze 8% CO2.
Stosowane w niniejszych badaniach skróty oznaczają;
DMEM - modyfikowany odczynnik Dulbecco Eagle;
HEPES - kwas 4-(2-hydroksyetylo)-l-piperazynoetanosulfonowy;
FCS - płodowa surowica cielęca:
HBSS - zrównoważony roztwór soli Hańska;
Po okresie namnażania komórki przemyto dwukrotnie buforem do stymulacji (HBSS suplementowany 1% BSA, 0,25%D-glukozy i 25 mM HEPES) i preinkubowano przez 1 godzinę. Następnie bufor usunięto i dodano nowy bufor do stymulacji, zawierający związek według-.wynalazku i inkubowano płytki przez 15 minut w 37°C i w atmosferze 5% CO2. Bufor zebrano i analizowano na zawartość szczurzego hormonu wzrostu (rGH) za pomocą testu scyntylacyjnego (SPA) w sposób opisany poniżej (SPA opisany w patencie USA nr 4568649, w artykule Hart i Greenwalt, Mol. Immunol. 16, 1979, strony 265-269 lub artykule Udenfried i in., Proc., Natl. Acad. Sci USA 82, 1985, strony 8672-8676).
Oznaczenie rGH przeprowadzono w OptiPlates (płytki 96-dołkowe) odpowiednich do bezpośredniego zliczania w Packards TopCount (licznik scyntylacyjny β).
Protokół testu pi buforu μΐ próbki (inkubowany bufor do stymulacji) pl 125I-rGH pl króliczego anty-rGH pl reagenta SPA (przeciwciało anty-królicze)
Płytki zatopiono i umieszczono na wytrząsarce do płytek na 30 minut, a następnie inkubowano przez 10 godzin, klarowano w 10-15°C i zliczano.
W teście SPA rGH związane z króliczym przeciwciałem anty-GH (przeciwciało pierwsze) poddaje się reakcji z drugim przeciwciałem, związanym z fluomikrosferami (SPA Type IIRIA, dostępne z Amersham). Cały radioznakowany rGH związany z pierwszym przeciwciałem zostanie immobilizowany na fluomikrosferach, które następnie będą wytwarzać światło. Pomiar w liczniku scyntylacyjnym β umożliwia obliczenie ilości radioznakowanego rGH. Ilość radioznakowanego rGH związanego z fluomikrosferami maleje ze wzrostem zawartości rGH w próbce.
181 280
Przykład nr Związek ECS0 (nM) EmK (% GHRP-6)
3 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(CH2)5NH2 20 100
10 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2 90
51 H-Ala-His-D-1 Nal-D-Phe-Lys-NH2 10 85
76 (2S)-((3-aminomety lobenzoilo)-D-2N al-D-Phe-NH)-6-am inoheksanol 26 65
83 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 8 75
88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 11 80
104 (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)etylo)-benzen 58 85
181 280
Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 70 egz. Cena 4,00 zł.

Claims (10)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Związek o wzorze ogólnym I
    A-B-C-D-E (I) w którym;
    A oznacza wodór,
    B oznacza grupę (G)t-H, w której t oznacza liczbę 0 lub 1, G i H są resztami aminokwasów wybranymi z grupy obejmującej naturalne L-aminokwasy lub ich odpowiednie D-izomery Ala, His lub Phe, lub syntetyczne aminokwasy: kwas aminoizomasłowy, kwas 3-amino-3-metylobenzoesowy,
    C oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH(CH2-R4)W-CO-, w którym w oznacza liczbę 1, a R4 oznacza grupę o wzorze
    D oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH((CH2)k-R5)-CO-, gdzie k oznacza liczbę 1; R5 oznacza grupę o wzorze;
    E oznacza -NH-CH(R10)-(CH2)v-R9, gdzie v oznacza liczbę 4 lub 8; R9 oznacza wodór, lub grupę N(R' J-R12, gdzie każdy z podstawników R11 i R12 oznacza wodór,
    R10 jest wybrany z grupy składającej się z -H, CH2-OH, -CO-R13, gdzie R13 oznacza grupę -OH lub -N(Ri4)-R15, gdzie każdy z podstawników R14 i R15 oznacza wodór;
    oraz jego dopuszczalne farmaceutycznie sole.
  2. 2. Związek według zastrz. 1, w którym gdy t oznacza liczbę 1, G oznacza Ala, Aib.
  3. 3. Związek według zastrz. 1, w którym H oznacza His, Phe, lub kwas 3-aminometylobenzoesowy.
  4. 4. Związek według zastrz. 1, w którym R4 oznacza 2-naftyl.
  5. 5. Związek według zastrz. 1, w którym R9 oznacza NH2.
  6. 6. Związek według zastrz. 1, w którym R10 oznacza grupę -CH2-OH, -H lub -CONH2.
  7. 7. Związek według zastrz. 1, wybrany ze związków następujących:
    5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentyloamina,
    H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2,
    H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2.
  8. 8. Związek według zastrz. 1, wybrany ze związków następujących;
    (2S)-((3-aminometylobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amino-heksanol,
    H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2,
    H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2,
    H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2.
  9. 9. Kompozycja farmaceutyczna do stymulowania uwalniania hormonu wzrostu z przysadki, zawierająca substancję czynną razem z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub rozcieńczalnikiem, znamienna tym, że zawieraj ako składnik czynny związek o wzorze ogólnymi
    A-B-C-D-E (I)
    181 280 w którym;
    A oznacza wodór,
    B oznacza grupę (G)t-H, w której t oznacza liczbę 0 lub 1, G i H sąresztami aminokwasów wybranymi z grupy obejmującej naturalne L-aminokwasy lub ich odpowiednie D-izomery Ala, His lub Phe, lub syntetyczne aminokwasy: kwas aminoizomasłowy, kwas 3-amino-3-metylobenzoesowy,
    C oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH((CH2)W-R4)-CO-, w którym w oznacza liczbę 1, a R4 oznacza grupę o wzorze
    D oznacza D-aminokwas o wzorze -NH-CH((CH2)k-R5)-CO-, gdzie k oznacza liczbę 1; R5 oznacza grupę o wzorze;
    E oznacza -NH-CH(R10)-(CH2)v-R9, gdzie v oznacza liczbę 4 lub 8; R9 oznacza wodór, lub grupę N(Rn)-R12, gdzie każdy z podstawników R11 i R12 oznacza wodór,
    R10 jest wybrany z grupy składającej się z -H, CH2-OH, -CO-R13, gdzie R13 oznacza grupę -OH lub -N(R14)-R15, gdzie każdy z podstawników R14 i R15 oznacza wodór;
    lub jego dopuszczalne farmaceutycznie sole.
  10. 10. Kompozycja farmaceutyczna według zastrz. 9, znamienna tym, że ma formę dawki jednostkowej, zawierającej od około 10 do około 200 mg związku o wzorze ogólnym I lub jego dopuszczalnej farmaceutycznie soli.
    * * *
PL94315113A 1993-12-23 1994-12-22 oraz zawierajaca je kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL PL PL PL PL PL181280B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DK143993A DK143993D0 (pl) 1993-12-23 1993-12-23
DK12194 1994-01-28
DK119194 1994-10-14
PCT/DK1994/000485 WO1995017423A1 (en) 1993-12-23 1994-12-22 Compounds with growth hormone releasing properties

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL315113A1 PL315113A1 (en) 1996-10-14
PL181280B1 true PL181280B1 (pl) 2001-07-31

Family

ID=27220421

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL94315113A PL181280B1 (pl) 1993-12-23 1994-12-22 oraz zawierajaca je kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL PL PL PL PL

Country Status (27)

Country Link
US (1) US5767085A (pl)
EP (1) EP0736039B1 (pl)
JP (1) JP3181918B2 (pl)
KR (1) KR100354897B1 (pl)
CN (1) CN1052731C (pl)
AT (1) ATE197158T1 (pl)
AU (1) AU689181B2 (pl)
BR (1) BR9408377A (pl)
CA (1) CA2179597A1 (pl)
CZ (1) CZ293113B6 (pl)
DE (1) DE69426206T2 (pl)
DK (1) DK0736039T3 (pl)
ES (1) ES2153469T3 (pl)
FI (1) FI962584A0 (pl)
GR (1) GR3035150T3 (pl)
HU (1) HU224345B1 (pl)
IL (1) IL112112A (pl)
MX (1) MX9500072A (pl)
NO (1) NO315561B1 (pl)
NZ (1) NZ277486A (pl)
PL (1) PL181280B1 (pl)
PT (1) PT736039E (pl)
RO (1) RO115635B1 (pl)
SG (1) SG55069A1 (pl)
SK (1) SK281963B6 (pl)
UA (1) UA42747C2 (pl)
WO (1) WO1995017423A1 (pl)

Families Citing this family (57)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1995014666A1 (en) * 1993-11-24 1995-06-01 Merck & Co., Inc. Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)
AU683121B2 (en) * 1993-12-23 1997-10-30 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US20020111461A1 (en) 1999-05-21 2002-08-15 Todd C. Somers Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
US5798337A (en) * 1994-11-16 1998-08-25 Genentech, Inc. Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
ID18218A (id) * 1995-01-27 1998-03-19 Novo Nordisk As Senyawa dengan sifat-sifat pelepas hormon pertumbuhan
AU711104B2 (en) * 1995-06-22 1999-10-07 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6531314B1 (en) 1996-12-10 2003-03-11 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue receptor family
ES2268713T3 (es) 1995-12-13 2007-03-16 MERCK & CO., INC. Ensayos de receptores de secretagogos de la hormona de crecimiento.
GB2308362A (en) * 1995-12-19 1997-06-25 Lilly Industries Ltd Pharmaceutical indole derivatives
CZ195098A3 (cs) * 1995-12-22 1998-10-14 Novo Nordisk A/S Sloučeniny uvolňující růstový hormon
US6451970B1 (en) 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
KR20000010626A (ko) * 1996-04-24 2000-02-25 한센 핀 베네드, 안네 제헤르 성장호르몬 방출성을 갖는 화합물
US5919777A (en) * 1996-04-24 1999-07-06 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US5922770A (en) * 1996-07-22 1999-07-13 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
WO1998008492A1 (en) * 1996-08-29 1998-03-05 Novo Nordisk A/S Transdermal delivery of peptides
US6121416A (en) 1997-04-04 2000-09-19 Genentech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
US6420518B1 (en) 1997-04-04 2002-07-16 Genetech, Inc. Insulin-like growth factor agonist molecules
US6127341A (en) * 1997-06-20 2000-10-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
EP1005484A1 (en) 1997-06-20 2000-06-07 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
HUP0100777A3 (en) 1998-01-16 2001-12-28 Novo Nordisk As Tripeptides with growth hormone releasing properties, pharmaceutical compositions comprising thereof and their use
US6919315B1 (en) 1998-06-30 2005-07-19 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6682908B1 (en) 1998-07-10 2004-01-27 Merck & Co., Inc. Mouse growth hormone secretagogue receptor
WO2000002919A1 (en) 1998-07-13 2000-01-20 Merck & Co., Inc. Growth hormone secretagogue related receptors and nucleic acids
US6645726B1 (en) 1998-08-10 2003-11-11 Merck & Co., Inc. Canine growth hormone secretagogue receptor
US6696063B1 (en) * 1998-12-30 2004-02-24 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Treatment of HIV-associated dysmorphia/dysmetabolic syndrome (HADDS) with or without lipodystrophy
AU762351B2 (en) 1999-01-06 2003-06-26 Genentech Inc. Insulin-like growth factor (IGF) I mutant variants
JP2002542151A (ja) * 1999-02-18 2002-12-10 科研製薬株式会社 成長ホルモン分泌促進物質としての新規なアミド誘導体
JP2003501394A (ja) * 1999-06-04 2003-01-14 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ 延長された重度の疾患の異化状態の処理のための組成物
ATE389416T1 (de) 2000-05-16 2008-04-15 Genentech Inc Behandlung von knorpelerkrankungen
DE60140285D1 (de) 2000-05-31 2009-12-10 Pfizer Prod Inc Verwendung von Wachstumshormonsekretagoga zur Förderung der Beweglichkeit des Verdauungstrakts
TWI331922B (en) 2002-08-09 2010-10-21 Ipsen Pharma Sas Growth hormone releasing peptides
CA2525636A1 (en) * 2003-05-19 2004-11-25 Warner-Lambert Company Llc Hard gelatin capsule containing titanium oxide with a controlled particle size and process for producing the same
US7476653B2 (en) 2003-06-18 2009-01-13 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor
EP2274978B1 (en) 2003-09-12 2015-05-20 Tercica, Inc. Methods for treatment of insulin-like growth factor-I(IGF-I) deficiency
WO2005027913A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and a growth hormone secretagogue
KR20070010151A (ko) * 2004-03-30 2007-01-22 사파이어 세라퓨틱스, 인크. 성장 호르몬 분비촉진제를 이용하여 ｃ-반응성 단백질을감소시키는 방법
UA87854C2 (en) 2004-06-07 2009-08-25 Мерк Энд Ко., Инк. N-(2-benzyl)-2-phenylbutanamides as androgen receptor modulators
ES2388501T3 (es) * 2004-08-12 2012-10-16 Helsinn Healthcare S.A. Uso de secretagogos de la hormona de crecimiento para estimular la motilidad del sistema gastrointestinal
CU23558A1 (es) 2006-02-28 2010-07-20 Ct Ingenieria Genetica Biotech Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento
EP2021015A2 (en) * 2006-04-28 2009-02-11 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Ghrelin/growth hormone releasing peptide/growth hormone secretatogue receptor antagonists and uses thereof
CN101657436A (zh) 2007-02-09 2010-02-24 特兰齐姆制药公司 大环生长素释放肽受体调节剂及其使用方法
CA2677813A1 (en) * 2007-02-13 2008-08-21 Helsinn Therapeutics (U.S.), Inc. Method of treating cell proliferative disorders using growth hormone secretagogues
TWI429436B (zh) * 2007-04-10 2014-03-11 Helsinn Therapeutics Us Inc 使用生長激素促泌素治療或預防嘔吐之方法
WO2008134828A2 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Katholieke Universiteit Leuven Tissue degeneration protection
CA2710039C (en) 2007-12-26 2018-07-03 Critical Outcome Technologies, Inc. Semicarbazones, thiosemicarbazones and related compounds and methods for treatment of cancer
EP2318406B1 (en) 2008-07-17 2016-01-27 Critical Outcome Technologies, Inc. Thiosemicarbazone inhibitor compounds and cancer treatment methods
UA105657C2 (uk) * 2009-02-27 2014-06-10 Хелсінн Терапьютікс (Ю.Ес.), Інк. Поліпшені способи лікування мігрені на основі анамореліну
US9724381B2 (en) 2009-05-12 2017-08-08 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Methods of inhibiting the ghrelin/growth hormone secretatogue receptor pathway and uses thereof
PE20121064A1 (es) * 2009-06-12 2012-09-03 Helsinn Therapeutics Us Inc Solucion de inyeccion o infusion de diacetato de ipamorelin
EP2552915B1 (en) 2010-04-01 2017-07-19 Critical Outcome Technologies Inc. Compounds for the treatment of hiv
WO2013190520A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The General Hospital Corporation Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions
US9119832B2 (en) 2014-02-05 2015-09-01 The Regents Of The University Of California Methods of treating mild brain injury
ES2864079T3 (es) 2014-05-30 2021-10-13 Pfizer Derivados de carbonitrilo como moduladores selectivos del receptor de andrógenos
WO2017075535A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating neurodegenerative conditions
WO2018183411A1 (en) * 2017-03-28 2018-10-04 The Regents Of The University Of Michigan Small molecule dcn1 inhibitors and therapeutic methods using the same
WO2023275715A1 (en) 2021-06-30 2023-01-05 Pfizer Inc. Metabolites of selective androgen receptor modulators
CN119930744B (zh) * 2025-01-20 2025-12-19 昆明理工大学 一种发酵马乳源小分子肽及其应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4228156A (en) * 1979-03-30 1980-10-14 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223020A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
US4223019A (en) * 1979-03-30 1980-09-16 Beckman Instruments, Inc. Synthetic peptides having pituitary growth hormone releasing activity
JPS58501861A (ja) * 1981-12-28 1983-11-04 ベツクマン・インストルメンツ・インコ−ポレ−テツド 下垂体成長ホルモン放出活性を有する合成ペプチド
US4410512A (en) * 1981-12-28 1983-10-18 Beckman Instruments, Inc. Combinations having synergistic pituitary growth hormone releasing activity
US4803261A (en) * 1986-06-27 1989-02-07 The Administrators Of The Tulane Educational Fund Method for synthesizing a peptide containing a non-peptide
IL98910A0 (en) * 1990-07-24 1992-07-15 Polygen Holding Corp Polypeptide compounds having growth hormone releasing activity and pharmaceutical compositions containing them
US5663146A (en) * 1991-08-22 1997-09-02 Administrators Of The Tulane Educational Fund Polypeptide analogues having growth hormone releasing activity
WO1994007519A1 (en) * 1992-09-25 1994-04-14 Smithkline Beecham Corporation Growth hormone releasing peptides
WO1995014666A1 (en) * 1993-11-24 1995-06-01 Merck & Co., Inc. Indolyl group containing compounds and the use thereof to promote the release of growth hormone(s)

Also Published As

Publication number Publication date
KR100354897B1 (ko) 2003-01-06
CA2179597A1 (en) 1995-06-29
ATE197158T1 (de) 2000-11-15
AU689181B2 (en) 1998-03-26
CZ293113B6 (cs) 2004-02-18
NO315561B1 (no) 2003-09-22
BR9408377A (pt) 1997-08-19
SK281963B6 (sk) 2001-09-11
EP0736039A1 (en) 1996-10-09
CZ183496A3 (en) 1997-02-12
DE69426206D1 (de) 2000-11-30
FI962584A7 (fi) 1996-06-20
CN1138335A (zh) 1996-12-18
FI962584L (fi) 1996-06-20
IL112112A (en) 2000-06-29
ES2153469T3 (es) 2001-03-01
EP0736039B1 (en) 2000-10-25
HU224345B1 (hu) 2005-08-29
HUT73497A (en) 1996-08-28
IL112112A0 (en) 1995-03-15
PT736039E (pt) 2001-04-30
JP3181918B2 (ja) 2001-07-03
DE69426206T2 (de) 2001-05-17
DK0736039T3 (da) 2001-02-12
AU1272495A (en) 1995-07-10
NO962665D0 (no) 1996-06-21
CN1052731C (zh) 2000-05-24
SG55069A1 (en) 1998-12-21
RO115635B1 (ro) 2000-04-28
NO962665L (no) 1996-08-23
JPH09507217A (ja) 1997-07-22
HU9501947D0 (en) 1995-11-28
WO1995017423A1 (en) 1995-06-29
US5767085A (en) 1998-06-16
SK82096A3 (en) 1997-01-08
NZ277486A (en) 1997-03-24
MX9500072A (es) 1997-05-31
UA42747C2 (uk) 2001-11-15
GR3035150T3 (en) 2001-04-30
FI962584A0 (fi) 1996-06-20
PL315113A1 (en) 1996-10-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL181280B1 (pl) oraz zawierajaca je kompozycja farmaceutyczna PL PL PL PL PL PL PL PL
JP3759748B2 (ja) 成長ホルモン放出性を有する化合物
AU711104B2 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
US5990084A (en) Compounds with growth hormone releasing properties
WO1997040071A1 (en) Compounds with growth hormone releasing properties
JP4173541B6 (ja) 成長ホルモン放出特性を有する化合物
TW438811B (en) Compounds with growth hormone releasing properties
MXPA97010377A (en) Compounds with releasing properties of growth hormone

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20041222