PT736039E

PT736039E - Compostos com propriedades para liberar a hormona de crescimento

Info

Publication number: PT736039E
Application number: PT95903774T
Authority: PT
Inventors: Nils Langeland Johansen; Henning Thogersen; Behrend Friedrich Lundt; Jesper Lau; Kjeld Madsen; Birgit Sehested Hansen; Bernd Peschke
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 1993-12-23
Filing date: 1994-12-22
Publication date: 2001-04-30
Also published as: EP0736039B1; FI962584L; DE69426206T2; DK0736039T3; SK82096A3; NO962665D0; NO962665L; CA2179597A1; FI962584A0; PL181280B1; AU1272495A; ATE197158T1; AU689181B2; BR9408377A; HU224345B1; IL112112A; NO315561B1; WO1995017423A1; FI962584A7; CZ293113B6

Description

MEMÓRIA DESCRITIVA

COMPOSTOS COM PROPRIEDADES PARA LIBERAR A HORMONA DE CRESCIMENTO

Campo da invenção A presente invenção refere-se a novos derivados peptídeos, compostos que os contenham, e a seu emprego para tratar transtornos médicos que provenham de uma deficiência da hormona de crescimento.

Estado da técnica A hormona de crescimento é uma hormona que estimula o crescimento de todos os tecidos que podem crescer. Além disso, sabe-se , que a hormona de crescimento provoca vários efeitos sobre processos metabólicos, por exemplo, a estimulação da síntese de proteína e a mobilização do ácido gorduroso livre e que causa uma mudança no metabolismo da energia desde os carboidratos até o metabolismo do ácido gorduroso. A deficiência na hormona de crescimento pode causar diversos transtornos médicos graves, por exemplo, o nanismo.

A hormona de crescimento é liberada desde a pituitária. A liberação produz-se sob o estrito controle de varias hormonas e neuro - transmissores directa ou indirectamente. A liberação da hormona de crescimento pode vir estimulada pela hormona libertadora da hormona de crescimento (GHRH) e inibida pela somatostatina. Em ambos casos as hormonas são liberadas a partir do hipotálamo porém sua acção é mediada principalmente por receptores específicos localizados na pituitária. Também se descreveu outros compostos que estimulam a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária. Por exemplo a arginina, a L-3,4-dihidroxifenilalanina (L-Dopa), o glucagón, a vasopresina, o PACAP (peptídeo activador de ciclase de adenililo de pituitária), os agonistas receptores muscarínicos e um hexapeptídeo sintético, o GHRP (peptídeo libertador de hormona de crescimento) libera a hormona de crescimento endógeno por meio de um efeito directo sobre a pituitária ou influído na liberação do GHRH e/ou a somatostatina do hipotálamo.

Nos transtornos ou estados em que se deseje o aumento dos níveis de hormona de crescimento, a natureza da proteína da hormona de crescimento faz que só seja possível a administração parenteral. Além disso, outros secretagogos naturais activos directos, por exemplo., o GHRH e o PACAP, são polipeptídeos mais compridos por isso sua administração oral é impossível.

Previamente, foi proposto o emprego de peptídeos mais curtos com o fim de aumentar os níveis de hormona de crescimento, por exemplo, nas patentes europeias EP 18 072, EP 83 864, WO 89/07110, WO89/01711, WO 89/10933, WO 88/9780, WO 83/02272, WO 91/18016, WO 92/01711 e WO 93/04081. A composição dos peptídeos libertadores da hormona de crescimento ou derivados peptídeos é importante tanto pela sua potência libertadora de hormona de crescimento como pela sua biodisponibilidade. Em consequência, o objectivo da presente invenção é proporcionar peptídeos com propriedades de liberação de hormonas de crescimento que aperfeiçoaram propriedades relativas a peptídeos conhecidos deste tipo.

Resumo da invenção

Em consequência, a presente invenção refere-se a um composto da fórmula geral I A-B-C-D(-E)p onde p é 0 ou 1; A é hidrogénio ou R1-(CH2)q(X)r-(CH2),-CO, onde q é 0 ou um número inteiro entre 1 e 5; r é 0 ou 1; s é 0 ou um número inteiro entre 1 e 5; R1 é hidrogénio, imidazolil, guanidino, piperazino, morfolino, piperidino ou N(R2)-R3, onde cada R2e R3 é independentemente hidrogénio ou algo inferior opcionalmente substituído por um ou mais grupos de hidróxilo, piridinilo ou furanilo; e X, quando r é 1, é -NH-, - CH2, -CHCH-,

Rw

I -C- i

Ru

1/ |»T onde cada R e R são hidrogénio independentemente ou alquino inferior; B é (G)r(H) u onde t é 0 ou 1; o é 0 ou 1; G e H são resíduos aminoácidos seleccionados entre o grupo composto por L-aminoácidos naturais ou seus correspondentes D-isómeros ou aminoácidos não naturais como ácido 1,4-diaminobutírico, ácido 3

aminoisobutírico, ácido 1,3-diaminopropiónico, 4-aminofenilalanina, 3-piridilalanina, ácido l,2,3,4-tetrahidroisoquinolino-3-carboxílico, ácido l,2,3,4-tetrahidronorharman-3-carboxílico, ácido N-metilantranílico, ácido antranílico, N-benilglicina, ácido 3-aminometilben2Óico, ácido 3-amino-3-metilbutanóico, sarcosina, ácido nipecótico ou ácido isonipecótico; e onde, quando t e o são 1, o enlace de amida entre G e H é opcionalmente substituído por R18 I

I __ I

-Y-N, onde^e<i,C=0 ou CH2, e R18 é hidrogénio, alquino inferior ou aralquino inferior; I C é um D-aminoácido da fórmula NH-CH((CH2)w-R4)-CO onde w é 0, 1 ou 2; e R4 selecciona-se entre o grupo composto por

cada um dos quais se substitui, opcionalmente, por halogéneo, alquino inferior, alquiloxi inferior, alquilamino inferior, amino ou hidroxi; D, quando pé 1, é um D-aminoácido da fórmula -NH-CH((CH2)k-R5)-CO- ou, quando p é 0, D é um resíduo de D-aminoácido da fórmula -NH-CH((CH2)r R5)-CH2-R6 o NH-CH((CH2)m-R5)-CO-R6, onde k é 0,1 ou 2; 1 é 0, 1 ou 2; m é 0,1 ou 2; R5 selecciona-se de entre o grupo composto por

cada um dos quais se substitui opcionalmente por halogéneo, alquino, aminoalquíloxi ou hidroxi; e R6 é piperazino, morfolino, piperidino-OH or -N(R7)-R8, onde cada R7e R8é independentemente hidrogénio ou alquino inferior; E, quando p é 1, é -NH-CH(R10)-(CH2)V-R9, onde v é 0 ou um número inteiro entre 1 e 8; R9 é hidrogénio, imidazolil, guanidino, piperazino, morfolino, piperidino,

onde n é 0, 1 ou 2, e R19 é hidrogénio ou alquino inferior,

o

\r12 onde o é um número inteiro dc 1 a 3, ou N(Rn )-R12, onde cada R11 e R12 é independentemente hidrogénio ou alquino inferior, ou 5

ο

cada um dos quais se substitui opcionalmente por halogéneo, alquino, alquiloxi, amino, alilamino, hidroxi ou o produto de um re-ordenamento de Amadori de um grupo amino e uma hexapiranosa ou um hexapiranosil-hexapiranosa e R10, quando p é 1, se selecciona de entre o grupo que consiste em -H,-COOH, -CH2-R13, -CO-R13 ou -CH2-OH, onde

Ri3 é piperazino, morfolino, piperidino, -OH ou -N(R14)-R15, onde cada R14 e R15 é independentemente hidrogénio ou alquino inferior; o enlace de amida entre B e C ou, quando t e o são 0, entre A e C pode-se substituir opcionalmente por R18 |

I -Y-N, onde~e^.C=0 ou CH2, y R18 é hidrogénio, alquino inferior ou aralquino inferior, I ou, quando p é 1, o enlace de amida entre D e E se pode substituir

opcionalmente por R18 I -Y-N, onde e R18 são tal e como foi indicado anteriormente; ou um derivado de sal farmaceuticamente aceitável.

Acredita-se que os derivados peptídeos da fórmula I apresentam uma resistência aperfeiçoada o degradação proteolítica causada pelas enzimas por culpa da presença de D-aminoácidos adjacentes na sequência péptida, opcionalmente combinados com a substituição de um enlace de amida 6 R18

I

(-CO-NH) por -Y-N tal e como foi indicado anteriormente, por exemplo., o aminometileno (-CH2-NH) e/ou a modificação no extremo do terminal N ou C do peptídeo. Espera-se que a resistência aumentada contra a degradação proteolítica combinada com o tamanho reduzido dos derivados peptídeos da invenção melhore sua biodisponibilidade em comparação com os peptídeos sugeridos na bibliografia precedente.

No presente contexto, 0 termo "alquino inferior" deve indicar alquino com 1-6 átomos de carbono, concretamente metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, pentilo ou hexilo. O termo "halogéneo" deve incluir Cl, F, Br e I. Nos termos "alquiloxi inferior", "aralquilo inferior" e "alquilamino inferior", a metade de alquino inferior tem 0 significado indicado anteriormente.

Descrição detalhada da invenção

Numa forma de realização preferente do composto da fórmula I, p é 1. Em outra forma de realização preferente do composto da fórmula I, A é hidrogénio ou, altemativamente, R'-(CH2)q-(X)r -(CH2)s-CO-, onde R1 é 3- imidazolil, q é 2, r é 0 e S é 0; ou onde R1 é NH2, q é 1, r é 1, X é benzeno di substituído preferentemente substituído nas posições 1 e 3, e s é 0; ou onde R!é NH2, q é 1, r é 1, X é tiofeno di substituído preferentemente substituindo nas posições 3 e 2, e S é 0. Quando t é 1, G no composto da fórmula I é preferentemente Ala, Gly, Aib, sarcosina, ácido nipecótico ou ácido isonipecótico. Quando u é 1, Et é preferentemente His, Phe, Tic, Phe(4NH2), 3-Pyal, Gly, Ala, Sar, Pro, Tyr, Arg, Om, 3-ácido aminometilbenzóico ou D-Phe. C no composto da fórmula I é preferentemente D-2-naftilalanina (D-2Nal), D-l-naftilalanina (D-lNal), D-Phe ou D-Trp. D no composto da fórmula I é preferentemente D-Phe, D-lNal, D-2Nal, D-Trp, 3-Pyal, D-Phe(4F), D-Tyr ou Phe-NH2 7 E no composto da fórmula Ϊ é preferentemente Lys-NH2, NH-(2-(l- piperazino)etilo), NH-(2-(l-morfolino)propilo), NH-(2-aminoetilo), NH-(4-aminometilbencilo), NH-(bencilo), Lys-OH, NH-(l-hidroxi-6-amino-2S-hexilo), NH-(2-(l-metilo-2-pirrolidinil)etilo), ou

R4 no composto da fórmula I é preferentemente 2-naftilo. R5 é preferentemente fenilo. v é preferentemente 2-6, e R4 é NH2, morfolinoetilo, morfolinopropilo ou (l-metilpirrolidinilo)etilo. R10 é preferentemente -COOH, -CH2-OH, -H, -CONH2 ou -CON(CH3)2.

Os exemplos dos compostos específicos da presente invenção são: H-Ala-His ψ (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolilo)propionilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-D-2Nal-D-Plie-Lys-NH2 (n-Propilo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pyal-D-2Na1-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 8 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(4-Imidazolilo)acetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolilo)acriolilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilo benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminocrotonoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Piperidina-carboxilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexano 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexilamina 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentiIanaina H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe ψ (CH2NH)Lys-NH2

H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (2S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etilo)benceno 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etilamina 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)metilo)bencilamina H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosilo)-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 H-Ala-His-D-lNal-D-Plie-Lys-NH2 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2. H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosilo)-NH2 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3fenilopropilamina H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

9 (3-(Metilaminometilo)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-(Aminometilo)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Hi s-Ala-D-2N al-D-Phe-Ly s-N H2 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)butilamina 3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)propilamina (3-(Dimetilaminorrieti]o)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Amino-3-metilbutanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo) ψ (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-Amino-3-metilbutanoilo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-N-Bzl-GIy-Lys-NH2 (2S)-(3-aminometilobenzoilo)y(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2S)-((3-aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 (28)-(Η-Α^-Ηί8ψ(ΟΗ2ΝΗ)Φ-2Ν3ΐ-0-ΡΗ6-ΝΗ)-6-3ΐηΐηο1ΐ6Χ3ηο1 (3 - Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-3 Pyal-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2 (2-Aminometilofeniloacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridilo)etano H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2-pirrolidinilo)etano 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridilo)etano

H-Aib-Hisψ(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-I-ys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2

H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om-NH2 (5-Aminometilotienilo-2-carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe ψ (CH2NH)-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H - Aib-His-D-2N al-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-Aminometilotienilo-2-carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 φ H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 (3R)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3s)-piperídinacarbonilo-D-2Nal-D-phe-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 (Furfdrilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Piridilometilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-(3-aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 φ H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH, (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)etilo)benceno N,N-di(2R-Hidroxipropilo)-(3-aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 (2R-Hidroxipropilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3 -Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe\j/ (CH2NH)Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 (3Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys- NH2 H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 11 H-Aib-His-D-2Nal-N-(fenetilo)-Gly-Lys-NH2 (3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-N-(fenetilo)-Gly-Lys-NH2 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(fenetilo)-Gly-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe\|/ (CH2N(Me))LyS-NH2 3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-metilo-2-pirrolidinilo)etano (3R)-Piperidinacarbonilo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 3- ((Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2- pirrolidinilo)etano 2-(3R)-Piperidinacarbomlo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo- 2- pirrolidinilo)etano 2- (3-Aminometilobenzoilo)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-metilo- 2- pirrolidinilo)etano 3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 3-((3R)-Piperídinacarbonilo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe- NH)morfolinopropano 3-((3-Aminometilobenzoilo)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe- NH)morfolinopropano H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NHz 2-((3-Aminometilobenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2-pirrolidinilo)etano 2-((3R)Piperidinacarbonilo-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2-pirrolidinilo)etano /9

Abreviaturas: D -2Nal = D-2 -naftilalanina 5Apent = 5 ácido aminopentanóico 3Pial = 3- piridilalanina Aib = H ácido aminoisobutírico Thial = tienilalanina HPhe = homo fenilalanina N-Bzl-Gly = N bencilglicina 4-F = 4-fluoro 4-OMe = 4-metoxi Om = Omitina Dab = 2,4-ácido diaminobutírico Hyp = hidroxiprolina Tic = 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina-3-ácido carboxílico

Os compostos da fórmula I podem preparar-se mediante métodos convencionais síntese péptida da fase sólida ou síntese péptida da solução. A síntese da fase sólida pode realizar-se substancialmente, por exemplo, como se descreve em Stewart and Young, Solid Phase Peptide Svhthesis. 2nd. Ed., Rockford, Illinois, EUA, 1976. A síntese péptida da solução pode-se levar a cabo essencialmente, por exemplo, como se descreve em Bodansky et ai., Peptide Svnthesis. 2nd. Ed., New York, New York, EEUU, 1976. O aminometileno como uma substituição de um enlace de amida pode introduzir-se segundo o método descrito por Y. Sasaki e D.H. Coy, Peptides 8(1), 1987, págs. 119-121. Os derivados peptídeos que contém um grupo amino derivado de mono ou di hexapiranoses podem preparar-se mediante um re-ordenamento de Amadori, essencialmente aplicando o método descrito por R. Albert et al., Life Sciences 53, 1993, págs. 517-525. A glicose, a galactose, a maltose, a lactose ou a celobiose são exemplos de mono ou di hexapiranoses 13 adequadas. Os derivados utilizados como materiais de partida na síntese também podem obter-se comercialmente e, em caso necessário, estão fornecidos de grupos de protecção adequados; ou os materiais de partida empregados para preparar a metade "A" na fórmula geral I podem-se preparar mediante métodos conhecidos e pode-se proteger opcionalmente de uma forma conhecida per se. Entre os sais de adições ácidas farmaceuticamente aceitáveis dos compostos da fórmula I encontram-se as que se preparam reagindo o peptídeo com um ácido inorgânico o orgânico como o ácido hidroclorhídrico, hidrobrómico, sulfurico, acético, fosfórico, láctico, maléico, itálico, cítrico, glutárico, glucónico, metanosulfónico, salicílico, succínico, tartárico, toluenosulfónico, trifluoracético, sulfámico e fumárico.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que inclui, como ingrediente activo, um composto da fórmula geral I ou um derivado de sal farmaceuticamente aceitável junto a um suporte ou diluente farmaceuticamente aceitável.

Os compostos farmacêuticos que contém um composto da presente invenção podem preparar mediante técnicas convencionais, por exemplo, como se descreve em Remington's Pharmaceutical Sciences. 1985. Os compostos podem aparecer na forma convencional, por exemplo em cápsulas, comprimidos, spray, soluções, suspensões ou aplicações tópicas. O suporte farmacêutico ou diluente empregado pode ser um sólido convencional ou um suporte líquido. A lactose, terra Alba, sucrosa, ciclodextrina, talco, gelatina, Agar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico ou éteres de alquilo inferior de celulose são exemplos de suportes sólidos. O xarope, azeite de amendoim, azeite de azeitona, fosfolípidos, ácidos gordurosos, aminas de ácido gorduroso, polioxietileno e água são exemplos de suportes líquidos. 14

De forma parecida, o suporte ou diluente pode incluir qualquer material para a liberação continuada conhecido na técnica, como o monoestearato de gliceril ou diestearato de gliceril, só ou misturado com uma cera.

Empregando-se um suporte sólido para a administração oral, a preparação pode ser preparada em pílulas, numa cápsula de gelatina dura, em pó ou em forma de granulado ou pode ter forma de pílula ou de pastilha. A quantidade de suporte sólido variará amplamente porém normalmente será por volta de 25 mg a 1 g. Uma pastilha normal que se prepare mediante técnicas de disposição em pastilhas convencionais pode conter: Núcleo:

Composto activo (como composto livre ou derivado de 100 mg sal)

Dióxido de silicone coloidal (Aerosil®) mg

Celulose, microcrist. (Avicei®) 70 mg

Goma de celulose modificada (Ac- Di -Sol) 7,5 mg

Estearato de magnésio Revestimento: HPMC aprox. 9 mg *Mywacett™9-40 T aprox. 0,9 mg *monoglicérido acilado empregado como plastificador para o revestimento da película

Se se utilizar um suporte líquido, a preparação pode ser em forma de xarope, emulsão, cápsula de gelatina mole ou líquido estéril injectável como uma suspensão ou solução de líquido aquoso ou não aquoso.

Para a administração nasal, a preparação pode conter um composto da fórmula I dissolvido ou suspendido em suporte líquido, em particular um suporte aquoso, para aplicação mediante aerossol. O suporte pode conter aditivos como agentes de solubilização, por exemplo propilenoglicol, surfactivo como o ácido de sais 15 de bílis ou os éteres de álcool de polioxietileno elevado superiores, aumentadores da absorção como a lecitina (fosfatidilcolina) ou a ciclodextrina, ou conservantes como os parabenos.

Geralmente, os compostos da presente invenção dispensam-se em dose unitária que contém 0,0001-100 mg de ingrediente activo junto a um suporte farmacéuticamente aceitável por unidade de dosagem. A dosagem adequada dos compostos segundo esta invenção é de 1-500 mg/dia, por exemplo ao redor de 100 mg por dose, quando se administra como medicamento a pacientes, por exemplo, seres humanos.

Foi demonstrado que os compostos da fórmula geral I possuem a capacidade de liberar a hormona de crescimento endógeno in vivo. Como consequência disto, os compostos podem utilizar-se no tratamento de estados que requeiram um aumento dos níveis de hormona de crescimento no plasma como no caso das pessoas com deficiência hormona de crescimento ou em pacientes maiores ou no gado.

Deste modo, em um aspecto concreto, a presente invenção refere-se a uma composição farmacêutica que estimula a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária, a composição inclui, como ingrediente activo, um composto da fórmula geral I ou um derivado de sal farmacéuticamente aceitável junto com um suporte ou diluente farmacéuticamente aceitável.

Em outro aspecto, a presente invenção refere-se a um método que estimula a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária, o método inclui a administração a um sujeito que necessite uma quantidade eficaz de um composto da fórmula geral I ou um derivado de sal farmacéuticamente aceitável.

Em outro aspecto ulterior, a presente invenção refere-se ao emprego de um composto da fórmula geral I ou a um derivado de sal farmacéuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para estimular a liberação da hormona de crescimento desde pituitária.

Os expertos na matéria sabem que os empregos atuais e potenciais da hormona de crescimento em seres humanos são variados, e numerosos. Antecipou-se que os compostos da fórmula I podem administrar para objectivos que estimulam a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária e com o que teriam efeitos ou empregos similares aos da mesma hormona de crescimento. Os usos da hormona de crescimento podem resumir-se da seguinte forma: A estimulação da liberação da hormona de crescimento em pessoas mais velhas; a prevenção de efeitos secundários catabólicos de glucocorticoides, o tratamento da osteoporose, a estimulação do sistema imunológico, a aceleração da cicatrização de uma ferida, a aceleração da cura de uma ffactura de osso, o tratamento do atraso do crescimento, o tratamento do falho ou a insuficiência renal que resultam do atraso do crescimento, o tratamento da pequena estatura fisiológica que inclui a hormona de crescimento para meninos com déficit e com pequena estatura associada a doença crónica, o tratamento da obesidade e o atraso do crescimento associado com a obesidade, o tratamento do atraso do crescimento associado com o síndrome Prader Willi e o síndrome de Tumer; que acelera a recuperação e a hospitalização de pacientes com queimaduras; o tratamento do atraso do crescimento intrauterino, displasia esquelética, hipercortisolismo e síndrome de Cushing; a indução da liberação da hormona de crescimento pulsátil; a substituição da hormona de crescimento em pacientes estressados, o tratamento de osteocondrodisplasias, o síndrome Noonan, esquizofrenia, depressões, a doença de Alzheimer, ferida de cicatrização retardada e privação psicosocial, o tratamento da disfunção pulmonar e a dependência do respirador, a atenuação das respostas de proteínas catabólicas depois de cirurgia maior, caquexia redutora e perda da proteína devido a doenças crónicas como o cancro ou o sida; o tratamento da hiperinsulinemia incluído a nesidioblastose, tratamento adjunto para a indução à ovulação; para estimular o desenvolvimento tímico e impedir o declive refreado com a idade da função

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tímica, o tratamento de pacientes inmunosuprimidos, uma melhora da força muscular, a mobilidade, a manutenção da espessura da pele, homeostase metabólica, homeostase renal nos anciãos frágeis, a estimulação dos osteoblastos, remodelação dos ossos e o crescimento da cartilagem, estimulação do sistema imunológico em animais de companhia e tratamento de desordens devidos a idade em animais de companhia, crescimento acelerado no gado e estimulação do crescimento da lã nas ovelhas.

Para todo o indicado anteriormente, a dosagem pode variar dependendo do composto da fórmula I empregado, no modo de administração e no tratamento que se deseje. Mas, geralmente, pode-se administrar diariamente a pacientes e animais em níveis de dosagem que oscilem entre 0,0001 e 100 mg/kg do peso corporal para obter uma liberação eficaz da hormona de crescimento endógeno. Normalmente, a forma de dosagem adequada para a administração oral ou nasal é por volta de 0,0001 mg a 100 mg, preferentemente de 0,001 mg a 50 mg dos compostos da fórmula I misturada com um suporte ou diluente farmacéuticamente aceitável.

Os compostos da fórmula I podem ser administrados na forma de sal de adição ácida farmacéuticamente aceitável ou, em caso necessário, como um metal alcalino ou metal alealinotérreo ou um sal de alquilamonio inferior. Achamos que essas formas de sal mostram aproximadamente a mesma ordem de actividade que a formas de base livres.

Opcionalmente, a composição farmacêutica da invenção pode compreender um composto da fórmula I combinado com um ou mais compostos que mostram uma actividade diferente, por exemplo, um antibiótico ou outro material farmacológicamente activo. Este pode ser outro secretagogo, como GHRP (1 ou 6) ou GHRH ou um derivado semelhante, uma hormona de crescimento ou um derivado semelhante ou uma somatomedina como IGF-1 ou IGF-2. 18 O itinerário de administração pode ser qualquer itinerário que transporte eficazmente o composto activo ao lugar apropriado ou onde se deseja que actue, como uma administração oral, nasal ou parenteral, é preferível o itinerário oral. Além disso, o uso farmacêutico dos compostos da fórmula I, estes podem ser instrumentos in vitro úteis para investigar a regulação da liberação da hormona de crescimento.

Os compostos da fórmula I também podem ser instrumentos in vivo úteis para avaliar a capacidade que tem a pituitária para liberar a hormona de crescimento. Por exemplo, as amostras de soro tomadas antes e depois da administração destes compostos a seres humanos podem ser estudadas em relação com a hormona de crescimento. A comparação da hormona de crescimento em cada amostra de soro determina directamente a capacidade da pituitária dos pacientes para liberar a hormona de crescimento.

Os compostos da fórmula I podem ser administrados a animais comercialmente importantes para aumentar o nível e alcance do seu crescimento, e para aumentar a produção de leite. Métodos farmacológicos

Pode-se avaliar in vitro a eficácia e a força dos compostos da fórmula I na hora de liberar a hormona de crescimento em somatotrofos de rato primária.

Os somatotrofos de rato primária podem preparar essencialmente como foi descrito previamente (Chen et al., Endocrinology 1991, 129, 3337-3342 e Chen et al., Endocrinology 1989, 124, 25 2791-2798). Matam-se os ratos rapidamente decapitando-os. Em seguida extrai-se-lhes a pituitária. Digerem-se as pituitárias com um 0,2% de colágenos e um 0,2% de hialurinidase numa solução equilibrada de sal Hanks. Volta-se a suspender as células em um meio Dulbecco's Modified Eagle's que conta um 0,37% de NaHC03, um 10% de soro de cavalo, um 2,5% de soro de bezerro fetal, um 1% de aminoácidos não essenciais, um 1% de glotamina e um 1% de penicilina/estreptomícina e se

I 19 ajusta a 1,5 x 105 células/ml. Coloca-se um ml desta suspensão em cada recipiente de uma placa de 24 recipientes e deixa-se durante 2-3 dias antes de levar a cabo as experiências de liberação.

No primeiro dia de experiências, lavam-se as células duas vezes com o meio acima indicado que contém 25 mM de HEPES, um pH de 7.4. A liberação da hormona de crescimento inicia-se agregando o meio que contém 25 mM de HEPES e o composto de prova. A incubação leva-se a cabo durante 15 minutos a 37°C. Trás a incubação, calcula-se a hormona de crescimento liberada no meio mediante um RIA Standard.

Pode-se avaliar os efeitos in vivo dos compostos da fórmula I sobre a liberação da hormona de crescimento em ratos fêmea anestesiadas com pentobarbital como foi descrito previamente (Bercu et al. Endocrinology 1991, 129, 2592-2598). Rapidamente anestesiam-se os ratos machos adultos de Sprague-Dawley com 50 mg/kg ip de pentobarbital. Depois de que foram anestesiados completamente os ratos, implanta-se uma cânula de traqueotomia e cateteres na artéria carótida e na veia jugular. Depois de 15 minutos de recuperação, foi tomada uma amostra de sangue a tempo 0. Subministra-se por via intravenosa os secretagogos da pituitária e colocam-se as mostras de sangue da artéria em gelo durante 15 minutos e, a continuação, centrifugam-se durante 2 minutos a 12,000 xg. Decanta-se o soro e determina-se a quantidade de hormona de crescimento mediante RIA Standard. A invenção também vem ilustrada nos exemplos seguintes que não pretendem limitar em modo algum o objectivo da invenção tal e como se reivindica.

As abreviaturas empregadas em toda esta descrição e nos exemplos indicam as estruturas seguintes:

Abreviaturas para os resíduos aminoácidos não naturais:

Tic

3Pyal Phe(40Me)

Phe(4-NH!)

NH,

Phe(4-F)

N

O hPhe

Hyp

O

A. N-Bzl-Gly V °

N-( fenetil’>GlyN^r O

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Abreviaturas utilizadas para substituições de enlace peptídeo. -N-Me- O CH3

^(CHiNH) TCCHjNCMe)) xch2/ NH 7 CH3

Abreviaturas utilizadas para os grupos de protecção:

Boc-

Fmoc- Q-Z-

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Os compostos preparados nos exemplos seguintes isolaram-se como os sais de ácido trifluoroacético (TFA).

Exemplo 1 H-Ala-His-D-2Nal-D-Trp-Lis-NH2

Sintetizou-se o peptídeo do título segundo a estratégia Fmoc em um sintetizador peptídeo 431A de Applied Biosystems numa escala de 0,22 mmol que emprega os protocolos FastMoc UV proporcionados pelo fabricante nos que se utilizam acoplamentos mediados HBTU (2-( 1 H-Benzotriazo 1-1-11)-1,1,3,3 hexafluorofosfato de tetrametiluronio) em NMP (N-metilpirrolidona) e monitorização de UV da desprotecção do grupo de protecção Fmoc. A resina inicial empregada para conseguir a síntese foi 559 mg de resina 4-((2',4'-dimetoxifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenossi (Novabiochem, Bad Soden, Alemanha, cat. #: 01-64-0013) com uma capacidade de substituição de 0,39 mmol/g. Os derivados dos aminoácidos protegidos utilizados foram Fmoc-Lis(Boc)-OH, Fmoc-D-Trp-OH, Fmoc-2Nal-OH, Fmoc-His(Trt) e Fmoc-Ala-OH. O peptídeo dividiu-se a partir de 434 mg de resina peptídica agitando-a durante 180 minutos à temperatura ambiente junto com uma mistura de 4 ml de TFA (ácido trifluoroacético), 300 mg de fenol, 100 μΐ de etanoditiol, 200 μΐ de tioanisol e 200μ1 de H20. Filtrou-se a mistura da dissociação e concentrou-se a 23 η. filtração a 1 ml mediante uma corrente de nitrogénio. Precipitou-se o peptídeo total a partir deste azeite com 45 ml de éter dietílico e lavou-se 3 vezes com 50 ml de éter dietílico.

Secou-se e purificou o peptídeo total mediante HPLC semipreparativo sobre uma coluna de 20 mm x 250 mm coberto com 7μ de sílica C-18 que foi pré-equilibrado com um 15% de CH3CN em 0,05M de (NH4)?S04, que se ajustou a um pH de 2.5 com 4 M de H2SO4. Dissolveu-se o peptídeo total em 2 ml de CH3CN ao 70%/ TFA ao 0,1% em H20 e diluiu-se a 100 ml com H20. Dividiu-se esta solução em duas porções iguais e injectou-se cada uma delas na coluna em duas operações separadas. Eluiu-se a coluna com um gradiente de 15%-25% de CH3CN em 0,05M de (NH4)2S04> com um pH de 2.5 a 10 ml/min durante 47 minutos a 40 °C. Recolheu-se 0 peptídeo que continha as fracções, diluiu-se com 3 volumes de H20 e aplicou-se a um cartucho Cl 8 de Sep-Pak® (partículas de águas #:51910) que se equilibrou com um 0,1% de TFA. Eluiu-se o peptídeo a partir do cartucho de Sep-Pak® com um 70% de CH3CN um 0,1% de TFA e isolou-se do eluato mediante liofilização trás 0 diluição com água. Obteve-se um rendimento de 19,0 mg. O produto final obtido caracterizou-se por um RP-PLC analítico (tempo de retenção) e pela espectrometria da massa de desabsorção do plasma (massa molecular). A espectrometria da massa correspondia com a estrutura desejada dentro do erro experimental do método (espectrometria da massa ± 0,9 amu).

As análise RP-PLC levaram-se a cabo utilizando a detecção UV a 214 nm e uma coluna de sílica C-18 Vydac 218TP54 4,6mm x 250mm 5μ (The Separations Group, Hesperia) que se eluiu a 1 ml/min a 42 °C. Foram utilizado duas condições diferentes de eluição:

Al: Equilibrou-se a coluna com um 5% de CH3CN em um tampão composto por 0,1M de (NH4)2S04, que se ajustou a um pH de 2.5 24

com 4 M de H2SO4 e eluiu-se mediante um gradiente de um 5% a 60% de CH3CN no mesmo tampão durante 50 minutos. BI: Equilibrou-se a coluna com um 5% de CH3CN / um 0,1% de TF A / H20 e eluiu-se mediante um gradiente de um 5% de CH3CN / 0,1% de TFA / H20 a um 60% de CH3CN / 0,1% de TFA / H20 durante 50 minutos.

Descobriu-se que 0 tempo de retenção utilizando as condições de eluição Ale BI era de 17,88 minutos e de 20,15 minutos, respectivamente.

Exemplo 2

H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH

Sintetizou-se 0 peptídeo do título mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 com a exceção de que se utilizaram 450 mg de resina Fmoc-Lys(Boc)-Wang (Novabiochem, Bad Soden, Alemanha, cat. # 04-12-2014) com uma capacidade de substituição de 0,49 mmol/g como resina inicial. Trás a dissociação de 560 mg de resina peptídica e a purificação de 1/ 2 do produto resultante total como se descreve no exemplo 1, obteve-se um rendimento de 25,9 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que 0 tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 18,30 minutos e 20,15 minutos, respectivamente.

Exemplo 3 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)aminopentano

Sintetizou-se a resina peptídica H-Ala-His(Trl)-D-2Nal-P-Phe-Sasrin mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 com a excepção de que se utilizaram 262 mg de resina Sasrin (2-Metossi-4-alcoxibenzil resina de etoxilato de álcool) (Bachem, Bubendorf, Suíça cat. # D-1295) com uma capacidade de substituição de 0,96 mmol/g e 0 protocolo empregado para acoplar 0 primeiro 25 resíduo aminoácido a resina foi um acoplamento catalisado de 4-dimetilaminopiridina do anidrido simétrico pré-formado contínuo do recobrimento dos grupos OH de resíduos na resina com anidrido benzóico. Dividiu-se o aminopentano do peptídeo parcialmente protegido 5-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH) a partir de 56 mg de resina H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin agitando-o durante 20 h a temperatura ambiente com 0,5 ml de 1,5-diaminopentano. Separou-se a resina utilizada mediante filtração e extraiu-se com 1 ml de DMF. O filtrado combinado e o extracto agregaram-se lentamente a uma mistura de 2,5 ml de CH3CN e 10 mil M de ácido hidroclorídrico sob agitação e, trás o diluição a 50 ml com 25% de CH3CN, manteve-se a mistura a 4 °C durante 100 h (para conseguir a dissociação da protecção do título sobre a histidina). Diluiu-se então a mistura a 200 ml com H20 e filtrou-se.

Purificou-se o peptídeo total mediante HPCL semipreparativo por injecção directa sobre a coluna de 1/2 deste filtrado utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 1. O rendimento foi de 4,5 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 18,43 minutos e 20,75 minutos, respectivamente.

Exemplo 4 (2S)-(H-Ala-His~D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol Sintetizou-se a resina peptídica H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 3 a partir dc uma resina Sasrin com uma capacidade de substituição de 0,96 mmol/g.

Dividiu-se o (2S)-(H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol do peptídeo parcialmente protegido a partir de 200 mg da resina H-Ala-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin agitando a resina peptídica durante 20 h a

temperatura ambiente com uma mistura de 1,2 ml de THF (tetrahidrofurano), 0,2 ml de etano, 23 mg de LiBr e 10 mg de NaBH4. A continuação agregaram-se-lhe 200 μΐ de H20, 200 μΐ de ácido acético e 4 ml de etano. Extraíram-se os resíduos de resina mediante filtração, diluiu-se o filtrado com 50 ml de H20 e depois liofilizou-se. O pó resultante submeteu-se a uma dissociação e a uma purificação TFA como se descreve no exemplo 1. Tivemos que repetir a purificação com o objectivo de obter um produto suficientemente puro. Obteve-se um rendimento de 5,8 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 17,82 minutos e 20,02 minutos, respectivamente.

Exemplo 5 5 H-Ala-Hisy(C2N)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

Sintetizou-se a resina peptídica H-D-2Nal-D-Phe-Lys-(Boc)Resin mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 começando de 556 mg de resina 4-((2',4'-dimetoxifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenossi (Novabiochem AG Suíça, cat. #: 01-64-0013) que tem uma capacidade de substituição de 0,34 mmol/g. Utilizaram-se os seguintes derivados de aminoácidos protegidos: Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-Oh e Fmoc-2Nal-OH.

Foram introduzidos os isósteros de enlace dos peptídeos -CH2NH- segundo Sasaki, Y. e Coy, D. H., PEPTIDES 8(1) 119-121. 1987.

Obteve-se Fmoc-His(Trt)-aldeido a partir de 820 mg do correspondente Ν,Ο-hidroxomato segundo Fehrentz, J. A. e Castro. B., SYNTHESIS 676-678. 1983. Dissolveu-se o aldeído total em 8 ml de DMF e dividiu-se em duas porções. Agregou-se a primeira porção a uma suspensão agitada de 610 mg de H-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin em 10 ml de um 1% de ácido acético em DMF a temperatura ambiente. A continuação agregou-se 57 mg de NaCNBH3 (85% 27

puro) dissolvido em 1 ml de DMF e continuou-se agitando durante 60 minutos. Depois disto, isolou-se a resina peptídica mediante filtração e lavou-se com um 1% de ácido acético em DMF. Voltamos a suspender a resina peptídica em 10 ml de um 1% de ácido acético em DMF e agregou-se-lhe a segunda porção de Fmoc-His(Trt)-aldeído. Voltaram a agregar 57 mg de NaCNBH3 (85% puro) que foi dissolvido em 1 ml de DMF a temperatura ambiente e agitou-se a mistura durante 18 h.

Depois deste passo de alquilação reductiva, isolou-se a resina peptídica mediante filtração e lavou-se com um 1% de ácido acético em DMF e completou-se o alargamento da cadeia utilizando o sintetizador peptídeo segundo os procedimentos de anteriormente e utilizando os derivados do aminoácido protegido Fmoc-Ala-OH.

Dividiu-se o peptídeo a partir de 550 mg de resina peptídica e purificou-se o peptídeo total mediante HPLC semipreparativo utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 1. Obteve-se um rendimento de 11,3 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 13,35 minutos e 17,38 minutos, respectivamente.

Exemplo 6 (n-Propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 e(n-propil)2-His-D-2-Nal-D-Phe-Lys-NH2

Sintetizou-se a resina péptida H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lis(Boc)-Resin mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 começando da resina 4-((2,,4’-dimetoxifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenossi (Novabiochem AG Suíça, cat. #: 01-64-0013) que tem uma capacidade de substituição de 0,34 mmol/g. Os derivados de aminoácidos protegidos utilizados foram Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-D-Phe-OH, Fmoc-2Nal-OH e Fmoc-His(Trt)-OH. 28

Agregaram-se 13 ml de n-propanal a uma suspensão agitada de 150 mg de H-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Lys-Resin em 3,3 ml de um 1% de ácido acético em DMF à temperatura ambiente. A continuação agregou-se 16,8 mg de NaCNBH3 (85% puro) dissolvido em 0,5 ml de DMF e seguiu-se agitando durante 6 h. Depois deste passo de alquilação reductiva, isolou-se a resina peptídica, lavou-se em um filtro de funil com DMF e CH2CI2 e a continuação secou-se ao vazio. Misturaram-se as duas resinas peptídicas resultantes e uma mistura de peptídeo mono-n-propilo e di-n-propilo não alquilado dividiu-se da resina peptídica resultante de 300 mg. Separaram-se e purificaram-se os peptídeos mediante HPLC semipreparativo utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 1. Obteve-se um rendimento de 6,54 mg de n-propil-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 e 5,59 mg de (n-propil)2-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2.

Os produtos finais caracterizaram-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que para (n-propil)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 16,45 minutos e 19,92 minutos, respectivamente.

Exemplo 7 H-Ala-Tic-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 A partir de 620 mg de resina 4-metil BHA (Bissendorf Biochemicals, Hannover, Alemanha, cat. #: RMIS50) que tem uma capacidade de substituição de 0,72 mmol / g, sintetizou-se o peptídeo segundo a estratégia Boc em um sintetizador peptídeo 430A de Applied Biosystems utilizando os protocolos de enlace simples com uma escala de 0,5 mmol proporcionados pelo fabricante que empregam enlaces simples com os anidridos simétricos pré-formados cm DMF. Ajustaram-se os protocolos a um tempo de enlace de 60 minutos. Utilizou-se um tempo de enlace dupla com 2 X 60 minutos para o N-terminal Ala. Os derivados de aminoácidos protegidos empregados na síntese foram Boc-Lys(2-cloro-Z)-OH, Boc-D-Phe-OH, Boc-D-2Nal-OH, Boc-Tic-OH e Boc-Ala-OH. 29

Dividiu-se o peptídeo a partir de 486 mg da resina peptídica agitando-o durante 75 minutos a 0 °C com uma mistura de 4,5 ml de HF e 500 μΐ de m-cresol. O HF se evaporou a 0 °C mediante uma corrente de nitrogénio. O peptídeo precipitou-se a partir do azeite restante junto com a resina utilizada com 50 ml de éter dietílico e lavou-se 2 vezes com 50 ml de éter dietílico. Trás o secado, extraiu-se o peptídeo precipitado com 10 ml de H20 que continha 4 gotas de ácido acético. Diluiu-se o extracto a 100 ml de H2O.

Purificou-se 0 peptídeo total a partir de 2 X 18 ml do extracto diluído mediante duas operações de HPLC semipreparativo utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 1.0 rendimento foi de 17,3 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. A análise RP-PLC utilizando as condições AI e BI deu em uns tempos de retenção de 27,37 minutos e 29,50 minutos, respectivamente.

Exemplo 8 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3-fenilpropilamina

Extrai-se o grupo Fmoc mediante tratamento com um 20% de piperidina em NMP durante 20 minutos a partir de 580 mg de resina 4-((2',4'-dimetossifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenossi (Novabiochem AG Suíça, cat. #: 01-64-0013) que tem uma capacidade de substituição de 0,43 mmol / g. Lavou-se a resina com DMF e com CH2CI2 e alquilou-se com Fmoc-D-Fealdeido utilizando o procedimento de alquilação anaeróbio descrito no exemplo 5. A continuação, isolou-se a resina peptídica mediante filtração e lavou-se com um 1% de ácido acético em DMF em um filtro de funil e completou-se 0 alargamento do cadeia utilizando o sintetizador peptídeo como se descreve no exemplo 1 e utilizando os derivados de aminoácidos protegidos Fmoc-D-2NaI-OH, Fmoc-His(Trt)-OH e Fmoc-Ala-OH.

Dividiu-se o peptídeo a partir de 301 mg de resina peptídica e purificou-se o peptídeo total mediante HPLC semipreparativo utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 1. Obteve-se um rendimento de 23,92 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 19,33 m

Exemplos 9-54

Ex. Péptido Preparado utilizando um procediment o similar ao do Exemplo Tempo de retenção RP-HPLC para a condição AI (Ex. D Tempo de retenção RP-HPLC para a condição BI (Ex. D 9 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys- nh2 1 12,53 15,43 10 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 28,13 29,62 11 H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 18,02 20,15 12 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe- nh2 1 28,48 29,48 13 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D- Phe-NH2 1 26,65 27,75 14 H-Ala-His-D-2Nal-Phe-Lys- nh2 1 21,85 23,12 15 (3-(4-Imidazolilo)propionilo)- D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,7 16 (propionilo)-His-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 1 22,2 23,77 17 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 1 21,7 23,08 18 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- NH)hexano 3 34,11 35,78 19 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys- nh2 1 14,52 16,7 20 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 21,97 23,23 21 ((propionilo)-His-D-2Nal-D-Phe-NII) hexano 3 37,17 39,47 22 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- 3 19,3 21,57 31 NH)hexilamina 23 H-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 15,88 18,25 24 (5-Aminopentanoilo)-His-D- 2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 17,8 19,98 25 H-D-Lys-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 17,07 19,62 26 H-Ala-His-D-2Nal-D-Tic-Lys- nh2 1 19,12 20,78 27 H-D-Lys-Phe-2Nal-D-His-D- Ala-NH2 1 18,15 20,48 28 (5-Aminopentanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 20,67 22,45 29 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 19,57 21,53 30 (Propionilo)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 26,7 27,92 31 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 17,83 20,3 32 H-Ala-3-Pyal-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 18,15 20,18 33 (n-Butilo)-Ala-His-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 6 19,55 - 34 (n-Octilo)-Ala-His-D-2Nal-D- Phe-Lys-NH2 6 27,88 24,52 35 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe\]/(CH2NH)Lys- NH2 5 17,97 20,83 36 (3-Aminoetilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 22,42 24,13 37 (3-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 23,62 23,97 38 ((4-Imidazolilo)acetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 20,42 22,22 39 (3 -(4-Imidazolilo)acriloilo)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 21,25 23,32 40 (4-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 22,45 41 (Trans-4- aminometiciclohexanoilo)-D- 2Nal-D-Phe-LyS-NH2 1 22,07 23,67 42 2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- NH)-etilamina 3 18,6 20,25 43 (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- 3 30,18 32,18 NH)etilo)benceno 44 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- NH)metilo)bencilamina 3 19,63 21,55 45 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-NH)-3- fenilpropilamina 4 21,55 23,57 46 2-(H-Ala-His-D-2Nal- NH)etilamina 3 25,52 - 47 H-D Phe Ala-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 27,82 29,43 48 H-Ala-D-Phe-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 25,62 27,22 49 H-Ala-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 7 26,42 24,93 50 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 17,42 20,13 51 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys- nh2 1 17,55 19,8 52 H-Tyr-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 19,9 21,22 53 (Piperidina-4-carbonilo)-D- 2Nal-D-Phe-Lys-NH2 1 20,4 22,32 54 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2 1 19,20 -

Exemplo 55 ((Propionil)-D-2Nal-D-Phe-NH)hexano

Sintetizou-se a resina peptídica (Propionil)-D-2Nal-D-Phe-Sasrin utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 3 a partir de uma resina Sasrin com uma capacidade de substituição de 0,96 mmol/g.

Foram submetidos a amolnólise 105 mg da resina peptídica resultante. Dividiu-se o peptídeo ((Propionil)-D-2Nal-D-Phe-Nh)hexano a partir de 105 mg da resina Propionil-D-2Nal-D-Phe- Sasrin agitando-o durante 20 h a temperatura ambiente com 1 ml de n-hexilamina. Separou-se a resina utilizada mediante filtrado e extraiu-se com 1 ml de DMF. Agregou-se íentamente o filtrado e o extracto combinado a 8 ml de 1 M de ácido hidroclorhídrico agitando-o constantemente. Dissolveu-se o precipitado resultante mediante a

adição de aproximadamente 70 ml de CH3CN e, a continuação, volveu-se a precipitar agregando 20 ml de H2O. Separou-se 0 precipitado mediante filtração, lavou-se com H20 e secou. O rendimento foi de 12 mg.

Este produto caracterizou-se como se descreve no exemplo 1 com excepção de que só numa das análises HPLC se empregaram as condições similares a BI j, salvo que se utilizou um gradiente de um 0,1 % de TFA / H2O a 90°O CH3CN / 0,1% de TFA / H20 durante 50 minutos. Descobriu-se que o tempo de retenção era de 35,73 minutos.

Exemplo 56 (3 -Metilaminometilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Ly s- NH2

Sintetizou-se a resina peptídica (3-Aminometilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-LyS(Cl-Z)-MBHA mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 7 a partir de uma resina MBHA com uma capacidade de substituição de 0,72 mmol/g. Desnaturalizou-se a resina peptídica resultante de acordo com Kaljuste, K. e Unden, A., Int. J. Peptide Protein Res. 42 118-124.1993. Misturaram-se 300 mg de resina durante 2h com uma mistura de 8 ml de DCM, 150 μΐ de DIEA (dietil-isopropilamina) e 39mg 4,4 de cloruro dimetoxiditil (DOD-C1) e a continuação isolou-se mediante filtração e lavou-se com DCM e com DMF. Misturou-se então a resina peptídica protegida DOD com 18 ml de uma solução de um 3,7% de formaldehído em DMF, à continuação agregaram-se 0,18 ml de ácido acético e 180 mg de NaCNBH3 e continuou-se agitando a mistura durante 18h. Isolou-se a resina mediante filtração e lavou-se com DMF e com DCM. Acto contínuo, extraiu-se a protecção DOD mediante o tratamento com 2 x 3 ml de DCM/TFA 1:1 durante 5 minutos + 30 minutos respectivamente e se lavou a resina peptídica com DCM; o continuação, secou-se ao vazio.

Dividiu-se o peptídeo N-desnaturalizado resultante a partir de 370 mg da resina resultante utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 7 e 34

purificou-se e caracterizou tal como se descreve no exemplo 1. O rendimento foi de 17,3 mg.

As análises RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram em uns tempos de retenção de 22,83 minutos e 24,60 minutos, respectivamente.

Exemplo 57 (3-Dimetilaminometilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 Sintetizou-se a resina peptídica (3-Aminometilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys(Cl-Z)-MBHA mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 7 a partir de uma resina MBHA com uma capacidade de substituição de 0,72 mmol/g. A continuação misturou-se 650 mg da resina peptídica resultante junto com 20 ml de um 1% de ácido acético em DMF e 45 μΐ de um 3,7% de solução de formaldehído em DMF. Depois agregou-se 55 mg de NaCNBH3 (85%) e continuou-se agitando durante 18h. Isolou-se a resina mediante filtração e lavou-se com DMF, DCM/MeOH 6:4 e com DCM. A mistura resultante dos peptídeos N,N-di-desnaturalizados dividiu-se a partir de 631 mg da resina resultante utilizando um procedimento similar ao descrito no exemplo 7 e purificou-se e caracterizou como se descreve no exemplo 1. O rendimento foi de 8,58 mg. A análise RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram em uns tempos de retenção de 31,58 minutos e 33,00 minutos, respectivamente.

Exemplo 58 (3 - Amino-3 -metilbutanoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2

Sintetizou-se a resina peptídica H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 a partir de 2 g de resina4-((2',4-dimetoxifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenoxi (resina Rink) (Novabiochem, Bad 35

Soden, Alemanha, cat. #: 01 64 0013) com uma capacidade de substituição de 0,39 mmol/g.

Suspenderam-se 500 mg da resina peptídica resultante (0,15 mmol) em 4 ml de DCM/MeOH 1:1. Agregaram-se-lhes 42 μΐ de trietilamina (0,3 mmol) e depois de que se esfriasse a 0 °C, agregou-se 31 mg (0,158 mmol) de 2,2 dimetil-4-oxo-acetidina-l-sulfonilcloridro enquanto que se seguia agitando. Continuou-se com a agitação durante 20 minutos a 0 °C e durante 90 minutos à temperatura ambiente. Trás lavar a resina com DCM/MeOH 6:4 e seca-la ao vazio, dividiu-se o peptídeo total a partir da resina e purificou-se utilizando procedimentos similares aos descritos no exemplo 1. O rendimento foi de 41,81 mg.

As análises RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram em uns tempos de retenção de 21,35 minutos e 22,95 minutos, respectivamente.

Exemplo 59 (2S)-((3-Aminometilbenzoilo)\|/(CH2-NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol Sintetizou-se a resina peptídica H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Sasrin mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 3 a partir de 980 mg de resina Sasrin com uma capacidade de substituição de 0,87 mmol/g.

Alquilaram-se de forma reductiva 1,4 g desta resina com Boc-3-aminometil-benzaldehido e dividiu-se o peptídeo a partir de 1,0 g da resina resultante e purificou-se a metade do produto total utilizando procedimentos similares aos descritos no exemplo 5.0 rendimento foi de 18,46 mg.

As análises RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram em uns tempos de retenção de 14,78 minutos e 17,40 minutos, respectivamente.

Exemplo 60 (2-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- NH2.

Sintetizou-se a resina peptídica H-D-2Nal-D-Phe-Lys(Boc)-Rink mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 a partir de 2 g de resina 4-((2',4'- dimetoxifenil)-(Fmoc-amino)metil)-fenoxi (Rink resin) (Novabiochem, Bad Soden, Alemanha, cat. #: 01 64 0013) com uma capacidade de substituição de 0,39 mmol/g.

Misturaram-se 300 mg da resina peptídica resultante (0,096 mmol) durante 18h em 10 ml de DMF com 54 mg de ftaloil-2-aminometil-ácido benzóico (0,192 mmol), 182 mg de HBTU (0,480 mmol) y 164 μΐ de DIEA (0,96 mmol).

Trás lavar a resina com DMF, DCM/MeOH 6:4 e DCM e seca-la ao vazio, dividiu-se (Ftaloil-2-aminometilbenzoil)-D-2Nal-D-Phe-Lys NH2 a partir de 290 mg de resina peptídica agitando-o durante 180 minutos à temperatura ambiente com uma mistura de 3 ml de TFA, 225 mg de fenol, 75 μΐ de etanoditiol, 150 μΐ de tioanisol e 150 μΐ de H20. Filtrou-se a mistura dividida, lavou-se a resina restante com 1 ml de TFA e concentrou-se o filtrado a 1 ml mediante uma corrente de nitrogénio. Precipitou-se o peptídeo total a partir deste azeite com 50 ml de éter dietílico e lavou-se 3 vezes com 50 ml de éter dietílico. A continuação dissolveu-se o precipitado em 50 ml de H20 e liofilizou-se. O pó resultante misturou-se então com 0,5 ml de hidrato de hidracina em 5 ml de etano durante 6h a 70 °C e logo se diluiu com 50 ml de H20 e se liofilizou.

Dissolveu-se o produto liofilizado agregando 2 ml de ácido acético, 2 ml de etano e 100 ml de H20 e purifícou-se utilizando procedimentos similares aos de no exemplo 1. O rendimento foi de 9,43 mg

As análises RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram como resultado em uns tempos de retenção de 23,22 minutos e 25,05 minutos, respectivamente.

Exemplo 61

H-Aib-Hisy (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-OH

Sintetizou-se o peptídeo mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 5 com o excepção de que se utilizaram 1050 mg de resina Sasrin (resina de 2-metoxi-4-alcoxibencil álcool) (Bachem, Bubendorf, Suíça cat. # D 1295) com uma capacidade de substituição de 0,87 mmol/g e com o excepção de que o protocolo empregado para acoplar o primeiro resíduo aminoácido a resina foi um acoplamento catalisado 4-dimetilaminopiridina do anidrido simétrico pré-formado contínuo do recobrimento dos grupos OH de resíduos na resina com o anidrido benzóico. Trás a divisão de 752 mg de resina peptídica e a purificação de 7 /10 do produto total resultante como se descreve no exemplo 1, obteve-se um rendimento de 36,76 mg. O produto final caracterizou-se como se descreve no exemplo 1. Descobriu-se que o tempo de retenção utilizando as condições de eluição AI e BI era de 13,90 minutos e 17,42 minutos, respectivamente.

Exemplo 62 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

Sintetiza-se a resina peptídica H-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 56 a partir de uma resina MBHA com uma capacidade de substituição de 0,72 mmol/g.

Na continuação, utilizaram-se 458 mg desta resina para conseguir a síntese de H-Aib-His(Bom)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys(C 1 -Z)-MBhA mediante acoplamento com Boc-His(Bom)-OH e Boc-Aib-OH. Seguidamente dividiu-se o peptídeo desnaturalizado-N a partir de 469 mg da resina resultante, purificou-se 1/2 do peptídeo total e caracterizou-se como se descreve no exemplo 7. O rendimento foi de 23,5 mg. A análise RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram como resultado em uns tempos de retenção de 17,62 minutos e 19,95 minutos, respectivamente.

Exemplo 63 (Furfurilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

Sintetizou-se a resina peptídica H-Aib-His(Trt)-D-2Nal-D-Phe-Ly(Boc)-Rink mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 1 a partir da resina 4-((2',4,-dimetoxifenilo)-(Fmoc-amino)metilo)-fenoxi (Rink Resin) (Novabiochem, Bad Soden, Alemanha, cat. #: 01 64 0013) com uma capacidade de substituição de 0,43 mmol/g.

Misturaram-se 300 mg da resina peptídica resultante junto com 5 ml de um 1% de ácido acético em DMF e 410 ml de furano-2-aldeido. Agregaram-se 231 mg de NaCNBH3 (85%) trás 15 minutos e depois de 180 minutos. Seguimos agitando durante 18h. Foi isolada a resina mediante filtração e foi lavada com φ DMF, DCM/MeOH 6:4 e com DCM.

Dividiu-se o peptídeo N-alugado a partir de 319 mg da resina resultante, purificou-se e caracterizou-se como se descreve no exemplo 1.0 rendimento foi de 44,8 mg.

As análises RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram em uns tempos de retenção de 19,45 minutos e 22,23 minutos respectivamente.

Exemplo 64 N,N-di-(2R-Hidroxi-propilo)-3-aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 φ Sintetizou-se a resina peptídica (3-aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys(CI-Z)-MBHA mediante um procedimento similar ao descrito no exemplo 7 a partir de resina 4-metil-benzhidrilamina (MBHA) (Bissendorf Biochemicals, Hannover, Alemanha, cat. #: RMIS50) que tem uma capacidade de substituição de 0,72 mmol/g. A continuação misturaram-se 500 mg da resina peptídica resultante junto com 12,5 ml de um 1% de ácido acético em DMF e 410 μΐ dc 2(R)-(tetrahidropirano-2(R,S)-iloxi)propanal. Adiciona-se 213 mg de NaCNBH3 (85%) trás 5 minutos. Continuou-se agitando durante 18h. Isolou-se a resina mediante filtração e lavou-se com DMF, DCM/MeOH 6:4 e com DCM. 39

Dividiu-se o peptídeo Ν,Ν-di-alquilado a partir de 490 mg da resina resultante, purificou-se e caracterizou-se como se descreve no exemplo 7. O rendimento foi de 20,72 mg. A análise RP-PLC utilizando as condições AI e BI deram uns tempos de retenção de 23,40 minutos e 25,33 minutos, respectivamente.

Exemplo 65-110

Ex. Peptídeo Preparado usando um procedime nto similar ao do exemplo n° Tempo de retenção RP-HPLC para a condição Al(Ex.l) Tempo de retenção RP- HPLC para a condição Bl(Ex.l) 65 H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoilo)- D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 24,47 26,27 66 (4-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- D-Phe-Lys-NH2 1 22,22 23,5 67 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 19,90 21,45 68 (2 S)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-l,6-di- aminohexano 8 17,05 19,07 69 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe- NH)butilamina 3 18,65 20,08 70 3-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-propilo- amina 3 18,42 19,80 71 (3-Aminometilbenzoilo)-D- hPhe-D-Phe-Lys-NH2 7 20,33 21,95 72 (3- Aminometilbenzoilo)y(CH2NH) D-2Nal-D-Phe-LyS-NH2 5 14,17 17,23 73 (3 Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 7 25,30 26,58 74 (3-Amino-3-metilbutanoilo)-His- D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 58 18,12 20,20 75 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- N-Bzl-Gly-Lys-NH2 7 25,33 26,70 76 (2S)-((3-Aminometilbenzoilo)- 4 22,95 24,32 40 D-2Nal-D-Phe-NH)-6- aminohexanol 77 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- D-Thial-Lys-NH2 7 22,13 23,23 78 (2S)-(H-Aib-His\KCH2NH)D-2Nal-D-Phe- NH)-6-aminohexanol 59 12,83 17,27 79 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- D-3Pyal-Lys-NH2 1 15,10 16,87 80 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- D-Phe(4-F)-Lys-NH2 7 23,40 24,63 81 (3-Ammometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe(4- OMe)-Lys-NH2 7 22,50 23,90 82 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe- NH)etano 3 18,30 20,47 83 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 29,25 30,55 84 2-(H-Aib-His-D-2NaI-D-Phe- NH-(l-metilo-2- pirrolidinilo)etano 3 18,70 20,80 85 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(2- pirídilo)etano 3 19,20 20,83 86 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D- Phe-Lys-NH2 1 26,78 27,88 87 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly- nh2 1 20,48 22,23 88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala- nh2 1 21,65 23,38 89 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Om- nh2 1 18,43 20,05 90 (5-Aminometiltienilo-2- carbonilo)-D2Nal-D-Phe-Lys- nh2 1 22,32 23,65 91 H-Aib-His-D-2Nal-D-Pbe-D- Lys-NH2 1 18,50 20,00 92 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab- NH2 1 17,75 19,48 93 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phev(CH2NH)Lys- NH2 5 18,57 20,62 94 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N -Me-Lys -NH2 62 18,03 20,60 95 (3-Aminometiltienilo-2- 1 23,23 24,78 41 carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 96 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D- Phe-Lys-NH2 1 21,78 23,53 97 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys- N(Me)2 3 18,70 21,07 98 (3-Aminometilbenzoilo)-D-lNal-D-Lys- NH2 1 22,67 24,23 99 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys- nh2 1 18,17 20,40 100 (2-Piridilmetilo)-Aib-His-D- 2Nal-D-Phe-Lys-NH2 63 19,07 21,73 101 H-Aib-(3-aminometilbenzoilo)- D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 7 23,95 25,38 102 H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 18,53 20,38 103 (3R)-Piperidinacarbonilo)-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2 1 21,52 22,97 104 (2-(H-Aib-His-D-2Nal- NH)etilo)benceno 3 25,55 27,85 105 (2R-Hidroxipropilo)-Aib-His-D- 2Nal-D-Phe-Lys-NH2 64 18,15 20,28 106 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D- Phe\(/(CH2NH)Lys-NH2 5 22,00 23,95 107 (3-Aminometilbenzoilo)-N-Me- D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 62 23,27 24,72 108 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal- D-Phe-N-Me-Lys-NH2 67 22,60 23,98 109 H-D-Thr-His-D-2Nal-D-Phe- Lys-NH2. 7 17,75 19,83 110 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys- nh2 7 17,58 19,37

Em baixo mostram-se as estrutura dos peptídeos representativos da invenção. N,N-di-(2R-Hidroxipropilo)-(3-aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 42

3-(4-Imidazolilo)propionilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

H-Ala-3Pial-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 43

(Trans-4-aminometilcicloexanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

H-Ala-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 44 (3R)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

(2S)-(H-Aib-His((CH2NH)D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol

2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)( 1 -metil-2-pirrolidinilo)etano 46

(5-Aminometiltienilo-2-carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

(3-Aminometilo-tienilo-2-carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2

47 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-N-(fenetilo)-Gly-Lys-NH2

Exemplo 116

Levou-se a cabo um ensaio in vitro onde se empregaram células pituitárias dos ratos para estudar o efeito de diferentes secretagogos GH. Isolou-se o cultivo misto da célula pituitária, da pituitária anterior de ratos machos e cultivou-se durante 3 dias. Trás o lavado, foram estimulados as células durante 15 minutos e mediu-se a quantidade de GH segregada no sobrenadante do cultivo. O isolamento das células pituitárias de rato foi uma variante de O. Sartor et al., Endocrinoloev 116. 1985, págs. 952-957. Foram extirpadas as pituitárias de 250 g de ratos machos do tipo Sprague Dawlei depois foram decapitados. Foram extraídos os lóbulos intermédios do cérebro e o resto foi colocado no meio Grei junto com um 0,25% de glicose, aminoácidos não essenciais 2x e um 1% de BSA (tampão de isolamento). Cortaram-se as glândulas em pedaços pequenos e trasladaram-se para um frasco que continha 3 ml de tampão de isolamento + 11,5 mg de tripsina e 1000 pg de DNasa e incubou-se durante 35 minutos a 37°C, com um 95% de Oz e a 70 rotações por minuto. Lavaram-se os fragmentos 3 vezes mediante sedimentação no tampão de isolamento e aspiraram-se em células individuais utilizando uma pipeta Pasteur. Trás a dispersão, filtraram-se as células através de um filtro de nylon (160 pm) para eliminar o tecido não assimilado. Lavaram-se as células 3 vezes com o tampão 48 de isolamento junto com um inibidor de tripsina (0,75 mg/ml) e re-suspenderam-se em um meio de cultivo (DMEM junto com 25 mM de HEPES, 4mM de Glutámica, um 0,75% de bicarbonato sódico, um 2,5% de FCS, um 3% de soro de cavalo, um 10% de soro de rato, 1 nM de T3 e 40 pg/l de) até alcançar uma densidade de 2x105 células/ml. Foram inseridas as células em placas micro, 200, μΐ/pote e cultivaram-se durante 3 dias a 37°C e um 8% de C02.

Seguindo o período de cultivo, lavaram-se as células duas vezes com o tampão de estimulação (HBSS junto com um 1% de BSA, um 0,25% de D-glicose e 25 mM de HEPES) e pré-incubou-se durante 1 hora. A continuação, extraiu-se o tampão e agregou-se o tampão de estimulação novo que continha o peptídeo e incubaram-se as placas durante 15 minutos a 37°C e um 5% de C02. Recolheu-se e analisou-se o meio para conseguir o contido da hormona de crescimento do rato (rGH) em um estudo sobre a proximidade do centelha (SPA) como segue a continuação (SPA, essencialmente como se descreve em US 4,568,649, Hart e Greenwalt, Mol.Immunol. 16. 1979, págs. 265-269, ou Udenfríend et al., Proc.Natl.Acad.Sci. EUA 82.1985, págs. 8672-8676). O ensaio sobre rGH levou-se a cabo em placas Opti (placa de 96 potes) adequadas para que se efectue uma contagem directa em um Packards TopCount (contador de centelhas-β).

Protocolo do estudo: 40 μΐ de tampão 10 μ de mostra (tampão de estimulação incubado)

50 μΐ de 1251-rGH 50 μΐ de anti-rGH de coelho 50 μΐ de reactivo SPA (anticorpo anti-coelho)

Selam-se as placas e colocam-se sobre um agitador de placas durante 30 minutos, contínuo de 10 horas de incubação; a continuação, se deixa a 10-15°C e procede-se à contagem.

No SPA, uma rGH referida com um anticorpo de coelho anti-GH (anticorpo •primário) reage com um segundo anticorpo vinculado a fluomicroesferas (SPA Tipo IIRLA disponível em Amersham). Qualquer rGH radiomarcada que esteja vinculada ao anticorpo primário quedará imobilizada nas fluomicroesferas que, então, produzirão luz. A medição em um contador de centelhas-β permite calcular a quantidade de rGH radiomarcadas. A quantidade de rGH radiomarcadas vinculadas a as fluomicroesferas diminue à medida que aumente o contido de rGH da amostra.

Exn° Composto EC 50 (nM) Emax (% de GHRP-6) 3 H-Ala-His-D-2Nal-Dphe-NH-(CH2)5NH2 20 100 10 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2 90 51 H-Ala-His-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 10 85 76 (2S)-((3-Aminometilbenzoilo)-D2Nal-D- Phe-NH)-6-aminohexanol 26 65 83 H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 8 75 88 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 11 80 104 (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)etilo)benceno 58 85

Lisboa, 23 de Janeiro de 2001.

Pela Requerente

50

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto da fórmula geral I A-B-C-D(-E)p

naquepéOou 1; A é hidrogénio ou R1-(CH2)q-(X)r-(CH2)s-CO-, onde q é ϋ ou um número inteiro entre 1 e 5; r é 0 ou 1; s é 0 ou um número inteiro entre 1 e 5; R1 é hidrogénio, imidazolilo, guanidino, piperazino, morfolino, piperidino ou N(R2)-R3, onde cada R3e R3 é independentemente hidrogénio ou alugo inferior substituindo opcionalmente por um ou mais grupos de hidroxilo, piridinilo ou furanilo; e X, quando r é 1, é -NH, -CH2,

I· tr , R,T onde cada R16 e RI7é independentemente hidrogénio ou alugo inferior; B é (G)t-(H)U onde t é 0 ou 1; o éO ou 1; G e H são dos resíduos aminoácidos seleccionados a partir do grupo composto por aminoácidos-L naturais ou seus correspondentes isómeros-D, ou aminoácidos não naturais como o ácido 1,4-diaminobutírico, ácido amino-isobutírico, ácido 1,3-diaminopropiónico, 4-aminofenilalanina, 3-piridilalanina, ácido l,2,3,4-tetrahidroisoquinolino-3-carboxílico, ácido 1,2,3,4- 1 tetrahidronorharman-3-carboxílico, ácido N-metilantranílico, ácido antranílico, N-bencilglicina, ácido 3-amino-3-metilbenzoico, ácido 3-amino-3-metilbutanoico, sarcosina, ácido nipecótico ou ácido iso-nipecólico; e onde, quando tanto t como o são 1, o enlace de amida entre G e H substitui-se opcional mente por T __ i -Y-N, onde Y^e,C=0 ou CH2, e R é hidrogénio, alugo inferior ou aralquilo inferior; I C é um D-aminoácido da fórmula -NH-CH((CH2)w-R4)-CO- onde w é 0, 1 ou 2; e R4 selecciona-se a partir do grupo composto por

cada um dos quais se substitue opcionalmente por um halogéneo, alugo inferior, alquiloxi inferior, alquilamino inferior, amino ou hidroxi; D, quando p é 1, é um D-aminoácido da fórmula -NH-CH((CH2)k-R5)-CO- ou, quando p é 0, D é um D-resíduo aminoácido da fórmula -NH-CH((CH2)1-R5)-CH2-R6 o -NH-CH((CH2)m- R5)-CO- R6, onde k é 0, 1 ou 2; 1 é 0,1 ou 2; m é 0, 1 ou 2; 2 R5 selecciona-se do grupo composto por

cada um dos quais se substitui opcionalmente por um halogéneo, alugo, amino alquiloxi ou hidroxi; e

R6 é piperazino, morfolino, piperidino, -OH ou -N(R7)- R8, onde cada R7e Rsé independentemente hidrogénio ou alugo inferior; E, quando p é 1, é -NH-CH(R10)- (CH2)V-R9, onde v é 0 ou um número inteiro entre 1 e 8; R9é hidrogénio, imidazolil, guanidino, piperazino, morfolino, piperidino,

onde n é 0,1 ou 2, e R19é hidrogénio ou alugo inferior,

0 (11
2. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por p ser 1.
3. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por a ser hidrogénio.

3 onde ou é um número inteiro do 1 ao 3, ou N(R")-R12, onde cada R11 e R12 é independentemente hidrogénio ou alugo inferior, ou

cada um dos quais se substitui opcionalmente por um halogéneo, alugo, alquiloxi, amino, alquilamino, hidroxi, ou o produto do re-ordenamento Amadori de um grupo de aminos e uma hexapiranosa ou uma hexapiranosil-hexapiranosa e R10, quando p é 1, se selecciona do grupo composto por -H,-COOH-, -CH2-R13, -CO-R13 o -CH2-OH, onde R13 é piperazino, morfolino, piperidino, -OH ou -N(R14)-R15, onde cada R14 e R15é independentemente hidrogénio ou alugo inferior; o enlace de amida entre B e C ou, quando t e o são ambos 0, entre a e C pode-se substituir opcionalmente por R18 I I ___ I -Y-N, onde YejC =0 ou CH2, e R18é hidrogénio, alugo inferior ou aralquilo inferior, j ou, quando p é 1, o vínculo de amida entre D e pode-se substituir opcionalmente por R18 I i 4 -Y-N, onde Υ e R18 são como se há indicado anteriormente; ou um sal farmacéuticamente aceitável derivado do mesmo.
4. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por a ser R’-(CH2)q-(X)r-( CH2)s-CO-, onde R‘é 3-imidazolil, q é 2, r é 0 e s é 0; ou onde RJé NH, q é 1, r é 1, X é benzeno di substituído preferentemente substituído nas posições 1 e 3, e s é 0; ou onde R'é NH, q é 1, r é 1, X é tiofeno di substituído preferentemente substituindo nas posições 3 e 2, e s é 0.
5. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por, quando t é 1, G é Ala, Gly, Aib, sarcosina, ácido nipecótico ou ácido isonipecótico.
6. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por, quando u é 1, H é His, Phe,Tic, 3Pyal, Gly, Ala, Phe(4-NH2), Sar, Pro, Tyr, Arg, Om, ácido 3-aminometilbenzoico ou D-Phe.

Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por R4 ser 2-naítilo. Composto segundo a reivindicação 1, caracterizado por R5 ser fenilo.
7 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-hPhe-Lys-NH2 (3-Amino-3-metilbutanoilo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2S)-(3-aminometilbenzoiIo)y(CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexariol (2S)-((3-aminometilben2:oilo)-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-amiiiohexanol (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Thial-Lys-NH2 (2$)-(Η-Α^-Ηί8ψ(ΟΗ2ΝΗ)-ϋ-2Ν3ΐ-0^6-ΝΗ)-6-3ΐΜηο1ΐ6Χ3ηο1 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-3Pyal-Lys-NH2 (3-AminometilbenzoÍlo)-D-2Nal-D-Phe(4-F)-Lys-NH2 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe(4-OMe)-Lys-NH2 (2-Ami nometilfenilacetilo)-D-2N al-D-Phe-Ly s-NH2 (2-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridilo)etano H-Aib-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 2-(H- Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2-pirrolidinilo)etano 2-(H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-(4-piridilo)etano H-Aib-His\|/ (CH2NH)-D-2Nal-D-Phe-Lys-OH (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Gly-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Ala-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-0m-NH2 (S-Aminometiltienilo-2-carboniIo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-D-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Pheψ (CH2 CH2NH)-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 (3-Aminometiltienilo-2-carbonilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
8 H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2 (3R)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilben2oilo)-D-lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 (Furíurilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-Piridilmetilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-(3-aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3S)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3R)-Piperidinacarbonilo-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(H-Aib-His-D-2Nal-NH)etilo)benceno N,N-di(2R-Hidroxipropilo)-(3-aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2R-Hidroxipropilo)-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe\j/ (CH2NH)Lys-NH2 (3-Aminometilbenzoilo)-N-Me-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2) (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-N-Me-Lys-NH2 H-D-Thr-His-D-2N al-D-Phe-Lys-NH2 H-Hyp-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-(fenetilo)-Gly-Lys-NH2 H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Pheψ (CH2N(Me))Lys-NH2 3-(H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 2- (H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2-pirrolidimlo)etano (3R)-Piperidinacarbonilo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Lys-NH2 3- ((Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfoliriopropano 2-(H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(I-metilo-2-pirrolidinilo)etano 2-(3R)-Piperidinacarboni,lo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-metilo-2 pirrolidinilo)etano 2- (3-Aminometilbenzoilo)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-(l-metilo-2-pirrolidinilo)etano 3- (H-Aib-His-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 3-((3R)-Piperidinacarbonilo-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)morfolinopropano 3-((3-Aminometilbenzoilo)-N-Me-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH) morfolinopropano H-Aib-His-D-2Nal-N-Me-D-Phe-Hyp-NH2 2-((3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( l-metilo-2-pirrolidinilo)etano 2-((3R)Piperidinacarbonilo-D-2Nal-N-Me-D-Phe-NH)-( 1 -metilo-2- pirrolidinilo)etano H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
9. Composto segundo a reivindicação 2, caracterizado por v ser 2-6, e R9 ser -NH2, morfoninoetilo, morfolinopropilo ou (l-metilpirrolidinilo)etilo. 5
10. Composto segundo a reivindicação 2, caracterizado por Rl 0 es -COOH, CH2-OH, -H ou CONH2.
11. Composto segundo a reivindicação 1 caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo composto por: H-Ala-Hisv(CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolilo)propionilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 φ H-D-Lys-D-2Naí-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-5Apent-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (n-Propilo)-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-3Pyal-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe(4-NH2)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-D-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (2-(4-Imidazolilo)acetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(4-Imidazolilo)acriloilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 ^ (3-Aminometilo benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Aminofenilacetilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminocrotonoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-Piperidino-carboxilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH2 (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexano 6-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)hexilamina 6 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)pentilanaina H-Ala-His-D-2NaI-D-Phe\|/ (CH2NH)Lys-NH2 H-Ala-His-D-2N al-D-Phe-Lys-OH (2S)-(H-ALa-His-D-2Nal-D-Phe-NH)-6-aminohexanol (2-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etilo)benceno 2- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)etilamina 4-((H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)meíilo)bencilamina H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosilo)-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Phe-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-D-Phe-NH2 H-Ala-His-D-Phe-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-Trp-D-Phe-Lys-NH2 H-His-D-2Nal-D-Trp-Lys-NH2 H-Ala-His-D- lNal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-Phe-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys(maltosilo)-NH2 (2R)-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH)-3fenilpropilamina H-Ala-N-Me-(2-aminobenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-(Metilaminometilo)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (4-(Aminometilo)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Ly's-NH2 H-His-Ala-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 4-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Pbe-NH)butilamina 3- (H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)propilamina (3-(Dimetilaminometilo)benzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Amino-3-metilbutanoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilbenzoilo)-D-hPhe-D-Phe-Lys-NH2 (3-Aminometilbenzoilo) ψ (CH2NH)D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2
12. Composto segundo a reivindicação 1 caracterizado por ser seleccionado de entre o grupo composto por: 5-(H-Ala-His-D-2Nal-D-Phe-NH)aminopentano (3-Aminometilbenzoilo)-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Dab-NH2 H-Aib-His-D-2Nal-D-Phe-Lys-N(Me)2
13. O composto H-Aib-His-D-2Nal-D -Phe -Lys-NH2.
14. Composto farmacêutico caracterizado por incluir, como ingrediente activo, um composto da fórmula geral I ou um sal derivado farmacéuticamente aceitável junto com um suporte ou diluente farmacéuticamente aceitável.
15. Composto segundo a reivindicação 14 em forma de dosagem unitária, caracterizado por compreender mais ou menos 10 por volta de 200 mg da fórmula geral I ou um sal derivado farmacéuticamente aceitável.
16. Composição farmacêutica para estimular a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária; caracterizada por incluir, como ingrediente activo, um composto da fórmula geral I ou um sal derivado farmacéuticamente aceitável junto com um suporte ou diluente farmacéuticamente aceitável.
17. Emprego de um composto da fórmula geral I ou um sal derivado farmacéuticamente aceitável para a preparação de um medicamento para estimular a liberação da hormona de crescimento desde a pituitária. Lisboa, 23 de Janeiro de 2001. Pela Requerente

Adjunto do Agente Oficial ds Propriedade Industrial R. D. Joác V,9-2° dí.°-1250 LiSSOA 11