PL183772B1

PL183772B1 - Nowe estry związków chalkonowych, kompleksy związków chalkonowych i środki farmaceutyczne je zawierające

Info

Publication number: PL183772B1
Application number: PL95320787A
Authority: PL
Inventors: Ezio Bombardelli; Salvatore Mancuso; Monache Franco Delle
Original assignee: Indena Spa
Priority date: 1994-12-20
Filing date: 1995-12-04
Publication date: 2002-07-31
Also published as: CN1087609C; FI972641L; NO307926B1; DK0800387T3; EP0800387A1; SI9520139A; SK282259B6; JP2004131509A; CA2208351A1; NO972842L; SI9520139B; CZ186997A3; ES2181806T3; ITMI942568A1; HUT77438A; DE69527980T2; CZ288043B6; ITMI942568A0; DE69527980D1; KR100264369B1

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe estry związków chalkonowych, kompleksy związków chalkonowych, wykazujące aktywność w leczeniu i zapobieganiu nowotworom macicy, jajnika i piersi, jak również zawierające je środki farmaceutyczne.

Ostatnio okazało się, że flawonoidy wykazują aktywność przeciwrakową (Cancer Research 48, 5754, 1988), jak również w przypadku pewnych nowotworów aktywność chemo-terapeutyczną(J. Nat. Prod. 53,23,1990). W szczególności kwercetyna, flawonoid wszechobecny w roślinach, przejawia pewną aktywność przeciwwzrostową w ludzkich komórkach białaczkowych (Br. J. ofHaemology 75,489,1990) 15 oraz: na pewnych innych liniach komórkowych (Br. J. Cancer 62,942,1990 - Int. J. Cancer 46,1112,1990 - Cancer Chemother. Pharmacol. 28,255, 1991 - Gynecologic Oncology 45,13,1991, 1992), niezależnie od aktywności synergistycznej z konwencjonalnymi środkami chemoterapeutycznymi. Chociaż mechanizm takiego działania przeciwwzrostowego nie jest znany, to prawdopodobnie jest on związany z oddziaływaniem tego flawonoidu z receptorami estrogenowymi typu II (J. Steroid Biochem. 30,71, 1988). Takie centra zostały najpierw opisane przez Clarka (J. Biol. Chem. 253, 7630, 1978) w 1978 roku w macicy samicy szczura przez ujawnienie, że taki sam steroid i specyfika tkanki odróżniają się od “prawdziwych,, receptorów estrogenowych (ER), ponieważ są obecne przy wyższym stężeniu niż ER i mają niższą stalą dysocjacji związaną z pozornym powinowactwem (KD: 10-20 nM) dla estradiolu niż eR(KD: 0,2-1 nM).

183 772

Z opisów patentowych WO 91/17749 i WO 93/01824 znany jest sposób leczenia nowotworów i chorób związanych z rozrostem komórek przy użyciu hydroksychalkonów, które wiążą się do miejsc wiążących estrogen jądrowy i regulują wzrost komórek.

Ustalono niespodziewanie, że nowa grupa związków o strukturze chalkonowej, wykazuje znaczne powinowactwo do receptorów estrogenowych typu II, wraz z zaznaczoną aktywnością przeciwwzrostową na liniach komórkowych nowotworu macicy, jajnika i piersi.

Przedmiotem wynalazku są nowe związki o strukturze chalkonowej, stanowiące estry izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.

Szczególnie korzystne sąestry kordoiny lub izokordoiny z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.

Przedmiotem wynalazku jest również kompleks izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z naturalnymi albo syntetycznymi fosfolipidami.

Struktury podanych wyżej związków są następujące:

	R,	r₂	R3	R4	R5
Izokordoma S1	H	H	Prenyl	H	H
4-Hydroksyderrycyna S2	Me	OH	Prenyl	H	H
2-Hydroksyderrycyna S3	Me	H	Prenyl	OH	H
3-Hydroksyderrycyna S4	Me	H	Prenyl	H	OH
2’,4’-Dwuhydroksychalkon S5	H	H	H	H	H
4,2’,4’-Trójhydroksychalkon S6	H	OH	H	H	H
Kordoina S7	Prenyl	H	H	H	H

Inne chalkony związane ściśle z tymi pierwszymi jeśli chodzi o budowę chemiczną, takie jak 4-hydroksykordoina i dwuwodorokordoina, których struktury podano poniżej, nie wykazują żadnego powinowactwa do wyżej wspomnianych receptorów.

183 772

Chalkony	R.	r₂	r₃
4-Hydroksykordoina S8	Prenyl	OH	H
Dwuwodorokordoma S9	Prenyl	H	H

Kolejnym przedmiotem wynalazku jest środek farmaceutyczny zawierający substancje czynne o powinowactwie do receptorów estrogenowych typu II i o aktywności przeciw-wzrostowej w nowotworach macicy, jajnika i piersi, w mieszaninie z odpowiednimi zarobkami, którego istotią jest to, że jako substancje czynne zawiera estry izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’, 4’-dwuhydroksychalkonu, 4,2’, 4’-trójhydroksychalkonu z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.

Szczególnie korzystnyjest środek, któryjako substancję czynną zawiera estry izokordoiny lub kordoiny z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.

Przedmiotem wynalazku jest również środek farmaceutyczny zawierający substancje czynne, o powinowactwie do receptorów estrogenowych typu II i o aktywności przeciwwzrostowej w nowotworach macicy, jajnika i piersi, w mieszaninie z odpowiednimi zarobkami, którego istotą jest to, że jako substancję czynną zawiera kompleks izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z naturalnymi albo syntetycznymi fosfolipidami.

Związki (I) można przygotować sposobami konwencjonalnymi podanymi w II Farmaco, 30,449-55, 1975; II Farmaco, 32, 261-69,1977; II Farmaco, 30, 326-42, 1975. Powinowactwa związków (I) do receptorów estrogenowych typu II oraz aktywność przeciwwzrostowa na komórkach nowotworowych jajnika przedstawione są w poniższej tabeli.

Tabela

Powinowactwo do receptorów estrogenowych typu II oraz aktywność przeciwwzrostowa na komórkach rakowych OVCA 433 in vitro

Chalkony	IC50 ** (pM)	IC50 *** (pM)
S1	1,2	1,2
S2	17,0	10,6
S3	4,2	18,0
S4	5,0	12,1
S5	2,5	0,6
S6	5,0	3,2
S7	6,0	4,2

* * Stężenie dające 50% zahamowamania wzrostu komórek.

* * * Stężenie dające 50% przemieszczenia* znaczonego estradiolu (40 pM) z receptora.

Ocenę związania z receptorem estragenowym przeprowadzono na komórkach nowotworowychjajnika oraz innych organów. Komórki hodowano w kulturzejednowarstwowej na minimalnym medium podstawowym dodanym z osoczem krwi cieląt i 200jednostkami/ml penicyliny dla utrzymania medium w stanie sterylności. W celu zachowania powtarzalności testów, komórki w każdym tygodniu zadawano trypsyną, umieszczano na płytkach przy gęstości 8 x 10i podawano inkubacji w temperaturze 37°C w atmosferze powietrza zawierającego 5% CO, i w warunkach wilgotności.

183 772

Dla oceny aktywności związków komórki umieszczano w gniazdkach (Falcon 3046, Becton Dickinson NY) przy stężeniu 1 x 10'⁵/ml w minimalnej ilości podłoża. Po 24 godzinach podłoże zastąpiono podłożem świeżym i dodano chalkony rozpuszczone w bezwodnym etanolu. Próbki kontrolne potraktowano analogicznie nośnikiem, przy braku składnika czynnego. Opisany wyżej sposób postępowania powtarzano w 24-godzinnych przedziałach czasowych w czasie 72 godzin testu. Po 24 godzinach komórki poddano inkubacji ze skalarnymi ilościami znaczonego estradiolu (³H-E2 40Ci/mMol Amershan UK), samego albo w obecności 100-krotnej ilości dwuetylostylbestrolu w temperaturze 4° C w ciągu 2,5 godzin. Pod koniec inkubacji komórki przemywano szybko świeżym substratem i poddawano inkubacji przez 30 minut z 1M NaOH. Promieniotwórczość mierzono za pomocą licznika scyntylacyjnego, a specyficzność wiązania obliczano jako różnicę pomiędzy preparatami zawierającymi lub niezawierającymi dwuetylostylbestrolu. Wyniki wyrażono, zgodnie z konwencjonalnymi metodami, jako liczbę centrów wiążących na komórkę. Zahamowanie wzrostu komórek oceniono przez bezpośrednie liczenie komórek w porównaniu ze wzrostem komórek kontrolnych.

Związki według wynalazku hamowały in vivo rozmnażanie się komórek,jak to wykazano przez pomiar wielkości nowotworów do organizmu obnażonej, odurzonej myszy, zgodnie z konwencjonalnymi warunkami opisanymi w literaturze. Traktowanie zwierząt za pomocądawek od 1 do 10 mg/kg świadczyło o wyraźnym cofaniu się badanych nowotworów, aż do ich zaniku w przypadku wielu osobników'. U człowieka związki wykazywały aktywność na nowotworach jajnika, piersi i macicy wyższą niż znane środki lecznicze, takie jak Tamoxifen.

W cytowanych wyżej próbach estry izokordoiny, kordoiny i 2’,4’-dwuhydroksychalkonu wykazywały aktywność szczególnie wyraźną.

Związki według wynalazku mogą być korzystnie podawane doustnie lub przez infuzję, przy czym przy podawaniu doustnym szczególnie korzystne okazały się naturalne albo syntetyczne fosfolipidy, ponieważ tworzą trwałe kompleksy z chalkonami, rozpuszczalne w tłuszczach. Użyteczne także okazały się trójglicerydy o średniej długości łańcucha oraz podobne rozczynniki. Dawkowanie związków według wynalazku może zmieniać się w szerokich granicach, na przykład od 10 do 300 mg/dzień, głównie przy podawaniu doustnym.

Wynalazek ilustrują następujące przykłady.

Przykład I - Przygotowanie ksymeninianu kordoiny g 4-0-prenylo-2-hydroksyacetofenonu poddano reakcji z 7 g benzaldehydu w 10 g piperydyny i 70 ml etanolu w temperaturze 60-70°C. Po 36 godzinach usunięto rozpuszczalnik pod zmniejszonym ciśnieniem, a pozostałość potraktowano 100 ml benzenu i starannie przemyto za pomocą2N HC1. Po usunięciu benzenu pozostałość oczyszczono w kolumnie wypełnionej żelem krzemionkowym uzyskując 3,5 g kordoiny. Uzyskaną kordoinę poddano reakcji w 20 ml bezwodnej pirydyny z 3 g chlorku kwasu ksymeninowego. Mieszaninę reakcyjną wlano do wody, a produkt ekstrahowano chlorkiem metylenu. Po krystalizacji z metanolu uzyskano 4,2 g ksymeninianu kordoiny o temperaturze topnienia 64-166°C.

Przykład II- Otrzymywanie palmitynianu izokordoiny.

g 3-C-prenylorezacetofenonu i 10 g p-hydroksybenzaldehydu rozpuszczono w 15 g piperydyny i 200 ml bezwodnego etanolu, utrzymując całość w ciągu 4 godzin w temperaturze 60° C. Po usunięciu rozpuszczalnika pozostałość zawieszono w 50 ml 2N HC1 i produkt ekstrahowano chlorkiem metylenu. Po usunięciu chlorowcowanego rozpuszczalnika pozostałość oczyszczano na żelu krzemionkowym uzyskując 4,1 g izokordoiny o temperaturze topnienia 160-161 °C. Produkt poddano reakcji z 8 g chlorku palmitoilu w 30 ml bezwodnej pirydyny. Po rozcieńczeniu mieszaniny reakcyjnej wodą i oczyszczeniu na żelu krzemionkowym uzyskano 6,2 g dwupalmitoiloizokordoiny o temperaturze topnienia 131-132°C.

Przykład III - Otrzymywanie octanów i maślanów kordoiny i izokordoiny

Produkty otrzymywano w sposób podany w przykładach I i II, stosując odpowiednio chlorki lub bezwodniki odpowiednich kwasów (octan kordoiny - temperatura topnienia 131-133°C, maślan kordoiny - temperatura topnienia 124-126°C).

183 772

PrzykładIV - Otrzymywanie kompleksu izokordoiny z dwupalmitoilo-fosfatydylocholiną. 3,08 g izokordoiny zawieszono w 30 ml chlorku metylenu, po czym dodano 7,9 g dwupalmitoilofosfatydylocholiny i mieszając pozostawiono całość na 1 godzinę do przereagowania. Po całkowitym rozpuszczeniu reagentów mieszaninę reakcyjnązatężono do małej objętości i koncentrat wlano do 50 ml n-heksanu. Wytrącony stały materiał odfiltrowano i suszono przez noc pod zmniejszonym ciśnieniem w temperaturze 40°C, uzyskując 7,2 g kompleksu fosfolipidoizokordoiny o temperaturze topnienia 70°C.

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.

Cena 2,00 zł.

Claims

Zastrzeżenia patentowe

1. Nowe estry związków chalkonowych, stanowiące estry izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.
2. Estry według zastrz. 1, stanowiące estry kordoiny 15 lub izokordoiny z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.
3. Kompleksy izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z naturalnymi albo syntetycznymi fosfolipidami.
4. Środek farmaceutyczny zawierający substancje czynne, o powinowactwie do receptorów estrogenowych typu II i o aktywności przeciwwzrostowej w nowotworach macicy, Jajnika i piersi, w mieszaninie z odpowiednimi zarobkami, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera estry izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu, 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.
5. Środek według zastrz. 4, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera estry izokordoiny lub kordoiny z kwasami octowym, masłowym, palmitynowym i ksymeninowym.
6. Środek farmaceutyczny zawierający substancje czynne, o powinowactwie do receptorów estrogenowych typu II i o aktywności przeciwwzrostowej w nowotworach macicy, jajnika i piersi, w mieszaninie z odpowiednimi zarobkami, znamienny tym, że jako substancję czynną zawiera kompleks izokordoiny, kordoiny, 4-hydroksyderrycyny, 2-hydroksyderrycyny, 3-hydroksyderrycyny, 2’,4’-dwuhydroksychalkonu i 4,2’,4’-trójhydroksychalkonu z naturalnymi albo syntetycznymi fosfolipidami.