PL195027B1

PL195027B1 - Tricykliczny związek, jego zastosowanie i zawierająca go kompozycja farmaceutyczna

Info

Publication number: PL195027B1
Application number: PL98341114A
Authority: PL
Inventors: Samuel Chackalamannil; Theodros Asberom; Yan Xia; Dario Doller; Martin C. Clasby; Michael F. Czarniecki
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1997-11-25
Filing date: 1998-11-23
Publication date: 2007-08-31
Also published as: WO1999026943A1; CZ20001856A3; DK1036072T3; NZ504218A; HK1031726A1; JP2001524479A; CA2309352C; ID24726A; SA99190972B1; CN101274929A; IL135797A0; CZ298578B6; IL135797A; CN1290265A; CO4990946A1; KR100393492B1; NO322022B1; TR200001480T2; PE133799A1; DE69823694T2

Abstract

1. Tricykliczny zwiazek o wzorze strukturalnym (I) albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, w którym to wzorze: linia kropkowana oznacza ewentualnie wiazanie podwójne, n wynosi 0; Q oznacza fenyl, R-podstawiony fenyl, cykloheksyl, R-podstawiony cykloheksyl; gdzie R oznacza 1 do 3 podstawni- ków niezaleznie wybranych z grupy skladajacej sie z H, grupy (C 1-C 6)alkilowej, fluorowca, -OH, grupy (C 1-C 6)alkoksylowej, -O-(CH 2) 2-O-, =O, =NOH; R 1 i R 2 sa niezaleznie wybrane z grupy skladajacej sie z H, grupy (C 1-C 6)alkilowej; R 3 oznacza H, grupe, (C 1-C 6)alkilowa, (C 2-C 6)alkenylowa, fenylowa albo hydroksy(C 1-C 6)alkilowa, -OH, -C(O)OR 17 , gdzie R 17 jest wybrany sposród H i grupy (C 1-C 6)alkilowej; Het oznacza grupe pirydylowa, ewentualnie W-podstawiona grupe pirydylowa, chinolinylo- wa, ewentualnie W-podstawiona grupe chinolinylowa, pirymidynowa, indolowa, benzoksazolowa, tiazolowa, chinoksalinowa, fenantrolinowa, pirazynowa, pirydazynowa podstawiona alkilem, benzochinolinowa, indazolowa, izochinolinowa, pirazynowa, pirydylowa skondensowana z grupa (C 5-C 7)cykloalkilowa, ewentualnie podstawiona przez grupe (C 1-C 6)alkilowa; i te grupy sa ewentualnie w postaci N-tlenków lub grup czwartorzedowych; gdzie W oznacza grupe: (C 1-C 6)alkilowa, ewentualnie podstawio- na przez fenylowa, 1 albo 2 grupy OH, (C 1-C 6)alkoksylowa, fenoksylowa, N(CH 3) 2, CF 3; (C 2-C 6)cykloalkilowa; (C 2-C 6)alkenylo- wa; (C 1-C 6)alkoksylowa ewentualnie podstawiona przez fenylowa skondensowana z -O-CH 2-O- albo podstawiona przez fluoro- wiec, OH, CF 3 , NH 2 , C(O)OH, (C 1-C 6)alkilowa, (C 1-C 6)alkoksylowa, -C(O)O(C 1-C 6)alkilowa, -NH-C(O)O(C 1-C 6)alkilowa, . . . . . . . . . . . PL PL PL PL

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy podstawionych tricyklicznych antagonistów receptora trombiny, ich zastosowania do leczenia chorób związanych z zakrzepicą, stwardnieniem tętniczek, nawrotem zwężenia, nadciśnieniem, dusznicą bolesną, arytmią, niewydolnością serca, niedokrwieniem mózgu i rakiem oraz zawierających je kompozycji farmaceutycznych.

Trombina jest znana jako mająca różną aktywność w różnych typach komórek, a receptory trombiny są znane jako występujące w takich typach komórek jak ludzkie płytki krwi, komórki naczyniowych mięśni gładkich, komórki śródbłonka i fibroblasty. Zatem oczekuje się, że antagoniści receptora trombiny będą użyteczni do leczenia chorób zakrzepowych, zapalnych, miażdżycowych i fibroproliferatywnych, jak również pewnych chorób, w których trombina i jej receptor spełniają patologiczną rolę.

Peptydowi antagoniści receptora trombiny zostali zidentyfikowani w oparciu o badania aktywności strukturalnej obejmujące podstawianie aminokwasów w receptorach trombiny, W publikacji Bernatowicz i in., w J. Med. Chem. 39, (1996), strony 4879-4887, ujawniono tetra- i pentapeptydy jako potencjalnych antagonistów receptora trombiny, na przykład N-trans-cynamoilo-p-fluoro-Phe-p-guanidyno-Phe-Leu-Arg-NH2 i N-trans-cynamoilo-p-fluoro-Phe-p-guanidyno-Phe-Leu-Arg-Arg-NH2. Peptydowi antagoniści receptora trombiny zostali również ujawnieni w publikacji patentowej WO 94/03479, opublikowanej 17 lutego, 1994.

Himbacyna, alkaloid piperydyny o wzorze

HgC^' została zidentyfikowana jako antagonista receptora muskaryny. Pełna synteza (+)-hitnbacyny została ujawniona w publikacji Chackalamannil'a i in., J. Am. Chem. Soc., 118 (1996), strony 9812-9813.

Niniejszy wynalazek dotyczy tricyklicznych związków o wzorze strukturalnym (I):

albo jego farmaceutycznie dopuszczalnych soli, w którym to wzorze: linia kropkowana oznacza ewentualnie wiązanie podwójne; n wynosi 0;

Q oznacza fenyl, R-podstawiony fenyl, cykloheksyl, R-podstawiony cykloheksyl; gdzie R oznacza 1 do 3 podstawników niezależnie wybranych z grupy składającej się z H, grupy (C₁-Ce)alkilowej, fluorowca, -OH, grupy (C-i-Ce)alkoksylowej, -O-(CH2)2-O-, =O, =NOH;

R¹ i R² są niezależnie wybrane z grupy składającej się z H, grupy (C₁-Ce)alkilowej;

R³ oznacza H, grupę, (C_rC6)alkilową, (C2-C6)alkenylową, fenylową albo hydroksy(C1-C6)alkilową, -OH, -C(O)OR1⁷, gdzie R^v jest wybrany spośród H i grupy (C1-C6)alkilowej;

Het oznacza grupę pirydylową, ewentualnie W-podstawioną grupę pirydylową, chinolinylową ewentualnie W-podstawioną grupę chinolinylową, pirymidynową, indolową, benzoksazolową, tiazolową, chinoksalinową, fenantrolinową, pirazynową, pirydazynową podstawioną alkilem, benzochinolinową, indazolową, izochinolinową, pirazynową, pirydylową skondensowaną z grupą (C5-C/)cykloalkilową, ewentualnie podstawioną przez grupę (C_rC6)alkilową; i te grupy są ewentualnie w postaci N-tlenków lub grup czwartorzędowych;

PL 195 027 B1 gdzie W oznacza grupę:

(Ci-C6)alkilową, ewentualnie podstawioną przez fenylową, 1 albo 2 grupy OH, (Ci-C6)alkoksylową, fenoksylową, N(CH3)2, CF3; (C2-C₆)cykloalkilową; (C2-C₆)alkenylową; (C1-C₆)alkoksylową ewentualnie podstawioną przez fenylową skondensowaną z -O-CH2-O- albo podstawioną przez fluorowiec, OH, CF3, NH2, C(O)OH, (C1-Ce)alkilową, (C1-Ce)alkoksylową, -C(O)O(C1-Ce)alkilową, -NH-C(O)O(C1-Ce)-alkilową, -C(O)-morfolinową, -C(O)NH-fenylową, fenylową ewentualnie podstawioną przez C(O)OCH3, pirydynową, 5 członową nienasyconą grupę heterocykliczną z 4 atomami N, 5 członową nienasyconą grupę heterocykliczną z 1 atomem S, ewentualnie podstawioną przez fluorowiec; fenylową ewentualnie skondensowaną z -O-CH2-O- albo podstawioną przez (C1-C₆)alkilową, podstawioną przez OH, N(CH3)2, fluorowiec, (C1-C₆)alkoksylową, ewentualnie podstawioną przez COOH, fluorowiec, N-(C1-C6)alkilową, aminową, ewentualnie podstawioną przez C(O)(C1-C6)alkoksylową, C(O)-fenylową, SO2-fenylową(C1-C₆)alkilową, CF3, OH, C=O, C(O)OH, C(O)O(C1-C₆)alkilową, C(O)NH2, fenylową, NO2, CN, SO2NH2, SO2alkilową; aminową ewentualnie podstawioną przez (C1-C₆)alkilową, cyklo 5-członową, alkilofenylową, C(O)-fenylową, SO2-fenylową, piperazynylo-CH3, C(O)OH, C(O)-NH-fenylową, cykloheksylową, naftalenową, 5-6 członową grupę heteroarylową z 2 atomami hetero wybranymi z S, N i O; albo oznacza fluorowiec, OH, CN, CF3, grupę tio-(C1-C6)alkilową;

R , R i R oznaczają H, przy czym gdy występuje ewentualne wiązanie podwójne to R nie występuje, a gdy Q oznacza pierścień fenylowy to R¹⁰ i R^ nie występują;

^r9 oznacza ^H atoo -^OH;

B oznacza -CH=CH-;

X oznacza -O-;

Y oznacza =O.

Korzystne są związki, w których każdy R² i R⁸ oznacza H; R³ oznacza H albo grupę (C1-C6)alkilową; i R⁹ oznacza H albo -OH.

Także korzystne są związki, w których R1 oznacza grupę (C1-C6)alkilową.

Korzystnie Q oznacza R-podstawiony cykloheksyl albo R-podstawiony fenyl.

Korzystna jest grupa związków, w którym R oznacza fluor, -OH, grupę (C1-C6)alkilową albo (C1-C6)alkoksylową.

Korzystne związki są wybrane z grupy składającej się z

PL 195 027 B1

Przedmiotem wynalazku jest także związek jak wyżej określony do stosowania do wytwarzania leków do hamowania receptorów trombiny, w szczególności do leczenia zakrzepicy, stwardnienia tętniczek, nawrotu zwężenia, nadciśnienia, dusznicy bolesnej, arytmii, niewydolności serca, zawału serca, zapalenia kłębuszków nerkowych, zakrzepowego i zakrzepowego z zatorami porażenia, chorób naczyń obwodowych, chorób zapalnych, niedokrwienia mózgu i raka.

Dalszym przedmiotem wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję aktywną farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, która jako związek aktywny zawiera skuteczną ilość wyżej określonego związku.

Grupą korzystnych związków są związki o wzorze IA:

_z 123891011 w którym podstawniki X, Y, R, R, R, R, R, R , R , B i Het mają znaczenia wyżej podane. Drugą grupą korzystnych związków są związki o wzorze IB:

w którym podstawniki X, Y, R¹, R², R³, R⁸, R⁹, R¹¹, B i Het mają znaczenia wyżej podane. Trzecią grupą korzystnych związków są związki o wzorze IC:

w którym podstawniki X, Y, R1 r2, r3, r8, r9, b i Het mają znaczenia wyżej podane.

Podstawniki r2, r8, r¹⁰ i R¹¹ każdy korzystnie oznacza wodór, r3 korzystnie oznacza wodór lub niższa grupę alkilową. R¹ korzystnie oznacza grupę (C1-Ce)alkilową, bardziej korzystnie metylową. Pierścień Q korzystnie oznacza R-podstawioną grupę cykloheksylową lub R-podstawioną grupę fenylową, R korzystnie oznacza wodór, fluor, grupę hydroksylową, alkoksylową lub alkilową. B korzystnie oznacza grupę trans -CH=CH-, Het korzystnie oznacza grupę pirydylową, podstawioną grupę piryPL 195 027 B1 dylową, chinolilową lub podstawioną grupę chinolilową. Korzystne podstawniki grupy Het (W albo W) to grupa arylowa, podstawiona grupa arylowa, heteroarylowa lub alkilowa. Bardziej korzystne są związki, w których Het oznacza grupę 2-pirydylową podstawioną w pozycji 5 przez grupę arylową, podstawioną grupę arylową, heteroarylową lub alkilową, lub 2-pirydylową podstawioną w pozycji 6 przez grupę alkilową.

Związki będące antagonistami receptorów trombiny według wynalazku mają jeszcze aktywność przeciwzakrzepową, przeciw agregacji płytek krwi, przeciwmiażdżycową, przeciwzwężeniową i przeciwkoagulacyjną. Związane z trombiną choroby leczone związkami według wynalazku to zakrzepica, stwardnienie tętniczek, nawrót zwężenia, nadciśnienie, dusznica bolesna, arytmia, niewydolność serca, zapalenie kłębuszków nerkowych, zakrzepowe i zakrzepowe z zatorami porażenie, choroby obwodowych naczyń krwionośnych i inne choroby sercowo-naczyniowe, niedokrwienie mózgu, choroby zapalne i rak, jak również inne choroby, w których trombina i jej receptor pełnią patologiczną rolę.

Zatem związki o wzorze (I) według wynalazku mają zastosowanie jako środki przeciwzakrzepowe, przeciw agregacji krwinek, przeciwkoagulacyjne lub przeciwrakowe u ssaków, potrzebujących takiego leczenia.

W innym aspekcie wynalazku wyżej określone związki mają zastosowanie do wytwarzania leków do hamowania receptorów trombiny, w szczególności do leczenia zakrzepicy, stwardnienia tętniczek, nawrotu zwężenia, nadciśnienia, dusznicy bolesnej, arytmii, niewydolności serca, zawału serca, zapalenia kłębuszków nerkowych, zakrzepowego i zakrzepowego z zatorami porażenia, chorób naczyń obwodowych, chorób zapalnych, niedokrwienia mózgu i raka.

W jeszcze innym aspekcie wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznej zawierającej wyżej określony związek o wzorze (I) i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik.

Jeżeli nie podano inaczej określenie grupa „alkilowa” lub „niższa grupa alkilowa” oznacza prosty lub rozgałęziony alkilowy łańcuch zawierający 1 do 6 atomów węgla i podobnie grupa „alkoksylowa” odnosi się do grup alkoksylowych mających 1 do 6 atomów węgla.

Grupa fluoroalkilowa, difluoroalkilowa i trifluoroalkilowa oznaczają łańcuchy alkilowe, w których końcowy atom węgla jest podstawiony przez 1, 2 lub 3 atomy fluoru, na przykład -CF3, -CH2CF3, -H2CHF2 lub -CH2CH2F. Grupa chlorowcoalkilowa oznacza łańcuch alkilowy podstawiony przez 1 do 3 atomy chlorowca.

Grupa „alkenylowa oznacza prosty lub rozgałęziony łańcuch węglowy zawierający 1 do 6 atomów węgla mający jedno lub więcej wiązań podwójnych w łańcuchu, sprzężonych lub nie sprzężonych. Podobnie grupa „alkinylowa” oznacza prosty lub rozgałęziony łańcuch węglowy zawierający 1 do 6 atomów węgla mający jedno lub więcej wiązań potrójnych w łańcuchu. Gdy łańcuch alkilowy, alkenylowy lub alkinylowy łączy dwa różne podstawniki i przez to jest dwuwartościowy, to stosowane jest określenie akilen, alkenylen i alkinylen.

Grupa „cykloalkilowa” oznacza nasycony pierścień węglowy zawierający 3 do 6 atomów węgla, „cykloalkilenowa” odnosi się do odpowiedniego dwuwartościowego pierścienia, w którym punkty przyłączenia do innych grup obejmują wszystkie izomery pozycyjne i stereoizomery.

„Fluorowiec” oznacza atom fluoru, chloru, bromu lub jodu.

„Dihydroksy(C₁-Ce)alkilowa” oznacza łańcuch alkilowy podstawiony przez dwie grupy hydroksylowe przy dwóch różnych atomach węgla.

„Aryl” oznacza fenyl, naftyl, indenyl, tetrahydronaftył lub indanyl.

„Heteroaryl” oznacza pojedynczy pierścień, pierścień bicykliczny lub benzoskondensowaną grupę heteroaromatyczną zawierającą 5 do 10 atomów węgla zawierającą 2 do 9 atomów węgla i 1 do 4 heteroatomów niezależnie wybranych z grupy składającej się z N, O i S, pod warunkiem, że pierścienie nie zawierają sąsiadujących atomów tlenu i/lub siarki, N-tlenki pierścieniowych azotów są również włączone, jak też związki, w których pierścieniowy azot jest podstawiony przez (C1-C₄)alkil tworząc czwartorzędową aminę. Przykładami pierścieni grup heteroarylowych są pirydyl, oksazolil, isoksazolii, oksadiazolil, furanyl, pirolil, tienyl, imidazolil, pirazolil, tetrazolil, tiazolil, izotiazolil, tiadiazolil, pirazynyl, pirymidyl, pirydazynyl i triazolil. Przykładami bicyklicznych grup heteroarylowych są naftopirydyl (na przykład 1, 5 lub 1, 7), imidazopirydyl, pirydo[2,3]imidazolil, pirydopirymidynyl i 7-azaindolil. Przykładami benzoskondensowanych grup heteroarylowych są indolil, chinolil, izochinolil, ftalazynyl, benzotienyl (na przykład tionaftenyl), benzoimidazolil, benzofuranyl, benzoksazolil i benzofurazanyl. Wszystkie pozycyjne izomery są włączone, na przykład 1-pirydyl, 2-pirydyl, 3-pirydyl i 4-pirydyl, W-podstawiony heteroaryl oznacza takie grupy, w których podstawiony pierścień atomów węgla ma

PL 195 027 B1 podstawniki wyżej zdefiniowane albo w których sąsiednie atomy węgla tworzą pierścień z grupą alkilenową lub grupą metylenedioksylową.

Określenie „Het” oznacza przykładowo pojedynczy pierścień, pierścień bicykliczny i benzoskondensowaną heteroarylową grupę jak wyżej zdefiniowane, jak również grupę tricykliczną, taką jak benzochinolinyl (na przykład 1, 4 lub 7, 8) lub fenantrolinyl (na przykład 1, 7; 1, 10 lub 4, 7). Grupy Het są przyłączone do grupy B przez węgiel pierścieniowy, na przykład Het oznacza 2-pirydyl, 3-pirydyl lub 2-chinolil.

Przykładami grup heteroarylowych, w których sąsiednie atomy węgla tworzą pierścień z grupą alkilenową są 2,3-cyklopentenopirydyna, 2,3-cykloheksenopirydyna i 2,3-cykloheptenopirydyna.

Określenie „ewentualne wiązanie podwójne” oznacza wiązanie zaznaczone pojedynczą linią kropkowaną w środku pierścienia struktury przedstawionej wzorem (I).

Związki według wynalazku mają co najmniej jeden asymetryczny atom węgla, zatem wszystkie izomery, włączając diastereomery i obrotowe izomery są uważane za stanowiące część wynalazku. Wynalazek obejmuje (+)- i (-)-izomery zarówno w czystej postaci, jak i w mieszaninach, włączając mieszaniny racemiczne. Izomery mogą być wytwarzane przy użyciu konwencjonalnych technik, zarówno w reakcji czystych optycznie jak i wzbogaconych optycznie materiałów wyjściowych albo przez rozdzielanie izomerów związku o wzorze (I).

Typowe korzystne związki według wynalazku, w których Q oznacza nasycony pierścień mają następującą stereochemię:

a bardziej korzystne są związki mające taką absolutną stereochemię. Typowe korzystne związki według wynalazku, w których Q oznacza fenylowy pierścień mają następującą stereochemię:

a bardziej korzystne są związki mające taką absolutną stereochemię.

Fachowcy wiedzą, że dla pewnych związków o wzorze (I), jeden izomer będzie miał większą aktywność farmakologiczną niż inne izomery.

Związki według wynalazku z grupą zasadową mogą tworzyć farmaceutycznie dopuszczalne sole z organicznymi i nieorganicznymi kwasami. Przykłady kwasów odpowiednich do tworzenia soli to kwas solny, siarkowy, fosforowy, octowy, cytrynowy, szczawiowy, malonowy, salicylowy, jabłkowy, fumarowy, bursztynowy, askorbinowy, maleinowy, metanosulfonowy i inne mineralne i karboksylowe kwasy dobrze znane fachowcom. Sól jest wytwarzana przez kontaktowanie wolnej zasady z wystarczającą ilością pożądanego kwasu z wytworzeniem soli. Postać wolnej zasady może być odtwarzana przez traktowanie soli odpowiednim rozcieńczonym wodnym roztworem zasady, takim jak rozcieńczony wodny roztwór dwuwęglanu sodu. Postać wolnej zasady różni się od postaci odpowiedniej soli pewnymi fizycznymi właściwościami, takimi jak rozpuszczalność w polarnych rozpuszczalnikach, ale z drugiej strony sól jest równoważna postaci wolnej zasady dla celów niniejszego wynalazku.

Pewne związki według wynalazku są kwaśne (na przykład te, które mają grupę karboksylową). Takie związki tworzą farmaceutycznie dopuszczalne sole z nieorganicznymi i organicznymi zasadami. Przykładami takich soli są sole sodu, potasu, wapnia, glinu, litu, złota i srebra, a także sole tworzone z farmaceutycznie dopuszczalnymi aminami, takimi jak amoniak, alkiloaminy, hydroksyalkiloaminy, N-metyloglukamina i podobne. Związki według wynalazku są generalnie wytwarzane sposobami znanymi w stanie techniki, na przykład w sposobami opisanymi poniżej.

PL 195 027 B1

Na schemacie 1 przedstawiono sposób wytwarzania związków o wzorze (I) w których n oznacza 0, ewentualne wiązanie podwójne nie występuje, Q tworzy pierścień cykloheksylowy, X oznacza -O-, Y oznacza =O, B oznacza -CH=CH-, Het oznacza W-podstawiony pirydyl, R² oznacza metyl, każdy R, R, R, R, R i R oznacza wodór. Jednak podobny sposób można zastosować do wytwarzania związków zawierających inne ewentualnie podstawione grupy Het. Fachowiec wie, że sposób może być jednakowo zastosowany do wytwarzania związków optycznie czynnych lub racemicznych.

Handlowo dostępny (R)-3-butyn-2-ol jest O-chroniony jako eter tetrahydropiranylowy przez traktowanie dihydropiranem w obecności katalitycznej ilości kwasu paratoluenosulfonowego z wytworzeniem związku pośredniego 1a. Traktowanie roztworu związku 1a w THF n-BuLi w temperaturze -78°C, a następnie zakończenie reakcji benzylochloromrówczanem i kolejne usunięcie grupy ochronnej daje związek pośredni 2, który estryfikuje się kwasem dienowym 3, w standardowych warunkach otrzymując ester 4. Selektywna redukcja potrójnego wiązania w związku 4 przy użyciu katalizatora Lindlar'a w atmosferze wodoru daje związek pośredni 5, który podczas termicznej cyklizacji między 200-210°C, i kolejne traktowanie zasadą daje tricykliczny związek pośredni 6. Ester 6 poddaje się uwodornianiu w obecności tlenku platyny tworząc pośredni nasycony kwas karboksylowy, którego traktowanie SOCh daje odpowiedni chlorek kwasowy, następnie przekształcany do tricyklicznego aldehydu 7 przez redukcję przy użyciu wodorku tributylocyny w obecności Pd(O). Kondensacja anionu wytworzonego z fosfonianu 8 z aldehydem 7 w THF daje alken 9 (produkt końcowy).

Związek pośredni 8, w którym W oznacza aryl lub podstawiony aryl można wytworzyć sposobem podobnym do poniżej podanego dla wytwarzania trifluorometylofenylo podstawionego związku, 8a.

PL 195 027 B1

Handlowo dostępna pochodna hydroksypirydyny przekształca się w odpowiedni triflat przy użyciu bezwodnika trójfluorometanosulfenowego, a następnie sprzęga się z handlowo dostępnym kwasem borowym w obecności Pd(O) w warunkach reakcji Suzuki. Otrzymany produkt przekształca się w fosfonian przez traktowanie tert-butylolitem, następnie reakcję przerywa się dietylochlorofosfonianem.

Alternatywnie, związki o wzorze 9, gdzie W oznacza ewentualnie podstawiony aryl można wytwarzać ze związków o wzorze 9, w których W oznacza -OH przy użyciu pośredniego triflatu. Na przykład, 3-hydroksy-6-metylopirydynę traktuje się chlorkiem triizopropylokrzemu, a otrzymany związek z chronioną grupą hydroksylową przekształca się w fosfonian jak opisano powyżej dla wytwarzania związku pośredniego 8. Chroniony pośredni związek triizopropylokrzemowy następnie poddaje się reakcji z tricyklicznym związkiem pośrednim 7, a grupę chroniącą usuwa się w standardowych warunkach. Otrzymany związek o wzorze 9, w którym W oznacza OH następnie traktuje się bezwodnikiem trójfluorometanosulfonowym w temperaturze pokojowej w rozpuszczalniku, takim jak CH2O2, a następnie triflat reaguje z ewentualnie podstawionym kwasem aryloborowym, na przykład ewentualnie podstawionym kwasem fenyloborowym w rozpuszczalniku, takim jak toluen, w obecności Pd(PPh3)₄i zasady, takiej jak K2CO3 w podwyższonej temperaturze i w obojętnej atmosferze.

Związki o wzorze 9, gdzie W oznacza podstawioną grupę hydroksylową (na przykład grupę benzyloksy) można wytwarzać ze związków o wzorze 9, w których W oznacza grupę hydroksylową przez ogrzewanie pod chłodnicą zwrotną w odpowiednim rozpuszczalniku, takim jak aceton z chlorowcopodstawionym związkiem, takim jak ewentualnie podstawiony bromek benzylu w obecności zasady, takiej jak K2CO3. Związki o wzorze (I) w których Het jest W-podstawiony przez atom węgla (na przykład w których W oznacza alkil, alkenyl lub aryloalkil) lub przez atom azotu (na przykład NR R ) można wytwarzać przy użyciu związków o wzorze (I), w których W oznacza chloroalkil jako związków pośrednich. Związki o wzorze I, w których W oznacza grupę polarną, taką jak hydroksyalkil, dihydroksyalkil, -COOH, dimetylatnino i -COH można wytwarzać tak jak przedstawiono na schemacie 1B, gdzie wyjściowym materiałem jest związek o wzorze (I), w którym W oznacza grupę alkenylową. Poniższe schematy 1A i 1B przedstawiają dobrze znane warunki reakcji dla wytwarzania różnych W-podstawionych związków, w których Q oznacza cykloheksyl, X oznacza -O-, Y oznacza =O, R¹ oznacza metyt ^ka^{żdy r2, r3, r9, r10 i r11} oznacza H B oznacza -C^H=C^H- a ^He^t oznacza 2-^piry^dyL

Schemat IA

PdFWwWaHtei THF, 120 °C

PhBtOHb, MjtWu

120 °C, 16 h n-BuBiOHfe,

WSnBu, JWRią»

THF, 120 °C, 16 h

N W = fenyl W = winyl w = aiil

Λ»* ά

W

W ~ Et W = t-Bu

W = n-Pr w = n-Mex W»BPr w = benzyl

W«bBu aminy.......

Czysty, 190°C

V.

,1 L a

NH ó

PL 195 027 B1

Fachowiec wie, że reakcje podobne do opisanych powyżej można prowadzić z innymi związkami o wzorze (I) jeżeli tylko występujące podstawniki nie są wrażliwe na opisane warunki reakcji.

Związki o wzorze (I), w których R⁹ oznacza wodór można przekształcać w odpowiednie związki, w których r9 oznacza hydroksyl przez ogrzewanie ze środkiem utleniającym, takim jak SeO2.

Na schemacie 2 przedstawiono sposób wytwarzania związków o wzorze I, w których n oznacza 0, występuje ewentualne wiązanie podwójne, Q tworzy pierścień cykloheksyIowy, X oznacza -O-, Y oznacza =O, R², R³, R⁸, r9 i R¹¹ oznacza każdy oznacza wodór, R¹ oznacza metyl, R¹⁰ nie występuje, B oznacza -CH=CH-, a Het oznacza W podstawiony pirydyl. Jednak podobny sposób może być zastosowany do wytwarzania związków zawierających inne ewentualnie podstawione grupy Het.

Alkohol 1 jest O-chroniony jako eter TBDMS przez traktowanie chlorkiem TBDMS. Anion wytworzony z 1b chłodzi się roztworem jodyny dla otrzymania odpowiedniego jodku acetylenowego, który podczas redukcji za pomocą di(cykloheksylo)boranu daje jodek cis-winylu 10. Sprzęganie jodku cis-winylu 10 z trimetylokrzemoacetylenem w obecności Cu(I) i Pd(0) daje związek pośredni 11 po usunięciu grupy ochronnej przy użyciu kwasu trifluorooctowego w CH3OH. Estryfikcja 11 kwasem 3 daje pośredni ester 12, który podczas termicznej cyklizacji w temperaturze 185-195°C daje tricykliczny prekursor 13 po krótkiej obróbce DBU. Usuwanie krzemu z pochodnej acetylenowej 13, a następnie

PL 195 027 B1 wodorocynowanie przy użyciu wodorku tributylocyny w obecności AIBN daje winylocynową pochodną 15, którą się sprzęga z chlorowcopirydynową pochodną 16 otrzymując produkt końcowy 17.

Schemat 2A przedstawia alternatywną procedurę:

Sprzęganie przy pomocy pośredniego związku palladu acetylenu 1b z transjodowinylopirydyną 28, a następnie selektywna redukcja wiązania potrójnego daje pośredni dienowy alkohol 29, który estryfikuje się kwasem dienowym 3 otrzymując związek 30. Termiczna cyklizacja związku 30 w temperaturze 190-210°C, a następnie traktowanie zasadą daje związek 17. Związek pośredni 28 wytwarza się z (2-chloro-6-metylo)pirydyny przez sprzęganie z (trimetylokrzemo)acetylenu w obecności palladu, a następnie usuwanie grupy chroniącej grupę krzemową przy użyciu anionu fluorkowego i traktowanie wyizolowanego produkt wodorkiem tributylocyny, a potem jodyną.

Na schemacie 3 przedstawiono sposób wytwarzania związków o wzorze (I), w których n oznacza 0, ewentualne wiązanie podwójne nie występuje, Q tworzy pierścień fenylowy, X oznacza -O-, Y oznacza =O, każdy R¹, R², R³, R⁸ i Rg oznacza wodór, R¹⁰ i R¹¹ nie występują, B oznacza -CH=CH-, a Het oznacza metoksypodstawioną grupę chinolinylową. Jednak podobny sposób można zastosowano do wytwarzania związków zawierających inne ewentualnie podstawione grupy Het.

PL 195 027 B1

Handlowo dostępną pochodną acetylenową 18 przekształca się w odpowiedni ester 19 przez traktowanie n-BuLi w THF, a następnie gaszenie benzylochloromrówczanem. Usunięcie grupy THP, a następnie estryfikacja przy użyciu chlorku transcynamylu w standardowych warunkach daje ester 21, który podczas termicznej cyklizacji w temperaturze 190C° daje tricykliczny ester 22. Uwodornianie związku 22 nad tlenkiem platyny daje kwas karboksylowy 23, który przekształca się w odpowiedni chlorek kwasowy w standardowych warunkach. Redukcja chlorku kwasowego wytworzonego z 23 przy użyciu Pd(O) i wodorku tributylocyny daje aldehyd 24, który kondensuje się z anionem wytworzonym z fosfonianu 25, otrzymując produkt końcowy 26.

Związki, w których R³ oznacza grupę alkilową można wytwarzać z odpowiednich związków, w których R3 oznacza wodór. Na przykład, przez traktowanie związku 26 LDA, a następnie CH3I otrzymuje się odpowiedni związek 27, w którym R3 oznacza metyl.

Na schemacie 4 przedstawiono sposób wytwarzania związków o wzorze I, w których n oznacza 0, ewentualne wiązanie podwójne nie występuje, Q oznacza pierścień cykloheksylowy podstawiony w pozycji 6 przez etylenedioksyl, X oznacza -O-, Y oznacza =O, każdy R¹, r3, R⁸, R⁹, R¹⁰ i R¹¹ oznacza wodór, R² oznacza metyl, B oznacza -CH=CH-, Het oznacza pirydyl, a W oznacza CF3-fenyl. Jednak podobny sposób można zastosować do wytwarzania związków zawierających inne ewentualnie podstawione grupy Het.

PL 195 027 B1

Roztwór 1,4-cykloheksanodiono-monoetylenoketalu 28 i 2,6-di-t-butylo-4-metylopirydyny traktuje się bezwodnikiem trójfluorometylosulfonowym dla otrzymania triflatu enolu 29. Związek 29 przekształca się w związek 30 przez traktowanie akrylanem metylu w rozpuszczalniku, takim jak DMF, w obecności zasady, takiej jak Et3N i katalizatora, takiego jak Pd(PPh3)2Cl2, a związek 30 przekształca się w odpowiedni kwas 31 standardowymi metodami, na przykład przez traktowanie zasadą, taką jak NaOH.

Kwas 31 następnie poddaje się reakcji z racemicznym związkiem 2 i cyklizuje, jak przedstawiono na schemacie 1 dla otrzymania produktu 36 jako racemicznej mieszaniny.

Ketal, taki jak związek 36, można przekształcać w odpowiedni keton przez traktowanie kwasem takim jak HCl. Keton, odwrotnie, można redukować do odpowiedniego związku hydroksylowego przez traktowanie reagentem, takim jak NaBH4 lub K-Selectride®.

Na schemacie 4A przedstawiono sposób wytwarzania związków podobnych do przedstawionych na schemacie 4, ale w których grupa etylenodioksylowa znajduje się w pozycji 7 pierścienia cykloheksylowego.

HO

O

OBn

Lindiar Kat. THF, H

Schemat 4A

OH

O,

OBn (PhgPlgPdCig

i) SOCi₂, PhMe, 80 ' ii) BugSnH, Pd(Ph₃Pi₄, ^phMe

Roztwór ketalu 44 traktuje się akrylanem metylu w rozpuszczalniku, takim jak DMF, w obecności zasady, takiej jak Et3N i katalizatora, takiego jak Pd(PPh3)2Cl2, a otrzymany ester 45 przekształca się w odpowiedni kwas 46, standardowymi metodami, na przykład przez traktowanie zasadą taką jak NaOH. Następnie kwas 46 poddaje się reakcji ze związkiem 43 i cyklizuje dla otrzymania 47, który potem przekształca się w odpowiedni kwas standardowymi metodami.

Związek pośredni 49 sprzęga się do grupy -B-Het stosując sposób jak przedstawiony na schemacie 1 dla otrzymania związku 50.

Ketal, taki jak związek 50, można przekształcać w odpowiedni keton przez traktowanie kwasem, takim jak HCl. Keton, odwrotnie, można redukować do odpowiedniego związku hydroksylowego przez traktowanie reagentem takim jak NaBH4 lub K-Selectride®. Keton można przekształcać w odpowiedni związek 7-hydroksy-7-metylowy przez traktowanie reagentem, takim jak CH3MgBr.

Na schemacie 5 przedstawiono sposób wytwarzania związków o wzorze I, w których n oznacza 0, ewentualne wiązanie podwójne nie występuje, Q tworzy pierścień cykloheksylowy, X oznacza -O-, Y oznacza =O ^ka^żdy R¹, ^{r3, r8, r9, r10 i r11} oznacza H ^r2 oznacza -CH^ B oznacza -C^H=C^{H- H}e^t

PL 195 027 B1 oznacza pirydyl, W oznacza CF3-fenyl i R oznacza grupę hydroksylową. Jednak w podobny sposób można wytwarzać związki zawierające inne ewentualnie podstawione grupy Het.

DioksanSeO<

Schemat 5

Η » H

CO2Bn

OH

A, 30% 37B, 30%

Rozdzielanie chromatograficzne

Związek pośredni 6 ze schematu 1 utlenia się do pośrednich alkoholi 37A i 37B. Alkohol 37A uwodornia się do związku 38, który następnie przekształca się w octan 39.

Octan 39 przekształca się w związek pośredni 40, tak samo jak przedstawiono na schemacie 1. Związek pośredni 40 hydrolizuje się do związku 41A.

Przy użyciu podobnej procedury, ale podstawiając w drugim etapie związek 37B otrzymuje się związek o wzorze 41B.

Materiały wyjściowe do powyższych procesów są albo handlowo dostępne, znane, albo zostały wytworzone dobrze znanymi sposobami.

Reaktywne grupy nie uczestniczące w powyższych procesach można chronić podczas reakcji konwencjonalnymi grupami ochronnymi, które po reakcji można usuwać standardowymi procedurami.

PL 195 027 B1

Poniższa tabela A przedstawia pewne typowe grupy chroniące:

Niniejszy wynalazek dotyczy również kompozycji farmaceutycznej zawierającej związek o wzorze (I) według wynalazku i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik. Związki o wzorze (I) można podawać w dowolnych doustnych postaciach dawkowania, takich jak kapsułki, tabletki, proszki, saszetki, zawiesiny lub roztwory. Preparaty i kompozycje farmaceutyczne można wytwarzać przy użyciu konwencjonalnych farmaceutycznie dopuszczalnych środków pomocniczych (zaróbek) i dodatków konwencjonalnymi technikami. Takie farmaceutycznie dopuszczalne zarobki i dodatki obejmują nietoksyczne kompatybilne wypełniacze, substancje łączące, substancje przyspieszające rozpad, bufory, konserwanty, przeciwutleniacze, środki poślizgowe, środki smakowo-zapachowe, zagęszczające, środki barwiące, emulgatory i podobne.

Dzienna dawka związku o wzorze (I) do leczenia chorób lub stanów chorobowych cytowanych powyżej wynosi około 0,001 do około 100 mg na kg wagi ciała na dzień, korzystnie około 0,001 do około 10 mg/kg. Dla średniej wagi ciała 70 kg, poziom dawkowania wynosi od około 0,1 do około 700 mg leku na dzień, podane w pojedynczej dawce lub w 2-4 dawkach podzielonych. Jednak doPL 195 027 B1 kładna dawka jest określana przez lekarza klinicystę i zależy od mocy podawanego związku, wieku, wagi i stanu zdrowia pacjenta oraz jego reakcji na lek.

Poniżej przedstawiono przykłady wytwarzania związków o wzorze (I).

P r z y k ł a d 1. Kwas [[2-[(E)-2-(3R,3aS,4S,8aS,9aR-dodekahydro-3-metylo-1-oksonafto[2,3-c]-furan-4-ylo)etenylo]-6-chinolinylo]oksy]octowy

Etap 1:

(R)-3-butyn-2-ol (15 ml, 0,204 mola) i 3,4-dihydro-2H-piran (26,1 ml, 1 eq) mieszano w temperaturze 0°C. Dodano kwas p-toluenosulfonowy (wodzian) (0,38 g, 5% mol,) mieszaninę mieszano przez dalsze 2 godz. Dodano octan etylu (EtOAc) (319 ml) i NaHCO₃ (1,6 g), a po 1 godz. mieszaninę odfiltrowano i zatężono, Chromatografia (SiO2, 19:1 heksan/EtOAc dała 31,49 g (100%) żądanego produktu jako mieszaninę diastereomerów.

¹H NMR ^głó^wn^y diastereoi^zomer ⁽CDCl₃) δ 1^,54 (d, J = 7^,5 Hz, 3H), 1^,55^-2^,0 (m, 6H), 2^,42 (s, 1H), 3,56 (m, 1H), 3,88 (m, 1H), 4,60 (br q, J = 7,5 Hz, 1H), 5,00 (t, J = 5,0 Hz, 1H).

Etap 2:

Produkt z etapu 1 (31,49 g, 0,204 mola) rozpuszczono w THF (1 l) i ochłodzono do temperatury -78°C mieszając. Dodano kroplami n-butylolit (97,8 ml 2,5 M roztwór, 1,2 eq). Po mieszaniu przez 20 minut dodano chloromrówczan benzylu (35,1 ml, 1,2 eq) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze -78°C przez 2 godz.

Mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej (RT), dodano NH₄Cl roztwór (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty organiczne wysuszono (MgSO₄), zatężono, a następnie rozpuszczono w CH3OH (2 l), dodano jonowymienną żywicę DOWEX 50WK8-100 (60 g, wstępnie przemytą CH3OH) i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Mieszaninę odfiltrowano, zatężono i chromatografowano (SiO2, 9:1-4:1 heksan/EtOAc) otrzymano 29,9 g (71%) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,55 (d, J = 7^,5 Hz, 3H), 4^,70 (^q, J = 7^,5 Hz, 1H), 5^,27 (s, 2H), 7^,44 ⁽br s^, 5H).

PL 195 027 B1

Etap 3:

Kwas trans-3-(1-cykloheksenylo)akrylowy (4,13 g, 0,0273 mola) i 4-pirolidynopirydynę (0,4 g, 10% mol,) w CH2Cl2 (100 ml) mieszano w temperaturze 0°C°. Dodano 1,3 dicykloheksylokarbodiimidu (5,63 g, 1 eq) i mieszaninę mieszano przez 10 minut, Roztwór produktu z etapu 2 (5,58 g, 0,0273 mola) w CH2Cl2 (40 ml) dodano kroplami. Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 2 godz., odfiltrowano, zatężono i chromatografowano (SiO2, 97:3 heksan/EtOAc) otrzymano 5,82 g (63%) żądanego produktu.

¹H NMR (CDCl·.) δ 1,61 (d, J = 7^,0 Hz, 3H), 1^,66 (m, 2H), 1^,74 (m, 2H), 2^,18 (m, 2H), 2^,27 (m, 2H), 5,25 (s, 2H), 5,67 (m, 1H), 5,80 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 6,26 (br s, 1H), 7,37 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,42 (s, 5H),

Etap 4:

Produkt z etapu 3 (5,82 g, 0,017 mola) i trietyloaminę (Et₃N) (0,112 ml) rozpuszczono w THF (32 ml). Dodano katalizator Lindlar'a (0,58 g) i mieszaninę mieszano pod ciśnieniem 1 atm. wodoru przez 16 godz. Mieszaninę odfiltrowano, zatężono, rozpuszczono w oksylenie i odgazowano pod strumieniem N2. Odgazowaną mieszaninę zamknięto w ciśnieniowym naczyniu i ogrzewano w temperaturze 210°C przez 6 godz. Po ochłodzeniu do temperatury pokojowej usunięto ksylen pod zmniejszonym ciśnieniem i otrzymaną mieszaninę chromatografowano (SiO2, 19:1-9:1 heksan/EtOAc) otrzymano 3,81 g (66 %) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0^,94 (m, 1H), 1^,20 (d, J = 7^,0 Hz, 3H), 1,31 (m, 1H), 1^,50 (m, 1H), 1^,82 (m, 2H), 2,00 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 2,39 (br d, J = 15,0 Hz, 1H), 2,51 (m, 1H), 2,62 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 3,35 (m, 1H), 4,53 (m, 1H), 5,22 (AB kwartet, J = 12,5 Hz, 2H), 5,34 (br s, 1H), 742 (br s, 5H);

Etap 5:

Produkt z etapu 4 (3,81 g, 0,011 mola) rozpuszczono CH₃OH (100 ml). Dodano tlenek platyny (IV) (0,38 g) i mieszaninę wytrząsano przez 16 godz. w atmosferze wodoru (60 psi). Mieszaninę odfiltrowano, zatężono i rekrystalizowano (CH2Ch/heksany), otrzymano 2,12 g (75 %) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0^,90^-1^,00 (m, 1H), 1,05-1,20 (m, 2H), 2^,21^-1^,55 (m, 7H), 1,75-1,92 (m, 4H), 1,92-2,00 (m, 1H), 2,52-2,64 (m, 2H), 2,74 (m, 1H), 4,76 (m, 1H).

PL 195 027 B1

Etap 6:

ο ι_ι u

C

Ο

Produkt z etapu 5 (2,3 g, 9,66 mmola) zawieszono w toluenie (20 ml), dodano SOCI2 (4 ml) i mieszaninę ogrzewano w temperaturze 80°C przez 16 godz. Po ochłodzeniu do temperatury pokojowej, składniki lotne usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, a otrzymaną żywicę rozpuszczono w świeżym toluenie (23 ml). Dodano tetrakistrifenylofosfinopalladu (0) (800 mg, 8% mol) i mieszaninę ochłodzono do temperatury 0°C. Dodano kroplami wodorek tributylocyny (Bu3SnH) (3,24 ml, 1,2 eq) i mieszaninę mieszano przez 30 minut, po tym czasie analiza TLC wykazała w przybliżeniu 66% konwersję. Dodano Bu₃SnH (1,35 ml, 0,5 eq) i mieszaninę mieszano przez dalszą godzinę. Następnie mieszaninę chromatografowano SiO2, 4:1 heksany/EtOAc) otrzymano 1,9 g (88 %) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0^,88-1^,05 (m, 1H), 1,10-1,20 (m, 2H), 1,22-1,50 (m, 5H), 1,55-1,70 (m, 2H), 1,75-1,90 (m, 4H), 1,98 (dd, J = 12,5, 7,0 Hz, 1H) 2,53 (m, 1H), 2,63 (m, 1H), 2,73 (m, 1H), 4,73 (m, 1H), 9,80 (d, J = 5,0 Hz, 1H).

Etap 7:

6-hydroksychinaldynę (1,97 g, 0,0123 mola) i imidazol (0,85 g, 0,0124 mola) rozpuszczono w DMF (20 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C mieszając. Dodano chlorek triizopropylokrzemu (2,7 ml, 1,05 eq) i mieszaninę mieszano przez 30 minut. Dodano roztwór NH₄Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc, Ekstrakty organiczne suszono (MgSO₄), zatężono i chromatografowano (SiO2, 4:1-1:1 heksan/EtOAc), otrzymano 3,39 g (88 %) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1,12 (d, J = 8^,5 Hz, 18H), 1^,30 ⁽he^ptet J = 8^,5 Hz, 3H), 2^,05 (s, 3H), 7^,13 ⁽br s, 1H), 7,22 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,31 (d, J = 11,0 Hz), 7,89 (m, 2H).

Etap 8:

o

I 1

Produkt z etapu 6 (3,39 g, 0,0108 mola) i diizopropyloaminę (1,66 ml, 1 eq) rozpuszczono w THF (54 ml) i ochłodzono do temperatury -78°C mieszając. Dodano kroplami n-butylolit (9 ml 2,5 M

PL 195 027 B1 roztwór w heksanach, 2,1 eq), a po 20 minutach dodano dietylochlorofosforan (1,7 ml, 1,1 eq). Po dalszych 20 minutach mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej. Dodano roztwór NH₄Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty organiczne suszono (MgSO₄), zatężono i chromatografowano (SiO2, 1:1 heksan/EtOAc - 100% EtOAc), otrzymano 4 g (82%) żądanego produktu.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1,12 (d, J = 8^,0 Hz, 18H), 1^,25 (t, J = 7^,5 Hz, 6H), 1,3 ⁽he^ptet J = 8^,0 Hz, 3H), 3,55 (d, J = 22 Hz,2H), 4,08 (q, J = 7,5 Hz, 4H), 7,14 (s, 1H), 7,32 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 7,4 Hz, 1H), 7, 95 (d, J = 9,5 Hz, 1H).

Etap 9:

Roztwór produktu z etapu 8 (4 g, 8,86 mmola) w THF (20 ml) ochłodzono do temperatury 0°C mieszając. Dodano kroplami n-butylolit (3,5 ml 2,5 M roztwór w heksanach, 1 eq), Otrzymany roztwór mieszano przez dalsze 10 minut i dodano do roztworu produktu z etapu 6 (1,9 g, 8,05 mmola) w THF (20 ml) w temperaturze 0°C. Po 1 godz. dodano roztwór NH4Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty organiczne suszono (MgSO4), zatężono i chromatografowano (SiO2, 1:5-1:3 heksan/EtOAc), otrzymano 2,8 g (65%) tytułowego związku.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1,12 (d, J = 8^,0 Hz, 18H), 1,0-1,5 (m, 11H), 1^,43 (d, J = 6^,0 Hz, 3H), 1^,73 ⁽br d, J = 9,5 Hz, 2H), 1,84 (m, 1H), 1,92 (dd, J = 9,2, 7,0 Hz, 1H), 2,40 (m, 2H), 2,71 (q, J = 6,0 Hz, 1H), 4,77(m, 1H), 6,46 (dd, J = 15,8, 9,6 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 7,13 (s, 1H),7,31 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 743 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,94 (d, J = 8,5 Hz, 1H).

Etap 10:

Roztwór produktu z etapu 9 (2,8 g, 5,25 mmola) mieszano w THF (72 ml) w temperaturze 0°C. Dodano kroplami fluorek tetrabutyloamoniowy (5,3 ml 1 M roztwór w THF, 1 eq), analiza TLC (5 minut) wykazała całkowitą konwersję. Dodano roztwór NH4Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty organiczne suszono (MgSO4), zatężono i chromatografowano (SiO2, 1:2-1:1 heksan/EtOAc), otrzymano 1,96 g (99 %) tytułowego związku.

PL 195 027 B1 ¹H NMR (CDCl₃) δ 1,0-1,4 (m, 8H), 1,45 (d, J = 6 Hz, 3H), 1,7-1,9 (m, 3H), 1,97 (m, 1H), 2,43 (m, 2H), 2,72 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 4,78 (m, 1H), 6,50 (dd, J = 15,9, 9,5 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,34 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,53 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,01 (m, 2H);

MS ^m/^z 378 ⁽M+) 332^, 264^, 236^;

HRMS oblic^zono dla C24H28NO3 ⁽MH+) 378^,2069^{; z}nale^ziono 378^,2060^;

Analiza dla C24H27NO3, HCl · 0,5H2O:

Obliczono: Znaleziono: Etap 11:

C 68,16; C 68,21;

H 6,91; H 7,64,

N 3,31, N 3,36.

Dodano NaH (33 mg 60 % dyspersji w mineralnym oleju, 0,825 mmola) do roztworu produktu z etapu 10 (75 mg, 0,2 mmola) w DMF (1 ml).

Po mieszaniu przez 10 minut dodano bromooctan metylu (166 ml, 8 eq), a po dalszych 10 minutach analiza TLC wykazała całkowite przereagowanie.

Dodano roztwór NH4Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc.

Ekstrakty organiczne suszono (MgSO4), zatężono i chromatografowano (SO 1:4-1:2 heksan/EtOAc), otrzymano 60 mg (68%) tytułowego związku.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0,8-1^,4 ⁽m, 8H), 1^,48 ⁽d, J = 6,0 Hz, 3H), 1^,79 ⁽b^r d^, J = 9,0 H^ 2H\ 1^,89 J = 10,5 Hz, 1H), 1,98 (dd, J = 13,5, 6,0 Hz, 1H), 2,46 (m, 2H), 2,75 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 4,82 (br s, 3H), 6,55 (dd, J = 15,7, 9,5 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,06 (s, 1H), 7,48 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 8,03 (t, J = 9,0 Hz, 2H).

HRMS °bli^czono dl^a C27H32NO5 ⁽MH+) 450^,2280^{, zna}l^ezi^ono 450^,2282.

Etap 12

Produkt z etapu 11 (60 mg, 0,136 mmola) rozpuszczono w 4:1 CH3OH/woda (6,5 ml).

Dodano LiOH (0,25 ml 1 M roztwór w wodzie, 2 eq) i mieszaninę mieszano przez 2 godz.

Dodano wodę i mieszaninę ekstrahowano EtOAc.

Warstwę wodną zakwaszono i ekstrahowano EtOAc (x 3), te ekstrakty suszono (MgSO4) i zatężono, otrzymano 30 mg tytułowego związku (50%).

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0,9^5 ⁽m, 8H\ 1^,42 J = 6,0 H^ 3H\ 1^,80 ⁽m, 3H\ 1^,92 ⁽m, 1H\ 2^,50

6,89 (d, J = 15,8 Hz, 1H), 7,16 (dd, 1H), 8,08 (d, J = 9,5 Hz, 1H), (m, 1H), 2,64 (m, 1H), 2,83 (q, J = 6,5 Hz, 1H), 4,95 (m, 3H)

J = 15,8, 10,0 Hz, 1H), 7,56 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 7,76 (dd, J = 9,5, 2,5 Hz 8,16 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,71 (d, J = 9,0 Hz, 1H);

MS m/z 420 (18), 392 (100), 302 (2), 117 (8).

Analiza dla C26H29NO5, HCl · 2H2O obliczono: C 61,47; H 6,75 ; N 2,76;

znaleziono: C 61,02; H 6,45 ; N 2,91.

Przy użyciu procedury z przykładu 1, stosując znane materiały wyjściowe lub wytworzone zgodnie z procedurami podobnymi do opisanych w następujących przykładach, wytworzono związki podstawione w poniższej tabeli 1, których podstawniki zdefiniowano w tabeli.

PL195 027 Β1

i Dane fizyczne \|	HRMS (MH+) znaleziono 340.2281	MS (Cl) m/z = 326 (MH+, 100%)	co OJ . „ o ud X II O' lf) O n§ D· £ E’ ,1 ° Si Ξο 5	co CM , „ o θ' CD-s ω I ll o tn O ™ § + X « ° Si Rq\| Ξ Η 2	MS (Cl) m/z = 326 (MH+, 100%)
Het				^P
OQ	x o—	X -IO	X T'P>- •<o	X mii O	X x<P— o
r— CC	ł	X J	X J	X	X T
o x	X J	X w I	X r ?	X T	X T
CD CC	X	X	X	X	X
co X	X Ϊ	X C t	X ł	X I	X ę ł
co CC	X ?	X «	X Ϊ	X !	X
<x	CD X o	CD X o	CD X o	CD X o T	CD X o
Prz.	<	CD	o	o	LU

PL 195 027 Β1

co £1-° ° x CD ->_o ▼“ -Ł II o- co C\j % δί; —» '7Γ ° 60 —-O- H 5 E	(+)-izomer MS (Cl) m/z = 326 (MH+, 100%)	HRMS (MH+) znaleziono 326.2118	HRMS (MH+) znaleziono 326.2115	HRMS (MH+) znaleziono 326.2118	HRMS (MH+) znaleziono 326.2115	MS (Cl) m/z = 346 (MH+, 100%)
-id	-i-d		-id		-i-d	-i-d
X ΙΖ_ΖΟ- mc·	X X<P~ -Ml o	X -«Ο_νχχ o—	X o—	X o—	X o—	X Xz_zO“ -o
X l	X 5 T	X I	X ł	X I	X l	X !
X V	X !	X X 7	X s 7	X t 7	X s 7	X = 1
X	X	X	X	X	X	X
X « i	X f	X X T	X - 7	X = t	X i	X V V 1
-lIlH	X Ϊ	X V	X « r	X •s I	X s » i	X s V
CO X o	co X O T	co X O	CO X O «	co X o	co X o	<0 X O 5
LL	o	X	-	”3	X	-J -r—

PL195 027 Β1

C\l	00	<0	ιη
π—	<0	OJ	cn
II °^ν	= 3 0%)	II ⁰ ¹¹ ο	Το- » Ο
ο
Ν Ο	Ν ο	Ν Ο	Ν Ο
	Ε’^-	Ε-	Ε-
rr' +	— +	ίΧ' +	+
	ΟΧ	οχ	ΟΧ
ΖΕ		— 2	Γ-
ω —	C0 —	ω —	09 —'
Σ	2	5	S
	Γ>
-%ο	X Ο <π ·ο3 -i-d		Q -id
X	X	X	X
Ι'ζθ*·	Χ<Λ>-	χ->°*	χ>°-
-*ο	-*ο	-*ο	-*ο
X	X	X	X
ϊ	τ	=· Β {	I
X	X	X	X
	ę	S 1	5 »
X	X	X	X
X	X	X	X
V τ	ϊ V	* ϊ	β ϊ
£	X	ΐ	X
ϊ	?	ζ 1	« X
σ)	m	Π	C0
X	X	X	X
Ο	Ο ę	Ο	Ο
Ο	X	ω	Η-
Ύ—		'^r—

PL 195 027 B1

PL 195 027 Β1

HRMS (ΜΗ+) znaleziono 392.2219	HRMS (ΜΗ+) znaleziono 376.2270	HRMS (ΜΗ+) znaleziono 392.2219	MS (Cl) m/z = 354 (ΜΗ+, 100%)	MS (Cl) m/z = 354 (ΜΗ+, 100%)	ο 00 OJ X 11 ι/S Ο Ν§ “ £ Ε- „ θ *7? ° ω— — 3
		ο \	<η X Ο <Μ _CJ -id	-łd	-i-d
X ο—	X ο~*	X ο—	X I'x°- — ο	X Iz_yO-	X Χο°- -«ο
X Τ	X !	X I	X 1	I ϊ	X 1
X «τ I	X » ΐ	X C τ	X	X w 9 »	X ?
X	X	X	X	X	X
X r	X C ?	X ϊ I	X κ	X V I	X X Τ 1
X te Τ	X S Β	X X «	X 5 *	X β :	X 1
η X Ο	CO X Ο τ	Ο X ο «	CO X Ο	<η X Ο	CO X ο
ω <	ο <	ο < τ—	LU <	X <	Ο < ν—

PL 195 027 B1

MS (FAB) m/z = 356 (MH+, 100%)	HRMS (MH+) znaleziono 340.2285	MS (FAB) m/z = 362 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 342 (MH+, 100%)	HRMS (MH+) znaleziono 376.2274	MS (FAB) m/z = 376 (MH + , 100%)	MS (FAB) m/z = 356 (MH+, 100%)
o Λ<		kP		λ/ Φ	to X O * /=\ -SC—'	X O ^=η -sd'
X -mo	X **°.-x o—	X x*°— •HI O	X X'x°- ^o	X XO°— -MO	X -mo	X Χ5Ρ- -MO
X T	X J	X I	X !	X !	X Ϊ	X ł
X	X ę Ϊ	X T	X ?	X	X sr t	X T
X	X	X	X	X	X	X
X 1 V	X I 1	X X T	X B T I	X ę *	X 7	X
X 1	X »	X «	X —	X ą	XL Ϊ	X B V ł
CO X O ę t	CO X O	CO X o	co X O w	<0 X o	CO X o	CO X O J
1AH	< T~	“3 <	y: c	—ł <	ZE < T*“	X <

PL195 027 Β1

MS (FAB) m/z = 372 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 369 (MH+, 100%)	II	MS (FAB) m/z = 386 (MH+, 100%)	MS m/z = 464(100)	MS (Cl) m/z = 355 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 341 (MH+, 100%)
MS (FAB) m/z 352	O O +' X 2
HO HO	/ —z			θι
/-·	-?w		Γ	> z -7—t -o	y=o o ?	-i-rf’	zx
	X		X	X	X	X	X
	χ/,ο-		o—	X<-°“		x*°-	X<z°—
-<o	-*o	-«o		-*o	o—	-*e>	-*o
X !	X !	X ł	X I	X !	X f	X J
X	X	X		X	X	X	X
ΐ	ł	<= Ϊ		T	ę ł	7	Ϊ
X	X	X	X	HH	X	X
X	X	X		X	X	X	X
				w	Ϊ	V	K
»	s «	7		s	⁷	Ϊ	5
X	X	X		X	X	X	X
5	Ϊ	I		f	I	t	7
CO	co	n		σ>	en	en	cn
X	X	X		X	X	X	X
o	o	O		o	O	O	O
>		T		-	T		T
o	a.	o		X	ω	h-	X
<	<	<		<	<	<	<

PL 195 027 Β1

HRMS (MH+) znaleziona 422.2340	HRMS (MH+) znaleziono 492.2738	HRMS (MH+) znaleziono 450.2282	MS (Cl) m/z = 342 (MH+, 100%)	11 ___ E o — co 2 CO 00 < CO + i. x ω 2 5
o I	O X	o /
X IZ_ZO-	I Χ<·°— -<O	X x<P- -«o	I CH 1	1 CH I
I 1	I I	X !	X t	I T
X * i	X <= f	X	X rz 7	X B »
X	X	X		X Sć t
X ę 1	X B 1	X c 7	X ε F	X 7
X 7	I b	X 7	X B X	X 7
CO X O	co X O B	^εΗ0......	co X O	co X o
1AV	<	X < .	> <	2

PL 195 027 B1

1BA

PL 195 027 B1

MS (FAB) m/z = 396 (MH+, 100%)	HRMS (MH+) znaleziono 378.2060	+ I + 5 co o ώ ΖΣ	MS (ESI) m/z = 456 (MH+, 100%)	¹¹ — E ° ω - ω Ξ —
		I		CO LL O
I	I	I	X	z
I'/⁰’^-	χ<·°—	I<,o-	x<P-	X>°*-
-*o	--o	-<o	—o	—o
I 1	I ł	I l	z ł	I I
I \|	I X	I Ϊ	I er f	I T
			I	x
I	I	I	ę ?	s ł
5	I	I	I	I
5	f	w r	Ϊ t	E 1
	co	co
I	I	I	z	X
1	O	o	c	*
co	co	co	co	co
I	I	I	I	I
On··-	o	O X	o	o
u_	o	I	—	“5
CD	CD	co		00
				t—

PL 195 027 B1

MS (ESI) m/z = 402 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 394 (MH+, 43%), 188(100%)	o S — s 5 3 £ II °. Ho 5 'ϋ' H	o ° £ f=· + o 5 X CM C5 O Sra 7 x ωξ .. °. ?§Ho2 X N _—' θ (U — rj	MS (FAB) m/z = - 438 (MH+, 100%)
			N
I CH /	X X<P-- — o	X ^-*°s'VC o—	X -'Οχχ o—	X X<P-- —o
X 1	X I	X 1	X	X 1
X T	X T	X	X 1	X Ϊ
X ł	X T	I	X	X V T
X s t	X s T	X «r ł	X 1	X « f
X Ϊ	X	X V	X 1	X
co X o .	co X O	co X O	co X O T	co X O
Pć CQ	_J co	Σ C	X co	O co

PL 195 027 B1

MS m/z = 378(100), 377(15), 154(2), 150(2)	—.o O X- co o r- X II ΧΧ — θ ⁺ X E «r- , » n —tn £ f «S'^- 8o $ s ?7£ 'Ξ’ό CO co o Tt c —“ CO	o K X t± °0 V X o ¹¹ Ln S3q __o Δ o.	in _C\J + C\j X ™ n % ° X a X N Φ ra	CD __o 4- LO X<H 2 0 iCD % o cc o X N CO	\| HRMS ⁽MH+) laleztono 468.2536
X o ._S^⁼o S N_i7	X °s	X •vCP-°	s_ N , w=z> O-o	N ^p o b	N
X •oi_>	X X>° •*n<o	X X>°' — o	X X<.O- -<o	X X>P- -«o	X -^{11 OsS}X o—
X	£	X I	X I	X V	X »
X 1	X V I	x	X ę T	X T	X 1
X	X	X	X	X	X
X I	X V !	X ę	X w	X 8 t	X 1
X ł	X 1	X « t	X f	X f	X 1
CO X o T	co X O T	co X O T	co X ο	co X o T	co X O I
1BU	> CD	5 CD	X co	> CD C~	N CD

PL 195 027 Β1

MS (ESI) m/z = 406 (MH+, 100%)	II _ L\| CD rj< Tt +“ !t x ω 2	II _λ N ζο* E o _^LD O CD ⁰⁴«£ + ω I 2 ~	MS (FAB) m/z = 419 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 476 (MH+, 100%)
				co X
		O^O		O
		ó	o	o
	O	hzP	_ > ^ζ>°
X	X	X	X	X
	x>°-~	X<r°—	X>°-	χζ>Ο-
— O	—o	—o	— o	— O
X	X	X	X	X
I	I	f	1	l
X	X	X	X	X
ΐ 1	K i	ę V	ę	7
X	X	X	X	X
I 5	Ę t	*	i	T
X	X	X	X	X
T «	5 ΐ	1	ϊ
X I	5	X s	X •	X ΐ
CO X o	co X O 5	co X o E	co X O	co X o
en	O	Q	LU	Ll
O	o	O	O	O «—

PL195 027 Β1

MS (FAB) m/z = 445 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 418 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 416 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 544 (MH+, 100%)	LO z-.CC + CD X ™ ^zin is X o X N ω TO
<o X <O O X / O-Z r 2=\	X o ς 2=\ /=<?	O		N O
X “O	X — o	X x<P~ —o	X X<P~ — o	X Xx_zO«ii o
X ł	X T	X l	X T	X c
X f t	X X T	X f r	X rr ł	X I
X w i	X w •	X B 7	X B V	X
X	X c ΐ	X s s 1	X B T	X f
X =	X I	X x	X	X Ϊ
CO X o T	co X O *	co X O r	co X O ę	co X O T
O o	X o	O	“3 O	o

PL 195 027 Β1

MS (FAB) m/z = 448 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 448 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 486 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 462 (MH+, 100%)
	CD X	^£>°hQ o CD LL·
	O	S-g
X	X	X	X
x*°-	x<P~*	X<P-	x<P-
—o	—o	—o	—o
X	X	X	X
!	Ϊ	!	1
X	X t	X J	X r i
X Ϊ	X ł	X ę ϊ	X ę ł
X	X t	X ΐ	X t
X	X	X	X ę
CD X o	CD X o	<D X o	CD X o
-J		X	o
o	O	o	o
¹	T~		▼-

PL 195 027 B1

MS (Cl) m/z = 448 (MH+, 100%)	, MS (Cl) m/z = 486 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 422 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 432 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 432 (MH+, 100%)
CO X O	CO	+ξχ>ό		?
X	X	X	X	X
X<^P—	X<p-	I',O	X<-°~	X<°“
— α	— O	— o	— o	— o
X	X	X	X	X
T	T	I	T	T
X ε	X w B	X	X c	X
X 7	X	X	X	X 1
X	X	X	X	X
e 7	ź	=	s	Ξ
X	X	X	X	X
Ϊ	f		f	rr
co X o	co X O	co X O	co X o	co X O
Q_	O	X	ω	H
O	o	o	o	O
				—

PL 195 027 B1

MS (FAB) m/z = 446 (MH+, 100%)	co τχ M X U ©5 £> O ϋ§ + X⁰ u O OX 3ω X Ξ o s	OJ CM O ~ T CD X «g Ϊ& + X 1 ^ϋ. 0x wQ li	XJ □0 O 4—, □ Ą CD X u E O _fcl O E co o + X ε- „ O O X Sio □ ξ 3	MS (FAB) m/z = 432 (MH+, 100%) —---1
O ⁷ \ z^_-<°	9 K>°	O 4<X$	-ΚΧ3	-Ck°>
X X<A>- —o	X x->°— o	X x<°- —o	X ΚΛ>- — o	X X<°- — O
X T	X a	X « *	X « T	X T
X Ϊ	X !	X I	X f	X -
X f	X T	X !	X 1	X » V
X	X ł	X ł	X !	X T I
X	X T	X !	X i	X
co X O s	co X O T	co X O T	co X O T	co X O
1CU _]	> o	$ o	X o	- O T—

PL 195 027 B1

tT + CM X ™ S-P ω Ό S £ OE .2 ^X8 π	MS m/z = 406(1 20), 241(25), 225(51), 194156), 168(53)	MS (Cl) m/z = 445 (MH+, 100%)	HRMS (MH+) naleziono505 2698
N CM kP^x		CO X O ^O==^_Zx	N 0
X “II o	X x.,^>~ ..IIO	I ^cy CH 1	X X<.o~ “HO
X	X J	X ł	X V 1
X 1	X 1	X	X 1
X 1	X 1	X w	X
X I	X 1	X β »	X ł
X l	X 1	X t	X 1
co X o 1	co X o T	iro X o	co X O 1
1DA 1	m c—	Cl Q	UJ O

PL 195 027 Β1

II	II _			CM
_co		^σ>
Ν -P	Ν -θ	+		4- m
^ε §	(Ρ Ε 2 _ . ο	X ™ Ζ> ’ί		X ™
		CO		^C\\|
X <ο	CO ιχ.
<0^4? t I ω 5	IS (FA 4 (ΜΗ+,	/η 2 8 X ο X Ν		CO ~ 2 8 X ο X Ν
		Φ		Φ
		2		Π3
		Ν		Ν CD X
			X
	CTJ		C ο	Ο ο
ο	OCF	_ /=	^ο=1^£ ν<°	^ο=ί/=\
-V©-Q	-^Ό~Ο	łP
X	X	X		X
τρ-	τΡ-	χ<Ρ-		^ρ-
—ο	— ο	«•ι ο		-«ιο
X	X	X		X
!	τ	ę		C
••μΜΙΗ I	X	X I	X ϊ
X	X
^?	5	X		X
X	X	X		X
Ε	ΐ	1		ϊ
X	X	X		X
	¹	ϊ		ϊ
σο	C0	ΡΠ		CD
X	X	X		X
Ο	Ο	α		Ο
^?	S	τ		τ
LL	ο	X		_
Ο	Q	Ω		ο
		τ~

PL 195 027 Β1

PL 195 027 B1

+ m cc § CC 0 ^x a	1 _ o -— « # o ⁵ ^E cc ^§ + f ω X - u 4i'x Ωω® Σ H	¹¹ — Co — -£' o^c w ο £ O oj CO + g ω 5 . n ^ϋ ^H X ^ao X £ 2 TT ° £ - Σ. S-	MS (ESI) m/z = 418 (ΜΗ+, 100%)	MS (Cl) m/z = 432 (ΜΗ+, 100%)
C * ·' Ν σ? X Ο °=C	LL	οι o X -?vv	Γ> o o	0^0 -?Ό·^
X X<°- •«IQ	X x<°- —o	X Χ'Λ>- — o	X Χ^ο- — o	1 ! CH f
X a	X	X 7	X	X a B
X I	X τ	X !	X τ	X !
T	X 1	X !	X τ	X τ
X I	X 1	X !	X τ	X τ
X 1	X I	X I	X ł	X !
σ> X Ο	o X Ο !	C0 X Ο I	CD X Ο τ	σ) X Ο τ
1DN	Ο Ω	0. Ω	σ Ω τ·	cc Ω

PL 195 027 Β1

MS (Cl) m/z = 426 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 456 (MH+, 100%)	Ί _ X N uS O r X -P ^cc\jcn + x X 2= &Ω CO 2 r-r, O 2 “ JL o.	MS (Cl) m/z = 389 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 389 (MH+, 100%)
o	CO U.		-iOd
I CH 1	X Xd°- —o	X X<P~ — O	X Χθ°- —o	X X<-°- —o
X J	X	X	X	X
X	X !	X 1	X !	X T
X	X I	X !	X !	X ł
X	X T	X 1	X !	X I
........	X I	X ł	X ł	X Ϊ
co X O	CO X O T	co X O 1	co X O T	co X O T
1DX	> o	N Q	< LU	ω LU

PL 195 027 B1

MS(FAB)m/z = 388 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 430 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 430 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 402 (MH+, 100%)	0 ΙΌ Q + s ¹¹ co CO ruQ _o ^ró' co	MS (Cl) m/z = 476 (MH+, 100%)
	CO X				CO θ o y-°
	O /				<
	oo		Z=x		-$ό·Ό
X	X	X	X		X
x<P-	x<P-	X'_z°-	X<P’		x<P-
—o	— o	— o	— o		— o
X	X	X	X		X
s
c					1
X	X	X	X		X
T	!	!	I
X	X	X	X		X
!	1	!	J
X	X	X	X		X
!	!	1	1
X	X	X	X		X
T	J	!	1		!
co	CO	co	ro		co
X	X	X	X		X
O	o	O	O		o
!	T	T	T
1EC	1ED	1FE	1EF	1EG

PL 195 027 Β1

MS (FAB) m/z = 481 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z =	462 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 456 (MH+, 100%)	o O Ó + II ΈΓ	'co O X O cr> CO O O_	II E ° - — X ω	o .—. LO I m O	II O _ _N $ * x E g <M £ u °. - i Rio S ω Ξ o
OJ + II Rio Τ’	co X O cc Cd o
CO
X
~ o		O T
/ ω					cc
O' '					LL				LL
ZI		o			O		LL	LL	LL O
-sOCS	-¾		-d-c	>		d	-dd
X		X	X			X			X
X<P-			X->°-					Iz_zO-
—o	— O	— O			— o			—o
X	X		X			X			X


	1 I		•						t
........	X	X !	X T	X f
X	X		X			X			X
						V			V
«	J		1			1			1
X	X		X			X			X
	β		Ϊ			Ϊ			1
T			1			I			1
X	X		X			X			X
			•			*			V
			1			!			I
CO	co		CO			CO			co
X	X		X			X			X
o	o		O T			o I			O T
X	__		“5			yr			_l
LU	LLI		LŁI			LU			LLI

PL195 027 Β1

MS (FAB) m/z = 509 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 509 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 378 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 523 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 495 (MH+, 100%)
H A Τι 1 0 0 Kp	ω °· 'ζι	-i-Onui	o,/ ,ω °''zi	o„) ω °'zi
X X<P~~ — o	I CH I	X x<P- — o	I CH 1	X x<P~ — o
.......	X	.....H	X	X
X 1	X 1	X I	X !	X 1
X !	X !	X !	X 1	X !
X !	X I	X J	X I	X T
X 1	X T	X I	X 1	X !
co X O T	co X O T	co X O !	co X O I	co X O T
1EM	1EN	1EO _I	0- LŁJ	1ECT

PL 195 027 B1

MS (ESI) m/z = 549 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 524 (MH+, 100%)	¹¹ 3· N co > ° ^£ θ — O O + 2 i	O O I O O o co + s II S Sci ™ Ξ O	MS (ESI) m/z = 378 (MH+, 100%)
co u_ O
> ω	co LL o co LL	X
I	X	X		X
zp-	Zp-	X<P~		X*O~
—o	— o	—o		— o
X	X	X		X
Z »		s		«
X	X	X		X
1	1	1		I
X	X	X		X
!	1	1		?
X	X	X		X
I	!	!		J
X	X	X		X
!	Ϊ	!		!
o X O	co X O	co X O		rn X O
T	T	ł		ł
X	co	1-		X)
LU	UJ	LU		LU
	r—		Ύ—

PL 195 027 B1

HRMS (MH+) znaleziono 419.2331	HRMS (MH+) znaleziono 433.2489	HRMS (MH+) znaleziono 481.2495	HRMS (MH+) znaleziono 460.2335	HRMS (MH+) znaleziono 478.1611
CO X 4	Kp=	O -( kP²¹	«31,. M
X	X	X	X	X
X'z°~~		X'z^U~“		Xz_zO-
•“l o	-u O	•HL O	-UO	••uo
X Ϊ	X	.....¹¹H	X 5Γ	X
X ł	X !	X T	X f	X T
X	X	X	X	X
X	X	X	X	X
1	1	1	I	T
X !	X ł	X 1	X 1	X 1
CO X	co X	co X	co X	co X
O	O	O	O	O
!	ł	T	T	T
5	X	X	N	<
LU	LU	LU	LU	LL

PL 195 027 B1

HRMS (MH+) znaleziono 444.1998	HRMS (MH+) znaleziono 412.2277
, x.-=\ γ~χ ^ω

X	X
	X<P—
••«o	••II O
X	X
	—


X !	X T
X	X
X I	X !
X ł	X !
co	CO
X	X
o	o
!	T
m	o
LL	Ύ
	^Ύ

PL 195 027 B1

MS (Cl) m/z = 424 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 456 (MH+, 100%)	MS (Cl) m/z = 460 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 474 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 413 (MH+, 100%)
LL	O	C X O CM X o Cd O	UJ w O	X u -^o~c5
X	X	X	X	X
x<p-	x<P-	x<°-	x<°~	X<°-
—o	—o	— a	—o	— o
X	X	X	X	X
ł	K	ε	=	T
X !	X 1	X ł	X 1	X !
X Ϊ	X Ϊ	X ł	X I	X ł
X 1	X 1	X I	X 1	X T
X I	X 1	X f	X !	X 1
co	co	co	co	co
X	X	X	X	X
O	O	O	O	O
I	T	!	T	T
1FH	L—	FJ	X LL	FL\|

PL 195 027 B1

MS (FAB) m/z = 460 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 424 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 472 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 424 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 467 (MH+, 100%)
				CJ X
LLJ		CO LL		X CM
o	LL	O	Ll	O
o	Ll	o	-·\\ o\ // — r- Ll	ω
X	X	X	X	X
	X»O-	X<°	x<P—	Χ'ζθ-
— o	— O	— o	— o	— O
X = z	X	X	X	X
X	X	X	X	X
J	I	1	T	!
X I	X J	X !	X !	X !
X Ϊ	X I	X !	X !	X !
X !	X I	X 1	X !	X I
co	co	co	co	co
X	X	X	X	X
O	O	O	O	O
T	T	T	!	!
	X	o	Ol	σ
LL	LL*	Ll	Ll	ll
T*

PL 195 027 B1

MS (ESI) m/z = 494 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 466 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 424 (MH+, 100%)	II •Ν as ε 8 00 t· φ Β x ω 2 5 ~	Τ' Ν a ' E _ ⁸ Μ »— x?vj O + ί i
^εΗΟ Ńp (	Ł.	LL	□. LL . Χ=\ %=( -łvv \ Ll	LL
I ^cy CH ί	1 n HO 1	I CH 1	X χ<°~ —a	1 ^H % HO 1
X 5	....... _1	H	X	X 1
X Ϊ	X 1	X 1	X I	X I
I	X I	X 1	X f	X ϊ
X f	X I	X Ϊ	X J	X 1
X f	X ł	X f	X τ	X !
co X Ο τ	co X O τ	C0 X Ο I	C0 X Ο Τ	CO X Ο τ
1FR	1FS	1FT	1FU	> X

PL 195 027 B1

MS (ESI) m/z = 418 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 445 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 448 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 462 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 492 (MH+, 100%)
			CO X
	có X	O \	O \	c<\^>
X	o	/	/	¹ /
o	X	\	\	\
7		o	o	o
	, 2-χ Y=\	-?vv	-?vv
X	X	X	X	X
tP-	X<o-	Tp-		Xy°-
— o	— o	— o	— O	— o
X	X	X	X	X
f		7	s	7
X	X	X	X	X
I	!	I	1	Ϊ
X	X	X	X	X
T	ł	T	I	T
X	X	X	X	X
T	T	!	ł	T
X	X	X	X	X
!	J	!	ł	1
co	CO	CO	co “Γ	co X
X O	O	o	o	O
T	T	T	T	T
5	X	>	N	<
ll	U-	LL	LL	o

PL 195 027 B1

MS (ESI) m/z = 536 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 481 (MH+, 100%)	MS (ESI) m/z = 474 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 431 (MH+, 100%)	MS (FAB) m/z = 430 (MH+, 100%)
X /-° o	n cX <Z)	co X o OJ X o ZX	CM X	CM X
ó' \ Zł	o=< 7T-f-	2 > o

X	X	X	X	X
X<-ó-	X<P~	X<°-	Xx_zó-	Xz_z ^o-
— o	—o	— o	—o	— o
X	X	X	X	X
X	X	X	X	X
I	ł	!	ł	f
X	X	X	X	X
1	!	T	!	!
X	X	X	X	X
1	1	!	!	ł
X I	X 1	X I	X 1	X 1
co	co	co	co	co
X	X	X	X	X
o	o	o	o	o
1	V	!	T	T
m	o	o	LU	LL
O	O	o	o	ó
	T-

PL 195 027 B1

Etap 1

Do roztworu związku 1b (4,532 g, 24,6 mmola) w THF (15 ml), ochłodzonego do temperatury 0°C w atmosferze argonu dodano roztwór n-BuLi (1,6 M w cykloheksanie, 17 ml, 27 mmola). Po mieszaniu w temperaturze 0°C przez 40 minut, dodano roztwór I2 (6,24 g, 24,6 mmola) w THF (10 ml) i mieszaninę reakcyjną mieszano przez dodatkowe 15 minut. Reakcję zgaszono przez dodanie wody (25 ml) i rozcieńczono heksanem (50 ml). Fazę wodną ekstrahowano heksanem (3 x 50 ml). Połączone fazy organiczne przemyto 5% roztworem tiosiarczanu sodu (2 x 50 ml), suszono nad MgSO₄ i odparowano w próżni, otrzymano jodek acetylenowy 1c jako pomarańczowy olej (7,281 g, 95%).

[α]ο²³ -48,8 (c 1,23, CHCI3);

IR ⁽CH²Cl²⁾ 2200 cm^-1; ¹H NMR ⁽400 MHi CDCI3) δ 0,11 (s, 3H), 0^,12 (s, 3H), 0^,90 (s, 9H, ąCH^, 1,40 (d, J = 6,5 Hz, 3H, CH3), 4,63 (q, J = 6,4 Hz, 1H, CH(OTBS));

¹³C NMR ⁽100 MHi CDCI₃) δ ^-4^ ^-0^,31^, 18^^ 25^ 25^ 60^,50^, 96^,98.

Etap 2

Do roztworu cykIoheksenu (6,8 mI, 67 mmoIa) w bezwodnym pentanie (50 mI) mieszanego w temperaturze 0°C w atmosferze argonu dodano kompIeks boran-siarczek metyIu (2 M w THF, 16,7 mI, 33,4 mmoIa). Roztwór ogrzano do temperatury pokojowej i mieszano przez 1 godz., otrzymano mętną zawiesinę, do której dodano jodek acetyIenowy 1c (8,446 g, 27,2 mmoIa).

PL 195 027 B1

Otrzymany klarowny roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 80 minut i dodano lodowaty kwas octowy (5 ml, 87,3 mmola). Po mieszaniu mieszaniny reakcyjnej przez 20 minut, dodano etanoloaminę (5,2 ml, 86,2 mmola) i kontynuowano mieszanie przez dodatkowe 15 minut. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc (300 ml), przemyto wodą (2 x 100 ml) i solanką (100 ml). Fazę organiczną suszono nad bezwodnym MgSO₄ i zatężono w próżni, otrzymano surowy produkt jako żółty olej. Po oczyszczaniu kolumnową chromatografią na żelu krzemionkowym (heksan) otrzymano jodek ciswinylu 10 jako bezbarwny olej (7,167 g, 84%).

[α]ο²³ +68,1 (c 0,79, CHCI3);

IR (tabletka KBr) 1610 cm^-1; ¹H NMR ⁽400 MH^ CDCI3) δ 0^,13 (s, 3H), 0^,16 (s, 3H), 0^,95 (s, 9H, C(CH3)₃), 1^,27 (d, J = 6,4, 3H, CH3), 4,56 (dq, J = 6,4, 6,2 Hz, 1H, OCH), 6,18 (d, J = 7,6 Hz, 1H, HC=C-HI), 6,28 (dd, J = 7,6, 7,6 Hz, 1H, CH=CHI);

¹³C NMR ⁽100 MH^ CDCI₃) δ -4,95, 17,80, 22,37, 25,29, 71,63, 78,25, 145^,09.

Etap 3

Do roztworu PdCh(PhCN)2 (58,1 mg, 0,15 mmoIa) i CuI (58,8 mg, 0,31 mmoIa) w piperydynie (3 mI) dodano roztwór jodku cis-winyIu 10 (303 mg, 0,97 mmoIa) w bezwodnym THF (3 mI). Następnie dodano (trimetyIokrzemo)acetyIen (0,35 mI, 2,48 mmoIa), czemu towarzyszyła zmiana koIoru z ciemno zieIonego na jasno zieIony, a następnie na czarny w ciągu 5 minut. Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu przez 18 godz.

RozpuszczaIniki usunięto w próżni i mieszaninę oczyszczano rzutową chromatografią na żeIu krzemionkowym (heksan, następnie 5% EtOAc w heksanie), otrzymano produkt 11 jako żółty oIej (267 mg, 98%).

[α]₀2⁵ +128,7 (c 0,745, CHCI3);

IR ⁽CH₂C1²⁾ 2151 1252 cm'¹;

¹H NMR ⁽400 MH^ CDCI3) δ 0^,12 (s, 3H^ 0^,15 (s, 3H^ 0^,25 (s, 9H S^CHM 0^,95 (s, 9H C(CH3)₃), 1,29 (d, J = 6,2 Hz, 3H, CH3), 4,89 (dq, J = 8,5, 6,3 Hz, 1H, OCH), 5,46 (d, J = 11,0 Hz, 1H, CH=C), 5,97 (dd, J = 8,5, 11,0 Hz, 1H, C=CH);

¹³C NMR ⁽100 MH^ CDCI₃) δ ^-4^,88^{, -}4^ 1,08, 18^1 23,61, 25,91, 67,03, 99^,53^, 101^ 107,40, 148,86;

MS ⁽CI/CH₄) 283^, (MH⁺), 267^, 225.

Etap 4

Do roztworu chronionego enynu 11 (1,744 g, 10,38 mmoIa) w CH₃OH (30 mI) dodano TFA (0,6 mI). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godz. RozpuszczaInik usunięto w próżni a pozostałość rozcieńczono Et2O (40 mI) i wodą (40 mI). Fazę wodną ekstrahowano Et2O (3 x 40 mI), połączone fazy organiczne przemyto soIanką (50 mI), suszono nad MgSO4 i zatężono. Pozostałe śIady rozpuszczaInika usuwano w wysokiej próżni.

Do powyższego roztworu niechronionego enynu w bezwodnym CH2CI2 (30 mI) dodano chIorowodorek 1-(3-dimetyIoaminopropyIo)-3-etyIokarbodiimidu (4,412 g, 23,01 mmoIa), dimetyIoaminopirymidynę (DMAP) (2,836 g, 23,2 mmoIa), TEMPO (1 mg) i kwas dienowy 3 (2,414 g, 15,9 mmoIa). Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej w atmosferze argonu przez 18 godz. RozpuszczaIniki usunięto, a mieszaninę rozcieńczono EtOAc (300 mI).

Fazę organiczną przemyto wodą (150 mI), 0,5 N roztworem HCI (2 x 100 mI) i soIanką (100 mI), suszono nad bezwodnym MgSO4. Po odparowaniu pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymano ester 12 jako brązowy oIej (2,601 g, 83%). Przygotowano anaIityczną próbkę przez daIszą chromatografię na żeIu krzemionkowym (5% EtOAc w heksanie).

[a]_D2⁵ +190,7 (c 1,04, CHCh);

IR ⁽CH²CI²⁾ 2151 1715 cm^-1; ¹H NMR ⁽400 MH^ CDCI3) δ 0^,20 (s, 9H, C(CH3)₃), 1,40 (d, J = 6^,4 Hz, 3H, CH₃), 1,58-1,66 (m, 2H, CH2), 1,66-1,73 (m, 2H, CH2), 2,10-2,18 (m, 2H, CH2), 2,23-2,30 (m, 2H, CH2), 5,57 (dd, J = 11,0, 1,1 Hz, 1H, C=CH), 5,76 (d, J=15,6 Hz, 1H, CH=C), 5,86 (dq, J = 6,44, 7,56 Hz, 1H, CH=C), 5,97 (dd, J = 7,8, 11,0 Hz, 1H, CH=C), 6,22 (t (szerokie), J = 4,0 Hz, CH=C), 7,31 (s, 1H, CH=C);

¹³C NMR ⁽100 MH^ CDCI₃) δ ^-0^,203^, 19^1 21^,98^, 22,01, 24 07^, 26,40, 69,02, 100,20, 101,51, 110,35, 114,55, 134,85, 138,77, 143,55, 148,21,166,65;

^HRMS (^FAB): otoczone ^dIa ^Ci₈ ^H27°^2Si (^M+) m/e ^302,17°^2, znateztono m/e ^302,1695.

PL 195 027 B1

Etap 5

Do roztworu związku pośredniego 12 (2,125 g, 7,03 mmola) w bezwodnym, odgazowanym toluenie (25 ml) dodano TEMPO (1 mg). Roztwór ogrzewano w zamkniętym naczyniu w temperaturze 185°C przez 2,5 godz. Mieszaninę reakcyjną ochłodzono do temperatury pokojowej, dodano DBU (1 ml) i mieszano przez 30 minut.

Mieszaninę rozcieńczono EtOAc (300 ml) i przemyto wodą (100 ml), 0,5 N roztworem HCl (2 x 100 ml) i solanką (100 ml). Fazę organiczną suszono nad bezwodnym MgSO₄, filtrowano i odparowano otrzymano surowy produkt jako żółty olej (2,290 g). Po oczyszczaniu chromatografią na żelu krzemionkowym (8% EtOAc w heksanie) otrzymano tricykliczną pochodną 13b jako jasno żółty olej (1,541 g, 73%).

[α]ο²¹ +115,6 (c 1,01, CHCI3);

IR ⁽CH²Cl²⁾ 2170, 1768 cm^-1; ¹H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 0,21 (s, 9H, Si(CHa)3), 0,98 (dddd, J = 12,0, 10,5, 10,5, 3,5 Hz, 1H, C₅H_aks), 0,92-1,04 (m, 1H, CH), 1,23-1,36 (m, 1H), 1,40-1,54 (m, 1H), 1,66 (d, J = 6,1 Hz, 3H, CH3), 1,78-1,94 (m, 2H), 1,96-2,15 (m, 2H), 2,31-2,44 (m, 2H), 2,54-2,68 (m, 2H), 3,23-3,29 (m, 1H, C(O)CH), 4,52-4,62 (m, 1H, OCH(CH₃), 5,35 (d, J = 2,2 Hz, 1H, C=CH);

¹³C NMR (100 MHz, CDCI3) δ -0,10, 21,29, 25,80, 26,79, 32,94, 33,18, 34,87, 38,16, 43,49, 44,73, 77,67, 88,22, 107,05, 113,12, 142,13, 175,75;

^HRMS (^FAB) otoczono ^dIa ^Ci₈ ^H27°^2Si (^MH+) m/e ^303,1780, znateztono m/e ^303,1775.

Etap 6

AIkin 14 (1 g), wytworzony przez usuwanie krzemu z 13b przy użyciu K2CO3 w CH3OH, rozpuszczono w toIuenie (20 mI) w obecności wodorku tributyIocyny (1,75 mI) i ALBN (100 mg), mieszaninę ogrzewano w 120°C przez 2 godz. Roztwór wIano na koIumnę żeIu krzemionkowego, a żądany produkt eIuowano mieszaniną EtOAc-heksan (5 : 95).

¹H-NMR (CDCI3) δ 0,8-0,9 (m, 9H); 1,2-1,6 (m); 3,2 (m, 1H); 4,5 (m, 1H); 5,3 (s, 1H); 5,75 (dd, J = 8,3, 18 Hz, 1H): 6,05 (d, J = 18 Hz, 1H).

Etap 7

Roztwór 15 (224 mg), 6-bromopikoIiny (356 mg) i Pd(PPh₃)₄ (50 mg) w toIuenie (4 mI) ogrzewano przez noc w naczyniu ciśnieniowym w temperaturze 120°C.

Otrzymany roztwór wyIano na koIumnę żeIu krzemionkowego, a tytułowy związek eIuowano mieszaninami EtOAc-heksan (5:95 do 10:90).

¹H-NMR (CDCI3) δ 1,35 (d, 6 Hz, 3H); 2,46 (s, 3H); 3,2 (m, 1H); 4,5 (m, 1H); 5,3 (s, 1H); 6,5 (m, 2H), 6,9 (d, 1H); 7,1 (d, 1H); 7,5 (t, 1H).

Stosując podobną procedurę wytworzono następujące związki, których podstawniki zdefiniowano w poniższej tabeIi 2.

PL195 027 Β1

PL 195 027 B1

MS: 310 (M+H+)	O — 1— + co X	t— + co X - · + S s s ~	MS: 316 (M+H+)	MS: 311 (M+H+)	o ~CD + co X Si
AO	-*0	-C>	ω
X	X	X	X	X	X
Χί·°-	x>°-	Χ·ςΛ>“		x<>°-	x<°-
-•u	-»o	—o		— o	-«o
X	X	X	X	X	X
ł	1	ł	!	I	I
Z	X	X	X	X	X
	w	Ϊ
X	X	X	X	X	X
	—			—
	•		t
X	X	X	X	X	X
C	co	co	C	co	co
X	X	X	X	X	X
o	O	o	o	o	o
U_	o	X	CM _	x:
CM	CM	CM	OJ ___	—

PL 195 027 Β1

Ο	ο	Ο	Ο _Λ
CO χ	ο χ	co χ	CO χ	CO ±	CO X
ω 2	ω 2	ω	ω 2		ώ 2
Ξ —	Ξ —	Ξ —		Έ —	ζ> —
		<ο	-*ό°	•^ρ	κρ
X	X	X	X	X	X
X<P—	χ<Λ->—	χ<°~	χ>°-	Χ·>°-	ι-Λ>-
-«ο	-*ο	-«ο	-*ο	-*ο	-<ο
X	X	X	X	X	X
!	!	τ	Τ	1	!
X	X	X	X	X	X
	V	7	Γ	S	«
X	X	X	X	X	X
Β	Β t	a	-	a •	=
X	X	X	X	X	X
co	CO τ	co π~	CO ~τ~	ΓΟ	CD
Ο	Ο	Ο	Ο	Ο	-1_ Ο
?	*		»	7	7
Ο	k	ο	X	<η	Ρ—
C\J	l· 1	CM	CM	Cd	Cd

PL 195 027 B1

	o .—.	Tt .—.	CD —-	CM	+Γ ——-
OJ 4-	CD +	CD +	CO +	ID +	CD +	O +
CO X	co X	co X	co X	co X	co X	-t X
• - +	- +	• * +	• · 4-	· +	• +	+
		W 2	ω>	w	ω?	ω 2
Ξ —	Ξ —	ΞΕ —		:> —	Ξ —	I> —
40-	0		-łd	-\3~	κΡ	,<^=^3>-θ
X	X	X	X	X	X	X
Χ'_ΖΛ^-		X>/°-	x<P-	x<P-	Τ-,⁰'	3Z_ZO-
-*o	-*o		-*o		— o	-<o
X Ϊ	X !	X !	X 1	X T	X T	X !
X	X	X	X	X	X	X
		s	a 7	7	?	?
X	X	X	X	X	X	X
a	e	ε	E i	=	a	a
7	7
X	X	X	X	X	X	X
co	co	co	co	co	co	CO
X	X	X	X	X	X	X
O	O X	O	O	o	o	o
X)	>	5	X	>	N	< < CM
CM	CM	CM	CM	CM	CM

PL 195 027 B1

co	CO	LO λ-»	CM —	O —	co	•Μ —,
CO 4	h* +	co +	O +	m 4	l·* 4	m 4
CO χ	co X	CO X	X	co X	CO X	CO X
• · +	- · +	• · 4-	- · +	- - 4	- 4-	- · 4-
ω	ω ;+	ώ S	ω ξ	ω 2	ω	ω
2 —	2 —	2 —	:> —			> —
	•tcP		κΡ<			o^z
X	X	X	X	X	X	X
X<^P*	x<^p-	X>°-	χ^^υ—	X<P*	kP-	i<P-
-*o	-«o	-*oo		-<o	-*o	•<o
X I	X 1	X !	X !	X 1	X T	X I
X	X	X	X	X	X	X
	7	ę		7		•
X	X	X	X	X	X	X
	f		»	¹	r	ar
X	X	X	X	X	X	X
CO	CO	CO	CO	CO	CO	CO
X	X	X	X	X	X	X
O	O	o	o	O	O	O
	s	7	7	7	7	7
CQ	o	Q	LU	LL	O	X
<	<	<	<	<	<	<
CM	CM	CM	CM	CM	CM	CM

PL 195 027 B1

LO CM 4 co ΠΞ Ui	O CD + CO x	O —. CD + co X	MS: 374 (M+H+)	MS: 361 (M+H+)	MS: 368 (M+H+)	MS: 374 (M+H⁺)
°O	kP	dP	kP	Kp		P
X x<A>- -«o	X χ<Ρ- -«o	II O Z	X X>°- -<o	X X>°* -*o	X x<°- — o	X X<A>- -«o
X I	X J	X I	X !	X 1	X T	X T
X	X	X	X ?	X	X	X 5
X	X «	X B	X	X	X	x:
X	X	X	X	X	X	co X O1 1
co X O	co X O	CO X o	O co X O	co X O	co X o	co X O t
2AI	< CM	yr < CM	< CM	< CM	X < CM	o < CM

PL195 027 Β1 ο ο ·— __ r-

CM _Λ Ο + ω χ Η	MS: 422 (Μ+Η+)	Ο *Ν J> ΤΤ C0 τΓ c σ> Ν Woi Ζ> cm X X	MS: 418	+ X +	HRMSznalezioi 368.2224	HRMS (Μ+Η+) znaleziono 404.1858	HRMS (Μ+Η+) znaleziono 356.1685	HRMS (Μ+Η⁺) znaleziono 356.1685
	Ο	«
	LL.	υ_
\	^Ο>	^Ό>			\	/=\
	Ο <_ζ=/				ο		\ σ>	ω
		$		Ο		ο ° X	-d	łd
χ	X			X	X	X	X	X
Χ<Ρ	Χ°	1) Ο	Ι*°-	Χ<Ρ	χ>ο-	Χ>θ*	χ>ο-
-*ο	-<ο	ζ	-*ο	-*ο		-<ο	-<ο
X !	X 1	X τ	X !	X 1	X 1	X τ	X ϊ
X	X	X	X		X	X	X	X
ϊ	e	ϊ	»		ϊ	y	f	9
X	X	X	X		X	X	,Χ	X
ę I	ΐ t	β ΐ	C 1		τ 1	β 9 1	? ί	β X I
X	X	X	X	X	X	X	X
co	η	C0	<ο		σ>	σι	η	CO
X	X	X	X		X	X	X	X
Ο	Ο	ο	ο		Ο	Ο	ο	ο


ί	τ	•	-
X	Ο	X	ω		Η-	X	>	§
<	<	<	<		<	<	<	<
CM	CM	C\J	CM		<Μ	ΓΜ	CM	<Ν

PL 195 027 B1

HRMS (M+H+) znaleziono 386.2115	HRMS (M+H+) znaleziono 352.2274	HRMS (M+H+) znaleziono 338.2113	HRMS (M+H+) znaleziono 338.2110	HRMS (M+H+) znaleziono 400.2273	HRMS (M+H+) znaleziono 420.2181	HRMS (M+H+) znaleziono 414.2432
OO		-*3	4		CO X O ,°T
X x^°'- -<o	X	X x<^P- -«o	II	X XO°-- -<o	X x<P—	X X<P— -«o
X !	X I	X !	X T	X !	X T	X 1
X	X s T	X r	X	X	X	X Ę
X » T	X ę	X	X	X s	X E	X at
X	X	X	X	X	X	X
^εΗΟι.....	co X O	co X o	co X O	co X O	^εΗΟι.....	co X O
2ΑΧ	> < CM	N < OJ	< OD OJ	co CO CM	O co CM	o 00 CM

PL 195 027 B1

HRMS (M+H+) znaleziono 414.2432	HRMS (M+H⁺) znaleziono 346.1811	HRMS (M+H+) znaleziono 310.1808	HRMS (Μ+Η+) znaleziono 338.2127	HRMS (M+H+j znaleziono 416.2593	HRMS (M+H⁺; znaleziono 386.2115	HRMS (M+H⁺) znaleziono 386.2115
			-od	Kp4		o s/=\
II O Z	1 CH 1 1	X XZ°- -Ο	X X<°-	X X<,°— MO	X Χ<·°“~ — o	X — o
X ϊ	X τ	X ϊ	X !	X !	X l	X ł
X	X 5	X ε	X	X	X 5	X y
....«η	X «	X » ϊ	X ε	X	X	X s
X	X	X	X	X	X	X
co X ο	X	X	o CO X O	CO X o T 1	CO X o	co X o
2BE	IX ω CM	ο ω CM	X CD CM	CD CM	“3 CD CM	CD CM

PL 195 027 B1

HRMS (M+H+) znaleziono 400.2269	HRMS (M+H+) znaleziono 436.2271	MS: 388 (M+H+)	HRMS (M+H+) znaleziono 411.2072	HRMS (M+H+) znaleziono 390.2064	HRMS (M+H+) znaleziono 400.2293
	_O.d>
	'<TLiT		-
		-kP	-łOO	kP	κΡ
I	X	X	X	X	X
	X<z^z°*~		X<p-		Ι'Λ>~
-*o	-<O	-<o	-<o	«ο	-<o
X I	X T	X f	X !	X Ϊ	X f
X ę	X 5	X	X	X	X
CO X	X		co X	X o	CM X
O	5	O CD X o	O	CM X	O=^£ OH·-
X	X	X	X	X	X
co	CO	CO	co	co	co
X	X	X	X	X	X
o	O	o	O	O	O
f	Ξ	f	a		Ξ
X	w	I—	X)	>	§
CD	co	CQ	00	00	CD
CM	CM	CM	CM	CM	CM

PL 195 027 Β1

HRMS (M+H+) znaleziono 374.2107	HRMS (M+H+) znaleziono 443.2336	HRMS (M+H+) znaleziono 450.2445	MS: 416 (M+H+)	HRMS (M+H+) znaleziono 466.2373	HRMS (M+H+) znaleziono 418.2022
^P	U	<,,^Z=Q	-*Oo-Q	O im	^P
X —o	i ^cy CH 1	X ΐ'Λ>- -*o	X x«P- -<o	11 O z	I ι<.ω- -*o
X I	X I	X 1	X 1	X ł	X 1
X	X	X	X	X	X β K
^εΗ3·.....	X B	ą	X Ξ	X «	X o o=< ''•III··
I	X	X	X	X	X
σι X O	<o X o	rt X O	m X O	C*3 X o a	σι X O
2ΒΧ	> OD OJ	N oo OJ	< o OJ	ω o CJ	o o OJ

PL 195 027 B1

2CD

PL 195 027 B1

MS: 429 (M+H+)	MS: 465 (M+H+)	HRMS (M+H+) znaleziono 410.2130	HRMS (M+H+) znaleziono 404.2226	HRMS (M+H+) znaleziono 390.2071
9	O		kP	O co X
X	X	X	X	X
X<°“~	c 1	X<°~-	x->°-	X<^p-
-<o	-*o	—o	<υ	-«o
X !	X ł	X T	X 1	X !
x	X ę	x:	X	x
			X
X	X	X	o. ......... O' co X	X c
X	X	X	X	X
CO	CO	co	co	CD
X	X	X	X	X
O	O	.......	o	o
“3	yr	j		X
O	o	O	O	o
CM	CM	CM	CM	CM

PL 195 027 B1

Numery związków stosowane w poniższych etapach odpowiadają numerom pokazanym powyżej na schemacie 3.

Etap 1

Roztwór THP-eter 18 (2,8 g, 20 mmola) w suchym THF (100 ml) ochłodzono do temperatury -78°C i dodano kroplami n-BuLi (25 mmol, 10 ml, 2,5 N w heksanach). Po 15 minutach w tej temperaturze dodano kroplami chloromrówczan benzylu (3,75 ml, 25 mmol, 95% czystości). Otrzymany roztwór mieszano w temperaturze -78 C przez 2 godz. i reakcję zakończono przez dodanie NH₄Cl (roztwór nasycony). Po osiągnięciu temperatury pokojowej, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono Et₂O (50 ml) i przemyto solanką. Fazę organiczną wysuszono (MgSO₄), a rozpuszczalniki usunięto w wyparce rotacyjnej. Otrzymano 7,0 g surowego estru 19.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,3^-2^,0 (m, 6H), 3^,6^-3^,9 (m, 2H), 4^,45 (s, 2H), 5^,27 (s, 2H), 7^,40 (m, 5H).

Etap 2

Surowy THP-eter 19 (7,0 g) rozpuszczono w CH3OH (15 ml) i dodano katalityczną ilość PTSA (250 mg) w temperaturze pokojowej. Po 15 minutach roztwór rozcieńczono Et₂O i solanką, fazę organiczną przemyto NaHCO3 (roztwór nasycony) i solanką, wysuszono (MgSO4). Rozpuszczalniki usunięto w wyparce rotacyjnej i otrzymano 4,6 g surowego alkoholu 20.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 4^,45 ⁽ą 2H) 5^,27 ⁽ą 2H) 7^,40 5H).

Etap 3

Surowy alkohol 20 (4,6 g) rozpuszczono w CH₂Cl₂ (50 ml) zawierającym DMAP (katalityczna ilość) i Et3N (3 ml) w temperaturze 0°C. Dodano chlorek cynamoilu (3,3 g, 20 mmola) i mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 30 minut. Otrzymaną zawiesinę rozcieńczono Et2O i wodą, fazę organiczną kolejno przemywano NaOH (10%, 50 ml), HCl (2 N, 50 ml) i solanką, wysuszono (MgSO4), a rozpuszczalniki usunięto w wyparce rotacyjnej i otrzymano surowy ester 21 (7,2 g).

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 5^,0 ⁽ą 2H) 5^,27 ⁽ą 2H) 6^,50 J = 16 H^ 1H) 7^,40^-7 70 (i^ 10H) 7^,80

J = 16 Hz, 1H).

Etap 4

Roztwór cynamonowego estru 21 (7,2 g) w o-ksylenie (50 ml) odgazowano Ar i ogrzewano w temperaturze 190°C w ciśnieniowym naczyniu przez 18 godz. Mieszaninę schłodzono, a rozpuszczalnik usunięto w wyparce rotacyjnej. Po chromatograficznym oczyszczeniu otrzymano lakton 22 (3,0 g, 44 % wydajność z eteru 18).

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 3^,62 ^(m 1H) 3^,78 J = 15^,2 H^ 1H) 4^,08 ⁽t J = 8^,8 H^ 1H) 4^,68 ⁽t J =

8,8 Hz, 1H), 5,34 (d, J = 12,0 Hz, 1H), 5,42 (d, J = 12 Hz, 1H), 7,2-7,5 (m, 10H).

Etap 5

Lakton 22 (0,9 g) rozpuszczono w CH3OH (40 ml) i uwadarniano pod ciśnieniem 60 psi całkowitego ciśnienia w obecności PtO2 (150 mg) przez 14 godz. Katalizator odfiltrowano przez złoże celitu, a rozpuszczalnik usunięto w wyparce rotacyjnej. Kwas 23 (270 mg, 41%) krystalizowano z EtOAc i heksanów.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 2^,93 3^,2; 15^,3 H^ 1H) 3^,52 J = 7^,8; 15^,3 H^ 1H) 3^,23 ^(m 1H)

3,55 (m, 1H), 3,61 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 3,7 (dd, J = 5,5; 9,5 Hz, 1H), 4,44 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 7,1-7,2 (m, 4H).

Etap 6

Kwas karboksylowy 23 (0,18 g) zawieszono w CH2Cl2 (5 ml) zawierającym (COCl)2 (0,15 ml) w atmosferze N2 w temperaturze pokojowej. Dodano kroplę DMF i otrzymaną mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godz. Rozpuszczalniki usunięto w wyparce rotacyjnej, a otrzymane

PL 195 027 B1 surowe ciało stałe przemyto dwukrotnie toluenem, usunięto rozpuszczalnik w wyparce rotacyjnej. Otrzymane białe ciało stałe traktowano roztworem toluenu (5 ml) i wodorkiem tributylocyny (0,3 ml) zawierającym katalityczną ilość Pd(PPh3)4 w temperaturze 0°C. Po 2 godz. mieszaninę rozcieńczono Et2O, a fazę organiczną przemyto solanką. Po oczyszczaniu chromatograficznym otrzymano tytułowy aldehyd 24 (95 mg, 56% wydajności) jako ciało stałe.

¹H NMR ⁽CDCl³) δ 2^,75 ⁽ddd, 1,0; 7,1; 15^,5 Hz, 1H), 3^,52 ⁽dd, J = 2^,3; 15^,5 Hz, 1H), 3^,5 ⁽m, 1H), 3,64 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,83 (dd, J = 4,7; 9,2 Hz, 1H), 4,55 (t, J = 9,1 Hz, 1H), 7,2-7,4 (m, 4H), 9,56 (s, 1H).

Etap 7

Roztwór fosfonianu 25 (125 mg, 0,45 mmola) w suchym THF (10 ml) w temperaturze 0°C traktowano n-BuLi (0,2 ml, 0,5 mmola, 2,5 N w heksanach). Po 15 minutach dodano roztwór aldehydu 24 (95 mg) w suchym THF. Otrzymany roztwór mieszano w tej temperaturze przez 30 minut, rozcieńczono Et2O i solanką. Fazę organiczną przemyto solanką i wysuszono (MgSO4). Rozpuszczalniki usunięto w wyparce rotacyjnej, a oczyszczanie chromatograficzne dało tytułowy związek (50 mg, 32%).

¹H NMR (CDCl₃) δ 8^,35 j J = 8^,5 H^ 1H^); 8^,0 j J = 9^,4 H^ 1H^); 7^,54 j J = 8^,6 H^ 1H^);7,42 (dd, J = 2,9; 9,2 Hz, 1H); 7,28-7,36 (m, 4H); 7,11 (d, J = 2,8 Hz, 1H); 6,94 (dd, J = 7,6; 15,9 Hz, 1H); 6,78 (d, J = 15,9 Hz, 1H); 4,56 (dd, J = 8,3; 9,4 Hz, 1H); 4,18 (dd, J = 4,4; 9,4 Hz, 1H), 4,0 (s, 3H); 3,6 (t, J = 7,3 Hz, 1H).

¹³C^-NMR (CDCl₃) δ 179^,4^; 157^,6^; 152^,5^; 143^,9^; 137^,3^; 135^,2^; 135,1; 133^,9^; 133^,6^; 130^,5^; 128^,3^;127,5; 127,3; 126,9; 122,3; 119,3; 105,0; 71,5; 55,4; 45,6; 39,0; 38,4; 28,7.

Przy użyciu podobnej procedury, wytworzono związki o następującej budowie, których podstawniki zdefiniowano w tabeli.

Η

Het

Prz.	Q	Het	Dane fizyczne
3A		ώ OCH3	MS m/z 430(18), 403(28), 402(100), 401(14)
3B	CH3 ić>	£²¹OCH3	HRMS (MH+) naleziono 386.1756
3C	ÓCl Y^x^'OCH₃	ώ zi f₃cÓ	HRMS (MH+) laleziono 466.1625
3D	OCH3 (ó	7 il ^Zl OCH3	HRMS (MH+) naleziono 402.1709

PL 195 027 B1

3Ε	CH3 $ć>		HRMS (MH+) naleziono 450.1684
3F	CH3 ió	ΛΑΑ.- CH3	HRMS (MH+) laleziono 370.1799
3G		ΑΛΛΖ Λ ^zr <7 OCH3	HRMS (MH+) laleziono 386.1750
3Η	(Cr	rwww ó F3C-Ó	m.p. 173-176°C
31	F d	ΛΛΑΛ/ .Λ p zr r^ji	HRMS (MH+) laleziono 454.1427
3J	ία	ΛΛΛΛ/ ό» pi	HRMS (MH+) laleziono 454.1423
3K	¢0	^wvw Ά zr Y PO	HRMS {MH+) laleziono 436.1533
3L	ίί	<AW Ó z _F3cj5	HRMS (MH+) i\|aleziono472.1332

PL 195 027 B1

Pr zy kł a d 4 (+)-(3R,3aS,4S,4aR,8aS,9aR)-dekahydro-4-[(E)-2-[5-[3-(trifluorometylo)fenylo]-2-pirydynylo]etenylo]-3-metylonafto-[2,3-c]furan-1-(3H)-on

Etap 1

Bezwodnik trojfluorometanosulfonowy (46 ml, 0,275 mola] dodano kroplami do mieszanego roztworu 3-hydroksylo-6-metylopirydyny (10 g, 0,092 mola) w pirydynie (200 ml) w temperaturze 0°C i mieszano w temperaturze 0°C do temperatury pokojowej przez 16 godz. Mieszaninę wylano do roztworu lód-woda (300 ml) i ekstrahowano Et₂O. Warstwę Et₂O przemyto wodą (2 x 150 ml) i solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni, otrzymano żądany produkt (18,7 g, 83%) jako brązowy olej.

Ή NMR ⁽400 MHz CDCl₃) δ 2^,67 (s, 3H), Hz), 8,53 (d, 1H, J = 2,8 Hz);

MS ⁽ESI) m/^z 242 (MH+ 100 %^);

Analiza dla C7H6F3NO3S:

Obliczono: 0 34,86; H 2,51 ;

Znaleziono: C35,24; H 2,48;

Etap 2

7^,32 1H J = 8^,5 H^z) 757 1H J = 8Λ 2^,8

N 5,81, N 5,5.

Do roztworu produktu z etapu 1 (8,5 g, 34,5 mmola) i kwasu 3-trifluorometylofenyloborowego (10 g, 55 mmola) w toluenie (100 ml) dodano EtOH (25 ml), K₂CO3 (14,3 g, 104 mmola) w H₂O (50 ml) i Pd(PPh₃)4 (400 mg, 0,345 mmola). Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120°C przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto 5% NaOH i solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego EtOAc:heksan (10:90, następnie 20:80) jako eluentem dała żądany produkt (6,7 g, 82%) jako żółte ciało stałe.

¹H NMR ⁽400 MHz CDCl₃) δ 2^,68 3H) 7^,32 1H J = 8 Hz) 7^,62^-7^,90 5H^), 8^,79 (d, 1H, J = 2 Hz).

Analiza dla C₁₃H₁₀N · 0,10 H₂O:

Obliczono: C 65,32; H 4,3^0; N 5,86,

Znaleziono: C 65,27; H ; N

Etap 3

PL 195 027 B1

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 8, traktowano produkt z etapu 2 i otrzymano żądany produkt (8,84 g, 85%) jako beżowy olej.

¹H NMR ⁽400 MH^ CDCh) δ 1^,36 ⁽t, 6H, J = 7 Hz) 3^,56 ⁽d, 2H, J = 22 H^z), 4^,19 ⁽dq, 4^ J = 77 Hz), 7,58-7,96 (m, 6H), 8,84 (d, 1H, J = 2 Hz);

MS (FAB) m/^z 374 ⁽MH+ 100 %^);

Analiza dla CnH₁₉F₃NO₃P · 0,25 H₂O:

Obliczono: C ; H 5,20; N 33,71,

Znaleziono: C 54,22; H 5,54; N 3,93.

Etap 4

Traktowano produkt z etapu 3 w sposób podobny do opisanego w przykładzie 1, etap 9 i otrzymano związek tytułowy.

¹H NMR (400 MHz, CDCh) δ 0,83-2,03 (m, 12H), 1,49 (d, 3H, J = 6 Hz), 2,38-2,51 (m, 2H), 2,72-2,81 (m, 1H), 4,79-4,88 (m, 1H), 6,57-6,73 (m, 2H), 7,30-7,95 (m, 6H), 8,85 (d, 1H, J = 2 Hz);

MS (FAB) m/^z 456 ⁽MH+ 100 sól HCl: biała^we ciało stałe^;

[a]D2 = +17,0° (c 0,33, MeOH);

Analiza dla C27H28F3NO2· HCl · 0,50 H₂O:

Obliczono: C 64,73 ; H 6,04; N, 2,80,

Znaleziono: C 64,57; H 6,32; N 2,94.

Produkt z przykładu 4 traktowano jak opisano poniżej dla otrzymania związków z przykładów 4B i 4C

P r z y k ł a d 4B

Do roztworu produktu z przykładu 4 (20 mg, 0,044 mmola) w CH2O2 (1 ml) dodano m-CPBA (11 mg, 0,066 mmola) w temperaturze pokojowej. Mieszaninę mieszano w pokojowej temperaturze przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono z C^Ch, przemyto NaHCO3 (nasycony), wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości z CH2Ch:CHaOH (95:5) jako eluentem dało związek 4B (19 mg, 91%) jako białawe ciało stałe.

[a]_D ²² = +23^,3° (c 0^ CH³OH)^;

MS ⁽ESI) m/^z 472 ⁽MH+ 100 %).

P r z y k ł a d 4C

Produkt z przykładu 4 (21 mg, 0,050 mmola) ogrzewano z SeO2 (0,2 mg, 0,23 mmola) w 1,4-dioksanie (2 ml) pod chłodnicą zwrotną przez 40 minut. Mieszaninę zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości EtOAc:heksanem (40:60) jako eluentem dało związek 4C (17 mg, 80%) jako białe ciało stałe.

[a]_D ²² = +42^,8° (c 0^ CH0H);

MS (FAB) m/^z 472 ⁽MH+ 100 %).

PL 195 027 B1

Produkt z przykładu 4 traktowano jak niżej opisano dla otrzymania związków z przykładów 4D i 4E.

Przy kład 4D

LiN(TMS)2 (0,6 ml, 0,60 mmola) dodano do roztworu produktu z przykładu 4 (227 mg, 0,50 mmola) w suchym THF (5 ml) w temperaturze -78°C i mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut, a w temperaturze pokojowej przez 1 godz. Roztwór (10-kamforosulfonylo)oksazyrydyny (137 mg, 0,60 mmola) w suchym THF (2 ml) dodano w temperaturze -78°C i mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut, a w temperaturze pokojowej przez 2 godz. Mieszaninę zneutralizowano nasyconym roztworem NH₄Cl i ekstrahowano EtOAc. Warstwy organiczne przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemiokowego mieszaniną EtO-Ac:heksan (40:60) jako eluentem dała związek 4D (100 mg).

MS: 472 ⁽MH⁺⁾.

Przy kład 4E

LiN(TMS)2 (0,6 ml, 0,60 mmola) dodano do roztworu produktu z przykładu 4 (227 mg, 0,50 mmola) w suchym THF (5 ml) w temperaturze -78°C i mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut, a w temperaturze pokojowej przez 1 godz. Dodano mieszaninę paraformaldehydu (225 mg, 2,5 mmola) w suchym THF (2 ml) w temperaturze -78°C i mieszano w temperaturze -78°C przez 30 minut i w temperaturze pokojowej przez 2 dni. Mieszaninę zneutralizowano nasyconym roztworem NH₄Cl i ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dała związek 4E (30 mg).

MS^: 486 ⁽MH⁺⁾.

Przy kład 5

Etap 1:

Do roztworu 1,4-cykloheksanodionomonoetylenoketalu (10 g, 64 mmola) i 2, 6-di-tert-butylo-4-metylopirydyny (21 g, 102 mmola) w CH-CF (350 ml) w temperaturze pokojowej dodano bezwodnik trójfluorometanosulfonowy (16 ml, 96 mmola) i mieszaninę mieszano przez 16 godz. Mieszaninę przemyto NaHCO₃ (nasycony). Warstwę organiczną wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. RzutoPL 195 027 B1 wa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (5:95, następnie 10:90) jako eluentem dała żądany produkt (13,4 g, 72%) jako przezroczysty olej.

Etap 2

Do roztworu produktu z etapu 1 (13 g, 46 mmola) w DMF (150 ml) dodano akrylan metylu (8,4 ml, 92 mmola), Et3N (19 ml, 138 mmola) i Pd(PPh3)2Cl2 (1,62 g, 2,3 mmola), Mieszaninę mieszano w temperaturze 75°C przez 10 godz. Mieszaninę rozcieńczono NH₄Cl (nasycony) i ekstrahowano eterem. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (15:85) jako eluentem dała żądany produkt (9,15 g, 89%) jako przezroczysty olej.

Etap 3

Do roztworu produktu z etapu 2 (9,15 g, 40 mmola) w THF:CH₃OH (450 ml, 1:1) dodano NaOH (225 ml, 10%). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 godz. Mieszaninę rozcieńczono wodą, przemyto CH2Ch, zakwaszono 10% HCl i ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni, otrzymano żądany związek (8,00 g, 95%) jako jasnożółte ciało stałe.

Etap 4

Produkt z etapu 3 traktowano w sposób podobny do opisanego w przykładzie 1, etapy 3 do 6 i 9 dla otrzymania związku tytułowego (racemat) jako białawego ciała stałego.

MS (ESL) m/^z 514 ⁽MH+ 100%).

Produkt z przykładu 5 traktowano jak opisano poniżej dla otrzymania związków z przykładów 5A, 5B i 5C.

Pr z y k ł a d 5A

Mieszaninę związku z przykładu 5 (65 mg, 0,13 mmola) i HCl (2 ml, 5%) w acetonie (2 ml) mieszano w temperaturze wrzenia przez 16 godz. Mieszaninę zneutralizowano NaHCO₃ (nasycony) i ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dało związek 5A (42 mg, 71%), sól HCl jako białe ciało stałe.

MS (FAB) m/^z 470 ⁽MH+ 100%),

Pr z y kł a d 5B

Do roztworu związku 5A (70 mg, 0,15 mmola) w THF:CH₃OH (10 ml, 1:1) dodano NaBH4 (11 mg, 0,30 mmola). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 10 minut, Mieszaninę rozcień80

PL 195 027 B1 czono NH4CI (nasycony) i ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (60:40) jako eluentem dało związek 5B (39 mg, 55%), sól HCl jako białe ciało stałe.

MS ⁽FAB) ^m/^z 472 ⁽MH+ ΙΟΟθ/ο)

P r z y k ł a d 5C

Do roztworu związku 5A (70 mg, 0,15 mmola) w suchym THF (5 ml) dodano K-Selectride® (0,23 ml, 0,23 mmola, 1,0 M w THF) w temperaturze -78 C. Mieszaninę mieszano w -78 C przez 1,5 godz. Mieszaninę rozcieńczono NH4O (nasycony) i ekstrahowano EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (60:40) jako eluentem dało związek 5C (45 mg, 63%), sól HCl jako białe ciało stałe.

MS ⁽FAB) ^m/^z 472 ⁽MH+ 100%).

Związki 5D, 5E i 5F wytworzono w sposób podobny do opisanego w przykładach 5A-5C przy użyciu enancjomerycznie czystych materiałów wyjściowych:

5D: MS: 470 (MH⁺);

5E^: MS^: 472 ⁽MH^+);

5F^: MS^: 472 ⁽MH⁺⁾.

Ze związku 5D następujące związki 5G i 5H mogą być wytworzone konwencjonalnymi metodami znanymi fachowcom:

5H^: MS^: 485 ⁽MH⁺⁾.

PL 195 027 B1

P r zy kła d 8 (+)-(3R,3aS,4S,4aR,8aS,9aR)-dekahydro-4-[(E)-2-(6-etylo-2-pirydynylo)etenylo]-3-metylonafto-[2,3-c]furan-1(3H)on

Etap 1 Wytwarzanie

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 8, 2-chloro-6-metylopirydynę traktowano dietylochlorofosforanem dla otrzymania klarownego oleju.

¹H NMR ⁽400 MH^ CDCh) δ 1^,34 (t, 6H, J = 7 Hz^ 3^,43 (d, 2H, J = 22 Hz^ 4^,15 (dq, 4H, J = 7,7 Hz), 7,27 (dd, 1H, J = 8, 2 Hz), 7,38 (dd, 1H, J = 8,2 Hz), 7,66 (t, 1H, J = 8 Hz);

MS ⁽FAB) m/^z 264 ⁽MH^+, 100%).

Etap 2

Do roztworu produktu z etapu 1 (5,24 g, 19,9 mmola) w bezwodnym THF (100 ml) dodano Pd(PPh3)4 (1,2 g, 1,0 mmola) i winylotributylocynę (8,72 ml, 29,9 mmola). Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120°C przez 16 godz. Warstwę wodną zneutralizowano 10% NaOH i stałym NaHCO3, ekstrahowano C^Ch Warstwę organiczną wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (40:60 następnie 80:20) jako eluentem dała żądany produkt (3,66 g, 72%) jako klarowny olej.

¹H NMR ⁽400 MH^ CDCh) δ 1^,32 (t 6H J = 7 Hz^ 3^,48 2H J = 22 Hz^ 4^,15 (d^q 4H J = 7,7 Hz), 5,52 (d, 1H, J = 11 Hz), 6,26 (d, 1H, J = 17 Hz), 6,85 (dd, 1H, J = 17,11 Hz), 7,26-7,34 (m, 2H), 7,66 (t, 1H, J = 8 Hz);

MS ⁽CI) m/^z 256 ⁽MH^+, 100%).

Analiza dla C12H18NO3P · 0,50 H2O:

Obliczono: C 54,54; H 7,25; N 5,30; P 11,72;

Znaleziono: C 54,80; H7,21; N 5,34; P 11,87.

Etap 3

Do mieszanego roztworu produktu z etapu 2 (3,58 g, 14,0 mmola) w CH3OH (100 ml) dodano 5% Pd/C (0,36 g). Mieszaninę mieszano w atmosferze H2 (1 atm) w temperaturze pokojowej przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc i ekstrahowano 10% HCl. Ciało stałe odfiltrowano i przemy82

PL 195 027 B1 to CH3OH. Filtrat i roztwory z przemywania połączono i zatężono w próżni, otrzymano żądany produkt (3,56 g, 99 %) jako klarowny olej.

¹H NMR ⁽400 MH^ CDCh) δ 1^,32 (t, 6H, J = 7 H^z\ 1^,34 (t, 3H, J = 7^,6 H^z) 2^,84 ⁽q, 2H, J = 7^,6 Hz), 3,44 (d, 2H, J = 22 Hz), 4,13 (dq, 4H, J = 7,7 Hz), 7,08 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,25 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,59 (t, 1H, J = 7,6 Hz);

MS ⁽CI) ^m/^z 258 (MH+, 100%).

Analiza dla C₁₂H2oNO₃P · 0,50 H₂O:

Obliczono: C54,13; H 7 95; N 5,26; P 11,63,

Znaleziono: C54,19; H 7,95 ; N 5,25; P 11,65.

Etap 4

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 9, połączono produkt z etapu 3 z produktem z przykładu 1, etap 6, dla otrzymania związku tytułowego jako białej żywicy.

¹H NMR (400 MHz, CDCh) δ 0,78-2,01 (m, 12H), 1,36 (t, 3H, J = 7,6 Hz), 1,49 (d,3H, J = 6 Hz), 2,36-2,43 (m, 2H), 2,70-2,78 (m, 1H), 2,86 (q, 2H, J = 7,6 Hz), 4,77-4,85 (m, 1H), 6,47-6,58 (m, 2H),7,06 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,11 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 7,59 (t, 1H, J = 7,6 Hz), sól HCl: białawe ciało stałe.

[o] _d ²² = +21,3° (c 0,41, CH3OH);

MS (ESI) m/z 340 (MH+, 100%).

Analiza dla C22H29NO2 · HCl · 1,50 H2O:

Obliczono: C 65,58 , H 8,25 ; N 3,48,

Znaleziono: C 65,54 ; H 8,40 ; N 3,68.

Przykłady 9, 9A i 9B

OCH3

P r z y kł a d 9

Etap 1

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 7, traktowano 3-hydroksy-6-metylopirydynę chlorkiem triizopropylokrzemu.

Etap 2

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 8, traktowano produkt z etapu 1 dietylochlorofosforanem.

Etap 3

Przy użyciu procedury podobnej do opisanej w przykładzie 1, etap 9, połączono produkt z etapu 3 z produktem z przykładu 1, etap 6, dla otrzymania żądanego produktu (Tips oznacza triizopropylokrzem) jako białe ciało stałe.

MS (FAB) ^m/^z 484 (MH^+, 100%),

Etap 4

Przez traktowanie produktu z etapu 3 jak opisano w przykładzie 1, etap 10, otrzymano produkt z przykładu 9, sól HCl, białawe ciało stałe.

MS (CI) ^m/^z 342 (MH^+, 100).

P r z y k ł a d 9A

Etap

PL 195 027 B1

Do roztworu produktu z przykładu 9 (30 mg, 0,092 mmola) i Et₃N (64 ml, 0,46 mmola) w CH2CI2 (5 ml) w temperaturze pokojowej dodano bezwodnik trojfluorometanosulfonowy (46 ml, 0,28 mmola) i mieszaninę mieszano przez 10 minut, następnie przemyto wodą. Warstwę organiczną wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dała żądany triflat (42 mg, 100%), sól HCl, jasno żółte ciało stałe.

MS (FAB) m/^z 460 ⁽MH+ 100°%),

Etap 2

Do roztworu produktu z etapu 1 (37 mg, 0,081 mmola) i kwasu p-metoksyfenyloborowego (24 mg, 0,16 mmola) w toluenie (2 ml) dodano EtOH (0,5 ml), K2CO3 (44 mg, 0,32 mmola) w H2O (1 ml) i Pd(PPh₃)₄ (9 mg, 0,008 mmola), Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym ciśnieniowym naczyniu w atmosferze Ar w temperaturze 120°C przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto 5% NaOH i solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dało związek 9A (24 mg, 71%), sól HCl białe ciało stałe.

MS ⁽CI) m/^z 418 ⁽MH+ 100%).

Pr z y kł a d 9B

Mieszaninę produktu z przykładu 9 (33 mg, 0,10 mmola), bromku 4-(trifluorometylo)benzylu (36 mg, 0,15 mmola) i K2CO₃ (42 mg, 0,30 mmola) w acetonie (2 ml) mieszano w temperaturze wrzenia przez 3 godz. Ciało stałe filtrowano i przemyto EtOAc. Filtrat i roztwór z przemywania połączono i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dało związek z przykładu 9B (41 mg, 85 %), sól HCl, białawe ciało stałe.

MS ⁽CI) m/^z 486 ⁽MH+ 100°%),

Przykłady 10, 10A, 10B

Alternatywy dla procedury sprzęgania według przykładu 9. Metoda A

PL 195 027 B1

Mieszaninę 10(a) (wytworzono podobnie do przykładu 9A, etap 1, przy użyciu odpowiedniego materiału wyjściowego (460 mg, 1,00 mmola) estru diboropinakolu (305 mg, 1,20 mmola), octanu potasu (294 mg, 3,00 mmola), 1,1'-bis(difenylofosfino)ferocenu (55 mg, 0,10 mmola) i adduktu dichloro[1,1'-bis(difenylofosfonio)ferocen]palladu (II).

Dichlorometan (82 mg, 0,10 mmola) w 1,4-dioksanie (5 ml) ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze N2 w temperaturze 80°C przez 2 godz. Mieszaninę ochłodzono do temperaturze pokojowej. Do tej mieszaniny dodano 1-bromo-3-chlorobenzen (235 μΙ, 2,00 mmola), K₃PO₄(636 mg, 3,00 mmola), addukt dichloro-[1,1'-bis(di-fenylofosfino)ferocen]pallad (II) dichlorometanu (41 mg, 0,050 mmola) w 1,4-dioksanie (5 ml).

Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze azotu w temperaturze 80°C przez 16 godz. Mieszaninę rozdzielono między NH₄Cl (nasycony) i EtOAc. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni.

Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtO-Ac:heksan (20:80, następnie 25:75) jako eluentem dała (+)-związek z przykładu 10 (360 mg, 85%) jako białawe ciało stałe, sól HCl: białawe ciało stałe.

MS (FAB) m/^z 422 ⁽MH^+, 100%^),

Metoda B

P r z y k ł a d 10A

Mieszaninę 10(a) (46 mg, 0,10 mmola), 2-tributylostanylotiazol (112 mg, 0,30 mmola) i tetrakis(trifenylofosfino)pallad (12 mg, 0,010 mmola) w N-metylopirolidonie (1 ml) ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze azotu w temperaturze 120°C przez 20 godz. Mieszaninę rozdzielono między H2O i eter. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Preparatywna analiza TLC pozostałości na płycie żelu krzemionkowego mieszaniną EtO-Ac:heksan (30:70) jako eluentem dała związek z przykładu 10A (17 mg).

MS^: 395 ⁽MH⁺⁾.

P r z y k ł a d 10B

W podobny sposób wytworzono związek z przykładu 10B.

MS^: 392 ⁽MH⁺⁾.

Przykład 11

Do roztworu z przykładu 1L (20 mg, 0,058 mmola) i kwasu fenyloborowego (14 mg, 0,12 mmola) w toluenie (2 ml) dodano EtOH (0,5 ml), K2CO₃ (32 mg, 0,23 mmola) w H2O (1 ml) i Pd(PPh₃)₄(7 mg, 0,006 mmola). Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120 C przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto 5% NaOH i solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (20:80) jako eluentem dało związek tytułowy (10 mg, 11%), sól HCl, białawe ciało stałe.

MS (CI) m/^z 388 (MH+, 100 %).

Przykład 12

PL 195 027 B1

Przykład 1L (333 mg, 0,963 mmola) ogrzewano z winylotri-n-butylocyną (424 μΙ, 1,44 mmola) i Pd(PPh3)4 (62 mg, 0,05 mmola) w THF (10 ml) w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120 C przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto NH4G (nasycony) i solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (20:80) jako eluentem dała związek tytułowy (281 mg, 86%) jako białe ciało stałe.

MS ⁽CI) m/^z 338 ⁽MH+ 100%).

Przykład 13

Do roztworu ZnCh (0,96 ml, 0,5 M w THF) dodano chlorek izobutylomagnezu (0,22 ml, 2,0 M w eterze) w temperaturze -78°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze -78°C do temperatury pokojowej przez 1 godz. Dodano związek z przykładu 1L (30 mg) i Pd(PPh3)4 (10 mg) do otrzymanej mieszaniny. Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120°C przez 2,5 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto NH4G (nasycony), wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (20:80) jako eluentem dało związek tytułowy (16 mg) jako sól HCl, białe ciało stałe.

MS (FAB) m/^z 368 ⁽MH+ 100%).

Przykład 14

Związek z przykładu 1L (20 mg, 0,058 mmola) ogrzewano z piperydyną (0,5 ml) w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 190°C przez 13 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto NaHCO3 (nasycony) i solanką, wysuszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (30:70) jako eluentem dało związek tytułowy (15 mg, 66%), sól HCl, białe ciało stałe.

MS ⁽CI) m/^z 395 ⁽MH+ 100%).

Przykład 15

Do roztworu ZnCh (0,95 ml, 0,44 mmol, 0,5 M w THF) dodano chlorek benzylomagnezu (0,44 ml, 0,44 mmola, 1,0 M w eterze) w temperaturze -78°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze -78°C do temperatury pokojowej przez 1 godz. Do otrzymanej mieszaniny dodano produkt z przykładu 9A, etap 1 (40 mg, 0,087 mmola) i Pd(PPh3)4 (10 mg, 0,009 mmola). Mieszaninę ogrzewano w zamkniętym na86

PL 195 027 B1 czyniu ciśnieniowym w atmosferze Ar w temperaturze 120°C przez 16 godz. Mieszaninę rozcieńczono EtOAc, przemyto solanką, wysuszono (MgSO₄) i zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości mieszaniną EtOAc:heksan (30:70) jako eluentem dało związek tytułowy (34 mg, 97), sól HCl, białawe ciało stałe.

MS (FAB) m/^z 402 ⁽MH+ 100%),

Przykłady 16, 16A, 16B i 16C

Etap 1

Mieszaninę 6 (3,15 g) i SeO2 (3,10 g) w 1,4-dioksanie (50 ml) i pirydynie (5 ml) ogrzewano w zamkniętym naczyniu ciśnieniowym w temperaturze 100°C przez 1 godz. Mieszaninę ochłodzono do temperatury pokojowej, filtrowano i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (30:70) jako eluentem dała 37B (950 mg) i 37A (1,05 g).

Etap 2

Mieszaninę 37A (1,05 g) i PtO2 (250 mg) w EtOAc (70 ml mieszano pod balonem z wodorem w temperaturze pokojowej przez 16 godz. Mieszaninę odfiltrowano i filtrat zatężono próżni otrzymano żądany produkt (670 mg, 85%).

Etap 3

Mieszaninę produktu z etapu 2 (670 mg) i Ac2O (2 ml) w pirydynie (5 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez 16 godz. Mieszaninę wylano do mieszaniny rozcieńczonego roztworu HCl i lodu, mieszano przez 1 godz. Otrzymaną mieszaninę ekstrahowano eterem. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni, otrzymano żądany produkt (700 mg).

PL 195 027 B1

Etap 4

Traktowano produkt z etapu 3 w sposób podobny do opisanego w przykładzie 1, etapy 6 i 9, przy użyciu odpowiedniego fosfonianu otrzymano żądany związek.

Etap 5

Mieszaninę produktu z etapu 4 (100 mg), NaOH (10%, 2 ml), i CH3OH (2 ml) w THF (7 ml) mieszano w temperaturze 0°C przez 3 godz. Mieszaninę zneutralizowano nasyconym roztworem NH₄Cl i ekstrahowano eterem. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (45:55, następnie 50:50) jako eluentem dała tytułowy produkt (25 mg).

MS (FAB) ^m/^z 472 ⁽MH+ 100).

Przy użyciu odpowiednich fosfonianów zgodnie z procedurą z przykładu 16, etapy 4-5, wytworzono następujące związki 16A i 16B:

16A: MS (ESI) m/z 438 (MH+, 100);

16B^: MS (ESI) ^m/z 438 ⁽MH+ 100).

Przy użyciu procedury z przykładu 16, etapy 2-5, stosując materiał wyjściowy 37B wytworzono następujący związek 16C:

MS (FAB) m/z 472 (MH+, 100).

PL 195 027 B1

Pr z y k ł a d y 17 i 17A

Odczynnik Jones'a dodawano do roztworu produktu z przykładu 16, chlorowodorek (20 mg) w acetonie (5 ml) w temperaturze pokojowej aż do uzyskania trwałego koloru czerwonego. Reakcję zgaszono EtOH i ekstrahowano eterem, Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni, otrzymano związek tytułowy (20 mg).

MS (FAB) ^m/^z 470 ⁽MH+ 100).

Przykłady 18, 18A, 18B, 18C i 18D

DAST (dietyloaminosulfurotrifluorek) (2-3 krople) dodano do roztworu produktu z przykładu 16 (12 mg) w CH2Ch (2 ml) w temperaturze 0°C i mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej. Mieszaninę przemyto NaHCO3 roztwór (nasycony) i solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtO-Ac:heksan (35:65) jako eluentem dała tytułowy produkt (8 mg).

MS ⁽ESI) ^m/^z 474 ⁽MH^+, 100).

Przy użyciu procedury według przykładu 18, zastosowano jako materiał wyjściowy produkt z przykładu 16C i wytworzono związek 18A, podobnie przy użyciu odpowiedniego materiału wyjściowego wytworzono również związki 18B, 18C i 18D:

18A: MS (FAB) m/z 454 (MH+, 100), 18B^: MS ⁽ESI) ^m/^z 440 ⁽MH^+, 100), 18C: MS ⁽ESI) ^m/^z 474 ⁽MH^+, 100), 18D^: MS ⁽ESI) ^m/^z 440 ⁽MH^+, 100). Pr z y k ł a d 19

PL 195 027 B1

DAST (250 ml) dodano do roztworu produktu z przykładu 17 (60 mg) w CH2CI2 (5 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez 3 dni. Mieszaninę przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 i solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (35:65) jako eluentem dała tytułowy produkt.

MS ⁽FAB) m/^z 492 ⁽MH+ 100).

Przykłady 20, 20A i 20B

DAST dodano do roztworu związku 37B (180 mg) w CH2G2 w temperaturze -78°C i mieszano przez 15 minut. Mieszaninę przemyto nasyconym roztworem NaHCO3 i solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (10:90) jako eluentem dała żądany produkt (100 mg).

Etap 2

Traktowano produkt z etapu 1 w sposób podobny do opisanego w przykładzie 16, etapy 2 i 4, otrzymano związek tytułowy.

MS ⁽ESI) m/^z 474 ⁽MH+ 100),

Przy użyciu odpowiedniego fosfonianu w powyższej procedurze wytworzono związek z przykładu 20A; przy użyciu procedury i związku 4C wytworzono związek z przykładu 20B z produktu z przykładu 18:

20A: MS (CI) m/z 440 (MH+, 100), 20B^: MS ⁽ESI) m/^z 490 100).

Pr z y kł a d 21 ci

PL 195 027 B1

Produkt z przykładu 16 (30 mg, 0,063 mmola) ogrzewano pod chłodnicą zwrotną z SOCI2 (1 ml) przez 3 godz. Mieszaninę zatężono w próżni. Preparatywne rozdzielanie TLC pozostałości na płycie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (30:70) jako eluentem dała tytułowy produkt (13 mg).

MS (FAB) ^m/^z 490 ⁽MH⁺, 100).

P r z y k ł a d 22

MeMgBr (0,1 ml, 1,4 M) dodano do roztworu produktu z przykładu 17 (50 mg) w suchym THF (3 ml) i mieszano w temperaturze pokojowej przez kilka minut. Mieszaninę zneutralizowano nasyconym roztworem NH₄Cl i ekstrahowano eterem. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (40:60) jako eluentem dała tytułowy produkt (10 mg).

MS (FAB) ^m/^z 486 ⁽MH+ 100).

P r z y k ł a d y 23, 23A, 23B

n-BuLi (0,15 ml, 0,22 mmola) dodano to roztworu diizopropyloaminy (0,060 ml, 0,22 mmola) w suchym THF w temperaturze -78°C i mieszano przez kilka minut. Roztwór produktu z przykładu 17 (40 mg, 0,10 mmola) w suchym THF (2 ml) dodano w temperaturze -78°C i mieszano przez 15 minut. Dodano roztwór (10-kamforosulfonylo)oksazyrydyny (46 mg, 0,20 mmola) w suchym THF (2 ml) w temperaturze -78°C i mieszano do temperatury pokojowej (2 godz.), mieszaninę zneutralizowano nasyconym roztworem NH₄Cl i ekstrahowano eterem. Warstwę organiczną przemyto solanką, wysuszono i zatężono w próżni. Rzutowa chromatografia pozostałości na kolumnie żelu krzemionkowego mieszaniną EtOAc:heksan (60:40, następnie 70:30) jako eluentem dała tytułowy produkt (10 mg).

MS ⁽ESI) ^m/^z 486 ⁽MH+ 100).

Produkt z przykładu 23 traktowano w sposób podobny do opisanego w przykładzie 5B, otrzymano następujące związki:

CF3

PL 195 027 B1

23A: MS (FAB) m/z 488 (MH+, 100), 23B: MS (FAB) m/^z 488 ⁽MH^+, 100).

Pr z y k ł a d 24

Etap 1

Patrz J. Organomettallic Chem., 521 (1996) strony 203-210; J_ Ora. Chem., 47 (1982), strony 2825-2832,

Etap 2

Produkt z etapu 1 (27,5 g, 0,1255 mola) rozpuszczono w DMF (400 ml) i kolejno dodawano metakrylan (23 ml, 0,251% mol), Et₃N (52,25 ml, 0,3765 mola) i Pd(Ph₃P)₃Cl2 (4,37 g, 5% mol). Mieszaninę połączono z NH₄Cl (nasycony), ekstrahowano eterem i suszono (MgSO₄). Ekstrakty zatężono w próżni, a pozostałość chromatografowano (9:1-4:1 heksan/EtOAc), otrzymano 20 g (71%) żądanego związku.

¹H NMR (CDCl³) δ 1^,78 (t, J = 6^,5 Hz, 2H), 2^,38 (s, 2H) 2^,44 (m, 2H), 3^,74 (s, 3H) 4^,0 (s, 4H), 5,73 (d, J = 15 Hz, 1H), 6,17 (br s, 1H), 7,36 (d, J = 15 Hz, 1H).

Etap 3

Produkt z etapu 2 (20 g, 0,089 mola) rozpuszczono w mieszaninie 1:1 THF/CH3OH (520 ml całość). Powoli dodano 1M roztwór NaOH (260 ml). Mieszaninę mieszano przez 4 godz. i dodano wodę. Mieszaninę przemyto eterem, warstwę wodną zakwaszono do pH 1 i ekstrahowano EtOAc (x 3), połączone ekstrakty suszono (MgSO₄) i roztwór zatężono w próżni, otrzymano 19 g (99%) żądanego związku.

¹H NMR (CDCl³) δ 1,79 (t J = 6^,5 H^ 2H) 2^,40 2H) 2^,46 2H) 4^,01 4H) 5^,73 J =

15,7 Hz, 1H), 6,23 (s, 1H), 7,41 (d, J = 15,7 Hz, 1H).

Etap 4

Produkt z przykładu 1, etap 2 (23,28 g, 0,114 mola) rozpuszczono w THF (232 ml) i dodano katalizator uwodorniania Lindlar'a (3,48 g). Mieszaninę umieszczono pod ciśnieniem 1 atm H2 (g) i mieszano przez 2,5 godz. Mieszaninę odfiltrowano i zatężono w próżni, otrzymano żądany związek (22 g, 93%).

¹H NMR (CDCl³) δ 1^,32 J = 6^,5 H^ 3H) 5^,09 1H) 5^,17 2H) 5^,86 J = 11^,7 H^ 1H)

6,30 (dd,J = 11,7, 7,0 Hz, 1H), 7,38 (s, 5H).

PL 195 027 B1

Etap 5

Produkt z etapu 3 (18 g, 0,0856 mola) rozpuszczono w CH2CI2 (350 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C. Dodano 1,3-dicykloheksylokarbodiimid (23,23 g, 0,112 mola), następnie 4-pirolidynopirydynę (1,39 g, 9,4 mmola). Po mieszaniu przez 5 minut, roztwór produktu z etapu 4 (22 g, 0,1067 mola) w CH2Cl2 (127 ml) dodano w ciągu 10 minut. Mieszaninę mieszano w temperaturze 0°C przez 2 godz. i w temperaturze pokojowej przez 1 godz. Mieszaninę następnie filtrowano, zatężono w próżni, a pozostałość chromatografowano na kolumnie (9:1-4:1 heksan/EtOAc jako eluent), otrzymano 27 g oleju, Ten produkt rozpuszczono w ksylenie (300 ml) i ogrzewano w 215°C przez 7 godz. Po chromatografii kolumnowej (9:1-4:1-2:1 heksan/EtOAc) otrzymano 13,2 g oleju. Olej rozpuszczono w THF (264 ml) i dodano DBU (4,9 ml, 0,033 mola). Mieszaninę mieszano przez 1 godz., rozcieńczono EtOAc (500 ml), przemyto NHąCl (nasycony), wysuszono (MgSOą), zatężono w próżni, filtrowano przez filtr SiO2 (1 cal) (eluowano EtOAc) i zatężono w próżni, otrzymano żądany związek (13 g, 38%).

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,10 J = 6^,0 H^ 3H) 1^,2 ^(m 1H) 1^,65^-1^,85 ^(m 2H) 1^,92 ^(m 1H) 2^,35 (m,1 H), 2,47 (m, 1H), 2,59 (dd, J = 10,75, 4,0 Hz, 1H), 2,70 (m, 1H), (q, J = 2,5 Hz, 1H), 3,85-4,0 (m, 5H), 4,45 (m, 1H), 5,15 (AB kwartet, J = 12,0, 10,5 Hz, 2H), 5,36 (br s, 1H), 7,35 (s, 5H).

Etap 6

Produkt z etapu 5 (4,92 g, 0,0123 mola) rozpuszczono w EtOAc (250 ml), dodano 10% palladu na węglu (492 mg) i mieszaninę mieszano przy 1 atm H2 (g) przez 1 godz.

Mieszaninę odfiltrowano na celicie, dodano PtO2 (492 mg) do filtratu i mieszaninę mieszano przez 16 godz. przy 1 atm H2 (g). Mieszaninę następnie filtrowano i zatężono w próżni, otrzymano 3,81 g (99%) żądanego związku.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,25 ^(m 2H) 1^,35 J = 6^,5 H^ 3H) 1^,3^-1^,5 ^(m 3H) 1^,6 ^(m 1H) 1^,7^-1^,95 (m, 3H), 2,5 (m, 1H), 2,58 (m, 1H), 2,68 (m, 1H), 3,95 (m, 5H), 4,69 (m, 1H).

Etap 7

Produkt z etapu 6 (1 g, 3,2 mmola) rozpuszczono w toluenie (20 ml), dodano SOCl2 (1,25 ml) i mieszaninę ogrzewano w temperaturze 80°C przez 16 godz. Mieszaninę zatężono w próżni, rozpuszczono w świeżym toluenie (16 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C, Pd(Ph₃P)ą (186 mg), dodano następnie wodorek tributylocyny (1,3 ml, 4,8 mmola).

Mieszaninę mieszano przez 3 godz., następnie chromatografowano (4:1- 2,5:1 heksan:EtOAc), otrzymano 450 mg (48%) żądanego związku.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,24 J = 6^,5 H^ 3H) 1^,0^-1^,9 ^(m 10H) 2^,48 ^(m 1H) 2^,6^-2^,7 ^(m 2H) 3,87 (m, 4H), 4,54 (m, 1H), 9,70 (br s, 1H).

PL 195 027 B1

Etap 8

Produkt z przykładu 4, etap 3 (1,14 g, 3,0 mmola) rozpuszczono w THF (10 ml) i ochłodzono do temperatury 0°C. Dodano roztwór n-BuLi (1,9 ml 2,5 M roztworu w heksanach, 2,9 mmola) i mieszaninę mieszano przez 10 minut.

Roztwór następnie dodano do roztworu produktu z etapu 7 (450 mg, 1,53 mmola) w THF (10 ml) w temperaturze 0°C. Mieszaninę mieszano przez 2 godz., następnie dodano NH₄Cl (nasycony), Mieszaninę ekstrahowano (EtOAc), wysuszono (MgSO4), zatężono w próżni, a następnie chromatografowano (60:40 heksan:EtOAc), otrzymano 650 mg (83 %) tytułowego związku.

¹H NMR (CDCl₃) δ 1^,12^-1^,55 (mr 6H), 1^,43 (d, J = 6 Hz 3H), 1^,78 (m, 2H), 1^,79 (m, 1H), 1^,96 (dd, J = 6,5, 3,0 Hz, 1H), 2,9 (m, 2H), 2,70 (kwintet, J = 6,5 Hz, 1H), 3,95 (m, 4H), 4,76 (m, 1H), 6,55 (d, J = 15 5 Hz, 1H), 6,65 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,86 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,79 (s, 1H).

Produkt z przykładu 24 traktowano jak opisano poniżej dla otrzymania przykładów 24A, 24B-1, 24B-2 i 24C.

P r z y k ł a d 24A

Produkt z przykładu 24 (650 mg, 1,26 mmola) rozpuszczono w acetonie (7,5 ml) i dodano HCl (7,5 ml 1M roztwór). Mieszaninę ogrzewano w temperaturze 50°C przez 16 godz. Dodano NaHCO₃(nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Połączone ekstrakty suszono (MgSO4), zatężono w próżni i chromatografowano (1:1 heksan:EtOAc), otrzymano 590 mg (99%) związku 24A.

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,2^-1^,5 2H) 1^,47 J = 7^,0 Hz 3H) 1^,65 (mr 2H) 2^,08 2H) 2^,10 (m, 2H), 2,3-2,5 (m, 4H) 2,74 (kwintet, J = 6,5 Hz, 1H), 4,80 (m, 1H), 6,59 (d, J = 6,5 Hz, 1H), 6,72 (m, 1H), 7,28 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,61 (t, J = 75 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,81 (s, 1H), 787 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,80 (s, 1H).

P r z y k ł a d 24B-1 i 24B-2

Produkt z przykładu 24A (100 mg, 0,213 mmola) rozpuszczono w EtOH (8 ml) i dodano NaBH4 (30 mg). Po 5 minutach dodano NaHCO₃ (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc. Ekstrakty suszono (MgSO4) i zatężono w próżni.

Oczyszczanie preparatywną TLC (47,5:47,5:5 heksan:EtOAc:CH₃OH) dało mniej polarny izomer, 24B-1 (15 mg, 15%):

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 1^,15^-1^,4 4H) 1^,43 J = 6^,0 Hz 3^ 1^,5^-1^,7 3H) 1^,75^-1^,95

3H), 2,35-2,5 (m, 2H), 2,72 (kwintet, J = 6,6 Hz, 1H), 4,16 (br s, 1H), 4,75 (m, 1H), 5,46, J = 15,5 Hz, 1H), 6,65 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,60 (t, J = 8 Hz, 1H), 7,66 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,76 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,79 (s, 1H);

i bardziej polarny izomer 24B-2 (70 mg, 70%):

¹H NMR ⁽CDCl₃) δ 0^,93 1H) 1^,06^-1^,4 5H) 1^,43 J = 6^,0 Hz 3H) 1^,85^-2^,05 (mr 4H) 2,40 (m, 2H), 2,70 (kwintet, J = 6,5 Hz, 1H), 3,64 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 6,55 (d, J = 15,5 Hz, 1H), 6,64 (m, 1H), 7,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 760 (t, J = 7,75 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,75 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,79 (s, 1H).

P r z y k ł a d 24C

Produkt z przykładu 24A (30 mg, 0,0638 mmola) rozpuszczono w THF (1 ml). Dodano CH₃MgBr (150 μΙ 1M roztworu). Analiza TLC wykazała bardziej polarny związek. Dodano NH₄Cl (nasycony) i mieszaninę ekstrahowano EtOAc.

Ekstrakty suszono (MgSO4) i zatężono w próżni. Pozostałość oczyszczano preparatywną TLC (30:70 heksan:EtOAc), otrzymano 6 mg żądanego związku.

MS (FAB) m/z 486 (100).

PL 195 027 Β1

Przy użyciu podobnych procedur, wytworzono związki o następujących wzorach strukturalnych, których podstawniki zdefiniowano w tabeli.

OH h

w

Prz.	Q	w	Dane fizyczne
24D	Z _Λ .OH ίσ	Φ CH₃	MS (FAB) m/z =418
24 E	Z _Λ .OH ίο	Φ CH₃	MS (FAB)m/z =418
24F	/ _Λ .OH ίσ	dr^a	MS (FAB)m/z =418
24G	Z _Λ .OH ίο		MS (FAB)m/z =418
24H	Z _Λ .OH ίσ		MS (FAB)m/z = 422
241	z -OH ίο	io	MS (FAB)m/z =422
24J	Z _Λ .OH ίσ	Φ F	MS (FAB)m/z = 422
24K	Z _Λ .OH ίο	5 F	MS (FAB)m/z = 422
24L	Z _Λ .OH ίο	<Ł	¹H NMR (CDCI₃) 0.93 (m, 1H), 1.051.38 (m, 5H), 1.43 (d, J= 6.0 Hz, 3H), 1.88-2.1 (m, 4H), 2.36 (m, 2H), 2.68 (m, 1H), 3.65 (m, 1H), 5.75 (m, 1H), 6.5-6.65 (m, 2H), 7.27 (d, J= 8.0 Hz, 1H), 7.35-7.5 (m, 3H), 7.55 (s, 1H), 7.81 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H).

PL 195 027 B1

Następujące formulacje ilustrują postacie dawkowania według wynalazku. W każdym z nich określenie „związek czynny” oznacza związek o wzorze I.

Pr zy kł a d A

Tabletki

Nr

Składnik mg/tabletkę

500

113 mg/tabletkę

100

122

Związek czynny Lactoza USP Skrobia kukurydziana, jadalna, jako 10% pasta w oczyszczanej wodzie 30 40

Skrobia kukurydziana, jadalna 44 40

Stearynian magnezu 0 7

Całość 300 700

Sposób wytwarzania

Mieszano składniki nr 1 i 2 w odpowiednim mieszalniku przez 10-15 minut. Mieszaninę granulowano ze składnikiem nr 0. Zmielono zwilżony granulat gruboziarnisty (na przykład 1/4, 0,60 cm), jeżeli było to potrzebne. Wysuszono zwilżony granulat.

Przesiano wysuszone granule, jeżeli to potrzebne i zmieszano ze składnikiem nr 4 i przez 10-15 minut. Dodano składnik nr 5 i mieszano przez 1-0 minuty. Mieszaninę sprasowano do odpowiedniego rozmiaru i wagi w odpowiedniej tabletkarce.

Pr zy kł a d B

Kapsułki

Nr

Składnik mg/tabletkę mg/tabletkę

1	Związek czynny	100	500
2	Laktoza USP	106	120
0	Skrobia kukurydziana jadalna	40	70
4	Stearynian magnezu NF	4	7
	Całość	250	700

Sposób wytwarzania

Mieszano składniki nr 1,2 i 0 w odpowiednim mieszalniku przez 10-15 minut. Dodano składnik nr 4 i mieszano przez 1-0 minuty. Mieszaniną napełniano odpowiednie dwuczęściowe twarde kapsułki żelatynowe w odpowiednim urządzeniu do kapsułkowania.

Aktywność związków o wzorze I można określać następującymi procedurami.

Procedura testowania in vitro antagonistów receptora trombiny ^Wy^twarzanⁱe [³H]^ha^TR^AP

A(pF-F)R(ChA)(hR)(l2-Y)-NH2 (1,00 mg) i 10% Pd/C (5,07 mg) zawieszono w DMF (250 μΙ) i diizopropyloetyloaminie (10 μ). Naczynie podłączono do linii trytu, zamrożono w ciekłym azocie i odparowano w próżni. Następnie do kolby dodano gazowy tryt (042 mCi), mieszano w temperaturze pokojowej przez 2 godz.

Po zakończeniu reakcji usunięto nadmiar trytu, a roztwór przereagowanego peptydu rozcieńczono DMF (0,5 ml) i filtrowano dla usunięcia katalizatora, zebrany roztwór surowego peptydu rozcieńczono wodą i liofilizowano dla usunięcia labilnego trytu, ciało stałe peptydu powtórnie rozpuszczono w wodzie i powtórzono proces liofilizacji, peptyd z trytem ([³H]haTRAP) rozpuszczono w 0,5 ml 0,1% wodnego roztworu TFA i oczyszczano za pomocą HPLC stosując następujące warunki:

kolumna: Vydac C18, 25 cm x 9,4 mm l.D.; faza ruchoma: (A) 0,1% TFAw wodzie, (B) 0,1% TFA w CH_:,CN; gradient: (A/B) od 10% do 40/60 w ciągu 00 minut; szybkość przepływu: 5 ml/min;

detekcja: UV przy 215 nm;

radiochemiczna czystość [³H]haTRAP: 99% jak zanalizowano za pomocą HPLC.

Otrzymano porcję 14,9 mCi o specyficznej aktywności 18,4 Ci/mmol.

PL 195 027 B1

Wytwarzanie membran płytek krwi

Membrany płytek krwi wytwarzano stosując modyfikację metody Natarajan'a i in. (Natarajan i in., Int. J. Peptide Protein Res. 45: 145-151 (1995)) z 20 jednostek koncentratów płytek krwi otrzymanych z North Jersey Blood Center (East Orange, NJ) z kolekcji 48 godzinnej. Wszystkie etapy prowadzono w temperaturze 4°C w odpowiednio bezpiecznych warunkach.

Płytki krwi wirowano 100 x g przez 20 minut w temperaturze 4°C dla usunięcia czerwonych komórek, supernatanty zdekantowano i wirowano 3000 x g przez 15 minut dla zgrudkowania płytek krwi. Płytki krwi powtórnie zawieszono w 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, do całkowitej objętości 200 ml i wirowano 4400 x g przez 10 minut. Ten etap powtórzono jeszcze dwa razy. Płytki krwi zawieszono powtórnie w 5 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mM EDTA do końcowej objętości w przybliżeniu 30 ml i homogenizowano z 20 uderzeniami w homogenizatorze Dounce.

Grudkowano membrany przy 41000 x g, powtórnie zawieszono w 40-50 ml 20 mM Tris-HCl, pH 7,5, 1 mM EDTA, 0,1 mM ditiotreitolu i 10 ml podjednostki zamrażano w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze -80°C. Dla zakończenia procesu wytwarzania membran podjednostki rozmrażano, zbierano i homogenizowano z 5 uderzeniami w homogenizatorze Dounce.

Membrany grudkowano i przemywano 3 krotnie 10 mM trietanoloaminą-HCl, pH 7,4, 5 mM EDTA i powtórnie zawieszano w 20-25 ml 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 10 mM MgCh, 1 mM EGTA i 1% DMSO. Podjednostki membran zamrażano w ciekłym azocie i przechowywano w temperaturze -80°C. Membrany były stabilne przez co najmniej 3 miesiące.

jednostek koncentratów płytek krwi zazwyczaj dawało 250 mg membran protein. Stężenie protein było określane testem Lowry'ego (Lowry i in., J. Biol. Chem., 193: 265-275 (1951)).

Wysokosprawny test przyłączania radioligandu receptora trombiny

Antagoniści receptora trombiny byli badani przy użyciu testu przyłączania radioligandu receptora trombiny Ahn'a i in. (Ahn i in., Mol. Pharmacol., 51: 350-356 (1997)). Test prowadzono w 96 otworkowych płytach Nunc (Cat. nr 269620) w końcowej objętości 200 μΙ. Membrany płytek krwi i [³H]haTRAP rozpuszczano odpowiednio do 0,4 mg/ml i 22,2 nM, w wiążącym buforze (50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 10 mM MgCI₂, 1 mM EGTA, 0,1% BSA).

Wyjściowe roztwory (10 mM w 100% DMSO) badanych związków rozpuszczano dalej w 100% DMSO. Jeżeli nie wskazano inaczej, to 10 μl roztworu rozcieńczonego związku i 90 μl radioligandu (końcowe stężenie 10 nM w 5% DMSO) dodawano do każdego dołka i rozpoczynano reakcję przez dodanie 100 μl membran (40 μg proteiny/dołek). Wiązanie nie było znacząco hamowane przez 5% DMSO.

Związki testowano w trzech stężeniach (0,1, 1 i 10 pM). Płyty przykryto i łagodnie mieszano na wytrząsarce Lab-Line Titer Plate Shaker przez 1 godz. w temperaturze pokojowej. Packard UniFilter GF/C filtrowe płytki zanurzano na co najmniej 1 godz. w0,1% polyetylenoiminie. Inkubowane membrany utwardzano przy użyciu Packard Filter Mate Universal Harvester i szybko przemywano cztery razy 300 μl chłodzonym lodem roztworem 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 1 mM EGTA. Scyntylacyjny koktajl MicroScint 20 (25 μ) dodawano do każdego dołka, i płytki liczono w liczniku Packard TopCount Microplate Scintillation Counter.

Specyficzne przyłączenie było definiowane jako całkowite przyłączenie minus niespecyficzne przyłączenie obserwowane w obecności nadmiaru (50 μM) nieznaczonego haTRAP.

% zahamowania przez związek przyłączenia [³H]haTRAP do receptorów trombiny był obliczany z następującego równania:

% , _i całkowiteprzyłączenie-przyłączeniew obecności badanego związku „₀„ % zahamowania =-^{r j hr j ha}-—— χ 100 całkowite przyłączenie - niespecyficzne przyłączenie

Materiały

A(pF-F)R(ChA)(hR)Y-NH₂ i A(pF,F)R(ChA)(hR)(I₂,Y)NH₂, były zwyczajnie syntetyzowane przez AnaSpec Inc. (San Jose, CA). Czystość tych peptydów wynosiła > 95%. Gazowy tryt (97%) był dostarczany z EG & G Mound, Miamisburg, Ohio.

Gaz był ładowany i przechowywany w urządzeniu IN/US Systems Inc. Trisorber. Koktajl scyntylacyjny MicroScint 20 otrzymano z Packard Instrument Co.

PL 195 027 B1

Protokół testu ex-vivo agregacji płytek krwi Cynomolgus w pełnej krwi i zbieranie krwi

Świadome siedzące małpy cynomolgus pozostawiono do aklimatyzacji przez 30 minut. Cewnik igłowy wprowadzono do żyły barkowej dla wprowadzania testowanych leków. Inny cewnik igłowy wprowadzano do drugiej żyły barkowej lub dopiszczelowej i używano do pobierania próbek krwi. W tych doświadczeniach związek jest podawany doustnie i tylko jeden cewnik jest używany. Podstawowa próbka krwi (1-2 ml) jest pobierana do próżniowej probówki zawierającej inhibitor trombiny CVS 2139 (100 pg/0,1 ml solanki) jako antykoagulant.

Lek jest następnie wprowadzany dożylnie w czasie 30 minut. Pobierano próbki krwi w ciągu 5, 10, 20, 30 minut i 30, 60, 90 minut po zakończeniu podawania leku. W doświadczeniach PO zwierzętom dawkowano lek przy użyciu zgłębnikowej kaniuli.

Próbki krwi pobierano w czasie 0, 30, 60, 90, 120, 180, 240, 300, 360 minut po podaniu. 0,5 ml krwi używano do agregacji pełnej krwi a drugie 0,5 ml krwi używano do określania stężenia w plazmie leku lub jego matebolitów. Agregacja jest prowadzona bezpośrednio po pobraniu próbek krwi, jak opisano poniżej.

Agregacja pełnej krwi

0,5 ml próbkę krwi dodano do 0,5 ml solanki i ogrzano do 37°C w agrometrze pełnej krwi Chronolog. Jednocześnie elektrodę impedancji ogrzewano w solance do 37°C. Próbkę krwi z kostką mieszającą umieszczano w ogrzewanym naczyniu, w próbce umieszczano elektrodę impedancji i rozpoczynano sterowany komputerem pomiar.

Pomiar jest prowadzony, dopóki nie ustabilizuje się linia bazowa, następnie wprowadzany jest opór 20 Ω. 20 Ω odpowiada 4 blokom na grafie generowanym przez program komputerowy. Dodaje się antagonistę (haTRAP) przez odpowiednio skalibrowaną pipetę (5-25 pl) i rysowana jest krzywa agregacji przez 10 minut. Zapisywaną wartością jest maksimum agregacji w 6 minucie po podaniu antagonisty.

Procedura agregacji płytek krwi in vitro

Badanie agregacji płytek krwi prowadzono zgodnie z metodą Bednar'a i in. (Bednar. B., Condra. C., Gould. R.J. i Connolly. T M., Trom. Res., 77: 453-463 (1995)).

Krew pobierano od zdrowych ludzi, którzy nie przyjmowali aspiryny przez co najmniej 7 dni, przez nakłucie żył stosując ACD jako antykoagulant.

Wytwarzano plazmę wzbogaconą w płytki krwi przez wirowanie 100 x g przez 15 minut w temperaturze 15°C.

Płytki krwi bryłkowano przy 3000 x g i przemywano dwukrotnie buforowaną solanką zawierającą 1 mM EGTA i 20 pg/ml apirazy dla zahamowania agregacji.

Agregacja zachodziła w temperaturze pokojowej w buforowanej solance uzupełnionej 0,2 mg/ml ludzkim fibrynogenem.

Badane związki i płytki krwi wstępnie inkubowano w 96-dołkowych o płaskich dnach płytach przez 60 minut.

Agregację rozpoczynano przez dodawanie 0,3 pM haTRAP lub 0,1 U/ml trombiny i szybkie wytrząsanie mieszaniny przy użyciu Lab Line Titer Plate Shaker (szybkość 7).

Kontrolowano procent agregacji jako wzrost transmitancji światła przy 405 nm w czytniku Spectromax Plate Reader.

Procedura przeciwrakowa in vivo

Prowadzono testy na modelu ludzkiego raka piersi u nagich myszy zgodnie z procedurą opisaną przez S. Even-Ram i in. Nature Medicine, 4, 8 (1988), strony 909-914.

Stosując procedury testowe wyżej opisane, w testach in vitro antagonistę receptora trombiny, związki według wynalazku miały wartości IC₅₀ (tj. stężenie, przy którym występuje 50% zahamowanie receptora trombiny) w zakresie około 4 do 2000 nM, a korzystne związki miały wartości około 4 do 100 nM.

W teście in vitro hamowania agregacji płytek krwi (PAI) testowane związki miały wartości IC₅₀w zakresie 67 do 1000 nM.

W teście ex vivo pełnej krwi małp PAI, jeden testowany związek wykazał 100% agregację przy 3 mpk (doustnie w betahydroksypropylocyklodekstrynie jako współrozpuszczalniku), a inny związek miał 100% agregacji przy 10 mpk (podany i.v. w ciągu 30 minut, w 5% dekstrozie).

Claims

1. Tricyklicznyzwiązek o wzorzestrukturalnym (I) albo jego farmazkktkzeyik dopusezealna sól, w którym to weoree: linia kropkowana oenazea ewentualnie wizeanie podwójne, y wynosi 0;

Q oenazea fenyl, R-podstawiony fenyl, zykloheksyl, R-podstawiony zykloheksyl; gdeie R oenazea 1 do 3 podstawników nieeależnie wybranyzh e grupy składajzzej się e H, grupy )Ci-C₆)alkilowej, flrorowza, -OH, grupy )Ci-C₆)alkoksylowej, -O-)CH2)2-O-, =O, =NOH;

Ri i R² są nieeależnie wybrane e grupy składajzzej się e H, grupy )Ci-C₆)alkilowej;

R³ oenazea H, grupę, )Ci-C6)alkilowz, )C2-C6)alkenylowz, fenylową albo hydroksy)Ci-C6)alkilową, -OH, -C)O)ORi⁷, gdeie Ri⁷ jest wybrany spośród H i grupy )Ci-C6)alkilowej;

Het oenazea grupę pirydylowz, ewentualnie W-podstawionz grupę pirydylowz, zhinolinylowz, ewentualnie W-podstawionz grupę zhinolinylowz, pirymidynowz, indolowz, beneoksaeolowz, tiaeolowz, zhinoksalinowz, fenantrolinowz, piraeynowz, pirydaeynowz podstawionz alkilem, beneozhinolinowz, indaeolowz, ieozhinolinowz, piraeynowz, pirydylowz skondensowanz e grupz )C₅-C7)zykloalkilowz, ewentualnie podstawionz preee grupę )Ci-C₆)alkilowz; i te grupy sz ewentualnie w postazi N-tlenków lub grup zewartoreędowyzh;

gdeie W oenazea grupę:

)Ci-C₆)alkilowz, ewentualnie podstawionz preee fenylowz, i albo 2 grupy OH, )Ci-C₆)alkoksylowz, fenoksylowz, N)CH3)2, CF3; )C2-C₆)zykloalkilowz; )C2-C₆)alkenylowz; )Ci-C₆)alkoksylowz ewentualnie podstawionz preee fenylowz skondensowanz o -O-CH2-O- albo podstawionz preee fluorowiez, OH, CF3, NH2, C)O)OH, (C1-C₆)alkilowz, )Ci-C₆)alkoksylowz, -C)O)O)Ci-C₆)alkilowz, -NH-C)O)O)Ci-C₆)-alkilowz, -C)O)-morfolinowz, -C)O)NH-fenylowz, fenylowz ewentualnie podstawionz preee C)O)OCH3, pirydynowz, 5 zełonowz nienasyzonz grupę heterozyklizenz o 4 atomami N, 5 zełonowz nienasyzonz grupę heterozyklizenz o i atomem S, ewentualnie podstawionz preee fluorowiez; fenylowz ewentualnie skondensowanz o -O-CH2-O- albo podstawionz preee )Ci-C₆)alkilowz, podstawionz preee OH, N)CH3)2, fluorowiez, )Ci-C₆)alkoksylowz, ewentualnie podstawionz preee COOH, fluorowiez, N-)Ci-C₆)alkilowz, aminowz, ewentualnie podstawionz preee C)O))Ci-C₆)alkoksylowz, C)O)-fenylowz, SO2fenylowz)Ci-C₆)alkilowz, CF3, OH, C=O, C)O)OH, C)O)O)Ci-C₆)alkilowz, C)O)Nh2, fenylowz, NO2, CN, SO2NH2, SO2alkilowz; aminowz ewentualnie podstawionz preee )Ci-C₆)alkilowz, zyklo 5 zełonowz, alkilofenylowz, C)O)-fenylowz, SO2-fenylowz, piperaeynylo-CH3, C)O)OH, C)O)-NH-fenylowz, zykloheksylowz, naftalenowz, 5-6 zełonowz grupę heteroarylowz o 2 atomami hetero wybranymi e S, N i O; albo oenazea fluorowiez, OH, CN, CF3, grupę tio-)Ci-C6)alkilowz;

R⁸, Rⁱ⁰ i Ri oenazeajz H, prey zeym gdy występuje ewentualne wizeanie podwójne to Rⁱ⁰ nie występuje, a gdy Q oenazea pierśzień fenylowy to R¹⁰ i Ri nie występujz;

^r9 oenazea ^H atóo -^OH;

B oenazea -CH=CH-;

X oenazea -O-;

Y oenazea =O.

2. Związee wwełuu zeafrz. t w którym kaażd R² I R⁸ oorinaze H; R³ oomaze H albb grupp )Ci-C6)alkilowz; i R oenazea H albo -OH.

3. Zwizeek według eastre. i albo 2, w którym Ri oenazea grupę )Ci-C6)alkilowz.

4. Związee wwełuu ζοι^ζ. 1 alt>b 2, w Ιύό^ηι Q R-ppOstawiony albb

R-podstawiony fenyl.

PL 195 027 B1

5. Związekwedług zastrz. 1 albo 2,w którym R oznacza fluor, -OH, grupę (C-i-C₆)alkilową albo (Ci -C₆)alkoksylową.

6. Zwiąadk według nasórn. -, wyOzaay a gzoęy składającej się a:

7. Związek j akokteklonyw zaatóz. 1 der ztozoweaia der ząywarzania I eków der lamowania zecepóozów ózomOiay, w sazaególaośzi do lezaeaia aakredęizy, sówazdaieaia óęóaizaek, aawzoóo awężeaia, aadziśaieaia, dosaaizy Oolesaej, arytmii, aiewydolaośzi sezza, aawało sezza, aaęaleaia kłęOosaków aezkowyzh, aakzadęowdgo i aakzndęowdgo a aaóozami ęozażeaia, zhozóO aazayń oOwodowyzh, zhozóO aaęalayzh, aiedokzwieaia móago i raka.

8. Ke^r^f^e^^a^y^J^ karmaceLpyczna zawierająca subOsancję aktóweą, f^rr^^e^^L^Oó^^^^ie^ dopuszczalay aośaik, znamienna tym, że jako awiąaek akóyway aawieza skoóezaaz ilość awiąako jak okześloay w aasórz. -.