PL197569B1 - Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna - Google Patents
Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutycznaInfo
- Publication number
- PL197569B1 PL197569B1 PL339559A PL33955998A PL197569B1 PL 197569 B1 PL197569 B1 PL 197569B1 PL 339559 A PL339559 A PL 339559A PL 33955998 A PL33955998 A PL 33955998A PL 197569 B1 PL197569 B1 PL 197569B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- mcp
- protein
- amino
- cells
- amino acid
- Prior art date
Links
- AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N mcp 2 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 AEUKDPKXTPNBNY-XEYRWQBLSA-N 0.000 title claims abstract description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 title claims description 7
- 102100034871 C-C motif chemokine 8 Human genes 0.000 claims abstract description 103
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 29
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 13
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 101710155833 C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 claims abstract 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 45
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 8
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 claims 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 abstract description 21
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 abstract description 21
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 abstract description 11
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 abstract description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 abstract description 6
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 108010055204 Chemokine CCL8 Proteins 0.000 description 94
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 34
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 15
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 12
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 12
- 108010055124 Chemokine CCL7 Proteins 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 12
- 101710155857 C-C motif chemokine 2 Proteins 0.000 description 11
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- 239000002559 chemokine receptor antagonist Substances 0.000 description 9
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 9
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 7
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 6
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 5
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 5
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 5
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 5
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 description 4
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 108010090333 leucyl-lysyl-proline Proteins 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- -1 9-fluorenylmethoxycarbonyl Chemical group 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N Arg-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N PHHRSPBBQUFULD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N Asn-Arg-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N DQTIWTULBGLJBL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- 108050006947 CXC Chemokine Proteins 0.000 description 3
- 102000019388 CXC chemokine Human genes 0.000 description 3
- QJUDRFBUWAGUSG-SRVKXCTJSA-N Cys-Cys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CS)N QJUDRFBUWAGUSG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CS)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O HMWBPUDETPKSSS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 3
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N Tyr-Thr-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@H](O)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 ITDWWLTTWRRLCC-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 3
- CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N Val-Cys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C(C)C)N CWSIBTLMMQLPPZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 3
- YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N fura-2 Chemical compound CC1=CC=C(N(CC(O)=O)CC(O)=O)C(OCCOC=2C(=CC=3OC(=CC=3C=2)C=2OC(=CN=2)C(O)=O)N(CC(O)=O)CC(O)=O)=C1 YFHXZQPUBCBNIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 3
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 3
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 3
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- PAMIQIKDUOTOBW-UHFFFAOYSA-N 1-methylpiperidine Chemical compound CN1CCCCC1 PAMIQIKDUOTOBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N Ala-Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 2
- SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N Arg-Asp Chemical compound NC(=N)NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O SIFXMYAHXJGAFC-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N Asn-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N YVXRYLVELQYAEQ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 102100036153 C-X-C motif chemokine 6 Human genes 0.000 description 2
- 108010014423 Chemokine CXCL6 Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 2
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VFBZWZXKCVBTJR-SRVKXCTJSA-N His-Leu-Asp Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)N VFBZWZXKCVBTJR-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 101000946794 Homo sapiens C-C motif chemokine 8 Proteins 0.000 description 2
- IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N Leu-Leu-Cys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O IFMPDNRWZZEZSL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N Leu-Lys-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N RTIRBWJPYJYTLO-MELADBBJSA-N 0.000 description 2
- DRCILAJNUJKAHC-SRVKXCTJSA-N Lys-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O DRCILAJNUJKAHC-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N N-tris(hydroxymethyl)methylglycine Chemical compound OCC(CO)(CO)[NH2+]CC([O-])=O SEQKRHFRPICQDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N Phe-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XZQYIJALMGEUJD-OEAJRASXSA-N 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UQTNIFUCMBFWEJ-IWGUZYHVSA-N Thr-Asn Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O UQTNIFUCMBFWEJ-IWGUZYHVSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 150000001945 cysteines Chemical class 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 2
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000030505 negative regulation of chemotaxis Effects 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 230000027425 release of sequestered calcium ion into cytosol Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 2
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N (2S,3S)-2-[[[(2S)-1-[(2S,3S)-2-amino-3-methyl-1-oxopentyl]-2-pyrrolidinyl]-oxomethyl]amino]-3-methylpentanoic acid Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNTMAZFVYNDPLB-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N Arg-Asp-Ser Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N)CN=C(N)N HKRXJBBCQBAGIM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N Arg-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O HJDNZFIYILEIKR-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ZCSHHTFOZULVLN-SZMVWBNQSA-N Arg-Trp-Val Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N)=CNC2=C1 ZCSHHTFOZULVLN-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- JNCRAQVYJZGIOW-QSFUFRPTSA-N Asn-Val-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O JNCRAQVYJZGIOW-QSFUFRPTSA-N 0.000 description 1
- PMEHKVHZQKJACS-PEFMBERDSA-N Asp-Gln-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O PMEHKVHZQKJACS-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N Asp-Pro-Lys Chemical compound C1C[C@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O UAXIKORUDGGIGA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- OFYVKOXTTDCUIL-FXQIFTODSA-N Asp-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N OFYVKOXTTDCUIL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 1
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 101710091342 Chemotactic peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000018832 Cytochromes Human genes 0.000 description 1
- 108010052832 Cytochromes Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 1
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 1
- QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N Digitonin Natural products CC1CCC2(OC1)OC3C(O)C4C5CCC6CC(OC7OC(CO)C(OC8OC(CO)C(O)C(OC9OCC(O)C(O)C9OC%10OC(CO)C(O)C(OC%11OC(CO)C(O)C(O)C%11O)C%10O)C8O)C(O)C7O)C(O)CC6(C)C5CCC4(C)C3C2C QRLVDLBMBULFAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 108010001515 Galectin 4 Proteins 0.000 description 1
- NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N Glu-Ala-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NCWOMXABNYEPLY-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- SYDJILXOZNEEDK-XIRDDKMYSA-N Glu-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O SYDJILXOZNEEDK-XIRDDKMYSA-N 0.000 description 1
- VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N Glu-Leu-Arg Chemical group OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O VSRCAOIHMGCIJK-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KCCNSVHJSMMGFS-NRPADANISA-N Glu-Val-Cys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N KCCNSVHJSMMGFS-NRPADANISA-N 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920001612 Hydroxyethyl starch Polymers 0.000 description 1
- YKRIXHPEIZUDDY-GMOBBJLQSA-N Ile-Asn-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YKRIXHPEIZUDDY-GMOBBJLQSA-N 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N Ile-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 LRAUKBMYHHNADU-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 1
- SAEWJTCJQVZQNZ-IUKAMOBKSA-N Ile-Thr-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N SAEWJTCJQVZQNZ-IUKAMOBKSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N Isophenergan Chemical compound C1=CC=C2N(CC(C)N(C)C)C3=CC=CC=C3SC2=C1 PWWVAXIEGOYWEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 102000008192 Lactoglobulins Human genes 0.000 description 1
- 108010060630 Lactoglobulins Proteins 0.000 description 1
- CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N Leu-Met-Ala Chemical compound CSCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPONGMJGVIAWEH-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 1
- UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N Lys-Glu Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O UGTZHPSKYRIGRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N Lys-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O OWRUUFUVXFREBD-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N Lys-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IZJGPPIGYTVXLB-FQUUOJAGSA-N 0.000 description 1
- YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N Lys-Thr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O YKBSXQFZWFXFIB-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N Lys-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN YQAIUOWPSUOINN-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN GILLQRYAWOMHED-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 101710091439 Major capsid protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010023347 Met- RANTES Proteins 0.000 description 1
- UFOWQBYMUILSRK-IHRRRGAJSA-N Met-Lys-His Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 UFOWQBYMUILSRK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JIYJYFIXQTYDNF-YDHLFZDLSA-N Phe-Asn-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N JIYJYFIXQTYDNF-YDHLFZDLSA-N 0.000 description 1
- UMKYAYXCMYYNHI-AVGNSLFASA-N Phe-Gln-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N UMKYAYXCMYYNHI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 102100036154 Platelet basic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710195957 Platelet basic protein Proteins 0.000 description 1
- GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N Pro-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 GLEOIKLQBZNKJZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ZCXQTRXYZOSGJR-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZCXQTRXYZOSGJR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C([O-])=O)NC(=O)[C@@H]1CCC[NH2+]1 OCYROESYHWUPBP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N Pro-Ile-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KLSOMAFWRISSNI-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N Ser-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O OQSQCUWQOIHECT-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N Syringetin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UZMAPBJVXOGOFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N Thr-Cys-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O DGOJNGCGEYOBKN-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Arg Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N TZJSEJOXAIWOST-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- 239000007997 Tricine buffer Substances 0.000 description 1
- 101710162629 Trypsin inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 229940122618 Trypsin inhibitor Drugs 0.000 description 1
- APEBUJBRGCMMHP-HJWJTTGWSA-N Val-Ile-Phe Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 APEBUJBRGCMMHP-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N Valyl-Serine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NC(CO)C(O)=O STTYIMSDIYISRG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N [benzotriazol-1-yloxy(dimethylamino)methylidene]-dimethylazanium Chemical compound C1=CC=C2N(OC(N(C)C)=[N+](C)C)N=NC2=C1 CLZISMQKJZCZDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FKNHDDTXBWMZIR-GEMLJDPKSA-N acetic acid;(2s)-1-[(2r)-2-amino-3-sulfanylpropanoyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(O)=O.SC[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O FKNHDDTXBWMZIR-GEMLJDPKSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000003139 biocide Substances 0.000 description 1
- 230000001275 ca(2+)-mobilization Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002556 chemokine receptor agonist Substances 0.000 description 1
- PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N chemotactic peptide Chemical compound CSCC[C@H](NC=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 PRQROPMIIGLWRP-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N digitonin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H]([C@]2(CC[C@@H]3[C@@]4(C)C[C@@H](O)[C@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)CO7)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O6)O[C@H]6[C@@H]([C@@H](O[C@H]7[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@@H](CO)O5)O)C[C@@H]4CC[C@H]3[C@@H]2[C@@H]1O)C)[C@@H]1C)[C@]11CC[C@@H](C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-KUAJCENISA-N 0.000 description 1
- UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N digitonine Natural products CC1C(C2(CCC3C4(C)CC(O)C(OC5C(C(O)C(OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)CO7)O)C(O)C(CO)O6)OC6C(C(OC7C(C(O)C(O)C(CO)O7)O)C(O)C(CO)O6)O)C(CO)O5)O)CC4CCC3C2C2O)C)C2OC11CCC(C)CO1 UVYVLBIGDKGWPX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010054812 diprotin A Proteins 0.000 description 1
- 230000001210 effect on neutrophils Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000003269 fluorescent indicator Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000043805 human CCL8 Human genes 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940050526 hydroxyethylstarch Drugs 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000028550 monocyte chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001992 poloxamer 407 Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010015796 prolylisoleucine Proteins 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 239000002464 receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 229940044551 receptor antagonist Drugs 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 101150003509 tag gene Proteins 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N α-cyano-4-hydroxycinnamic acid Chemical compound OC(=O)C(C#N)=CC1=CC=C(O)C=C1 AFVLVVWMAFSXCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/4813—Exopeptidases (3.4.11. to 3.4.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/521—Chemokines
- C07K14/523—Beta-chemokines, e.g. RANTES, I-309/TCA-3, MIP-1alpha, MIP-1beta/ACT-2/LD78/SCIF, MCP-1/MCAF, MCP-2, MCP-3, LDCF-1, LDCF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Virology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
1. Skrócone na ko ncu aminowym bia lko MCP-2, znamienne tym, ze jest skrócone o aminokwasy ko nca NH 2 , odpowiadaj ace resztom aminokwasowym 1, 1-2, 1-3, 1-4 albo 1-5 naturalnie wyst epuj acego MCP-2, oraz ze wykazuje aktywnosc antagonistyczn a wzgl edem chemokin. 2. Skrócone na ko ncu aminowym bia lko MCP-2 wed lug zastrz. 1, znamienne tym, ze jest skróco- ne o aminokwasy ko nca NH 2 , odpowiadaj ace resztom aminokwasowym 1-5 naturalnie wyst epuj acego MCP-2, oraz ze wykazuje aktywnosc antagonistyczn a wzgl edem chemokin. 8. Rekombinacyjny sposób wytwarzania bia lka okre slonego w zastrz. 1 albo 3, znamienny tym, ze obejmuje hodowanie w odpowiedniej po zywce hodowlanej komórki okre slonej w zastrz. 7. 10. Zastosowanie bia lka okre slonego w zastrz. 1 albo 3 do wytwarzania leku do leczenia i/lub dia- gnostyki choroby, w której konieczna jest aktywno sc antagonistyczna wzgl edem aktywno sci chemokiny. 12. Kompozycja farmaceutyczna zawieraj aca substancj e czynn a wraz z jednym albo wieloma do- puszczalnymi farmaceutycznie no snikami i/lub zaróbkami, znamienna tym, ze jako substancj e czynn a zawiera bialko okre slone w zastrz. 1 albo 3. PL PL PL PL PL
Description
(21) Numer zgłoszenia: 339559 (13) (51) Int.Cl.
C12N 15/19 (2006.01) C07K 14/52 (2006.01) A61K 38/19 (2006.01) A61K 38/48 (2006.01)
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej (22) Data zgłoszenia: 28.09.1998 (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego:
28.09.1998, PCT/EP98/06142 (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
08.04.1999, WO99/16876 PCT Gazette nr 14/99
| Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania (54) oraz jegozastosowame , cząsteczk i DNA, v^^łtorr ekspresyjny, komórka gospodarza | |
| i kompozycj | a farmaceutyczna |
| (30) Pierwszeństwo: 29.09.1997,EP,97116863.8 19.12.1997,EP,97122471.2 | (73) Uprawniony z patentu: APPLIED RESEARCH SYSTEMS ARS HOLDING N.V.,Curacao,AN |
| 10.03.1998,EP,98104216.1 | (72) Twórca(y) wynalazku: |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: 18.12.2000 BUP 26/00 | Paul Proost,Heverlee-Leuven,BE Sofie Struyf,Rumst,BE Jo Van Damme,Bruksela,BE |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: 30.04.2008 WUP 04/08 | (74) Pełnomocnik: Janina Kossowska, PATPOL Sp. z o.o. |
(57) 1 , Skróconena końcu aminowym białko MCP-2, znamienne tym , że jestskrócone o aminokwasy końca NH2, odpowiadające resztom aminokwasowym 1, 1-2, 1-3, 1-4 albo 1-5 naturalnie występującego MCP-2, oraz że wykazuje aktywność antagonistyczną względem chemokin.
2. Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według zastrz. 1, znamienne tym, że jest skrócone o aminokwasy końca NH2, odpowiadające resztom aminokwasowym 1-5 naturalnie występującego MCP-2, oraz że wykazuje aktywność antagonistyczną względem chemokin.
8. Rekombinacyjny sposób wytwarzania białka określonego w zastrz. 1 albo 3, znamienny tym, że obejmuje hodowanie w odpowiedniej pożywce hodowlanej komórki określonej w zastrz. 7.
10. Zastosowanie białka określonego w zastrz. 1 albo 3 do wytwarzania leku do leczenia i/lub diagnostyki choroby, w której konieczna jest aktywność antagonistyczna względem aktywności chemokiny.
12. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną wraz z jednym albo wieloma dopuszczalnymi farmaceutycznie nośnikami i/lub zaróbkami, znamienna tym, że jako substancję czynną zawiera białko określone w zastrz. 1 albo 3.
PL 197 569 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna.
Wynalazek dotyczy MCP-2 skróconych na końcu aminowym, tj. pozbawionych aminokwasów końca NH2, odpowiadających resztom aminokwasowym 1, 1-2, 1-3, 1-4 albo 1-5 występującego naturalnie białka MCP-2, wykazujących aktywność antagonistyczną względem chemokin, jak również kodujących je sekwencji cDNA, ich zastosowania w leczeniu i/lub diagnostyce chorób, w których pożądana jest aktywność antagonistyczna względem chemokin oraz zawierających je kompozycji farmaceutycznych.
Chemokiny stanowią rodzinę małych, pro-zapalnych cytokin o właściwościach chemotaktycznych i aktywujących wobec leukocytów. Zależnie od położenia pierwszych cystein, rodzinę chemokin można podzielić na chemokiny C-C, C-X-C i C-X3-C (Baggiolini i in., 1994; Baggiolini i in., 1997 i Taub i in., 1996).
Wiele chemokin C-X-C, takich jak interleukina 8 (IL-8) działa chemotaktycznie względem neutrofili, podczas gdy chemokiny C-C, takie jak białko chemotaktyczne monocytów 3 (MCP-3), aktywują różne leukocyty, w tym monocyty, limfocyty, eozynofile, bazofile, komórki NK i komórki dendrytyczne.
Domena końca NH2 chemokin warunkuje wiązanie receptora, zaś obróbka końca NH2 może aktywować chemokiny albo całkowicie je unieczynnić.
Chemokina C-X-C, zasadowe białko płytek, staje się peptydem chemotaktycznym neutrofili (NAP-2) tylko po usunięciu 24 reszt końca NH2 (Walz i in., 1989; Van Damme i in., 1990).
Usunięcie do 8 reszt końca NH2 z IL-8 powoduje zwiększoną aktywność chemotaktyczną, ale odcięcie motywu Glu-Leu-Arg, który jest położony przed pierwszą Cys we wszystkich chemokinach C-X-C chemotaktycznych dla neutrofili, powoduje całkowitą inaktywację (Clark-Lewis i in., 1991).
Podobna proteoliza końca NH2 (do 8 reszt aminokwasowych) innej chemokiny C-X-C, białka chemotaktycznego granulocytów 2 (GCP-2) nie wywiera wpływu na aktywność chemotaktyczną wobec neutrofili (Proost i in., 1993a).
Syntetyczne chemokiny C-C MCP-1, MCP-3 i RANTES pozbawione 8 do 9 aminokwasów końca NH2 są nieaktywne wobec monocytów i są przydatne jako antagoniści receptorów (Gong i in., 1996; Gong i in., 1995).
Wydłużenie RANTES jedną metioniną powoduje całkowitą inaktywację cząsteczki, zaś MetRANTES zachowuje się jak antagonista naturalnego RANTES (Proudfoot i in., 1996).
Klon ludzkiego MCP-2 (białka chemoatraktantowego monocytów 2) wyizolowano przez różnicowe przeszukiwanie biblioteki sondami cDNA pochodzącymi z pobudzonych versus spoczynkowych limfocytów krwi obwodowej (PBL) (początkowo nazywany „HC14, Chang i in., 1989). Sekwencja białkowa uzyskana z cDNA była identyczna z sekwencją oczyszczonego, naturalnego MCP-2, jednakże, wyizolowano również domniemane warianty alleliczne, w których Gln 46 zastępowała Lys 46 (Van Coillie i in., 1997).
MCP-2 syntetyzowano również w reakcji na podłożu stałym (Proost i in., 1995).
Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według wynalazku jest skrócone o aminokwasy końca NH2, odpowiadające resztom aminokwasowym 1, 1-2, 1-3, 1-4 albo 1-5 naturalnie występującego MCP-2, oraz wykazuje aktywność antagonistyczną względem chemokin.
Korzystnie skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według wynalazku jest skrócone o aminokwasy końca NH2 odpowiadające resztom aminokwasowym 1-5 naturalnie występującego białka MCP-2 oraz wykazuje aktywność antagonistyczną względem chemokin.
Również korzystnie skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według wynalazku ma sekwencję aminokwasową Id. Sekw. nr 3 albo Id. Sekw. nr 4.
Białka MCP-2 skrócone na końcu NH2 według wynalazku mogą być glikozylowane albo nieglikozylowane. Najkorzystniej skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według wynalazku jest w postaci glikozylowanej.
Białko MCP-2 (6-76) jest białkiem MCP-2 pozbawionym 1-5 aminokwasów końca NH2, jak przedstawione na fig. 1 oraz na liście sekwencji jako Id. Sekw. nr 3 albo Id. Sekw. nr 4.
Określenie „antagoniści chemokiny oznacza, że działają antagonistycznie względem dojrzałych, naturalnie występujących chemokin pełnej długości.
PL 197 569 B1
W zakres wynalazku wchodzą również cząsteczki DNA, które obejmują sekwencję DNA kodującą skrócone na końcu aminowym białko MCP-2 według wynalazku, w tym sekwencje nukleotydowe zasadniczo takie same.
Określenie „zasadniczo takie same sekwencje obejmuje wszystkie sekwencje kwasu nukleinowego, które z powodu degeneracji kodu genetycznego kodują również dane sekwencje aminokwasowe.
Przedmiotem wynalazku jest również wektor ekspresyjny, obejmujący cząsteczkę DNA według wynalazku, zawierająca go komórka gospodarza oraz rekombinacyjne sposoby wytwarzania skróconego na końcu aminowym białka MCP-2 według wynalazku, przez hodowanie w odpowiedniej pożywce hodowlanej komórek według wynalazku.
Sekwencję DNA kodującą białko według wynalazku można wprowadzić i poddać ligacji z odpowiednim plazmidem. Po wytworzeniu, wektor ekspresyjny wprowadza się do odpowiedniej komórki gospodarza, która następnie wyraża wektor(y) z wytworzeniem pożądanego białka.
Ekspresję dowolnych białek rekombinowanych, a w tym białek według wynalazku, jak to niniejszym opisano, można przeprowadzić w komórkach eukariotycznych (np. komórkach drożdży, owadów albo ssaków) albo komórkach prokariotycznych, stosując odpowiednie wektory ekspresyjne. Można zastosować dowolną, znaną w stanie techniki metodę.
Przykładowo, kodujące białka cząsteczki DNA otrzymane w powyższy sposób wprowadza się znanymi w dziedzinie technikami do odpowiednio skonstruowanych wektorów ekspresyjnych (patrz, Sambrook i in., 1989). Dwuniciowy cDNA poddaje się ligacji z wektorem plazmidowym przez łączenie homopolimeryczne albo restrykcyjne, obejmujące zastosowanie technik syntetycznych łączników DNA albo ligacji tępych końców, tj. do ligacji cząsteczek DNA stosuje się ligazy DNA, zaś niepożądanemu łączeniu zapobiega się przez traktowanie fosfatazą alkaliczną.
Wektor ekspresyjny, aby był zdolny do ekspresji pożądanego białka, powinien również obejmować swoiste sekwencje nukleotydowe zawierające informację regulującą transkrypcję i translację, połączone z kodującym pożądane białko DNA w taki sposób, aby umożliwić ekspresję genu i wytworzenie białka. Gen, który ma podlegać transkrypcji, musi być poprzedzany przez promotor rozpoznawalny przez polimerazę RNA, z którym polimeraza ta wiąże się, zapoczątkowując proces transkrypcji. Istnieje wiele takich promotorów, które działają z różną wydajnością (promotory słabe i silne).
W przypadku gospodarzy eukariotycznych można zastosować różne sekwencje regulujące transkrypcję i translację, w zależności od natury gospodarza. Mogą one pochodzić ze źródeł wirusowych, takich jak adenowirus, bydlęcy wirus brodawczaka, małpi wirus itp., w których sygnały regulacyjne są powiązane z konkretnym genem wykazującym wysoki poziom ekspresji. Przykładami są: promotor TK wirusa opryszczki, promotor wczesny SV40, promotor drożdżowy genu gal4, itp. Można wybrać sygnały regulacyjne początku transkrypcji, które umożliwiają represję i aktywację, w sposób modulujący ekspresję genów.
Cząsteczka DNA obejmująca sekwencję nukleotydową kodującą białko według wynalazku jest wprowadzana do wektorów, które są zdolne do integracji sekwencji pożądanego genu z komórką gospodarza, zawierających połączone funkcjonalnie sekwencje sygnałowe regulujące transkrypcję i translację.
Komórki, które stabilnie transformowano wprowadzonym DNA można wybrać przez wprowadzenie jednego albo wielu znaczników umożliwiających selekcję komórek gospodarza zawierających wektor ekspresyjny. Znacznik może dostarczyć fototrofię gospodarzowi auksotroficznemu, oporność na biocydy, np. antybiotyki albo metale ciężkie, takie jak miedź, itp. Gen znacznika umożliwiającego selekcję można połączyć bezpośrednio z sekwencją DNA wyrażanego genu, albo wprowadzić do tej samej komórki przez równoczesną transfekcję. Do syntezy białka według wynalazku mogą być również konieczne dodatkowe elementy.
Istotne czynniki do selekcji konkretnego plazmidu albo wektora obejmują: łatwość rozpoznawania i selekcjonowania komórki biorcy zawierającej wektor spośród komórek, które nie zawierają wektora; liczba kopii wektora, która jest konieczna dla konkretnego gospodarza; oraz, jeżeli to konieczne, zdolność wektora do „wahadłowej wymiany pomiędzy komórkami różnych gatunków.
Gdy wektor(y) albo sekwencje DNA zawierające konstrukt(y) do ekspresji konstruktów DNA są przygotowane, można je wprowadzić do odpowiedniej komórki gospodarza różnymi dostępnymi sposobami: przez transformację, transfekcję, koniugację, fuzję protoplastu, elektroporację, precypitację fosforanem wapnia, bezpośrednie wstrzyknięcie itp.
PL 197 569 B1
Komórka gospodarza może być prokariotyczna albo eukariotyczna. Korzystne są komórki eukariotyczne, np. komórki ssaków, takich jak ludzie, małpy, myszy i komórki jajnika chomika chińskiego (CHO), ponieważ zapewniają one modyfikację potranslacyjną cząsteczek białka, w tym prawidłowe fałdowanie albo glikozylację w prawidłowych miejscach. Również komórki drożdży mogą przeprowadzać potranslacyjną modyfikację peptydów, w tym glikozylację. Istnieje wiele strategii rekombinacji DNA, które wykorzystują sekwencje silnych promotorów i plazmidy o licznych kopiach, które można zastosować do wytwarzania pożądanego białka w drożdżach. Drożdże rozpoznają sekwencje liderowe klonowanych produktów genów ssaków i wydzielają peptydy niosące sekwencje liderowe (tj. pre-peptydy).
Po wprowadzeniu wektora (wektorów), komórki gospodarza hoduje się w wybiórczej pożywce, która selekcjonuje wzrost komórek zawierających wektor. Ekspresja sekwencji klonowanego genu powoduje wytwarzanie pożądanego białka.
Białko MCP-2 skrócone na końcu aminowym według wynalazku można wytworzyć dowolną znaną procedurą, w szczególności, dobrze znanymi procedurami syntezy chemicznej, z wykorzystaniem syntezatorów peptydów w fazie stałej, a następnie oczyszczać przez chromatografię.
Chemokiny można, przykładowo, syntetyzować z zastosowaniem Fmoc (9-fluorenylometoksykarbonylu), tBoc (t-butoksykarbonylu) albo inną porównywalną metodą syntezy chemicznej z wykorzystaniem albo bez grup chroniących łańcuchy boczne na różnych aminokwasach. Aminokwasy z odpowiednimi grupami chroniącymi łańcuchy boczne lub bez takich grup poddaje się preaktywacj i - np. przy użyciu HBTU/HOBt [heksafluorofosforan 2-(1H-benzotriazol-1-ilo)-1,1,3,3-tetrametylouroniowy/1-hydroksybenzotriazol)] - i sprzęga z rosnącym łańcuchem peptydowym. Przed dodaniem kolejnej Reszty aminokwasowej, z grupy α-aminowej usuwana jest grupa ochronna (np. Fmoc). Po syntezie, wszystkie grupy ochronne usuwa się, peptyd pełnej długości oczyszcza się i fałduje chemicznie albo enzymatycznie (łącznie z formowaniem mostków disiarczkowych pomiędzy cysteinami), tworząc odpowiednie chemokiny według wynalazku.
Oczyszczanie naturalnych, syntetycznych albo rekombinowanych białek przeprowadza się dowolnym znanym sposobem, tj. dowolną konwencjonalną procedurą obejmującą ekstrakcję, precypitację, chromatografię, elektroforezę itp. (patrz, przykładowo Proost i in., 1996). Dodatkową procedurą oczyszczania, którą można korzystnie zastosować w celu oczyszczania białka według wynalazku, jest chromatografia powinowactwa z zastosowaniem przeciwciała monoklonalnego albo heparyny wiążących białko docelowe, które są wytwarzane i unieruchamiane na matrycy żelowej znajdującej się w kolumnie. Białko będzie wiązane przez heparynę albo swoiste przeciwciało, zaś zanieczyszczenia będą przechodzić przez kolumnę. Po płukaniu, białko eluuje się z żelu przez zmianę pH albo siły jonowej.
Białka MCP-2 skrócone na końcu aminowym według wynalazku są przydatne w leczeniu i/lub diagnostyce chorób, w których pożądana jest aktywność antagonistyczna względem chemokin. Przykłady takich chorób obejmują choroby zapalne, choroby związane z angiogenezą i hematopoezą, nowotwory, choroby zakaźne, w tym HIV, choroby autoagresyjne, miażdżycę, choroby płuc i skóry.
Stąd, przedmiotem wynalazku jest białko według wynalazku do zastosowania jako lek oraz zastosowanie białka według wynalazku do wytwarzania leku do leczenia i/lub diagnostyki choroby, w której konieczna jest aktywność antagonistyczna względem aktywności chemokiny. Korzystnie, lek otrzymany zgodnie z zastosowaniem według wynalazku przeznaczony jest do leczenia chorób zapalnych, zakażenia HIV, chorób związanych z angiogenezą i hematopoezą oraz nowotworów.
Lek otrzymany zgodnie z zastosowaniem według wynalazku może być w postaci kompozycji farmaceutycznej. Przedmiotem wynalazku jest więc, kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną wraz z jednym albo wieloma dopuszczalnymi farmaceutycznie nośnikami i/lub zaróbkami, przy czym jako substancję czynną zawiera białko według wynalazku.
Niniejszym opisany został również sposób leczenia wyżej wskazanych chorób obejmujący podawanie farmakologicznie skutecznej ilości białka MCP-2 skróconego na końcu aminowym według wynalazku osobnikowi narażonemu na ryzyko rozwinięcia takich chorób albo osobnikowi wykazującemu taką patologię.
Wynalazek zostanie opisany w oparciu o przykłady, których nie należy uważać za ograniczenie zakresu wynalazku. Przykłady odnoszą się do figur wymienionych poniżej.
Figura 1 przedstawia sekwencję aminokwasową białka MCP-2 i jego znanych wariantów. Sekwencje sygnałowe zaznaczone są kursywą, podczas gdy reszty C wytłuszczono. Strzałki wskazują
PL 197 569 B1 pierwsze aminokwasy białek MCP-2(6-76) skróconych na końcu aminowym według wynalazku. Podkreślono aminokwasy, które różnią się w wariantach MCP-2.
Figura 2 SDS-PAGE MCP-2(6-76) skróconych na końcu aminowym:
ścieżka 1: naturalne MCP-2 (1-76, 100 ng/ścieżkę);
ścieżka 2: naturalne MCP-2 (1-76, 30 ng/ścieżkę);
ścieżka 3: naturalne MCP-2 (6-76, 30 ng/ścieżkę); i ścieżka 4: syntetyczne MCP-2 (1-76, 60 ng/ścieżkę).
Badanie na żelach prowadzono w warunkach redukujących, zaś białka barwiono srebrem.
Figura 3 przedstawia porównanie siły chemotaktycznej modyfikowanych postaci MCP-2. Kompletne, naturalne (nat) i syntetyczne (syn) MCP-2(1-76), skrócone na końcu NH2 naturalne MCP-2(676) i skrócone na końcu -COOH syntetyczne MCP-2(1-74) badano pod względem aktywności chemotaktycznej na komórkach THP-1. Wyniki przedstawiono jako średnią CI±SEM dla czterech albo więcej niezależnych doświadczeń.
Figura 4 Naturalne MCP-2 jest słabszym niż MCP-1 agonistą mobilizacji wapnia w monocytach. Kompletne MCP-2 (15, 50 i 150 ng/ml) zwiększa w sposób zależny od dawki [Ca2+]i w komórkach THP-1. Przedstawiono wyniki jednego z dwóch reprezentatywnych doświadczeń.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1: MCP-2 skrócone na końcu aminowym
Materiały i metody
Chemokina i test immunologiczny
MCP-2 syntetyzowano i oczyszczono, jak to opisano uprzednio (Proost i in., 1995).
Swoiste przeciwciała przeciwko ludzkiemu MCP-2 uzyskano od myszy i oczyszczono przez chromatografię powinowactwa na kolumnie Sepharose przy użyciu syntetycznego MCP-2 sprzęgniętego w warunkach określonych przez producenta (Sepharose 4B aktywowana CNBr, Pharmacia, Uppsala, Szwecja).
Płytki ELISA pokryto MCP-2 oczyszczonym przez powinowactwo, zaś jako przeciwciało wychwytujące zastosowano biotynowane przeciwciało przeciwko MCP-2. Wykrywanie przeprowadzono przy użyciu peroksydazy znakowanej streptawidyną i TMB. Granica wykrywalności dla ELISA MCP-2 wynosiła około 0,1 ng/ml.
Wytwarzanie i oczyszczanie MCP-2
Białko chemotaktyczne monocytów oczyszczono z pożywki kondycjonowanej otrzymanej z jednojądrzastych komórek krwi obwodowej od 132 dawców krwi, otrzymanej z Blood Transfusion Centers z Antwerpii i Leuven (Proost i in., 1996).
Erytrocyty i granulocyty usunięto przez sedymentację w skrobi hydroksyetylowanej (Fresenius AG, Bad Homburg, Niemcy) oraz wirowanie w gradiencie stężeń w roztworze metrizonianu sodu (Lymphoprep, Nyegaard, Oslo, Norwegia).
Komórki jednojądrzaste (60x109 komórek) inkubowano (5x106 komórek/ml) z 10 pg/ml Con A i 2 ng/ml LPS. Po 48 do 120 godzinach, pobierano kondycjonowaną pożywkę i przechowywano w -20°C do momentu oczyszczania.
Naturalne MCP-2 oczyszczano w czteroetapowym procesie oczyszczania, jak opisano uprzednio (Proost i in., 1996).
Pokrótce, pożywkę kondycjonowaną zatężano na filtrze ze szkła o określonej wielkości porów albo kwasie krzemowym i częściowo oczyszczano przez chromatografię powinowactwa na kolumnie heparyna-Sepharose (Pharmacia).
Frakcje charakteryzujące się immunoreaktywnością wobec MCP-2 oczyszczano dalej przez chromatografię kationowymienną Mono S (Pharmacia) i eluowano gradientem NaCl przy pH 4,0.
Naturalne MCP-2 oczyszczano do homogenności przez RP-HPLC na kolumnie C-8 Aquapore RP-300 (Perkin Elmer, Norwalk, CT), zrównoważonej 0,1% kwasem trifluorooctowym (TFA). Białka eluowano gradientem acetonitrylu.
Charakterystyka biochemiczna postaci MCP przez SDS-PAGE, analizę sekwencji aminokwasowej i spektrometrii mas
Czystość frakcji z kolumny badano przez SDS-PAGE w warunkach redukujących na żelach Tris/tricyna (Proost i in., 1996). Białka barwiono srebrem, stosując następujące znaczniki względnego ciężaru cząsteczkowego (Mr): OVA (Mr 45000), anhydraza węglanowa (Mr 31000), inhibitor trypsyny sojowej (Mr 21000), β-laktoglobulina (Mr 18400), lizozym (Mr 14400) i aprotynina (Mr 6500).
PL 197 569 B1
Sekwencję końca NH2 oczyszczonych chemokin określono przez degradację Edmana na sekwenatorze białka 477A/120A (Perkin Elmer) z N-metylopiperydyną jako zasadą sprzęgającą. Zablokowane białka cięto pomiędzy Asp i Pro w 75% kwasie mrówkowym przez 50 godzin. Produkt trawienia sekwencjonowano bez dalszego oczyszczania.
Mr MCP-2 określono przez spektrometrię mas metodą laserowej desorpcji i jonizacji próbki wspomaganej matrycą z pomiarem czasu przelotu jonów (MALDI/TOF-MS) (Micromass TofSpec, Manchester, UK). Kwas alfa-cyjano-4-hydroksycynamonowy i cytochrom C zastosowano jako standard wewnętrzny.
Wykrywanie aktywności chemotaktycznej
MCP-2 badano pod kątem aktywności chemotaktycznej na świeżo oczyszczonych monocytach (2x106 komórek/ml) albo monocytarnej linii komórkowej THP-1 (0,5x106 komórek/ml; 2 dni po inkubacji) w mikrokomorze Boydena, stosując membrany poliwęglanowe traktowane poliwinylopirolidonem, z porami o średnicy 5 ąm.
Próbki i komórki rozcieńczano w HBSS (Life Technologies/Gibco BRL, Paisley, Szkocja) z dodatkiem 1 mg/ml albuminy surowicy ludzkiej (Belgijski Czerwony Krzyż). Po 2 godzinach inkubacji w 37°C, komórki utrwalono i barwiono roztworem Diff-Quick (Harleco, Gibbstown, NJ) i zliczono mikroskopowo komórki, które migrowały przez membrany, w dziesięciu polach widzenia, pod immersją olejową, przy powiększeniu 500x.
Wskaźnik chemotaktyczny (CI) próbki (w potrójnym powtórzeniu dla każdej komory) obliczano jako liczbę komórek, które migrowały do próbki w stosunku do liczby komórek, które migrowały do pożywki kontrolnej (Van Damme i in., 1992).
W doświadczeniach nad odczulaniem, komórki inkubowano z biologicznie nieczynnymi wariantami chemokin przez 10 minut w 37°C, po czym dodawano je do górnej studzienki mikrokomory Boydena. Procentowe zahamowanie CI obliczano stosując CI z komórek traktowanych HBSS względem próbki jako wartości odniesienia.
Wykrywanie wewnątrzkomórkowego stężenia Ca2+
Wewnątrzkomórkowe stężenie wapnia ([Ca2 1],) mierzono jak to opisano uprzednio (Wuyts i in., 1997). Oczyszczone monocyty atoo tomcirki THP-1 (W7 tom^ek/mO mkiróowano w minimataej Nezbędnej pożywce Eagle'a (EMEM, Gibco) z dodatkiem 0,5% FCS ze wskaźnikiem fluorescencyjnym fura-2 (fura-2/AM 2,5 μΜ, Molecular Probes Europe BV, Leiden, Holandia) i 0,01% Pluronic F-127 (Sigma, St. Louis, MO).
Po 30 minutach w 37°C komórki dwukrotnie płukano i zawieszano ponownie w ilości 106 komórek/ml w 1 mM Ca2+ i 0,1% FCS (buforowanym 10 mM HEPES/Na°FI pH 74). Komórld równoważono w 37°C przez 10 minut, po czym mierzono fluorescencję fura-2 w spektrofotometrze luminescencyjnym LS50B (Perkin Elmer).
Po wzbudzeniu przy 340 i 380 nm, fluorescencję wykrywano przy 510 nm. [Ca2+]j obliczano według równania Grynkiewicza (Grynkiewicz i in., 1985). W celu określenia Rmax, komórki poddano lizie 50 ąM digitoniną. Następnie, pH doprowadzono do wartości 8,5 przy użyciu 20 mM Tris i otrzymano Rmn przez dodanie 10 mM EGTA do poddanych lizie komórek. Kd wynosiła 224 nM.
Do doświadczeń nad odczulaniem, monocyty albo komórki THP-1 pobudzano buforem, chemokiną albo antagonistą chemokiny w różnych stężeniach. Jako drugi bodziec zastosowano MCP-2 w stężeniach indukujących istotny wzrost [Ca2+]j po wstępnej stymulacji buforem. Drugi bodziec zastosowano 2 minuty po dodaniu pierwszego bodźca. Procentowe zahamowanie wzrostu [Ca2+]j w odpowiedzi na drugi bodziec obliczono przez porównanie sygnału po wstępnej stymulacji chemokiną albo antagonistą chemokiny z sygnałem po dodaniu bufora.
Wyniki
Izolowanie potranslacyjnie modyfikowanych postaci MCP-2
Swoisty i czuły test ELISA zastosowano w celu śledzenia różnych postaci MCP-2 wytwarzanych przez jednojądrzaste komórki krwi obwodowej pobudzane mitogenem i endotoksyną.
Pożywkę kondycjonowaną oczyszczano standardowymi procedurami oczyszczania (Proost i in., 1996), w tym przez adsorpcję na szkle o określonej wielkości porów i chromatografię na kolumnie Sepharose-heparyna.
Następnie, przeprowadzono oczyszczanie przez chromatografię kationowymienną na kolumnie FPLC mono S, po czym zastosowano etap oczyszczania RP-HPLC na C-8. Ciężary cząsteczkowe wyznaczano przez SDS-PAGE oraz MALDI/TOF-MS.
PL 197 569 B1
Wyizolowano różne postaci MCP-2: oprócz naturalnego MCP-2(1-76) wielkości 7,5 kDa, MCP-2 wielkości 7kD skrócone na końcu NH2 o pięć reszt [MCP-2(6-76)] oczyszczono do homogenności przez RP-HPLC i zidentyfikowano przez analizę sekwencji aminokwasowej (fig. 2). Analiza MALDI/TOF-MS (tabela I) dostarczyła ciężaru cząsteczkowego równego 8881 Da dla kompletnego MCP-2 (teoretyczny Mr 8893 Da), podczas gdy dla MCP-2(6-76) wyznaczono ciężar cząsteczkowy 8365 Da, co potwierdza delecję pięciu aminokwasów końca NH2 (teoretyczny Mr 8384 Da). Porównanie funkcjonalne tych postaci MCP-2 w teście chemotaksji THP-1 wykazało, że kompletne MCP-2 pozostaje aktywne w stężeniu 5 ng/ml, podczas gdy skrócone MCP-2(6-76) pozostaje pozbawione aktywności chemotaktycznej w badaniu w zakresie stężeń od 0,6 do 60 ng/ml (fig. 3). Kompletne, naturalne MCP-2 porównano również pod względem siły działania z syntetycznym MCP-2 (1-76) oraz okrojoną na końcu COOH postacią syntetyczną (Proost i in., 1995) pozbawioną dwóch aminokwasów (MCP-2(1-74)).
Minimalne skuteczne chemotaktycznie stężenie tych postaci określono na 5 ng/ml (fig. 3). Mimo, że w testach chemotaksji aktywność właściwa MCP-1 i MCP-2 jest porównywalna (Van Damme i in., 1992), zdolność mobilizowania wapnia przez MCP-2 jest wciąż dyskusyjna.
Jednakże, w doświadczeniach nad mobilizacją Ca2+, minimalna skuteczna dawka zarówno naturalnego i syntetycznego MCP-2(1-76) była 10-krotnie wyższa niż naturalnego, kompletnego MCP1(1-76) (fig. 4), podczas gdy MCP-2(6-76) pozostawało nieaktywne.
Mimo to, kompletne MCP-2 (50 ng/ml) było zdolne do odczulenia wobec MCP-2 (15 ng/ml) i MCP-3 (10 ng/ml) dając, odpowiednio, 52% i 45% zahamowanie chemotaksji.
Z powodu niższej aktywności właściwej MCP-2 w teście Ca2+, przeprowadzono odczulanie chemotaksji przez MCP-2(6-76) w komorze Boydena. Ponieważ opisywano, że kompletne MCP-2 krzyżowo odczula aktywne MCP-1, MCP-2 i MCP-3 w teście chemotaksji monocytów (Sozzani i in., 1994), zbadano czy naturalne, nieaktywne MCP-2(6-76) może również odczulać MCP-1, MCP-2, MCP-3 i RANTES (tabela II). Preinkubacja komórek THP-1 ze 100 ng/ml nieaktywnego MCP-2(6-76) hamuje w sposób istotny chemotaksję wywołaną przez 10 ng/ml MCP-1 (63%), 5 ng/ml MCP-2 (75%), 30 ng/ml MCP-3 (62%) i 100 ng/ml RANTES (75%). Ponadto, chemotaksja w reakcji na 3-krotnie niższe stężenie odpowiednich MCP była całkowicie hamowana (91-100%) przez 100 ng/ml MCP-2(6-76). Ponadto, już przy stężeniu 10 ng/ml MCP-2 (6-76) było zdolne do istotnego zahamowania aktywności chemotaktycznej wywołanej przez MCP-1 (3 ng/ml), MCP-2 (1,5 ng/ml) albo MCP-3 (10 ng/ml) oraz RANTES (30 ng/ml). Podsumowując, MCP-2(6-76) wytwarzane naturalnie, jest nieaktywne jako chemoatraktant i antagonizuje kilka chemokin C-C, przy czym efekt jest szczególnie dominujący w przypadku MCP-3.
T a b e l a I
Charakterystyka biochemiczna naturalnych postaci MCP-2. Analiza sekwencji aminokwasowej końca NH2 i porównanie doświadczalnego (SDS-PAGE i MALDI/TOF-MS) z teoretycznym ciężarem cząteczkowym (Mr) naturalnych izoform MCP oczyszczonych przez RP-HPLc C-8
| Postać MCP | Sekwencja końca NH2 | Mr(Da) | ||
| Teoretyczny nieglikozylowany | SDS-PAGE | MALDI/TOF-MS | ||
| MCP-2 (1-76) | zablok. | 8893 | 7500 | 8881 |
| MCP-2 (2-76) | SIPITCC | 8384 | 7000 | 8365 |
PL 197 569 B1
T a b e l a II
MCP-2(6-76) odczula reakcje chemotaktyczne monocytów na MCP-1, MCP-2, MCP-3 i RANTES w mikrokomorach
| Chemokina3 | Stężenie | Antagonizacja reakcji chemotaktycznejb c | % zahamowania chemotaksji | |
| Bufor | 100 ng/ml MCP-2 (6-76) | |||
| MCP-1 | 10 | 22,3±7,9 | 8,3±3,8 | 63±21 |
| 3 | 15,0±8,0 | 1,3±0,3 | 99±1,0 | |
| MCP-2 | 5 | 36,0±12,6 | 10,8±6,1 | 75±8,0 |
| 1,5 | 6,7±1,4 | 1,5±0,3 | 91±7,0 | |
| MCP-3 | 30 | 13,2±0,4 | 6,0±4,0 | 62±31 |
| 10 | 3,0±1,5 | <1 | 100±0,0 | |
| RANTES | 100 | 6,3±0,8 | 2,6±1,3 | 75±19 |
| 30 | 4,0±0,8 | 1,5±0,3 | 77±16 | |
| Bufor | 10 ng/ml MCP-2 (6-76) | |||
| MCP-1 | 10 | 12,7±2,3 | 10,5±3,8 | 24±1,8 |
| 3 | 7,5±0,0 | 3,0±0,3 | 69±4,0 | |
| MCP-2 | 5 | 38,0±5,3 | 27,2±4,9 | 30±6,0 |
| 1,5 | 18,3±4,6 | 9,2±1,4 | 45±23 | |
| MCP-3 | 30 | 13,2±1,9 | 8,0±1,0 | 37±19 |
| 10 | 7,7±1,4 | 1,7±0,3 | 90±6,0 | |
| RANTES | 100 | 5,5±0,6 | 5,8±0,9 | 17±7,0 |
| 30 | 3,2±0,7 | 2,5±0,5 | 39±18 |
aMCP-1, MCP-2, MCP-3 albo RANTES dodawano jako chemoatraktanta do dolnych studzienek bdo górnej studzienki mikrokomory dodawano komórki THP-1 inkubowane z MCP-2(6-76) albo buforem cśrednia CI±SEM z 3 niezależnych doświadczeń
Literatura
Baggiolini M. i in., Ann. Rev. Immunol., 55, 97-179, 1994.
Baggiolini M. i in., Ann. Rev. Immunol., 15, 675-705, 1997.
Chang H. C. i in., International Immunology, 1(4), 388-397, 1989.
Clark-Lewis I. i in., J. Biol. Chem., 266, 23128-23134, 1991.
De Meester I. i in., J. Immunol. Methods, 189, 99-10526, 1996.
Deng H. i in., Nature, 381,661-666, 1996.
Gong J. i in. J. Exp. Med., 181,631-640, 1995.
Gong J. i in., J. Biol. Chem. 271, 10521-10527, 1996.
Grynkiewicz G. i in., J. Biol. Chem., 260, 3440, 1985.
Proost P. i in., Biochemistry, 32, 10170-10177, 1993a.
Proost P. i in., J. Immunol., 150, 1000-1010, 1993.
Proost P. i in., Cytokine, 7, 97-104, 1995.
Proost P. i in., Methods: A companion to Methods in Enzymol., 10, 82, 1996.
Proudfoot A. E. i in., J. Biol. Chem., 271,2599-2603, 1996.
Sambrook et al, Molecular Cloning: A laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, 1989.
Schols D. i in., J. Exp. Med., 186, 1383-1388, 1997.
Sozzani S. i in., J. Immunol., 152, 3615, 1994.
PL 197 569 B1
Taub D. i in., Cytokine & Growth Factor Reviews, 7, 335-76, 1996.
Van Coillie E. i in., Biochem. Biophys. Res. Commun., 231, 726-730, 1997. Van Damme J. i in., Eur. J. Biochem., 181,337-344, 1989.
Van Damme J. i in., Eur. J. Immunol., 20, 2113-8, 1990.
Van Damme J. i in., J. Exp. Med., 176, 59, 1992.
Walz A. i in., Biochem. Biophys. Res. Commun., 159, 969-75, 1989.
Wuyts A. i in., Biochemistry, 36, 2716-2723, 1997.
LISTA SEKWENCJI (1) INFORMACJE OGÓLNE:
(i) ZGŁASZAJĄCY:
(A) NAZWA: APPLIED RESEARCH SYSTEMS ARS
HOLDING N.V. ' (B) ULICA: 14 JOHN B. GORSIRAWEG (C) MIASTO: CURACAO (E) KRAJ: ANTYLE HOLENDERSKIE (F) KOD POCZTOWY: BRAK (G) TELEFON: 639300 (H) TELEFAX: 614129 (ii) TYTUŁ WYNALAZKU:
(iii) LICZBA SEKWENCJI: 4 (iv) POSTAĆ MOŻLIWA DO ODCZYTANIA PRZEZ KOMPUTER:
(A) TYP NOŚNIKA: dyskietka ' (B) KOMPUTER: kompatybilny z IBM PC (C) SYSTEM OPERACYJNY: PC-DOS/MS-DOS (D) OPROGRAMOWANIE: Patentln Release #1,0,
Wersja #1,30 (EPO) (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKWENCJI NR:1:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI :
(A) DŁUGOŚĆ: 99 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) NICIOWOŚĆ:
(D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (iii) HIPOTETYCZNY: nie (ix) CECHA:
(A) NAZWA/KLUCZ: białko (B) POŁOŻENIE: 1..76
| (xi) | 1 OPIS | SEKWENCJI: | IDENTYFIKATOR | SEKW. | NR: | 1: | |
| Met | Lys | Val Ser -20 | Ala Ala Leu | Leu Cys Leu Leu -15 ' | Leu Met | Ala -10 | Ala Thr |
| Phe | Ser | Pro Gin -5 | Gly Leu Ala | Gin Pro Asp Ser 1 | Val Ser 5 | Ile | Pro Ile |
| Thr 10 | Cys | Cys Phe | Asn Val Ile 15 | Asn Arg Lys Ile 20 | Pro Ile | Gin | Arg Leu 25 |
| Glu | Ser | Tyr Thr | Arg Ile Thr | Asn Ile Gin Cys | Pro Lys | Glu | ALa Val |
PL 197 569 B1
| Ile Phe Lys Thr Lys Arg Gly Lys Giu Val Cys ALa Asp Pro , Lys Glu | |||
| 45 | 50 | 55 | |
| Arg· Trp | Val Acg Asp Ser | Met Lys His Leu | Asp Gln Ile Phe Gln Asn |
| 60 | 65 | 70 | |
| Leu Lys | Pro | ||
| 75 |
(2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKWENCJI NR: 2:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI :
(A) DŁUGOŚĆ: 99 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) NICIOWOŚĆ:
(D) TOPOLOGIA: ^iniw^a (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (iii) HIPOTETYCZNY: nie (ix) CECHA:
CA) NAZWA/KLUCZ: białko (B) POŁOŻENIE: 1..76 (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 2:
| Met | Lys | Val | Ser -20 | Ala | Ala | Leu | Leu | Cys -15 | Leu | Leu | Leu | Met | Ala -10 | Ala | Thr |
| Phe | Ser | Pro -5 | Gln | Gly | Leu | Ala | Gln 1 | Pro | Asp | Ser | Val 5 | Ser | Ile | Pro | Ile |
| Thr 10 | Cys | Cys | Phe | Asn | Val 15 | Ile | Asn | Arg | Lys | Ile 20 | Pro | Ile | Gln | Arg | Leu 25 |
| Glu | Ser | Tyr | Thr | Arg 30 | Ile | Thr | Asn | Ile | Gln 35 | Cys | Pro | Lys | Glu | Ala 40 | Val |
| Ile | Phe | Lys | Thr:. 45 | Gln | Arg | Gly | Lys | Glu 50 | Val | Cys | ALa | Asp | Pro 55 | Lys | Glu |
| Arg | Trp | Val 60 | Arg | Asp | Ser | Met | Lys 65 | His | Leu | Asp | Gln | Ile 70 | Phe | Gln | Asn |
Leu Lys Pro 75 (2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKWENCJI NR: 3:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI :
CA) DŁUGOŚĆ: 71 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) NICIOWOŚĆ: (D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko
PL 197 569 Β1 (iii) HIPOTETYCZNY: nie
| (xi) | OPIS SEKWENCJI: | IDENTYFIKATOR SEKW. | NR: 3: |
| Ser | Ile Pro Ile Thr Cys | Cys Phe Asn Val Ile Asn | Arg Lys Ile Pro |
| 1 | 5 | 10 | 15 |
| Ile | Gin Arg Leu Glu Ser | Tyr Thr Arg Ile Thr Asn | Ile Gin Cys Pro |
| 20 | 25 | 30 | |
| Lys | Glu Ala Val Ile Phe | Lys Thr Lys Arg Gly Lys | Glu Val Cys Ala |
| 35 | 40 | 45 | |
| Asp | Pro Lys Glu Arg Trp | Val Arg Asp Ser Met Lys | His Leu Asp Gin |
| 50 | 55 60 | ||
| Ile | Phe Gin Asn Leu Lys | Pro | |
| 65 | 70 |
(2) INFORMACJA DLA IDENTYFIKATORA SEKWENCJI NR: 4:
(i) CHARAKTERYSTYKA SEKWENCJI :
(A) DŁUGOŚĆ: 71 aminokwasów (B) TYP: aminokwas (C) NICIOWOŚĆ:
(D) TOPOLOGIA: liniowa (ii) RODZAJ CZĄSTECZKI: białko (iii) HIPOTETYCZNY: nie (xi) OPIS SEKWENCJI: IDENTYFIKATOR SEKW. NR: 4:
| Ser 1 | Ile | Pro | Ile | Thr 5 | Cys | Cys | Phe | Asn | Val 10 | Ile | Asn | Arg | Lys | Ile 15 | Pro |
| Ile | Gin | Arg | Leu 20 | Glu | Ser | Tyr | Thr | Arg 25 | Ile | Thr | Asn | Ile | Gin 30 | Cys | Pro |
| Lys | Glu | Ala 35 | Val | Ile | Phe | Lys | Thr 40 | Gin | Arg | Gly | Lys | Glu 45 | Val | Cys | Ala |
| Asp | Pro 50 | Lys | Glu | Arg | Trp | Val 55 | Arg | Asp | Ser | Met | Lys 60 | His | Leu | Asp | Gin |
Ile Phe Gin Asn Leu Lys Pro 65 70
PL 197 569 B1
Claims (12)
- Zastrzeżenia patentowe1. Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, zznmieenn tym, że jest skrócone o aminokwasy końca NH2, odpowiadające rssztnm amionkwas-wym 1, 1-2, 1-3, 1-4 albn 1-5 oaturalois występującego CPP22, oraz es wykazujs aktywoość aotagooistyczoą względsm chsmokio.
- 2. Skrócońe n o kkocc aminewym białkoMCP-2 wySługzzatrz.1 , z znmieenn tym, że jess s siocoos o amiookwasy końca NH2 odpowiadającs rssztom amiookwasowym 1-5 oaturalois występującsgo CPP22, oraz es wykazujs aktywoość aotagooistyczoą względsm chsmokio.
- 3. Skrócońe no aońcc aminewym Siatto MCP-2 wwsług zaas^. k, z znmieenn tym^, że ma sskwsocję amiookwasową Id. kskw. or 3 albo Id. kskw. or 4.
- 4. Skrócońe no Sońcc amineńwm Siatto MCP-2 wwskiu zzatrz. k albb k, zznmieenn tt/mn, ke jsst w postaci glikozylowaosj.
- 5. CzastecoaiDNN,zznmieenn eymi, że oOejmająs skwwnoję DNA koOująco s Srócońen ekońcu amioowym białko MCP-2 jak okrsśloos w zastrz. 1 albo 3, w tym sskwsocjs ouklsotydows zasadoiczo takis sams.
- 6. Wsktor sksprssyjoy, znaiienny tyi, es obsjmujs cząstsczkę NNA okrsślooą w zastrz. 5.
- 7. Komórka gospodarza, znaiienna tyi, es obsjmujs wsktor sksprssyjoy okrsślooy w zastrz. 6.
- 8. Rekomaineaojee epposc wytwyłózaia białkk onróklońeso w zza^r. 1 albo 3, zznmieeny tyi, es obsjmujs hodowaois w odpowisdoisj poeywcs hodowlaosj komórki okrsśloosj w zastrz. 7.
- 9. Białko wsdług zastrz. 1 albo 3 do zastosowaoia jako lsk.
- 10. Zastosowaois białka okrsśloosgo w zastrz. 1 albo 3 do wytwarzaoia lsku do lsczsoia i/lub diagoostyki choroby, w ktcrsj kooisczoa jsst aktywoość aotagooistyczoa względsm aktywoości chsmokioy.
- 11. ZzatonswyaiewySług zzas^ 1 0, z znmieenn eymi, że I ekprzzsaeaozńejekt ddlekozniac coróC zapaloych, zakaesoia HIV, chorób związaoych z aogiogsoszą i hsmatoposzą oraz oowotworcw.
- 12. Kc>mapozcje Sam^aaontycoae zzwie-ójeco ssgotsaoje scznoo wraa z j eSnem albb wieloim dopuszczaloymi farmacsutyczois oośoikami i/lub zaróbkami, znamienna tyi, es jako substaocję czyooą zawisra białko okrsśloos w zastrz. 1 albo 3.RysunkiMCP-2-23 1MKŻSAALLCL LLMAATFSPQ GDAQPDSVSI PITCCFNVIN RKIPIQRLES YTRITNIQCP KEWIFKTKR GKEVCADPKE RWYRDSMKHL DQIFQNLKPWariant MCP-2-23 1 ΨMKVSAALLCL LLMAATFSPQ GLAQPDSVSI PITCCFNVIN RKIPIQRLES YTRITNIQCP KEAVIFQTKR GKEVCADPKE RWYRDSMKHL DQIFQNLKP
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP97116863A EP0906954A1 (en) | 1997-09-29 | 1997-09-29 | Amino-terminal truncated c-c chemokines as chemokine antagonist |
| EP97122471A EP0905240A1 (en) | 1997-09-29 | 1997-12-19 | Amino-terminally truncated c-c chemokines as chemokine antagonists |
| EP98104216A EP0905241A1 (en) | 1997-09-29 | 1998-03-10 | Amino-terminally truncated c-c chemokines as chemokine antagonists |
| PCT/EP1998/006142 WO1999016876A1 (en) | 1997-09-29 | 1998-09-28 | Amino-terminally truncated mcp-2 as chemokine antagonists |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL339559A1 PL339559A1 (en) | 2000-12-18 |
| PL197569B1 true PL197569B1 (pl) | 2008-04-30 |
Family
ID=8227408
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL339559A PL197569B1 (pl) | 1997-09-29 | 1998-09-28 | Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna |
| PL339545A PL196427B1 (pl) | 1997-09-29 | 1998-09-28 | Białko RANTES skrócone na końcu aminowym, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna, oraz zastosowanie CD26/DPP IV |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL339545A PL196427B1 (pl) | 1997-09-29 | 1998-09-28 | Białko RANTES skrócone na końcu aminowym, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna, oraz zastosowanie CD26/DPP IV |
Country Status (28)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US6977071B2 (pl) |
| EP (6) | EP0906954A1 (pl) |
| JP (2) | JP4230659B2 (pl) |
| KR (2) | KR100542934B1 (pl) |
| CN (3) | CN1145693C (pl) |
| AR (2) | AR013529A1 (pl) |
| AT (3) | ATE368742T1 (pl) |
| AU (2) | AU750341B2 (pl) |
| BG (2) | BG64679B1 (pl) |
| BR (2) | BR9812565A (pl) |
| CA (2) | CA2304827A1 (pl) |
| CY (1) | CY1110927T1 (pl) |
| CZ (2) | CZ299478B6 (pl) |
| DE (3) | DE69823218T2 (pl) |
| DK (3) | DK1439231T3 (pl) |
| EA (2) | EA003940B1 (pl) |
| EE (2) | EE200000151A (pl) |
| ES (3) | ES2215324T3 (pl) |
| HU (2) | HU226414B1 (pl) |
| IL (2) | IL135352A (pl) |
| NO (2) | NO20001584D0 (pl) |
| NZ (3) | NZ503235A (pl) |
| PL (2) | PL197569B1 (pl) |
| PT (3) | PT1021541E (pl) |
| SK (2) | SK286495B6 (pl) |
| UA (2) | UA73080C2 (pl) |
| WO (2) | WO1999016877A1 (pl) |
| ZA (2) | ZA988676B (pl) |
Families Citing this family (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6989435B2 (en) | 1997-09-11 | 2006-01-24 | Cambridge University Technical Services Ltd. | Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response |
| US7067117B1 (en) | 1997-09-11 | 2006-06-27 | Cambridge University Technical Services, Ltd. | Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response |
| WO1999028474A2 (en) * | 1997-12-01 | 1999-06-10 | The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary Of Health And Human Services | Chemokine variants and methods of use |
| US7238711B1 (en) | 1999-03-17 | 2007-07-03 | Cambridge University Technical Services Ltd. | Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response |
| EP1167527A1 (en) * | 2000-06-22 | 2002-01-02 | Euroscreen S.A. | Processed human chemokines PHC-1 and PHC-2 |
| DE60030749T2 (de) * | 1999-10-25 | 2007-09-20 | Pharis Biotec Gmbh | Prozessiertes menschliches chemokin phc-1 |
| WO2001036459A2 (en) * | 1999-11-15 | 2001-05-25 | Forssmann Wolf Georg | Novel use of hcc-2 |
| CA2316405A1 (en) * | 2000-05-26 | 2001-11-26 | Ian Clark-Lewis | Modulation of inflammation by protease products |
| EP1176200A3 (de) | 2000-06-20 | 2005-01-12 | Switch Biotech Aktiengesellschaft | Verwendung von Polypeptiden oder diese kodierende Nukleinsäuren zur Diagnose oder Behandlung von Hauterkrankung oder Wundheilung sowie ihre Verwendung zur Indentifizierung von pharmakologisch aktiven Substanzen |
| UA77950C2 (en) * | 2000-10-04 | 2007-02-15 | Applied Research Systems | Use of mutants of cc chemokines for treatment of multiple sclerosis |
| GB2373785A (en) * | 2001-03-28 | 2002-10-02 | Rega Inst For Medical Res | Truncating chemokines using dipeptidyl peptidase IV |
| EP1458756B1 (en) | 2001-12-17 | 2009-01-28 | Laboratoires Serono SA | Chemokine mutants acting as chemokine antagonists |
| WO2004104216A2 (en) * | 2003-05-21 | 2004-12-02 | Bayer Healthcare Ag | Diagnostics and therapeutics for diseases associated with dipeptidylpeptidase iv (dpp4) |
| DE102005049637A1 (de) * | 2005-10-14 | 2007-04-26 | Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen | Antagonisten gegen die Interaktion von PF4 und RANTES |
| ES2453592T3 (es) | 2007-08-02 | 2014-04-08 | Novimmune Sa | Anticuerpos anti-RANTES y métodos de uso de los mismos |
| US20130053257A1 (en) * | 2010-02-08 | 2013-02-28 | Paul E. Oran | RANTES Multiplexed Assay, RANTES Variants Related to Disease, and RANTES Variants Related to Enzymatice Activity |
| CN102884194B (zh) | 2010-03-11 | 2015-07-22 | 健康研究股份有限公司 | 含增强免疫应答的Fc融合蛋白的方法和组合物 |
| TW201718851A (zh) * | 2015-09-18 | 2017-06-01 | 通用醫院公司 | 具有抗化學排斥(anti-fugetactic)性質之經修飾自然殺手細胞及其用途 |
| WO2019229615A1 (en) | 2018-05-28 | 2019-12-05 | Université De Genève | Methods of inhibiting cerebral inflammation |
| US11629196B2 (en) | 2020-04-27 | 2023-04-18 | Incelldx, Inc. | Method of treating SARS-CoV-2-associated hypercytokinemia by administering a human monoclonal antibody (PRO-140) that inhibits CCR5/CCL5 binding interactions |
| US11402391B2 (en) | 2020-12-21 | 2022-08-02 | Incelldx, Inc. | Methods of treating a long-hauler subject for chronic COVID-19 by administering a CCR5 or CCL5 antagonist |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01265099A (ja) | 1987-10-08 | 1989-10-23 | Stichting Rega Vzw | 抗ｈｉｖ活性をもつ３’，−フルオロプリン−２’，３’−ジデオキシリボシド類 |
| US5739103A (en) * | 1993-11-12 | 1998-04-14 | Dana-Farber Cancer Institute | Chemokine N-terminal deletion mutations |
| FI972433A0 (fi) * | 1994-12-08 | 1997-06-06 | Glaxo Group Ltd | Rantes-peptidi ja fragmentteja sekä tätä sisältäviä tulehduksen hoitoon soveltuvia koostumuksia |
| AU1532697A (en) * | 1996-01-12 | 1997-08-01 | Genetics Institute Inc. | Beta-chemokine, h1305 (mcp-2) |
| JP2000508527A (ja) * | 1996-03-27 | 2000-07-11 | アイコス コーポレイション | 単球走化性タンパク質―５物質及び方法 |
| FR2748938B1 (fr) * | 1996-05-22 | 1998-07-31 | Pasteur Institut | Utilisation de molecules antagonistes de chemokines pour leur activite antivirale notamment contre un retrovirus de type vih |
| US6168784B1 (en) * | 1997-09-03 | 2001-01-02 | Gryphon Sciences | N-terminal modifications of RANTES and methods of use |
-
1997
- 1997-09-29 EP EP97116863A patent/EP0906954A1/en not_active Withdrawn
- 1997-12-19 EP EP97122471A patent/EP0905240A1/en not_active Withdrawn
-
1998
- 1998-03-10 EP EP98104216A patent/EP0905241A1/en not_active Withdrawn
- 1998-09-22 ZA ZA9808676A patent/ZA988676B/xx unknown
- 1998-09-22 ZA ZA9808675A patent/ZA988675B/xx unknown
- 1998-09-28 SK SK451-2000A patent/SK286495B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 AU AU97474/98A patent/AU750341B2/en not_active Ceased
- 1998-09-28 EP EP98947553A patent/EP1021541B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 AU AU94420/98A patent/AU750606B2/en not_active Ceased
- 1998-09-28 ES ES98947553T patent/ES2215324T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 NZ NZ503235A patent/NZ503235A/xx unknown
- 1998-09-28 ES ES04007579T patent/ES2287601T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 DK DK04007579T patent/DK1439231T3/da active
- 1998-09-28 EP EP04007579A patent/EP1439231B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 HU HU0003505A patent/HU226414B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 CZ CZ20001146A patent/CZ299478B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 ES ES98951476T patent/ES2218860T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 EE EEP200000151A patent/EE200000151A/xx unknown
- 1998-09-28 KR KR1020007003020A patent/KR100542934B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 CA CA002304827A patent/CA2304827A1/en not_active Abandoned
- 1998-09-28 HU HU0003563A patent/HU226468B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 CA CA002305017A patent/CA2305017A1/en not_active Abandoned
- 1998-09-28 SK SK450-2000A patent/SK286439B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 KR KR1020007003019A patent/KR100560275B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 DE DE69823218T patent/DE69823218T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 UA UA2000042496A patent/UA73080C2/uk unknown
- 1998-09-28 PT PT98947553T patent/PT1021541E/pt unknown
- 1998-09-28 BR BR9812565-6A patent/BR9812565A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-09-28 WO PCT/EP1998/006143 patent/WO1999016877A1/en not_active Ceased
- 1998-09-28 WO PCT/EP1998/006142 patent/WO1999016876A1/en not_active Ceased
- 1998-09-28 UA UA2000042499A patent/UA73081C2/uk unknown
- 1998-09-28 EA EA200000379A patent/EA003940B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 PT PT98951476T patent/PT1019507E/pt unknown
- 1998-09-28 AT AT04007579T patent/ATE368742T1/de active
- 1998-09-28 CN CNB988095696A patent/CN1145693C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 NZ NZ503234A patent/NZ503234A/en unknown
- 1998-09-28 AR ARP980104820A patent/AR013529A1/es active IP Right Grant
- 1998-09-28 PL PL339559A patent/PL197569B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 EA EA200000378A patent/EA003942B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 AT AT98947553T patent/ATE264390T1/de active
- 1998-09-28 DK DK98947553T patent/DK1021541T3/da active
- 1998-09-28 DE DE69822856T patent/DE69822856T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 EE EEP200000152A patent/EE200000152A/xx unknown
- 1998-09-28 EP EP98951476A patent/EP1019507B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 CN CNB988095726A patent/CN1148447C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 AR ARP980104819A patent/AR013528A1/es active IP Right Grant
- 1998-09-28 NZ NZ516027A patent/NZ516027A/en unknown
- 1998-09-28 AT AT98951476T patent/ATE263242T1/de active
- 1998-09-28 JP JP2000513946A patent/JP4230659B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 JP JP2000513947A patent/JP4233214B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 PT PT04007579T patent/PT1439231E/pt unknown
- 1998-09-28 BR BR9812394-7A patent/BR9812394A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-09-28 CN CNB031492991A patent/CN1233415C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-09-28 DK DK98951476T patent/DK1019507T3/da active
- 1998-09-28 CZ CZ20001147A patent/CZ299479B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-09-28 DE DE69838188T patent/DE69838188T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-28 PL PL339545A patent/PL196427B1/pl not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-03-22 BG BG104266A patent/BG64679B1/bg unknown
- 2000-03-22 BG BG104267A patent/BG64757B1/bg unknown
- 2000-03-27 NO NO20001584A patent/NO20001584D0/no not_active Application Discontinuation
- 2000-03-28 NO NO20001609A patent/NO20001609D0/no unknown
- 2000-03-28 US US09/537,858 patent/US6977071B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-28 US US09/537,859 patent/US6905676B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-03-29 IL IL135352A patent/IL135352A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-03-29 IL IL135351A patent/IL135351A/en not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-03-07 US US11/072,454 patent/US7326411B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-05-06 US US11/123,089 patent/US7338653B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2005-05-18 US US11/131,221 patent/US20050220790A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-10-08 CY CY20071101290T patent/CY1110927T1/el unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL197569B1 (pl) | Skrócone na końcu aminowym białko MCP-2, rekombinacyjny sposób jego wytwarzania oraz jego zastosowanie, cząsteczki DNA, wektor ekspresyjny, komórka gospodarza i kompozycja farmaceutyczna | |
| MXPA00002880A (en) | Amino-terminally truncated mcp-2 as chemokine antagonists | |
| MXPA00002881A (en) | Amino-terminally truncated rantes as chemokine antagonists |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Decisions on the lapse of the protection rights |
Effective date: 20090928 |