PL198352B1 - Heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38 - Google Patents

Heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38

Info

Publication number
PL198352B1
PL198352B1 PL344046A PL34404699A PL198352B1 PL 198352 B1 PL198352 B1 PL 198352B1 PL 344046 A PL344046 A PL 344046A PL 34404699 A PL34404699 A PL 34404699A PL 198352 B1 PL198352 B1 PL 198352B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compound
group
disease
diseases
compounds
Prior art date
Application number
PL344046A
Other languages
English (en)
Other versions
PL344046A1 (en
Inventor
Francesco Salituro
Vincent Galullo
Steven Bellon
Guy Bemis
John Cochran
Original Assignee
Vertex Pharma
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharma filed Critical Vertex Pharma
Publication of PL344046A1 publication Critical patent/PL344046A1/xx
Publication of PL198352B1 publication Critical patent/PL198352B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/74—Amino or imino radicals substituted by hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/06—Antimigraine agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/10—Antioedematous agents; Diuretics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C04—CEMENTS; CONCRETE; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES
    • C04B—LIME, MAGNESIA; SLAG; CEMENTS; COMPOSITIONS THEREOF, e.g. MORTARS, CONCRETE OR LIKE BUILDING MATERIALS; ARTIFICIAL STONE; CERAMICS; REFRACTORIES; TREATMENT OF NATURAL STONE
    • C04B35/00—Shaped ceramic products characterised by their composition; Ceramics compositions; Processing powders of inorganic compounds preparatory to the manufacturing of ceramic products
    • C04B35/01—Shaped ceramic products characterised by their composition; Ceramics compositions; Processing powders of inorganic compounds preparatory to the manufacturing of ceramic products based on oxide ceramics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/12—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/26—Radicals substituted by halogen atoms or nitro radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/36—Radicals substituted by singly-bound nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/06—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by halogen atoms or nitro radicals
    • C07D295/073—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by halogen atoms or nitro radicals with the ring nitrogen atoms and the substituents separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/04—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/08—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms
    • C07D295/096—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring nitrogen atoms substituted by singly bound oxygen or sulfur atoms with the ring nitrogen atoms and the oxygen or sulfur atoms separated by carbocyclic rings or by carbon chains interrupted by carbocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/06—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Ceramic Engineering (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Manufacturing & Machinery (AREA)
  • Structural Engineering (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)

Abstract

1. Heterocykliczne inhibitory p38 o wzorze; w którym ka zdy Q 1 i Q 2 oznacza fenyl; Q 1 jest podstawiony 2 podstawnikami, z których ka zdy jest niezale znie wybrany z grupy obej- mujacej chlor i fluor; Q 2 jest podstawiony 1 lub 2 podstawnikami, z których ka zdy jest niezale znie wybrany z grupy obejmuj acej fluor i metyl; W jest wybrany z grupy obejmuj acej -NH 2 ; -NHC(O)NH 2 ; -NH 2 CH 2 C(O)NH 2 ; -C(O)NH 2 ; -CH 2 OH; -CH 2 N(CH 3 ) 2 ; -CH 2 CH 2 OH; -CH 2 CH 2 C(O)NH 2 ; -CH 2 CH 2 C(O)OCH 3 ; -CH 2 OC(O)CH 3 ; -CH 2 OC(O)NH 2 ; -CH 2 OC(O)-piperazyna; -CH 2 OC(O)NH-pirydyna; -CH 2 OC(O)CH 2 CH 2 -piperazyna; -CH 2 -piperazyna; i -CH 2 CH 2 OC(O)NH 2 ; R oznacza wodór; Y oznacza C; Z oznacza N; U oznacza wodór; oraz V oznacza -C(O)NH 2 . PL PL PL PL PL PL PL

Description

Przedmiotem wynalazku są heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38. p38 jest to ssacza kinaza białkowa związana z proliferacją komórek, śmiercią komórek i odpowiedzią na bodźce pozakomórkowe. Przedmiotem wynalazku są także kompozycje farmaceutyczne zawierające inhibitory według wynalazku oraz zastosowania tych związków do wytwarzania kompozycji farmaceutycznych do leczenia lub zapobiegania różnym zaburzeniom.
Kinazy białkowe biorą udział w różnych odpowiedziach komórek na sygnały pozakomórkowe. Odkryto ostatnio rodzinę aktywowanych mitogenem kinaz białkowych (MAPK). Członkami tej rodziny są kinazy Ser/Thr, które aktywują swoje substraty przez fosforylację [B. Stein i in., Ann. Rep. Med. Chem., 31, str. 289-98 (1996)]. MAPK aktywują się przez różne sygnały obejmujące czynniki wzrostowe, cytokiny, promieniowanie UV i czynniki wywołujące napięcie.
Jedną ze szczególnie interesujących MAPK jest p38. p38, znana również jako białko wiążące przeciwzapalne leki hamujące cytokiny (CSPB) i RK, została wyizolowana z mysich limfocytów pre-B, transfekowanych receptorem CD14 lipopolisacharydu (LPS), CD14 i indukowanych LPS. Wyizolowano i zsekwencjonowano cDNA kodujący p38 u ludzi i myszy. Aktywację p38 serwowano w komórkach stymulowanych przez napięcia, takie jak działanie lipopolisacharydami (LPS), UV, anizomycyną lub przez wstrząs osmotyczny albo przez cytokiny, takie jak IL-1 i TNF.
Zahamowanie kinazy p38 prowadzi do blokady wytwarzania zarówno IL-1, jak i TNF. IL-1 i TNF stymulują wytwarzanie innych cytokin prozapalnych, takich jak IL-6 i IL-8 i są związane z ostrymi i przewlekłymi chorobami zapalnymi i z osteoporozą postmenopauzalną [R.B. Kimble i in., Endocrinol., 136, str. 3054-61 (1995)].
W oparciu o to stwierdzenie, uważa się, że p38, wraz z innymi MAPK, odgrywa rolę w pośredniczeniu w odpowiedzi komórek na bodźce zapalne, takiej jak akumulacja leukocytów, aktywacja makrofagów/monocytów, resorpcja tkanki, gorączka, odpowiedzi fazy ostrej i neutrofilia. Ponadto MAPK, takie jak p38, są związane z nowotworem, agregacją płytek wywołaną trombiną, z niedoborem odporności, chorobami autoimmunizacyjnymi, śmiercią komórek, alergiami, osteoporozą i zaburzeniami neurodegeneracyjnymi. Inhibitory p38 są również związane z dziedziną leczenia bólu poprzez zahamowanie indukcji syntazy-2 endonadtlenku prostaglandyny. W WO 96/21654 podano inne choroby związane z nadprodukcją IL-1, IL-6, IL-8 lub TNF.
W publikacji PCT WO 97/33883 opisane są związki pirymidynowe podstawione grupą aminową do leczenia chorób związanych z cytokiną. W europejskich zgłoszeniach patentowych nr nr EP 0337943 i EP 0336944 opisane są fenylo-N-pirymidyn-2-ylomoczniki o aktywności chwastobójczej i regulującej wzrost roślin.
Rozpoczęto już próby opracowania leków, które swoiście hamują MAPK. Przykładowo, w publikacji zgłoszenia PCT nr WO 96/31451 opisano związki pirazolowe, które hamują MAPK, a zwłaszcza p38. Jednakże nadal bada się skuteczność tych inhibitorów in vivo.
Tak więc, nadal istnieje potrzeba opracowania innych silnych inhibitorów p38, łącznie z inhibitorami specyficznymi wobec p38, które są użyteczne w leczeniu różnych stanów związanych z aktywacją p38.
Niniejszy wynalazek rozwiązuje powyższy problem przez dostarczenie związków, które wykazują silne hamowanie p38.
Heterocykliczne inhibitory p38 według wynalazku mają ogólny wzór:
w którym każdy Q1 i Q2 oznacza fenyl;
Q1 jest podstawiony 2 podstawnikami, z których każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej chlor i fluor;
Q2 jest podstawiony 1 lub 2 podstawnikami, z których każdy jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej fluor i metyl;
W jest wybrany z grupy obejmującej -NH2; -NHC(O)NH2; -NH2CH2C(O)NH2; -C(O)NH2; -CH2OH; -CH2N(CHah; -CH2CH2OH; -CH2CH2C(O)NH2; -CH2CH2C(O)OCHa; -CH2OC(O)CHa; -CH2OC(O)NH2;
PL 198 352 B1
-CH2OC(O)-piperazyna; -CH2OC(O)NH-pirydyna; -CH2OC(O)CH2CH2-piperazyna; -CH2-piperazyna; i -CH2CH2OC(O)NH2;
R oznacza wodór;
Y oznacza C;
Z oznacza N;
U oznacza wodór; oraz
V oznacza -C(O)NH2.
Zgodnie z korzystnym wykonaniem, Q1 oznacza fenyl zawierający 2 podstawniki, przy czym co najmniej jeden z nich jest w pozycji orto.
Jeszcze bardziej korzystnie Q1 oznacza fenyl zawierający 2 podstawniki, obydwa w pozycji orto. Konkretnymi przykładami korzystnych podstawników Q1 są:
Najkorzystniej, Q1 jest wybrany z grupy obejmującej 2,6-difluorofenyl i 2,6-dichlorofenyl. Niektóre konkretne przykłady korzystnych podstawników Q2 stanowią:
Najbardziej korzystne są związki, w których Q2 jest wybrany z grupy obejmującej 3,4-dimetylofenyl, 3-fluorofenyl, 2-metylofenyl, 4-fluorofenyl, 2-metylo-4-fluorofenyl i 2,4-difluorofenyl.
Korzystne związki o wzorze la przedstawione są w następującej tabeli:
Nr zw. Struktura Nr zw. Struktura
Y
L. 1 Λ Y.
T T 'NH2
150 1 F Yn | 151 Cl (S
liii U
HO. HO
o o ΥΑγ- 'F o
q lAlH ej .Λ
Ϊ 1 1f-h
Cl . Y, F
152 r Ϊ 1 160 X II F
AY ϊ|Α
HOJ
,F F
U Ύ O 1 °
'n'xNH2
T 'NH2
15S F AN i 164 F II
0 γ.
HO tom'-f ,Λ & τα
' 0 Γ ι'' 0
T άΑ nh2
163 T 11 Αν f 162 F Αν I
γτ •Λ
HO. J LAf HC.^ ΆΥ
F
PL 198 352 B1 cd. tabeli
165 ę F „A o '•'bA aA r nh2 F 6, 158 S, ΓΥ HU
ę A jh2 fFo 1 I n nh2
F fi A-l
159 |l ν.Α ϊΓί 161 L n 1 3 la.f
o LA Η2Νγ-<Κ
9 -F o NH, 9 -Fo x?Anh2
F A^n F i
166 Uk 167 AS f 0 1
A Out, H s
Szczególnie korzystne wykonania obejmują związki o wzorze:
Szczególnie korzystne wykonania obejmują również związki o wzorze:
PL 198 352 B1 w którym X oznacza NH2 lub Ν(ΟΗβ)2;
w którym X oznacza OH, NH2 lub N(CH3)2;
Inne szczególnie korzystne wykonania obejmują związki o wzorze:
w którym X oznacza OH,
albo
Inne szczególnie korzystne wykonania obejmują związki o wzorze:
w którym X = H, -C(O)CH albo -C(O)NH
PL 198 352 B1 w którym X =
Najkorzystniejsze wykonania obejmują:
Poniżej przedstawiono reprezentatywne schematy syntezy związków o wzorze (la).
Na schematach 1-3 zilustrowano wytwarzanie związków, w których W oznacza aminową, karboksylową lub aldehydową grupę funkcyjną. W każdym przypadku konkretną resztę można zmodyfikować metodami chemicznymi znanymi z literatury. Przykładowo, końcową grupę aminową w związkach D i N (schematy 1 i 4, odpowiednio) można acylować lub alkilować, z wytworzeniem związków, które mieszczą się w zakresie W. Na wszystkich schematach grupy L1 i L2 w substancjach wyjściowych oznaczają grupy opuszczające w pozycji orto względem atomu azotu w pierścieniu heterocyklicznym. Przykładowo, związkiem A może być 2,6-dichloro-3-nitropirydyna.
PL 198 352 B1
Jak przedstawiono na schemacie 1, pierścień Q2 wprowadza się stosując jedną z wielu znanych w technice reakcji, które prowadzą do wytworzenia związków biarylowych. Jednym z przykładów może być reakcja związku metaloarylowego z pirydynowym związkiem pośrednim A. Alternatywnie, związek metaloarylowy, taki jak stannan arylu lub kwas aryloboronowy, można poddać reakcji z halogenkiem arylu (związek pośredni A) w obecności Pd0 jako katalizatora, z wytworzeniem produktu B. W następnym etapie podstawioną Q1 pochodną, taką jak pochodna fenyloacetonitrylowa, można potraktować zasadą, taką jak wodorek sodu, amidek sodu, LDA, heksametylodisilazydek litu lub innymi nienukleofilowymi zasadami, w celu deprotonowania pozycji alfa względem grupy cyjanowej, która oznacza zamaskowaną resztę amidową. Następnie anion ten kontaktuje się ze związkiem pośrednim B, uzyskując C. Nitryl lub równoważną grupę związku pośredniego C następnie hydrolizuje się z wytworzeniem amidu, a grupę nitrową poddaje się warunkom redukującym, uzyskując pośrednią aminę D. Pośredni związek D stosuje się do wprowadzenia różnych grup funkcyjnych określonych przez W, stosując dobrze znane w literaturze reakcje chemiczne, takie jak acylowanie lub alkilowanie. W zależności od regioselektywności dwóch pierwszych etapów opisanego sposobu, może zachodzić potrzeba zmiany ich kolejności.
Na schemacie 2, W jest wybrany spośród grup pochodzących od grupy karboksylowej.
Na schemacie 2 w zasadzie powtórzono procedury ze schematu 1, z tą różnicą, że jako substancję wyjściową stosowano pośredni związek karboksylowy, taki jak E. Pierwsze dwa etapy są iden8
PL 198 352 B1 tyczne jak na schemacie 1, i podobnie można zmienić ich kolejność w zależności od regioselektywności konkretnych przykładów. W pierwszych dwóch etapach wytwarza się związek G, który następnie można hydrolizować, jak opisano dla karboksylowego związku pośredniego H. Następnie grupę karboksylową można zmodyfikować, zgodnie z procedurami dobrze znanymi z literatury, takimi jak acylowanie, amidowanie i estryfikowanie uzyskując analogi zawierające określone podstawniki W.
Na schemacie 3 W jest wybrany z grupy obejmującej prosty lub rozgałęziony (C1-C4) alkil ewentualnie podstawiony.
Na schemacie 3 do pochodnej piperydyny wprowadza się metal, a następnie reakcję przerywa się jednym z wielu znanych związków elektrofilowych, które są zdolne do wytworzenia aldehydu, i uzyskuje się związek pośredni I. Aldehyd można następnie zablokować z wytworzeniem acetalu dimetylowego J. Ten związek pośredni poddaje się reakcji, jak opisano na schematach 1 i 2, aby wprowadzić podstawniki Q1 i Q2 i uzyskać związek pośredni L. Jak opisano uprzednio, można zmienić kolejność tych dwóch etapów, w zależności od konkretnej regioselektywności . Zablokowany aldehyd L można następnie pozbawić grupy ochronnej i stosować do wytworzenia związków zawierających określone podstawniki W, zgodnie ze znanymi w chemii reakcjami, takimi jak alkilowanie i redukcyjne aminowanie.
Schematy 4-6 są podobne do schematów 1-3, z tą różnicą, że związkami docelowymi są tu związki, w których Z = azot.
Prowadzi się etapy analogiczne do schematów 1-3, z tym wyjątkiem, że zamiast alkilowania z użyciem fenyloacetonitrylu prowadzi się reakcję z pochodną aminy Q1, taką jak podstawiona pochodna aniliny. Następnie do cząsteczki wprowadza się część amidową na drodze reakcji acylowania, na przykład izocyjanianem chlorosulfonylu.
PL 198 352 B1
Na schemacie 4 W jest wybrany spośród grup pochodzących od grupy aminowej.
Na schemacie 4, na związek pośredni B (ze schematu 1) działa się, na przykład, pochodną aniliny w obecności zasady, takiej jak węglan potasu. Ponadto, w celu zwiększenia reaktywności tej ogólnego typu reakcji w razie potrzeby można stosować katalizator palladowy. Następnie wytworzoną pochodną aminy acyluje się, uzyskując związek pośredni N. Grupę nitrową związku M redukuje się, z wytworzeniem związku M, a grupę aminową można następnie derywatyzować, jak opisano na schemacie 1. Jak przedstawiono na schematach 1-3, można zmienić kolejność etapów we wprowadzaniu podstawników Q1 i Q2, w zależności od regioselektywności konkretnych związków.
Na schemacie 5 W jest wybrany spośród grup pochodzących od grupy karboksylowej.
Na schemacie 6, W jest wybrany z grupy obejmującej prosty lub rozgałęziony (C1-C4) alkil ewentualnie podstawiony.
Procedury na schematach 5 i 6 są zasadniczo zgodne z procedurami opisanymi uprzednio. Aktywność inhibitorów p38 według wynalazku można ocenić w badaniach in vitro, in vivo lub w badaniach na liniach komórkowych. Testy in vitro obejmują badania, które określają zahamowanie aktywności kinazy lub aktywności ATPazy aktywowanego p38. Alternatywne badania in vitro określają zdolność inhibitora do wiązania się z p38, którą można zmierzyć przez radioznakowanie inhibitora przed związaniem, wyizolowanie kompleksu inhibitor/p38 i oznaczenie ilości radioznakowanego wią10
PL 198 352 B1 zania lub prowadząc badania kompetycyjne, w których nowe inhibitory inkubuje się z p38 związanym ze znanymi radioligandami.
W badaniach działania hamującego związków według wynalazku na hodowli komórek określić można ilość TNF, IL-l, IL-6 lub IL-8 wytworzonych w pełnej krwi lub w jej frakcjach komórkowych w komórkach traktowanych inhibitorem w porównaniu z komórkami traktowanymi ujemnymi związkami kontrolnymi. Poziom tych cytokin określić można stosując dostępne na rynku testy ELISA.
W badaniach in vivo działanie hamujące inhibitorów p38 według wynalazku określa się poprzez zmniejszenie obrzęku tylnej łapy szczura towarzyszącego zapaleniu stawów wywołanemu przez Mycobacterium butyricum. Badanie to opisali J.C. Boehm i in., w J. Med. Chem., 39, str. 3929-37 (1996). Inhibitory p38 według wynalazku można również badać na zwierzęcych modelach zapalenia stawów, resorpcji kości, wstrząsu endotoksycznego i czynności układu odpornościowego, jak opisali A.M. Badger i in., w J. Pharmacol. Experimental Therapeutics, 279, str. 1453-61 (1996).
Inhibitory p38 lub ich farmaceutycznie dopuszczalne sole można sporządzać w postaci kompozycji farmaceutycznych do podawania zwierzętom lub ludziom. Takie kompozycje farmaceutyczne, które zawierają inhibitor p38 według wynalazku w ilości skutecznej do hamowania p38, oraz farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, są następnym przedmiotem niniejszego wynalazku.
W zakres wynalazku wchodzi również zastosowanie związków według wynalazku do wytwarzania kompozycji farmaceutycznych do leczenia lub zapobiegania chorobom związanym z p38.
Stosowane tu określenie „choroba związana z p38 odnosi się do wielu chorób lub szkodliwych stanów, w których znana jest rola p38. Obejmują one stany chorobowe spowodowane nadprodukcją IL-1, TNF, IL-6 lub IL-8. Do chorób takich należą, ale nie wyłącznie, choroby zapalne, choroby autoimmunizacyjne, choroby zwyrodnieniowe kości, choroby proliferacyjne, choroby zakaźne, choroby neurodegeneracyjne, alergie, reperfuzja/niedokrwienie przy udarze, ataki serca, choroby naczyniotwórcze, niedotlenienie narządów, rozrost naczyń, hipertrofia serca, agregacja płytek związana z trombiną oraz stany związane z syntazą-2 endonadtlenku prostaglandyny.
Choroby zapalne, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę, alergie i zespół niewydolności oddechowej u dorosłych.
Choroby autoimmunizacyjne, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, zapalenie kłębuszków nerkowych, reumatoidalne zapalenie stawów, układowy toczeń rumieniowaty, twardzinę skóry, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Gravesa, autoimmunizacyjne zapalenie żołądka, cukrzycę, autoimmunizacyjną białaczkę hemolityczną, neutropenię autoimmunizacyjną, trombocytopenię, atopowe zapalenie skóry, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenia gravis, stwardnienie rozsiane, chorobę zapalną jelita grubego, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, chorobę Crohna, łuszczycę i chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi.
Zwyrodnieniowe choroby kości, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, osteoporozę, zapalenie kostno-stawowe i choroby kości związane ze szpiczakiem mnogim.
Choroby proliferacyjne, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, ostrą białaczkę pochodzenia szpikowego, przewlekłą białaczkę pochodzenia szpikowego, czerniaka przerzutowego, mięsaka Kaposiego oraz szpiczaka mnogiego. Choroby naczyniotwórcze, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, guzy lite, zapalenie naczyń oka, naczyniaki dziecięce.
Choroby zakaźne, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, posocznicę, wstrząs septyczny i zakażenie pałeczkami Shigella.
Choroby wirusowe, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, ostre zapalenie wątroby (obejmujące zapalenie wątroby A, zapalenie wątroby B i zapalenie wątroby C), zakażenia HIV i zapalenie spojówek wywołane przez wirus cytomegalii. Choroby neurodegeneracyjne, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując związki według wynalazku, obejmują, ale nie wyłącznie, chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie mózgu lub choroby neurodegeneracyjne spowodowane uszkodzeniami i urazami.
PL 198 352 B1 „Stany chorobowe związane z p38 obejmują również niedokrwienie/reperfuzję przy udarze, ataki serca, niedokrwienie mięśnia sercowego, niedotlenienie narządów, rozrost naczyń, przerost mięśnia sercowego oraz agregację płytek związaną z trombiną.
Ponadto, inhibitory p38 według wynalazku są również zdolne do hamowania ekspresji indukowalnych białek prozapalnych, takich jak syntaza-2 endonadtlenku prostaglandyny (PGHS-2), określana również jako cyklooksygenaza-2 (COX-2). Tak więc, inne „stany chorobowe związane z p38, które można leczyć związkami według wynalazku, obejmują obrzęk, analgezję, gorączkę i bóle, takie jak ból nerwowo-mięśniowy, ból głowy, bóle nowotworowe, ból zęba i ból stawów.
Choroby, które można leczyć lub którym można zapobiegać stosując inhibitory p38 według wynalazku można również pogrupować według cytokin (IL-1, TNF, IL-6, IL-8), które uważa się za odpowiedzialne za daną chorobę.
Tak więc, choroby lub stany chorobowe związane z IL-1, obejmują reumatoidalne zapalenie stawów, zapalenie kostno-stawowe, udar, endotoksemię i/lub zespół wstrząsu toksycznego, reakcję zapalną wywołaną przez endotoksyny, chorobę zapalną jelita grubego, gruźlicę, miażdżycę tętnic, zwyrodnienie mięśni, kacheksję, zapalenie stawów spowodowane łuszczycą, zespół Reitera, dnę, pourazowe zapalenie stawów, zapalenie stawów spowodowane różyczką, ostre zapalenie błony maziowej, cukrzycę, chorobę trzustki związaną z komórkami β i chorobę Alzheimera.
Choroby lub stany chorobowe związane z TNF obejmują reumatoidalne zapalenie stawów, zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa, zapalenie kostno-stawowe, ostre dnawe zapalenie stawów i inne stany artretyczne, posocznicę, wstrząs septyczny, wstrząs endotoksyczny, posocznicę gram ujemną, zespół wstrząsu toksycznego, zespół niewydolności oddechowej dorosłych, malarię mózgową, przewlekłą zapalną chorobę płuc, pylicę krzemową, sarkoidozę płucną, choroby związane z resorpcją kości, urazy związane z reperfuzją, chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi, odrzucenie przeszczepu, gorączkę i ból mięśni spowodowany zakażeniem, kacheksję w następstwie zakażenia, AIDS, ARC lub nowotwory złośliwe, tworzenie bliznowców, bliznowce tkankowe, chorobę Crohna, wrzodziejące zapalenie okrężnicy lub stany gorączkowe. Choroby związane z TNF obejmują również zakażenie wirusowe, takie jak HIV, CMV, grupę i opryszczkę; oraz weterynaryjne zakażenia wirusowe, takie jak zakażenia wirusowym zapaleniem soczewek, zakażenia końskim wirusem białaczki, zakażenia kozim wirusem zapalenia stawów, zakażenia wirusami maedi i visna; lub zakażenia retrowirusami, obejmujące koci wirus niedoboru odporności, bydlęcy wirus niedoboru odporności lub psi wirus niedoboru odporności.
Choroby lub stany chorobowe związane z IL-8 obejmują choroby charakteryzujące się intensywnym naciekaniem obojętnochłonnych krwinek białych, takie jak łuszczyca, choroba zapalna jelita grubego, astma, reperfuzja serca i nerek związana z uszkodzeniami, zespół niewydolności oddechowej dorosłych, zakrzepica i zapalenie kłębuszków nerkowych. Ponadto, związki według wynalazku można stosować miejscowo do leczenia i zapobiegania stanom spowodowanym lub zaostrzonym przez IL-I lub TNF. Stany takie obejmują zapalenie stawów, egzemę, łuszczycę, zapalenia skóry, takie jak porażenia słoneczne, zapalenia oka, takie jak zapalenia spojówek, stany gorączkowe, bóle i inne stany związane z zapaleniami. Związki według wynalazku oraz farmaceutycznie dopuszczalne sole związków według wynalazku można ponadto stosować w kompozycjach do leczenia lub zapobiegania wymienionym powyżej chorobom.
Farmaceutycznie dopuszczalne sole związków według wynalazku obejmują sole utworzone z farmaceutycznie dopuszczalnymi kwasami nieorganicznymi i organicznymi oraz z zasadami. Przykłady odpowiednich soli z kwasami obejmują octan, adypinian, alginian, asparaginian, benzoesan, benzenosulfonian, wodorosiarczan, maślan, cytrynian, kamforan, kamforosulfonian, cyklopentanopropionian, diglikonian, dodecylosiarczan, etanosulfonian, mrówczan, fumaran, glukoheptanian, glicerofosforan, glikolan, hemisiarczan, heptanian, heksanian, chlorowodorek, bromowodorek, jodowodorek, 2-hydroksyetanosulfonian, mleczan, maleinian, malonian, metanosulfonian, 2-naftalenosulfonian, nikotynian, azotan, szczawian, palmitynian, pektynian, nadsiarczan, 3-fenylopropionian, fosforan, pikrynian, piwalinian, propionian, salicylan, bursztynian, siarczan, winian, tiocyjanian, tosylan i undekanian. Inne kwasy, takie jak szczawiowy, aczkolwiek same nie są farmaceutycznie dopuszczalne, mogą być stosowane do wytwarzania soli użytecznych jako produkty przejściowe w wytwarzaniu związków według wynalazku oraz ich farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych z kwasami. Sole utworzone z odpowiednimi zasadami obejmują sole metali alkalicznych (np. z sodem i potasem), metali ziem alkalicznych (np. z magnezem), sole amonowe i sole N-(C1-C4alkil)4+. Wynalazek przewiduje również czwartorzędowanie dowolnych grup zawierających zasadowy atom azotu w związkach według wyna12
PL 198 352 B1 lazku. W wyniku takiego czwartorzędowania wytworzyć można produkty rozpuszczalne lub dyspergowalne w wodzie lub w oleju.
Farmaceutycznie dopuszczalne nośniki, które można stosować w kompozycjach farmaceutycznych według wynalazku obejmują, ale nie wyłącznie, wymieniacze jonowe, tlenek glinu, stearynian glinu, lecytynę, białka surowicy, takie jak albumina surowicy ludzkiej, substancje buforowe, takie jak fosforany, glicynę, kwas sorbinowy, sorbinian potasu, mieszaniny częściowych glicerydów nasyconych roślinnych kwasów tłuszczowych, wodę, sole i elektrolity, takie jak siarczan protaminy, wodorofosforan disodu, wodorofosforan potasu, chlorek sodu, sole cynku, krzemionkę koloidalną, trikrzemian magnezu, poliwinylopirolidon, substancje oparte na celulozie, glikol polietylenowy, sól sodową karboksymetylocelulozy, poliakrylany, woski, polimery blokowe polietylen-polioksypropylen, glikol polietylenowy i lanolinę.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie, pozajelitowo, przez wdmuchiwanie do nosa, miejscowo, doodbytniczo, donosowo, dopoliczkowo, dopochwowo lub z wszczepionego zbiornika. Stosowany tu termin „pozajelitowo obejmuje wstrzykiwanie podskórne, dożylne, domięśniowe, dostawowe, domaziówkowe, domostkowe, dokomorowe, dowątrobowe, do miejsca chorobowo zmienionego i doczaszkowe, oraz podawanie technikami wlewów. Korzystnie, kompozycje podaje się doustnie, dootrzewnowo lub dożylnie.
Sterylne preparaty do wstrzyknięć według wynalazku mogą być w postaci wodnych lub olejowych zawiesin. Zawiesiny takie wytwarza się znanymi w technice sposobami przy użyciu odpowiednich środków dyspergujących lub zwilżających i środków zawieszających. Sterylne preparaty do wstrzyknięć mogą być również w postaci sterylnego nadającego się do wstrzyknięć roztworu lub zawiesiny w nietoksycznym dopuszczalnym do stosowania pozajelitowego rozcieńczalniku lub rozpuszczalniku, na przykład jako roztwór w 1,3-butanodiolu. Jako dopuszczalne rozcieńczalniki i rozpuszczalniki można stosować wodę, roztwór Ringera i izotoniczny roztwór chlorku sodu. Ponadto, jako rozcieńczalnik lub środek zawieszający korzystnie stosuje się również sterylne, ciekłe oleje. Do tych celów stosować można dowolną mieszankę ciekłych olejów, łącznie z syntetycznymi mono- lub diglicerydami. Do wytwarzania preparatów do wstrzyknięć przydatne są także kwasy tłuszczowe, takie jak kwas oleinowy, i jego glicerydowe pochodne, oraz naturalne farmaceutycznie dopuszczalne oleje, takie jak olej z oliwek lub olej rycynowy, szczególnie w ich polietoksylowanych wersjach. Takie olejowe roztwory lub zawiesiny mogą również zawierać jako rozcieńczalnik długołańcuchowy alkohol, lub czynnik dyspergujący, taki jak karboksymetyloceluloza lub podobne środki dyspergujące, które są zwyczajowo stosowane do wytwarzania farmaceutycznie dopuszczalnych postaci użytkowych, takich jak emulsje i zawiesiny. Do wytwarzania kompozycji farmaceutycznych w postaci stałej, ciekłej lub w innej formie, można również stosować inne stosowane zwykle środki powierzchniowo czynne, takie jak Tween lub Span oraz inne podobne środki emulgujące lub zwiększające biodostępność.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można podawać doustnie w dowolnej postaci użytkowej odpowiedniej do takiego podawania, obejmującej, ale nie wyłącznie, kapsułki, tabletki, wodne zawiesiny i roztwory. W przypadku tabletek do podawania doustnego jako nośniki stosuje się zwykle laktozę i skrobię kukurydzianą. Zazwyczaj dodaje się również środki poślizgowe, takie jak stearynian magnezu. W kapsułkach do podawania doustnego użyteczne nośniki obejmują laktozę i suchą skrobię kukurydzianą. W wodnych zawiesinach do podawania doustnego składnik czynny łączy się ze środkami emulgującymi lub zawieszającymi. W razie potrzeby, można również dodawać substancje słodzące, smakowo-zapachowe lub barwniki.
Alternatywnie, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można również podawać w postaci czopków do podawania doodbytniczego. Preparaty takie wytwarza się przez zmieszanie związku według wynalazku z odpowiednim niedrażniącym nośnikiem, który jest stały w temperaturze pokojowej, ale ciekły w temperaturze odbytu, a zatem topi się w odbycie, uwalniając lek. Substancje takie obejmują, ale nie wyłącznie, masło kakaowe, wosk pszczeli i glikole polietylenowe.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można również podawać miejscowo, szczególnie, gdy żądane leczenie obejmuje obszary lub narządy łatwo dostępne przy takim podawaniu, takie jak oczy, skóra lub dolne odcinki przewodu pokarmowego. Odpowiednie kompozycje do podawania miejscowego na takie obszary lub narządy wytwarza się znanymi sposobami.
Kompozycje do podawania miejscowego do dolnych odcinków przewodu pokarmowego mogą mieć postać czopków lub odpowiednich wlewów doodbytniczych. Można również stosować plastry do podawania przezskórnego.
PL 198 352 B1
Do zastosowania miejscowego kompozycje farmaceutyczne sporządza się w postaci odpowiedniej maści zawierającej składnik czynny zawieszony lub rozpuszczony w jednym lub więcej niż jednym nośniku. Nośniki do podawania miejscowego związków według wynalazku obejmują, ale nie wyłącznie, olej mineralny, parafinę ciekłą, wazelinę białą, glikol propylenowy, polioksyetylen, polioksypropylen, wosk emulgujący i wodę. Alternatywnie, kompozycje farmaceutyczne mogą być w postaci lotionu lub kremu zawierającego składniki czynne zawieszone lub rozpuszczone w jednym lub więcej farmaceutycznie dopuszczalnym nośniku. Do odpowiednich nośników należą, ale nie wyłącznie, olej mineralny, monostearynian sorbitanu, polysorbate 60, woski oparte na estrach cetylowych, alkohol cetearylowy, 2-oktylododekanol, alkohol benzylowy i woda.
Do zastosowania w okulistyce, kompozycje farmaceutyczne sporządza się w postaci mikronizowanych zawiesin w izotonicznych, sterylnych roztworach soli fizjologicznej o ustalonym pH, lub, korzystnie w postaci roztworów w izotonicznych, sterylnych roztworach soli fizjologicznej o ustalonym pH, bez lub z substancjami konserwującymi, takimi jak chlorek benzalkoniowy. Alternatywnie, kompozycje do zastosowania w preparatach do oczu mogą mieć postać maści, takich jak wazelina.
Kompozycje farmaceutyczne według wynalazku można również podawać przez rozpylanie do nosa lub inhalację. Kompozycje takie wytwarza się technikami znanymi w farmacji i mogą być one sporządzone jako roztwory w soli fizjologicznej, z zastosowaniem alkoholu benzylowego lub innych odpowiednich środków konserwujących, promotorów absorpcji zwiększających biodostępność, fluorowęglowodorów i/lub innych znanych w technice środków solubilizujących lub dyspergujących.
Ilość inhibitora p38, którą można połączyć z nośnikami, uzyskując dawkę jednostkową, będzie zmieniać się w zależności od leczonego pacjenta i konkretnej drogi podawania. Korzystnie, kompozycję wytwarza się tak, aby można było podać pacjentowi inhibitor w dawce w zakresie 0,01 - 100 mg/kg wagi ciała/dzień.
Należy podkreślić, że konkretne dawki i sposób leczenia dla danego pacjenta zależeć będzie od wielu czynników, obejmujących działanie konkretnego stosowanego związku, wiek, ciężar ciała, ogólny stan zdrowia, płeć, dietę, czas podawania, szybkość wydalania, połączenie z innymi lekami, ocenę lekarza prowadzącego i zaawansowanie konkretnej leczonej choroby. Ilość inhibitora zależna również będzie od konkretnego związku zawartego w kompozycji.
Zgodnie z innym wykonaniem, inhibitory według wynalazku stosuje się do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia lub zapobiegania chorobom lub stanom chorobowym związanym z IL-1, IL-6, IL-8 lub TNF. Choroby takie opisano powyżej.
W zależności od konkretnego stanu związanego z p38, który ma być leczony lub któremu należy zapobiec, do kompozycji farmaceutycznej razem z inhibitorami według wynalazku można również włączyć dodatkowe leki, które zazwyczaj podaje się do leczenia lub zapobiegania takim chorobom. Przykładowo, w kompozycji farmaceutycznej do leczenia chorób proliferacyjnych z inhibitorami p38 według wynalazku można łączyć środki chemioterapeutyczne lub inne środki przeciwproliferacyjne.
W celu pełniejszego zrozumienia wynalazku zamieszczono następujące przykłady. Należy rozumieć, że przykłady podano w celach ilustracyjnych i w żaden sposób nie ograniczają one zakresu wynalazku.
P r z y k ł a d 1
Synteza inhibitora p38, związku 6
Do roztworu LDA (60 mmoli, 40 ml) w temperaturze -78°C wkroplono rozwór 2,6-dibromopirydyny (40 mmoli, 9,48 g) w THF (30 ml, suchy). Mieszaninę tę mieszano w temperaturze -78°C wkroplono rozwór 2,6-dibromopirydyny (40 mmoli, 9,48 g) w THF (30 ml, suchy). Mieszaninę tę mieszano w temperaturze -78°C przez 20 minut. Dodano mrówczanu etylu (400 mmoli, 32,3 ml) i mieszano dalej w temperaturze -78°C przez 2 godziny. Dodano nasyconego roztworu chlorku amonu (200 ml)
PL 198 352 B1 i mieszaninę ogrzano do temperatury pokojowej. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i warstwę organiczną przemyto wodnym roztworem kwasu i zasady. Warstwę organiczną wysuszono i odparowano pod próżnią. Otrzymany materiał oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, po czym eluowano 10% octanem etylu w n-heksanie i otrzymano związek 1 (32 mmole, 8,41 g) w postaci białej substancji stałej.
Roztwór związku 1 (13,08 mmoli, 3,1 g) i stężonego kwasu siarkowego (1 ml) w metanolu (50 ml) ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez noc. Mieszaninę reakcyjną oziębiono, zobojętniono wodnym roztworem zasady i ekstrahowano octanem etylu. Po wysuszeniu i odparowaniu warstwy organicznej otrzymano związek 2 (11,77 mmola, 3,63 g) w postaci oleju.
Do roztworu t-butanolanu (2,2 mmola, 2 ml) wkroplono roztwór 2,6-dichloroaniliny (1,0 mmola, 162 mg) w THF (2 ml, suchy). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 20 minut. Dodano roztworu związku 2 (1,0 mmola, 309 mg) w THF (5 ml) i mieszano dalej przez 3 godziny. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i warstwę organiczną przemyto wodnym roztworem kwasu i zasady. Warstwę organiczną wysuszono i odparowano pod próżnią. Otrzymany materiał oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, a następnie eluowano 5% acetonem w n-heksanie i otrzymano związek 3 (0,33 mmola, 128 mg) w postaci pomarańczowej substancji stałej.
Kwas o-toliloboronowy (0,34 mmola, 46 mg) i związek 3 (0,20 mmola, 80 mg) rozpuszczono w mieszaninie toluen/etanol (5/1). Do roztworu dodano węglanu talu (0,5, 235 mg) i tetrakis(trifenylofosfino)palladu (O) i zawiesinę ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 30 minut. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i warstwę organiczną przemyto wodnym roztworem kwasu i zasady. Warstwę organiczną wysuszono i odparowano pod próżnią. Otrzymany materiał
PL 198 352 B1 oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, a następnie eluowano 5% metanolem w chlorku metylenu i otrzymano związek 4 (0,17 mmola, 61 mg) w postaci białej substancji stałej.
Roztwór związku 4 (0,17 mmola, 61 mg) i izocyjanianu chlorosulfonylu (1 mmol, 141,5 mg) w chlorku metylenu (5 ml) mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i warstwę organiczną przemyto wodnym roztworem kwasu i zasady. Warstwę organiczną wysuszono i odparowano pod próżnią. Otrzymany materiał oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym, a następnie eluowano 5% acetonem w n-heksanie i otrzymano związek 5 (0,12 mmola, 46 mg) w postaci białej substancji stałej.
Do roztworu związku 5 (0,12 mmola, 46 mg) w metanolu (10 ml) dodano borowodorku sodu (1,0 mmola, 39,8 mg) i roztwór mieszano przez 15 minut. Reakcję przerwano dodatkiem wody. Następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczono octanem etylu i warstwę organiczną przemyto wodnym roztworem kwasu i zasady. Warstwę organiczną wysuszono i odparowano pod próżnią. Otrzymany materiał oczyszczono metodą szybkiej chromatografii na żelu krzemionkowym i uzyskano związek 6 (0,08 mmola, 36 mg) w postaci białej substancji stałej.
Dane widma dla związku 6: 1H-NMR (500 MHz, CDCh) δ 7,90 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,5-7,3 (m, 5H), 6,30 (d, 2H) , 4,5 (s, 2H) , 2,3 (s, 2H).
Synteza inhibitora p38, związku 7
Aminoalkohol (500 mg, 1,43 mmola), wytworzony w taki sam sposób jak związek 4, rozpuszczono w dichlorometanie. Dodano trietyloaminy (433 mg, 4,29 mmola), a następnie chlorku acetylu
PL 198 352 B1 (168 mg, 2,15 mmola). Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę, przelano do wody i ekstrahowano dichlorometanem. Ekstrakt organiczny odparowano pod próżnią i pozostałość rozpuszczono w 10,0 ml toluenu. Dodano 20% roztworu fosgenu w toluenie (5,0 ml) i roztwór ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny. Roztwór oziębiono i dodano 5,0 ml stężonego wodorotlenku amonu, po czym wytrąciła się biała substancja stała. Mieszaninę przelano do wody i ekstrahowano toluenem. Ekstrakt organiczny wysuszono (MgSO4) i odparowano pod próżnią, uzyskując 205 mg mocznika-octanu 7 w postaci białej substancji stałej.
Dane widm dla związku 7: 1H-NMR (500 MHz, CDCla) δ 7,80 (d, 1H), 7,62-7,50 (m, 2H), 7,25-7,0 (m, 5H), 6,59 (d, 1H), 5,1 (s, 2H), 2,12 (s, 3H). HRMS wykazała MH+ 434,2 jako główny pik.
Synteza inhibitora p38, związku 8
Mocznik-alkohol (548 mg, 1,4 mmola), wytworzony w taki sam sposób jak związek 6, rozpuszczono w 5,0 ml toluenu, dodano 20% roztworu fosgenu w toluenie (5,0 ml) i roztwór ogrzewano do wrzenia pod chłodnicą zwrotną przez 2 godziny. Roztwór oziębiono i dodano 5,0 ml stężonego wodorotlenku amonu, po czym wytrąciła się biała substancja stała. Mieszaninę przelano do wody i ekstrahowano toluenem. Ekstrakt organiczny wysuszono (MgSO4) i odparowano pod próżnią, uzyskując 284 mg karbaminianu 8 w postaci białej substancji stałej.
Dane widm dla związku 8: 1H-NMR (500 MHz, CDCfe) δ 7,77 (d, 1H), 7,55-7,45 (m, 2H), 7,15-6,95 (m, 5H), 6,50 (d, 1H), 5,40 (szer. s, 2H), 5,00 (s, 2H). HRMS wykazała MH+ 435,1 jako główny pik.
P r z y k ł a d 2
Synteza inhibitora p38, związku 16
Jeden równoważnik kwasu 2,5-dichloropirydyno-4-karboksylowego rozpuszczono w THF. Roztwór oziębiono do temperatury 0°C i dodano kompleksu boran-sulfid dimetylu. Roztwór mieszano w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Mieszaninę przelano do wody i ekstrahowano eterem dietylowym.
Ekstrakt eterowy wysuszono i odparowano pod próżnią, uzyskując związek 9 z wydajnością 93%.
Jeden równoważnik związku 9 rozpuszczono w chlorku metylenu. Dodano jeden równoważnik eteru metylowo-chlorometylowego, a następnie jeden równoważnik etylodiizopropyloaminy. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez kilka godzin, przelano do wody i ekstrahowaPL 198 352 B1 no niemieszającym się z wodą rozpuszczalnikiem. Ekstrakt wysuszono i odparowano pod próżnią, uzyskując związek 10 z wydajnością 86%.
Do roztworu jednego równoważnika 2,6-dichlorofenyloacetonitrylu w THF w temperaturze pokojowej dodano jeden równoważnik t-butanolanu potasu. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 minut, po czym dodano dichloropirydyny 10 w THF. Całość mieszano przez 1,5 godziny, a następnie mieszaninę przelano do wodnego roztworu chlorku amonu i ekstrahowano octanem etylu. Ekstrakt wysuszono i odparowano pod próżnią. Pozostałość oczyszczono metodą szybkiej chromatografii i otrzymano związek 11 z wydajnością 79% w postaci białego proszku.
12
Acetal 11 zmieszano ze stężonym kwasem solnym i całość mieszano przez kilka godzin. Mieszaninę ekstrahowano niemieszającym się z wodą rozpuszczalnikiem organicznym. Ekstrakt przemyto nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, wysuszono i odparowano pod próżnią, uzyskując związek 12.
Nitryl 12 zmieszano ze stężonym kwasem siarkowym i ogrzewano do temperatury 100°C przez kilka minut. Mieszaninę oziębiono, przelano do lodu i przesączono, uzyskując związek 13.
PL 198 352 B1
Jeden równoważnik chloropirydyny 13 rozpuszczono w 1,2-dimetoksyetanie. Dodano jeden równoważnik kwasu 3-chloro-2-metylofenyloboronowego. Dodano jeden równoważnik roztworu węglanu sodu w wodzie i katalityczną ilość tetrakis(trifenylofosfino)palladu (O). Mieszaninę ogrzewano do temperatury 80°C przez kilka godzin. Mieszaninę przelano do wody i ekstrahowano niemieszającym się z wodą rozpuszczalnikiem organicznym. Ekstrakt wysuszono, odparowano i oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, uzyskując związek 14.
Jeden równoważnik alkoholu 14 rozpuszczono w THF. Roztwór oziębiono do temperatury 0°C i dodano jeden równoważnik chlorku metanosulfonylu, a następnie jeden równoważnik trietyloaminy. Roztwór mieszano przez kilka godzin, przelano do wody i ekstrahowano niemieszającym się z wodą rozpuszczalnikiem. Ekstrakt wysuszono i odparowano pod próżnią, uzyskując surowy mesylan 15.
Jeden równoważnik estru metanosulfonylowego 15 rozpuszczono w THF. Roztwór oziębiono do temperatury 0°C i dodano jeden równoważnik N-etylopiperazyny, a następnie jeden równoważnik trietyloaminy. Roztwór mieszano przez kilka godzin, przelano do wody i ekstrahowano niemieszającym się z wodą rozpuszczalnikiem. Ekstrakt wysuszono, odparowano i oczyszczono metodą szybkiej chromatografii, uzyskując czystą aminę 16.
Dane widm dla związku 16: 1H-NMR (500 MHz, CDCL) δ 9,85 (szer.s, 1H), 7,47 (dd, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,27 (m, 5H), 6,75 (s, 1H), 5,95 (s, 1H), 5,7 (szer. s, 1H), 3,5 (ABq, 2H), 2,5-2,3 (m, 10H), 2,3 (s, 3H), 1,2 (t, 3H).
P r z y k ł a d 3
Klonowanie kinazy p38 w komórkach owadzich
Zidentyfikowano dwa warianty ludzkiej kinazy p38, CSBP1 i CSBP2. Do amplifikowania regionu kodującego cDNA CSBP2 stosowano swoiste startery oligonukleotydowe z użyciem jako matrycy biblioteki komórek HeLa (Stratagene). Produkt łańcuchowej reakcji polimerazy wklonowano do wektora pET-15b (Novagen). Skonstruowano bakulowirusowy wektor przenoszący, pVL-(His) 6-p38, przez subklonowanie fragmentu XbaI-BamHI z pET15b-(His) 6-p38 do komplementarnych miejsc w plazmidzie pVL1392 (Pharmingen).
Plazmid pVL-(His) 6-38 kieruje syntezą rekombinantowego białka składającego się z peptydu z 23 reszt (MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMLE, gdzie LVPRGS oznacza miejsce rozszczepienia trombiny) połączonych w ramce z N-końcem p38, co potwierdzono przez sekwencjonowanie DNA i sekwencjonowanie N-końca wyrażanego białka.
Monowarstwową hodowlę komórek owadzich Spodoptera frugiperda (Sf9) (ATCC) utrzymywano w pożywce TNM-FH (Gibco BRL) wzbogaconej 10% płodową surowicą bydlęcą w T-kolbie w temperaturze 27°C. Komórki Sf9 w fazie logarytmicznej kotransfekowano liniowym wirusowym DNA wirusa jądrowej poliedrozy Autographa califonica (Pharmigen) i wektorem przenoszącym pVL-(His) 6-p38
PL 198 352 B1 stosując Lipofectin (Invitrogen). Poszczególne rekombinantowe klony bakulowirusa oczyszczono w próbie łysinek stosując 1% niskotopliwą agarozę.
P r z y k ł a d 4
Ekspresja i oczyszczanie rekombinantowej kinazy p38
Komórki Trichoplusia ni (Tn-368) High-Five™ (Invitrogen) hodowano w zawiesinie w pożywce Excel-405 wolnej od białka (JRH Bioscience) w kolbie do wytrząsarki w temperaturze 27°C. Przy gęstości 1,5 x 106 komórek/ml komórki zakażono rekombinantowym bakulowirusem, jak opisany powyżej, przy wielokrotności zakażenia 5. Stopień ekspresji rekombinantowego p38 monitorowano przez immunoblotting, stosując królicze przeciwciało przeciw-p38 (Santa Gruz Biotechnology). Masę komórkową zebrano po 72 godzinach od zakażenia, w którym to czasie stopień ekspresji p38 osiągnął swoją maksymalną wartość.
Zamrożoną pastę komórkową z komórek wyrażających p38 znakowaną (His)6 rozmrożono w 5 objętościach Buforu A (50 mM NaH2PO4, pH 8, 200 mM NaCI, 2 mM β-merkaptoetanol, 10% gliceryna i 0,2 mM PMSF). Po mechanicznym rozerwaniu komórek w mikrofluidyzerze, lizat odwirowano przy 30 000 x g przez 30 minut. Supernatant inkubowano okresowo przez 3-5 godzin w temperaturze 4°C, stosując żywicę z powinowactwem do metalu Talon™ (Clontech) przy stosunku 1 ml żywicy na 2-4 mg oczekiwanego p38. Żywicę osadzono przez odwirowanie przy 500 x g przez 5 minut i delikatnie przemywano okresowo Buforem A. Żywice zawieszono i przelano do kolumny (ok. 2,5 x 5,0 m) i przemyto mieszaniną Bufor A + 5 mM imidazolu.
(His)6-p38 eluowano Buforem A + 100 mM imidazolu, a następnie dializowano przez noc w temperaturze 4°C do 2 litrów Buforu B (50 mM HEPES, pH 7,5, 25 mM β-glicerofosforan, 5% gliceryna, 2 mM DTT). Marker His6 usunięto przez dodanie 1,5 jednostki trombiny (Calbiochem) na mg p38 i inkubowanie w temperaturze 20°C przez 2-3 godziny. Reakcję z trombiną przerwano dodatkiem 0,2 mM PMSF i następnie całą próbkę wprowadzono do 2 ml kolumny z benzamidynoagarozą (American International Chemical).
Przepływ przez frakcje wprowadzono bezpośrednio do kolumny Q-Sepharose o wymiarach 2,6 x 5,0 (Pharmacia) zrównoważonej uprzednio Buforem B + 0,2 mM PMSF. p38 eluowano liniowym gradientem od 20 objętości kolumny do 0,6 M NaCl w Buforze B. Pik wyeluowanego białka zebrano i dializowano przez noc w temperaturze 4°C do Buforu C (50 mM HEPES, pH 7,5, 5% gliceryna, 50 mM NaCl, 2 mM DTT, 0,2 mM PBSF).
Dializowane białko zatężono w Centiprep (Amicon) do objętości 3-4 ml i wprowadzono do kolumny Sephacryl S-100HR (Pharmacia) o wymiarach 2,6 x 100 cm. Białko eluowano przy szybkości przepływu 35 ml/godz. Zebrano główny pik, doprowadzono do 20 mM DTT, zatężono do 10-80 mg/ml i zamrożono w porcjach w temperaturze -70°C lub stosowano bezpośrednio.
P r z y k ł a d 5
Aktywowanie p38 p38 aktywowano przez połączenie 0,5 mg/ml p38 z 0,005 mg/ml DD-double mutant MKK6 w Buforze B + 10 mM MgCl2, 2 mM AT, 0,2 mM Na2VO4 przez 30 minut w temperaturze 20°C. Następnie mieszaninę do aktywacji wprowadzono do kolumny MonoQ o wymiarach 1,0 x 10 cm (Pharmacia) i eluowano liniowym gradientem od 20 objętości kolumny do 1,0 M NaCl w Buforze B. Aktywowane p38 wyeluowano po ADP i ATP. Pik aktywowanego p38 zebrano i dializowano do Buforu B + 0,2 mM Na2VO4 w celu usunięcia NaCl. Dializowane białko doprowadzono do 1,1 M fosforanu potasu przez dodanie 0,4M roztworu podstawowego i załadowano do kolumny HIC (Rainin Hydropore) o wymiarach 1,0 x 10 cm, zrównoważonej uprzednio Buforem D (10% gliceryna, 20 mM β-glicerofosforan, 2,0 mM DTT) + 1,1M K2HPO4. Białko eluowano liniowym gradientem od 20 objętości kolumny do Buforu D + 50 mM K2HPO4. Jako główny pik wyeluowano podwójnie fosforylowane p38 i zebrano do dializy do Buforu B + 0,2 mM Na2VO4. Aktywowane p38 przechowywano w temperaturze -70°C.
P r z y k ł a d 6
Badania na hamowanie p38
A. Zahamowanie fosforylacji peptydu receptora EGF
Badanie prowadzono w obecności 10 mM MgCh, 25 mM β-glicerofosforanu, 10% gliceryny i 100 mM HEPES przy pH 7,6. W celu typowego określenie IC50 przygotowano roztwór podstawowy zawierający wszystkie powyższe składniki i aktywowane p38 (5 nM). Roztwór podstawowy rozporcjowano do fiolek. Do każdej fiolki wprowadzono określona objętość DMSO lub inhibitora w DMSO (końcowe stężenie DMSO w reakcji wynosiło 5%), zmieszano i inkubowano przez 15 minut w temperaturze pokojowej. Do każdej fiolki dodano peptyd receptora EGF, KRELVEPLTPSGEAPNQALLR, akcep20
PL 198 352 B1 tor fosforytowy w reakcji kinazy katalizowanej p38 (1) do końcowego stężenia 200 μΜ. Reakcję kinazy zapoczątkowano dodatkiem ATP (100 μM) i fiolki inkubowano w temperaturze 30°C. Po 30 minutach reakcję przerwano dodatkiem równych objętości 10% kwasu trifluorooctowego (TFA).
Określono ilość fosforylowanego peptydu metodą analizy HPLC. Fosforylowany peptyd oddzielono od niefosforylowanego peptydu na kolumnie z odwróconymi fazami (Deltapak, 5 μίτι, C18 100D, część nr 011795) z binarnym gradientem wody i acetonitrylu, z dodatkiem do każdego z nich 0,1% TFA. IC50 (stężenie inhibitora dające 50% zahamowania) określono za pomocą wykresu % aktywności pozostającej w funkcji stężenia inhibitora.
B. Zahamowanie aktywności ATPazy
Badanie prowadzono w obecności 10 mM MgCl2, 25 mM β-glicerofosforanu, 10% gliceryny i 10 mM buforu HEPES przy pH 7,6. W celu typowego określenia wartości Ki, wyznaczono wartość Km dla ATP w aktywności ATPazy w reakcji aktywowanego p38 przy nieobecności inhibitora i w obecności dwóch stężeń inhibitora. Przygotowano roztwór podstawowy zawierający wszystkie powyższe składniki i aktywowane p38 (60 nM). Roztwór podstawowy rozporcjowano do fiolek. Do każdej fiolki wprowadzono określoną objętość DMSO lub inhibitora w DMSO (końcowe stężenie DMSO w reakcji wynosiło 2,5%), zmieszano i inkubowano przez 15 minut w temperaturze pokojowej. Reakcję zapoczątkowano przez dodanie różnych stężeń ATP, a następnie inkubowano w temperaturze 30°C. Po 30 minutach reakcję przerwano dodatkiem 50 μl EDTA (końcowe stężenie 0,1 M), pH 8,0. Ilość produktu aktywności ATPazy p38, ADP, określono metodą analizy HPLC.
Oddzielenie ADP od ATP prowadzono na kolumnie z odwróconymi fazami (Supelcosil, LC-18, 3 urn, część nr 5-8985), stosując binarny gradient rozpuszczalników o następującym składzie: Rozpuszczalnik A - 0,1 M bufor fosforanowy zawierający 0,8 mM wodorosiarczanu tetrabutyloamoniowego (Sigma Chemical Co., nr katalogowy T-7158), Rozpuszczalnik B - Rozpuszczalnik A z 30% metanolu.
Wartości Ki wyznaczono na podstawie danych dotyczących szybkości w funkcji stężenia inhibitora i ATP.
Inhibitory p38 według wynalazku hamują aktywność ATPazy p38.
C. Zahamowanie IL-1, TNF, IL-6 i IL-8
Wytwarzanie w PBMC stymulowanych LPS
Inhibitory rozcieńczano seryjnie w DMS od stężenia podstawowego 20 mM. Przygotowano co najmniej 6 różnych rozcieńczeń. Następnie przygotowano 4 x roztwory inhibitor przez dodanie 4 ul rozcieńczenia inhibitora do 1 ml pożywki RPMI 1640/10% płodową surowicą bydlęcą. Roztwory podstawowe inhibitora 4 x zawierały inhibitor w stężeniach 80 uM, 32 uM, 12,8 uM, 5,12 uM 2,048 uM, 0,819 uM, 0,328 uM, 0,131 uM, 0,052 uM 0,021 uM itd. Przed użyciem roztwory podstawowe inhibitora 4x inhibitor ogrzewano w temperaturze 37°C.
Komórki kożuszka leukocytarnego świeżej krwi ludzkiej oddzielono od innych komórek, stosując urządzenie Vacutainer CPT z firmy Becton & Dickinson (zawierające 4 ml krwi i DBBS bez Mg2+/Ca2+ w ilości wystarczającej do wypełnienia rurki) przez odwirowanie przy 1500 x g przez 15 minut. Jednojądrzaste komórki krwi obwodowej (PBMC) umieszczone na górze gradientu w urządzeniu Vacutainer usunięto i przemyto dwa razy pożywkę RPMI1640/10% płodowa surowica bydlęca. PBMC zebrano przez odwirowanie przy 500 x g przez 10 minut. Łączną ilość komórek określono stosując urządzenie Neubauer Cell Chamber i stężenie komórek doprowadzono do wartości 4,8 x 106 komórek/ml w pożywce do hodowli (RPMI1640 uzupełniona 10% płodową surowicą bydlęcą).
Alternatywnie, bezpośrednio w badaniu stosowano pełną krew zawierającą antykoagulant.
W każdej studzience 96-studzienkowej płytki do hodowli komórek umieszczono 100 ul zawiesiny komórek lub całą krew. Następnie do komórek dodano 50 ul roztworu inhibitora 4x. Na koniec dodano 50 ul roztworu lipopolisacharydu (LPS) (16 ng/ml w pożywce do hodowli komórek) do końcowego stężenia 4 ng/ml LPS w badaniu. Całkowitą objętość nośnika w badaniu kontrolnym doprowadzono również do 200 ul dodatkiem 50 ul pożywki do hodowli komórek. Następnie komórki PBMC lub pełną krew inkubowano przez noc (przez 12-15 godzin) w temperaturze 37°C/5% CO2 w wilgotnej atmosferze.
Następnego dnia komórki wymieszano w mieszarce przez 3-5 minut, po czym odwirowano przy 500 x g przez 5 minut. Supernatanty hodowli komórek zebrano i poddano analizie metodą ELISA na zawartość IL-1b (zestaw R & D Systems kits, #DBL50), TNF-α (BioSource, #KHC3012), IL-6 (Endogen, #EH2-IL6) i IL-8 (Endogen, #EH2-IL8), zgodnie z instrukcjami producenta. Dane badania ELISA stosowano do wykreślenia krzywych dawka-odpowiedź, z których wyprowadzono wartości IC50.
Wyniki testu na kinazę („kinaza, podrozdział A, powyżej), IL-1, TNF i IL-6 w całej krwi („WB) dla różnych inhibitorów p38 według wynalazku zestawiono w poniższej tabeli 7:
PL 198 352 B1
T a b e l a 7
Związek Ciężar cząstecz- kowy Kinaza IC50 (pM) Komórki IL-1 IC50 (ąM) Komórki TNF IC50 (ąM) IL-1 WB IC50 (ąM) TNF WB IC50 (ąM) IL-6 WB IC50 (ąM)
17 402,28 0,056 0,021 0,14 0,420 0,064 0,250
18 436,32 0,002 0,020 0,05 0,118 0,055 0,180
19 387,36 0,027 0,027 0,01 0,057 0,090 0,076
Inne inhibitory p38 według wynalazku również hamują fosforylowanie peptydu receptora EGF oraz wytwarzanie IL-1, TNF i IL-6, a także IL-8 w PBMS stymulowanych LPS lub w całej krwi.
D. Zahamowanie IL-6 i IL-8
Wytwarzanie w PBMC stymulowanych IL-1
Badanie prowadzono na komórkach PBMC, sposobem dokładnie opisanym powyżej, z tym wyjątkiem, że zamiast podstawowego roztworu roboczego (LPS) dodano 50 μΙ roztworu roboczego IL-1bb (2 ng/ml w pożywce do hodowli komórek).
Supernatanty z hodowli komórek zebrano, jak opisano powyżej, i poddano analizie metodą ELISA na poziomy IL-6 (Endogen, #EH2-IL6) i IL-8 (Endogen, #EH2-IL8), zgodnie z instrukcjami producenta. Dane z badania ELISA służyły do określenia krzywych dawka-odpowiedź, z których wyprowadzono wartości IC50.
E. Zahamowanie endonadtlenku prossaglandyny wywołanej LPS (PGH-2 lub COX-2).
Indukcja w PBMC
Jednojądrzaste komórki ludzkiej krwi obwodowej (PBMC) oddzielono od świeżego kożuszka leukocytarnego przez odwirowanie w urządzeniu Vacutainer CPT (Becton & Dickinson). Na 6-studzienkowej płytce do hodowli tkanek, zawierającej RPMI 1640 wzbogaconą 10% płodową surowicą bydlęcą, 50 U/ml penicyliny, 50 μg/ml streptomycyny i 2 mM L-glutaminy wysiano 15 x 106 komórek. Dodano związku 6 (powyżej) w stężeniach 0,2, 2,0 i końcowym 20 μM w DMSO. Następnie dodano LPS przy końcowym stężeniu 4 mg/ml w celu zaindukowania ekspresji enzymu. Końcowa objętość hodowli wynosiła 10 ml/studzienkę.
Po całonocnej inkubacji w warunkach 37°C i 5% CO2, komórki zebrano przez zdrapanie i odwirowanie, następnie supernatant usunięto i komórki dwukrotnie przemyto oziębioną lodem DPBS (sól fizjologiczna buforowana fosforanem Dulbecco's, BioWhittaker). Komórki poddano lizie na lodzie przez 10 minut w 50 μl zimnego buforu do lizy (20 mM Tris-HCl, pH 7,2, 150 mM NaCl, 1% Triton-X-100, 1% kwas dezoksycholowy, 0,1% SDS, 1 mM EDTA, 2% aprotynina (Sigma), 10 μg/ml pepstatyna, 10 μg/ml leupeptyna, 2 mM PMSF, 1 mM benzamidyna, 1 mM DTT), zawierającym 1 μl Benzonazę (DNAza z firmy Merck). Stężenie białka w każdej próbce określano stosując test BCA (Pierce) i bydlęcą albuminę surowiczą jako wzorzec. Następnie stężenie białka w każdej próbce doprowadzono do 1 mg/ml dodatkiem zimnego buforu do lizy. Do 100 μl lizatu dodano równą objętość buforu 2 x SDS PAGE i próbkę gotowano przez 5 minut. Białka (30 μg/pasmo) pofrakcjonowano pod względem wielkości na 4-20% gradientach żeli SDS PAGE (Novex) i przeniesiono następnie na błonę nitrocelulozową za pomocą środków do elektroforezy na 2 godziny w 100 mA buforu Towbin (25 mM Tris, 192 mM glicyny) zawierającym 20% metanolu. Błonę poddano obróbce wstępnej przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej buforem blokującym (5% nietłustego suchego mleka w DPBS uzupełnionej 0,1% Tween-20) i przemyto 3 razy w DPBS/0,1% Tween-20. Błonę inkubowano w temperaturze 4°C z 1:250 rozcieńczeniem przeciwciała monoklonalnego przeciw-COX-2 (Transduction Laboratories) w buforze blokującym. Po trzykrotnym przemyciu DPBS/0,1% Tween-2, błonę inkubowano z 1:1000 rozcieńczeniem peroksydazy chrzanowej sprzężonej z owczą surowicą odpornościową przeciw mysim Ig (Amersham) w buforze blokującym przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej. Następnie błonę przemyto 3 razy w DPBS/0,1% Tween-20 i do określenia poziomów ekspresji COX-2 stosowano układ detekcji ECL (SuperSignal™ CL-HRP Substrate System, Pierce).
Aczkolwiek zaprezentowano tu wiele wykonań niniejszego wynalazku, oczywiste jest, że tę podstawową konstrukcję można zmieniać, uzyskując inne wykonania z zastosowaniem sposobów według wynalazku.

Claims (27)

  1. Zastrzeżenia patentowe
    1. Heterc>cykliczneirihibitc>ryp38 o wzorze;
    w którpm każdp Qi i Q2 oznacza fenpl;
    Qi jest pzdstawiznp 2 podstawnikami, z którpcb każdp jest niezależnie wpbranp z grupp obejmującej cblzr i fluor;
    Q2 jest podstawionp 1 lub 2 podstawnikami, z którpcb każdp jest niezależnie wpbranp z grupp obejmującej fluor i metpl;
    W jest wpbranp z grupp obejmującej -NH2; -ΝΗΟ(Θ)ΝΗ2; -NH2CH2C(O)NH2; -C(O)Ne2; -CH2OH; -Ce2N(Ce8)2; -Ce2Ce2Oe; -Ce2Ce2C(O)Ne2; -Ce2CH2C(O)OCH8; -CH2OC(O)CH8; -CH2OC(O)NH2; -CH2OC(O)-piperazpna; -CH2OC(O)Ne-pirpdpna; -Ce2OC(O)CH2Ce2-piperazpna; -CH2-piperazpna; i -CH2CH2OC(O)NH2;
    R oznacza wodór;
    Y oznacza C;
    Z oznacza N;
    U oznacza wodór; oraz
    V oznacza -C(O)NH2.
  2. 2. Związek według zastrz. 1, w którpm co najmniej jeden z podstawników Qi jest w pozpcji orto.
    8. Związek według zastrz. 2, w którpm obpdwa podstawniki w Qi są w pozpcji orto.
  3. 4. Związek według zastrz. 2, w którpm Qi jest wpbranp z grupp obejmującej:
  4. 5. Związzk wweługzzstrz^, w któiórm Q1 jest wwpbany z grupp o0eCmującei2,6-difiuorofecyl i 2,6-dicblorofenpl.
  5. 6. Związek według zastrz. i, w którpm Q2 jest wpbranp z grupp obejmującej:
  6. 7. Związek według zastrz. 6, w którpm Q2 jest wpbranp z grupp obejmującej 8,4-dimetplofenpl, 8-fluorofenpl, 2-metplofenpl, 4-fluorofenpl, 2-metplo-4-fluorofenpl i 2,4-difluorofenpl.
    0. Związek według zastrz. i, którp jest wpbranp z grupp obejmującej następujące związki:
    PL 198 352 B1 Nrzw, Struktura Nr zw. Struktura c 9 'NH2 ęC p, Cl 150 ΗΟχ 9 A 151 H ζύ Co iA' F o Ok A AA . A n NH2 f H NH Cc Ϊ ć 152 i 160 An f II 1 A A Αγ-Α HO -A-f -F -F O [ H kxJx Jk kJ k Jk τ A f ih2 t F y χ 156 I 164 pY F k -A O YA HO J 1 A^F A Λ kXF 9 A AN nh2 9 F A N^NH2 A 163 F 162 ySiA HO\z L A HCO^ J ku-.
    F F 0 U 0 -A OANHf T 'nh2 F A i- f F 165 lf F 158 1Τ11 O pA pA <A AA-F A «σ Tn Ί A u F° Y ψΐ nh2 p''U-i.
    F A F F Λ f 159 ρΛ ts 161 yY O A Ηζΐγ: 0 - kAF 9 'f 0 A NH, QX, F I An F An f 166 Ak 167 pA ĆlF Cu AA, AA J
    PL 198 352 B1
  7. 9. Związek według z astrz. 1 , któió/rn jest związek o wzorze
  8. 10. Zwiezek według zastrz. 1 , któimjest zwiezek o wzorze w którym X jsst wybrany spośród NH2 i Ν(ΟΗβ)2.
  9. 11. Związak według zastrz:. 1 , któó/m jest związak o wzarza w którym X jkst eybrsny spośród OH, NH2 i Ν(ΟΗβ)2.
  10. 12. Związak wekług zastrZa 1 , któr/rn jekt związak o wearza w którym X jkst eybrsny a grupy zbsjmgjącsj OH, NH2 i Ν(ΟΗβ)2
    PL 198 352 B1
  11. 13. Związek według z astrz.1 , którym jest związekowzorze w którym X jest wybrany o grupy obejmującej OH, ο 0 \Λνη2 0„ f
  12. 14. Związek według z ostrz.1 , kktr/yi jest związekowzorze w którym X = H, -C(O)CH3, slbo -C(O)NH2.
  13. 15. Wwiąesk według esstre. 1, którym jest ewiąesk o weores w którym X =
  14. 16. Wwiąeek według esstre. 1, którym jest ewiąeek wybrany e grupy obejmującej
    PL 198 352 B1
  15. 17. Kompozycja farmaceutyczna, zawierająca substancję czynną i farmaceutycznie dopuszczalny nośnik, znamienna tym, że jako substancję czynną zawiera związek określony w zastrz. 1-16 w ilości skutecznej do hamowania p38.
  16. 18. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1-16 do wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia lub zapobiegania chorobom zapalnym, chorobom autoimmunizacyjnym, chorobom zwyrodnieniowym kości, chorobom proliferacyjnym, chorobom zakaźnym, chorobom wirusowym, chorobom neurodegeneracyjnym, alergiom, reperfuzji/niedokrwieniu przy udarze, niedokrwieniu mięśnia sercowego, niedokrwieniu nerek, atakom serca, chorobom naczyniotwórczym, niedotlenieniu narządów, rozrostowi naczyń, hipertrofii serca, agregacji płytek związanej z trombiną oraz stanom związanym z syntazą-2 endonadtlenku prostaglandyny.
  17. 19. Zastosowanie wedługzastrz. 18, znamienne tym, że choroba zapalnaj est vw/branazgrupy obejmującej ostre zapalenie trzustki, przewlekłe zapalenie trzustki, astmę, alergie i zespół niewydolności oddechowej u dorosłych.
  18. 20. Zastosowanie według zasfrz. 18, znamienne tym, że choroba jess wybrana z grupy obejmującej zapalenie kłębuszków nerkowych, reumatoidalne zapalenie stawów, układowy toczeń rumieniowaty, twardzinę skóry, przewlekłe zapalenie tarczycy, chorobę Gravesa, autoimmunizacyjne zapalenie żołądka, cukrzycę, autoimmunizacyjną białaczkę hemolityczną, neutropenię autoimmunizacyjną, trombocytopenię, atopowe zapalenie skóry, przewlekłe aktywne zapalenie wątroby, miastenia gravis, stwardnienie rozsiane, chorobę zapalną jelita grubego, wrzodziejące zapalenie okrężnicy, chorobę Crohna, łuszczycę i chorobę przeszczep przeciwko gospodarzowi.
  19. 21. Zastosowanie według zastrz. 18, znamienne tym, że choroba zwyrodnieniowa kości jest wybrana z grupy obejmującej zapalenie kostno-stawowe, osteoporozę i choroby kości związane ze szpiczakiem mnogim.
  20. 22. Zastosowanie według zasltrz. 18, znamienne tym, że choroba prollferacyjna jess wybrana z grupy obejmującej ostrą białaczkę pochodzenia szpikowego, przewlekłą białaczkę pochodzenia szpikowego, czerniaka przerzutowego, mięsaka Kaposiego oraz szpiczaka mnogiego.
  21. 23. Zastosowanie według zasfrz. 18, zn^mi^nn^ tym, że choroba zakaźna 1 ess iw<bbana z grupy obejmującej posocznicę, wstrząs septyczny i zakażenie pałeczkami Shigella.
  22. 24. Zastosowanie według zasfrz. 18, znamienne tym, że choroba wirusowa j ess iiw/branaz grupy obejmującej ostre zapalenie wątroby, zakażenia HIV i zapalenie spojówek wywołane przez wirus cytomegalii.
  23. 25. Zastosowanie według zastrz. W, znamienne tym, że choroba neurodegeneracyjna jest wybrana z grupy obejmującej chorobę Alzheimera, chorobę Parkinsona, niedokrwienie mózgu i chorobę neurodegeneracyjną spowodowaną uszkodzeniami i urazami.
    PL 198 352 B1
  24. 26. Zastosowanie według zastrz. 18, znamienne tym, że wymienione związki stosuje się do wytwarzania kompozycji do leczenia lub zapobiegania niedokrwieniu/reperfuzji przy udarze lub niedokrwieniu mięśnia sercowego, niedokrwieniu nerek, atakom serca, niedotlenieniu narządów lub agregacji płytek związanej z trombiną.
  25. 27. Zastosowane według zastrz. 18, znamienne tym, że wymienione związki stosie się do wytwarzania kompozycji do leczenia lub zapobiegania stanom związanym z syntazą-2 endonadtlenku prostaglandyny wybranym z grupy obejmującej obrzęk, gorączkę, analgezję lub ból.
  26. 28. Zastosowane według zastrz. 27, znamienne tym, że wymienione związki stosie się do wytwarzania kompozycji do leczenia lub zapobiegania bólom nerwowo-mięśniowym, bólom głowy, bólom związanym z nowotworami, bólom zębów oraz bólom stawów.
  27. 29. Zastosowane według zastrz. 18, znamienne tym, że wymienione związki stosie się do wytwarzania kompozycji do leczenia lub zapobiegania chorobom naczyniotwórczym wybranym z grupy obejmującej guzy lite, zapalenie naczyń oka, naczyniaki dziecięce.
PL344046A 1998-05-11 1999-05-11 Heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38 PL198352B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8505398P 1998-05-11 1998-05-11
US12762699P 1999-04-01 1999-04-01
US12909999P 1999-04-13 1999-04-13
PCT/US1999/010291 WO1999058502A1 (en) 1998-05-11 1999-05-11 Heterocyclic inhibitors of p38

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL344046A1 PL344046A1 (en) 2001-09-24
PL198352B1 true PL198352B1 (pl) 2008-06-30

Family

ID=27375001

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL344046A PL198352B1 (pl) 1998-05-11 1999-05-11 Heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38

Country Status (30)

Country Link
US (4) US6632945B2 (pl)
EP (3) EP1077943B1 (pl)
JP (2) JP4704560B2 (pl)
KR (1) KR100696219B1 (pl)
CN (1) CN1306512A (pl)
AP (1) AP2000001996A0 (pl)
AT (1) ATE417828T1 (pl)
AU (1) AU764047B2 (pl)
BG (1) BG65025B1 (pl)
BR (1) BR9911786A (pl)
CA (1) CA2331460C (pl)
CZ (1) CZ300702B6 (pl)
DE (1) DE69940115D1 (pl)
DK (1) DK1077943T3 (pl)
EA (1) EA200001176A1 (pl)
EE (1) EE200000610A (pl)
ES (1) ES2318893T3 (pl)
GE (1) GEP20032954B (pl)
HU (1) HUP0105174A3 (pl)
IL (2) IL139479A0 (pl)
IS (1) IS5711A (pl)
MY (1) MY132496A (pl)
NO (1) NO319755B1 (pl)
NZ (1) NZ508653A (pl)
PL (1) PL198352B1 (pl)
PT (1) PT1077943E (pl)
SK (1) SK286689B6 (pl)
TW (1) TWI249527B (pl)
UA (1) UA74325C2 (pl)
WO (1) WO1999058502A1 (pl)

Families Citing this family (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6608060B1 (en) 1996-12-18 2003-08-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
EP1023066A4 (en) 1997-06-13 2001-05-23 Smithkline Beecham Corp NEW PYRAZOLE AND PYRAZOLINE SUBSTITUTED COMPOUND
AU736746B2 (en) 1997-09-10 2001-08-02 Dainippon Ink And Chemicals Inc. 2,6-dichloro-4-pyridinemethanol derivatives and agricultural chemicals
US6858617B2 (en) 1998-05-26 2005-02-22 Smithkline Beecham Corporation Substituted imidazole compounds
ATE258055T1 (de) 1998-11-04 2004-02-15 Smithkline Beecham Corp Pyridin-4-yl oder pyrimidin-4-yl substituierte pyrazine
US6469018B1 (en) 1999-01-08 2002-10-22 Smithkline Beecham Corporation Compounds
ATE538794T1 (de) 1999-01-13 2012-01-15 Bayer Healthcare Llc Gamma carboxyarylsubstituierte diphenylharnstoffverbindungen als p38 kinasehemmer
US8124630B2 (en) 1999-01-13 2012-02-28 Bayer Healthcare Llc ω-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors
US7125875B2 (en) 1999-04-15 2006-10-24 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic protein tyrosine kinase inhibitors
PT1169038E (pt) 1999-04-15 2012-10-26 Bristol Myers Squibb Co Inibidores cíclicos da proteína tirosina cinase
AU5316900A (en) * 1999-06-03 2000-12-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of c-jun n-terminal kinases (jnk)
ES2230171T3 (es) 1999-11-23 2005-05-01 Smithkline Beecham Corporation Compuestos 3,4-dihidro-(1h)quinazolin-2-ona como inhibidores de csbp/p38 quinasa.
ES2249309T3 (es) 1999-11-23 2006-04-01 Smithkline Beecham Corp Compuestos de 3,4-dihidro-(1h)quinazolin-2-ona como inhibidores de csbp/p39 kinasa.
WO2001038314A1 (en) 1999-11-23 2001-05-31 Smithkline Beecham Corporation 3,4-dihydro-(1h)quinazolin-2-one compounds as csbp/p38 kinase inhibitors
EP1259486A1 (en) * 2000-02-23 2002-11-27 Iconix Pharmaceuticals, Inc. Pyridine-amidines as modulators of p38 map kinase
US7235551B2 (en) 2000-03-02 2007-06-26 Smithkline Beecham Corporation 1,5-disubstituted-3,4-dihydro-1h-pyrimido[4,5-d]pyrimidin-2-one compounds and their use in treating csbp/p38 kinase mediated diseases
WO2001070695A1 (en) * 2000-03-22 2001-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridine derivatives as inhibitors of p38
WO2002014281A1 (en) * 2000-08-11 2002-02-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pyridine derivatives as inhibitors of p38
US6645990B2 (en) 2000-08-15 2003-11-11 Amgen Inc. Thiazolyl urea compounds and methods of uses
CA2446879A1 (en) * 2001-05-11 2002-11-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 2,5-disubstituted pyridine, pyrimidine, pyridazine and 1, 2, 4-triazine derivatives for use as p38 inhibitors
DE60230044D1 (de) 2001-06-11 2009-01-08 Vertex Pharma Isochinolin-inhibitoren von p38
HUP0401711A3 (en) * 2001-06-26 2009-07-28 Bristol Myers Squibb Co N-heterocyclic inhibitors of tnf-alpha and pharmaceutical compositions containing them
US7838541B2 (en) 2002-02-11 2010-11-23 Bayer Healthcare, Llc Aryl ureas with angiogenesis inhibiting activity
JP4472349B2 (ja) * 2002-02-12 2010-06-02 スミスクライン ビーチャム コーポレーション ｐ３８阻害薬として有用なニコチンアミド誘導体
GB0214268D0 (en) * 2002-06-20 2002-07-31 Celltech R&D Ltd Chemical compounds
ES2278170T3 (es) 2002-07-09 2007-08-01 BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH &amp; CO.KG Composiciones farmaceuticas de anticolinergicos e inhibidores de la quinasa p38 en el tratamiento de enfermedades respiratorias.
CA2755297A1 (en) 2003-02-10 2004-08-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes for the preparation of n-heteroaryl-n-aryl-amines by reacting an n-aryl carbamic acid ester with a halo-heteroaryl and analogous processes
WO2004113274A2 (en) 2003-05-20 2004-12-29 Bayer Pharmaceuticals Corporation Diaryl ureas with kinase inhibiting activity
RS52625B (sr) 2003-07-23 2013-06-28 Bayer Healthcare Llc Fluoro supstituisana omega-karboksiaril difenil urea za lečenje i prevenciju bolesti i stanja bolesti
WO2005100340A2 (en) 2004-04-13 2005-10-27 Icagen, Inc. Polycyclic pyridines as potassium ion channel modulators
KR100575344B1 (ko) * 2004-07-14 2006-05-03 주식회사 이큐스팜 Ｃ형 간염 예방 및 치료용 약학적 조성물
US20060035893A1 (en) 2004-08-07 2006-02-16 Boehringer Ingelheim International Gmbh Pharmaceutical compositions for treatment of respiratory and gastrointestinal disorders
WO2006021848A1 (en) * 2004-08-27 2006-03-02 Ranbaxy Laboratories Limited Anti-inflammatory agents
US8017395B2 (en) 2004-12-17 2011-09-13 Lifescan, Inc. Seeding cells on porous supports
PE20060777A1 (es) 2004-12-24 2006-10-06 Boehringer Ingelheim Int Derivados de indolinona para el tratamiento o la prevencion de enfermedades fibroticas
AU2006202209B2 (en) 2005-05-27 2011-04-14 Lifescan, Inc. Amniotic fluid derived cells
BRPI0502016B8 (pt) * 2005-06-03 2021-05-25 Univ Federal Do Rio De Janeiro Ufrj composto ureídicos, composições farmacêuticas contendo os mesmos e seu uso no tratamento de doenças inflamatórias
CN101484575B (zh) * 2005-06-08 2013-10-02 森托科尔公司 用于眼变性的细胞疗法
US20070122448A1 (en) * 2005-11-28 2007-05-31 Alireza Rezania Compositions and methods to create a vascularized environment for cellular transplantation
US8741643B2 (en) 2006-04-28 2014-06-03 Lifescan, Inc. Differentiation of pluripotent stem cells to definitive endoderm lineage
EP2021462B1 (en) 2006-04-28 2019-01-09 Lifescan, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
WO2008094597A2 (en) * 2007-01-30 2008-08-07 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Early mesoderm cells, a stable population of mesendoderm cells that has utility for generation of endoderm and mesoderm lineages and multipotent migratory cells (mmc)
EP2131858A4 (en) * 2007-03-20 2011-11-23 Cadila Pharmaceuticals Ltd P38 INHIBITORS
EP1992344A1 (en) 2007-05-18 2008-11-19 Institut Curie P38 alpha as a therapeutic target in pathologies linked to FGFR3 mutation
US9080145B2 (en) 2007-07-01 2015-07-14 Lifescan Corporation Single pluripotent stem cell culture
KR101555824B1 (ko) 2007-07-18 2015-09-25 라이프스캔, 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 분화
KR101617243B1 (ko) 2007-07-31 2016-05-02 라이프스캔, 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 분화
CA3123528C (en) 2007-11-27 2026-01-13 Lifescan, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells to pancreatic cells
BR122017025207B1 (pt) 2008-02-21 2021-03-16 Centocor Ortho Biotech Inc superfície que faz parte de um recipiente ou matriz destinada para uso em uma cultura de células ou análises, desprovida de uma camada de células alimentadoras e desprovida de uma camada adsorvente
US8623648B2 (en) 2008-04-24 2014-01-07 Janssen Biotech, Inc. Treatment of pluripotent cells
US20100015711A1 (en) 2008-06-30 2010-01-21 Janet Davis Differentiation of Pluripotent Stem Cells
EP2318520B1 (en) 2008-07-25 2017-10-11 The University Of Georgia Research Foundation, Inc. Compositions for mesoderm derived isl1+ multipotent cells (imps), epicardial progenitor cells (epcs) and multipotent cxcr4+cd56+ cells (c56cs) and methods of use
US20110305672A1 (en) 2008-07-25 2011-12-15 University Of Georgia Research Foundation, Inc. COMPOSITIONS FOR MESODERM DERIVED ISL1+ MULTIPOTENT CELLS (IMPs), EPICARDIAL PROGENITOR CELLS (EPCs) AND MULTIPOTENT CD56C CELLS (C56Cs) AND METHODS OF PRODUCING AND USING SAME
US20100028307A1 (en) * 2008-07-31 2010-02-04 O'neil John J Pluripotent stem cell differentiation
WO2010038428A1 (ja) * 2008-09-30 2010-04-08 武田薬品工業株式会社 タキサン系抗がん剤の置き換え薬
BRPI0919885A2 (pt) * 2008-10-31 2015-08-11 Centocor Ortho Biotech Inc Diferenciação de células-tronco embrionárias humanas para a linhagem endócrina pancreática
CA2742267C (en) 2008-10-31 2019-06-04 Centocor Ortho Biotech Inc. Differentiation of human embryonic stem cells to the pancreatic endocrine lineage
US20100124781A1 (en) 2008-11-20 2010-05-20 Shelley Nelson Pluripotent Stem Cell Culture on Micro-Carriers
AU2009316583B2 (en) * 2008-11-20 2016-04-21 Janssen Biotech, Inc. Methods and compositions for cell attachment and cultivation on planar substrates
EP2394993A4 (en) * 2008-12-10 2012-05-30 Dong Wha Pharm Co Ltd A NEW 2,6-SUBSTITUTED 3-NITROPYRIDINE DERIVATIVE, METHOD FOR ITS PREPARATION AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION CONTAINING THEREOF
JP6093110B2 (ja) 2008-12-17 2017-03-08 ザ スクリプス リサーチ インスティテュート 幹細胞の作製と維持
EP2396302A2 (en) * 2009-02-13 2011-12-21 Vertex Pharmceuticals Incorporated Processes for producing phenyl-6-(1-(phenyl)ureido)nicotinamides)
GB0908317D0 (en) * 2009-05-14 2009-06-24 Argenta Discovery Ltd Pharmaceutical compounds and compositions
CA2768644A1 (en) * 2009-07-20 2011-01-27 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
JP5819826B2 (ja) * 2009-07-20 2015-11-24 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド ヒト胚性幹細胞の分化
BR112012001480A2 (pt) 2009-07-20 2015-09-01 Janssen Biotech Inc Diferenciação de células-tronco embriônicas humanas
ES2665006T3 (es) 2009-10-29 2018-04-24 Janssen Biotech, Inc. Células madre pluripotentes
US9133439B2 (en) * 2009-12-23 2015-09-15 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
CA2784415C (en) 2009-12-23 2019-06-18 Jean Xu Differentiation of human embryonic stem cells
WO2011109279A2 (en) * 2010-03-01 2011-09-09 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods for purifying cells derived from pluripotent stem cells
US9752125B2 (en) 2010-05-12 2017-09-05 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
KR20130100122A (ko) 2010-08-12 2013-09-09 얀센 바이오테크 인코포레이티드 췌장 내분비 전구 세포를 이용한 당뇨병의 치료
PH12013500349A1 (en) 2010-08-31 2022-03-30 Janssen Biotech Inc Differentiation of pluripotent stem cells
CA2809300A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells
CN108517310B (zh) 2010-08-31 2022-02-15 詹森生物科技公司 人胚胎干细胞的分化
US9574171B2 (en) 2010-12-02 2017-02-21 Technion Research & Development Foundation Ltd. Methods of generating corneal cells and cell populations comprising same
EP2652125B1 (en) 2010-12-15 2017-04-26 Kadimastem Ltd. Insulin producing cells derived from pluripotent stem cells
KR102203056B1 (ko) 2011-12-22 2021-01-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 단일 인슐린 호르몬 양성 세포로의 분화
KR20140131999A (ko) 2012-03-07 2014-11-14 얀센 바이오테크 인코포레이티드 만능 줄기 세포의 증폭 및 유지를 위한 한정 배지
EP2843049B1 (en) 2012-04-27 2018-04-11 Keio University Neuronal differentiation promoter
KR102667288B1 (ko) 2012-06-08 2024-05-17 얀센 바이오테크 인코포레이티드 인간 배아 줄기 세포의 췌장 내분비 세포로의 분화
RU2768963C2 (ru) 2012-12-31 2022-03-25 Янссен Байотек, Инк. Культивация эмбриональных стволовых клеток человека в воздушно-жидкостной зоне взаимодействия с целью их дифференцировки в панкреатические эндокринные клетки
WO2014105546A1 (en) 2012-12-31 2014-07-03 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of human embryonic stem cells into pancreatic endocrine cells using hb9 regulators
WO2014106141A1 (en) 2012-12-31 2014-07-03 Janssen Biotech, Inc. Suspension and clustering of human pluripotent cells for differentiation into pancreatic endocrine cells
US10370644B2 (en) 2012-12-31 2019-08-06 Janssen Biotech, Inc. Method for making human pluripotent suspension cultures and cells derived therefrom
US12558316B2 (en) 2013-03-13 2026-02-24 University Of Miami Methods and compositions for the treatment of epidermolysis bullosa
DK2972193T3 (da) 2013-03-13 2020-03-23 Univ Miami Fremgangsmåde til isolation og oprensning af mikrovesikler fra cellekultursupernatanter og biologiske fluider
EP3954759A1 (en) 2014-05-16 2022-02-16 Janssen Biotech, Inc. Use of small molecules to enhance mafa expression in pancreatic endocrine cells
US20180325947A1 (en) 2015-10-27 2018-11-15 Children's Hospital Medical Center Use of mapk inhibitors to reduce loss of hematopoietic stem cells during ex vivo culture and/or genetic manipulation
EP4231015B1 (en) 2015-11-30 2024-10-30 Kadimastem Ltd. Methods for differentiating and purifying pancreatic endocrine cells
CA3020905A1 (en) 2016-04-14 2017-10-19 Janssen Biotech, Inc. Differentiation of pluripotent stem cells to intestinal midgut endoderm cells
JP2021501130A (ja) 2017-10-05 2021-01-14 フルクラム セラピューティクス，インコーポレイテッド ＤＵＸ４の発現を低減するためのｐ３８阻害剤の使用
US10342786B2 (en) 2017-10-05 2019-07-09 Fulcrum Therapeutics, Inc. P38 kinase inhibitors reduce DUX4 and downstream gene expression for the treatment of FSHD
KR20200121800A (ko) 2018-01-05 2020-10-26 싸이브렉사 1, 인크. 산성 또는 저산소성 질환에 걸린 조직에 관련된 질환의 치료를 위한 화합물, 조성물 및 방법
EP3773579A4 (en) 2018-03-26 2022-03-09 Clear Creek Bio, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR INHIBITING DIHYDROOROTATE DEHYDROGENASE
CA3146560A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Cybrexa 2, Inc. Peptide conjugates of cytotoxins as therapeutics
MY209459A (en) 2019-07-10 2025-07-09 Cybrexa 3 Inc Peptide conjugates of microtubule-targeting agents as therapeutics
US20210308117A1 (en) 2020-03-20 2021-10-07 Clear Creek Bio, Inc. Methods of treating viral infections using inhibitors of nucleotide synthesis pathways
CA3187902A1 (en) 2020-08-21 2022-02-24 University Of Miami Compositions and methods of treatment using microvesicles from bone marrow-derived mesenchymal stem cells
US20230390341A1 (en) 2022-04-19 2023-12-07 University Of Miami Methods and compositions for prevention and treatment of graft versus host disease

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4973690A (en) * 1988-04-12 1990-11-27 Ciba-Geigy Corporation Novel ureas
US4966622A (en) * 1988-04-12 1990-10-30 Ciba-Geigy Corporation N-phenyl-N-pyrimidin-2-ylureas
US5559137A (en) 1994-05-16 1996-09-24 Smithkline Beecham Corp. Compounds
KR19980701374A (ko) 1995-01-12 1998-05-15 스티븐 베네티아너 신규 화합물(Novel Compounds)
JP2000506532A (ja) * 1996-03-13 2000-05-30 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション サイトカイン介在疾患の治療にて有用な新規ピリミジン化合物
US6147080A (en) 1996-12-18 2000-11-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of p38
US6242569B1 (en) * 1997-02-05 2001-06-05 Tularik, Inc. Regulators of apoptosis
PL336990A1 (en) * 1997-05-22 2000-07-31 Searle & Co 3(5)-heteroaryl group substituted pyrazoles as inhibitors of kinase p 38
DE60230044D1 (de) * 2001-06-11 2009-01-08 Vertex Pharma Isochinolin-inhibitoren von p38

Also Published As

Publication number Publication date
EA200001176A1 (ru) 2001-06-25
IL139479A0 (en) 2001-11-25
US7115637B2 (en) 2006-10-03
HUP0105174A3 (en) 2002-06-28
EP2336111A1 (en) 2011-06-22
DE69940115D1 (de) 2009-01-29
US20020019393A1 (en) 2002-02-14
US7423049B2 (en) 2008-09-09
AU764047B2 (en) 2003-08-07
MY132496A (en) 2007-10-31
NO319755B1 (no) 2005-09-12
HK1034907A1 (en) 2001-11-09
AP2000001996A0 (en) 2000-12-31
US20090075981A1 (en) 2009-03-19
JP4704560B2 (ja) 2011-06-15
CZ300702B6 (cs) 2009-07-22
CA2331460A1 (en) 1999-11-18
PT1077943E (pt) 2009-02-23
IS5711A (is) 2000-11-10
SK16882000A3 (sk) 2001-05-10
BG65025B1 (bg) 2006-12-29
NZ508653A (en) 2003-07-25
JP2010150282A (ja) 2010-07-08
TWI249527B (en) 2006-02-21
KR20010043509A (ko) 2001-05-25
BR9911786A (pt) 2001-04-03
NO20005673L (no) 2001-01-10
AU3792399A (en) 1999-11-29
US20040132729A1 (en) 2004-07-08
DK1077943T3 (da) 2009-03-16
ES2318893T3 (es) 2009-05-01
PL344046A1 (en) 2001-09-24
CA2331460C (en) 2011-01-18
NO20005673D0 (no) 2000-11-10
HUP0105174A2 (hu) 2002-04-29
SK286689B6 (sk) 2009-03-05
GEP20032954B (en) 2003-04-25
IL139479A (en) 2009-11-18
CN1306512A (zh) 2001-08-01
EP1077943B1 (en) 2008-12-17
JP2002514625A (ja) 2002-05-21
ATE417828T1 (de) 2009-01-15
EE200000610A (et) 2002-04-15
US20070060572A1 (en) 2007-03-15
CZ20004172A3 (cs) 2001-03-14
EP1077943A1 (en) 2001-02-28
BG105031A (en) 2001-10-31
KR100696219B1 (ko) 2007-03-21
UA74325C2 (uk) 2005-12-15
EP2062879A1 (en) 2009-05-27
US6632945B2 (en) 2003-10-14
WO1999058502A1 (en) 1999-11-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL198352B1 (pl) Heterocykliczne inhibitory p38, kompozycja farmaceutyczna i zastosowanie heterocyklicznych inhibitorów p38
PL202464B1 (pl) Podstawione związki heterocykliczne zawierające azot jako inhibitory kinazy białkowej p38, zawierająca je kompozycja farmaceutyczna i ich zastosowanie
US7598277B2 (en) Inhibitors of p38
US7951809B2 (en) Inhibitors of p38
JP2004506042A5 (pl)
AU2001283237A1 (en) Pyridine derivatives as inhibitors of p38
KR100559917B1 (ko) ｐ38 프로테인 키나아제의 저해제로서 치환된 질소를 함유하는헤테로사이클
MXPA00011076A (en) Heterocyclic inhibitors of p38
HK1034907B (en) Heterocyclic inhibitors of p38

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20100511