PL202758B1 - Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny - Google Patents

Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny

Info

Publication number
PL202758B1
PL202758B1 PL341187A PL34118700A PL202758B1 PL 202758 B1 PL202758 B1 PL 202758B1 PL 341187 A PL341187 A PL 341187A PL 34118700 A PL34118700 A PL 34118700A PL 202758 B1 PL202758 B1 PL 202758B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
conjugate
erythropoietin
conjugates
glycoprotein
epo
Prior art date
Application number
PL341187A
Other languages
English (en)
Other versions
PL341187A1 (en
Inventor
Pascal Sebastian Bailon
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27495518&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL202758(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of PL341187A1 publication Critical patent/PL341187A1/xx
Publication of PL202758B1 publication Critical patent/PL202758B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K17/00—Carrier-bound or immobilised peptides; Preparation thereof
    • C07K17/02—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier
    • C07K17/08—Peptides being immobilised on, or in, an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/475—Growth factors; Growth regulators
    • C07K14/505—Erythropoietin [EPO]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja koniugatów erytropoetyny, środek farmaceutyczny, zastosowanie koniugatów erytropoetyny i ich kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny.
Erytropoeza jest procesem wytwarzania erytrocytów, który równoważy proces niszczenia komórek. Erytropoeza jest kontrolowanym mechanizmem fizjologicznym zapewniającym powstawanie erytrocytów w ilości wystarczającej do odpowiedniego natlenienia tkanek. Naturalnie występująca ludzka erytropoetyna (hEPO) jest wytwarzana w nerkach i jest humoralnym czynnikiem osoczowym stymulującym wytwarzanie erytrocytów (Carnot, P i Deflandre, C (1906) C.R. Acad. Sci. 143: 432; Erslev, AJ (1953 Blood 8: 349; Reissmann, KR (1950) Blood 5: 372; Jacobson, LO, Goldwasser, E, Freid, W i Plzak, LF (1957) Nature 179: 6331-4). Naturalnie występująca EPO stymuluje podziały i różnicowanie zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym i wywiera działanie biologiczne przez wiązanie się z receptorami na prekursorach erytroidalnych (Krantz, BS (1991) Blood 77: 419).
Erytropoetynę wytwarza się drogą biosyntezy z użyciem technik rekombinacji DNA (Egrie, JC, Strickland, TW, Lane, J i inni (1986) Immunobiol. 72: 213-224) i jest ona produktem sklonowanego ludzkiego genu EPO wstawionego do komórek tkanki jajnika chomika chińskiego (komórkach CHO), ulegającego w nich ekspresji. Podstawową budowę przeważającej, w pełni przetworzonej postaci hEPO przedstawia SEQ ID NO:1. Występują w niej dwa mostki disulfidowe, pomiędzy Cys7-Cys161 i Cys29-Cys33. Masa cząsteczkowa łańcucha polipeptydowego EPO bez grup cukrowych wynosi 18236 Da. W nienaruszonej czą steczce EPO okoł o 40% masy czą steczkowej stanowią grupy wę glowodanowe, które glikozylują białko w miejscach glikozylacji białka (Sasaki, H, Bothner, B, Dell, A i Fukuda, M (1987) J. Biol. Chem. 262: 12059).
Ze względu na to, że ludzka erytropoetyna jest niezbędna do tworzenia erytrocytów, hormon ten znajduje zastosowanie w leczeniu zaburzeń charakteryzujących się niskim lub zaburzonym wytwarzaniem erytrocytów. Klinicznie EPO stosuje się w leczeniu niedokrwistości u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF) (Eschbach, JW, Egri, JC, Downing, MR i inni (1987) NEJM 316: 73-78; Eschbach, JW, Abdulhadi, MH, Browne, JK i inni (1989) Ann. Intern. Med. 111: 992; Egrie, JC, Eschbach, JW, McGuire, T, Adamson, JW (1988) Kidney Intl. 33: 262; Lim, VS, Degowin, RL, Zavala, D i inni (1989) Ann. Intern. Med. 110: 108-114) oraz u pacjentów z AIDS i u pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię (Danna, RP, Rudnick, SA, Abels, RI w: red. MB Garnick, Erythropoietin in Clinical Applications - An International Perspective. New York, NY: Marcel Dekker; 1990: str. 301-324). Jednakże biodostępność dostępnych w handlu terapeutycznych leków białkowych, takich jak EPO, jest ograniczona z uwagi na ich krótki okres półtrwania w osoczu oraz podatność na rozkład przez proteazy. Wady te nie pozwalają na osiągnięcie maksymalnej siły działania przy klinicznym stosowaniu tych leków.
Nieoczekiwanie okazało się, iż owych wad można uniknąć dzięki nowym koniugatom erytropoetyny według wynalazku, które zawierają glikoproteinę erytropoetynę mającą co najmniej jedną wolną grupę aminową i wykazującą in vivo działanie biologiczne powodujące zwiększenie produkcji retikulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego, gdzie erytropoetyna jest ludzką erytropoetyną; przy czym ta glikoproteina jest kowalencyjnie połączona z „n” grupami poli(glikolu etylenowego) o wzorze -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, przy czym grupa -CO każ dej grupy poli(glikolu etylenowego) tworzy wiązanie amidowe z jedną z tych grup aminowych; R oznacza C1-C6-alkil; x oznacza 2 lub 3; m oznacza 450-900; a n oznacza 1-3; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica masy cząsteczkowej koniugatu i masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od 20 kilodaltonów do 100 kilodaltonów.
Korzystnie koniugat ma wzór P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają znaczenie podane powyżej, a P oznacza resztę glikoproteiny bez n grup(-y) aminowych(-ej) tworzących(-ej) wiązania(-e) amidowe z grupami(-ą) poli(glikolu etylenowego).
Korzystnie R oznacza metyl, m oznacza od 650 do 750 lub n oznacza 1.
Korzystniej R oznacza metyl; m oznacza od 650 do 750; a n oznacza 1.
Korzystną postacią wynalazku jest koniugat o wzorze [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650 do 750, n oznacza 1, a P ma znaczenie podane wyż ej.
Korzystny jest taki koniugat zawierający glikoproteinę ludzką erytropoetynę eksprymowaną przez aktywację endogennego genu, w szczególności zawierający glikoproteinę o sekwencji SEQ ID NO:1.
PL 202 758 B1
W korzystnej postaci koniugatu R oznacza metyl; x oznacza 3; m oznacza 650-750; a n oznacza 1; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica średniej masy cząsteczkowej koniugatu i średniej masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła około 30 kilodaltonów.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja zawierająca koniugaty określone powyżej, gdzie zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 90%, jeszcze korzystniej co najmniej 92%, a najkorzystniej co najmniej 96%.
Także korzystnie zawartość koniugatów, w których n oznacza 1, wynosi 90-96%.
Przedmiotem wynalazku jest także środek farmaceutyczny zawierający farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i substancję czynną, cechujący się tym, że jako tę substancję czynną zawiera koniugat lub kompozycję określone powyżej.
Wynalazek dotyczy także koniugatów określonych powyżej do leczenia chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię, jak również zastosowania koniugatu lub kompozycji okreś lonych powyżej do wytwarzania środków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
Przedmiotem wynalazku jest też sposób wytwarzania związków koniugatów określonych powyżej, charakteryzujący się tym, że związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R, m i x mają znaczenie podane powyżej, poddaje się kondensacji z glikoproteiną erytropoetyną.
W porównaniu z niemodyfikowaną EPO (to jest EPO bez do łączonego PEG) oraz ze znanymi koniugatami PEG-EPO, koniugaty według wynalazku wykazują wydłużone okresy półtrwania w krążeniu oraz okresy występowania w osoczu, obniżony klirens oraz podwyższoną aktywność kliniczną in vivo. Koniugaty według wynalazku mają te same zastosowania co EPO. W szczególności koniugaty według wynalazku znajdują zastosowanie w leczeniu pacjentów przez stymulację podziałów komórkowych oraz różnicowania zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym, tak samo jak w przypadku stosowania EPO w leczeniu pacjentów.
Ze względu na te ulepszone właściwości koniugaty według wynalazku można podawać jeden raz w tygodniu, podczas gdy niemodyfikowaną EPO podaje się trzy razy w tygodniu. Oczekuje się, że zmniejszona częstotliwość podawania spowoduje lepszą akceptację przez pacjentów, co doprowadzi do lepszych wyników leczenia, a także polepszy jakość życia pacjentów. Stwierdzono, że w porównaniu ze znanymi koniugatami EPO z poli(glikolem etylenowym), koniugaty mające masę cząsteczkową i strukturę linkera koniugatów wedł ug wynalazku odznaczają się polepszonym profilem skutecznoś ci, trwałością, wartościami AUC, okresem półtrwania w układzie krążenia oraz obniżonymi kosztami.
Koniugaty według wynalazku można podawać pacjentom w leczniczo skutecznej ilości tak samo jak podawana jest EPO. Leczniczo skuteczną ilością jest ilość koniugatu wymagana dla uzyskania in vivo działania biologicznego powodującego wzmożenie wytwarzania retykulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego. Dokładna ilość koniugatu zależy od takich czynników związanych z pacjentem, jak dokładny typ leczonego stanu i stan leczonego pacjenta, a także od innych składników środka. Przykładowo można podawać 0,01-10 μq koniugatu na kilogram masy ciała, a korzystnie 0,1-1 μg na kilogram masy ciała, np. raz w tygodniu.
Środki farmaceutyczne zawierające koniugat można formułować tak, by zawierały ten koniugat w ilości wystarczającej dla zapewnienia skuteczności przy podawaniu różnymi drogami człowiekowi cierpiącemu na zaburzenia związane z krwią, charakteryzujące się niskim lub zaburzonym wytwarzaniem erytrocytów. Średnia leczniczo skuteczna ilość koniugatu może się zmieniać i powinna być ona dobierana i przepisywana w oparciu o zalecenia doświadczonego lekarza.
Produkty glikoproteiny erytropoetyny wytworzone zgodnie z wynalazkiem można formułować w postaci odpowiednich do iniekcji środków farmaceutycznych z dopuszczalnym farmaceutycznie nośnikiem lub zaróbką, ogólnie znanymi sposobami. Przykładowo odpowiednie środki opisano w WO97/09996, WO97/40850, WO98/58660 i WO99/07401. Wśród korzystnych farmaceutycznie dopuszczalnych nośników do formułowania środków według wynalazku można wymienić albuminę ludzkiej surowicy, białka ludzkiego osocza itd. Środki według wynalazku można formułować w 10 mM buforze, fosforanie sodu/potasu o pH 7 zawierającym środek tonizujący, np. 132 mM chlorek sodu. Ponadto środek farmaceutyczny może zawierać środek konserwujący. Środek farmaceutyczny może zawierać różne ilości erytropoetyny, np. 10-1000 μg/ml, np. 50 μg lub 400 μg.
Określenie „erytropoetyna” lub „EPO” oznacza glikoproteinę o sekwencji aminokwasowej przedstawionej jako SEQ ID NO:1 lub SEQ ID NO:2 lub o sekwencji aminokwasowej zasadniczo do nich
PL 202 758 B1 homologicznej, której właściwości biologiczne odnoszą się do stymulacji wytwarzania erytrocytów i różnicowania zaangażowanych prekursorów erytroidalnych w szpiku kostnym. Określenia te obejmują zarówno naturalną, jak i rekombinowaną ludzką erytropoetynę.
Koniugaty erytropoetyny według wynalazku można przedstawić ogólnym wzorem P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają wyżej podane znaczenie. W tym wzorze P oznacza opisaną tu resztę glikoproteiny erytropoetyny (to jest bez grupy aminowej lub grup aminowych, które tworzą wiązanie amidowe z karbonylem w powyższym wzorze), wykazującej in vivo działanie biologiczne powodujące wzmożenie produkcji retykulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego.
Korzystnie R oznacza metyl. Korzystnie m oznacza od około 650 do około 750, a n oznacza 1.
Najkorzystniej R oznacza metyl, m oznacza od 650 do około 750, a n oznacza 1, to jest koniugat według wynalazku ma wzór [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650 do 750, n oznacza 1, a P ma wyżej podane znaczenie. Korzystnie m oznacza średnio 680.
Glikoproteina w koniugatach według wynalazku jest ludzką erytropoetyną. Ludzka erytropoetyna i zdefiniowane powyżej analogiczne białka mogą być eksprymowane przez endogenną aktywację genów. Korzystnie ludzkimi glikoproteinami, erytropoetynami są związki o SEQ ID NO: 1 i SEQ ID NO:2, a najkorzystniej o SEQ ID NO:1.
Użyte tu określenie „C1-C6-alkil” oznacza liniową lub rozgałęzioną grupę alkilową o 1-6 atomach węgla. Przykłady C1-C6-alkili obejmują metyl, etyl i izopropyl. Według wynalazku R oznacza jakikolwiek C1-C6-alkil. Korzystne są koniugaty, w których R oznacza metyl.
Symbol „m” oznacza liczbę reszt tlenku etylenu (OCH2CH2) w grupie poli(tlenku etylenu). Pojedyncza podjednostka PEG tlenku etylenu ma masę cząsteczkową około 44 daltonów. Zatem masa cząsteczkowa koniugatu (bez masy cząsteczkowej EPO) zależy od liczby „m”. W koniugatach według wynalazku „m” oznacza od około 450 do około 900 (co odpowiada masie cząsteczkowej od około 20 kDa do około 40 kDa), a korzystnie od około 650 do około 750 (co odpowiada masie cząsteczkowej około 30 kDa). Liczbę m dobiera się tak, żeby powstały koniugat według wynalazku miał aktywność fizjologiczną porównywalną z niemodyfikowaną EPO, która to aktywność może być taka sama, wyższa lub stanowić część odpowiadającej jej aktywności niemodyfikowanej EPO. Masa cząsteczkowa „około” konkretnej liczby oznacza, że jest ona sensownie bliska tej liczbie przy oznaczaniu standardowymi technikami analitycznymi. Liczba „m” jest dobrana tak, żeby masa cząsteczkowa każdej grupy poli(glikolu etylenowego) dołączonej kowalencyjnie do glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od około 20 kDa do około 40 kDa, a korzystnie wynosiła około 30 kDa.
W koniugatach według wynalazku liczba „n” jest liczbą grup glikolu polietylenowego zwią zanych kowalencyjnie z wolnymi grupami aminowymi (włącznie z ε-aminowymi grupami lizyny i/lub N-terminalną grupą aminową) białka erytropoetyny poprzez wiązanie (wiązania) amidowe. Koniugat według wynalazku może zawierać jedną, dwie lub trzy grupy PEG na cząsteczkę EPO. Liczba „n” jest liczbą całkowitą od 1 do 3, przy czym korzystnie „n” oznacza 1 lub 2, a najkorzystniej „n” oznacza 1.
Związek o wzorze P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n można wytwarzać ze znanego materiału polimerycznego o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R i m mają wyżej podane znaczenie, przez kondensację związku o wzorze przedstawionym na rysunku z glikoproteiną erytropoetyną. Związki o wzorze przedstawionym na rysunku, w których x oznacza 3, stanowią estry sukcynimidylowe kwasu a-niższo-alkoksy-poli(oksyetyleno)masłowego (niższo-alkoksy-PEG-SBA). Związki o wzorze przedstawionym na rysunku, w których x oznacza 2, stanowią estry sukcynimidylowe kwasu α-niższo-alkoksy-poli(oksyetyleno)propionowego (niższo-alkoksy-PEG-SPA). Można zastosować dowolny znany sposób prowadzenia reakcji zaktywowanego estru z aminą w celu utworzenia amidu. W reakcji opisanej powyżej przykładowe ugrupowanie estru sukcynymidylowego stanowi grupę odszczepiającą się z wytworzeniem amidu. Zastosowanie estrów sukcynymidylowych, takich jak związki o wzorze przedstawionym na rysunku, do wytworzenia koniugatów z białkami, ujawniono w opisie patentowym Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5672662.
Ludzka EPO zawiera 9 wolnych grup aminowych, N-końcową grupę aminową oraz grupy ε-aminowe w ośmiu resztach lizyny. Gdy środek PEG-ilujący połączono ze związkiem SBA o wzorze przedstawionym na rysunku, stwierdzono, że przy pH 7,5, stosunku białko : PEG 1 : 3 oraz w temperaturze reakcji 20-25°C, powstała mieszanina mono-, di- oraz śladowych ilości tri-PEG-ilowanych białek. Gdy środek PEG-ilujący był związkiem SPA o wzorze przedstawionym na rysunku, w podobnych warunkach, z wyjątkiem tego, że stosunek białko : PEG wynosił 1 : 2, głównym produktem było białko mono-PEG-ilowane. PEG-ilowaną EPO można podawać jako mieszaninę lub w postaci różnych białek PEG-ilowanych rozdzielonych drogą chromatografii kationowymiennej. Przy manipulacji warunkami
PL 202 758 B1 reakcji (np. stosunkiem reagentów, pH, temperaturą, stężeniem białka, czasem reakcji itd.) można osiągnąć różne względne ilości poszczególnych PEG-ilowanych białek.
Ludzka erytropoetyna (EPO) stanowi ludzką glikoproteinę stymulującą tworzenie erytrocytów. Jej wytwarzanie i zastosowania terapeutyczne opisano szczegółowo w opisach patentowych Stanów Zjednoczonych Ameryki nr 5547933 i 5621080, EP-B 0148605, Huang, S.L, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1984) 2708-2712, EP-B 0205564, EP-B 0209539 i EP-B 0411678 a także w Lai, P.H. i inni, J. Biol. Chem. 261 (1986) 3116-3121, Sasaki, H. i inni, J. Biol. Chem. 262 (1987) 12059-12076. Erytropoetynę do zastosowań terapeutycznych można wytworzyć metodami rekombinacji (EP-B 0148605, EP-B 0209539 i Egrie, J.C., Strickland, T.W., Lane, J. i inni (1986) Immunobiol. 72: 213-224).
Sposoby ekspresji i wytwarzania erytropoetyny w pożywce wolnej od surowicy opisano np. w WO 96/35718 i w europejskim zgł oszeniu patentowym nr 513 738. Dodatkowo poza publikacjami wymienionymi powyżej wiadomo, że można przeprowadzić wolną od surowicy fermentację zrekombinowanych komórek CHO zawierających gen EPO. Sposoby takie opisano np. w EP-A 0513738, EP-A 0267678 oraz w ogólnej formie w Kawamoto, T. i inni Analytical Biochem. 130 (1983) 445-453, EP-A 0248656, Kowar, J. i Franek, F., Methods in Enzymology 421 (1986) 277-292, Bavister, B., Exp. Zoology 271 (1981) 45-51, EP-A 0481791, EP-A 0307247, EP-A 0343635, WO 88/00967.
W EP-A 0267678 do oczyszczania EPO wytworzonej w hodowlach wolnych od surowicy po dializie zastosowano chromatografię jonowymienną na S-Sepharose, preparatywną HPLC z odwróceniem faz na kolumnie C8 oraz chromatografię żelową. Etap chromatografii żelowej można zastąpić chromatografią jonowymienną na S-Sepharose z szybkim przepływem. Proponuje się także przeprowadzenie chromatografii z barwnikiem na kolumnie Blue Trisacryl przed chromatografią jonowymienną.
Proces oczyszczania zrekombinowanej EPO opisano w Nobuo, I. i inni J. Biochem. 107 (1990) 352-359. Zgodnie z tym sposobem EPO poddaje się jednak przed etapami oczyszczania działaniu roztworu Tween® 20, fluorku fenylometylosulfonylu, etylomaleimidu, pepstatyny A, siarczanu miedzi i kwasu oksamowego. W publikacjach, w tym w WO 96/35718, ujawniono procedurę wytwarzania erytropoetyny drogą procesu fermentacji w pożywce wolnej od surowicy (EPOsf).
Specyficzną aktywność EPO lub koniugatów EPO według wynalazku można oznaczyć w różnych znanych testach. Aktywność biologiczna oczyszczonych białek EPO według wynalazku jest taka, że podanie ich ludziom powoduje zwiększenie produkcji retykulocytów i erytrocytów w komórkach szpiku kostnego w porównaniu z pacjentami, którym ich nie podawano, lub pacjentami z grup kontrolnych. Aktywność biologiczną białek EPO lub ich fragmentów, uzyskanych i oczyszczonych według wynalazku, można przebadać metodami według Annable i innych Bull. Wld. Hlth. Org. (1972) 47: 99-112 i Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio 1997(2). Inny sposób oznaczania aktywności białka EPO, test normocytemiczny na myszach, opisano w przykładzie 4.
Jak wyżej wspomniano, zakresem wynalazku objęte są także kompozycje zawierające wyżej opisane koniugaty. Związek zawierający co najmniej 90% koniugatów mono-PEG, tj. takich, w których n oznacza 1, moż na wytwarzać w sposób opisany w przykładzie 5. Zazwyczaj wymagane są koniugaty mono-PEG glikoproteiny erytropoetyny, ze względu na to, że mają one tendencję do wykazywania aktywności wyższej niż koniugaty di-PEG. Zawartość procentową koniugatów mono-PEG oraz stosunek koniugatów mono- do di-PEG można regulować zbierając razem szersze frakcje wokół piku elucji, aby zmniejszyć procent mono-PEG, lub węższe frakcje, aby zwiększyć procent mono-PEG w środku. Około 90% koniugatów mono-PEG zapewnia dobrą równowagę wydajności i aktywności. Czasami mogą być wymagane kompozycje, w których np. co najmniej 92% lub co najmniej 96% koniugatów stanowi mono-PEG (n oznacza 1). Zgodnie z jedną z postaci wynalazku zawartość procentowa koniugatów, których n oznacza 1, wynosi od 90% do 96%.
Koniugaty i kompozycje według wynalazku znajdują szczególne zastosowanie do wytwarzania leków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z niedokrwistością u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF), z AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
Środki według wynalazku znajdują zastosowanie w sposobie leczenia profilaktycznego i/lub terapeutycznego zaburzeń obejmujących niedokrwistość w przewlekłej niewydolności nerek (CRF), AIDS oraz pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię, obejmującym etap podawania pacjentowi wyżej opisanego środka.
PL 202 758 B1
Wynalazek ilustrują poniższe przykłady.
P r z y k ł a d 1. Fermentacja i oczyszczanie ludzkiej EPO
a) Wytwarzanie i fermentacja materiału inokulacyjnego
Z gazowej fazy zbiornika do przechowywania z ciekł ym azotem pobrano jedną próbkę Working
Cell Bank, pochodzącego z linii komórkowej CHO produkującej EPO (można zastosować ATCC CRL8695, ujawnioną w EP 411678 (Genetics Institute)). Komórki przeniesiono do szklanych butelek do wirowania i hodowano w pożywce buforowanej wodorowęglanem w inkubatorze w atmosferze wilgotnego CO2. Standardowa pożywka, wolna od surowicy, stosowana do wytwarzania i fermentacji materiału inokulacyjnego, ujawniona w europejskim zgłoszeniu patentowym 513738, Koch z 12 czerwca 1992 r. lub WO 96/35718, Burg z 14 listopada 1996 r., zawiera np. jako pożywkę DMEM/F12 (np. JRH Biosciences/Hazleton Biologies, Denver, US, zamówienie nr. 57-736) i dodatkowo wodorowęglan sodu, L+glutaminę, D+glukozę, zrekombinowaną insulinę, selenin sodu, diaminobutan, hydrokortyzon, siarczan żelaza(II), asparaginę, kwas asparaginowy, serynę i stabilizator komórek ssaczych, taki jak np. polialkohol winylowy, metyloceluloza, polidekstran, glikol polietylenowy, Pluronic F68, środek zwiększający objętość osocza poligelinę (HEMACCEL®) lub poliwinylopirolidon (WO 96/35718).
Pod mikroskopem sprawdzono czy hodowle nie zawierają organizmów zanieczyszczających je oraz wyznaczono gęstości komórek. Testy te przeprowadzano po każdym etapie podziału.
Po okresie początkowego wzrostu hodowlę komórek rozcieńczono świeżą pożywką do początkowej gęstości komórek i poddano jeszcze jednemu cyklowi wzrostu. Procedurę powtarzano do momentu otrzymania objętości około 2 l hodowli na każde szklane naczynie do wirowania. Po około 12 powtórzeniach uzyskano od 1 do 5 litrów hodowli, którą następnie użyto jako materiału inokulacyjnego do 10 l fermentatora inokulacyjnego.
Po 3-5 dniach, hodowle z 10 l fermentatora można zastosować jako materiał inokulacyjny do 100 l fermentatora inokulacyjnego.
Po 3-5 dniach hodowli, hodowle ze 100 l fermentatora można zastosować jako materiał inokulacyjny do 1000 l fermentatora produkcyjnego.
b) Zbieranie hodowli i rozdzielanie komórek
Zastosowano proces periodycznego powtórnego uzupełniania, t.j. kiedy hodowla osiągała wymaganą gęstość, zbierano około 80% hodowli. Pozostałą część hodowli uzupełniano świeżą pożywką i hodowano do czasu nastę pnego zbioru. Jeden etap produkcyjny sk ł adał się z maksymalnie 10 następujących po sobie zbiorów: 9 częściowych zbiorów i 1 całkowitego zbioru pod koniec fermentacji. Zbieranie wykonywano co 3-4 dni.
Określoną objętość zbioru przenoszono do ochłodzonego naczynia. Komórki usuwano przez wirowanie lub filtrację i odrzucano. Supernatant otrzymany po wirowaniu, zawierający EPO, kolejno filtrowano i zbierano w drugim ochłodzonym naczyniu. Każdy ze zbiorów podczas oczyszczania poddawano obróbce osobno.
Typowy sposób oczyszczania białka EPO ujawniono w WO 96/35718, Burg z 14 listopada 1996 r. Proces oczyszczania objaśniono poniżej.
a) Chromatografia na Blue Sepharose
Blue Sepharose (Pharmacia) składa się z ziaren Sepharose, które mają na powierzchni kowalencyjnie związany barwnik błękit Cibacron. Ze względu na to, że EPO wiąże się z Blue Sepharose mocniej niż większość niebiałkowych zanieczyszczeń, niektórych białkowych zanieczyszczeń i PVA, EPO można w tym etapie wzbogacić. Wymywanie z kolumny Blue Sepharose przeprowadza się zwiększając stężenie soli, a także pH.
Kolumnę wypełniono 80-100 l Blue Sepharose, zregenerowanej NaOH i zrównoważono buforem do równoważenia (chlorek sodu/wapnia i octan sodu). Naniesiono zakwaszony i przefiltrowany supernatant fermentacyjny. Po zakończeniu nakładania kolumnę przemyto najpierw buforem podobnym do buforu równoważącego, zawierającym wyższe stężenie chlorku sodu, a następnie buforem Tris. Produkt wymyto buforem Tris i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
b) Chromatografia na Butyl Toyopearl
Butyl Toyopearl 650 C (Toso Haas) jest złożem polistyrenowym z dołączonymi kowalencyjnie alifatycznymi grupami butylowymi. EPO wiąże się z żelem mocniej niż większość zanieczyszczeń i PVA, tak że należy ją wymywać buforem zawierającym izopropanol.
Kolumnę zapakowano 30-40 l złoża Butyl Toyopearl 650 C, zregenerowanego NaOH, przemyto buforem Tris i równoważono buforem Tris zawierającym izopropanol.
PL 202 758 B1
Eluat z Blue Sepharose doprawiono izopropanolem do jego stężenia w buforze do równoważenia kolumny i nałożono na kolumnę. Następnie kolumnę przemyto buforem do równoważenia z wzrastającym stężeniem izopropanolu. Produkt wymyto buforem do wymywania (bufor Tris z dużą zawartością izopropanolu) i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania .
c) Chromatografia na hydroksyapatycie Ultrogel
Hydroksyapatyt Ultrogel (Biosepra) składa się z hydroksyapatytu włączonego w złoże agarozowe w celu polepszenia właściwości mechanicznych. EPO ma niskie powinowactwo do hydroksyapatytu, zatem może być wymyta niższymi stężeniami fosforanu niż inne zanieczyszczenia białkowe.
Kolumnę wypełniono 30-40 l hydroksyapatytu Ultrogel i zregenerowano buforem fosforan potasu/chlorek wapnia i NaOH, a następnie buforem Tris. Następnie kolumnę równoważono buforem Tris zawierającym niskie stężenie izopropanolu i chlorku sodu.
Eluat z chromatografii Butyl Toyopearl zawierający EPO nałożono na kolumnę. Następnie kolumnę przemyto buforem do równoważenia i buforem Tris z izopropanolem i chlorkiem sodu. Produkt wymyto buforem Tris zawierającym fosforan potasu i zebrano w jedną frakcję, zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
d) HPLC z odwróceniem faz na Vydac C4
Złoże RP-HPLC Vydac C4 (Vydac) składa się z cząstek żelu krzemionkowego, których powierzchnie mają dołączone łańcuchy alkilowe C4. Rozdział EPO od białkowych zanieczyszczeń jest oparty na różnicach siły oddziaływań hydrofobowych. Białko wymywa się z gradientem acetonitrylu w rozcień czonym kwasie trifluorooctowym.
Preparatywną HPLC przeprowadzano stosując nierdzewną stalową kolumnę (wypełnioną 2,8 do 3,2 litra żelu krzemionkowego Vydac C4). Eluat z hydroksyapatytu Ultrogel zakwaszono dodając kwasu trifluorooctowego i naniesiono na kolumnę Vydac C4. Do przemycia i wymywania zastosowano gradient acetonitrylu w rozcieńczonym kwasie trifluorooctowym. Frakcje zbierano i od razu zobojętniano buforem fosforanowym. Zebrano frakcje EPO pozostające w zakresach IPC.
e) Chromatografia na DEAE Sepharose
Złoże DEAE Sepharose (Pharmacia) zawiera grupy dietyloaminoetylowe (DEAE) kowalencyjnie związane z powierzchnią ziaren Sepharose. W wiązaniu EPO z grupami DEAE biorą udział oddziaływania jonowe. Acetonitryl i kwas trifluorooctowy przechodzą przez kolumnę bez zatrzymywania. Po wymyciu tych substancji usuwa się śladowe zanieczyszczenia przemywając kolumnę buforem octanowym o niskim pH. Kolumnę przemywa się obojętnym buforem fosforanowym, a EPO wymywa się buforem o zwiększonej sile jonowej.
Kolumnę zapakowano DEAE Sepharose do szybkiego przepływu. Objętość kolumny ustawiono tak, żeby umożliwić załadowanie EPO w zakresie 3-10 mg EPO/ml żelu. Kolumnę przemyto wodą i równoważ ono buforem (fosforan sodu/potasu). Nał o ż ono połączone frakcje eluatu z HPLC i kolumnę przemyto buforem do równoważenia. Następnie kolumnę przemyto buforem do przemywania (bufor z octanu sodu), a następnie przemyto buforem do równoważenia. Następnie EPO wymyto z kolumny buforem do wymywania (chlorek sodu, fosforan sodu/potasu) i zebrano w jedną frakcję zgodnie z wzorcowym profilem wymywania.
Eluat z kolumny DEAE Sepharose doprowadzono do określonego przewodnictwa. Otrzymany lek wyjałowiono przez filtrację do butelek Teflon i przechowywano w -70°C.
P r z y k ł a d 2. PEG-ilacja EPO z użyciem mPEG-SBA
EPO oczyszczona według procedury z pożywką wolną od surowicy z przykładu 1 (EPOsf) była homogenna przy ocenie metodami analitycznymi oraz miała typowy wzór izoform składający się z 8 izoform. Miała ona właściwą aktywność biologiczną 190000 IU/mg, wyznaczoną w mysim teście normocytemicznym. Zastosowanym odczynnikiem PEG-ilującym był metoksy-PEG-SBA, związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R oznacza metyl, x oznacza 3 i m oznacza od 650 do 750 (średnio około 680, co odpowiada średniej masie cząsteczkowej około 30 kDa).
Reakcja PEG-ilacji
Do 100 mg EPOsf (9,71 ml przechowywanej EPOsf o stężeniu 10,3 mg/ml, 5,48 μmola) dodano 10 ml 0,1 M buforu z fosforanu potasu, pH 7,5 zawierającego 506 mg 30 kDa metoksy-PEG-SBA (16,5 μmol) (uzyskanego z Shearwater Polymers, Inc., Huntsville, Alabama) i mieszano przez 2 godziny w temperaturze pokojowej (20-23°C). Końcowe stężenie białka wynosiło 5 mg/ml, a stosunek białko:PEG wynosił 1 : 3. Po 2 godzinach reakcję zatrzymano doprowadzając pH lodowatym kwasem octowym do 4,5 i przechowywano w -20°C do czasu oczyszczania.
PL 202 758 B1
Oczyszczanie
1. Mieszanina koniugatów: Około 28 ml SP-SEPHAROSE FF (sulfopropylowy kationit) zapakowano do szklanej kolumny AMICON (2,2 x 7,5 cm) i równoważono 20 mM buforem octanowym pH 4,5 przy przepływie 150 ml/godz. Sześć ml mieszaniny reakcyjnej zawierającej 30 mg białka rozcieńczono 5-krotnie buforem do równoważenia i nałożono na kolumnę. Nie zaabsorbowany materiał wymyto buforem, a zaabsorbowany koniugat PEG wymyto z kolumny 0,175 M NaCl w buforze do równoważenia. Niezmodyfikowaną EPOsf nadal pozostającą na kolumnie wymyto 750 mM NaCl. Kolumnę ponownie równoważono wyjściowym buforem. Próbki analizowano metodą SDS-PAGE i określono ich stopień PEG-ilacji. Stwierdzono, że eluat z 0,175 M NaCl zawierał mono-, di- oraz śladowe ilości tri-PEG-ilowanych białek, podczas gdy eluat 750 mM NaCl zawierał niemodyfikowaną EPOsf.
2. Di-PEG i Mono-PEG-EPOsf: Oczyszczoną mieszaninę koniugatów wymytą z kolumny w poprzednim etapie rozcieńczono 4-krotnie buforem i ponownie naniesiono na kolumnę, którą przemyto w sposób opisany. Di-PEG-EPOsf i mono-PEG-EPOsf oddzielnie wymyto z kolumny odpowiednio 0,1 M NaCl i 0,175 M NaCl. Kolumnę przemyto także 750 mM NaCl, aby wymyć jakiekolwiek pozostałe niezmodyfikowane EPOsf.
Alternatywnie, mieszaninę reakcyjną rozcieńczono 5 razy buforem octowym i naniesiono na kolumnę SP-Sepharose (~0,5 mg białka/ml żelu). Kolumnę przemyto i zaabsorbowane mono-PEG-EPOsf, di-PEG-EPOsf oraz niezmodyfikowaną EPOsf wymyto w sposób opisany w poprzedniej części.
Wyniki
PEG-EPOsf zsyntetyzowano chemicznie drogą sprzęgania z liniową cząsteczką PEG o średniej masie cząsteczkowej 30 kDa. PEG-EPOsf otrzymano z reakcji pomiędzy pierwszorzędowymi grupami aminowymi EPOsf i estrem sukcynymidylowym kwasu PEG-masłowego o 30 kDa, w wyniku której powstaje wiązanie amidowe.
Wyniki zestawiono w tabeli 1. Oczyszczona mieszanina koniugatów zawierała mono- i di-PEG-EPOsf oraz wolną niezmodyfikowaną EPOsf, co oznaczono przy pomocy analizy SDS-PAGE. Mieszanina koniugatów zawierała 23,4 mg lub 78% materiału wyjściowego. Rozdział mono- i di-PEG-EPOsf przy pomocy chromatografii kationowymiennej wskazał, że stosunek mono- do di-PEG w mieszaninie koniugatów wynosił prawie 1 : 1. Po zakończeniu reakcji, stosunek poszczególnych składników Mono: Di : niezmodyfikowanej wynosił 40 : 38 : 20 (%). Ogólna wydajność była prawie ilościowa.
T a b e l a 1.
Zestawienie wyników PEG-ilacji EPOsf
Próbka Białko (mg) Wydajność (%)
Mieszanina reakcyjna 30 100
Mono- 12,0 40
Di- 11,4 38
Niezmodyfikowana 6,0 20
Mieszanina koniugatów 23,4 78
P r z y k ł a d 3. PEG-ilacja EPO z użyciem mPEG-SPA
Inną porcję EPOsf zastosowanej w przykładzie 2 poddano reakcji z 30 kDa metoksy-PEG-SPA (Shearwater Polymers, Inc., Huntsville, Alabama). Reakcję prowadzono przy stosunku białko : odczynnik 1 : 2, a techniki oczyszczania były takie jak w przykładzie 2. Wytworzono głównie mono-PEG-ilowane białka.
P r z y k ł a d 4. Aktywność in vivo PEG-ilowanej EPO oznaczona w mysim teście normocytemicznym
Mysi biologiczny test normocytemiczny jest znany (Pharm. Europa Spec. Issue Erythropoietin BRP Bio 1997(2)) i sposób opisany w monografii dotyczącej erytropoetyny, Ph. Eur. BRP. Próbki rozcieńczono z użyciem BSA-PBS. Normalnym zdrowym myszom, w wieku 7-15 tygodni, podano podskórnie 0,2 ml frakcji EPO zawierającej nie-PEG-ilowaną EPO lub tri-, di- albo mono-PEG-ilowaną EPO z przykładu 2 lub 3. Przez okres 6 dni, pobierano krew przez nakłucie żyły ogonowej i rozcieńczano tak, aby 1 μl krwi był obecny w 1 ml roztworu wybarwiającego z 0,15 umol oranżu akrydynowego. Czas wybarwiania wynosił 3 do 10 minut. Retykulocyty policzono mikrofluorometrycznie w cytometrze przepływowym analizując histogram czerwonej fluorescencji. Ilości retykulocytów podano w postaci
PL 202 758 B1 liczb bezwzględnych (na 30000 analizowanych komórek krwi). W danych prezentowanych każda grupa składała się z 5 myszy na dzień, i od każdej myszy pobierano krew tylko raz.
W odrębnych doświadczeniach myszom podano pojedynczą dawkę niezmodyfikowanej EPO (25 ng EPO), mieszaniny PEG(SBA)-EPO z przykładu 2 (10 ng koniugatu), mono- i di-PEG-ilowanych EPO z przykładu 2 (10 ng koniugatu), PEG(SPA)-EPO z przykładu 3 (10 ng koniugatu) i roztworu buforu. Wyniki zestawiono w tabeli 2. Można zaobserwować lepszą aktywność i przedłużony okres półtrwania PEG-ilowanych białek EPO, na co wskazują znacznie zwiększone ilości retykulocytów oraz przesunięcie maksimum zliczenia retykulocytów przy tej samej dawce na mysz (10 ng), w porównaniu z dawką 25 ng niemodyfikowanej EPO.
T a b e l a 2
EPO (niemodyfikowana) 30 kDa SPA PEG Mono 30K SBA Di 30K SBA Mieszanka koniugacyjna PEG-EPO SBA Bufor kontrolny
72h 1000 1393 1411 994 1328 857
96h 500 1406 1501 926 1338 697
120h około 200 1100 1182 791 944 701
144h około 0 535 607 665 660 708
P r z y k ł a d 5. Wytwarzanie głównie mono-PEG-EPO
Reakcja PEG-ilacji
Do 100 mg (5,48 μmol) EPOsf, w 100 mM buforze, fosforanie potasu, pH 7,5, wytworzonej według przykładu 1, dodano 329 mg (10,96 gmol) 30 kDa odczynnika PEG-SBA rozpuszczonego w 3 ml 1 mM HCl. Dodano wystarczającą ilość 100 mM buforu fosforanowo potasowego, pH 7,5, aby doprowadzić objętość mieszaniny reakcyjnej do 20 ml. Końcowe stężenie białka wynosiło 5 mg/ml i stosunek białko : środek PEG wynosił 1 : 2. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny w temperaturze otoczenia (20-22°C). Po 2 godzinach reakcję zatrzymano doprowadzając pH lodowatym kwasem octowym do 4,5 i przechowywano w -20°C do czasu oczyszczania.
Oczyszczanie
Mieszaninę reakcyjną z poprzedniego etapu rozcieńczono 1 : 5 10 mM octanem sodu, pH 4,5 i naniesiono na 300 ml SP-Sepharose FF (sulfopropylowy kationit) zapakowanej w kolumnie 4,2 x 19 cm. Kolumnę wcześniej równoważono tym samym buforem. Materiał wymywany z kolumny monitorowano przy 280 nm przy pomocy monitora Gilson UV i rejestrowano przy pomocy rejestratora Kipp and Zonen. Kolumnę przemyto 300 ml lub 1 objętością złoża buforu do równoważenia, aby usunąć nadmiar reagentów, produkty uboczne reakcji i oligomeryczne PEG-EPO. Następnie kolumnę przemyto 2 objętościami złoża 100 mM NaCl, aby usunąć di-PEG-EPO. Następnie mono-PEG-EPO wymyto 200 mM NaCl. Podczas wymywania mono-PEG-EPO odrzucono pierwsze 50 ml piku białka i zebrano mono-PEG-EPO w postaci 150 ml frakcji. Niezmodyfikowaną EPOsf pozostałą na kolumnie wymyto 750 mM NaCl. Wszystkie bufory do wymywania sporządzono w buforze do równoważenia. Wszystkie wymyte próbki zanalizowano metodą SDS-PAGE i wysokosprawnej chromatografii z wykluczeniem wymiarów (SEC). Mono-PEG-EPO zebraną w postaci 150 ml frakcji, w której nie wykryto niemodyfikowanej EPOsf, zagęszczono do ~ 4,5-7,5 mg/ml i poddano diafiltracji do buforu do przechowywania, 10 mM fosforan potasu, 100 mM NaCl, pH 7,5. Zagęszczanie/diafiltrację przeprowadzono przy pomocy układu Millipore Labscale™ TFF dostosowanego do wykluczających 50 kDa błon Millipore Pellicon XL Biomax 50 w temperaturze otoczenia. Zagęszczone mono-PEG-EPO wyjałowiono przez filtrację i zamrożono w -20°C.
Około 75% EPOsf było PEG-ilowanych. Po oczyszczaniu, całkowita wydajność wynosiła ~ 30% mono-PEG-EPO z niewykrywalną niemodyfikowaną EPOsf i około 25% di-PEG-EPO. Oligomery i niePEG-ilowane EPOsf stanowiły resztę białek. Mono-PEG-EPO uzyskana z 150 ml frakcji zawierała około 90% mono-PEG-EPO i około 10% di-PEG-EPO.
PL 202 758 B1
Wykaz sekwencji (1) Informacja ogólna (i) Zgłaszający (A) Nazwa: F.Hoffmann-La Roche AG (B) Ulica: 124 Grenzacherstrasse (C) Miasto: 3azylea (E) Kraj: Szwaj caria (F) Kod pocztowy: CH-4070
(G) Telefon: (61) 688 11 11
(H) Telefax: (61) 688 13 95
(I) Telex: 962 292 h Ir ch
(ii) Tytuł wynalazku: Koniugaty erytropoetyny (iii) Liczba sekwencji: 3
(iv) Postać do odczytu komputerowego:
(A) (B) (C) (D) Typ nośnika: dyskietka Komputer: kompatybilny z IBM PC System operacyjny: Word Program: Patentln Relkease 2.0
<170> Patentln Ver. . 2.0
<210> <211> <212> <213> 165 PRT Homo sapiens
<400>
Ala 1 Pro Pro Arg Leu Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr 15 Leu
Leu Glu Ala Lvs 20 C-lu Ala Glu Asn I j.e Thr Thr Gly Cys Ala 30 Glu His
Cys Ser Leu 35 Asn Glu Asn Ile Thr 40 Vai Pro Asp Thr Lys 4 5 Vai Asn Phe
Tyr Ala oO Trp tys Arg Mer Glu Vai 55 Gly Gin Gin Aj. a 60 Val Glu Vai Trp
Gin 65 Gly Leu A.la Leu Leu 70 Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gin A_a Leu 80
Leu Vai Asn Ser Ser 85 Gin Pro Tro Glu Pro Leu 90 Gin Leu His Vai 55 Asp
Lys Ala Val Ser 100 Gly Leu Arg Ser Leu 105 Thr Thr Leu Leu Arg 110 Ala Leu
Gly Ala Gin 115 Lys Glu Aj- a Ile Ser 120 Pro Pro Asp Ala Ala 125 Ser A-i. a Ala
Pro Leu 130 Arg Thr Ile Thr Ala Asp 135 Thr Phe Arg Lys 14 0 Leu Phe Arg Val
Tyr 145 Ser Asn Phe Leu Arg 150 Gly Lys Leu Lys Leu ” 155 Tyr Thr Gly Glu A-a 160
PL 202 758 B1
Cys Arg Thr Gly Asp 165 <210> 2 <211> 166 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2
Ala 1 Pro Pro Arg Leu 5 Ile Cys Asp Ser Arg 10 Val Leu Glu Arg Tyr 15 Leu
Leu Glu Ala Lys 20 Glu Ala Glu Asn Ile 25 Thr Thr Gly Cys Ala 30 Glu His
Cys Ser Leu 35 Asn Glu Asn Ile Thr 40 Val Pro Asp Thr Lys 45 Val Asn Phe
Tyr Ala 50 Trp Lys Arg Met Glu 55 Val Gly Gin Gin Ala 60 Val Glu Val Trp
Gin 65 Gly Leu Ala Leu Leu 70 Ser Glu Ala Val Leu 75 Arg Gly Gin Ala Leu 80
Leu Val Asn Ser Ser 85 Gin Pro Trp Glu Pro 90 Leu Gin Leu His Val 95 Asp
Lys Ala Val Ser 100 Gly Leu Arg Ser Leu 105 Thr Thr Leu Leu Arg 110 Ala Leu
Gly Ala Gin 115 Lys Glu Ala Ile Ser 120 Pro Pro Asp Ala Ala 125 Ser Ala Ala
Pro Leu 130 Arg Thr Ile Thr Ala 135 Asp Thr Phe Arg Lys 140 Leu Phe Arg Val
Tyr 145 Ser Asn Phe Leu Arg 150 Gly Lys Leu Lys Leu 155 Tyr Thr Gly Glu Ala 160
Cys Arg Thr Gly Asp Arg

Claims (18)

1. Koniugat zawierają cy glikoproteinę erytropoetynę maj ą c ą co najmniej jedną wolną grupę aminową i wykazującą in vivo działanie biologiczne powodujące zwiększenie produkcji retikulocytów i erytrocytów przez komórki szpiku kostnego, gdzie erytropoetyna jest ludzką erytropoetyną; przy czym ta glikoproteina jest kowalencyjnie połączona z „n” grupami poli(glikolu etylenowego) o wzorze -CO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR, przy czym grupa -CO każdej grupy poli(glikolu etylenowego) tworzy wiązanie amidowe z jedną z tych grup aminowych; R oznacza C1-C6-alkil; x oznacza 2 lub 3; m oznacza 450-900; a n oznacza 1-3; z tym, że n i m są tak dobrane, aby różnica masy cząsteczkowej koniugatu i masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła od 20 kilodaltonów do 100 kilodaltonów.
2. Koniugat wedł ug zastrz. 1 o wzorze P-[NHCO-(CH2)x-(OCH2CH2)m-OR]n, w którym x, m, n i R mają znaczenie podane w zastrz. 1, a P oznacza resztę glikoproteiny bez n grup(-y) aminowych(-ej) tworzących(-ej) wiązania(-e) amidowe z grupami(-ą) poli(glikolu etylenowego).
3. Koniugat według zastrz. 1 albo 2, w którym R oznacza metyl.
4. Koniugat według zastrz 1-3, w którym m oznacza 650-750.
5. Koniugat według zastrz. 1-4, w którym n oznacza 1.
6. Koniugat według zastrz. 1-5, w którym R oznacza metyl; m oznacza 650-750; a n oznacza 1.
7. Koniugat według zastrz. 1-6 o wzorze [CH3O(CH2CH2O)mCH2CH2CH2CO-NH]n-P, w którym m oznacza 650-750, n oznacza 1, a P ma znaczenie podane w zastrz. 2.
8. Koniugat wedł ug zastrz. 1-7 zawierają cy glikoproteinę ludzką erytropoetynę eksprymowaną przez aktywację endogennego genu.
9. Koniugat według zastrz. 1-8, zawierają cy glikoproteinę o sekwencji SEQ ID NO:1.
10. Koniugat według zastrz. 1, w którym R oznacza metyl; x oznacza 3; m oznacza 650 - 750;
a n oznacza 1; z tym, że n i m s ą tak dobrane, aby róż nica ś redniej masy cząsteczkowej koniugatu i ś redniej masy cząsteczkowej glikoproteiny erytropoetyny wynosiła około 30 kilodaltonów.
11. Kompozycja zawierająca koniugaty określone w zastrz. 1-10, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 90%.
12. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 92%.
13. Kompozycja według zastrz. 12, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi co najmniej 96%.
14. Kompozycja według zastrz. 11, znamienna tym, że zawartość koniugatów, w których n oznacza 1 wynosi 90-96%.
15. Środek farmaceutyczny zawierający farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę i substancję czynną, znamienny tym, że jako tę substancję czynną zawiera koniugat lub kompozycję określone w zastrz. 1-14.
16. Koniugaty określone w zastrz. 1-10 do leczenia chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnoś cią nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodz ą cych chemioterapię.
17. Zastosowanie koniugatu lub kompozycji określonych w zastrz. 1-14 do wytwarzania środków do leczenia lub profilaktyki chorób związanych z anemią u pacjentów z przewlekłą niewydolnością nerek (CRF), AIDS oraz do leczenia pacjentów z rakiem przechodzących chemioterapię.
18. Sposób wytwarzania związków koniugatów określonych w zastrz. 1-10, znamienny tym, że związek o wzorze przedstawionym na rysunku, w którym R, m i x mają znaczenie podane w zastrz. 1-6, poddaje się kondensacji z glikoproteiną erytropoetyną.
PL341187A 1999-07-02 2000-07-03 Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny PL202758B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US14225499P 1999-07-02 1999-07-02
US15022599P 1999-08-23 1999-08-23
US15154899P 1999-08-31 1999-08-31
US16615199P 1999-11-17 1999-11-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL341187A1 PL341187A1 (en) 2001-01-15
PL202758B1 true PL202758B1 (pl) 2009-07-31

Family

ID=27495518

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL341187A PL202758B1 (pl) 1999-07-02 2000-07-03 Koniugat zawierający glikoproteinę erytropoetynę, kompozycja zawierająca te koniugaty, środek farmaceutyczny, zastosowanie tych koniugatów i tych kompozycji oraz sposób wytwarzania koniugatów erytropoetyny

Country Status (51)

Country Link
US (2) US6583272B1 (pl)
EP (2) EP1064951B1 (pl)
JP (2) JP3727009B2 (pl)
KR (1) KR100593143B1 (pl)
CN (2) CN1283664C (pl)
AR (2) AR024625A1 (pl)
AT (1) ATE370748T1 (pl)
AU (1) AU736067B2 (pl)
BG (1) BG65449B1 (pl)
BR (2) BRPI0002276B8 (pl)
CA (1) CA2310536C (pl)
CO (1) CO5190661A1 (pl)
CY (2) CY1107719T1 (pl)
CZ (1) CZ299516B6 (pl)
DE (3) DE122007000064I2 (pl)
DK (1) DK1064951T3 (pl)
DO (1) DOP2000000030A (pl)
EA (1) EA003777B1 (pl)
ES (2) ES2289985T3 (pl)
FR (2) FR2795734B1 (pl)
GB (2) GB2393960C (pl)
GC (1) GC0000197A (pl)
GE (1) GEP20022804B (pl)
GT (1) GT200000109A (pl)
HR (1) HRP20000436B1 (pl)
HU (1) HU226233B1 (pl)
ID (1) ID26447A (pl)
IL (1) IL137056A0 (pl)
IS (1) IS2492B (pl)
IT (1) IT1318606B1 (pl)
LU (1) LU91363I2 (pl)
MA (1) MA26746A1 (pl)
MX (1) MXPA00006547A (pl)
MY (1) MY128500A (pl)
NL (1) NL300289I9 (pl)
NO (2) NO327043B1 (pl)
NZ (1) NZ505454A (pl)
OA (1) OA11442A (pl)
PA (1) PA8497801A1 (pl)
PE (1) PE20010297A1 (pl)
PL (1) PL202758B1 (pl)
PT (1) PT1064951E (pl)
RS (1) RS49928B (pl)
SG (1) SG92717A1 (pl)
SI (1) SI1064951T1 (pl)
SK (1) SK286301B6 (pl)
SV (1) SV2002000120A (pl)
TN (1) TNSN00147A1 (pl)
TR (1) TR200001956A2 (pl)
TW (1) TWI235667B (pl)
UY (1) UY26228A1 (pl)

Families Citing this family (231)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT1037927E (pt) * 1997-12-08 2004-10-29 Emd Lexigen Res Ct Corp Proteinas de fusao heterodimericas uteis para imunoterapia de abordagem selectiva e estimulacao imunologica geral
US20030105294A1 (en) * 1998-02-25 2003-06-05 Stephen Gillies Enhancing the circulating half life of antibody-based fusion proteins
ATE329622T1 (de) * 1998-04-15 2006-07-15 Lexigen Pharm Corp Steigerung der antikörper-zytokin- fusionsproteinmediierten immunantwort durch mitverabreichung mit einem angiogeneseinhibitor
US7304150B1 (en) 1998-10-23 2007-12-04 Amgen Inc. Methods and compositions for the prevention and treatment of anemia
US7345019B1 (en) * 1999-04-13 2008-03-18 The Kenneth S. Warren Institute, Inc. Modulation of excitable tissue function by peripherally administered erythropoietin
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
US7067110B1 (en) 1999-07-21 2006-06-27 Emd Lexigen Research Center Corp. Fc fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
SK782002A3 (en) 1999-07-21 2003-08-05 Lexigen Pharm Corp FC fusion proteins for enhancing the immunogenicity of protein and peptide antigens
BR0013231A (pt) * 1999-08-09 2002-07-23 Lexigen Pharm Corp Complexos citocina-anticorpo múltiplos
US20050202538A1 (en) * 1999-11-12 2005-09-15 Merck Patent Gmbh Fc-erythropoietin fusion protein with improved pharmacokinetics
EP1228214A2 (en) 1999-11-12 2002-08-07 MERCK PATENT GmbH Erythropoietin forms with improved properties
JP5179689B2 (ja) * 2000-02-11 2013-04-10 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 抗体ベース融合タンパク質の循環系内半減期の増強
US6586398B1 (en) * 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
JP3967594B2 (ja) † 2000-05-15 2007-08-29 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 新しい薬剤組成物
JP5390055B2 (ja) * 2000-06-29 2014-01-15 メルク パテント ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 免疫サイトカインの取り込み増強剤との併用治療による抗体−サイトカイン融合タンパク質媒介免疫応答の増強
ATE421535T1 (de) * 2000-10-16 2009-02-15 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Peg-modifiziertes erythropoietin
CA2431964C (en) * 2000-12-20 2013-09-10 F. Hoffmann-La Roche Ag Conjugates of erythropoietin (pep) with polyethylene glycol (peg)
DE60144439D1 (de) * 2000-12-20 2011-05-26 Hoffmann La Roche Konjugate von erythropoietin (epo) mit polyethylenglykol (peg)
US7767643B2 (en) 2000-12-29 2010-08-03 The Kenneth S. Warren Institute, Inc. Protection, restoration, and enhancement of erythropoietin-responsive cells, tissues and organs
US20030072737A1 (en) * 2000-12-29 2003-04-17 Michael Brines Tissue protective cytokines for the protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues and organs
EP1234583A1 (en) * 2001-02-23 2002-08-28 F. Hoffmann-La Roche Ag PEG-conjugates of HGF-NK4
HUP0303428A2 (hu) * 2001-03-07 2004-01-28 Merck Patent Gmbh. Expressziós eljárás hibrid izotípusú antitestcsoportot tartalmazó fehérjékhez
DE10112825A1 (de) 2001-03-16 2002-10-02 Fresenius Kabi De Gmbh HESylierung von Wirkstoffen in wässriger Lösung
WO2002079415A2 (en) * 2001-03-30 2002-10-10 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Reducing the immunogenicity of fusion proteins
KR100900166B1 (ko) 2001-05-03 2009-06-02 메르크 파텐트 게엠베하 재조합 종양 특이적 항체 및 이들의 용도
US6818613B2 (en) 2001-11-07 2004-11-16 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Aqueous sustained-release formulations of proteins
KR100467751B1 (ko) 2001-12-03 2005-01-24 씨제이 주식회사 생체내 에리스로포이에틴 활성이 증진된 융합단백질
ATE542137T1 (de) * 2001-12-04 2012-02-15 Merck Patent Gmbh Immunocytokine mit modulierter selektivität
CN102526045A (zh) * 2001-12-06 2012-07-04 法布罗根股份有限公司 提高内源性红细胞生成素(epo)的方法
DE10209822A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung niedermolekularer Substanzen an ein modifiziertes Polysaccharid
DE10209821A1 (de) 2002-03-06 2003-09-25 Biotechnologie Ges Mittelhesse Kopplung von Proteinen an ein modifiziertes Polysaccharid
WO2003078959A2 (en) 2002-03-11 2003-09-25 Ortho Mcneil Pharmaceutical, Inc Methods for shp1 mediated neuroprotection
US20040122216A1 (en) * 2002-07-01 2004-06-24 Jacob Nielsen Recombinant tissue protective cytokines and encoding nucleic acids thereof for protection, restoration, and enhancement of responsive cells, tissues, and organs
CN100337689C (zh) 2002-07-24 2007-09-19 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 聚亚烷基二醇酸加合物
US7459435B2 (en) * 2002-08-29 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US20050176627A1 (en) * 2002-09-09 2005-08-11 Anthony Cerami Long acting erythropoietins that maintain tissue protective activity of endogenous erythropoietin
CA2498319A1 (en) * 2002-09-09 2004-03-18 Nautilus Biotech Rational evolution of cytokines for higher stability, the cytokines and encoding nucleic acid molecules
MXPA05002594A (es) 2002-09-11 2005-05-27 Fresenius Kabi Gmbh Derivados de polipeptidos con hidroxialquilalmidon, especialmente derivados de eritropoyetina con hidroxialquilalmidon.
US7459436B2 (en) * 2002-11-22 2008-12-02 Hoffmann-La Roche Inc. Treatment of disturbances of iron distribution
US7388079B2 (en) * 2002-11-27 2008-06-17 The Regents Of The University Of California Delivery of pharmaceutical agents via the human insulin receptor
CN100432105C (zh) * 2002-12-17 2008-11-12 默克专利有限公司 与gd2结合的小鼠14.18抗体的人源化抗体(h14.18)以及其与il-2的融合
US7553930B2 (en) 2003-01-06 2009-06-30 Xencor, Inc. BAFF variants and methods thereof
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
US7610156B2 (en) 2003-03-31 2009-10-27 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
EP1610825A2 (en) 2003-03-31 2006-01-04 Xencor, Inc. Methods for rational pegylation of proteins
US7642340B2 (en) 2003-03-31 2010-01-05 Xencor, Inc. PEGylated TNF-α variant proteins
US7279174B2 (en) * 2003-05-08 2007-10-09 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Stent coatings comprising hydrophilic additives
EP1626983B8 (en) * 2003-05-12 2010-12-22 Affymax, Inc. Novel poly (ethylene glycol) modified erythropoietin agonists and uses thereof
ES2395413T3 (es) * 2003-05-12 2013-02-12 Affymax, Inc. Péptidos que se unen al receptor de eritropoyetina
DE602004020610D1 (de) * 2003-05-12 2009-05-28 Affymax Inc Neue, an den erythropoietinrezeptor bindende peptide
JP2007500218A (ja) * 2003-05-12 2007-01-11 アフィーマックス・インコーポレイテッド ポリ（エチレングリコール）修飾ペプチド系化合物の新規スペーサー部分
EP1641481A4 (en) * 2003-05-30 2008-10-15 Centocor Inc TRAINING OF NEW ERYTHROPOIETIN CONJUGATES USING TRANSGLUTAMINASE
WO2005011587A2 (en) * 2003-07-30 2005-02-10 New Century Pharmaceuticls Chalaropsis lysozyme protein and its method of use in anti-bacterial applications
WO2005014655A2 (en) 2003-08-08 2005-02-17 Fresenius Kabi Deutschland Gmbh Conjugates of hydroxyalkyl starch and a protein
JP2007517769A (ja) * 2003-09-29 2007-07-05 ウォーレン ファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド 敗血症および癒着形成の治療および予防のための組織保護性サイトカイン
CA2542353A1 (en) 2003-10-10 2005-04-21 Xencor, Inc. Protein based tnf-alpha variants for the treatment of tnf-alpha related disorders
JP2007514673A (ja) * 2003-12-19 2007-06-07 エフ．ホフマン−ラ　ロシュ　アーゲー 慢性炎症性腸疾患の際の鉄分布障害の処置におけるエリスロポエチンの使用
EP1548031A1 (en) * 2003-12-22 2005-06-29 Dubai Genetics FZ-LLC Nature-identical erythropoietin
BRPI0417916A (pt) * 2003-12-31 2007-04-10 Merck Patent Gmbh proteìna de fusão de fc-eritropoietina com farmacocinética melhorada
AU2005206549B2 (en) * 2004-01-21 2011-09-15 Nektar Therapeutics Method of preparing propionic acid-terminated polymers
ZA200606216B (en) * 2004-02-02 2007-11-28 Ambrx Inc Modified human interferon polypeptides and their uses
AR048035A1 (es) 2004-03-11 2006-03-22 Fresenius Kabi De Gmbh Conjugados de almidon de hidroxialquilo y una proteina, preparados por aminacion reductora
US7588745B2 (en) * 2004-04-13 2009-09-15 Si Options, Llc Silicon-containing products
US7253650B2 (en) 2004-05-25 2007-08-07 International Business Machines Corporation Increase productivity at wafer test using probe retest data analysis
WO2006062685A2 (en) * 2004-11-11 2006-06-15 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
WO2006060148A2 (en) * 2004-11-11 2006-06-08 Affymax, Inc. Novel peptides that bind to the erythropoietin receptor
NZ556726A (en) 2005-01-25 2011-04-29 Cell Therapeutics Inc Conjugates of biologically active proteins having a modified in vivo half-life
EP1848461A2 (en) * 2005-02-16 2007-10-31 Nektar Therapeutics Al, Corporation Conjugates of an epo moiety and a polymer
US7919461B2 (en) 2005-06-03 2011-04-05 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US8324159B2 (en) * 2005-06-03 2012-12-04 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US7550433B2 (en) * 2005-06-03 2009-06-23 Affymax, Inc. Erythropoietin receptor peptide formulations and uses
US20070072795A1 (en) * 2005-09-28 2007-03-29 Anton Haselbeck Treatment of neurodegenerative disorders
DK1931704T3 (da) * 2005-10-04 2011-03-14 Zymogenetics L L C Frembringelse og rensning af IL-29
US8053569B2 (en) * 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
US8124095B2 (en) * 2005-10-07 2012-02-28 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS
US8741260B2 (en) * 2005-10-07 2014-06-03 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of GDNF to the CNS
US20080171696A1 (en) * 2005-10-21 2008-07-17 Avigenics, Inc. Pharmacodynamically enhanced therapeutic proteins
AU2006304856A1 (en) * 2005-10-21 2007-04-26 Synageva Biopharma Corp. Glycolated and glycosylated poultry derived therapeutic proteins
US8178495B2 (en) 2008-06-27 2012-05-15 Duke University Therapeutic agents comprising a GLP-1 receptor agonist and elastin-like peptide
US8841255B2 (en) 2005-12-20 2014-09-23 Duke University Therapeutic agents comprising fusions of vasoactive intestinal peptide and elastic peptides
US20130172274A1 (en) * 2005-12-20 2013-07-04 Duke University Methods and compositions for delivering active agents with enhanced pharmacological properties
EP1988910B1 (en) * 2006-02-28 2017-12-06 Kodiak Sciences Inc. Acryloyloxyethylphosphorylcholine containing polymer conjugates and their preparation
EP1997505A4 (en) 2006-03-22 2013-02-13 Chugai Pharmaceutical Co Ltd PREPARATION OF A ERYTHROPOETIN SOLUTION
WO2008019214A1 (en) * 2006-08-04 2008-02-14 Prolong Pharmaceuticals, Inc. Modified erythropoietin
JP5959795B2 (ja) 2006-08-18 2016-08-02 アーメイゲン・テクノロジーズ・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ， Ｉｎｃ． 血液脳関門送達のための物質
EP2120998B1 (en) 2006-11-28 2013-08-07 HanAll Biopharma Co., Ltd. Modified erythropoietin polypeptides and uses thereof for treatment
AR065083A1 (es) * 2007-02-02 2009-05-13 Amgen Inc Hepcidina, antagonistas de la hepcidina y metodos de uso
US20090011040A1 (en) * 2007-05-02 2009-01-08 Naash Muna I Use of compacted nucleic acid nanoparticles in non-viral treatments of ocular diseases
CL2008002053A1 (es) * 2007-07-17 2009-05-22 Hoffmann La Roche Metodo para la purificacion de una eritropoyetina monopeguilada (epompeg) que consiste en proporcionar una solucion que contiene eritropoyetina mono, poli y no peguilada y hacerla pasar por dos pasos de cromatografia de intercambio cationico y metodo para producir epo mpeg que incluye metodo de purificacion.
CL2008002054A1 (es) * 2007-07-17 2009-05-29 Hoffmann La Roche Metodo para la regeneracion de una columna de cromatografia de intercambio cationico despues de la elusion de eritropoyetina monopeguilada y metodo para obtener una eritropoyetina monopeguilada, incorporando el metodo de regeneracion de la columna de intercambio cationico.
EP2997976A1 (en) 2007-07-27 2016-03-23 Armagen Technologies, Inc. Methods and compositions for increasing alpha-l-iduronidase activity in the cns
AU2008304111B2 (en) * 2007-09-27 2014-04-24 Amgen Inc. Pharmaceutical formulations
EP3381445B1 (en) 2007-11-15 2023-10-25 Amgen Inc. Aqueous formulation of antibody stablised by antioxidants for parenteral administration
US8101706B2 (en) * 2008-01-11 2012-01-24 Serina Therapeutics, Inc. Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same
US8110651B2 (en) 2008-01-11 2012-02-07 Serina Therapeutics, Inc. Multifunctional forms of polyoxazoline copolymers and drug compositions comprising the same
AU2009206306B2 (en) 2008-01-25 2013-06-06 Amgen Inc. Ferroportin antibodies and methods of use
NZ602170A (en) 2008-02-08 2014-03-28 Ambrx Inc Modified leptin polypeptides and their uses
TWI395593B (zh) 2008-03-06 2013-05-11 Halozyme Inc 可活化的基質降解酵素之活體內暫時性控制
EP2662090A1 (en) 2008-04-14 2013-11-13 Halozyme, Inc. Modified hyaluronidases and uses in treating hyaluronan-associated diseases and conditions
JP2011519279A (ja) 2008-05-01 2011-07-07 アムジエン・インコーポレーテツド 抗ヘプシジン抗体及び使用の方法
PL2342223T3 (pl) 2008-09-26 2017-09-29 Ambrx, Inc. Zmodyfikowane polipeptydy zwierzęcej erytropoetyny i ich zastosowania
EP2349332B1 (en) 2008-11-13 2019-10-23 The General Hospital Corporation Methods and compositions for regulating iron homeostasis by modulation bmp-6
EA036569B1 (ru) 2008-12-09 2020-11-24 Галозим, Инк. Способ получения полипептида гиалуронидазы ph20
US9533055B2 (en) 2009-03-18 2017-01-03 Armagen Technologies, Inc. Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of IgG-decoy receptor fusion proteins
CA2768326C (en) 2009-07-30 2019-01-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Moveable chromatography column separator
WO2011024025A1 (en) * 2009-08-28 2011-03-03 Avesthagen Limited An erythropoietin analogue and a method thereof
CN102655853B (zh) 2009-09-17 2015-07-29 巴克斯特卫生保健有限公司 透明质酸酶和免疫球蛋白的稳定的复合制剂及其使用方法
EA022396B1 (ru) * 2009-09-23 2015-12-30 Ратиофарм Гмбх Способ очистки рекомбинантного эритропоэтина человека (epo), эритропоэтин, очищенный данным способом, и фармацевтические композиции, содержащие такой эритропоэтин
SI2485761T1 (sl) 2009-10-09 2019-05-31 Armagen, Inc. Postopki in sestavki za povečanje aktivnosti iduronat-2-sulfataze v CŽS
MX344382B (es) 2009-10-23 2016-12-14 Amgen Inc * Adaptador de vial y sistema.
WO2011075185A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Oligasis Targeted drug phosphorylcholine polymer conjugates
RU2588658C2 (ru) 2010-04-27 2016-07-10 ЭсСиАйЭл Текнолоджи ГмбХ Стабильные водные композиции белка mia/cd-rap
ES2545411T5 (es) 2010-06-07 2024-04-05 Amgen Inc Dispositivo de administración de fármaco
MX348420B (es) 2010-07-20 2017-06-12 Halozyme Inc Efectos secundarios adversos asociados con la administracion de agentes anti-hialuronano y metodos para mejorar o prevenir los efectos secundarios.
RU2566267C2 (ru) 2010-09-14 2015-10-20 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Способ очистки пегилированного эритропоэтина
JP6073811B2 (ja) 2011-02-02 2017-02-01 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ クロマトグラフィーカラムサポート
ES2634669T3 (es) 2011-02-08 2017-09-28 Halozyme, Inc. Composición y formulación lipídica de una enzima de degradación de hialuronano y uso de la misma para el tratamiento de la hiperplasia benigna de próstata
CA2831100C (en) 2011-03-31 2020-02-18 Mark Dominis Holt Vial adapter and system
CA3021845C (en) 2011-04-20 2022-03-29 Amgen Inc. Autoinjector apparatus
US9993529B2 (en) 2011-06-17 2018-06-12 Halozyme, Inc. Stable formulations of a hyaluronan-degrading enzyme
LT3045187T (lt) 2011-10-14 2019-07-10 Amgen Inc. Injekcijų įrenginys ir surinkimo būdas
AU2012328880B2 (en) 2011-10-24 2017-02-23 Halozyme, Inc. Companion diagnostic for anti-hyaluronan agent therapy and methods of use thereof
US8486399B2 (en) 2011-12-02 2013-07-16 Armagen Technologies, Inc. Methods and compositions for increasing arylsulfatase A activity in the CNS
WO2013102144A2 (en) 2011-12-30 2013-07-04 Halozyme, Inc. Ph20 polypeptede variants, formulations and uses thereof
NZ700073A (en) 2012-04-04 2016-08-26 Halozyme Inc Combination therapy with an anti - hyaluronan agent and a tumor - targeted taxane
CN102816227A (zh) * 2012-08-30 2012-12-12 深圳赛保尔生物药业有限公司 回收促红细胞生成素的方法
US9278124B2 (en) 2012-10-16 2016-03-08 Halozyme, Inc. Hypoxia and hyaluronan and markers thereof for diagnosis and monitoring of diseases and conditions and related methods
SI3081249T1 (sl) 2012-11-21 2021-03-31 Amgen Inc. Naprava za dajanje zdravila
CN105142695B (zh) 2013-03-15 2020-06-02 安进公司 身体轮廓可调适的自动注射器装置
TWI580451B (zh) 2013-03-15 2017-05-01 安美基公司 用於注射器之匣盒及使用具有自動注射器及匣盒之自動注射器設備之方法
EP2968503B1 (en) 2013-03-15 2018-08-15 Intrinsic LifeSciences LLC Anti-hepcidin antibodies and uses thereof
EP2968775B1 (en) 2013-03-15 2019-12-18 Amgen Inc. Drug cassette, autoinjector, and autoinjector system
SG11201507878SA (en) 2013-03-22 2015-10-29 Amgen Inc Injector and method of assembly
TW201534726A (zh) 2013-07-03 2015-09-16 Halozyme Inc 熱穩定ｐｈ２０玻尿酸酶變異體及其用途
WO2015035342A2 (en) 2013-09-08 2015-03-12 Oligasis Llc Factor viii zwitterionic polymer conjugates
EP3060281B1 (en) 2013-10-24 2019-01-30 Amgen Inc. Drug delivery system with temperature-sensitive control
EP3421066B1 (en) 2013-10-24 2021-03-03 Amgen Inc. Injector and method of assembly
WO2015119906A1 (en) 2014-02-05 2015-08-13 Amgen Inc. Drug delivery system with electromagnetic field generator
JP6640113B2 (ja) 2014-05-07 2020-02-05 アムジエン・インコーポレーテツド 衝撃低減要素を有する自動注入器
CN112237662B (zh) 2014-06-03 2022-10-21 安姆根有限公司 药物递送系统和使用方法
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
EP3186281B1 (en) 2014-08-28 2019-04-10 Halozyme, Inc. Combination therapy with a hyaluronan-degrading enzyme and an immune checkpoint inhibitor
WO2016049036A1 (en) 2014-09-22 2016-03-31 Intrinsic Lifesciences Llc Humanized anti-hepcidin antibodies and uses thereof
BR112017007765B1 (pt) 2014-10-14 2023-10-03 Halozyme, Inc Composições de adenosina deaminase-2 (ada2), variantes do mesmo e métodos de usar o mesmo
WO2016061220A2 (en) 2014-10-14 2016-04-21 Amgen Inc. Drug injection device with visual and audio indicators
KR20210013299A (ko) 2014-10-17 2021-02-03 코디악 사이언시스 인코포레이티드 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트
EP3848072A1 (en) 2014-12-19 2021-07-14 Amgen Inc. Drug delivery device with proximity sensor
US11357916B2 (en) 2014-12-19 2022-06-14 Amgen Inc. Drug delivery device with live button or user interface field
US10538589B2 (en) 2015-01-14 2020-01-21 Armagen Inc. Methods and compositions for increasing N-acetylglucosaminidase (NAGLU) activity in the CNS using a fusion antibody comprising an anti-human insulin receptor antibody and NAGLU
CA2976935C (en) 2015-02-17 2020-03-10 Amgen Inc. Drug delivery device with vacuum assisted securement and/or feedback
WO2016138434A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Amgen Inc. Drug delivery device having a needle guard mechanism with a tunable threshold of resistance to needle guard movement
WO2017039786A1 (en) 2015-09-02 2017-03-09 Amgen Inc. Syringe assembly adapter for a syringe
ES2755717T3 (es) 2015-12-09 2020-04-23 Amgen Inc Autoinyector con tapa de señalización
KR20250057128A (ko) 2015-12-30 2025-04-28 코디악 사이언시스 인코포레이티드 항체 및 이의 접합체
US11154661B2 (en) 2016-01-06 2021-10-26 Amgen Inc. Auto-injector with signaling electronics
US11200298B2 (en) 2016-03-15 2021-12-14 Amgen Inc. Reducing probability of glass breakage in drug delivery devices
CN105820232B (zh) * 2016-04-08 2019-05-17 昂德生物药业有限公司 单修饰聚乙二醇重组人促红素的制备方法及其制品和应用
US11541168B2 (en) 2016-04-29 2023-01-03 Amgen Inc. Drug delivery device with messaging label
WO2017192287A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Amgen Inc. Syringe adapter and guide for filling an on-body injector
EP3455142B1 (en) 2016-05-13 2023-08-09 Amgen Inc. Vial sleeve assembly
US11238150B2 (en) 2016-05-16 2022-02-01 Amgen Inc. Data encryption in medical devices with limited computational capability
US11541176B2 (en) 2016-06-03 2023-01-03 Amgen Inc. Impact testing apparatuses and methods for drug delivery devices
WO2018004842A1 (en) 2016-07-01 2018-01-04 Amgen Inc. Drug delivery device having minimized risk of component fracture upon impact events
AU2017295037B2 (en) 2016-07-15 2021-07-22 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for purifying PEGylated erythropoietin
WO2018034784A1 (en) 2016-08-17 2018-02-22 Amgen Inc. Drug delivery device with placement detection
US20200261643A1 (en) 2016-10-25 2020-08-20 Amgen Inc. On-body injector
WO2018136398A1 (en) 2017-01-17 2018-07-26 Amgen Inc. Injection devices and related methods of use and assembly
US11369736B2 (en) 2017-02-17 2022-06-28 Amgen Inc. Cannula insertion and retraction mechanisms
US11752258B2 (en) 2017-02-17 2023-09-12 Amgen Inc. Drug delivery device with sterile fluid flowpath and related method of assembly
CA3050927A1 (en) 2017-03-06 2018-09-13 Brian Stonecipher Drug delivery device with activation prevention feature
KR102627069B1 (ko) 2017-03-07 2024-01-18 암겐 인코포레이티드 과압에 의한 바늘 삽입
EP3592404A1 (en) 2017-03-09 2020-01-15 Amgen Inc. Insertion mechanism for drug delivery device
EP3570871B1 (en) 2017-03-20 2020-11-18 H. Hoffnabb-La Roche Ag Method for in vitro glycoengineering of an erythropoiesis stimulating protein
KR102651078B1 (ko) 2017-03-28 2024-03-22 암겐 인코포레이티드 플런저 로드 및 주사기 조립 시스템 및 방법
JP7200134B2 (ja) 2017-06-08 2023-01-06 アムジエン・インコーポレーテツド トルク駆動式薬物送達デバイス
US11590294B2 (en) 2017-06-08 2023-02-28 Amgen Inc. Syringe assembly for a drug delivery device and method of assembly
JP7195276B2 (ja) 2017-06-22 2022-12-23 アムジエン・インコーポレーテツド デバイス起動による衝突／衝撃の低減
AU2018290281B2 (en) 2017-06-22 2021-12-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified membrane type serine protease 1 (MTSP-1) polypeptides and methods of use
MA49461A (fr) 2017-06-23 2020-04-29 Amgen Inc Dispositif électronique d'administration de médicament comprenant un bouchon activé par un ensemble commutateur
MA49562A (fr) 2017-07-14 2020-05-20 Amgen Inc Système d'insertion-rétractation d'aiguille présentant un système à ressort en double torsion
EP3655063A1 (en) 2017-07-21 2020-05-27 Amgen Inc. Gas permeable sealing member for drug container and methods of assembly
MA49677A (fr) 2017-07-25 2021-04-21 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament avec module d'engrenage et procédé d'assemblage associé
US11484648B2 (en) 2017-07-25 2022-11-01 Amgen Inc. Drug delivery device with container access system and related method of assembly
MA49838A (fr) 2017-08-09 2020-06-17 Amgen Inc Systèm de administration de médicaments avec pression hydraulique-pneumatique de chambre
WO2019036181A1 (en) 2017-08-18 2019-02-21 Amgen Inc. BODY INJECTOR WITH STERILE ADHESIVE PATCH
US11103636B2 (en) 2017-08-22 2021-08-31 Amgen Inc. Needle insertion mechanism for drug delivery device
WO2019070472A1 (en) 2017-10-04 2019-04-11 Amgen Inc. FLOW ADAPTER FOR MEDICATION DELIVERY DEVICE
CN111132711B (zh) 2017-10-06 2022-07-01 安进公司 带有联锁组件的药物递送装置及相关组装方法
MA50348A (fr) 2017-10-09 2020-08-19 Amgen Inc Dispositif d'administration de médicament comprenant un ensemble d'entraînement et procédé d'assemblage associé
WO2019090086A1 (en) 2017-11-03 2019-05-09 Amgen Inc. Systems and approaches for sterilizing a drug delivery device
US20200261648A1 (en) 2017-11-06 2020-08-20 Amgen Inc. Drug delivery device with placement and flow sensing
IL273664B1 (en) 2017-11-06 2026-02-01 Amgen Inc Full-fledged assemblies and related methods
IL319987A (en) 2017-11-10 2025-06-01 Amgen Inc Plungers for drug delivery devices
AU2018368338B2 (en) 2017-11-16 2024-07-25 Amgen Inc. Autoinjector with stall and end point detection
SG11202003004RA (en) 2017-11-16 2020-04-29 Amgen Inc Door latch mechanism for drug delivery device
JP7137625B2 (ja) 2017-12-29 2022-09-14 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法
HRP20220388T1 (hr) 2017-12-29 2022-05-27 F. Hoffmann - La Roche Ag Postupak za dobivanje pegiliranog proteinskog pripravka
JP7410860B2 (ja) 2017-12-29 2024-01-10 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー Ｐｅｇ化タンパク質組成物を提供するための方法
US12071476B2 (en) 2018-03-02 2024-08-27 Kodiak Sciences Inc. IL-6 antibodies and fusion constructs and conjugates thereof
US20190351031A1 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Halozyme, Inc. Methods of selecting subjects for combination cancer therapy with a polymer-conjugated soluble ph20
US10835685B2 (en) 2018-05-30 2020-11-17 Amgen Inc. Thermal spring release mechanism for a drug delivery device
US11083840B2 (en) 2018-06-01 2021-08-10 Amgen Inc. Modular fluid path assemblies for drug delivery devices
WO2020023451A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
WO2020023336A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with grip portion
WO2020023220A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Hybrid drug delivery devices with tacky skin attachment portion and related method of preparation
CA3103681A1 (en) 2018-07-24 2020-01-30 Amgen Inc. Delivery devices for administering drugs
EP3829692A1 (en) 2018-07-31 2021-06-09 Amgen Inc. Fluid path assembly for a drug delivery device
DK3613486T3 (da) * 2018-08-24 2021-01-04 Uga Biopharma Gmbh Metode og anlæg til rengøring af epo og/eller et epo-derivat
EP3856284A1 (en) 2018-09-24 2021-08-04 Amgen Inc. Interventional dosing systems and methods
MA53718A (fr) 2018-09-28 2022-01-05 Amgen Inc Ensemble d'activation d'échappement de fil de muscle pour un dispositif d'administration de médicament
MX2021003492A (es) 2018-10-02 2021-06-18 Amgen Inc Sistemas de inyeccion para la administracion de farmacos con transmision de fuerza interna.
JP7547325B2 (ja) 2018-10-05 2024-09-09 アムジエン・インコーポレーテツド 投薬量インジケータを有する薬物送達デバイス
AU2019359801B2 (en) 2018-10-15 2025-01-02 Amgen Inc. Platform assembly process for drug delivery device
SG11202103800RA (en) 2018-10-15 2021-05-28 Amgen Inc Drug delivery device having damping mechanism
TWI831847B (zh) 2018-11-01 2024-02-11 美商安進公司 部分針頭縮回之藥物遞送裝置及其操作方法
ES3010833T3 (en) 2018-11-01 2025-04-04 Amgen Inc Drug delivery devices with partial drug delivery member retraction
MA54057A (fr) 2018-11-01 2022-02-09 Amgen Inc Dispositifs d'administration de médicament à rétraction partielle d'élément d'administration de médicament
US11613744B2 (en) 2018-12-28 2023-03-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
WO2020140101A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 Catalyst Biosciences, Inc. Modified urokinase-type plasminogen activator polypeptides and methods of use
AU2020263289B2 (en) 2019-04-24 2025-05-22 Amgen Inc. Syringe sterilization verification assemblies and methods
MX2022002149A (es) 2019-08-23 2022-03-17 Amgen Inc Dispositivo de suministro de farmacos con componentes de acoplamiento de capuchon de aguja configurable y metodos relacionados.
AU2020364071A1 (en) 2019-10-10 2022-05-26 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
US20230331798A1 (en) 2020-09-22 2023-10-19 Jecho Laboratories, Inc. Glycosylation-modified erythopoietin and use thereof
WO2022159414A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Rochester Erythropoietin for gastroinfestinal dysfunction
TW202309062A (zh) 2021-05-10 2023-03-01 日商凱依歐姆 生物科學股份有限公司 抗體組成物之純化方法
MX2023013640A (es) 2021-05-21 2023-11-30 Amgen Inc Metodo de optimizacion de una receta de llenado para un contenedor de medicamento.
WO2023209074A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods of restoring erythropoiesis in patients suffering from a sf3b1 mutant myelodysplastic syndrome by correcting coasy mis-splicing
KR20250099137A (ko) 2022-11-02 2025-07-01 에프. 호프만-라 로슈 아게 당단백질 조성물의 생산 방법
CN116492448A (zh) * 2023-04-12 2023-07-28 深圳赛保尔生物药业有限公司 负载peg-epo及间充质干细胞的组合物、药物及其制备方法
WO2025227129A2 (en) 2024-04-25 2025-10-30 Starrock Pharma Llc Delivery vehicles comprising proglucagon derived polypeptides and anabolic polypeptides and uses thereof
WO2026030152A1 (en) 2024-07-29 2026-02-05 Amgen Inc. System and method for assessing transferability of a fill recipe

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
KR850004274A (ko) * 1983-12-13 1985-07-11 원본미기재 에리트로포이에틴의 제조방법
EP0154316B1 (en) 1984-03-06 1989-09-13 Takeda Chemical Industries, Ltd. Chemically modified lymphokine and production thereof
JPS6197229A (ja) 1984-10-18 1986-05-15 Chugai Pharmaceut Co Ltd 安定なエリトロポエチン製剤
US4917888A (en) 1985-06-26 1990-04-17 Cetus Corporation Solubilization of immunotoxins for pharmaceutical compositions using polymer conjugation
US5641663A (en) * 1985-11-06 1997-06-24 Cangene Corporation Expression system for the secretion of bioactive human granulocyte macrophage colony stimulating factor (GM-CSF) and other heterologous proteins from steptomyces
US4902502A (en) 1989-01-23 1990-02-20 Cetus Corporation Preparation of a polymer/interleukin-2 conjugate
US5166322A (en) 1989-04-21 1992-11-24 Genetics Institute Cysteine added variants of interleukin-3 and chemical modifications thereof
US5674534A (en) * 1992-06-11 1997-10-07 Alkermes, Inc. Composition for sustained release of non-aggregated erythropoietin
NZ250375A (en) 1992-12-09 1995-07-26 Ortho Pharma Corp Peg hydrazone and peg oxime linkage forming reagents and protein derivatives
US5359030A (en) * 1993-05-10 1994-10-25 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
US5681811A (en) 1993-05-10 1997-10-28 Protein Delivery, Inc. Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same
IL192290A0 (en) * 1993-08-17 2008-12-29 Kirin Amgen Inc Erythropoietin analogs
US5919455A (en) * 1993-10-27 1999-07-06 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5643575A (en) * 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US5932462A (en) * 1995-01-10 1999-08-03 Shearwater Polymers, Inc. Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces
DE741187T1 (de) 1995-05-05 1997-04-30 Hoffmann La Roche Rekombinante Obesitäts-(OB)-Proteine
US5672662A (en) 1995-07-07 1997-09-30 Shearwater Polymers, Inc. Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications
US6025324A (en) * 1996-05-15 2000-02-15 Hoffmann-La Roche Inc. Pegylated obese (ob) protein compositions
TW517067B (en) * 1996-05-31 2003-01-11 Hoffmann La Roche Interferon conjugates
DE69726571T2 (de) * 1997-09-01 2004-11-04 Aventis Pharma Deutschland Gmbh Rekombinantes humanes Erythropoietin mit vorteilhaftem Glykosylierungsmuster
CA2352538A1 (en) 1998-11-30 2000-06-08 Eli Lilly And Company Erythropoietic compounds
CZ299516B6 (cs) * 1999-07-02 2008-08-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Konjugát erythropoetinového glykoproteinu, zpusobjeho výroby a použití a farmaceutická kompozice sjeho obsahem
JO2291B1 (en) * 1999-07-02 2005-09-12 اف . هوفمان لاروش ايه جي Erythropoietin derivatives
WO2001068141A2 (en) 2000-03-17 2001-09-20 Maxygen Aps Dispersions of polypeptide conjugates
US6586398B1 (en) 2000-04-07 2003-07-01 Amgen, Inc. Chemically modified novel erythropoietin stimulating protein compositions and methods
JP3967594B2 (ja) * 2000-05-15 2007-08-29 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 新しい薬剤組成物

Also Published As

Publication number Publication date
HUP0002553A2 (en) 2001-03-28
ATE370748T1 (de) 2007-09-15
BG104570A (en) 2001-09-28
BG65449B1 (bg) 2008-08-29
PL341187A1 (en) 2001-01-15
NL300289I9 (nl) 2019-08-21
GB0016205D0 (en) 2000-08-23
JP2004155787A (ja) 2004-06-03
FR2795734B1 (fr) 2005-09-30
DE122007000064I2 (de) 2010-03-25
AU4274400A (en) 2001-01-04
EP1064951A3 (en) 2002-03-20
JP3727009B2 (ja) 2005-12-14
MXPA00006547A (es) 2004-10-28
CY1107719T1 (el) 2010-07-28
PT1064951E (pt) 2007-09-10
HRP20000436B1 (en) 2008-01-31
LU91363I9 (pl) 2018-12-31
ES2289985T3 (es) 2008-02-16
GEP20022804B (en) 2002-09-25
HK1068354A1 (en) 2005-04-29
EP1839676A2 (en) 2007-10-03
YU40700A (sh) 2003-12-31
ITMI20001479A0 (it) 2000-06-30
SI1064951T1 (sl) 2007-12-31
NZ505454A (en) 2001-12-21
GB2353281B (en) 2004-06-09
DE60036053D1 (de) 2007-10-04
EP1064951B1 (en) 2007-08-22
HU0002553D0 (en) 2000-08-28
CN1280137A (zh) 2001-01-17
FR07C0051I1 (pl) 2007-12-14
NO2009010I1 (no) 2009-05-25
GB2393960A (en) 2004-04-14
CA2310536A1 (en) 2001-01-02
US20030120045A1 (en) 2003-06-26
CY2007021I2 (el) 2009-11-04
US6583272B1 (en) 2003-06-24
IL137056A0 (en) 2001-06-14
HRP20000436A2 (en) 2001-06-30
HU226233B1 (en) 2008-07-28
SG92717A1 (en) 2002-11-19
UY26228A1 (es) 2000-10-31
DK1064951T3 (da) 2007-10-08
PE20010297A1 (es) 2001-03-07
NO2009010I2 (no) 2014-06-02
CY2007021I1 (el) 2009-11-04
GB2393960B (en) 2004-08-04
BRPI0002276B1 (pt) 2019-05-14
IS2492B (is) 2009-02-15
GB2393960C (en) 2012-08-29
AR024625A1 (es) 2002-10-16
SK286301B6 (en) 2008-07-07
JP2001064300A (ja) 2001-03-13
EP1839676A3 (en) 2008-09-03
AU736067B2 (en) 2001-07-26
CO5190661A1 (es) 2002-08-29
KR100593143B1 (ko) 2006-06-26
SK9872000A3 (en) 2002-06-04
MA26746A1 (fr) 2004-12-20
PA8497801A1 (es) 2001-12-14
TWI235667B (en) 2005-07-11
CN1184233C (zh) 2005-01-12
IT1318606B1 (it) 2003-08-27
NO20003372L (no) 2001-01-03
NO327043B1 (no) 2009-04-06
NO20003372D0 (no) 2000-06-28
CN1283664C (zh) 2006-11-08
BR0002276A (pt) 2001-12-11
HK1033328A1 (en) 2001-08-24
EP1064951A2 (en) 2001-01-03
TNSN00147A1 (fr) 2005-11-10
CN1515590A (zh) 2004-07-28
GC0000197A (en) 2006-03-29
NL300289I2 (nl) 2010-02-01
DOP2000000030A (es) 2002-07-15
ES2191511A1 (es) 2003-09-01
NL300289I1 (nl) 2007-11-01
GT200000109A (es) 2001-12-21
BRPI0002276B8 (pt) 2021-05-25
EA003777B1 (ru) 2003-08-28
ID26447A (id) 2001-01-04
GB2353281A (en) 2001-02-21
FR2795734A1 (fr) 2001-01-05
DE122007000064I1 (de) 2008-01-03
HUP0002553A3 (en) 2005-11-28
EA200000607A1 (ru) 2001-02-26
MY128500A (en) 2007-02-28
CZ299516B6 (cs) 2008-08-20
CZ20002386A3 (cs) 2002-04-17
OA11442A (fr) 2004-04-28
KR20010049676A (ko) 2001-06-15
DE60036053T2 (de) 2008-01-03
IS5554A (is) 2001-01-02
RS49928B (sr) 2008-09-29
TR200001956A2 (tr) 2001-01-22
CA2310536C (en) 2007-09-11
ES2191511B1 (es) 2005-01-01
FR07C0051I2 (fr) 2008-05-09
GB0400086D0 (en) 2004-02-04
ITMI20001479A1 (it) 2001-12-30
LU91363I2 (fr) 2007-11-12
DE10031839A1 (de) 2001-02-01
AR055650A2 (es) 2007-08-29
SV2002000120A (es) 2002-01-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2310536C (en) Erythropoietin derivatives
EP1196443B1 (en) Erythropoietin conjugates with polyethylenglycol
EP1432802B1 (en) Pegylated and diglycosylated erythropoietin
CN100528235C (zh) 红细胞生成素共轭物
PL219131B1 (pl) Ciekła kompozycja farmaceutyczna, sposób jej wytwarzania oraz jej zastosowanie
RU2232163C2 (ru) Конъюгаты эритропоэтина и полиэтиленгликоля, фармацевтические композиции (варианты), способ профилактического и/или терапевтического лечения нарушений и способ получения коньюгата или композиции

Legal Events

Date Code Title Description
VDSO Invalidation of derivated patent or utility model

Ref document number: 383975

Country of ref document: PL