PL204119B1 - Sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu, produkt zawierający te trójpeptydy, produkt zawierający te trójpeptydy do zastosowania jako czynnik przeciw nadciścnieniu, produkt do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych, produkt do zastosowania w przemyśle i produkt jadalny - Google Patents

Sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu, produkt zawierający te trójpeptydy, produkt zawierający te trójpeptydy do zastosowania jako czynnik przeciw nadciścnieniu, produkt do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych, produkt do zastosowania w przemyśle i produkt jadalny

Info

Publication number
PL204119B1
PL204119B1 PL355670A PL35567000A PL204119B1 PL 204119 B1 PL204119 B1 PL 204119B1 PL 355670 A PL355670 A PL 355670A PL 35567000 A PL35567000 A PL 35567000A PL 204119 B1 PL204119 B1 PL 204119B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
product
fermentation
nanofiltration
antihypertensive
casein
Prior art date
Application number
PL355670A
Other languages
English (en)
Other versions
PL355670A1 (pl
Inventor
Olli Tossavainen
Tarja Suomalainen
Janne Sahlstein
Annika Mayra-Makinen
Original Assignee
Valio Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Valio Ltd filed Critical Valio Ltd
Publication of PL355670A1 publication Critical patent/PL355670A1/pl
Publication of PL204119B1 publication Critical patent/PL204119B1/pl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
    • A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
    • A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/14—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment
    • A23C9/142—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration
    • A23C9/1427—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations in which the chemical composition of the milk is modified by non-chemical treatment by dialysis, reverse osmosis or ultrafiltration by dialysis, reverse osmosis or hyperfiltration, e.g. for concentrating or desalting
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
    • A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
    • A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
    • A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
    • A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
    • A23J3/341—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
    • A23J3/343—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of dairy proteins
    • A23J3/344—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of dairy proteins of casein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/52—Adding ingredients
    • A23L2/66—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11—Lactobacillus
    • A23V2400/147—Helveticus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225—Lactobacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Description

Opis wynalazku
Dziedzina wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu, produkt zawierający te trójpeptydy i produkt zawierający te trójpeptydy do zastosowania jako czynnik przeciw nadciśnieniu oraz produkt do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych, produkt do zastosowania w przemyśle i produkt jadalny.
Stan techniki
Choroby sercowo-naczyniowe są zaliczane do najbardziej powszechnych chorób społecznych w krajach rozwijających się i ich występowanie będzie dalej wzrastało w miarę jak populacja społeczeństw będzie się starzała. Wysokie ciśnienie krwi produkt jadalny znacząco przyczynia się do rozwoju tych chorób i dlatego, leczenie nadciśnienia jest jednym z ważnych zadań odnośnie zarówno zapobiegania jak i skuteczności leczenia.
Enzym ACE przekształcający angiotensynę I ma kluczową rolę w regulacji ciśnienia krwi na poziomie komórkowym. ACE działa na dwóch drogach: przekształca angiotensynę I w angiotensynę II, będącą silnym środkiem obkurczającym naczynia krwionośne i inaktywuje bradykininę, która z kolei ma działanie rozszerzające naczynia krwionośne. Zatem obie funkcje prowadzą do podwyższenia ciśnienia krwi. Inhibitory ACE mogą hamować ten efekt i w rezultacie działać jako czynniki przeciw nadciśnieniowe. Wiele znanych farmaceutyków stosowanych w leczeniu nadciśnienia krwi jest inhibitorami ACE. Jednym z nich jest captopril to znaczy D-2-metylo-3-merkaptopropanilo-L-prolina, który jest dostępny w handlu w Finlandii pod znakiem towarowym Capoten (Bristol-Myers Squibb) i Captopril Generic (Merck Generis).
Inne metody do obniżania wysokiego ciśnienia krwi były także poszukiwane jako alternatywa leczenia lub jako jej uzupełnienie. Obejmują one na przykład, unikanie otyłości, zwiększenie wysiłku w ćwiczeniach fizycznych i dietę nisko-sodawą. Jedną z najnowszych dróg jest stosowanie żywności czynnościowej jako część zwykłej diety, która przez konsumentów została dobrze przyjęta.
Stwierdzono, że fermentowane produkty mleczne zawierają peptydy posiadające działanie przeciw nadciśnieniowe. Przypuszcza się, że peptydy te są wytwarzane w produktach mlecznych jako wynik hydrolizy białek mleka przeprowadzanej przez bakterie kwasu mlekowego a zwłaszcza ich proteinazy pozakomórkowe. W J. Biochem 114 (1993) 740, Yamamoto i wsp., opisują oczyszczanie i charakterystykę proteinazy pochodzącej z mikroorganizmu Lactobacillus helveticus CP790. Yamamoto i wsp., opisali także na podstawie badań, w których aS1- i β-kazeina były hydrolizowane przez tą wspomnianą proteinazę, a otrzymane peptydy były badane pod względem ich inhibitorowego działania na ACE (J. Dairy Sci, 1994, 77:917). Ogólnie wszystkich zbadanych peptydów było 25 i ich ciężary cząsteczkowe oraz efekty działania znaczne się różniły. Najskuteczniejszymi z nich były trzy peptydy otrzymane z β-kazeiny i zawierające odpowiednio: 8, 18 i 27 aminokwasów. W badaniach tych porównano także aktywność ACE mleka fermentowanego szczepem Lactobacillus helveticus CP790 i jego wariantem - CP791 z defektywną aktywnością proteinazową, przez co ten pierwszy szczep został określony jako skuteczny w odniesieniu do szczurów ze spontanicznym nadciśnieniem SHR, ale nie w stosunku do szczepu szczurów normalnych, podczas gdy ten drugi szczep nie posiadał żadnej aktywności.
W J Dairy Sci 78 (1995) 777-783 Nakamura i wsp., opisują zastosowanie Lactobacillus helveticus i Saccharomyces cerevisae zawierających starter do przygotowywania inhibitorów ACE. Odtłuszczone mleko fermentowane było tym wspomnianym starterem, po czym inhibitory ACE były oczyszczane chromatograficznie i analizowane. Aktywnymi związkami były trójpeptydy Val-Pro-Pro i Ile-ProPro. Publikacja ta nie opisuje przeciw nadciśnieniowego działania trójpeptydów i preparatów ze zsiadłego mleka wytworzonych za pomocą tego startera, lecz wspomina się o tym, że ma to być przedmiotem następnych badań.
Opis patentowy Stanów Zjednoczonych Am. 5,449,661, (Nakamura i wsp.,) ujawnia przygotowanie peptydu zawierającego sekwencję trójpeptydową Val-Pro-Pro i jego zastosowanie do obniżania wysokiego ciśnienia krwi. Peptyd jest przygotowywany przez fermentowanie odtłuszczonego mleka w proszku szczepem Lactobacillus helveticus JCM-1004, po czym peptyd ten jest oczyszczany chromatograficznie i liofilizowany.
Międzynarodowe Zgłoszenie Patentowe WO 99/16862, Yamamoto i wsp., opisuje szczep Lactobacillus helveticus CM4, FERM BP-6060, który jest zdolny do wytwarzania dużych ilości trójpeptydu Val-Pro-Pro i/lub Ile-Pro-Pro, który wykazuje wysoką pozakomórkową aktywność proteazową. PubliPL 204 119 B1 kacja ta opisuje także produkty z fermentowanego mleka zawierające powyżej wspomniane trójpeptydy i bakterie oraz sposób ich przygotowywania przez fermentację wspomnianymi bakteriami produktów zawierających sekwencję trójpeptydu.
Z produktami zawierającymi peptydy przeciw nadciśnieniu wytwarzanymi w reakcji fermentacji bakteriami kwasu mlekowego, związane są dwie niedogodności. Głównym produktem fermentacji jest kwas mlekowy, i jest on wytwarzany coraz bardziej skutecznie w reakcji fermentacji. Jak wynika z samej definicji, kwas mlekowy jest kwaś ny i nadaje gorzkawy smak produktom zawierającym peptydy przeciw nadciśnieniu, a dodatkowo wielu konsumentów uznało wysoki stopień kwasowości i niskie pH za nieprzyjemne. Duża ilość jonów jednowartościowych, zwłaszcza jonów sodowych jest także obecna w produkcie zawierającym peptydy przeciw nadciśnieniu wytwarzanym przez fermentację. Wiadomo, że jony te podnoszą ciśnienie krwi i dlatego działają odwrotnie niżeli peptydy przeciw nadciśnieniu.
W stanie techniki opisuje się sposoby oczyszczania peptydów wytwarzanych w fermentacji. Sposoby te pozwalają na częściowe uniknięcie powyższych niedogodności, wtedy gdy otrzymywany jest produkt zatężony. Jednak, istotą sposobu w stanie techniki było dostarczenie produktów czystych i odpowiednich do analizy i do badania aktywnoś ci. Ponieważ , sposoby te są sposobami wieloetapowymi i w głównej mierze stanowią różne oczyszczania chromatograficzne nie są one odpowiednie do produkcji na dużą skalę.
Dlatego, istnieje wciąż oczywista potrzeba dostarczenia nowych czynnościowych produktów, które mają działanie przeciw nadciśnieniowe i które konsumenci uznają za przyjazne i uznane, i które dlatego mogą być łatwo stosowane jako część normalnej diety. Ważne jest, że produkty te nie zawierają nieprzyjemnych a nawet szkodliwych składników i, że są one łatwe w produkcji na skalę przemysłową.
Krótki opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP/VPP, polegający na tym, że fermentuje się materiał startowy zawierający kazeinę bakteriami kwasu mlekowego i otrzymany produkt fermentacji zawierający trójpeptydy poddaje się nanofiltracji.
Korzystnym startowym materiałem w sposobie według wynalazku jest kazeina. Mogą to być także korzystnie mleko lub produkty oparte na mleku.
W sposobie wedł ug wynalazku do fermentacji stosuje się mieszaninę bakterii kwasu mlekowego i innych mikroorganizmów, którymi korzystnie moż e być mikroorganizm Lactobacillus helveticus. W najbardziej korzystnym wariancie wynalazku mikroorganizmem tym jest szczep Lactobacillus helveticus LBK-16H, DSM 13137.
W sposobie według wynalazku, korzystnie można usuwać kazeinę z produktu fermentacji przed nanofiltracją. Ponadto można usuwać wszystkie białka mleka z produktu fermentacji przed nanofiltracją i ewentualnie także ponadto usuwa się laktozę z produktu fermentacji przed nanofiltracją.
Kolejno, przedmiotem wynalazku jest produkt zawierający trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP i/lub VPP, charakteryzujący się tym, że jest wytwarzany w sposobie obejmującym etapy:
a) fermentowania materiału startowego zawierającego kazeinę bakteriami kwasu mlekowego dla otrzymania produktu fermentacji zawierającego trójpeptydy, przy czym wspomniane bakterie kwasu mlekowego wytwarzają trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP i/lub VPP; b) usuwania co najmniej pewnej ilości kazeiny ze wspomnianego produktu zawierającego trójpeptydy przed nanofiltracją; c) filtrowania wspomnianego zawierającego trójpeptydy produktu fermentacji przez nanofiltrację; i d) odzyskiwania retentatu z wspomnianej nanofiltracji dla otrzymania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu.
W korzystnym wykonaniu produkt według wynalazku obejmuje mieszaninę peptydów krótkoł a ń cuchowych, a bardziej korzystnie produkt ten zawiera dwu- i trójpeptydy.
W kolejnym korzystnym wykonaniu produkt wedł ug wynalazku posiada wysoką zawartość trójpeptydów Ile-Pro-Pro i/lub Val-Pro-Pro, oraz produkt ten posiada wysoką zawartość kationów dwuwartościowych.
W innym korzystnym wykonaniu produkt posiada niską zawartość kationów jednowartościowych i produkt ten posiada zawartość suchej masy okoł o 20 do 60%.
Produkt według wynalazku jest wysuszony do proszku i posiada zawartość suchej masy przekraczającą 90%.
Według wynalazku produkt jak zdefiniowano powyżej jest do zastosowania jako czynnik przeciw nadciśnieniu.
PL 204 119 B1
Według wynalazku produkt jak zdefiniowano powyżej jest do zastosowania w przemyśle mleczarskim, przemyśle napojów, przetwórczym przemyśle spożywczym, przetwórczym przemyśle mięsnym, przemyśle piekarniczym lub przemyśle cukierniczym.
Przedmiotem wynalazku jest także produkt jadalny, charakteryzujący się tym, że zawiera produkt otrzymany sposobem tak jak zdefiniowano powyżej. Korzystnie, produkt ten jest fermentowanym produktem mlecznym, i bardziej korzystnie produkt ten może być napojem, w tym, napojem serwatkowym, napojem owocowym lub piwem.
Produkt według wynalazku posiada wysokie stężenie peptydów przeciw nadciśnieniu i konsekwentnie posiada działanie przeciw nadciśnieniowe.
Ponadto, poza wysoką zawartością peptydów przeciw nadciśnieniu, produkt według wynalazku ma korzystny skład soli, który oznacza, że ilość szkodliwych kationów jednowartościowych jest niska a ilość poż ytecznych kationów dwuwartoś ciowych jest wysoka w porównaniu ze znanym produktem, podobnego typu.
Sposób wytwarzania produktu według wynalazku, jest prosty do przeprowadzenia i dlatego odpowiedni do wytworzenia produktu na skalę przemysłową.
Wynalazek pozwala na zastosowanie trawionych w jamie ustnej produktów, takich jak żywność czynnościowa i farmaceutyki, które zawierają, jako jeden z aktywnych składników, powyżej pisane produkty.
Szczegółowy opis wynalazku
Zgodnie z niniejszym wynalazkiem stwierdzono, że przedmioty niniejszego wynalazku mogą być osiągnięte nowymi sposobami, które są oparte na nowej i wynalazczej kombinacji: wstępnego przygotowania peptydów przeciw nadciśnieniu przez fermentację, po czym zatężaniu i dalej na wykańczaniu kompozycji przez nanofiltrację. Ta kombinacja czynności w sposobie według wynalazku dostarcza doskonałej możliwości zastosowania materiałów startowych różnego typu i modyfikowania kompozycji tak aby produkt końcowy był pożądanego typu, tak jak opisano w szczegółach poniżej.
Zatem, niniejszy wynalazek dotyczy sposobu wytwarzania produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu, który to sposób charakteryzuje się tym, że zawiera etapy fermentowania materiału startowego zawierającego kazeinę za pomocą bakterii kwasu mlekowego i przeprowadzania nonofiltracji otrzymanego produktu zawierającego peptyd.
Niniejszy wynalazek dotyczy także produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu, który to produkt charakteryzuje się tym, że posiada wysoką zawartością peptydów przeciw nadciśnieniu, i wytworzony jest sposobem w którym, za pomocą bakterii kwasu mlekowego fermentowany jest materiał startowy zawierający kazeinę i przeprowadzona jest nonofiltracja produktu zawierającego ten peptyd.
Niniejszy wynalazek dotyczy także zastosowania powyżej opisanego produktu jako czynnika przeciw nadciśnieniowego.
Niniejszy wynalazek dotyczy także zastosowania powyżej opisanego produktu w wytwarzaniu substancji jadalnych.
Niniejszy wynalazek dotyczy także jadalnych produktów zawierających powyżej-wspomniany zatężony produkt z wysoką zawartością peptydu i konwencjonalnych dodatków w wspomnianym produkcie końcowym.
W pierwszym etapie sposobu według wynalazku, produkt zawierają cy peptydy przeciw nadciśnieniu wytwarzany jest przez fermentację. W fermentacji materiałem startowym jaki jest stosowany może być każdy produkt, który zawiera sekwencje pożądanych peptydów przeciw nadciśnieniu jako część ich własnych peptydów lub sekwencji białkowych. Białko mleka, zwłaszcza kazeina jest korzystnie stosowana ja taka lub w postaci różnych preparatów. Korzystnie, odpowiednie materiały startowe także obejmują różne zawierające kazeinę produkty mleczne, takie jak mleko odtłuszczone lub mleko z różną zawartością tłuszczu, jako takie lub w postaci odpowiadającego mleka w proszku i fermentowanych produktów mlecznych, takich jak kwaszone mleko, maślanka, jogurt, ser niedojrzały i tym podobne.
Fermentacja może być prowadzona każdą bakterią kwasu mlekowego, która zdolna jest do wytwarzania peptydu przeciw nadciśnieniu z materiału startowego. Odpowiednie bakterie kwasu mlekowego można wybrać spośród gatunków np., Lactobacillus, Lactococcus, Leuconostoc, Streptococcus, i rodzaju Bifidobacterium. Lactobacillus helveticus LBK-16H, jest najbardziej proteolityczną z bakterii kwasu mlekowego i dlatego jest uważany za szczególnie odpowiedni do tego celu. Korzystnym szczepem Lactobacillus helveticus jest szczep Lactobacillus helveticus LBK-16H. Bakterie kwasu mlekowego mogą być stosowane jako czysta kultura, osobno lub z konwencjonalnie stosowanymi
PL 204 119 B1 i dostę pnymi w handlu starterami. Bakterie kwasu mlekowego mogą być stosowane także z innymi mikroorganizmami. Odnośnie kombinacji mikroorganizmów, odpowiednie kombinacje są wybierane pod kątem efektu, którym jest najlepszy możliwy smak w produkcie końcowym oraz uniknięcie jakiegokolwiek zanieczyszczenia.
Warunki fermentacji są dobrane tak aby spełniały wymagania stosowanego w fermentacji szczepu i aby wytwarzana była odpowiednia ilość peptydu przeciw nadciśnieniu do dostarczenia pożądanego efektu. Wybór odpowiednich warunków temperatury, pH i napowietrzania, jest częścią wiedzy fachowca w tej dziedzinie. Temperatura może być na przykład od 30 do 45°C.
Fermentację prowadzi się aż do utworzenia pożądanej ilości peptydu przeciw nadciśnieniu. Normalnie, zabiera to około 20 do 30 godzin, korzystnie 22 do 24 godziny.
W fermentacji tworzona jest mieszanina różnych trójpeptydów. Jeż eli fermentacja trwa dostatecznie długo otrzymywane są głównie stosunkowo małe dwu- i trójpeptydy takie jak VPP (Val-ProPro) i IPP (Ile-Pro-Pro).
Po fermentacji, zawiesina komórkowa jest odzyskiwana. Może ona być stosowana jako taka do następnego etapu np., do oddzielania i zagęszczania peptydów. Zawiesinę komórek można także zagęszczać na przykład przez odparowanie lub przez suszenie częściowe lub pełne, takie jak przez rozprowadzenie na płytce, wysuszenie i na koniec zmielenie na dobrze dający się przechowywać proszek.
W niektórych przypadkach, właś ciwe jest poddanie produktu fermentowanego wstępnej obróbce na przykład w celu usunięcia kazeiny lub wszystkich białek mleka przed nanofiltracją. Sposoby mogące mieć zastosowanie we wstępnej c obróbce są znane w tej dziedzinie i obejmują np., różne metody precypitacji i filtracji. Jedna z nich obejmuje doprowadzenie pH fermentowanego produktu do zakresu takiego przy którym odbywa się precypitacja kazeiny, na przykład do 4,6 przy temperaturze około 37°C, po czym strącona kazeina jest oddzielana za pomocą separatora skrzepu i oddzielającego kazeinę sita, dekantera lub osadnika lub innych odpowiednich metod. Druga metoda obejmuje ultrafiltrację fermentowanego produktu przy pH 3 do 3,5, przez co wszystkie białka są pozostawione na membranie i otrzymany permeat jest prawie wolny od serwatki. Koprecypitację, która daje prawie wolną od białka zawierającą peptyd serwatkę, uzyskać można na przykład za pomocą dodania CaCl2, podziałaniem temperaturą lub dodaniem kwasu. Jeśli jest to konieczne ewentualny pył kazeinowy można usunąć przez odwirowanie. Inne substancje takie jak laktoza mogą być także usuwane przed nanofiltracją, przykład przez enzymatyczną hydrolizę lub przez fermentację.
Produkt fermentacji, który był ewentualnie traktowany wstępnie, tak jak serwatka opisana powyżej, jest następnie poddawany nanofiltracji. Jako membrana do nanofiltracji może być stosowane konwencjonalna membrana taka jak membrana NF - Nanomax (Millipore) lub Desal 5 (Desal Inc., USA) i wybrane są takie warunki aby spełnić wymagania instrukcji wytwórcy membran. Wybór typu membran nanofiltrujących i warunków sposobu wpływa znacząco na kompozycję i na otrzymane frakcje peptydowe, a zwłaszcza na skład soli i cukru.
Według wynalazku, nanofiltracja jest prowadzona do osiągnięcia pożądanej zawartości suchej masy lub stosunku stężenia objętościowego, które generalnie są tak wysokie jak to możliwe. Zawartość suchej masy jest w zakresie około 20 do 40% i stosunek stężenia objętościowego wynosi około 5 do 20. Koncentrat (serwatka) moż e być rozcieńczony wodą, przez co można usunąć więcej soli i kwasu mlekowego z koncentratu w nanofiltracji. Jest to prosta i skuteczna droga do doprowadzenia ilości soli w koncentracie do pożądanego poziomu.
Małe peptydy, takie jak trójpeptydy IPP i VPP o około 350 daltonów, tworzone w fermentacji i oddziałujące na ciśnienie krwi, są całkowicie zatrzymywane za pomocą membrany do nanofiltracji. Sposób ten według wynalazku umożliwia także całkowite usuniecie laktozy: przed etapem nanofiltracji, laktoza może być enzymatycznie rozkładana, przez co główna część monosacharydów jest usuwana. W nanofiltracji włączonej w sposobu według wynalazku, kwas mlekowy, azotowe związki niskocząsteczkowe takie jak mocznik i sole jednowartościowe także przenikają przez membranę. W ten sposób, zawartość peptydu w produkcie wzrasta przy pomocy nanofiltracji. W związku z zatężaniem, zawartość jonów dwuwartościowych, zwłaszcza pożądanych jonów wapnia i magnezu, podczas gdy względna proporcja jonów jednowartościowych takich jak jony sodowe, chlorkowe i potasowe spada. Zwłaszcza jony sodowe jak wiadomo posiadają znaczący wpływ na równowagę płynów i ciśnienia krwi w ciele ludzkim i dlatego spadek iloś ci tych szkodliwych jonów moż e być uznany za bardzo znacz ą c ą korzyść. Wapń i jony magnezowe z kolei wiadomo, że mają udział w obniżaniu ciśnienia krwi i wysoka zawartość tych jonów jest uważana za bardzo pożądaną.
PL 204 119 B1
Tabela 1 pokazuje jak składniki tworzone we wstępnym pre-preparacie w etapie fermentacji w sposobie wedł ug wynalazku zachowują się na etapie nanofiltracji. Kompozycja jest przedstawiona jako przykład w celu zilustrowania wynalazku i jest wytworzona przez fermentowanie mleka odtłuszczonego za pomocą szczepu Lactobacillus helveticus. Jak jasno wynika z opisu, inne produkty mogą być także stosowane jako materiały startowe. Ponadto, warunki fermentacji, nanofiltracja oraz inne parametry i dodatkowa obróbka, jeżeli jest stosowana, mają wpływ na wydajność, tak więc kompozycja ta i wynik nanofiltracji - produkt końcowy może różnić się i odbiegać od tego poniżej zaprezentowanego.
T a b e l a 1
Zachowanie w nanofiltracji składników serwatki zawierających peptydy przeciw nadciśnieniu
Membrana: Namomax 50; warunki: 40°C, 30 barów, stosunek zatężenia objętościowego C=9, pH 4,6
Ciężar cząsteczkowy D Retencja (%)
IPP 361,4 100
VPP 347,4 100
Kwas mlekowy 90,1 24
Ca 40,1 68
Mg 24,3 72
K 39,1 11
Na 23 10
Cl 35,5 9
PO4 95 47
Mocznik 60,1 ~ 10
Laktoza 342,3 63
Produkt zatężony do peptydów przeciw nadciśnieniu i otrzymany sposobem według wynalazku może być stosowany jako taki jako czynnik przeciw nadciśnieniu. Produkt ten może także być suszony i stosowany w postaci proszku lub liofilizowanego preparatu. Zgodnie z niniejszym wynalazkiem, produkt ten jest korzystnie stosowany do wytwarzania żywności czynnościowej lub innych produktów.
W niniejszym dokumencie, okreś lenie ż ywność jest stosowane w szerokim znaczeniu obejmującym wszystkie jadalne produkty, które mogą być w postaci stałej, żelowej lub płynnej i obejmują zarówno wyroby gotowe do jedzenia jak i wyroby, do których dodaje się produkt według wynalazku. Na przykład, żywność może być wytwarzana przez przemysł mleczarski, przetwórczy przemysł mięsny, przetwórczy przemysł spożywczy, przemysł napojów, przemysł piekarniczy lub cukierniczy. Produkty typowe obejmują produkty mleczne, takie jak jogurt, mleko zsiadłe, twaróg, mleko kwaśne, maślankę i inne napoje z mleka fermentowanego, sery twarogowe, sery niedojrzałe i sery dojrzewające, nadzienia przekąsek i tym podobne. Inną ważną grupę stanowią napoje takie jak napoje serwatkowe, napoje owocowe i piwa.
Produkt otrzymany zgodnie z wynalazkiem jest stosowany w skutecznej ilości w celu dostarczenia pożądanego efektu przeciw nadciśnieniowego. Ilość jaka powinna być stosowana zależy od stopnia zatężenia serwatki i wynosi np., 0,1 do 30%, korzystnie 5 do 15%, obliczanych na ciężar produktu końcowego.
Ponieważ sposób według wynalazku a zwłaszcza jego etap nanofiltracji, dostarczają dobrych podstaw do przygotowywania produktu o pożądanym typie, możliwe jest także zredukowanie zawartości składników posiadających negatywny wpływ na smak lub też usunięcie wspomnianych komponentów całkowite i w rezultacie zachowanie lub nawet ulepszenie smaku tego produktu.
Produkt zawierający peptydy przeciw nadciśnieniu może być dodawany do żywności podczas procesu wytwarzania lub do gotowej do spożycia żywności. Żywność zawiera zatem, powyżej opisany, zagęszczony produkt zawierający ponadto, poza innymi składnikami, które są konwencjonalnie stosowane w takiej żywności, peptydy przeciw nadciśnieniu, a ich smak i zastosowanie całkowicie odpowiada tym produktom konwencjonalnym.
PL 204 119 B1
Zatem, ten dwuetapowy sposób według wynalazku dostarcza produkt, który ma znacząco wyższą zawartość peptydów przeciw nadciśnieniu niż produkty wytwarzane tylko przez fermentację. Oprócz tej zawartości peptydu, sposób łatwo pozwala doprowadzić zawartość soli i ich wzajemnych proporcji do pożądanego poziomu. Zwłaszcza jest możliwym podwyższenie zawartości pożądanego jonu dwuwartościowego i redukcja szkodliwych jonów jednowartościowych. Sposób jest prosty i niedrogi i jest dobrze dopasowany do produkcji na wielką skalę i w tym odniesieniu różni się od sposobów opisanych w stanie techniki.
Ponadto, warto zanotować, że frakcja białkowa otrzymana z oddzielania kazeiny lub całkowitego białka może być stosowana odpowiednio do wytwarzania produktów przeciw nadciśnieniu, takich jak powyżej opisane produkty mleczne lub na przykład, kiełbaski.
Dalej wynalazek będzie opisany bardziej szczegółowo w przykładach wykonania.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 1
Przeciw nadciśnieniowy efekt produktu według wynalazku
Aktywność inhibitorową ACE oznaczano dla peptydów IPP i VPP i dla znanego inhibitora lizynoprylu na podstawie tak zwanej stałej inhibitorowej (Halmguist B., Bunning P., Riordan J. F., A continuous spectrophotometric assay for angiotensin converting enzyme, Analytical Biochemistry 95 (1979) 540-548). Liczby mniejsze oznaczają bardziej skuteczny inhibitor ACE. Wyniki są następujące: IPP 4,4 x 10-6, VPP 1,8 x 10-5 i lizynopryl 7,5 x 10-9. Stwierdzono, że IPP i VPP posiadały wyraźnie inhibitorową aktywność w stosunku do ACE.
Efekt przeciw nadciśnieniowy produktu według wynalazku badany był przez podawanie od urodzenia szczurom SHR ze spontanicznym nadciśnieniem produktu kwaśnego mleka według wynalazku opisanego w Przykładzie 5. Kontrolę stanowiły trzy grupy szczurów którym podawano odpowiednio, wodę, mleko i dostępne w handlu mleko kwaśne. Jako porównawcza grupa stosowana była grupa szczurów, która dostawała produkt kwaśnego mleka Japanese Calpis (wytworzony przez Calpis Food Industry Company Ltd.). Ciśnienie krwi wszystkich szczurów, było mierzone w interwałach jednotygodniowych przez 13 tygodni. Wyniki przedstawione są na Figurze 1 jako wzrost ciśnienia skurczowego w funkcji czasu. Jest wyraźnie widoczne, że produkt według wynalazku jest zdolny do zapobiegania znaczącemu podwyższeniu ciśnienia krwi zarówno jak porównano grupy kontrolne i grupy porównawcze.
P r z y k ł a d p o r ó w n a w c z y 2
Przeciw nadciśnieniowy efekt działania produktu według wynalazku
Przeciw nadciśnieniowy efekt działania produktu według wynalazku badano także na ludziach. We wstępnym teście grupa testowa składała się z 12 przypadkowo dobranych osób, które dziennie spożywały 1,5 dl produktu według wynalazku opisanego w Przykładzie 5 i grupę kontrolną stanowiło wybranych losowo 11 osób, które spożywały równe ilości handlowo dostępnego mleka odtłuszczonego. Ciśnienie krwi mierzono w przedziałach jednotygodniowych przez 8 tygodni. Ciśnienie krwi ośmiu osób w tej grupie testowej było wyraźnie zredukowane: ciśnienie skurczowe o około 13% średniej i ciś nienie rozkurczowe o około 12% ś redniej, u jednej osoby obserwowano mniej ni ż 5% redukcję ciśnienia krwi i u trzech osób zmian nie zaobserwowano. W grupie kontrolnej u dwóch osób zaobserwowano wyraźną redukcję ciśnienia krwi, podczas gdy u siedmiu osób zmian nie zaobserwowano. Wyniki z dwóch osób odrzucono. Wyniki tego wstępnego testu wskazują zatem, że produkt według wynalazku jest zdolny do zapobiegania znaczącemu podwyższeniu ciśnienia krwi u ludzi.
P r z y k ł a d 1
Wytwarzanie produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu
Szczep Lactobacillus helveticus LBK-16H hodowany był w bulionie MRS w temperaturze 37°C przez 24 godziny i był zaszczepiany na odtworzonym mleku (10%) w celu utworzenia inokulum. Po dwóch rundach hodowli to inokulum (15%) było zaszczepiane na medium fermentora, stanowiącego 9 do 10% mleko uzyskane z odtł uszczonego mleka w proszku i które był o sterylizowane w 100°C przez 10 minut. Fermentację prowadzono przy 37°C przez 22 do 24 godzin, energicznie mieszając przez cały czas. Produkt był suszony i proszkowany lub przenoszony jako taki do nanofiltracji.
pH fermentowanego mleka kwaśnego otrzymanego w powyżej otrzymany sposób było podwyższone do około 4,6 przy pomocy KOH i kazeinę usunięto za pomocą ekranu przechylnego. Pozostały pył kazeinowy usuwano przez wirowanie oczyszczające. Do tej serwatki dodawano laktozę GLL Conc. (Biocon Ltd., Japan) i doprowadzano do hydrolizy w 5°C przez 24 godziny dla degradowania laktozy do monsacharydów. Serwatka traktowana wstępnie w ten sposób była nanofiltrowana przez membranę Nanomax-50 (Millipore).
PL 204 119 B1
Filtrację przeprowadzono w 40°C i pod ciśnieniem 30 barów. Serwatkę filtrowano do proporcji 9 zatężenia objętościowego. Skład otrzymanego koncentratu i wytworzonego z niego suchego proszku są przedstawione w Tabeli 2.
T a b e l a 2
Skład koncentratu i suchego proszku zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu
Koncentrat peptydowy Suchy proszek
Sucha masa (%) 30,0 94,5
Popiół (%) 3,69 13,3
Na (mg/kg) 130 470
K (mg/kg) 1600 5600
Ca (mg/kg) 10000 3600
Mg (mg/kg) 1700 6300
Cl (mg/kg) 550 2000
P (mg/kg) 6700 24500
IPP (mg/l) 510 2500
VPP (mg/l) 540 2700
Usuniętą kazeinę zobojętniano do kazeinianu i suszono.
P r z y k ł a d 2
Wytwarzanie produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu
Fermentacja opisana w Przykładzie 1 była powtarzana przez zastosowanie (a) mleka zawierającego tłuszcz i (b) maślanki w miejsce odtłuszczonego mleka.
pH produktu z Przykładu 2 (b) było podwyższone do około 4,5 i kazeinę usuwano separatorem skrzepu. Do serwatki dodawano laktozę i pył usuwano za pomocą baktofugi. Serwatka była następnie nanofiltrowana przez membranę NF (Desal-5,CK. &r Desal Inc.), odparowywana i suszona. Kompozycja otrzymanego nanofiltrowanego koncentratu była podobna do tego prezentowanego w Tabeli 2.
Usunięta kazeina zawiera duże ilości serwatki, której zawartość peptydu przeciw nadciśnieniu równa jest zawartości w fermentowanym mleku surowym. Kazeina stosowana była jako taka w twarogu, do którego peptydy przeciw nadciśnieniu były wprowadzane w ten sposób.
P r z y k ł a d 3
Wytwarzanie produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu
Szczep Lactobacillus helveticus LBK-16H, hodowany był w bulionie MRS w 37°C przez 24 godziny w celu wytworzenia inoculum jak opisano w Przykładzie 1. Inoculum zaszczepiano w medium fermentora, które stanowiło wodny roztwór kazeiny strąconej kwasem (2,8%) i glukozy (2,5%). Kazeinę rozpuszczano przez podniesienie pH do 6,7 za pomocą 10% KOH. Hodowlę prowadzono przez 24 godziny w 37°C. W produkcie, było możliwym wytworzenie peptydów przeciw nadciśnieniu (VPP, IPP) w ilościach odpowiadających wytworzonym w fermentującym mleku, ale łatwiej było oddzielać peptydy z roztworu kazeinowego niż z mleka.
pH bulionu fermentacyjnego podnoszono przez KOH do 4,6 w temperaturze 37°C, przez co kazeinę strącono. Kazeinę oddzielono separatorem skrzepu i otrzymaną serwatkę odzyskiwano. Serwatka zawiera peptydy, kwas mlekowy oraz sole i laktozę. Główna część kwasu mlekowego i soli jednowartościowych i resztkowej glukozy z tej serwatki może być usuwana przez nanofiltrację. Retenat z nanofiltracji mo ż e być odparowywany do zatężenia lub suszony do proszku, przez co uzyskuje si ę lepiej zatężony i dłużej trwały w przechowywaniu preparat zawierający peptydy przeciw nadciśnieniu.
P r z y k ł a d 4
Wytwarzanie produktu zawierającego peptydy przeciw nadciśnieniu
Fermentację powtarzano przez zastosowanie (a) mieszanki wielu szczepów to znaczy: L. helveticus LB161, L. helveticus LBK-16H i L. helveticus LB230, (b) mieszanki szczepów L. helveticus LBK16H i L. rhamnosus LC705, i (c) mieszanki szczepów L. helveticus LBK-16H i Streptococcus thermophilus T101. Wszystkie te szczepy są dostępne z kolekcji mikroorganizmów Valio Oy.
PL 204 119 B1
Stosowanym środowiskiem hodowlanym było 9% mleko, które było sterylizowane w 100°C przez 15 minut. Dla wytworzenia inokulum, szczepy L. helveticus i L. rhanomosus LC705 hodowano w bulionie MRS przez 24 godziny, w 37°C, z którego 1% inokulum przenoszono do mleka. Str. thermophilus T101 hodowano w bulionie LM17 przez 18 godzin, w 37°C, po czym inokulum przenoszono do mleka.
Pierwszą hodowlę przeprowadzono przez hodowanie wszystkich szczepów osobno w mleku, inkubację w 37°C przez 24 godziny. Do drugiej hodowli, 1% szczepu każdej mieszaniny pipetowano do mleka, a następnie łączną hodowlę kontynuowano przez 24 godziny w 37°C. Dla trzeciej hodowli, 5 do 10% pierwotnie otrzymanej hodowli łączonej pipetowano do mleka i hodowano w 37°C przez 24 godziny.
Ilości VPP i IPP wytworzone przez szczep L. helveticus LBK-16H i różne mieszaniny mikrobów oraz stężanie pewnych bakterii przedstawiono w Tabeli 3. Nie obserwowano wzajemnych różnic pomiędzy mieszaninami szczepów ani samym szczepem LBK-16H, lecz inne szczepy nie zmieniały także proteolizy.
T a b e l a 3
Ilości IPP i VPP wytwarzane przez szczep mieszaniny mikrobów
Drobnoustrój (mieszanina) VPP, mg/l IPP, mg/l Stężenie cfu/ml
L161+LBK-16H+LB230, 5% 13-14 6-7
L161+LBK-16H+LB230, 10% 13-14 6-7
LBK16H+LC705, 5% 13-14 6-7
LBK16H+LC705, 10% 13-14 6-7
LBK16H+Str.T101, 10% 13-15 6-8 1 x 108
LBK16H (sam) 13-15 6-8 7 x 107
P r z y k ł a d 5
Przygotowywanie produktu mleka fermentowanego
Mleko kwaśne zawierające peptydy przeciw nadciśnieniu było sporządzane przez dodawanie
3,3% koncentratu peptydowego otrzymanego tak jak w Przykładzie 3 do dostępnego w sprzedaży mleka kwaśnego. Kompozycję otrzymanego produktu przedstawiono w Tabeli 4, która pokazuje także kompozycję dostępnego produktu mleka kwaśnego, mleko kwaśne AB, Valio Oy, dla celów porównawczych.
T a b e l a 4
Skład produktu według wynalazku i dostępnego w handlu produktu mleka kwaśnego
Kwaśne mleko AB Produkt według wynalazku Biopep
Sucha masa (%) 9,0 9,8
Na (mg/kg) 390 380
K (mg/kg) 1700 1700
Ca (mg/kg) 1200 1510
Mg (mg/kg) 114 170
Cl (mg/kg) 1000 980
VPP (mg/l) 0 19
IPP (mg/l) 0 18

Claims (23)

1. Sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP/VPP, znamienny tym, że fermentuje się materiał startowy zawierający kazeinę bakteriami kwasu mlekowego i otrzymany produkt fermentacji zawierający trójpeptydy poddaje się nanofiltracji.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że startowym materiałem jest kazeina.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że startowym materiałem jest mleko lub produkty oparte na mleku.
4. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, znamienny tym, że do fermentacji stosuje się mieszaninę bakterii kwasu mlekowego i innych mikroorganizmów.
5. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, znamienny tym, że do fermentacji stosuje się mikroorganizm Lactobacillus helveticus.
6. Sposób według zastrz. 5, znamienny tym, że mikroorganizmem jest szczep Lactobacillus helveticus LBK-16H, DSM 13137.
7. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, znamienny tym, że ponadto usuwa się kazeinę z produktu fermentacji przed nanofiltracją.
8. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, znamienny tym, że ponadto usuwa się wszystkie białka mleka z produktu fermentacji przed nanofiltracją.
9. Sposób według zastrz. 1, albo 2, albo 3, znamienny tym, że ponadto usuwa się laktozę z produktu fermentacji przed nanofiltracją.
10. Produkt zawierający trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP i/lub VPP, znamienny tym, że jest wytwarzany w sposobie obejmującym etapy:
a) fermentowania materiału startowego zawierającego kazeinę bakteriami kwasu mlekowego dla otrzymania produktu fermentacji zawierającego trójpeptydy, przy czym wspomniane bakterie kwasu mlekowego wytwarzają trójpeptydy przeciw nadciśnieniu IPP i/lub VPP; b) usuwania co najmniej pewnej ilości kazeiny ze wspomnianego produktu zawierającego trójpeptydy przed nanofiltracją; c) filtrowania wspomnianego zawierającego trójpeptydy produktu fermentacji przez nanofiltrację; i d) odzyskiwania retentatu z wspomnianej nanofiltracji dla otrzymania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu.
11. Produkt według zastrz. 10, znamienny tym, że produkt ten obejmuje mieszaninę peptydów krótkołańcuchowych.
12. Produkt według zastrz. 10, znamienny tym, że produkt ten zawiera dwu- i trójpeptydy.
13. Produkt według zastrz. 10, albo 11, albo 12, znamienny tym, że produkt ten posiada wysoką zawartość trójpeptydów Ile-Pro-Pro i/lub Val-Pro-Pro.
14. Produkt według zastrz. 10, albo 11, albo 12, albo 13, znamienny tym, że produkt ten posiada wysoką zawartość kationów dwuwartościowych.
15. Produkt według 10, albo 11, albo 12, albo 13, albo 14, znamienny tym, że produkt ten posiada niską zawartość kationów jednowartościowych.
16. Produkt według zastrz. 10, albo 11, albo 12, albo 13, albo 14, albo 15, znamienny tym, że produkt ten posiada zawartość suchej masy około 20 do 60%.
17. Produkt według 10, albo 11, albo 12, albo 13, albo 14, albo 15, albo 16, znamienny tym, że produkt ten jest wysuszony do proszku i posiada zawartość suchej masy przekraczającą 90%.
18. Produkt jak zdefiniowano w jednym z zastrz. od 10 do 17 do zastosowania jako czynnik przeciw nadciśnieniu.
19. Produkt jak zdefiniowano w jednym z zastrz. od 10 do 17 do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych.
20. Produkt jak zdefiniowano w jednym z zastrz. od 10 do 17 do zastosowania w przemyśle mleczarskim, przemyśle napojów, przetwórczym przemyśle spożywczym, przetwórczym przemyśle mięsnym, przemyśle piekarniczym lub przemyśle cukierniczym.
21. Produkt jadalny, znamienny tym, że zawiera produkt tak jak zdefiniowano w jednym z zastrz. od 10 do 20.
22. Produkt jadalny, według zastrz. 21, znamienny tym, że stanowi go fermentowany produkt mleczny.
23. Produkt jadalny według zastrz. 21, znamienny tym, że produkt ten stanowi napój, korzystnie napój serwatkowy, napój owocowy lub piwo.
PL355670A 1999-11-01 2000-10-30 Sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu, produkt zawierający te trójpeptydy, produkt zawierający te trójpeptydy do zastosowania jako czynnik przeciw nadciścnieniu, produkt do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych, produkt do zastosowania w przemyśle i produkt jadalny PL204119B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FI992360A FI113741B (fi) 1999-11-01 1999-11-01 Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi
PCT/FI2000/000942 WO2001032905A1 (en) 1999-11-01 2000-10-30 Process for producing a product containing antihypertensive tripeptides

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL355670A1 PL355670A1 (pl) 2004-05-04
PL204119B1 true PL204119B1 (pl) 2009-12-31

Family

ID=8555541

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL355670A PL204119B1 (pl) 1999-11-01 2000-10-30 Sposób wytwarzania produktu zawierającego trójpeptydy przeciw nadciśnieniu, produkt zawierający te trójpeptydy, produkt zawierający te trójpeptydy do zastosowania jako czynnik przeciw nadciścnieniu, produkt do zastosowania w wytwarzaniu substancji jadalnych, produkt do zastosowania w przemyśle i produkt jadalny
PL00364790A PL364790A1 (pl) 1999-11-01 2000-10-30 Lactobacillus helveticus wytwarzający dwu-i trójpeptydy przeciw nadciśnieniu

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL00364790A PL364790A1 (pl) 1999-11-01 2000-10-30 Lactobacillus helveticus wytwarzający dwu-i trójpeptydy przeciw nadciśnieniu

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6890529B1 (pl)
EP (2) EP1226267B1 (pl)
JP (2) JP4172681B2 (pl)
KR (2) KR100704441B1 (pl)
CN (2) CN1197956C (pl)
AT (2) ATE266735T1 (pl)
AU (2) AU769432B2 (pl)
CA (2) CA2388354A1 (pl)
CZ (2) CZ294146B6 (pl)
DE (2) DE60016959T2 (pl)
DK (2) DK1226267T3 (pl)
EE (2) EE05461B1 (pl)
ES (2) ES2234686T3 (pl)
FI (1) FI113741B (pl)
HR (2) HRP20020377B1 (pl)
HU (2) HUP0203185A3 (pl)
NO (2) NO20022062L (pl)
NZ (2) NZ518493A (pl)
PL (2) PL204119B1 (pl)
PT (2) PT1226230E (pl)
RU (2) RU2270855C2 (pl)
WO (2) WO2001032836A1 (pl)
ZA (2) ZA200203172B (pl)

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI113741B (fi) * 1999-11-01 2004-06-15 Valio Oy Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi
FI112031B (fi) 2002-02-25 2003-10-31 Valio Oy Biologisesti aktiivisen tuotteen uusi käyttö
ES2540926T3 (es) 2002-06-04 2015-07-14 Dsm Ip Assets B.V. Hidrolizado de proteínas rico en tripéptidos
EP1529114A1 (en) * 2002-08-09 2005-05-11 Chr. Hansen A/S Process for preparing peptides with anti-hypertensive properties
CN1735347A (zh) * 2003-01-06 2006-02-15 荷兰联合利华有限公司 含有三肽vpp和/或ipp的发酵乳制品
TWI328457B (en) * 2003-03-18 2010-08-11 Suntory Holdings Ltd Angiotensin-converting enzyme inhibitory peptides
US7718171B2 (en) 2003-04-07 2010-05-18 Chr. Hansen A/S Reducing heart rate in mammals using milk derived fermentation products produced using Lactobacillus helveticus
ZA200507880B (en) 2003-05-05 2006-12-27 Unilever Plc Hydrolysed casein product comprising tripeptides IPP and/or VPP
WO2005096847A1 (en) * 2004-03-19 2005-10-20 Campina Nederland Holding B.V. Method of preparing a food ingredient and food product having angiotensin-i-converting enzyme inhibiting properties and products thus obtained
WO2005094848A1 (ja) 2004-03-31 2005-10-13 Calpis Co., Ltd. 肝障害予防又は抑制剤及び肝障害予防又は抑制用機能性食品
US7862808B2 (en) 2004-07-01 2011-01-04 Mead Johnson Nutrition Company Method for preventing or treating respiratory infections and acute otitis media in infants using Lactobacillus rhamnosus LGG and Bifidobacterium lactis Bb-12
WO2006004105A1 (ja) * 2004-07-05 2006-01-12 Calpis Co., Ltd. ペプチド混合物の製造法、抗高血圧ペプチド含有発酵乳の製造法及び抗高血圧ペプチド製剤の製造法
EA011865B1 (ru) * 2004-07-12 2009-06-30 ДСМ Ай Пи ЭССЕТС Б.В. Протеиновые гидролизаты, снижающие давление крови
EP1685764A1 (en) 2005-01-27 2006-08-02 Globus Egg Sciences B.V. Anti-hypertensive functional food products
ATE532416T1 (de) 2004-09-03 2011-11-15 Chr Hansen As Fermentierte milchproteine mit rezeptor-ligand und ihre verwendungen
FR2876874B1 (fr) * 2004-10-22 2007-02-16 Gervais Danone Sa Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par l'utilisation d'ingredients leurres
FR2876876B1 (fr) * 2004-10-22 2007-02-16 Gervais Danone Sa Protection d'ingredients alimentaires bioactifs par l'utilisation de microorganismes presentant une capacite de metabolisation reduite
CN101084004A (zh) * 2004-12-22 2007-12-05 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 单个酶促步骤中的血压降低寡肽
EP1879465A1 (en) * 2005-02-09 2008-01-23 Unilever N.V. Composition comprising peptide
EP1851323B1 (en) * 2005-02-24 2016-09-28 DSM IP Assets B.V. Enzymatic process for producing I-P-P from kappa casein
US7303745B2 (en) 2005-04-15 2007-12-04 Bristol-Myers Squibb Company Method for preventing or treating the development of respiratory allergies
CA2630445C (en) * 2005-11-28 2016-11-15 Dsm Ip Assets B.V. Enzyme preparations yielding a clean taste
US20090299036A1 (en) * 2006-02-14 2009-12-03 Calpis Co, Ltd Agent for preventing arteriosclerosis, agent for suppressing vascular intimal thickening and agent for improving vascular endothelial function
BRPI0707827A2 (pt) * 2006-02-14 2011-05-10 Calpis Co Ltd vasodilatador
ATE548445T1 (de) * 2006-02-20 2012-03-15 Gervais Danone Sa Laktose nicht fermentierende lactobacillus helveticus
DE602006005330D1 (de) * 2006-02-20 2009-04-09 Gervais Danone Sa Neue Stämme von Lactobacillus helveticus
EP1820849B1 (fr) * 2006-02-20 2009-01-21 Compagnie Gervais Danone Nouvelles souches de Lactobacillus helveticus
CN100370019C (zh) * 2006-04-21 2008-02-20 江南大学 一种具有抗高血压作用的植物乳杆菌cw006
JP2009537492A (ja) * 2006-05-15 2009-10-29 ヴァリオ・リミテッド 治療上有用なペプチドの新規用途
RU2457852C2 (ru) * 2006-05-15 2012-08-10 Валио Лтд Новое применение терапевтически эффективных пептидов
AU2007292786B2 (en) * 2006-09-04 2013-02-14 Megmilk Snow Brand Co., Ltd. Agent for accelerating the increase in and/or preventing the decrease in blood adiponectin level, and visceral fat accumulation inhibitor
ES2557160T3 (es) 2006-10-23 2016-01-22 Nestec S.A. Modulación del aroma y el sabor mediante biotransformación en productos lácteos
DE502007004849D1 (de) * 2007-02-02 2010-10-07 May Amadeus Alexander Produkt mit lebenden probiotischen Mikroorganismen
US11759477B2 (en) 2007-02-26 2023-09-19 Heartbeet Ltd. Compositions of nitrates and methods of use thereof
US10842813B2 (en) 2007-02-26 2020-11-24 Heartbeet Ltd Compositions of nitrates and methods of use thereof
MX2009010428A (es) * 2007-03-27 2009-12-01 Calpis Co Ltd Agente profilactico para insuficiencia renal.
EP2303030A1 (en) * 2008-06-12 2011-04-06 Nestec S.A. Lactobacillus helveticus strains for producing hypotensive peptides
DE102008032828A1 (de) 2008-07-02 2010-01-07 Technische Universität Dresden Tryptophanhaltige Peptide aus alpha-Lactalbumin mit blutdrucksenkender und vasoprotektiver Wirkung für biofunktionelle Lebensmittel
FI122531B (fi) * 2009-09-30 2012-03-15 Valio Oy Juusto ja menetelmä sen valmistamiseksi
CN102786579B (zh) * 2012-07-17 2014-07-09 上海交通大学 抗高血压活性肽vip
CN102786580A (zh) * 2012-07-17 2012-11-21 上海交通大学 抗高血压活性肽ivp
RU2580052C1 (ru) * 2014-12-24 2016-04-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" Штамм lactobacillus helveticus вкпм в-11176, полученный на доступных питательных средах
RU2577112C1 (ru) * 2014-12-25 2016-03-10 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Горский государственный аграрный университет" Штамм lactobacillus helveticus вкпм в-11175, полученный на доступных питательных средах
CA3043392A1 (en) 2016-12-02 2018-06-07 Fairlife, Llc Non-browning lactose-free milk powder and methods of making same
RU2685912C1 (ru) * 2018-03-14 2019-04-23 Федеральное государственное автономное научное учреждение "Научно-исследовательский институт хлебопекарной промышленности" Штамм бактерий lactobacillus amylolyticus, используемый для приготовления термофильной заквашенной заварки
RU2728171C2 (ru) * 2018-11-08 2020-07-28 Общество с ограниченной ответственностью "Инновационные биотехнологии" (ООО "Инбиотех") Штамм бактерий Lactobacillus helveticus T-5068, используемый в качестве закваски прямого внесения для приготовления кисломолочных продуктов
CN109517763B (zh) * 2018-12-27 2022-03-22 内蒙古农业大学 瑞士乳杆菌h11及其应用
TWI713972B (zh) * 2019-01-14 2020-12-21 大江生醫股份有限公司 改善呼吸道健康之益生菌株及其組合物與用途
US20230180778A1 (en) * 2020-04-02 2023-06-15 Fatah Bashir Ahtesh Milk fermentation process
CN112029784A (zh) * 2020-09-16 2020-12-04 内蒙古农业大学 一个与蛋白水解能力相关的基因及基于该基因的高蛋白水解能力瑞士乳杆菌的筛选方法
KR102684805B1 (ko) 2023-12-20 2024-07-12 푸른하늘환경주식회사 우수 유출수의 정화 처리 장치
KR102687298B1 (ko) 2023-12-20 2024-07-22 푸른하늘환경주식회사 비점오염물질 저감 및 우수 정화 장치
CN117986337B (zh) * 2024-02-02 2024-08-16 杭州御寿生物科技有限公司 一种提高免疫力的益生菌组合物以及在治疗疾病中的应用

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2483748A1 (fr) * 1980-06-06 1981-12-11 Corning Glass Works Procede d'hydrolyse du lactose contenu dans les lactoserums a l'aide de lactase immobilisee
SU1264889A1 (ru) * 1984-07-25 1986-10-23 Киевский Ордена Трудового Красного Знамени Технологический Институт Пищевой Промышленности Способ производства молочно-белкового продукта дл плавлени
JPS6153216A (ja) * 1984-08-23 1986-03-17 Rikagaku Kenkyusho 高血圧症予防治療剤
JP2782142B2 (ja) * 1992-07-23 1998-07-30 カルピス株式会社 アンジオテンシン変換酵素阻害剤及びその製造法
JP2782153B2 (ja) * 1992-11-09 1998-07-30 カルピス株式会社 アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチドの製造法
JP2824821B2 (ja) 1993-11-04 1998-11-18 カルピス株式会社 乳酸菌及び発酵乳製品
GB2294191B (en) * 1994-10-06 1997-10-01 Waterford Creamery Ltd Cheese manufacture
JP3782837B2 (ja) * 1995-04-10 2006-06-07 カルピス株式会社 血圧降下剤及びその製造法
JPH09188694A (ja) 1996-01-10 1997-07-22 Otsuka Shokuhin Kk ペプチド、アンジオテンシン変換酵素阻害組成物及びその製法
JP3746556B2 (ja) 1996-02-09 2006-02-15 カルピス株式会社 プラスミド及びプラスミドベクター
US5854029A (en) 1996-08-02 1998-12-29 Calpis Co., Ltd. Method for preparing antihypertensive agent
JP4727770B2 (ja) * 1997-09-26 2011-07-20 カルピス株式会社 尿中カテコールアミン低下、尿中ノルアドレナリン低下、尿中ドーパミン低下及びＦｉｓｃｈｅｒ比低下の少なくとも１つの軽減剤
JP3028411B2 (ja) 1997-09-26 2000-04-04 カルピス株式会社 トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌
GB9720633D0 (en) * 1997-09-29 1997-11-26 Univ Bristol BHV-2 vector
FI104783B (fi) 1998-02-12 2000-04-14 Valio Oy Herasuolajauhe, menetelmä sen valmistamiseksi ja sen käyttö
FI113741B (fi) * 1999-11-01 2004-06-15 Valio Oy Menetelmä verenpainetta alentavia peptidejä sisältävän tuotteen valmistamiseksi
US6514941B1 (en) * 1999-12-10 2003-02-04 Campina Melkunie B.V. Method of preparing a casein hydrolysate enriched in anti-hypertensive peptides

Also Published As

Publication number Publication date
HU226200B1 (en) 2008-06-30
JP4172681B2 (ja) 2008-10-29
US6972282B1 (en) 2005-12-06
ES2220557T3 (es) 2004-12-16
CZ302271B6 (cs) 2011-01-19
HUP0203185A3 (en) 2005-07-28
PT1226230E (pt) 2005-04-29
HUP0203256A2 (hu) 2003-01-28
CN1197956C (zh) 2005-04-20
NZ518470A (en) 2003-03-28
PL364790A1 (pl) 2004-12-13
PT1226267E (pt) 2004-08-31
EE200200231A (xx) 2003-06-16
FI19992360L (fi) 2001-05-02
EE05461B1 (et) 2011-08-15
CZ294146B6 (cs) 2004-10-13
NZ518493A (en) 2003-03-28
DK1226267T3 (da) 2004-09-20
ZA200203179B (en) 2003-07-22
KR20020064895A (ko) 2002-08-10
US6890529B1 (en) 2005-05-10
CA2388354A1 (en) 2001-05-10
AU769432B2 (en) 2004-01-29
CN1387577A (zh) 2002-12-25
ES2234686T3 (es) 2005-07-01
KR100718709B1 (ko) 2007-05-16
DK1226230T3 (da) 2005-04-04
NO20022061L (no) 2002-06-28
EP1226230A1 (en) 2002-07-31
CA2387738A1 (en) 2001-05-10
HRP20020377A2 (en) 2003-08-31
NO20022062D0 (no) 2002-04-30
WO2001032905A1 (en) 2001-05-10
JP2003513621A (ja) 2003-04-15
NO20022062L (no) 2002-06-28
AU1149801A (en) 2001-05-14
CZ20021369A3 (cs) 2002-07-17
ATE266735T1 (de) 2004-05-15
DE60010742D1 (de) 2004-06-17
DE60016959T2 (de) 2005-12-22
AU1149901A (en) 2001-05-14
HRP20020377B1 (en) 2005-06-30
ATE285470T1 (de) 2005-01-15
HRP20020378B1 (en) 2005-06-30
EP1226267A1 (en) 2002-07-31
EP1226230B1 (en) 2004-12-22
RU2270855C2 (ru) 2006-02-27
NO20022061D0 (no) 2002-04-30
JP3695648B2 (ja) 2005-09-14
HRP20020378A2 (en) 2003-08-31
AU777795B2 (en) 2004-10-28
CA2387738C (en) 2008-09-16
EP1226267B1 (en) 2004-05-12
NO330951B1 (no) 2011-08-22
KR100704441B1 (ko) 2007-04-24
EE200200230A (et) 2003-06-16
WO2001032836A1 (en) 2001-05-10
DE60010742T2 (de) 2005-05-12
HUP0203256A3 (en) 2005-11-28
PL355670A1 (pl) 2004-05-04
CN1164761C (zh) 2004-09-01
KR20020060220A (ko) 2002-07-16
HUP0203185A2 (hu) 2003-01-28
JP2003513636A (ja) 2003-04-15
CN1387564A (zh) 2002-12-25
RU2276689C2 (ru) 2006-05-20
CZ20021431A3 (cs) 2002-08-14
ZA200203172B (en) 2003-09-23
FI113741B (fi) 2004-06-15
DE60016959D1 (de) 2005-01-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1226267B1 (en) Process for producing a product containing antihypertensive tripeptides
Takano Anti-hypertensive activity of fermented dairy products containing biogenic peptides
JP2011504363A (ja) 改良された生理活性ペプチドの生成
JPH1198978A (ja) トリペプチド高生産性ラクトバチルス・ヘルベチカス乳酸菌
US20020182301A1 (en) Fermented milk product
AU2002302385A1 (en) Fermented milk product
EP1727440A1 (en) Method of preparing a food ingredient and food product having angiotensin-i-converting enzyme inhibiting properties and products thus obtained
JPH1033115A (ja) ホエー飲料とその製造法
JP4242293B2 (ja) 骨の強化および骨形成を増加させるための組成物
JP4525754B2 (ja) 代謝能力が低減した微生物を用いた生物活性食品成分の保護
JP4268785B2 (ja) カルシウム吸収促進及びリン酸カルシウム結晶成長促進剤
FI120267B (fi) Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten peptidien valmistamiseksi
PL241893B1 (pl) Sposób przeprowadzenia selekcji mikroorganizmów proteolitycznych, sposób wytwarzania hydrolizatu białek serwatkowych, zawierającego bioaktywne peptydy i hydrolizat białek serwatkowych
Kumari Biofunctional Properties of Probiotic Whey-based Fermented Frink
KR20090007643A (ko) 치료학적으로 유용한 펩타이드의 새로운 용도

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20121030