PL212019B1 - Sposób wytwarzania testololaktonu (17a-oxa-D-homo-androst-4-en-3,17-dionu) - Google Patents

Description

Testololakton jest analogiem testolaktonu o własnościach terapeutycznych, który stosowany jest głównie, jako inhibitor aromatazy przekształcającej androgeny w estrogeny. Dzięki temu farmakologicznie można zapobiegać rozwojowi raka piersi, aktywowanego przez estrogeny u kobiet po menopauzie. Podawany jest również w profilaktyce przerostu prostaty i nowotworu prostaty, przy ginekomastii oraz przedwczesnym dojrzewaniu (G. E. Serafini, S. Moslemi Mol. Cell. Endocrinol. 2001, 178, 117-131).

Wynalazek opiera się na konkurencyjnym do chemicznej metody mikrobiologicznym utlenianiu typu Baeyera-Villigera 4-en-3-okso substratu steroidowego do testololaktonu z układem δ-laktonu w pierścieniu D.

Znany jest sposób transfomacji progesteronu do testololaktonu w kulturze Penicillium citreoviride z wydajnością 60,9% po pięciu dniach prowadzenia procesu (Hong Min Liu et al., Steroids 71, 2006, 931-934).

Istota wynalazku polega na tym, że progesteron przekształcany jest do testololaktonu za pomocą kultury szczepu Penicillium camembertii.

Korzystne jest, gdy reakcję utleniania typu Baeyera-Villigera prowadzi się wodną kulturą szczepu, przy ciągłym mieszaniu reagentów, w temperaturze 293-300K.

Postępując zgodnie z wynalazkiem, w wyniku działania układu enzymatycznego zawartego w komórkach grzyba Penicillium camembertii progesteron utleniany jest do testololaktonu. Uzyskany w ten sposób produkt wydziela się z wodnej kultury mikroorganizmu, znanym sposobem przez ekstrakcję chloroformem.

Zasadniczą zaletą wynalazku jest otrzymanie testololaktonu, jako głównego produktu reakcji, z wydajnością 92%, w temperaturze pokojowej i pH bliskim obojętnemu.

Wynalazek jest bliżej objaśniony na przykładzie wykonania.

P r z y k ł a d

Do kolby Erlenmajera o pojemności 250 cm³, w której znajduje się 100 cm³ sterylnej pożywki zawierającej 3 g glukozy i 1 g aminobaku, wprowadza się szczep Penicillium camembertii. Po trzech ₃ dniach wzrostu dodaje się 20 mg progesteronu, o wzorze 1, rozpuszczonego w 1 cm³ acetonu. Transformację prowadzi się przy ciągłym wstrząsaniu przez 24 godziny w pięciu powtórzeniach w tych samych warunkach, w temperaturze 295 K, przy pH=6,9. Następnie uzyskane roztwory transformacyjne ekstrahuje się trzykrotnie chloroformem, osusza bezwodnym siarczanem magnezu i odparowuje rozpuszczalnik. Otrzymuje się 135 mg surowego produktu, który oczyszcza się chromatograficznie używając, jako eluentu mieszaniny: octan etylu:chlorek metylenu:aceton (3:1:1).

Na tej drodze otrzymuje się 92 mg testololaktonu (wydajność 92%).

Uzyskany produkt charakteryzuje się następującymi danymi spektralnymi: t.t. 209-210°C; [α] = +46,2 (c 0.16, CHCl3);

IR vmax (cm^-1): 1716, 1666, 1614, 1214;

¹H-NMR δ (ppm): 1.16 (s, 19-H3), 1.35 (s, 18-H3), 2.59 (m, 16a-H), 2.68 (m, 16β-Η), 5.75 (s, 4-H);

¹³C-NMR: δ (ppm): 199.2 (C-3), 171.1 (C-17), 169.2 (C-5), 124.1 (C-4), 82.7 (C-13), 52.5 (C-9), 45.7 (C-14), 39.1 (C-12), 38.4 (C-10), 38.0 (C-8), 35.5 (C-1), 33.8 (C-2), 32.4 (C-6), 30.5 (C-7), 28.6 (C-16), 21.9 (C-11), 20.1 (C-18), 19.9 (C-15), 17.44 (C-19).

Claims (4)

1. Sposób wytwarzania testololaktonu o wzorze 2, na drodze transformacji mikrobiologicznej, w którym jako substrat stosuje się progesteron, o wzorze 1, znamienny tym, że substrat przekształcany jest za pomocą systemu enzymatycznego szczepu grzyba z gatunku Penicillium camembertii.

2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces biotransformacji substratu prowadzi się wodną kulturą szczepu przy ciągłym mieszaniu.

3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces biotransformacji substratu prowadzi się w temperaturze 293-300K.

4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że proces biotransformacji substratu prowadzi się przy pH 6,8-7,1.