PL230832B1 - Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolitu - Google Patents
Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolituInfo
- Publication number
- PL230832B1 PL230832B1 PL412092A PL41209215A PL230832B1 PL 230832 B1 PL230832 B1 PL 230832B1 PL 412092 A PL412092 A PL 412092A PL 41209215 A PL41209215 A PL 41209215A PL 230832 B1 PL230832 B1 PL 230832B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- strain
- lactobacillus plantarum
- atcc
- candida
- metabolite
- Prior art date
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims description 81
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims description 66
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims description 66
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 title claims description 29
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 16
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 7
- 125000004203 4-hydroxyphenyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 5
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 claims description 4
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 4
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 25
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 24
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 23
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 19
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 19
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 17
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 12
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 12
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 12
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 10
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 10
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 10
- 241000894007 species Species 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 9
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical class OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 8
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 8
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 8
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 description 7
- 241000222126 [Candida] glabrata Species 0.000 description 7
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 7
- 208000032343 candida glabrata infection Diseases 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 7
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 7
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000222178 Candida tropicalis Species 0.000 description 6
- 244000285963 Kluyveromyces fragilis Species 0.000 description 6
- 235000014663 Kluyveromyces fragilis Nutrition 0.000 description 6
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 6
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- JVGVDSSUAVXRDY-UHFFFAOYSA-N 3-(4-hydroxyphenyl)lactic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC1=CC=C(O)C=C1 JVGVDSSUAVXRDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- VOXXWSYKYCBWHO-UHFFFAOYSA-N 3-phenyllactic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC1=CC=CC=C1 VOXXWSYKYCBWHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 241000943303 Enterococcus faecalis ATCC 29212 Species 0.000 description 5
- 241000588747 Klebsiella pneumoniae Species 0.000 description 5
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 5
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 5
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 5
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000775777 Streptococcus agalactiae ATCC 13813 Species 0.000 description 4
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000005000 reproductive tract Anatomy 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 3
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588767 Proteus vulgaris Species 0.000 description 3
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 3
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 3
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N cefaclor Chemical compound C1([C@H](C(=O)N[C@@H]2C(N3C(=C(Cl)CS[C@@H]32)C(O)=O)=O)N)=CC=CC=C1 QYIYFLOTGYLRGG-GPCCPHFNSA-N 0.000 description 3
- 229960005361 cefaclor Drugs 0.000 description 3
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 3
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 3
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 3
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 229940007042 proteus vulgaris Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 3
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 3
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 3
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O vancomycin(1+) Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C([O-])=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)[NH2+]C)[C@H]1C[C@](C)([NH3+])[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-O 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N (+)-Galactose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 2
- FYSSBMZUBSBFJL-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxydecanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)CC(O)=O FYSSBMZUBSBFJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MUCMKTPAZLSKTL-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxylauric acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)CC(O)=O MUCMKTPAZLSKTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZRJTRPJURQBRM-UHFFFAOYSA-N 4-amino-n-(5-methyl-1,2-oxazol-3-yl)benzenesulfonamide;5-[(3,4,5-trimethoxyphenyl)methyl]pyrimidine-2,4-diamine Chemical compound O1C(C)=CC(NS(=O)(=O)C=2C=CC(N)=CC=2)=N1.COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 WZRJTRPJURQBRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 2
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 2
- 208000007027 Oral Candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000193985 Streptococcus agalactiae Species 0.000 description 2
- 206010046914 Vaginal infection Diseases 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N aldehydo-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000000436 anus Anatomy 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001174 ascending effect Effects 0.000 description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 2
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 2
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 2
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 2
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- -1 doxacycline Chemical compound 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N hydroquinone O-beta-D-glucopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-RMPHRYRLSA-N 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JYVXNLLUYHCIIH-UHFFFAOYSA-N (+/-)-mevalonolactone Natural products CC1(O)CCOC(=O)C1 JYVXNLLUYHCIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VQFHWKRNHGHZTK-LURJTMIESA-N (3s)-3-(2-methylpropyl)piperazine-2,5-dione Chemical compound CC(C)C[C@@H]1NC(=O)CNC1=O VQFHWKRNHGHZTK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N (R)-amygdalin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H](C#N)C=2C=CC=CC=2)O1 XUCIJNAGGSZNQT-JHSLDZJXSA-N 0.000 description 1
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 239000005711 Benzoic acid Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N Beta-Lactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-DCSYEGIMSA-N 0.000 description 1
- 241000222173 Candida parapsilosis Species 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N Caprylic acid Natural products CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N D-Arabitol Natural products OC[C@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-NGQZWQHPSA-N 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N D-Fructose Natural products OC[C@H]1OC(O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-VRPWFDPXSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N D-fucopyranose Chemical compound C[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-SVZMEOIVSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N D-ribopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 1
- 238000007399 DNA isolation Methods 0.000 description 1
- 206010012742 Diarrhoea infectious Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001202 Inulin Polymers 0.000 description 1
- 201000008225 Klebsiella pneumonia Diseases 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N L-(-)-Sorbose Chemical compound OCC1(O)OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-AMVSKUEXSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N L-Fucose Natural products C[C@H]1O[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-PQMKYFCFSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N L-arabinitol Chemical compound OC[C@H](O)C(O)[C@@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N L-ribopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-OWMBCFKOSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000001145 Metabolic Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028080 Mucocutaneous candidiasis Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 241000737052 Naso hexacanthus Species 0.000 description 1
- IABBAGAOMDWOCW-UHFFFAOYSA-N Nicametate citrate Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=CN=C1 IABBAGAOMDWOCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N O4-alpha-D-Mannopyranosyl-D-mannose Natural products O=CC(O)C(O)C(C(O)CO)OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O DKXNBNKWCZZMJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010195 Onychomycosis Diseases 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 206010035717 Pneumonia klebsiella Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M Potassium gluconate Chemical compound [K+].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O HLCFGWHYROZGBI-JJKGCWMISA-M 0.000 description 1
- JYVXNLLUYHCIIH-ZCFIWIBFSA-N R-mevalonolactone, (-)- Chemical compound C[C@@]1(O)CCOC(=O)C1 JYVXNLLUYHCIIH-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N Salicin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1)c1c(CO)cccc1 NGFMICBWJRZIBI-JZRPKSSGSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 1
- 241000287411 Turdidae Species 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000007096 Vulvovaginal Candidiasis Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000000690 abdominal obesity-metabolic syndrome Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N aldehydo-L-rhamnose Chemical compound C[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-BXKVDMCESA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N aldehydo-L-xylose Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WISUUJSJSA-N 0.000 description 1
- 229930195726 aldehydo-L-xylose Natural products 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N alpha-salicin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940044197 ammonium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940089837 amygdalin Drugs 0.000 description 1
- YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N amygdalin Natural products OCC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC(C#N)c3ccccc3 YZLOSXFCSIDECK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 1
- 230000008485 antagonism Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001857 anti-mycotic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002543 antimycotic Substances 0.000 description 1
- 229960000271 arbutin Drugs 0.000 description 1
- 230000002368 bacteriocinic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 235000010233 benzoic acid Nutrition 0.000 description 1
- GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N benzyl(trichloro)silane Chemical compound Cl[Si](Cl)(Cl)CC1=CC=CC=C1 GONOPSZTUGRENK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000010876 biochemical test Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 229940055022 candida parapsilosis Drugs 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 229940047766 co-trimoxazole Drugs 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000002828 disc diffusion antibiotic sensitivity testing Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 208000001848 dysentery Diseases 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N eucalyptosin A Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(OC(C#N)C=2C=CC=CC=2)OC(CO)C(O)C1O YGHHWSRCTPQFFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000000855 fungicidal effect Effects 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N galactitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000001727 glucose Nutrition 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N inulin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)OC[C@]1(OC[C@]2(OC[C@]3(OC[C@]4(OC[C@]5(OC[C@]6(OC[C@]7(OC[C@]8(OC[C@]9(OC[C@]%10(OC[C@]%11(OC[C@]%12(OC[C@]%13(OC[C@]%14(OC[C@]%15(OC[C@]%16(OC[C@]%17(OC[C@]%18(OC[C@]%19(OC[C@]%20(OC[C@]%21(OC[C@]%22(OC[C@]%23(OC[C@]%24(OC[C@]%25(OC[C@]%26(OC[C@]%27(OC[C@]%28(OC[C@]%29(OC[C@]%30(OC[C@]%31(OC[C@]%32(OC[C@]%33(OC[C@]%34(OC[C@]%35(OC[C@]%36(O[C@@H]%37[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O%37)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%36)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%35)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%34)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%33)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%32)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%31)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%30)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%29)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%28)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%27)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%26)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%25)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%24)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%23)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%22)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%21)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%20)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%19)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%18)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%17)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%16)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%15)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%14)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%13)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%12)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%11)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O%10)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O9)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O8)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O7)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O6)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H]([C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 JYJIGFIDKWBXDU-MNNPPOADSA-N 0.000 description 1
- 229940029339 inulin Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K iron(III) citrate Chemical compound [Fe+3].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NPFOYSMITVOQOS-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 108010042648 lactocin Proteins 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003390 magnesium sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002160 maltose Drugs 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N methyl alpha-D-mannoside Chemical compound CO[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O HOVAGTYPODGVJG-VEIUFWFVSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940057061 mevalonolactone Drugs 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N n-hexanoic acid Natural products CCCCCC(O)=O FUZZWVXGSFPDMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N oxacillin Chemical compound N([C@@H]1C(N2[C@H](C(C)(C)S[C@@H]21)C(O)=O)=O)C(=O)C1=C(C)ON=C1C1=CC=CC=C1 UWYHMGVUTGAWSP-JKIFEVAISA-N 0.000 description 1
- 229960001019 oxacillin Drugs 0.000 description 1
- BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N p-hydroxyphenyl beta-D-alloside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC=C(O)C=C1 BJRNKVDFDLYUGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 229960003975 potassium Drugs 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004224 potassium gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000013926 potassium gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003189 potassium gluconate Drugs 0.000 description 1
- GSFHMOMWXNDPMM-YMDUGQBDSA-M potassium;(2r,3s,4s)-2,3,4,6-tetrahydroxy-5-oxohexanoate Chemical compound [K+].OCC(=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O GSFHMOMWXNDPMM-YMDUGQBDSA-M 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N ribitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-ZXFHETKHSA-N 0.000 description 1
- NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N salicin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1CO NGFMICBWJRZIBI-UJPOAAIJSA-N 0.000 description 1
- 229940120668 salicin Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229960001790 sodium citrate Drugs 0.000 description 1
- 235000011083 sodium citrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009003 standardized kity Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 108010038851 tannase Proteins 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N turanose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](C(=O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O RULSWEULPANCDV-PIXUTMIVSA-N 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz ich zastosowanie w leczeniu zakażeń grzybiczych i bakteryjnych.
Jednym z podstawowych grup bakterii zasiedlających ludzki przewód pokarmowy są bakterie z rodzaju Lactobacillus. Szczególnie wyróżniają się wśród nich szczepy należące do gatunku Lactobacillus plantarum, znane ze swoich właściwości stymulujących i poprawiających funkcjonowanie przewodu pokarmowego i stosowane w tym celu jako probiotyki.
Patogenne dla człowieka i zwierząt grzyby powodują szereg istotnych z punktu widzenia miejscowych zakażeń objętych ogólną nazwą kandydozy śluzówkowo-skórnej, która występuje pod wieloma postaciami, z których najczęstsze to kandydoza sromu i pochwy występująca często u kobiet w wieku rozrodczym, kandydoza jamy ustnej powodująca dolegliwości u osób starszych pod płytami protez stomatologicznych lub u małych dzieci występująca pod postacią pleśniawek, czy też grzybica wałów paznokciowych. Najczęściej występującymi gatunkami grzybów Candida powodujących te formy kandydozy są Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei i Candida glabrata. Niektóre gatunki Candida, szczególnie te spoza gatunku Candida albicans wykazują oporność na leki imidazolowe, a leczenie tymi antymykotykami powoduje selekcję opornych gatunków z prawidłowej flory drobnoustrojowej. W efekcie standardowe leczenie zakażeń powodowanych przez grzyby Candida jest coraz trudniejsze. Poszukując alternatywnych form leczenia rozważa się możliwość zastosowania preparatów zawierających bakterie z rodzaju Lactobacillus, które działając antagonistycznie wobec patogennych grzybów z rodzaju Candida byłyby wstanie eliminować je z ognisk zakażeń na skórze i błonach śluzowych i w ten sposób działając samodzielnie lub w skojarzeniu z innymi lekami doprowadzać do wyleczenia zmian zapalnych.
Znane jest z opisu patentowego PL203824 zastosowanie szczepu Lactobacillus plantarum zapewniającego zwiększoną ilość kwasu propionowego lub kwasu octowego w okrężnicy do wytwarzania leku zmniejszającego jeden lub większą ilość czynników ryzyka związanego z zespołem metabolicznym. Szczep ujawniony w wynalazku to Lactobacillus plantarum 299v, który wykazuje zdolność do wiązania się z błoną śluzową jelit.
Znana jest z opisu patentowego USRE 44400 kompozycja zawierająca jeden lub więcej szczepów Lactobacillus plantarum wytwarzających tanazę, enzym degradujący taninę, w połączeniu z samą taniną i farmaceutycznie dopuszczalnym nośnikiem. Szczepy wchodzące w skład kompozycji są to nowe szczepy Lactobacillus plantarum wyizolowane z błony śluzowej okrężnicy człowieka. Kompozycja wykazuje właściwości przeciwzapalne dzięki działaniu produktów rozkładu taniny. Kompozycja przeznaczona jest do wytwarzania leku do leczenia chorób układu pokarmowego i układu naczyniowo-sercowego.
Znany jest z opisu patentowego US20120200943 szczep Lactobacillus plantarum CMU995 który posiada doskonałą zdolność do przylegania do komórek przewodu pokarmowego i dróg oddechowych. Ta właściwość szczepu Lactobacillus plantarum CMU995 zgodnie z wynalazkiem, powoduje hamowanie przylegania patogenów do nabłonka przewodu pokarmowego i moczowego.
Dotychczas znane szczepy Lactobacillusplantarum ze względu na poznane, swoiste właściwości stosowane były w biegunkach infekcyjnych i stanach zapalnych przewodu pokarmowego.
Celem wynalazku było wyselekcjonowanie z kolekcji szczepów bakterii z rodzaju Lactobacillus, takiego nowego szczepu i jego metabolitu, które byłyby skuteczne w hamowaniu rozwoju i/lub ograniczaniu wzrostu populacji grzybów i bakterii patogennych dla człowieka.
Terminem metabolit określa się naturalną mieszaninę każdego związku, substancji lub produktu ubocznego fermentacji prowadzonej przez mikroorganizmy, która ma aktywność bójczą w odniesieniu do bakterii i grzybów.
Istotą wynalazku jest nowy szczep Lactobacillus plantarum oznaczony symbolem PM1 zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów we Wrocławiu pod numerem B/00055 wykazujący silne właściwości antagonistyczne wobec patogennych bakterii oraz grzybów z rodzaju Candida.
Szczep Lactobacillus plantarum PM1 został zdeponowany zgodnie z traktatem budapeszteńskim o międzynarodowym uznawaniu depozytu drobnoustrojów dla celów postępowania patentowego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM) w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we Wrocławiu (53-114 Wrocław, ul. Rudolfa Weigla 12). Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1 został zdeponowany w dniu 27 listopada 2013 i otrzymał numer B/00055.
PL 230 832 Β1
Wynalazek obejmuje też nowy metabolit otrzymany z hodowli szczepu Lactobacillus plantarum PM1, który zawiera kwasy, w tym szczególnie: 3-fenylomlekowy, 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowy, mlekowy, piroglutaminowy, i który wykazuje właściwości antygrzybiczne i antybakteryjne.
Wynalazek obejmuje też zastosowanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem dostępu B/00055 i/lub metabolitu wytworzonego przez szczep Lactobacillus plantarum PM1 do wytwarzania środka hamującego rozwój i/lub ograniczającego wzrost populacji grzybów i bakterii patogennych dla człowieka.
Badania przesiewowe pozwoliły na zidentyfikowanie szczepu Lactobacillus plantarum wyizolowanego z organizmu ludzkiego.
Szczep Lactobacillus plantarum PM1 został wyizolowany w trakcie rutynowych badań ginekologicznych z tylnego sklepienia pochwy zdrowej kobiety w wieku rozrodczym (25 lat) z prawidłową mikroflorą. Materiał po pobraniu został natychmiast przetransportowany do Laboratorium Mikrobiologicznego firmy Prolab, gdzie został opracowany, a wyizolowane szczepy bakterii szczegółowo scharakteryzowane w oparciu o metody genotypowe oraz fenotypowe.
Szczep Lactobacillus plantarum PM1 jest to szczep, który w naturalny sposób kolonizuje drogi rodne kobiety. Dzięki temu oraz specyficznym cechom indywidualnym szczep Lactobacillus plantarum PM1 jest szczególnie predysponowany do leczenia wstępujących zakażeń grzybiczych i bakteryjnych z dróg rodnych i odbytu. Do tej pory nie był znany chemiczny skład metabolitu wytwarzanego przez nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1. Dzięki zidentyfikowaniu kwasów: 3-fenylomlekowego, 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowego, mlekowego, piroglutaminowego, przyporządkowano tej naturalnej mieszaninie wybitną zdolność do hamowania populacji grzybów i bakterii.
Niniejszy wynalazek przedstawiono na załączonym rysunku, na którym:
Fig. 1. przedstawia wynik testu API 50 CH dla szczepu Lactobacillus plantarum PM1.
Fig. 2. przedstawia zdjęcie produktów reakcji PCR w kierunku Lactobacillus plantarum, ścieżki 1-(szczep PM1); 2-kontrola negatywna; 3-kontrola pozytywna (szczep Lactobacillus plantarum 57B); M-marker wielkości.
Fig. 3. przedstawia strefy zahamowania wzrostu otrzymane dla szczepu Lactobacillus plantarum PM1.
Fig. 4. przedstawia antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem wobec wybranych gatunków grzybów drożdżopodobnych z wykorzystaniem metody półilościowej.
Fig. 5. przedstawia antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem wobec wybranych gatunków grzybów drożdżopodobnych z wykorzystaniem metody ilościowej.
Fig. 6. przedstawia antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem na wzrost pałeczki E.coli z wykorzystaniem metody półilościowej.
Fig. 7. przedstawia antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem wobec wybranych gatunków bakterii chorobotwórczych z wykorzystaniem metody ilościowej.
Fig. 8. przedstawia antagonistyczne działanie naturalnej mieszaniny kwasów: 3-fenylomlekowego, 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowego, mlekowego, piroglutaminowego, wobec wybranych czynników etiologicznych zakażeń wstępujących z odbytu i pochwy.
Fig. 9. przedstawia oporność szczepu Lactobacillus plantarum PM1 na sole żółci w stężeniach: 1,2, 5, 10,20 g/l.
I. Fenotypowa identyfikacja szczepu PM1 z wykorzystaniem zestawu API®50 CH firmy bioMerieux
Identyfikację fenotypową przeprowadzono za pomocą zestawu API 50 CH zgodnie z zaleceniami producenta. Jest to wystandaryzowany zestaw zawierający 50 testów biochemicznych do badania sposobu metabolizmu węglowodanów przez drobnoustroje. API 50 CH firmy bioMerieux wykorzystuje się do identyfikacji bakterii z rodzaju Lactobacillus i rodzajów spokrewnionych w połączeniu z API 50 CHL Medium (bioMerieux; USA).
Wynik testu API 50 CH dla badanego szczepu z rodzaju Lactobacillus przedstawia Tab. 1.
PL 230 832 Β1
Tab. 1. Wynik testu API 50 CH dla szczepu PM1
| Probówka | TEST | Wynik Szczep PM1 |
| 0 | KONTROLA | - |
| 1 | Glicerol | |
| 2 | Erytrotol | - |
| 3 | D-arabinoza | - |
| 4 | L-arabinoza | + |
| 5 | D-ryboza | + |
| 6 | D-ksyloza | - |
| 7 | L-ksyloza | |
| 8 | D-adonitol | |
| 9 | Metyl o-pD-ksylopiranozyd | — |
| 10 | D-galaktoza | + |
| 11 | D-glukoza | + |
| 12 | D-fruktoza | + |
| 13 | D-mannoza | + |
| 14 | L-sorboza | “· |
| 15 | L-ramnoza | - |
| 16 | Dulcytol | |
| 17 | Inozytol | |
| 18 | D-mannitol | + |
| 19 | D-sorbitol | + |
| 20 | Metyló-aD-mannopiranozyd | - |
| 21 | Mety lo-aD - glukopiranozyd | - |
| 22 | N-acetylo-glukozamina | : + |
| 23 | Amigdalina | + |
| 24 | Arbutyna | 4- |
| 25 | Eskulina Cytrynian żelaza | + |
| 26 | Salicyna | + |
| 27 | D-celobioza | + |
| 28 | D-maltoza | + |
| 29 | D-laktoza (wołowa) | |
| 30 | __________D-melibioza__________ | + |
| 31 | D-sacharoza | 4- |
| 32 | D-trehaioza | + |
| 33 | Inulina | - |
| 34 | D-melezytoza | |
| 35 | D-rafinoza | + |
| 36 | Skrobia | - |
| 37 | Glikogen | - |
| 38 | Ksylitol | - |
| 39 | Gencjobioza | - |
| 40 | D-turanoza | + |
| 41 | D-liksoza | - |
| 42 | D tagatoza | - |
PL 230 832 Β1
| 43 | D-fukoza | - |
| 44 | L-fukoza | - |
| 45 | D-arabitol | - |
| 46 | L-arabitol | - |
| 47 | Glukonian potasu | - |
| 48 | 2-ketogiukonian potasu | - |
| 49 | 5-ketoglukonian potasu | - |
Na podstawie otrzymanego profilu biochemicznego program apiWeb zidentyfikował szczep PM1 jako Lactobacillus plantarum (% ID = 99,4 - Bardzo dobra identyfikacja). Wynik testu API 50 CH dla szczepu Lactobacillus plantarum PM1 przedstawiono na Fig. 1.
II. Identyfikacja szczepu Lactobacillus plantarum PM1 z wykorzystaniem metody PCR (ang. Polymerase Chain Reaction)
11.1 . Izolacja genomowego DNA bakterii:
Do izolacji genomowego DNA zastosowano zestaw DNA GeneMATRIX Basic DNA Purification Kit (EURx) wykorzystujący zdolność wiązania się DNA do złóż krzemionkowych w wysokich stężeniach soli chaotropowych. Procedura izolacji DNA przebiegała w następujący sposób:
1. 24-godzinną hodowlę komórek bakteryjnych prowadzoną w płynnym podłożu MRS (Biocorp) odwirowywano w objętości 1 ml (2 min., 12 000 rpm).
2. Supernatant usuwano, a osad dokładnie zawieszano w 250 μΙ buforu do zawieszania Celi R (w zestawie) z dodatkiem 200 μΙ niebieskiego buforu lizującego Lysis Blue (w zestawie), aż do uzyskania jednolitej, niebieskiej zawiesiny.
3. Do zawiesiny komórek dodawano 350 μΙ buforu neutralizującego Neutral B (w zestawie). Dokładnie i powoli mieszano zawartość probówek przez kilkukrotne odwracanie, aż do całkowitego zaniku niebieskiej barwy zawiesiny.
4. Po zakończeniu lizy mieszaninę odwirowywano (7 min., 12 000 rpm), a przesącz nakładano na minikolumnę ze specjalnym złożem krzemionkowym i ponownie wirowano (1 min., 12 000 rpm).
5. Złoże dwukrotnie przepłukiwano: najpierw 500 μΙ buforu płuczącego Wash UX1, a następnie 650 pL buforu płuczącego Wash UX2 (w zestawie).
6. Oczyszczone DNA eluowano ze złoża za pomocą 50 μΙ buforu Elution (w zestawie), ogrzanego do temperatury 80°C.
7. Wyizolowane DNA przechowywano w probówce typu Eppendorf w temperaturze 4°C do czasu dalszych analiz.
II.2 . Łańcuchowa reakcja polimerazy (PCR):
W tabeli 2 przedstawiono sekwencje użytych starterów oraz wielkość poszczególnych amplikonów
Tab. 2. Sekwencje starterów i wielkość amplikonów poszukiwanego gatunku bakterii
| Starter | Sekwencja 5’—>3’ | Gatunek | Wielkość amplikonu |
| Lfpr Planll | GCC GCC TAA GGT GGG ACA GAT TTA CCT AAC GGT AAA TGC GA | L. plantarum | 283 pz |
Program amplifikacji dla gatunku Lactobacillus prowadzony był w termocyklerze S 1000 (BioRad) i przedstawiał się następująco:
1. 92°C-2min
2. 95°C~30sek'
3. 55°C~30sek 30 x
4. 72°C~30sek.
5. 72°C -Imin
Amplifikację prowadzono zgodnie z metodą Walter i wsp. Z publikacji tej pochodzą również użyte sekwencje starterów.
PL 230 832 Β1
Po skończonej reakcji PCR produkty amplifikacji były analizowane w 1,5% żelu agarozowym z dodatkiem bromku etydyny. Próbki nakładano do kieszonek żelu w objętości 7 pl z dodatkiem 3 μΙ buforu obciążającego. Elektroforezę prowadzono w buforze TBE o stężeniu 0,5x, przez 1,5 godziny, pod napięciem 80V, w aparacie do elektroforezy (BioRad).
Obraz żelu oglądano przy użyciu systemu GelDocXR + (BioRad), w skład którego wchodził transiluminator UV, kamera zbierająca obraz oraz program komputerowy do dokumentacji i analizy obrazu Image Lab (BioRad).
Obecność produktu PCR o odpowiedniej ilości par zasad uznawana była za pozytywny wynik reakcji. Na każdym żelu umieszczano ponadto kontrolę negatywną, którą stanowiła woda destylowana dodawana do buforu reakcyjnego zamiast genomowego DNA bakterii oraz kontrolę pozytywną, jaką był produkt amplifikacji otrzymany z użyciem DNA szczepu wzorcowego oraz marker wielkości prążków (GeneRuler 100bp, Axygen).
Fig. 2 przedstawia zdjęcie produktów reakcji PCR w kierunku Lactobacillus plantarum: ścieżki: 1-(szczep PM1); 2-kontrola negatywna; 3-kontrola pozytywna (szczep Lactobacillus plantarum 57B); M - marker wielkości.
Tab. 3. Zestawienie wyników-identyfikacja gatunkowa przeprowadzona za pomocą testu API 50 CH oraz reakcji PCR
| Numer szczepu | Obraz mikroskopowy | Obraz makroskopowy | Test API | Test PCR |
| PMl | L. plantarum | kremowy | L plantarum | L. plantarum I I |
I II. Oznaczenie wrażliwości na antybiotyki szczepu Lactobacillus plantarum PM1.
W celu zbadania lekooporności szczepu L. plantarum PM1 metodą dyfuzyjno krążkową, zawiesinę hodowli (OD= 0,5 w skali McFarlanda) rozprowadzono na podłożu agarowym MRS (Oxoid) na płytce Petriego. Następnie podłoże z naniesioną zawiesiną pozostawiono w temperaturze pokojowej na 15 minut w celu jej wysuszenia. Po tym czasie na płytkę naniesiono za pomocą jałowej pęsety krążki nasączone odpowiednimi antybiotykami. Inkubację prowadzono w warunkach beztlenowych, przez 24h w temp. 37°C. Po inkubacji zmierzono strefy zahamowanego wzrostu szczepu bakteryjnego wokół krążka z antybiotykiem (w mm). Odczytu lekooporności różnicującego szczep L. plantarum PM1 na wrażliwy i oporny, dokonano zgodnie z EUCAST. W doświadczeniu wykorzystano następujące antybiotyki: penicylina, ciprofloksacyna, cefaklor, doksacyklina, oksacylina, kotrymoksazol, erytromycyna, ampicylina, klindamycyna, wankomycyna, gentamycyna, metronidazol, (Oxoid).
Tab. 4. Wielkości stref zahamowania wzrostu otrzymane dla badanego szczepu L. plantarum PM1 oraz szczepu wzorcowego L. plantarum PSCC 8014
| Antybiotyk Stężenie | L. plantarum PMl | L. plantarum ATCC 8014 |
| Penicylina (P) 1 pg | 14 mm | 13 mm |
| Ciprofloksacyna (CIP) 5 Pg | 10 mm | 11 mm |
| Cefaklor (CEC) 30 pg | 32 mm | 32 mm |
| Doksacyklina (DO) 30 pg | 27 mm | 26 mm |
| Oksycylina (OX) 1 Pg | 11 mm | 11 mm |
PL 230 832 Β1
| Kotrymoksazol (SXT) 25 μβ | 26 mm | 25 mm |
| Erytromycyna (E) 15 μβ | 29 mm | 26 mm |
| Ampicylina (AMP) 2 Mg | 32 mm | 32 mm |
| Klindamycyna (DA) 2 Mg | 16 mm | 18 mm |
| Gentamycyna (CN) 30 pg | 16 mm | 18 mm |
| Wankomycyna (VA) 30 μβ | 6 mm | 6 mm |
| Metronidazol (MTZ) 5 Mg | 6 mm | 6 mm |
Strefy zahamowania wzrostu otrzymane dla szczepu Lactobacillus plantarum PM1 przedstawiono na Fig. 3.
I V. Badanie właściwości antagonistycznych szczepu L.plantarum PM1 wobec grzybów z rodzaju Candida (zmodyfikowana metoda półilościowa wg Fitzsimmons i Berry).
W badaniu posłużono się zmodyfikowaną metodą półilościową według Fitzsimmons i Berry (Struś M., Kucharska A., Kukla G., Brzychczy-Włoch M., Maresz K, Heczko P.B., The in vitro activityofvaginal Lactobacillus with probiotic properties against Candida. Infect. Dis. Obstet. Gynecol. 2005; 13:69-75).
Do badania wybrano pięć grzybów wzorcowych z kolekcji ATCC tj. Candida albicans ATCC 10231, Candida glabrata ATCC 15126, Candida krusei ATCC 34135, Candida tropicalis ATCC 750, Candida kefyr ATCC 4135.
Metoda polegała na zastosowaniu podłoży dwuwarstwowych. Pierwszą warstwę stanowiło podłoże dla wzrostu Lactobacillus oparte na związkach chemicznych zawierające wyciąg drożdżowy, bezwodny octan sodu, cytrynian sodu, siarczan magnezu, chlorek manganu, siarczan amonu i glukozę (wszystkie z firmy Argenta)
Na podłoże to posiewano w formie paska o szerokości 2 cm badany szczep probiotyczny z rodzaju Lactobacillus. Po wymazaniu płytki inkubowano w temp. 37°C, w warunkach beztlenowych przez 48 godzin, a po upływie tego czasu na wierzch wylewano drugie, lekko przestudzone, płynne podłoże Sabouraud Dextrose (Biocorp) umożliwiające wzrost grzybów wskaźnikowych. Po zastygnięciu, na podłoże wysiewano zawiesinę grzybów z rodzaju Candida o gęstości 0,5 w skali MacFarlanda. Następnie płytki umieszczano na 4 godziny w lodówce (temperatura 4°C), a po upływie tego czasu dalszą inkubację prowadzono już w warunkach tlenowych, w temperaturze 37°C przez 24 godziny.
Uzyskane wyniki oceniono według następującej, półilościowej skali:
- Brak działania antagonistycznego Lactobacillus wobec szczepów Candida (nie zaobserwowano żadnej strefy zahamowania wzrostu Candida wzdłuż paska z naniesionym szczepem probiotycznym), + Częściowe działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się lekkie zahamowania wzrostu Candida jedynie nad paskiem z naniesionym szczepem probiotycznym), ++ Wyraźne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się wyraźne zahamowania wzrostu Candida nad paskiem z naniesionym szczepem probiotycznym czasami wyraźniej w jego górnej i dolnej części), +++ Bardzo silne działanie antagonistyczne Lactobacillus wobec szczepów Candida (obserwuje się wyraźne zahamowania wzrostu Candida nad paskiem i poza jego powierzchnią wzdłuż całej linii posiewu szczepu probiotycznego).
PL 230 832 Β1
Tab 5 Antagonistyczne działanie bakterii z rodzaju Lactobacillus wobec grzybów z rodzaju Candida przy zastosowaniu metody półilościowej
| Bakterie z rodzaju Lactobacillus | Candida albicans ATCC 10231 | Candida glabrata ATCC 15126 | Candida krusei ATCC 34135 | Candida tropicalis ATCC 750 | Candida kefyr ATCC 4135 |
| PMl | +++ | ++ | ++ | +++ | +++ |
Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec grzybów z rodzaju Candida przedstawiono na Fig. 4.
V . Badanie właściwości antagonistycznych szczepu L.plantarum PM1 wobec grzybów z rodzaju Candida z wykorzystaniem metody ilościowej.
Kolejnym etapem badań było określenie działania szczepu L.plantarum PM1 wobec tych samych grzybów wskaźnikowych wymienionych w punkcie IV, w oparciu o metodę ilościową. W metodzie ilościowej szczep probiotyczny oraz szczepy grzybów wskaźnikowych hodowano w tej samej probówce zawierającej po 900 mikrolitrów 24 godzinnej hodowli Lactobacillus o średniej gęstości 1x109 j.t.k/ml oraz 100 mikrolitrów 24 godzinnej hodowli grzybów wskaźnikowych o średniej gęstości 1x106 j.t.k/ml. Całość dalej hodowano, a po upływie 8 i 24 godzin od rozpoczęcia badania materiał posiewano ilościowo zarówno na stałe podłoże przeznaczone do wzrostu Lactobacillus oraz stałe podłoże Sabourauda przeznaczone do wzrostu pozostałych chorobotwórczych grzybów wskaźnikowych. Obliczano liczebność obu populacji, a wynik podawano w jednostkach tworzących kolonie w przeliczeniu na 1 ml (j.t.k./ml).
Tab. 6. Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec grzybów wskaźnikowych, przy zastosowaniu metody ilościowej
| Szczep | O godz j.t.k./ml | 8 godz j.t.k./ml | 24 godz j.t.k./ml |
| Candida albicans ATCC 10231 | 4xl07 | 4,0x10' | 0 |
| Candida glabrata ATCC 15126 | 1,2x10' | Ι,ΟχΙΟ5 | 4,0xl04 |
| Candida kefyr ATCC 4135 | 2,0x10* | 0 | 0 |
| Candida krusei ATCC 34135 | 6,3xl06 | l,2xl04 | 4,0x10* |
| Candida tropicalis ATCC 750 | 3,0x10* | 2,0x102 | Ι,ΟχΙΟ1 |
| Kontrola hodowli L. plantarum PMl | 4,0x10“ | 7,0x108 | 1,2x10m |
| Kontrola hodowli Candida albicans ATCC 10231 | 3,0x106 | 2,5x107 | 2,0xl07 |
| Kontrola hodowli Candida glabrata ATCC 15126 | 5,0x10* | 3,0x10' | 2,5xl07 |
| Kontrola hodowli Candida kefyr ATCC4135 | 1,0x10* | 1,5x107 | 3,0x10' |
| Kontrola hodowli Candida krusei ATCC 34135 | 3,0x106 | 3,0xl0; | Ι,ΟχΙΟ7 |
| Kontrola hodowli Candida tropicalis ATCC 750 | 2,0x10* | 1,8x107 | 1,2x10' |
PL 230 832 Β1
Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec wybranych gatunków grzybów drożdżopodobnych przedstawiono na Fig. 5.
Badanie antagonistycznego działania szczepu Lactobacillus plantarum PM1 za pomocą metody półilościowej i metody ilościowej wykazało bardzo silne działanie badanego szczepu wobec patogenów z rodzaju Candida.
V I. Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec wybranych czynników zakażeń wstępujących z pochwy i odbytu z wykorzystaniem metody półilościowej.
Antagonizm szczepów probiotycznych wobec innych bakterii chorobotwórczych jest jednym z dokładniej poznanych i udowodnionych mechanizmów działania bakterii z rodzaju Lactobacillus w przewodzie pokarmowym. Polega on na eliminacji drobnoustrojów chorobotwórczych dzięki wytwarzanym metabolitom, takim jak: kwas mlekowy i octowy pochodzących głównie z fermentacji węglowodanów, syntezie swoistych związków antybakteryjnych czyli substancji podobnych do bakteriocyn: lantybiotyków, laktocyny czy acidofiliny. Substancje podobne do bakteriocyn lub bardziej precyzyjnie lantybiotyki są aktywnymi biologicznie, peptydowymi substancjami działającymi bakteriobójczo na blisko spokrewnione drobnoustroje. Mechanizm ich działania polega na wytworzeniu por w ścianie komórek wrażliwych bakterii, przez które wypływają niskocząsteczkowe substancje, takie jak jony i elektrolity zawarte w cytoplaźmie, co w konsekwencji prowadzi do zniszczenia komórki. Szczepy wytwarzające bakteriocyny mają jednocześnie geny zabezpieczające je przed samounicestwieniem.
Metoda słupkowa:
Szczepy probiotyczne posiewano na stałe podłoże MRS agar. Hodowlę przeprowadzono w warunkach ściśle beztlenowych przez 24-48 godzin w 37°C. Po wzroście bakterii probiotycznych wycinano w podłożu MRS słupki o średnicy 9 mm, które nakładano na płytki zawierające odpowiednie podłoże stałe z naniesionymi uprzednio za pomocą wacika hodowlami szczepów wskaźnikowych (E. coli, ATCC 25922 Klebsiella pneumoniae ATCC 31488, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Streptococcus agalactiae ATCC 13813) pochodzącymi zarówno z zakażeń dróg rodnych i odbytu - Fig.6. Następnie płytki umieszczano na cztery godziny w lodówce w temp. 4°C, a po upływie tego czasu dalej je inkubowano w 37°C w warunkach tlenowych przez 18 godzin. Po inkubacji mierzono średnice stref zahamowania wzrostu szczepów wskaźnikowych podając wynik w mm.
Tab. 7. Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec wybranych czynników etiologicznych powodujących zakażenia występujące z odbytu i pochwy w oparciu o metodę półilościową tzw. metodę słupkową - strefa zahamowania podana w mm)
| Szczep | E.coli ATCC 25922 | Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | Enterococcus faecalis ATCC 29212 | Streptococcus agalactiae ATCC 13813 |
| L. plantarum PM1 | 26 mm | 25 mm | 19 mm | 24 mm |
Antagonistyczne działanie szczepu L.plantarum PM1 na wzrost pałeczki E. coli ATCC 25922 przedstawia Fig.6.
V II. Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wobec bakteryjnych czynników etiologicznych z wykorzystaniem metody ilościowej.
W celu określenia aktywności przeciwgrzybiczej szczepu L.plantarum PM1 do 900 mikrolitrów 24-godzinnej hodowli szczepu bakterii kwasu mlekowego o średniej gęstości 1x109 j.t.k/ml, dodawano po 100 mikrolitrów 24-godzinnych hodowli badanych szczepów czynników etiologicznych zakażeń dróg rodnych i odbytu o średniej gęstości 1x107 j.t.k/ml, przygotowanych przez zawieszanie jednego oczka ezy w 10 ml bulionu TSB (Biocorp). Całość inkubowano w warunkach tlenowych, w temperaturze 37°C. W czasie 0 h oraz po upływie 8 h i 24 godzin inkubacji z każdej z mieszanin wykonano rozcieńczenia dziesiętne, wysiewając kolejno po 100 mikrolitrów mieszaniny na podłoże Columbia (Biocorp) dla szczepów: Streptococcus agalactiae ATCC 13813, Enterococcus faecalis ATCC 29212; podłoże McKonkeya (Biocorp) dla szczepu Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumonia ATCC 31488, Proteus vulgaris ATCC 21719, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853. Obliczono liczbę kolonii bakterii badanych szczepów patogennych, a wyniki podano w jednostkach tworzących kolonie w przeliczeniu na 1 ml (j.t.k/ml).
PL 230 832 Β1
Tab 8 Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem wobec bakteryjnych czynników etiologicznych powodujących zakażenia pochwy i sromu w oparciu o metodę ilościową.
| Szczep | O godz j.t.k./ml | 8 godz j.t.k./ml | 24 godz j.t.k./ml |
| Escherichia coli ATCC 25922 | 2x10* | 0 | 0 |
| Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 1x10* | l,5xl06 | 0 |
| Streptococcus agalactiae ATCC 13813 | 6xl07 | 0 | 0 |
| Klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | 7xl07 | 0 | 0 |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | 2,2x103 | 0 | 0 |
| Proteus vulgaris ATCC 21719 | 4x107 | 0 | 0 |
| Kontrola hodowli L.plantarum PM 1 | 6x108 | 6x10* | 5x108 |
| Kontrola hodowli Escherichia coli ATCC 25922 | 6x10' | 2x10* | 2x10* |
| Kontrola hodowli Enterococcus faecalis ATCC 29212 | 2x107 | 3x108 | 2,2x108 |
| Kontrola hodowli Streptococcus agalactiae ATCC 13813 | 2xl07 | 2,5x108 | 6x108 |
| klebsiella pneumoniae ATCC 31488 | 4x107 | l,5xlOy | 5x108 |
| Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 | 6x107 | 4,6x108 | 8x10* |
| Proteus vulgaris ATCC 21719 | 2x10' | 3,5xl08 | 7x10* |
Antagonistyczne działanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 wraz z wytworzonym metabolitem wobec wybranych gatunków bakterii chorobotwórczych przedstawiono na Fig. 7.
V III. Charakterystyka metabolitu produkowanego przez szczep Lactobacillus plantarum PM1
Termin metabolit określa się naturalną mieszaninę każdego związku, substancji lub produktu ubocznego fermentacji prowadzonej przez L.plantarum PMI który ma aktywność bójczą w odniesieniu do bakterii i grzybów.
Przeprowadzone analizy jakościowe oraz ilościowe metabolitu bakterii Lactobacillus plantarum PM1 zostały wykonane przy wykorzystaniu metody LC/MS-MS. Ponadto przy zastosowaniu systemu wysokosprawnej chromatografii cieczowej (UltiMate 3000; Thermo Scientific) sprzężonej ze spektrometrem masowym (LCQ, Thermo Scientific).
Przeprowadzone analizy pozwoliły na wykrycie w badanym metabolicie następujących kwasów:
• δ-d od e kala kto n • kwas 3-fenylomlekowy • kwas heksanowy • kwas mlekowy • kwas piroglutaminowy • Mewalonolakton
PL 230 832 Β1 • kwas 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowy • cyklo(L-Leu-Gly) • kwas benzoesowy • kwas 3-hydroksydekanowy • kwas 3-hydroksydodekanowy, przy czym w dominującej ilości w metabolicie szczepu L.plantarum PM1 występowały: kwas 3-fenylomlekowy, kwas 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowy, kwas mlekowy, kwas piroglutaminowy.
Przeprowadzone analizy in vitro pozwoliły na przypisanie aktywności bakteriobójczej oraz grzybobójczej naturalnej mieszaninie zawierającej następujące kwasy: kwas 3-fenylomlekowy, kwas 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowy, kwas mlekowy, kwas piroglutaminowy.
Antagonistyczne działanie naturalnej mieszaniny kwasu 3-fenylomlekowego, kwasu 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowego, kwasu mlekowego, kwasu piroglutaminowego, wobec wybranych czynników etiologicznych zakażeń występujących z pochwy i odbytu przedstawiono na Fig. 8.
Tab. 9. Strefa zahamowania wzrostu badanych szczepów z kolekcji ATCC pod wpływem działania naturalnej mieszaniny kwasów: 3-fenylomlekowego, 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowego, mlekowego oraz piroglutaminowego.
| Numer krążka | Mieszanina: | Streptococcus agalactiae | Escherichia coli | Candida albicans |
| 1 | • kwas 3fenylomlekowy • kwas 3-(4hydrokś yfenylo) mlekowy • kwas mlekowy • kwas piroglutaminowy | 20 mm | 15 mm | 18 mm |
Z danych przedstawionych w tabeli wynika, że zastosowanie metabolitu szczepu Lactobacillus plantaraum PM1 prowadzi do zahamowania wzrostu patogenów grzybiczych i bakteryjnych.
IX. Oznaczenie oporności wybranych szczepu Lactobacillus plantarum PM1 na sztuczny sok żołądkowy.
Celem badania było oznaczenie przeżywalności w sztucznym soku żołądkowym nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1. W celu oznaczenie stopnia oporności bakterii z rodzaju Lactobacillus na pH soku żołądkowego posłużono się metodą Clarka, którą zmodyfikowano w ten sposób, iż zamiast stężonego kwasu solnego zastosowano sztuczny sok żołądkowy o pH równym 2.5, według następującego przepisu: 2.0 g NaCI, 3.2 g pepsyny w 7 ml 36% HCI o pH 1.2 rozpuszczono w 1000 ml wody destylowanej. Jałowy (po przesączeniu) sztuczny sok żołądkowy rozlewano po 1 ml do jałowych probówek, a następnie do każdej z nich kolejno dodawano po 100 pl świeżej (24 godzinnej) hodowli szczepów z rodzaju Lactobacillus o znanej gęstości. Mieszaniny inkubowano przez 20 min. w 37°C w warunkach ściśle beztlenowych. Po upływie wyznaczonego czasu mieszaniny starannie mieszano i wykonywano posiew dziesiętny w celu określenia otrzymanej gęstości końcowej.
Tab. 10. Przeżywalność szczepu Lactobacillus plantarum PM1 w sztucznym soku żołądkowym.
| Gęstość bakterii probiotycznych podana w j.l.k./ml | ||
| Szczep probiotyczny | Czas wyjściowy | Po 20 min. inkubacji w sztucznym soku żołądkowym o pH 2.5 |
| Lactobacillus plantarum PM 1 | 4,1x10* | 5,6x1ο6 |
PL 230 832 Β1
X. Oznaczenie oporności szczepu Lactobacillus plantarum PM1 na sole żółci.
Celem badania było oznaczenie oporności na sole żółci nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1. Oporność na sole żółci wyznaczono w oparciu o metodę Dashkevicz’a i Feighner’a. Metoda ta polegała na dodaniu do agaru MRS lub BL barwnika wskaźnikowego - purpury bromokrezolowej [POCH] w ilości 0,17 g/l oraz soli żółci [OXGAL firmy Difco], w pięciu kolejnych stężeniach: 1 g/l, 2 g/l, 5 g/l, 10 g/l, 20 g/l. Na tak przygotowane stałe podłoża posiewano metodą redukcyjną po 100 pl hodowli badanych szczepów z rodzaju Lactobacillus, które następnie inkubowano w standardowych warunkach beztlenowych przez 48 godz. Po zakończonej inkubacji kolonie szczepów opornych na dane stężenie soli żółci nabierały koloru jasno żółtego, jak również podłoże wzrostowe zmieniało swoje zabarwienie z fioletowego na żółte. Intensywność wzrostu badanych szczepów i zabarwienia podłoża na kolor żółty oceniono w skali półilościowej od - do +++.
Tab. 11. Oporność szczepu Lactobacillus plantarum PM1 na sole żółci w stężeniach: 1, 2, 5, 10, 20 g/l.
| Stężenie soli żółci | Lplantarum PM1 |
| 1 g/l | +++ |
| 2 g/l | +++ |
| 5 g/l | +++ |
| 10 g/l | +++ |
| 20 g/l | +++ |
Oporność szczepu Lactobacillus plantarum PM1 na sole żółci w stężeniach: 1, 2, 5, 10, 20 g/l przedstawia Fig. 9.
Wyniki przeprowadzonych badań wykazały, że szczep Lactobacillus plantarum PM1 i wytworzony przez niego metabolit są skuteczne wobec grzybów patogennych i bakterii i mogą być wykorzystane jako składnik czynny środka hamującego rozwój i/lub ograniczającego wzrost populacji grzybów patogennych dla człowieka.
Dodatkowo szczep ten wykazał się dużą opornością na niskie pH i działanie sztucznego soku żołądkowego. Szczep ten po upływie 20 min. redukował swoją populację średnio o 2 log, co może świadczyć o jego doskonałym przystosowaniu do niesprzyjających warunków panującym w ludzkim przewodzie pokarmowym czy niskiego pH w drogach rodnych.
Przykład: Badanie skuteczności antygrzybiczej preparatów żelowych opartych na metabolitach pohodowlanych szczepów Lactobacillus
Antygrzybicze działanie preparatów zostało zbadane metodą ilościową na szczepach wskaźnikowych: Candida albicans ATCC 10231, Candida glabrata ATCC 15126, Candida krusei ATCC 34135, Candida kefyr ATCC 4135, Candida tropicalis ATCC 750.
24-godzinną hodowlę szczepów należących do rodzaju Candida w podłożu Sabouraud'a żwirowano (2000 rpm, 10 min), usunięto supernatant, a pozostały na dnie osad komórkowy dwukrotnie płukano w NaCI. Po żwirowaniu i usunięciu supernatantu dodawano 10 ml NaCI i dokładnie worteksowano hodowlę. Tak przygotowaną czystą hodowlę grzybów drożdżopodobnych wysiewano na podłoże Sabouraud'a w celu oznaczenia wyjściowej liczby komórek (CFU; colony forming unit). Następnie pobierano 20 pl i umieszczano na spodzie 24-dołkowych płytek przeznaczonych do hodowli tkankowej. Hodowle przykrywano równomierną warstwą badanych substancji żelujących (około 300 pl). Następnie płytki umieszczano w temperaturze 37°C na 4, 8 i 24 godziny. Po upływie określonego czasu do odpowiednich dołków dodawano po 1 ml NaCI. Całość dokładnie mieszano, aż do całkowitego rozpuszczenia żelu. Wykonano rozcieńczenia dziesiętne w celu oznaczenia liczby komórek (CFU).
Do analiz wykorzystano żele zawierające zagęszczone 60% oraz 90% metabolity bakterii Lactobacillus: Lactobacillus plantarum PM1, Lactobacillus plantarum KL-62A, Lactobacillus plantarum 158B.
PL 230 832 Β1
Jako kontrolę doświadczenia zastosowano bazę żelu nie zawierającą metabolitów bakterii. Dodatkowo badaniu poddano komercyjnie dostępny na rynku preparat: prOVag żel.
Wartości pH badanych substancji żelowych przedstawiono w poniższej tabeli:
| Żel | pH |
| PM1 60% | 4,5-4,7 |
| 158B 60% | 4,5-4,7 |
| KL-62A 60% | 4,5-4,7 |
| PM1 90% | 4,0-4,5 |
| 158B 90% | 4,0-4,5 |
| KL-62A 90% | 4,0-4,5 |
| Provag | 5,0-5,5 |
| Baza żelu | 5,5-6,0 |
Wyniki badanych substancji w odniesieniu do szczepu Candida albicans
| Oh | 4h | 8h | 24h | |
| PM1 60% | lxl0b | lxl03 | 4xlOz | lxl03 |
| 158B60% | lxl0b | 9x10J | 8x10' | 3xl02 |
| KL-62A60% | lxl0b | 5xl03 | 4x103 | 2x104 |
| PM 190% | 1x106 | _______0_______ | 0 | 0 |
| 158B 90% | 1x10b | 0 | 0 | 0 |
| KL-62A 90% | lxlOb | 0 | 0 | 0 |
| Provag | lxl06 | 4xl05 | lxl04 | 5x103 |
| Kontrola(NaCl) | lxl06 | 8x103 | 2xl05 | 3x104 |
| Baza żelu | 2xl06 | 2x105 | 2xl05 | 3x105 |
Wyniki badanych substancji w odniesieniu do szczepu Candida glabrata
| Oh | 4h | 8h | 24h | |
| PM1 60% | lxlOb | 2xl0b | lxl03 | 2x106 |
| 158B 60% | lxl0b | lxlOb | 3x105 | 2x103 |
| KL-62A60% | lxlOb | 3,5xl06 | 3x105 | 4x103 |
| PM1 90% | lxl0b | 0 | 0 | 0 |
| 158B 90% | lxlOb | 0 | 0 | 0 |
| KL-62A 90% | lxlOb | 1Χ101 | 0 | 0 |
| Provag | lxlOb | lxlOb | 2x103 | 1Χ103 |
| Kontrola(NaCl) | lxlOb | 2x10b | lxl0b | 4xlO3 |
| Baza żelu_______ | 5xl06 | | 6xlOb | 7xl03 | 5xl03 |
Wyniki badanych substancji w odniesieniu do szczepu Candida krusei
| Oh | 4h | 8h | 24h | |
| PM1 60% | 4x10b | 2x106 | lxl0b | 2x10b |
| 158B60% | lxl0b | lxl0b | 3xlO5 | 2x105 |
| KL-62A60% | lxlOb | 3,5x106 | 3xl0s | 4x103 |
| PM1 90% | lxlOb | 0 | 0 | 0 |
| 158B 90% | ΙχΙΟ6 | 0 | 0 | 0 |
| KL-62A90% | lxlOb | lxlO3 | 0 | 0 |
| Provag | lxlOb | lxlOb | 2x105 | ΙχΙΟ3 |
| Kontrola(NaCl) | lxlOb | 2x10b | lxlOb | 4x103 |
| Baza żelu | 5xlOb | 6x10b | 7xl03 | 5x105 |
PL 230 832 Β1
Wyniki badanych substancji w odniesieniu do szczepu Candida tropicals
| Oh | 4h | 8h | 24h | |
| PM1 60% | 2x106 | lxl0J | 3x102 | lxl02 |
| 158B 60% | 2x10” | 4xlOJ | 5x102 | 3x102 |
| KL-62A60% | 3xl06 | 6x10’ | 3xlO3 | 2x10·’ |
| PM1 90% | lxl06 | 0 | 0 | 0 |
| 158B 90% | lxl06 | 0 | 0 | 0 |
| KL-62A90% | 1,5x106 | 0 | 0 | 0 |
| Provag | 2x106 | 4x105 | ΙχΙΟ5 | 2xl03 |
| KontroIa(NaCl) | 3xl06 | lxlO6 | 3x10^ | 5xl05 |
| Baza żelu | 4x106 | 3x105 | 4x105 | 2x105 |
Wyniki badanych substancji w odniesieniu do szczepu Candida kefyr
| Oh | 4h | 8h | 24h | |
| PM1 60% | lxl06 | 2xlOf | 2x102 | 2xl02 |
| 158B 60% | 1x10® | 6x104 | 4xl02 | 3x10’ |
| KL-62A60% | 3xlOft | 3x104 | 2x104 | lxlO4 |
| PM1 90% | 2xl06 | 0 | 0 | 0 |
| 158B90% | 1,5x106 | 0 | _______0_______ | 0 |
| KL-62A 90% | l,5xl06 | 0 | 0 | 0 |
| Provag | 2x106 | 4x105 | 2xl06 | 2x105 |
| Kontrola(NaCl) | 3x106 | lxlO6 | 4xl05 T | 6Χ105 |
| Baza żelu | 4x106 | 3x105 | 3x104 | 2xl05 |
Przeprowadzone badania wykazały, że szczep Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolity, będące przedmiotem wynalazku, wykazały się zdolnością przejścia przez przewód pokarmowy oraz silnymi właściwościami antagonistycznymi wobec patogennych bakterii i grzybów z rodzaju Candida.
Cechy te predysponują szczep Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolity do zastosowania w preparacie przeznaczonym do zapobiegania i leczenia stanów zapalnych dróg moczowo-płciowych.
Przeprowadzone badania uzasadniają wykonanie preparatu w postaci środka spożywczego lub w postaci żelu do użycia miejscowego.
Claims (3)
- Zastrzeżenia patentowe1. Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1 zdeponowany w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów (PCM) w Instytucie Immunologii i Terapii Doświadczalnej Polskiej Akademii Nauk we Wrocławiu pod numerem depozytowym B/00055.
- 2. Metabolit otrzymany z hodowli szczepu Lactobacillus plantarum PM1 określonego w zastrz. 1, który zawiera kwasy, w tym szczególnie 3-fenylomlekowy, 3-(4-hydroksyfenylo)mlekowy, mlekowy oraz piroglutaminowy i który wykazuje właściwości antygrzybicze i antybakteryjne.
- 3. Zastosowanie szczepu Lactobacillus plantarum PM1 zdeponowanego w Polskiej Kolekcji Mikroorganizmów pod numerem dostępu B/00055 i/lub metabolitu wytworzonego przez szczep Lactobacillus plantarum PM1 do wytwarzania środka hamującego rozwój i/lub ograniczającego wzrost populacji grzybów i bakterii patogennych dla człowieka.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL412092A PL230832B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolitu |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| PL412092A PL230832B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolitu |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL412092A1 PL412092A1 (pl) | 2016-10-24 |
| PL230832B1 true PL230832B1 (pl) | 2018-12-31 |
Family
ID=57821689
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL412092A PL230832B1 (pl) | 2015-04-22 | 2015-04-22 | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolitu |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| PL (1) | PL230832B1 (pl) |
-
2015
- 2015-04-22 PL PL412092A patent/PL230832B1/pl unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PL412092A1 (pl) | 2016-10-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Sandes et al. | Selection of new lactic acid bacteria strains bearing probiotic features from mucosal microbiota of healthy calves: Looking for immunobiotics through in vitro and in vivo approaches for immunoprophylaxis applications | |
| Anandharaj et al. | Determining the probiotic potential of cholesterol-reducing Lactobacillus and Weissella strains isolated from gherkins (fermented cucumber) and south Indian fermented koozh | |
| Boran et al. | Bacterial diseases of cultured Mediterranean horse mackerel (Trachurus mediterraneus) in sea cages | |
| Xia et al. | Recovery of Acinetobacter baumannii from diseased channel catfish (Ictalurus punctatus) in China | |
| CN114836358B (zh) | 罗伊氏乳杆菌sxdt-32及其应用 | |
| CN114806978A (zh) | 约氏乳杆菌sxdt-23及其应用 | |
| Er et al. | Anticandidal activities of lactic acid bacteria isolated from the vagina | |
| EP3818985A1 (en) | Lactobacillus fermentum pl9 and its application | |
| KR101201420B1 (ko) | 신규 락토바실러스 존슨니 및 이를 포함하는 사료첨가제 조성물 | |
| KR101201337B1 (ko) | 신규한 락토바실러스속 유산균 복합 균주를 포함하는 사료첨가제 | |
| KR101098946B1 (ko) | 신규한 락토바실러스 살리바리우스 균주 및 이를 함유하는 사료첨가제 조성물 | |
| KR100557397B1 (ko) | 유해미생물 억제 활성을 가지는 신규 내산성 락토바실러스 루테리 Probio-054 및 이를 함유하는 생균활성제 | |
| CN114258299A (zh) | 梭菌纲聚生体组合物以及治疗肥胖症、代谢综合征和肠易激疾病的方法 | |
| PL230832B1 (pl) | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PM1, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PM1 i jego metabolitu | |
| KR100211529B1 (ko) | 유해 미생물 억제 활성을 갖는 신규 내산성 락토바실러스 속 미생물 및 이를 함유하는 가축용 생균활성제 | |
| EP3168292B1 (en) | New lactobacillus plantarum strain amt14 and composition containing the strain of lactobacillus plantarum amt14 | |
| PL230548B1 (pl) | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PL3, jego metabolit oraz zastosowanie szczepu Lactobacillus plantarum PL3 i jego metabolitu | |
| CZ2014565A3 (cs) | Kmeny laktobacilů produkující látky účinné proti vaginálním patogenům, jejich použití a hygienické prostředky je obsahující | |
| US20180303884A1 (en) | Strain of bacteria and composition comprising the same | |
| CN113308416B (zh) | 一株具有抑制肾结石形成能力的植物乳杆菌及其应用 | |
| RU2391395C1 (ru) | ШТАММ Lactobacillus fermentum TS3-06, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ И ПРОИЗВОДСТВА ЖИДКОЙ МОЛОЧНОКИСЛОЙ ЗАКВАСКИ В КАЧЕСТВЕ ПРОДУКТА ПИТАНИЯ ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО НАЗНАЧЕНИЯ | |
| PL245526B1 (pl) | Szczep Lactobacillus plantarum PL8 i jego zastosowanie | |
| PL232906B1 (pl) | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PL4 | |
| PL239868B1 (pl) | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PL5 i jego zastosowanie | |
| PL230549B1 (pl) | Nowy szczep Lactobacillus plantarum PL2, jego metabolit oraz zastosowanie nowego szczepu Lactobacillus plantarum PL2 i jego metabolitu |