PL248387B1

PL248387B1 - Sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM G0 oraz zastosowanie soli diwodoroftalanu betuliny i PAMAM G0 do leczenia i pielęgnacji paznokci

Info

Publication number: PL248387B1
Application number: PL446207A
Authority: PL
Inventors: Zbigniew Majka; Edyta Pindelska
Original assignee: Advanced Pharma Solutions Spolka Z Ograniczona Odpowiedzialnoscia
Priority date: 2023-09-22
Filing date: 2023-09-22
Publication date: 2025-12-08
Also published as: PL446207A1

Abstract

Przedmiotem zgłoszenia jest sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM G0 o wzorze I oraz zastosowanie soli diwodoroftalanu betuliny i PAMAM G0 o wzorze I do leczenia i pielęgnacji paznokci.

Description

Opis wynalazku

Przedmiotem wynalazku jest sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM GO o wzorze ogólnym I

Wzór I i zastosowanie związku o wzorze I do leczenia i pielęgnacji paznokci.

Najczęstszą chorobą paznokci jest grzybica, do której leczenia stosowane są specjalnie do tego celu dedykowane leki lub wyroby medyczne zawierające farmakologiczną substancję aktywną np. amorolfinę. Oprócz grzybicy dość powszechnie występującą zmianą jest łuszczyca paznokci. Paznokcie charakteryzują się wtedy wgłębieniami, bruzdami, plamami olejowymi, zgrubieniami, są kruche i pożółkłe. Może dochodzić nawet do oddzielenia się paznokcia od łożyska (onycholiza). Onycholiza może być także spowodowana urazem, ale i infekcją (np.: Candida albicans lub Pseudomonas aeruginosa), reakcją fototoksyczną na pochodne tetracykliny, czy chorobami ogólnoustrojowymi np. chorobami tarczycy, cukrzycą. Onycholiza pierwotna związana jest ze zbyt częstym stosowaniem silnych środków mających pielęgnować paznokcie. Mogą więc jej doświadczyć przede wszystkim kobiety, które często wykonują manicure lub pedicure akrylowy, żelowy, hybrydowy czy też stosują odżywki zawierające formaldehyd. Zaś żółty paznokieć nie zawsze jest symptomem zmian chorobowych, może być także pozostałością po źle wykonanym zabiegu kosmetycznym, np. nie nałożeniu lakieru podkładowego przed aplikacją lakieru. Barwniki, które są w składzie lakierów przedostają się do płytki i barwią ją właśnie na kolor żółty. Inną zmianą obserwowaną na płytce paznokciowej jest podłużne pobruzdowanie (łac. Onychorrhexis) i kruchość paznokci. Ta zmiana często występuje u ludzi starszych. Na rynku kosmetycznym i aptecznym dostępnych jest wiele preparatów, które służą do pielęgnacji lub terapii płytki paznokciowej. Niewiele jest natomiast preparatów, które łączą obie te funkcje.

Polimery to makrocząsteczki zbudowane z powtarzających się jednostek. Są otrzymywane w procesach ściśle kontrolowanych, dzięki czemu można im przypisać dokładną masę cząsteczkową i strukturę. Polimery dendrytyczne charakteryzują się silnie rozgałęzioną i gęsto upakowaną budową, nazywane są polimerami XXI wieku, co znane jest z publikacji Basavaraj, B.V.; Furtado, S.; Bharath, S.; Deveswaran, R.; Abharam, S.; Madhavan, V. J. Pharmacy Research 2009, 2, 970-974.

Rozmiar makrocząsteczki określany jest przez jej generację, czyli liczbę powtarzających się warstw rozgałęzionych monomerów przyłączonych do rdzenia (G1, G2, itd.). Dendrymery znajdują się w kręgu zainteresowań wielu dziedzin nauki, m.in. kosmetologii i medycyny. Są badane zarówno pod kątem możliwości ich wykorzystania jako leków, jak i nośników substancji aktywnych, materiału genetycznego, antygenów, kontrastów NMR, itp. Aby mogły znaleźć zastosowanie w układach biologicznych muszą być nietoksyczne i nie immunogenne. Przykładem są dendrymery poliamidoaminowe (PAMAM), w których generacja powstaje w wyniku dwuetapowej syntezy, tj. przyłączenia akrylanu metylu do grup aminowych, a następnie aminolizy grup estrowych z użyciem etylenodiaminy. Dendrymery ze względu

PL 248387 Β1 na swoją unikalną strukturę i właściwości fizykochemiczne, jak również szeroką możliwość użycia różnych substratów do ich konstrukcji i funkcjonalizacji, są źródłem wielu ciekawych związków / systemów bakteriostatycznych i bakteriobójczych. Można je podzielić na dendrymery antybakteryjne i antybakteryjne systemy dendrytyczne, co zostało opisane w publikacjach Mintzer, M.A.; Dane, E.L.; 0’Toole, G.A.; Grinstaff, M.W. Mol. Pharmaceutics 2012, 9, 342-354, Lazniewska, J.; Milowska, K.; Gabryelak, T. WIREs Nanomed. Nanobiotechnol. 2012, 4, 469-491 oraz Castonguay, A.; Ladd, E.; van de Ven, T.G.M.; Kakkar, A. New J. Chem. 2012, 36, 199-204.

Betulina, pentacykliczny triterpen, jest pozyskiwana z kory brzozy (Betula alba cortex). Triterpeny brzozowe mają udowodnione działanie przeciwwirusowe (na opryszczki HSV-1 i HSV-2, ECHO 6, grypy FPV), przeciwdrobnoustrojowe (Streptococcus pyogenes, Escherichia coli, Staphylococcus aureus i Enterococcus faecalis), przeciwzapalne i hepatoprotekcyjne, co opisane zostało w szeregu publikacji, w tym Szuster-Ciesielska A., Kandefer-Szerszen M. Pharmacol. Rep. 2005; 57: 588-595, Suksamrarn S., Panseeta P., Kunchanawatta S., Distaporn T, Ruktasing S., Suksamrarn Chem. Pharm. Buli. 2006; 54: 535-537 czy Eiznhamer D.A., Xu Z.Q. IDrugs. 2004; 7: 359-373.

Jak wykazali w 2010 r. Woelfle i wsp. w publikacji Woelfle U., Laszczyk M.N., Kraus M., Leuner K., Kersten A., Simon-Haarhaus B., Scheffler A., Martin S.F., Muller W.E., Nashan D., et al. J. Investig. Dermatol. 2010; 130: 113-123, betulina sprzyja różnicowaniu keratynocytów i końcowemu różnicowaniu do korneocytów, posiada silnie właściwości przeciwutleniające, tzn. niszczy nadtlenki i reaktywne formy tlenu i antyalergiczne. Wykazuje również działanie przeciwgrzybicze np. w kierunku Fusarium oxysporum co znane jest z publikacji Jasicka-Misiak I., Lipok J., Świder I.A., Kafarski P.,. Z Naturforsch C J Biosci. 2010; 65(3-4): 201-6. Reguluje proces melanogenezy w skórze. Preparaty z betuliną skutecznie zapobiegają pojawianiu się nieprawidłowych zmian barwnikowych w skórze, które mogą prowadzić do rozwoju czerniaka co opisano w publikacji Muceniece R., Saleniece K., Riekstina U., Krigere L., Tirzitis G., Ancans J. Celi Biochem Funct. 2007; 25(5): 591-6.

Celem wynalazku jest opracowanie związku chemicznego, który zastosowany w preparatach będzie miał za zadanie naprawę poważnych uszkodzeń płytki, w szczególności do wypełniania bruzd, pęknięć, rozdwajających się i łuszczących końcówek płytki paznokciowej. Będzie redukować przebarwienia występujące na płytce, które powstają po stylizacjach, ale przede wszystkim będzie wzmacniać i odżywiać zmienioną chorobowo powierzchnię paznokcia. Powinien również pełnić funkcję ochronną, nawilżającą i uelastyczniającą, tworząc swoistą powłokę, która zapobiega różnym infekcjom wywołanym przez bakterie, drożdżaki, wirusy i pasożyty.

Został otrzymany antybakteryjny system dendrytyczny z połączenia diwodoroftalanu betuliny i dendrymeru PAMAM GO o wzorze ogólnym I.

Wzór I

PL 248387 Β1

Związek o wzorze I otrzymuje się w wyniku reakcji diwodoroftalanu betuliny o wzorze II

Wzór III

Dzięki innowacyjnemu połączeniu dendrymeru ze sfunkcjonalizowaną betuliną - d i wodo rofta łanem betuliny powstał system dendrytyczny, który pozwolił na wyeliminowanie problemu kruchych i łamliwych paznokci, zapobiega ich rozdwajaniu, nawadnia okalające paznokieć wały skórne, zapobiegając nadmiernej utracie wilgoci z tych okolic i działał bakteriostatycznie.

Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie związku o wzorze I do leczenia i pielęgnacji paznokci.

Przykład 1.

Opis syntezy diwodoroftalanu betuliny: W kolbie o pojemności 250 ml, zaopatrzonej w mieszadło magnetyczne, płaszcz grzejny i chłodnicę zwrotną umieszczono 4,4 g betuliny, 7,4 g bezwodnika ftalowego i 50 ml pirydyny. Uzyskaną mieszaninę ogrzewano pod chłodnicą zwrotną 30 godzin. Następnie odparowano pirydynę. Pozostałość roztarto z 100 ml wody i zakwaszono rozcieńczonym kwasem solnym (1 :1) do pH około 2. Wydzielony osad odsączono na lejku Buchnera, przemyto wodą i wysuszono na powietrzu.

Otrzymano diwodoroftalan betuliny (z wydajnością 80-90%).

Ostatnim krokiem jest otrzymanie systemu dendrytycznego. W tym celu łączy się diwodoroftalan betuliny o wzorze II

PL 248387 Β1

Wzór II z dendrymerem PAMAM GO o wzorze III

Wzór III przez wytworzenie soli.

Opis syntezy soli: Równomolowe ilości diwodoroftalanu betuliny (0,74 g) i dendrymeru PAMAM GO (0,25 g) mieszono z 20 ml etanolu. Zawiesinę pozostawiono do odparowania. Suchą pozostałość utarto i poddano analizom.

C68H106N10O12

IR Vmax KBr (cm-¹): 3389, 3261, 3046, 2940, 2860, 2340, 2317, 2109, 1723, 1644, 1557, 1456, 1372, 1257, 1252, 1123, 1075, 965, 747.

¹H NMR (500 MHz, DMSO) δ 8,23-7,89 (m, 16H), 3,36-2,70 (m, 39H), 2,86-2,70 (m, 3H), 2,82-2,24 (m, 105H), 2,20 (dd, J = 9,0, 4,9 Hz, 34H), 2,11-1,84 (m, 25H), 1,84-0,46 (m, 26H).

¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ 172,24, 171,42, 171,34, 170,25, 169,55, 150,39, 140,70, 140,45, 133,59, 133,07, 130,11, 128,82, 128,33, 127,26, 110,35, 80,85, 79,66, 77,24, 62,72, 55,36, 51,32, 50,19, 49,05, 48,85, 47,62, 46,66, 42,73, 41,02, 40,89, 40,52, 40,43, 40,36, 40,27, 40,19, 40,10, 40,02,

39,93, 39,76, 39,60, 39,43, 38,95, 38,47, 38,08, 37,56, 37,13, 37,07, 34,55, 33,67, 31,89, 29,76, 28,56,

28,26, 27,13, 25,25, 23,39, 20,83, 19,31, 18,24, 17,02, 16,32, 16,10, 14,98.

Ustalono wartości MIC (ang. Minimal Inhibitory Concentration) w stosunku do czterech wybranych szczepów. Badany innowacyjny system dendrytyczny wykazał właściwości przeciwdrobnoustrojowe względem wszystkich badanych drobnoustrojów. Staphylococcus aureus (ATCC 6538) charakteryzował się największą wrażliwością na działanie systemu dendrytycznego - MIC - 8 mg/ml, mniejszą dla Candida albicans (ATCC 10231) - 25 mg/ml, a najmniejszą dla Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027) i Escherichia Coli (ATCC 8739) - 50 mg/ml.

Oznaczono skuteczność wirusobiobójczą produktu w stosunku do szczepów: Murine norovirus (S99), Adenovirus type 5 (ATCC VR-5), Vaccinia virus strain Elstree (ATCC VR-1549). W tym celu przygotowany został 1% etanolowy roztwór systemu dendrytycznego.

PL 248387 Β1

Produkt był badany według normy PN-EN 16777:2019-01, w temperaturze 20°C, w obecności substancji obciążającej, wykazuje działanie biobójcze przeciwko wirusom, oraz przeciwko wirusom otoczkowym, (redukcja >4 Ig) wobec: Murine norovirus S99 Berlin w stężeniu 80%, w czasie 60 s i 30 s, w warunkach czystych; Adenovirus type 5 ATCC VR-5 w stężeniu 80%, w czasie 60 s, w warunkach czystych; Vaccinia virus strain Elstree ATCC VR-1549 w stężeniu 80% w czasie 60 s, w warunkach czystych.

Przeprowadzono badanie cytotoksyczności in vitro produktu względem następujących linii komórkowych: Vero ATCC CCL-10, MRC-5 ATCC CCL-171, V79-4 ATCC CCL-93. Produkt badany był według normy PN-EN 10993-5, w temperaturze 20°C, nie wykazywał on aktywności cytotoksycznej in vitro w następującym najwyższym badanym stężeniu (przeżywalność w teście MTT wyższa niż 70% lub wyższa niż 50% w teście IC50) wobec: Vero w stężeniu 2,2%;

MRC-5 w stężeniu 1,8%;

V79-4 w stężeniu 2,1%;

System dendrytyczny zastosowany w stężeniu poniżej 1,8% jest bezpieczny w produktach kosmetycznych.

Przykład 2.

Odżywka lakierowa do paznokci

Tabela 1

Nazwa składnika	Udział %
Octan etylu	57,9415
Octan butylu	19,4790
Nitroceluloza	5,7991
Acetylocytrynian tributylu	4,9565
Kopolimer kwasu adypinowego, glikolu neopentylowego i bezwodnika trimelitowego	4,8574
Etanol	3,6176
Kopolimer kwasu akrylowego, akrylanu etylu i metakrylanu metylu	1,9826
Benzoesan cukrozy	0,9913
Triglicerydy kaprynowo/kaprylowe	0,2000
Glikol propylenowy	0,0965
Guma mastyksowa	0,0500
Metyloetyloketon	0,0200
Sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM GO	0,0050
Ekstrakt z owoców cytryny	0,0035
1 -hyd roksy-4-(p-to I u idy no) antrach inon	0,0001

Do zlewki o pojemności 200 ml odważa się wszystkie składniki i miesza do uzyskania jednorodnej masy lakierowej. Masę rozlewa się do butelek z zakrętką z pędzelkiem.

PL 248387 Β1

Przykład 3. Odżywka olejowa do paznokci

Tabela 2

Nazwa składnika	Udział %
Olej migdałowy	86,6300
Triglicerydy kaprynowo/kaprylowe	10,4000
Kompozycja zapachowa	1,7200
Etanol	0,4950
Benzotriazolododecylo-p-krezol	0,2000
Olej morelowy	0,1975
Tokoferol	0,1000
Guma mastyksowa	0,1000
Olej słonecznikowy	0,1000
Hydrolizowany ekstrakt z nasion ciecierzycy	0,0175
Ekstrakt z nasion soczewicy	0,0175
Ekstrakt z nasion kom osy ryżowej	0,0175
Sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM GO	0,0050

Badania wpływu pielęgnującego odżywki lakierowej i olejowej na wygląd paznokci.

Do badania wybrano osoby mające kruche paznokcie, z onycholizą i paznokcie zniszczone lakierami. Każda osoba pomalowała paznokcie dwukrotnie odżywką lakierową i stosowała dwa razy dziennie odżywkę olejową. Odżywka lakierowa była stosowana dwa razy w tygodniu. Uprzednia warstwa lakieru była usuwana zmywaczem do paznokci. Odżywki stosowano przez miesiąc.

Dla porównania przygotowano odżywkę lakierową i olejową bez soli diwodoroftalanu betuliny i PAMAMU GO oraz odżywki i lakiery zawierające osobno PAMAM GO i diwodoroftalan betuliny.

W grupie 100 osób testujących preparaty zawierające sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM GO zauważono wyraźną poprawę wyglądu i twardości paznokci u 80 osób. W grupie 100 osób testujących preparaty bez zawartości soli diwodoroftalanu betuliny i PAMAMU GO poprawę wyglądu i twardości obserwowano u 30 osób.

W grupie 100 osób testujących preparaty zawierające PAMAM GO poprawę wyglądu i twardości obserwowano u 35 osób. W grupie 100 osób testujących preparaty zawierające tylko diwodoroftalan betuliny poprawę wyglądu i twardości obserwowano u 42 osób.

Claims

1. Sól diwodoroftalanu betuliny i PAMAM GO o wzorze I

do leczenia i pielęgnacji paznokci.